专利名称：螺旋藻多糖滴眼液及其制备方法和应用的制作方法
螺旋藻多撒飾艮舰其制备施和鹏
駄领域
本发明涉及一种预防和治疗目錢JfML管疾病的滴眼液，特别涉及到一种螺旋藻多糖 滴眼 其制备方法和应用。 背景狱
目薛^UfiL管疾病现已成为我国致盲幽艮病的首要原因，但尚未对其发病机制完全弄 清，临床上也缺少有效的治疗方法。临床常用的治疗新tt管方法是激光光凝和光凝联 合光动力学的方法，但其长期疗效不佳且费用高，更重要的是新她管一旦形成，对目艮 部造成的损害和破坏不可逆转，使大多数患者最终失明。寻找錢有效的具有阮新^I&L 管活性的生物活性物质对于预防和治疗目lf ^L管相^^是非常必要的，蹄来开始 受至恪国学者的重视，但是尚没有相关的报导。
螺旋藻，古老的多细胞原始海藻。据报导螺旋藻具有显著的降血糖、降血压、降 血月誇功效。螺旋藻化学成分中仅占2-3%的螺旋藻多糖，具有广泛而錢的生物活性， 在抛中瘤皿辐射上存在有药用疗效，是一种^^有效的生物活性物质。但目前螺旋藻 f观于f繊品及食品当中，因此开對點定 其生物活性物质专门用于眼用新她管治 疗及预防是非常必要和重要的。
发明内容
本发明的目的是M共一种螺旋藻多糖滴眼液的帝iJ备和应用,以弥补现有眼用新tt 管治疗及预防药物的缺乏和不足。
研究发现并证实，螺旋藻多糖會,制血管内皮细胞增殖、迁移等血管生i^l程； 并 堪础上，帝U备成了一种滴眼液，发现其能有$娜制小鼠 ^后角麟她管的 生长，减少角膜炎症细胞的浸润，改善角膨JC肿，显著斷氐角膜炎症因子^f^lftL管生 淑目关因子的敬，而且會,效地防治^f躬胞的新tt管^^角麟他病变。 因此，农飾艮 防治角膜 ^誠的角月凝>1 管中有显著的疗效，B鹏鄉也抑 制亂新tt管的发拨^3l程。
本发明以螺旋藻藻粉为原材料，提取制备了螺旋藻多糖，用AI泪液繊成一种以 生物活性物质为主要成分的目師滴眼液，用于抑制眼部新tt管的顿。
本发明的螺旋藻多糖滴眼液，包括螺旋藻多糖和AX泪液，其中的螺旋藻多糖浓度 为l(K500iig/ml， ^i^浓度为100|og/ml。
本发明的制备方法 一、首先,Ai動定藻藻粉中提取螺旋藻多糖，即是以钝顶螺旋藻
藻粉为原材料，提取制备而得。二、然后制备螺旋藻多糖滴眼液。
3本发明的螺旋藻多糖滴眼teffl于眼部新^lfil管ti^病。
本发明首次将螺旋藻多麟U淑飾艮鹏用至U防治眼部新tt管性疾病。本发明的滴 目艮液制备方法简单，便于实施，对于目賤W^fiL管的防治^媒显著，具有广阔的应用开发 前景。
本发明以钝顶螺旋藻藻粉(山东富施特生嫩术有限公司生产)为原材料，提取制
备了螺旋藻多糖，用AX泪液,成一种以生物活性物质为主要成分柳艮用獅艮液，用
于抑制眼部新tt管的^。其中的螺旋藻多糖浓度为10 500iJg/ml， ttlOO|og/ml。 本发明的详细制备方法
步骤一、螺旋藻多糖的制备以如下工艺制备本发明所需的螺旋藻多糖。 (1)取钝顶螺J定藻干粉加95%乙醇，徵敏夜；(2)离心37。C烘干，按l: 12 比例加双蒸水；(3)用NaOH调pH至10.0， 80。C水浴(4)离心，调pH至7.0; (5)力口质量体积比为5%三氯乙酸沉淀，4'C过夜；(6)离心，！Lh清液，再加质量体 积比为5。/o三氯乙酸沉淀3h; (7)离心，社清液，力口5倍#^只乙,淀，4。C过夜；
(8)以纯丙酮清洗沉淀2次，真空冷冻千燥；(9)将JJ^沉淀物置于-20。C保存3日以 上，以确保丙酮完全挥发；(10)力口入生ffik7乂充分溶M^淀，离心，去除未能溶解的物 质；(11)娜0.22 pm滤膜过滤除菌，得到了无菌的螺旋藻多糖溶液。
步骤二、将上述的螺旋藻多糖溶液使用人工泪液稀释到螺旋藻多糖含量10^500 M^ml，即得至体发明的螺旋藻多糖滴眼液。
Ji^AX泪m以用替若复方氯化钠滴眼ffl5割戈。
以下列多个实施例，详细说明本发明如下。 实施例1
首先粒C57 BL/6小,j^f方动t/t難t難动物細C57 BL/6 6—8周龄，雌性 小鼠，小鼠全身鹏，盐酸丙美卡因滴眼液点眼，3MllNNaOH直接滴到小鼠角膜表面， 进行石I^i另30秒，随后立即用大于20ml生S4k7jC冲洗。
对战粒的小鼠M^f方动辦翻，分为对照组和治疗组两ia^劳后即进行点眼治
疗，顿艮每次点滴眼液5pl ，每天点眼4次，点眼治疗7天。具体分组如下 对照组翻體复方氯化钠滴眼液点眼治疗。
治疗组采用螺旋藻多糖滴眼液点眼治疗。
治疗7天后，观察治疗效果，进行对比，具体以不同螺旋藻多糖浓度的滴眼液为例。 实施例2
螺旋藻多糖滴眼液多糖浓度为100^ml时，7天后，观察小鼠角鹏变瞎况，结果 发SM照组小鼠^(劳后血管生长明显，新生血管生长面积占旨角膜的1/2-3/4，而 10^ml螺旋藻多糖滴眼液治疗组仅在角膜缘P(做有少量新^管^A，约占*角膜 面积的1/15。取全眼球石蜡包鹏切片，HE她，可JW照组i!^f劳7天小鼠角膜基 质水肿明显，^t大量炎症细胞浸润，基赚层之间大Mf 她管长入，血管扩张她，虫II莫后粘连；治疗组5l^f矢7天小鼠角膜基质未见明显水肿，仅见个别炎症细胞浸润， 未见明显新她管MO莫后粘连。取全眼球冷冻胶包鹏冰冻切片，血管内皮细胞CD31 免疫荧光她，可JW照组石J^f劳7天小鼠角膜有大量CD31阳性细胞的教，而治疗 组石麟伤7天小鼠角膜无明显CD31阳性细胞的表达。取小鼠角膜，提取mRNA，反转 成cDNA，RT-PCR检测与角膨新tt管顿密切相关的因子血管内皮生长因子(VEGF)、 基质金属蛋白酶(MMP2、 MMP9)的表达。VEGF是目前发现的作用最强的角膜新生 血管形成促进因子；而MMPs在血管生成内皮细M移、细鹏hS质降解、细胞因子活 化多个环节中直接和间接地^ 重要作用。结果表明与对照组相比，治疗组小鼠i!^ 伤后角膜这些因子的皿均明显斷氐，说明螺旋藻多糖提取物滴眼液治疗可以抑制M^ 伤后新ttL管^t目关因子的就。RT-PCR检测炎症相关因子肿瘤坏死因子TNFa、巨 噬细胞炎症蛋白3a (MIP-3a)、基质细胞衍生因子(SDF1)的魏。己有的研録明， 这些炎症因子均与角膨新生血管的发生存在关联。表明与对照组相比，治疗组小鼠 伤后角膜这些因子的皿均明显斷氐，显明螺旋藻多糖滴眼液治疗可以抑制 ^后角 膜炎症相关因子的 。 实施例3
螺旋藻多糖滴眼液多糖浓度为500pg/ml时，7天后对照组小鼠角Mfftt管生长明 显，新生血管生长面积占^t角膜的1/2~2/3,而500吗tol治疗组小鼠角膜新生血管的 生长要显割氐于对照组，也仅在角膜缘处有极少量的生长。 实施例4
螺旋藻多糖滴眼液多糖浓度为10Mg/ml时，7天后对照组小鼠角麟她管生长明 显，新她管生长面积占齡角膜的1/2 2/3，而10Mg/ml治疗组小鼠角麟^lfiL管的生 长要少于对照组，约占旨角膜面积的1AM/3。
权利要求
1、一种螺旋藻多糖滴眼液，其特征在于其是由螺旋藻多糖和人工泪液组成，其中的螺旋藻多糖浓度为10～500μg/ml。
2、 如权利要求1所述的螺旋藻多糖滴眼液，其特征在于上述的人工泪 液用替若复方氯化钠滴眼液来替代。
3、 如权利要求1所述的螺旋藻多糖滴眼液，其特征在于上述的螺旋藻 多糖的优选浓度为100ug/ml。
4、 螺旋藻多糖滴眼液的制备方法步骤一、首先以如下工艺制备螺旋藻多糖(1) 取钝顶螺旋藻干粉加95%乙醇，浸泡过夜；(2)离心37。C烘干，按l: 12比例加双蒸水；(3)用NaOH调pH至10.0， 80。C水浴4~6h; (4)离心，调pH至7.0;(5)加质量体积比为5%三氯乙酸沉淀，4'C过夜；(6)离心，取上清液， 再加质量体积比为5%三氯乙酸沉淀3h; (7)离心，取上清液，加5倍体 积乙醇沉淀， 。C过夜；(8)以纯丙酮清洗沉淀2次，真空冷冻干燥；(9) 将上述沉淀物置于-20'C保存3日以上，以确保丙酮完全挥发；(10)加入 生理盐水充分溶解沉淀，离心，去除未能溶解的物质；(11)使用0.22 " m滤膜过滤除菌，即得到无菌的螺旋藻多糖溶液；步骤二、将上述的螺旋藻多糖溶液使用人工泪液稀释到螺旋藻多糖含 量10 500 Hg/ml，即得到螺旋藻多糖滴眼液。
5、 螺旋藻多糖滴眼液应用于眼部新生血管性疾病的预防和治疗。
全文摘要
本发明涉及一种预防和治疗眼新生血管疾病的滴眼液，特别涉及到一种螺旋藻多糖滴眼液及其制备方法和应用。本发明从螺旋藻藻粉中提取螺旋藻多糖，制备螺旋藻多糖滴眼液。滴眼液包括螺旋藻多糖和人工泪液，其中的螺旋藻多糖浓度范围为10～500μg/ml。上述的人工泪液可以用替若复方氯化钠滴眼液来替代。本发明首次将螺旋藻多糖制成滴眼液应用到防治眼部新生血管性疾病，对于眼新生血管疾病的预防和治疗效果显著，本发明的滴眼液制备方法简单，便于实施，疗效明显，具有广阔的应用开发前景。
文档编号A61K9/08GK101444480SQ20081024956
公开日2009年6月3日 申请日期2008年12月26日 优先权日2008年12月26日
发明者廷 刘, 周庆军, 杨玲玲, 瑶 王, 谢立信 申请人:山东省眼科研究所