专利名称：：治疗妇科疾病的药物制剂的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种以天然植物为药用成份的用于妇科疾病的复方药物制剂。
背景技术：
：世界卫生组织对中国妇女的调査表明中国41%的女性患有不同程度的妇科疾病，并且发病率呈逐年上升趋麵，妇科疾病治疗药物市场规模迅速扩大，市场期待疗效好、毒副作用低的妇科疾病的治疗药物。中国专利申请号97120991.X公开了一种"内异症中药制剂"，其成分为丹参、莪术、柴胡、赤芍、当归、三棱、香附、延胡索、五灵脂、牛膝、郁金、甘草、三七，所述制剂为口服制剂。
发明内容本发明的目的在于提供一种疗效好、毒副作用低的治疗妇科疾病的药物制剂。本发明所述的治疗妇科疾病的药物制剂是由下述重量份数的原料药制成的口服制剂紫丹参450、莪术250、竹叶柴胡250、三七150、赤芍250、当归250、三棱175、香附150、延胡索175、甘草100。本申请组方中采用了紫丹参为君药，所述的紫丹参为唇形科植物滇丹参Sa/Wa，朋a朋鹏jD.H.Wight的干燥根，主产云南，与通常所用的丹参不同，丹参为5Wvia附f/ft'on^/zaBge.的干燥根及根茎。本申请所采用的竹叶柴胡为伞形科植物竹叶柴胡Bwp/e"ra附m^g/朋m附^Vall.exDC.、马尾柴古月5wp/ew/7/附/m'crocep/w/wmDiels、马尔康柴古月5wp/eww附附a/co"em^ShanetY丄i或小柴胡5w;/ewnw7^"恥Buch,Ham.exD.Don的干燥全草，与通常所用的柴胡也不相同，柴胡为5wp/e"rawc//"eraeDC.或狭叶柴胡5up/e"ra附scor^wen'/o//wmWilld.的干燥根。本申请采用特定药材和特定用量，组方成分合理，具有活血化瘀，疏肝理气，调经止痛，软坚化积作用。经药效学试验研究证明，该药可使大鼠实验性子宫内膜症的异位内膜萎縮，坏死并消除盆腔炎症，同时具有抗炎、止痛、抗血小板聚集、抑制垂体后叶素引起的离体或在体子宫痉挛收縮。用于妇女瘀血阻滞所致月经不调，痛经，经期不适、癥瘕积聚，盆腔子宫内膜异位症见上述症状者。对于治疗妇科疾病具有非常良好的效果和应用前景。常规口服量，一次1015g，一日2次。本发明药效学实验实验目的实验研究本发明对离体大鼠子宫、在体大鼠子宫、兔血小板聚集以及大鼠子宫内膜异位模型的影响。拟对本发明调经止血、活血化瘀、治疗子宫内膜异位症等提供药效学依据。试验材料1、动物SD大鼠，雌性，体重150—250g.鼠龄2-25个月。由云南省天然药物药理重点实验室动物室提供。健康家兔，1.52.0kg，雌雄均用，由昆明医学院动物科提供。2、药物与试剂本发明(实施例1所述药物制剂)由云南滇虹天然药物股份有限公司提供，蒸馏水稀释后供用。专利97120991.X对照药由发明人蔡利珊提供制法，云南滇虹天然药物股份有限公司按工艺制备提供(以下均称为专利对照组)。阳性对照药物达拉唑，江苏扬州制药厂生产。血小板聚集诱导剂二磷酸腺苷(ADP)系瑞士进口分装。UniversalDAKOLSAB+KIT，PEROXIDASE试剂盒(购自DAKOCoorporation，Carpinteria，CA)。抗鼠NK细胞抗体MCA1427，抗鼠巨噬细胞MCA341R，抗鼠CD8细胞MCA48G，抗鼠树突细胞MCA1029G，均购自SerotecLtd。3、仪器Shimadzu(U135C)平衡记录仪，高倍显微镜，LBY—NJ2血液凝聚仪(北京普利生生化仪器中心生产)。方法与结果1、本发明离体子宫实验配制克氏液，含NaC17.5、KC10.35、CaCl20.06、MgCl20.05、NaH2PO40.1、NaHC031.0、葡萄糖0.5g/L。提前二天对大鼠皮下注射已烯雌酚0.1mg/kg.d。颈椎脱臼处死大鼠，剖腹取出子宫，置于克氏液中，将一侧子宫角两端结扎，一端固定于通气钩上，另一端与张力换能器相连，置于20mL克氏液的麦氏管中。负荷约lg，工作温度31土0.5'C，通氧气1-2个泡/秒，平衡45min，每15min换液一次。张力换能器与平衡记录仪相连，记录曲线。记录一段正常子宫收縮曲线后，滴入一定量本发明混悬液，记录曲线，滴入垂体后叶激素(1.39X10—5u/raL),再次记录曲线。三次换液恢复后，记录一段正常曲线，滴入同剂量垂体后叶激素，记录曲线。统计方法采用配对t一test。结果(表1)表明，本发明体外(1.5、3.0mg生药/mL)显著增强大鼠离体子宫最大收縮幅度(P〈0.05);(3.0mg生药/mL)显著降低基础张力(P<0.01)，并在基础张力最大收縮幅度方面显著对抗垂体后叶激素作用(P<0.05)。且本发明组各作用均强于专利对照组。表l本发明对大鼠离体子宫的影响(Mean土SD，n=6)<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>*P<0.05，**P<0.01与给药前进行配对West。2、本发明在体子宫实验将雌性大鼠用已烯雌酚lmg/kg.d皮下注射连续给药两天，进行人工动情。3%戊巴比妥钠0.1mL/kgip麻醉动物，下腹做一切口分离显露子宫，用保湿瓶固定一侧子宫角卵巢端及阴道端，中间用缝线连接张力换能器，负荷Ig。上腹部做一切口，分离十二指肠，以备给药。平衡30min后，记录正常曲线。经股静脉iv1.0u/kg垂体后叶激素，记录曲线。待恢复正常后，经十二指肠给一定量本发明，60min后记录曲线。再次iv同等剂量的垂体后叶激素，记录曲线。统计方法采用配对t-test。结果表明(表2)，本发明(13.3、26.6g生药/kg)对在体大鼠子宫收缩频率呈双向调节作用，同时在收缩频率及收縮幅度方面显著对抗垂体后叶激素作用(P<0.05)。专利对照组具有类似作用，但等剂量组药效低于本专利组。表2本发明对在体大子宫的影响(Mean±SD,n=6)<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>专利对照组<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>*P<0.05给药前后配对t-test;*P<0.05给药前给垂体后叶激素前后差值，与给药后给垂体后叶激前后差值进行配对t-test。3、本发明体外兔血小板集聚实验按Born氏比浊法采用血液凝聚仪进行，分别取富血小板血浆(PPP)及贫血小板血浆(PRP)各300iaL于比浊管中，置于预热孔；于PPP管中加溶媒或药液10nL，37。C恒温温育10min。测定时用PPP管调零，再用PRP管调幅；稳定后在磁棒搅拌下，在PRP中加入诱导剂ADP3.OpM，记录5rain最大聚集率，计算抑制率。结果表明，10g/L本发明对ADP诱导的兔体外血小板集聚抑制率达6(m，而专利对照组的兔体外血小板集聚抑制率为40%。2者均体现较强的作用，但本发明组强于对照组。4、本发明大鼠子宫内膜异位模型实验动物模型建立及给药将34只60天龄性成熟雌性未交配SD大鼠28只用实验方法造成内异症模型，另6只实验结束时取正常子宫内膜组织为对照。首先将21只大鼠在麻醉状态下用已确立的方法造模。分别结扎子宫输卵管端和宫颈端后切下左侧子宫角，置于无菌生理盐水中，切下约2cmX2cm组织块5块，用5个0无损伤丝线分别缝合在回盲部肠系膜上，术中用无菌生理盐水保持腹腔湿润，整个手术过程保持无菌状态。15天后开腹见大鼠子宫内膜种植成功后当天同法将另7只大鼠造模。整个实验期间大鼠饲养于昆明医学院天然药物药理重点实验室动物科内，每周检测大鼠体重，喂普通大鼠饲料，任其饮水，自然光照环境。第2批7只大鼠定为第1组，为术后早期治疗组，另21只随机分为3组，第2组为治疗组，第3组为治疗对照组，第4组为造模空白对照组，第1、2组分别给予本发明2g/kg.d蒸馏水稀释后分次灌胃，第3组予达拉唑60mg/kg.d蒸馏水稀释后分次灌胃，第4组予生理盐水2ml/d分次灌胃。于第2批造模后第2天起灌胃45天后将所有实验动物过量麻醉处死，取异位病灶及正常对照组大鼠左侧子宫角行病理检査和免疫组化检测。每次手术均测量病灶并照相记录。病理检査和免疫组化检测；异位病灶组织均用10%中性福尔马林液固定24小时，乙醇常规脱水后包埋于石蜡中，每块标本切取2—3块5um厚切片贴附在经多聚赖氨酸处理的玻片上风干，置二甲苯液中孵育5分钟两次，去除过多残留液后置无水乙醇中3分钟两次，去除过多残留液后置95%乙醇中3分钟两次，去除过多残留液后置蒸馏水中30秒钟水化。水化后用UniversalDAKOLSAB+KIT,PEROXIDASE试剂盒进行免疫组化检测，按试剂盒使用说明操作。标本水化后仔细擦干过多水后与3%过氧化氢溶液孵育5分钟，PBS液冲洗两次仔细擦干过多残留液后与一抗孵育15分钟，PBS液冲洗两次仔细擦干过多残留液后与链霉结合素过氧化氢酶孵育15分钟，PBS液冲洗两次仔细擦干过多残留液后与DAB液孵育5分钟后DAB液冲洗，再用蒸馏水冲洗，苏木素液复染后在氨水中侵入后提起10次，蒸馏水轻轻冲洗后置蒸馏水中2分钟，然后脱水，封固待检。免疫组化染色结果棕黄色为阳性，兰色为阴性。各组织标本均另做HE染色切片检测子宫内膜细胞退化程度。病灶内膜上皮细胞保存度评分；按如下标准评分；完好保存评3分；中等度保存伴白细胞侵润评2分；保存较差，仅遇见上皮细胞评l分；无上皮细胞存留评0分；每只大鼠取2—3个标本，每组共20个标本评分后取平均分。用直方图表示，如图1。免疫组化染色分析；每个标本取34高倍镜视野(*400倍)观察，免疫细胞总数的比例照如下标准评分；NK细胞。占0%—1%为阴性(_)，占2%—4%为阳性(+)，超过5%为强阳性(++);巨噬细胞占0%—39%为阴性(一)，占40%—60%为阳性(+);超过60%为强阳性(++);CD8细胞，占0%—6%为阴性(一)，占7%—10%为阳性(+)，超过10%为强阳性；树突细胞，占0%—3%为阴性(一)，占4%—7%为阳性(+)，超过7%为强阳性(++)。各组大鼠阴性和阳性(包括阳性和强阳性)的只数如下表(表3)。统计分析使用SPSS9.0版统计软件行乂2检验，P<=0.05认为有显著性差。表3免疫组化染色各组大鼠阴性和阳性(包括阳性和强阳性)的只数表分类CD8DC巨噬细胞NK细胞总例数组别阴性阳性阴性阳性阴性阳性，阴性阳性正常组160062462216617专利对照组43422434744352347治疗组34443257w^且343452167结果表明异位病灶子宫内膜上皮细胞退化程度早期治疗组比治疗组明显，治疗组和治疗对照无明显差异，本发明的3个剂量组均比空白对照组以及等剂量专利对照组明显，空白对照组内膜上皮细胞也有明显退化，但P〉0.05，统计学上没有显著性差异。病灶内NK细胞浸润阳性率阳性率早期治疗组，治疗组和治疗对照组分别为85.7%，71.4%，57.1%，正常组为66.7%，空白对照组为14.3%,前四组两两之间比较p〉0.05，统计学上无显著性差异，但前四组与空白对照组两两之间比较p<0.05，统计学上有显著性差异；病灶内巨噬细胞侵润阳性率早期治疗组，治疗组和治疗对照组分别为28.6%，42.9%，28.6%,高于正常组的OV比空白对照组的85.7%低，前四组两两之间比较pX).05，统计学上无显著性差异，但前四组与空白对照组两两之间比较P<0.05，统计,学上有显著性差异；病灶内CD8细胞侵润阳性率早期治疗组，治疗组和治疗对照组均为57.1%，较正常组的16.7%和空白对照组的28.6%高，但是p〉0.05，统计学上无显著性差异；病灶内树突细胞侵润阳性率阳性率早期治疗组，治疗组和治疗对照组分别为57.1%,57.1%，42.9%，较正常组的0%和空白对照组的28.6%高，但是pX).05，统计学上无显著性差异。实验结论1、本发明体外(1.5、3.Omg生药/mL)显著增强大鼠离体子宫最大收縮幅度(P<0.05);(3.0mg生药/mL)显著降低基础张力(P<0.01)，并在基础张力及最大收縮幅度方面显著对抗垂体后叶激素作用(P<0.05)。2、本发明(13.3、26.6g生药/kg)对在体大鼠子宫收縮频率呈双向调节作用，同时在收縮率及收縮幅度方面显著对抗垂体后叶激素作用(P<0.05)。3、本发明(10g/L)对体外兔血小板聚集有抑制作用，抑制率达60%。4、本发明(5.32g生药/kg.d)对大鼠子宫内膜异位症模型疗效和达拉唑相似，早期治疗组疗效更佳，其疗效是通过双向调节细胞及体液免疫功能而实现的，作用机理较单一免疫增强剂或免疫抑制剂更佳。5、专利对照组在各实验中均显示较好的作用，其作用与本发明组相比，本发明组均强于专利对照组。综上所述，本发明药效学试验显示子宫收縮行为有双向调节作用并抑制血小板聚集，说明本品有调经止痛和活血化瘀功效；子宫内膜异位症模型上本品有相似于达拉唑的縮小作用，可能通过调节细胞和体液免疫而显抗炎消瘀疗效。本发明为天然植物药的现代制剂，无明显毒性和副作用，有独到之处。图l为大鼠子宫内膜异位模型实验评分直方图。图中治疗组和早期治疗组为本发明。具体实施例方式实施例l:取紫丹参450、莪术250、竹叶柴胡250、三七150、赤芍250、当归250、三棱175、香附150、延胡索175、甘草100(均为重量份数)。以上十味药材，紫丹参、莪术、三七、当归、延胡索照流浸膏剂与浸膏项下的渗漉法(《中国药典》一部附录I)，用70%乙醇作溶剂，浸渍24小时后进行渗漉，收集漉液，减压回收乙醇并浓縮至相对密度约为1.30(5(TC)的稠膏；药渣与其余竹叶柴胡等五味加水煎煮二次，每次煎煮2小时，合并煎液，滤过，滤液浓縮至相对密度为1.30(5(TC)的稠膏；合并上述两种稠膏，加入蜂蜜(炼)100、炼糖165、山梨酸钾3(均为重量份数)，混匀，即得煎膏制剂。实施例2:取紫丹参450、莪术250、竹叶柴胡250、三七150、赤芍250、当归250、三棱175、香附150、延胡索175、甘草IOO(均为重量份数)。以上十味药材，加入8倍量60%乙醇为溶剂回流提取1.5小时，滤出药液，药渣继续加入6倍量60%乙醇回流提取1.5小时，合并药液，减压回收乙醇并浓缩至相对密度约为1.15(50'C)的稠膏；喷雾干燥，药粉加入甘露醇以及微粉硅胶，制成小丸，即得口服丸剂。实施例3:取紫丹参450、莪术250、竹叶柴胡250、三七150、赤芍250、当归250、三棱175、香附150、延胡索175、甘草IOO(均为重量份数)。以上十味药材，经水12倍量煎煮2小时后，水液采用大孔吸附树脂D—lOl吸附,'用70%的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇并浓缩至相对密度约为1.30(5(TC)的稠膏，微波干燥；干燥药粉加入适量糊精制粒，干燥，加入硬脂酸镁，填充胶囊或者直接压片，即得胶囊制剂或者片剂。权利要求1、一种治疗妇科疾病的药物制剂，其特征在于是由下述重量份数的原料药制成的口服制剂紫丹参450、莪术250、竹叶柴胡250、三七150、赤芍250、当归250、三棱175、香附150、延胡索175、甘草100。全文摘要本发明涉及一种以天然植物为药用成份的用于妇科疾病的复方药物制剂。本发明是由下述重量份数的原料药制成的口服制剂紫丹参450、莪术250、竹叶柴胡250、三七150、赤芍250、当归250、三棱175、香附150、延胡索175、甘草100。本申请采用特定药材和特定用量，组方成分合理，具有活血化瘀，疏肝理气，调经止痛，软坚化积作用。经药效学试验研究证明，该药可使大鼠实验性子宫内膜症的异位内膜萎缩，坏死并消除盆腔炎症，同时具有抗炎、止痛、抗血小板聚集、抑制垂体后叶素引起的离体或在体子宫痉挛收缩。用于妇女瘀血阻滞所致月经不调，痛经，经期不适、癓瘕积聚，盆腔子宫内膜异位症见上述症状者。文档编号A61K36/906GK101422587SQ20081023369公开日2009年5月6日申请日期2008年12月9日优先权日2008年12月9日发明者周家礽,汪伯良申请人:昆明滇虹药业有限公司