专利名称：：采食长春花叶的夹竹桃天蛾幼虫及其粪便提取物在制备抗肿瘤药物中的新用途的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种昆虫新的医疗用途，尤其是采食长春花叶的夹竹桃天蛾幼虫及其粪便提取物在制备抗肿瘤药物中的用途，属于天然药物领域。
背景技术：
：恶性肿瘤是危害人民生命健康的顽症之一，现有的抗肿瘤药物都不能彻底有效地治愈。据世界卫生组织(WHO)统计资料表明，全世界癌症每年发病约1000万人，死亡约700万人，已成为仅次于心血管病的人类第二杀手。同时由于新型肿瘤的不断发现，迫使人们努力寻找新的抗肿瘤药物。肝癌是我国常见的恶性肿瘤之一，是我国位居第二的癌症"杀手"，常见于中年男性。因其恶性度高、病情进展快，病人早期一般没有什么不适，但一旦出现症状就诊，就已经属于中晚期，故肝癌的治疗难度大。由于化学合成的抗肿瘤药物具有较大的毒副作用，因此从天然产物中寻找毒性低、疗效高的抗癌活性成分仍是近年国内外科学工作者研究的热点之一。而昆虫作为中药入药，在我国有着悠久的历史。尤其是近几十年对其研究有了较大发展，并发现了一些昆虫中含有抗癌等活性物质，在治疗某些疑难杂症放方面取得了可喜的成绩和苗头。早在南宋时期就有斑螫(地胆)治疗癌症的记载。经现代药理学研究表明斑螫素对小鼠腹水肿癌、网织细胞肉瘤有抑制作用，在临床上可治疗原发性肝癌；蟑螂提取物AF2可用于治疗原发性肝癌(陈利铭，1986)等。长春花(Caf/^ra"Awrow^)是夹竹桃科的一种重要药用植物。在海南分布于万宁、陵水、三亚、东方、海口等地。我国山东、江苏、福建、广东等省份有分布，原产于非洲东部，现各热区均有栽培。全草药用，具有镇静安神，平肝降压之功效。可用于治疗白血病、肺癌、胃癌、子宫癌、淋巴肉瘤、乳癌、卵巢癌、睾丸癌、等症。夹竹桃天蛾(Da;^m's"en'!'L.)就是一种新发生的尤其危害夹竹桃科植物较为严重的害虫。它为鳞翅目天蛾科白腰天蛾属昆虫，别名粉绿白腰天蛾、鹰纹天蛾，其幼虫主要取食夹竹桃和长春花等植物的新梢叶片及嫩茎。国外有少量对采食夹竹桃叶的夹竹桃天蛾幼虫及其粪便中强心苷类化学成分的研究，发现其粪便提取物中含有大多数夹竹桃叶中的强心苷类成分且有些成分明显高于其幼虫和夹竹桃叶的含量，并从粪便中获得了大量的欧夹竹桃甙乙和其他9种强心苷类化合物，由于欧夹竹桃苷丙发生脱乙酰作用导致欧夹竹桃甙乙的增加，从而降低了自体中毒，得出夹竹桃叶中的强心苷类成分可以在采食其叶的夹竹桃天蛾幼虫的整个生长过程中以生物活性成分的形式通过消化道(Phytochemistry,1996);国内仅有关于夹竹桃天蛾幼虫形态、取食表现方面的文献报道(台湾昆虫，2001)。本发明所述的采食长春花叶的夹竹桃天蛾幼虫及其粪便提取物在制备抗肿瘤药物中的用途，至今尚未见国内外有文献报道和专利公开。
发明内容本发明的目的是提供采食长春花叶的夹竹桃天蛾幼虫的新用途，即采食长春花P+的夹竹桃天蛾幼虫及其粪便提取物在制备抗肿瘤药物中的用途。本发明的内容是采食长春花叶的夹竹桃天蛾幼虫及其粪便提取物在制备抗肿瘤药物中的用途，所述采食长春花叶的夹竹桃天蛾幼虫粪便提取物可通过下述步骤获得是用水和有机溶剂作为提取剂，从采食长春花叶的夹竹桃天蛾幼虫粪便中提取得到夹竹桃天蛾幼虫粪便提取物。其中，所述有机溶剂具体可为甲醇、乙醇、石油醚、氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇、苯或甲苯。所述提取溶剂具体可为体积百分含量为95%的乙醇水溶液。所述提取可为冷浸提取，温度为常温。至少提取一次，每次提取时间为l-3天。所述肿瘤可为肝癌、胃癌或宫颈癌。根据以上方法所制备的预防和/或治疗肿瘤药物可通过注射、喷射、滴鼻、滴眼、渗透、吸收、物理或化学介导的方法导入机体如肌肉、皮内、皮下、静脉、粘膜组织；或是被其他物质混合或包埋后导入机体。还可以添加适当的药用辅料，按照药学领域的常规制剂工艺，即可制成片剂、粉剂、胶囊剂、颗粒剂、滴丸剂、口服液等口服药物制剂和注射药物制剂。本发明的采食长春花叶的夹竹桃天蛾幼虫粪便提取物，方法简单、成本低廉、变害为益。实验证明，该提取物能够有效的抑制人肿瘤细胞的生长，如人肝癌、胃癌或宫颈癌细胞。同时初步临床疗效观察显示本发明所提供的采食长春花叶的夹竹桃天蛾幼虫的粪便提取物对制备抗肿瘤药物，尤其是抗肝癌、胃癌、宫颈癌药物具有重要意义。一、体外活性筛选下面是采食长春花叶的夹竹桃天蛾幼虫粪便提取物的体外活性筛选试验及其结果。1.抗肿瘤活性测试采用MTT法。MTT法即四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法。其原理为MTT化学名3-(4，5-二甲基-2-噻唑)-2，5-二苯基溴化四唑，水溶液为黄色化合物，是一种接受氢离子的染料，作用于活细胞线粒体中的呼吸链，在琥珀酸脱氢酶和细胞色素C的作用下tetrazolium环开裂，生成蓝色的甲臜结晶(formazan)，formazan结晶的生成量仅与活细胞数目成正比(死细胞中琥珀酸脱氢酶消失，不能将MTT还原)。2.活性测试方法为实验设阴性对照组(水)、DMSO溶剂对照组、阳性对照组(丝裂素C)和8个不同浓度(O.l，0.2，0.4，0.8，1.6,3.2,6.3,12.5)的待测样品，每个浓度设3个平行。收集对数生长期细胞，血球计数板计数，按每孔4500个癌细胞量接种于96孔平底细胞培养板中，置于5。/。C02、湿度90%以上、37。C温箱中培养。24h后取出加入一定量的待测样品，继续培养3d后取出置于显微镜下观察每孔细胞形态，记录细胞形态变化情况，接着每孔加入5mg/mL的MTT溶液(溶于平衡盐溶液PBS)50^L，37'C反应4h后，将细胞培养液吸出，每孔加入100nLDMSO将Formazane充分溶解，将细胞培养板置于MK3酶标仪上，用570nm波长测各孔的吸光度(A)，按下列公式求生长抑制率。生长抑制率(％)=(1——用鄉TOAit■阴性对照组平均A值7以样品浓度为横坐标，以抑制率为纵坐标，作图并求出抑制率为50%时样品的浓度(1<:50)，样品活性结果即以半数抑制浓度(IC50)表示。3.活性测试结果为样品对四种肿瘤细胞株的毒性作用<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>幼虫粪便提取物注毒性值ICso,即药物对细胞杀灭50%时的浓度值。ICso值越大则毒性越小。二、初步临床疗效观察下面是采食长春花叶的夹竹桃天蛾幼虫粪便提取物治疗100例肝癌的临床疗效情况统计1.病例选择IOO例病人，均经各大医院确诊为肝癌晚期患者，其中男42例，女58例，年龄最小者35岁，最大者65岁。2.治疗方法对确诊为肝癌晚期患者，给予本发明成药(约含O.Olg采食长春花叶的夹竹桃天蛾幼虫粪便提取物的2号胶囊)服用，一日二次，每次一粒，开水冲服。每40天为一个疗程，连续两个疗程后停药休息一周，详细观察病情变化进行检査。然后进行第三个疗程治疗，在服药期间停服其它药品c3.疗效标准临床治愈症状及客观检査阳性征象消失，连续半年无复发者。临床显著症状基本消失，癌灶縮小一半以上，其它客观检查有明显好转，观察半年以上不再发展者。临床有效症状有所改善，病灶基本稳定，观察在一个月以上者。临床无效症状及客观检査无改善，或仅有短期改善，而又迅速恶化者。4.疗效观察结果疗效总例数百分比备注临床治愈临床显著临床有效临床无效253735325%37%35%3%扩散转移本发明的优点是1、本发明无须煎煮，治疗方便，有效率达97%。2、本发明能够控制癌细胞增生，防止癌细胞扩散，使癌细胞枯萎脱落消失。具体实施方式实施例1取采食长春花叶的夹竹桃天蛾幼虫粪便(400g)，用11倍量95%乙醇分3次(5、3、3倍)浸提，常温提取时间分别为3、2、1天，合并提取液减压回收乙醇，浓縮干燥得到浸膏粉，浸膏粉加入淀粉适量，混均、制粒、干燥、整粒，装入胶囊，制成1000粒即可。'实施例2取釆食长春花叶的夹竹桃天蛾幼虫粪便(300g)，用9倍量卯％乙醇冷浸提取2次，每次2天，减压浓縮渗漉液至无醇味得浓縮液，加入淀粉等适量辅料混均，冷冻干燥，粉碎成粉末、压制成1000片即可。实施例3取采食长春花叶的夹竹桃天蛾幼虫粪便(500g)，用10倍量90%乙醇冷浸提取1次，常温提取3天，减压浓縮渗漉液至无醇味得浓縮液，加入淀粉等适量辅料混均，冷冻干燥，粉碎成粉末、压制成1000片即可。权利要求1、采食长春花叶的夹竹桃天蛾幼虫在制备抗肿瘤药物中的新用途，其特征在于所述夹竹桃天蛾为采食长春花叶的鳞翅目天蛾科白腰天蛾属昆虫夹竹桃天蛾(DaphnisneriiL.)，药用其粪便。2、根据权利要求1所述的新用途，其特征在于该提取物可按照如下方法制备是用水和/或有机溶剂作为提取剂，从采食长春花叶的夹竹桃天蛾幼虫的粪便中提取得到该提取物。3、根据权利要求2所述的新用途，其特征在于所述有机溶剂为甲醇、乙醇、石油醚、氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇、苯或甲苯。4、根据权利要求2所述的新用途，其特征在于所述提取溶剂为体积百分含量为95%的乙醇水溶液。5、根据权利要求2-4中任一所述的应用，其特征在于所述提取为冷浸提取。6、根据权利要求5所述的应用，其特征在于所述的提取温度为常温。7、根据权利要求5或6所述的应用，其特征在于所述提取中，至少提取一次，每次提取的时间为1-3天。8、根据权利要求l-7中任一所述的应用，其特征在于所述肿瘤为肝癌、胃癌或宫颈癌。9、根据权利要求2所述采食长春花叶的夹竹桃天蛾幼虫粪便提取物，其特征在于所述该提取物含有生物碱类化合物。全文摘要本发明公开了一种采食长春花叶的夹竹桃天蛾幼虫粪便提取物及其在抗肿瘤药物中的新用途。所述提取物是按照如下方法制备的将采食长春花叶的夹竹桃天蛾幼虫的粪便用水和/或有机溶剂为提取剂，从中得到该提取物。本发明所提供的采食长春花叶的夹竹桃天蛾幼虫粪便提取物具有较好的抗肿瘤作用。文档编号A61K35/56GK101416988SQ20081018691公开日2009年4月29日申请日期2008年12月7日优先权日2008年12月7日发明者娇吴,戴好富,梅文莉申请人:中国热带农业科学院热带生物技术研究所