专利名称：：金线莲苷及其衍生物及制备方法和用途的制作方法
技术领域：
：本发明属于医药
技术领域：
，涉及蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)抑制剂，具体涉及金线莲苷及其衍生物和其制备方法，并涉及金线莲苷及其衍生物在治疗糖尿病和高血脂等疾病中的应用。
背景技术：
：糖尿病是一种与遗传因素相关联的全身性慢性分泌性代谢疾病，是体内胰岛素的绝对或相对不足而引起糖、脂肪、蛋白质的代谢紊乱，随着患糖尿病时间的延长，体内代谢紊乱如得不到很好的控制，可导致视网膜病变、高血压、肾脏病变、冠心病、下肢血管病变、脑血管病变、神经病变等慢性并发症，最终发生失明、下肢坏疽、尿毒症、脑中风或心肌梗死，甚至危及生命。据世界卫生组织统计，在全世界，1985年诊断患糖尿病的人数为3000万，1995年上升到1.35个亿，预测在2025年将有3亿人患病。金线莲(化r^3J/7oe"oc^7/')为兰科开唇兰属植物花叶开唇兰(^oec/ocr力y/iAyrox6"r^y/)的干燥全草，是多年生珍稀中草药。我国南方广西、广东、海南、贵州、四川、云南等省都有其丰富的药材资源，民间用药较广。金线莲在民间素有"金草"、"神药"、"乌人参"等美称，在浙江、福建一带的产地，其鲜草售价高达360~500元/公斤。
发明内容我们在国家自然科学基金(NSFC30400585)及囯家中医药管理局中药研究专项基金(04-05ZQ03)的资助下，在降血糖活性的指导下，对金线莲降血糖的活性成分进行了系统的研究，分离到主要活性成分kinsenoside(4(必-^-D-吡喃葡萄糖氧基-丁酸(K)内酯，在本专利申请中称为"金线莲苷"。)。金线莲苷我们对金线莲苷进行了降血糖的活性研究，并从体外蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)抑制活性等方面探讨了相关的降血糖机制。结果显示受试化合物金线莲苷具有显著的抗高血糖活性，对高血糖的逆转具有剂量依赖性。体外PTP1B抑制活性筛选结果表明金线莲苷对PTP1B有显著的抑制作用，呈显著的剂量相关性，抑制作用与体外抗高血糖活性相平行。且对PTP家族其余酶抑制作用较小，表现出对PTP1B的高度专一性抑制。金线莲苷作为PTP1B特异抑制剂，用于治疗II型糖尿病和肥胖症，值得进一步研究和开发。另外，kinsenoside使血清超氧化物岐化酶活力和清除羟自由基能力显著增强，过氧化产物丙二醛减少，活性因子NO含量明显降低；胰腺组织病理切片检査揭示了金线莲苷通过胰岛0细胞形态和功能的恢复发挥降血糖作用；口服葡萄糖耐量试验中金线莲苷使高血糖大鼠和正常大鼠对外源性葡萄糖的耐受能力明显改善。急性毒性试验中，金线莲苷给药达400mg/kg剂量组小鼠仍无不良反应，毒性极低。另外，金线莲苷还具有较强的保肝、降脂作用，而其差向异构体GoodyerosideA(4(i)-々-D-吡喃葡萄糖氧基-丁酸(内酯)则不具有抗高血糖及降脂作用，表明金线莲苷的4C5)构型是其抗高血糖及降脂作用药效基团。本发明的目的是提供蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)抑制剂金线莲苷及其衍生物、类似物，同时提供合成这些衍生物和类似物的方法。本发明的另一个目的是以本发明所提供的化合物在治疗糖尿病和高血脂等疾病中的应用。本发明提供的化合物具有以下结构式其中R为氢原子、30碳以下烷基、-CH2C00R,(其中Ri为氢原子或30碳以下烷基)、-CH2CH2COOR2(其中R2为氢原子或30碳以下烷基)、或-QUr(其中Ar为带各种取代基的苯环、吡啶环、喹啉环、^^喃环、吡唂环或噻吩环等芳香环或芳杂环，其中Ar上取代基可以为氢原子或30碳以下烷基、卤素、羟基、氨基、醚基、脂肪胺基、芳香胺基、羧基等)。当所述的R、K或R2为30碳以下烷基时，优选甲基、乙基或丙基。本发明所提供的金线莲苷的衍生物、类似物其可药用盐的结构式如(I)所其中R=H时的化合物本专利中称为金线莲苷；R=-CH3时的化合物本专利中称为化合物KD1;R=-CH2CH3时的化合物本专利中称为化合物KD2;R=-CH2C00H时的化合物本专利中称为化合物KD3;R=-CH2CH2COOH时的化合物本专利中称为化合物KD4;R=-CH2ph时的化合物本专利中称为化合物KD5;R=-CH2-p-hydroxyl-ph时的化合物本专利中称为化合物KD6;R=-CH广p-carboxyl-ph时的化合物本专利中称为化合物KD7;R=-CH2-p-C00H-CH=CH-ph时的化合物本专利中称为化合物KD8;R=-CH2-2-thiophene时的化合物本专利中称为化合物KD9;R=-CH2-2-[(5，-COOH)-U-iiophene]时的化合物本专利中称为化合物KDlO。制备本发明所述化合物是以金线莲苷为起始原料，经Ac20/吡啶保护葡萄糖基上羟基，通过LDA/HMPA/THF/低温条件与R-X反应，进一步在NaOCH3/CH3OH/低温/无水条件脱去葡萄糖基上保护基三步反应制得。其合成路线如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>本发明提供了新的金线莲苷及其衍生物、类似物，同时提供了适合于实用的制备方法。本发明实验表明，金线莲苷及其衍生物在抑制蛋白酪氨酸磷酸酶IB(PTPIB)活性以及在制备治疗糖尿病和高血脂药物中的应用的前景。图1为本发明提供的化合物之结构式。具体实施例方式实施例l金线莲苷(化合物l)的提取分离与纯化l公斤金线莲干燥全草经粉碎后用甲醇加热回流提取6次，每次2h,过滤，回收溶剂。粗提物加适量水悬浮，依次用石油醚、乙酸乙醋、正丁醇萃取，萃取液浓缩成浸膏得正丁醇部分500g。正丁醇部分IOg经反复的硅胶柱色谱，以氯仿-甲醇梯度洗脱，再经SephadexLH-20凝胶柱结合重结晶，得到金线莲苷l580金线莲苷无色针晶，易溶于甲醇、水，难溶于氯仿、丙酮、乙醇。熔点151.0-153。C，Molish反应阳性。IRv隨cm":3400(v0H),2926、2908(vCH),1769，889。酸水解与标准品共薄层检出葡萄糖。FAB(-)-MS:m/z264([M-H]+,355-Gly)，D16-62.8°(c0.64，H20)。'H-NMR(inPyr):S2.71(1H，dd，/=18.0Hz，/=2.5Hz，H-3),2.89(1H，dd，/=18.0Hz,</-6.3Hz，H-3),3.18(1H，m,H-5，),3.27(1H，dd，/=8.0Hz，/=6.1Hz,H-2，)，3.29(1H，m，H-4，)，3.34(1H，m，H-3，)，3.65(1H,dd,/=l1.2Hz，《/=3.7Hz，H-6，)，3.86(1H,dd，</=10.3Hz,/=4.7Hz，H-5)，4.36(1H,dd,1.7Hz，/=2,3Hz，H-6，)，4.40(1H,dd，/=10.3Hz，1.5Hz,H-5),4.50(1H，m,H-4),4.77(1H,d,■/=7.9Hz，H-1')。13C-NMR(inMeOD):337.0(C-3),62.7(C-6，)，71.4(C-4')，74.8(C-2，)，75.3(C—5),76.0(C-4),77.9(C-5，)，78.1(C-3，)，103.6(C-1，)，179.0(C-1)。将金线莲苷于甲醇中培养单晶，进行X-衍射结构分析，确定4位手性碳为R构型，结构如下图所示。实施例2全乙酰化金线莲苷(化合物2)的合成金线莲苷(0.5g,2mmol)溶于IOml的无水吡啶中，搅拌溶解后，力口5ml的醋酸酐，室温反应7h后，TLC跟踪检测，将反应液倒入60ml的饱和CuS04中，用乙酸乙酯萃取(50mlx2),合并有机层，0.5MHC1(20ml)洗涤，饱和氯化钠洗涤，无水Na2S0,干燥过夜。减压蒸除溶剂，硅胶柱纯化的得白色固体(即全乙酰化金线莲苷)780mg。实施例3化合物3-1~3-10的合成全乙酰化金线莲苷(0.5g,1.2mmol)溶于IOml的无水THF中，反应体系金线莲苷达到-25。C,加入lml二异丙基胺基锂(LDA),加入CH3-Br,化学当量为l:l,反应lh后加入2ml六甲基磷酸三胺(HMPA),减压蒸除溶剂，慢慢滴加20ml的冰水。快速用用乙酸乙酯萃取(50mlx2),合并有机层，无水Na2S0,干燥过夜。减压蒸除溶剂，硅胶柱纯化的得化合物3-l(白色固体，358mg)。用相同方法制备得化合物3-2(白色固体，374mg),化合物3-3(白色固体，390mg)，化合物3-4(白色固体，402mg)，化合物3-5(白色固体，420mg),化合物3-6(白色固体，431mg)，化合物3-7(白色固体，443mg)，化合物3-8(白色固体，452mg),化合物3-9(白色固体，417mg),化合物3-10(白色固体，435mg)。实施例4化合物KD1~KD10的合成化合物3-l0.5g溶于20ml的无水甲醇中，搅拌溶解后，加入O.3gNaOCH3，10'C反应6h,TLC跟踪检测，减压蒸除溶剂和醋酸，硅胶柱纯化的得化合物KD1。化合物KD2-KD10用相同方法制备。化合物KD1(R=-CH3,白色固体，358mg)，&NMR(400MHz，CD3OD):S(ppm)1.17(3H,d,/=7.2Hz，3-CH3)，2.76(1H,m,3-H)，3.41(1H，m,4-H),4.30(1H,m，5-H)，4.54(1H,m,5-H)，5.01(1H，m,l，-H),3.403.81(6H,m,2，-H6，H)。13CNMR(100MHz，CD3OD):S(ppm)178.2(C-2),42.7(C-3)，12.8(3-￡H3),66.8(C-4)，72.4(C-5)，102.1(C-1，)，74.2(C-2，)，76.9(C-3，),71.6(C-4，)，77.2(C-5，)，62.5(C-6，)。根据以上数据，鉴定该化合物为3-甲基金线莲苷(即化合物KDl)。化合物KD1化合物KD2(R-—CH2CH3，白色固体，269mg),'HNMR(400MHz，CD3OD):S(ppm)0.91(3H:t,戶7.5Hz，3-CHCH2)，1.78(2H,m，3-CH2CHQ，3.41(1H,m,4-H),4.30(1H，m,5-H),4.54(1H，m，5誦H)，5.01(1H,m,l，-H)，3.403.81(6H,m,2'-H6，H)。13CNMR(100MHz,CD3OD):S(ppm)178.8(C-2)，49.7(C墨3),11.5(3-CH2￡H3)，22.2(3-￡H2CH3),64.8(C-4),72.8(C-5),102.1(C國1'),74.3(C-2，)，76.8(C-3，)，71.7(C-4，)，77.1(C-5，)，62.3(C-6，)。根据以上数据，鉴定该化合物为3-乙基金线莲苷(即化合物KD2)。化合物KD2化合物KD3(H=—CH2COOH,白色固体，261mg)，NMR(400MHz，CD3OD):'HNMR(400MHz，CD3OD):S(ppm)2.93(1H，m,3-CH2COOH).2.68(1H，m，3-CH2COOH).2.95(1H,m，3-H)，3.46(1H，m,4-H),4'31(1H,m，5-H)，4.56(1H,m,5隱H),5.04(1H,m，l，-H)，3.403.80(6H，m，2，-H6，H)。13CNMR(lOOMHz,CD3OD):S(ppm)177.5(C-2),48.4(C-3)177.1(3-CH2￡OOH),32.0(3-￡H2COOH)，64.1(C國4)，72.6(C-5)，102.1(C-1，)，74.3(C-2，)，76.8(C-3，),71.7(C-4，)，77.1(C-5，),62.3(C-6，)。根据以上数据，鉴定该化合物为3-羧甲基金线莲苷(即化合物KD3)。化合物KD3化合物KD4(R-—CH2CH2COOH，白色固体，257mg)，'HNMR(400MHz，CDsOD):1!!NMR(400MHz，CD3OD):S(ppm)1.92(2H,m,3-CH2CFbCOOH)，2.35(2H,m,3-CH2纖COOH)，2.63(1H,m，3-H)，3.45(1H，m,4-H),4.30(1H,m,5-H)，4.57(1H，m，5-H),5.02(1H,m，l，-H)，3.403.81(6H,m,2，-H6，H)。l3CNMR(lOOMHz,CD3OD):S(ppm)178.8(C-2),46.7(C-3),178.2(3-CH2CH2￡OOH),8.6(3-￡H2CH2COOH),31.0(3-CH2￡H2COOH),64.7(C-4),72.1(C-5),102.9(C陽1')，74.2(C-2，)，76.7(C-3，)，71.5(C-4，),77.8(C-5，)，62.9(C-6，)。根据以上数据，鉴定该化合物为3-羧乙基金线莲苷(即化合物KD4)。化合物KD4化合物10)5(11=-01211,白色固体，250mg)，)HNMR(400MHz，CDsOD):1!!NMR(400MHz:CD3OD):S(ppm)3.20(1H，m，3-CH2ph),2.96(1H，m,3-CH2ph),7.29-7.41(5H,m，3-CH2Eh),2.98(1H，m，3-H)，3.49(1H，m，4-H),4.33(1H，m，5-H),4.58(1H,m,5-H)，5.01(1H，m，l，-H),3.403.82(6H,m,2，-H6，H)。13CNMR(100MHz，CD3OD):S(ppm)177.3(C-2),55.7(C陽3),138.6,128.7，128.9，125.4(3-CH2C6H5),32.6(3-￡H2C6H5)，64.5(C-4),72.3(C-5),102.0(C-1，)，74.6(C-2，)，76.3(C-3，)，71.9(C-4，)，77.0(C-5，)，62.0(C-6，)。根据以上数据，鉴定该化合物为3-节基金线莲苷(即化合物KD5)。化合物KD5<formula>formulaseeoriginaldocumentpage12</formula>化合物KD6(1^p-hydroxyl-ph-CH2-,白色固体，243mg)，NMR(400MHz,CD3OD):JHNMR(400MHz，CD3OD):S(ppm)3.21(1H，m,3-CH2phOH),2.92(1H，m，3-Q^phOH),7.13(2H,d,声7.8Hz,3-CH2EllOH)，6.75(2H，d，《/=7.8Hz,3-CH2eJiOH),3.01(1H,m，3-H)，3.45(1H,m，4-H),4.34(1H，m，5-H)，4.59(1H,m,5-H)，5.02(1H,m，l，-H),3.403.81(6H,m,2'-H6'H)。"C雨R(濯MHz，CD3OD):S(ppm)177.5(C-2),55.8(C-3),155.7,115.7,130.6,131.2(3-CH2￡6H40H),32.8(3-￡H2C6H40H),64.3(C國4),72.8(C-5)，102.9(C-1，)，74.0(C-2，)，76.2(C-3，)，71.5(C-4，)，77.2(C-5，)，62.7(C-6，)。根据以上数据，鉴定该化合物为3_羟苄基金线莲苷(即化合物KD6)。化合物KD6化合物KD7(R-p-carboxyl-ph—CH2-，白色固体，238mg)，！HNMR(400MHz,CD3OD):&NMR(400MHz,CD3OD):6(ppm)3.28(1H,m，3-CH2phCOOH),2.90(1H,m,3-CH2phCOOH),7.04(2H，d,^8.4Hz，3-CH2EhCOOH)，8.19(2H，d，^8.4Hz，3-CH2EhCOOH),3.05(1H,m，3-H)，3.48(1H，m,4-H)，4.32(1H，m，5-H),4.52(1H，m,5國H)，5.05(1H,m，l,-H)，3.403.80(6H，m，2，-H~6，H)。l3C画R(lOOMHz，CD3OD):S(ppm)177.2(C-2)，55.7(C-3)，143.2，128.1,130.2，127.9(3-CH2QH4COOH)，32.6(3-￡H2C6H4COOH)，64.7(C-4)，72.5(C-5)，102.8(C-1，)，74.3(C-2，)，76.3(C-3，)，71.4(C-4，)，77.6(C-5，)，62.3(C-6，)。根据以上数据，鉴定该化合物为3-羧苄基金线莲苷(即化合物KD7)。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage14</formula>化合物KD7化合物KD8(i^p-COOH-CH=CH-Ph—CH2-,白色固体，232mg)，NMR(400MHz,CD3OD):NMR(400MHz，CD3OD):S(ppm)3.21(1H，m，3-￡H2phCH=CHCOOH),2.94(1H,m,3-CH2CH=CHCOOH),6.75(2H,d,月.lHz，3-CH2EhCH=CHCOOH),7.68(2H，(y=8.1Hz，3-CH2ehCH=CHCOOH)，7.61(1H，cU=16.2Hz，3-CH2phCH=CHCOOH)，6.35(1H,d,/=16.2Hz，3-CH2phCH=CHCOOH)，3.02(1H,m,3國H),3.46(1H，m，4-H)，4.31(lH,m,5-H),4.54(1H，m,5-H)，5.01(1H,m，l，-H)，3.403.81(6H,m,2，-H6，H)。13CNMR(100MHz,CD3OD):S(ppm)177.1(C-2)，55.2(C-3)，137.7,128.3，128.9,132.8(3-CH2￡6H4CH=CHCOOH),145.1(3-CH2C6H4￡H=CHCOOH),117.3(3-CH2C6H4CH=￡HCOOH)，172.1(3-CH2C6H4CH=CICOOH),32.8(3-￡H2C6H4CH=CHCOOH)，64.4(C-4)，72.2(C國5)，102.3(C-1，)，74.0(C-2，)，76.5(C-3，)，71.6(C-4，)，77.2(C-5，),62.5(C-6，)。根据以上数据，鉴定该化合物为3-羧乙烯节基金线莲苷(即化合物KD8)。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage14</formula>化合物KD8化合物KD9(1^-CH2-2，-thiophene,白色固体，241mg)，'HNMR(400MHz，CD3OD):S(ppm)3..01(1H,m,3-CH2C4Hd).2.75(1H,m,3-CH2C4H3S).6.80-7.45(5H,m,3-CH2C4H2S),2.99(1H，m，3隱H),3.45(1H，m,4-H),4.32(1H,m，5-H),4.55(1H，m，5-H),5.02(1H,m,l，-H)，3.403.82(6H,m,2'-H6，H)。13CNMR(lOOMHz,CD3OD):S(ppm)177.2(C-2),56.2(C-3),143.1，126.6,126.4,124.8(3-CH2￡4H3S)，23.7(3-￡H2C4H3S),64.2(C-4),72.8(C-5),102.1(C-1，)，74.1(C-2，),76.5(C-3，)，71.5(C-4，)，77.5(C-5，)，62.1(C-6，)。根据以上数据，鉴定该化合物为3-蓬吩基金线莲苷(即化合物KD9)。化合物KD9化合物KDl0(R=-CH2-2，-[(5，-COOH)-thiophene]，白色固体，228mg)。'HNMR(400MHz，CD3OD):S(ppm)3..02(1H,m，3-CH2C4HiSCOOH),2.76(1H,m,3-CH2C4H3SCOOH)，6.92(1H，d，■7=6.4Hz，3-CH2C4i^S),7.93(lH,d，^6.4Hz，3-CH2C4H2S)，2.98(1H，m，3-H),3.43(1H，m，4-H)，4.30(1H，m，5-H),4.54(1H，m，5-H),5.03(1H,m,l，-H)，3.403.82(6H，m,2'-H6，H)。13C画R(lOOMHz，CD3OD):S(ppm)177.0(C-2),56.1(C-3),151.0，124.7，133.2,131.5(3-CH2￡4H2SCOOH)，163.4(3-CH2C4H2S￡OOH)，23.5(3-￡H2C4H2SCOOH),64.5(C-4)，72.7(C-5)，102.3(C-1，),74.2(C-2')，76.8(C-3，)，71.4(C-4，)，77.4(C-5，)，62.0(C-6，)。根据以上数据，鉴定该化合物为3-羧噻吩基金线莲苷(即化合物KD10)。(OOH化合物5化合物6化合物7化合物8Reagentsandconditions:(a)DMF，P0C13,80°C,(b)ethanediol，NH2_NH2/KOH，180°C(c)NBS,(phCO2)2,CCl4,20h,reflux化合物6:噻吩10g(0.12mol)溶于30ml的DMF中，搅拌溶解后，慢慢滴加10.8ml的三氯氧化磷，一小时滴加完毕。80'C反应10h。减压蒸除溶剂的，纯化得化合物6。化合物7:化合物6(10g，0.09mol)溶于30ml的中乙二醇中，搅拌溶解后，加入适量NH2-NH2和KOH,回流4小时，TLC跟踪检测，减压蒸除溶剂，重结晶，硅胶柱纯化得化合物7。化合物8:2-甲基噻吩lOg(O.lmol)溶于40ml的中CCU,中，搅拌溶解后，加入17.8g((Umol)溴代琥珀酰亚胺，lg过氧化苯甲酰。回流反应20h。TLC跟踪检观!l，减压蒸除溶剂，硅胶柱纯化的得化合物8。NMR(400MHz,CD3OD):S(ppm)4.97(2H，s,2-CH2Br),6.84(1H，d，7=6.8Hz，3-H),6.95(1H，t，J-6.8Hz,4-H),7.45(1H,d,J二6.8Hz，5-H).13CNMR(100MHz，CD3OD):S(ppm)139.4(C-2)，27.1(2-￡H2Br),126.1(C-3)，127.3(C-4)，125.7(C-5)。根据以上数据，鉴定该化合物为2-溴甲基噻吩(即化合物8)。5、Z21化合物8实施例6中间体化合物10的合成化合物7化合物9化合物IOReagentsandconditions:(a)AC20/AlCl3,CH3CHC1240-45。C(b)NaOCl,70-80°C(c)NBS，(PhC02)2,CC14，20h,reflux化合物9:2-甲基噻吩10g(O.lmol)溶于30ml的CH3CHC12中，搅拌溶解后，加入11ml的醋酸酐，lg三氯化铝。40-45'C反应3h后加入次氯酸钠2.6g70-8(TC反应5h,TLC跟踪检测，减压蒸除溶剂和醋酸。硅胶柱纯化的得化合物9。化合物10:化合物9(10g,0.08mol)40ml的中CCU，中，搅拌溶解后，加入17.8g(0.1mol)溴代琥珀酰亚胺，lg过氧化苯甲酰。回流反应20h。TLC跟踪检测，减压蒸除溶剂，硅胶柱纯化得化合物10。'HNMR(400MHz，CD3OD):5(ppm)4.92(2H,s,2-CH2Br).6.92(1H,d,/=6.8Hz，3-H)，7.93(1H,d,J-6.8Hz，4-H).'3CNMR(lOOMHz，CD3OD):S(ppm)147.3(C-2),27.6(2-￡H2Br)，127丄I(C-3),134,5(C-4),I32.7(C-5),162.7(5-￡OOH)。根据以上数据，鉴定该化合物为2-溴甲基-5-羧基噻吩(即化合物IO)。1化合物io实施例7STZ诱导的大鼠体内抗高血糖活性实验取雄性wistar大鼠，适应性喂养3d,禁食过夜后采用腹腔注射50mgkg-1链脲霉素(STZ)建立糖尿病模型，7化后测定血糖值，选取血糖高于11.l咖ol-L—1者作为高血糖实验大鼠。将高血糖大鼠随机分组，模型对照组、阳性对照组、给药组、正常对照组，每组8只。模型建立后第3日，郎血糖明显升高时开始灌胃给药，单体金线莲苷及KDl-lO用蒸馏水配制成5mg/ml,参考文献值及预试验结果，给药组剂量为15mg.kg-i体重，模型对照组给予同体积生理盐水，阳性对照组给予每曰给予60mgkg—'盐酸二甲双胍，正常对照组常规喂养。糖尿病模型大鼠具有典型的"三多一少"症状，连续4周，每日观察记录体重、饮食、饮水、垫料，隔曰检测尿糖水平，每三天定时检测血糖值。实验结果造模大鼠腹腔注射STZ72h后，与正常大鼠相比血糖明显升高。给药4周后，给药各组血糖值与模型对照组比较有显著性差异。饲喂过程中也发现该组大鼠的"三多一少，，症状明显得到改善。所有化合物中，化合物KD10(即3-羧噻吩基金线莲苷)降血糖活性最优。<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>注(D*p<0.05与正常对照组比有显著性差异△P<0.05与模型对照组比有显著性差异实施例8PTP1B抑制活性实验蛋白质酪氨酸磷酸化是细胞代谢、信号传导及细胞周期调控的重要调节步骤。蛋白质酪氨酸磷酸酶PTP1B是一种在体内广泛表达的胞内蛋白质酪氨酸磷酸酶，在调节胰岛素敏感性和能量代谢的过程中起着重要作用。PTP1B被认为是治疗II型糖尿病胰岛素抵抗的一个重要的潜在靶点，通过抑制PTP1B可增加胰岛素和痩蛋白的活性为寻找n型糖尿病、肥胖的治疗提供了光明前景。THE^ZtMZ^KB^1PTP1BDrugDiscoveryKit(Cattt:AK-822LotT5388)比色法测定纯化的PTPIB的活性。实验结果受试化合物对PTP1B酶的活性均有较高的抑制作用，化合物KD10(即3-羧噻吩基金线莲苷)的抑制活性最强，与其具有较高的降血糖活性相平行。金线莲苷及KD1-KD10抑制PTP1B酶活性样品IC50(MmolI/')KD19.26KD28.65KD37.12KD47.65KD510.96KD69.64KD76.61KD8536KD91.95KD100.97金线莲苷5.14实施例9金线莲苷及其化合物KD1KD10LDs。的测定金线莲苷LDs。的测定普通级昆明小鼠12只，20±2g，雌雄各半，适应性喂养后禁食12小时，随即分配到三个剂量组考察金线莲苷的口服急性毒性，每组雌雄各半。按参考剂量10mg/kg的10倍设计小鼠急性毒性的低剂量进行预试验，三个剂量组分别为100mg/kg、200mg/kg、飾g/kg，灌胃，观察一周内动物的饮食，活动，毛泽及存亡等情况。灌胃给药后动物外观和行为表现正常，三个剂量组均无任何毒性反应，无一中毒死亡。结果表明在有效参考剂量的40倍时无任何毒性反应，认为金线莲苷毒性级别非常低或无毒，口服安全，不再提高剂量做毒性试验。化合物KD1KD10LDs。的测定按金线莲苷LD5。的测定相同方法进行测定,结果表明在有效参考剂量的40倍时无任何毒性反应，认为化合物KD1KD10毒性级别均非常低或无毒，口服安全。因此，金线莲苷及其化合物KD1-KD10毒性级别均非常低或无毒，口服安全。实施例10化合物KD10(即3-羧蓬吩基金线莲苷)片剂制备及方法主要药用原料包括活性物质化合物KD10,药用片剂的稀释剂，片剂粘合剂和崩解剂，润滑剂。稀释剂可选择微晶纤维素、淀粉、羟甲基淀粉钠、苷氨酸中的一种或多种；粘合剂可选择淀粉浆、PVP胶浆、明胶浆中的一种；润滑剂可选择的滑石粉、硬脂酸镁中的一种。片剂稳定性好，患者可按医嘱，将药带回家服用，保证治疗的持续性。取化合物KD105g，淀粉35g，微晶纤维素35g,羟甲基淀粉钠6g，甘氨酸20分别研细，过80目筛，等量的加法混合均匀，用淀粉浆(5W制成软材，用30目筛滤制粒，置7(TC条件下干燥，再用40目筛滤整粒后加入硬脂酸镁O.3g，混合均匀，压片，分装，即得。权利要求1.具有以下结构式的化合物其中R为氢原子；30碳以下烷基；-CH2COOR1，其中R1为氢原子或30碳以下烷基；-CH2CH2COOR2，其中R2为氢原子或30碳以下烷基；或-CH2Ar，其中Ar为带各种取代基的苯环、吡啶环、喹啉环、呋喃环、吡咯环或噻吩环等芳香环或芳杂环，其中Ar上取代基可以为氢原子或30碳以下烷基、卤素、羟基、氨基、醚基、脂肪胺基、芳香胺基、羧基等。2.根据权利要求l所述的化合物，其特征在于，当所述的R、^或R2为30碳以下烷基时，优选甲基、乙基或丙基。3.含有权利要求1或2所述化合物的药物组合物。4.权利要求l或2所述的化合物在制备用于治疗糖尿病药物中的应用。5.权利要求1或2所述的化合物在制备用于治疗高血脂药物中的应用。6.权利要求1或2所述的化合物在制备蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)选择性抑制剂中的应用。7.—种药物组合物，它由权利要求1或2所述化合物和一种或多种可药用载体组合而成。8.权利要求l或2所述的化合物的制备方法，其特征在于通过Ac20/吡啶保护葡萄糖基上羟基，通过LDA/HMPA/THF/低温条件与R-X反应，进一步在NaOCH3/CH训/低温/无水条件脱去葡萄糖基上保护基。全文摘要本发明公开了一种蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)抑制剂金线莲苷及其衍生物，并提供了其制备方法和用途，这些化合物具有较强的降血糖活性和较高的抑制蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)活性及较低的毒性，从而可用于治疗糖尿病和高血脂等疾病。文档编号A61P3/06GK101434625SQ20081023682公开日2009年5月20日申请日期2008年12月12日优先权日2008年12月12日发明者张勇慧申请人:华中科技大学