专利名称：：一种替拉扎明非肠道给药含水制剂及其制备方法
技术领域：
：-本发明属药物制剂
技术领域：
，具体涉及一种替拉扎明非肠道给药含水制剂及其制备方法。替拉扎明，英文名称tir邻azamine或TPZ，化学名称3_氨基-1,2,4苯并三嗪-1,4-二氧化物(3-Amino-l,2，4-benzotuiazine-1,4-dioxide)又名Win59075或SR4233,其化学结构分子式C7H6N402分子量178替拉扎明是一种新型的生物还原活性物。它在肿瘤组织乏氧细胞内能够被还原生成一种具有细胞毒性作用的代谢产物。这种代谢产物对乏氧细胞的杀伤作用显著超过它的母体化合物，使肿瘤组织内乏氧细胞死亡，可以同时显著增加肿瘤放射治疗及肿瘤一系列化学治疗药物的抗肿瘤作用，因而作为一种新颖的乏氧细胞增敏剂被引入基础及临床实验。替拉扎明的作用机制替拉扎明对乏氧细胞具有特异的细胞毒性。在乏氧细胞存在的情况下，替拉扎明在细胞内代谢产生自由基自由基与DNA大分子结合，导致DNA损害和细胞死亡。Katherineb等认为替拉扎明在细胞核内代谢是替拉扎明引起DNA破坏及产生细胞毒性的主要原因。他们还通过大量的试验证实替拉扎明在乏氧细胞内抑制DNA复制的作用显著高于电离辐射。同时，delahoussayeym等对替拉扎明的代谢机制进行深入的研究:替拉扎明经乏氧细胞核内某些还原酶作用后的代谢产物均可DNA单链断裂。而另一方面DNA的双链断裂是由于替拉扎明被细胞核内一未知的依赖NADPH活性的还原酶还原产生的化合物所致。替拉扎明作为放疗增敏剂与放射线联合治疗恶性实体肿瘤的作用机制经过长期的研究证实，几乎所有的人类恶性实体肿瘤中无论肿瘤的大小均存在乏氧细胞,一般约占肿瘤细胞的
背景技术：
：:式如下:(替拉扎明的化学结构式)10%20%左右，也有高达50%或者少至1%，还有一些细胞介于乏氧状态与有氧状态之间。恶性实体肿瘤内的乏氧细胞当氧张力低于0.5mmHg时就会产生对放射治疗的抵抗性,其氧增强比(OxygenationenhancementrateOER)为2530，即杀灭乏氧细胞所需剂量是杀灭有氧细胞所需剂量的三倍。在有氧状态下，由于分子氧的存在而把应在照射中能得到修复的损伤固定下来,不再产生修复。因此,肿瘤乏氧细胞经照射后产生的损伤中，由于乏氧，可以使它们得到修复，也就增加了对放射线的抵抗性。替拉扎明能选择性的杀伤乏氧细胞，低LET射线则主要杀伤非乏氧细胞,两者联合应用，将使放射治疗的效果大大增强。Brown等报道了对荷SCCVII、RIF、EMT6、KHT/R瘤的C3H/Km小鼠和BALB/c小鼠实验的结果:在分次照射前给予008mmol/Kg的替拉扎明，采用体内实验/离体存活分析方法进行评价，证明替拉扎明可以显著增加辐射所引起的肿瘤细胞死亡,并且替拉扎明剂量修饰因子(DMF)值显著大于传统放射增敏剂SR2508替拉扎明作为化疗增敏剂与顺铂联合应用治疗恶性肿瘤的分子机制的研究进展。以往研究表明，肿瘤细胞对顺铂的敏感性取决于两种DNA交联修复蛋白Erccl和XRA的表达，且顺铂能上调ERCC1的表达。Goldbergz等应用替拉扎明和顺铂对两种不同的细胞株分别进行处理，两种细胞株一种对顺铂高度敏感一种对顺铂不敏感,处理方法分为同时用药和先后用药两种，结果发现两种处理方法对顺铀敏感组ERCClmRNA和蛋白表达均没有显著改变，在顺铂不敏感组,替拉扎明可以上调ERCC1的表达，而顺铂对ERCC1的表达没有影响。XRA的表达在各组均未见改变。据此，Goldbergz等认为替拉扎明与顺铂的协同作用，并非由于替拉扎明抑制ERCC1和XRA的表达所致，替拉扎明的乏氧细胞毒性也许起到了更为重要的作用。目前国外针对替拉扎明与放射治疗和化学药物联合应用治疗恶性实体肿瘤的临床试验已经大规模的展开。替拉扎明作为一种放射治疗、化学治疗的增敏药物，与放射治疗与化学治疗联合应用时具有协同的抗肿瘤活性,增加了放射治疗、化学治疗对肿瘤的杀伤效应，毒副反应可以耐受，没有出现危及生命的或不可恢复的毒副作用，为抗肿瘤治疗开辟了新的领域。因此，在肿瘤的治疗中，预期有很好的应用前景。1992年12月29日出版的US5175827公开了1，2，4-苯并三嗪氧化物与放射治疗结合用于治疗肿瘤的应用。1，2，4-苯并三嗪氧化物使肿瘤细胞对放射治疗敏感，并且使患者更顺应治疗的用药程式。Holden等(1992)在"用SR-4233加强烷基化试剂在FSaIIC鼠纤维肉瘤中的活性"(JNCI84:187-193)公开了SR-4233(即3-氨基-l，2,4-苯并三嗪-l，4-二氧化物，该化合物是已知的，并且在下文中也被称作替拉扎明)与抗肿瘤烷基化试剂结合的应用。国际申请PC/US1989/01037公开了用作放射增敏剂和选择性细胞毒剂的1，2，4-苯并三嗪氧化物。其他有关的专利包括US3868372和US4001410，其中公开了1，2，4-苯并三嗪氧化物的衍生物。国际申请PCT/US1996/13550公开了1，2，4-苯并三嗪氧化物的制剂。它是一种非肠道给药的含水制剂，其主要特征为含有柠檬酸盐缓冲液，并且限定了柠檬酸盐的浓度为0.001M一0.1M，最优选的处方中加入的柠檬酸为0.9605克，加水稀释至1000ml。同时指出主药替拉扎明的剂量范围优选为0.5—0.810克，最优选的处方中加入替拉扎明0.7克，加水稀释至1000ml。经过换算，专利中提到的替拉扎明的浓度范围为0.0028M—0.0046M。但是，替拉扎明的缺点是在非肠道给药的药物载体中的溶解度不够，并且在这些载体中不稳定。即使按照国际申请PCT/US1996/13550公开的方案配制的制剂在低温存放过程中仍存在不稳定、贮藏期较短、易受温度影响而析出等缺陷。在对替拉扎明的水性制剂研究中，我们发现替拉扎明在水中的溶解性非常差，按照现有技术(包括国际申请PCT/US1996/13550公开的方案)配制的注射液非常的不稳定，在常温(20。C)条件下放置一段时间，就会析出少量结晶，后证明结晶为替拉扎明。而在低温(4°C)放置24小时后，也会有替拉扎明结晶析出，由于替拉扎明水性制剂是作为注射液使用，主药替拉扎明的析出会严重影响患者使用的安全性和有效性，增大药物使用的风险。因此，研制出一种更加安全、稳定、有效、且符合人体注射要求的替拉扎明水性制剂，以更好的满足广大患者的需要，成为了药物制剂研究工作者的当务之急。
发明内容本专利发明的目的，在于找到一种更加稳定的替拉扎明非肠道给药含水制剂以解决现有技术中替拉扎明放置容易析出的问题，增强该制剂的稳定性和安全性，满足临床和广大患者对该药的需求。为提高替拉扎明制剂的稳定性和延长贮藏期，我们对新型替拉扎明的非肠道给药含水制剂进行了全面地研究。我们发现，如果减小替拉扎明在水溶液中的浓度，直接配制成1000ml的大容量输液，在放置过程中，溶液非常稳定，不会出现析出结晶等问题，并且动物的静脉刺激性和肌肉刺激性试验均表明本注射液非常安全。本发明提供了一种替拉扎明或其可药用盐的非肠道给药含水制剂，其基本组成为浓度为0.02—0.99咖o1/1的药学制剂中可接受的柠檬酸盐缓冲液和浓度为0.056—0.091mmo1/1的替拉扎明或其可药用盐；pH值为3.06.5。进一步的，所述制剂中柠檬酸盐缓冲液的浓度为0.08—0.5mmo1/1，替拉扎明或其可药用盐的浓度为0.056—0.091mmo1/1，1000ml水溶液基本组成为0.Ol—0.16克替拉扎明或其可药用盐；0.0168克一O.105克柠檬酸；0.004—0.03克氢氧化钠；pH值为3,25.3。更进一步，所述制剂1000ml水溶液基本组成为0.014克替拉扎明或其可用盐；0.0192克柠檬酸；0.005克氢氧化钠；pH值为5.0。本发明还提供了一种制备替拉扎明非肠道给药含水制剂的方法，其特征在于水配制所述的缓冲液，升高温度，并使缓冲液温度保持约6(TC，缓慢加入替拉扎明或其可药用盐搅拌使完全溶解，冷却至常温后，添加输液制剂所用的附加剂，加适量水至1000毫升，调PH，即得。其中所述附加剂可以为输液制剂常用的等渗调节剂(如氯化钠、葡萄糖等)，稳定剂和抗氧化剂等。本发明还提供了一种替拉扎明或其可药用盐的非肠道给药含水制剂在制备治疗癌瘤的药物中的用途，其中所述制剂处方包括浓度为0.02—0.99rnmo1/1的药学制剂中可接受的柠檬酸盐缓冲液和浓度为0.056—0.091mmo1/1的替拉扎明或其可药用的盐；pH值为3.06.5。具体实施例方式下面结合以下实例对本发明做进一步描述，但本发明并不仅仅限于此:制剂制备实例一a:替拉扎明O.Ol克b:柠檬酸0.0042克c:氢氧化钠O.OOl克取300毫升水溶解b、c。完全溶解后适量升温，使溶液温度保持约6(TC，缓慢加入a，搅拌使之完全溶解，冷却至室温后，添加氯化钠等渗透压调节剂，加适量水定容至1000毫升，PH约为6.5。制剂给药方式静脉滴注。6制剂制备实例二:a:替拉扎明0.16克b:拧檬酸0.0208克C:氢氧化钠0.00594克取300毫升水溶解b、c。完全溶解后适量升温，使溶液温度保持约5(TC，缓慢加入a，搅拌使之完全溶解，冷却至室温后，添加氯化钠等渗透压调节剂，加适量水定容至1000毫升，PH约为3.0。制剂给药方式静脉滴注。制剂制备实例三-a:替拉扎明O.Ol克b:柠檬酸0.0168克c-氢氧化钠0.004克取300毫升水溶解b、c。完全溶解后适量升温，使溶液温度保持约55'C，缓慢加入a，搅拌使之完全溶解，冷却至室温后，添加葡萄糖等渗透压调节剂，加适量水定容至1000毫升，PH约为5.3。制剂给药方式静脉滴注。制剂制备实例四a:替拉扎明0.16克b:柠檬酸0.105克c:氢氧化钠0.03克取300毫升水溶解b、c。完全溶解后适量升温，使溶液温度保持约6(TC，缓慢加入a，搅拌使之完全溶解，冷却至室温后，添加葡萄糖等渗透压调节剂，加适量水定容至iooo毫升，PH约为3.2。。制剂给药方式静脉滴注。制剂制备实例五a:替拉扎明0.014克b:柠檬酸0.0192克c:氢氧化钠Q.005克取300亳升水溶解b、c。完全溶解后适量升温，使溶液温度保持约6(TC,缓慢加入a,搅拌使之完全溶解，冷却至室温后，添加氯化钠、葡萄糖等渗透压调节剂，加适量水定容至1000毫升,调节PH约为5.0。制剂给药方式静脉滴注。稳定性对比研究我们选取了根据以上发明的技术方案配制出的澄明替拉扎明大输液(本发明实施例一至五)，与现有技术中的替拉扎明柠檬酸盐注射液共同在20'C恒温条件和4'C恒温条件下储存，观察其外观及析出情况。具体如下-2(TC恒温条件，观察本发明替拉扎明大输液具体处方与替拉扎明柠檬酸盐注射液的稳定性，结果见表一-<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>4'C恒温条件，观察替拉扎明大输液与替拉扎明柠檬酸盐注射液的稳定性，结果见表二:<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>动物药理试验对比研究为了观察本发明的技术方案中的配方在使用过程中动物的反应和耐受性，我们采用的家兔血管刺激试验和肌肉刺激试验。并与现有技术中的柠檬酸缓冲液进行对比研究。一、替拉扎明注射液血管剌激试验试验目的观察静脉注射新配方的替拉扎明大输液(本发明实施例一、四、五)与替拉扎明柠檬酸盐注射液(按PCT/US1996/13550公开方案配制)的血管剌激反应比较。试验材料1、受试药物替拉扎明大输液(本发明实施例一、四、五)、替拉扎明柠檬酸钠注射液(按PCT/US1996/13550公开方案配制)。2、O.W氯化钠注射液3、动物家兔，新西兰种普通级，雌雄各半，体重1.8-2.4kg。试验方法家兔5只，固定于兔箱内，分别于一侧耳缘静脉无菌操作缓慢注射每天注射1次，注射药物分别为替拉扎明大输液(本发明实施例一、四、五)、替拉扎明柠檬酸钠注射液(按PCT/US1996/13550公开方案配制)、生理盐水溶液l.Oml，在另一侧注射同体积的生理盐水。在同一部位连续3次，于最后一次给药后约24小时观察注射部位血管及周围组织的反应，并颈动脉放血处死家兔，取注射部位及其前方3cm血管及周围组织，作常规病理组织学观察。试验结果家兔缓慢静脉注射替拉扎明醋酸钠注射液，在其前方静脉和周围组织肉眼未见明显的红、肿或坏死等异常现象。组织学切片检査发现，与静脉注射生理盐水相比，静脉注射替拉扎明醋酸钠注射液的家兔耳缘静脉血管结构正常，无出血、炎症、组织变性和坏死等反应。家兔缓慢注射替拉扎明柠檬酸盐注射液，在其前方静脉和周围组织出现细微肉眼可见的红、肿现象。组织学切片检査发现，与静脉注射生理盐水相比，静脉注射替拉扎明柠檬酸盐注射液的家兔耳缘静脉血管有少量的出血、炎症反应。试验结论结果表明，缓慢静脉注射替拉扎明注射液(大输液)较已有的替拉扎明柠檬酸盐注射液血管刺激小。二、替拉扎明葡萄糖注射液肌肉注射刺激试验试验目的观察肌肉注射新配方的替拉扎明大输液(本发明实施例一、四、五)和替拉扎明柠檬酸盐注射液(按PCT/US1996/13550公开方案配制)对肌肉的刺激反应。试验材料1、受试药物替拉扎明大输液(本发明实施例一、四、五)、替拉扎明柠檬酸钠注射液(按PCT/US1996/13550公开方案配制)。2、0.9%氯化钠注射液3、动物家兔，新西兰种普通级，雌雄兼用。试验方法家兔5只，分别在其左右两股四头肌内上下交叉注射替拉扎明大输液(本发明实施例一、四、五)2.0ml/只、替拉扎明柠檬酸钠注射液(0.7mg/ml)2.Oml/只或生理盐水2.0ml/只，注射后48小时击头致昏，纵向切开股四头肌，观察注射局部形态、色泽等，并按表三换算成反应等级。表三.剌激反应级数<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>0无明显变化1轻度充血，其范围在0.5X1.0厘米以下2中度充血，其范围在0.5X1.0厘米以上3重度充血，伴有肌肉变性4出现坏死，有褐色变性5出现广泛性坏死试验结果:家兔股四头肌分别注射替拉扎明大输液和替拉扎明柠檬酸钠注射液，部位反应均与生理盐水一样，反应级数为o级，无明显的变化。试验结论本发明替拉扎明大输液(本发明实施例一、四、五)和替拉扎明柠檬酸钠注射液(按PCT/US1996/13550公开方案配制)均无明显的刺激反应。权利要求1、一种替拉扎明非肠道给药含水制剂，其特征在于其基本组成为浓度为0.02-0.99mmol/l的药学制剂中可接受的柠檬酸盐缓冲液，浓度为0.056-0.091mmol/l的替拉扎明或其可药用盐；pH值为3.0～6.5。2、根据权利要求l所述的替拉扎明非肠道给药含水制剂，其特征在于1000ml水溶液基本组成为0.01—0.16克替拉扎明或其可药用盐；0.0168克一O.105克拧檬酸；0.004—0.03克氢氧化钠；pH值为3.2~5.3。3、根据权利要求2所述的替拉扎明非肠道给药含水制剂，其特征在于1000ml水溶液基本组成为0.014克替拉扎明或其可药用盐；0.0192克拧檬酸；0.005克氢氧化钠；pH值为5.0。4、一种制备如权利要求1所述的替拉扎明非肠道给药含水制剂的方法，其特征在于用水配制所述的缓冲液，升高温度，并使缓冲液温度保持50-6(TC，缓慢加入替拉扎明或其可药用盐搅拌使完全溶解，冷却至常温后，添加输液制剂所用的附加剂，加适量水至1000毫升，调PH，即得。5、如权利要求1所述的替拉扎明非肠道给药含水制剂在制备治疗癌瘤的药物中的用途。全文摘要本发明提供了一种替拉扎明非肠道给药含水制剂及其制备方法，其中所述制剂基本组成为浓度为0.02-0.99mmol/l的药学制剂中可接受的柠檬酸盐缓冲液和浓度为0.056-0.091mmol/l的替拉扎明或其可药用盐；pH值为3.0～6.5。该制剂解决了现有技术中替拉扎明溶液放置容易析出的问题，增强该制剂的稳定性和安全性，满足临床和广大患者对该药的需求。文档编号A61K31/53GK101683319SQ20081016158公开日2010年3月31日申请日期2008年9月24日优先权日2008年9月24日发明者孟昭珂,杜九龄,郭殿武申请人:杭州民生药业有限公司