毒蕈碱性受体拮抗剂和β-2肾上腺素受体激动剂的组合的制作方法

专利名称：：毒蕈碱性受体拮抗剂和β-2肾上腺素受体激动剂的组合的制作方法
技术领域：
：本发明涉及用于治疗呼吸系统疾病(尤其是慢性阻塞性肺病(COPD)或哮喘)的药学活性物质的组合。
背景技术：
：肺的本质功能要求一种脆弱的结构广泛暴露于包括污染物、微生物、变应原(allergen)和致癌物在内的环境中。起因于生活方式选择和遗传组成的相互作用的宿主因素影响了对这种暴露的响应。对肺的伤害或感染能够产生广泛的呼吸系统疾病(或呼吸疾病(respiratorydisease))。这些疾病中的多种具有巨大的公共卫生重要性。呼吸系统疾病包括急性肺损伤、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、职业性肺部疾病、肺癌、结核、纤维化、尘肺(pneumoconiosis)、肺炎、肺气肿、慢性阻塞性肺病(COPD)和哮喘。最常见的呼吸系统疾病是哮喘。哮喘一般定义为气道的炎性病症，其临床症状是由间歇性气流阻塞引起的。其临床特征为喘鸣(wheezing)、呼吸困难和咳嗽的发作。它是一种慢性衰竭性病症，其患病率和严重性似乎一直在增加。据估计在发达国家的人口中，15%的儿童和5%的成人患有哮喘。因此，治疗应当针对控制症状，以便正常的生活成为可能，与此同时为治疗根本性炎症提供基础。COPD是表示一大类能够干扰正常呼吸的肺病的术语。目前的临床准则将COPD定义为以不完全可逆的气流受限(airflowlimitation)为特征的病症。气流受限通常既是进行性的，又与肺对有害颗粒和气体的异常炎性响应有关。这类颗粒和气体的最重要贡献来源至少在西方世界是吸烟。COPD患者具有多种症状，包括咳嗽、呼吸短促和痰生成过多；这类症状来源于大量细胞区室(包括嗜中性粒细胞、巨噬细胞和上皮细胞)的功能障碍。COPD涵盖的两种最重要的病症是慢性支气管炎和肺气肺。慢性支气管炎是支气管的长期炎症，导致粘液生成增加以及其它变化。患者的症状为咳嗽和咳痰。慢性支气管炎能够引起更频繁和更严重的呼吸4系统感染、支气管变窄和堵塞、呼吸困难和能力丧失。肺气肿是影响肺泡和/或最小支气管末梢的慢性肺疾病。肺丧失其弹性，因此肺的这些区域变得肿大。这些肿大的区域困住陈腐的气体，不会有效地与新鲜空气交换。这导致呼吸困难，并且可能导致对血液的供氧不足。肺气肿患者的主要症状是呼吸短促。用于治疗呼吸系统疾病的治疗剂包括|32肾上腺素受体激动剂。这些成分(也称为beta2((32)激动剂)可以用于通过松弛支气管平滑M^、减少气道阻塞、减少肺充气过度和降低呼吸短促来减轻呼吸系统疾病的症状。目前正在进行评价的作为每日一次P2激动剂的化合物描述在ExpertOpin.Investig.Drugs14(7)，775-783(2005)中。用于治疗呼吸系统疾病的另一类治疗药物是毒蕈碱性受体拮抗剂(muscarinicantagonists)。毒蕈碱性受体是G蛋白偶联受体(GPCR)家族，其具有五种家族成员M,、M2、M3、M4和Ms。在这五种毒蕈碱亚型中，已知三种(M，、M2和Ms)对人肺组织产生生理作用。副交感神经(Parasympatheticnerve)是人气道中用于反射支气管收缩的主要途径，并且通过将乙酰胆石咸释放在毒蕈碱性受体上介导气道紧张(airwaytone)。气道紧张在呼吸系统病症如哮喘和慢性阻塞性肺病(COPD)患者中增加，出于这种原因已经开发了毒蕈碱性受体拮抗剂用于治疗气道疾病。毒蕈碱性受体拮抗剂，在临床实践中通常称为抗胆碱能药(anticholinergic)，已经作为对患有COPD个体的首要治疗而获得广泛的接受，它们的用途已经在文献中得到了广泛的综述(例如Leeetal，CurrentOpinioninPharmacology2001，1,223-229。尽管用|32肾上腺素受体激动剂或毒蕈碱性受体拮抗剂治疗能够产生重要的益处，但是这些药物的功效经常远不能令人满意。鉴于呼吸系统疾病(如哮喘和COPD)的复杂性，任何一种调节剂可令人满意地单独治疗这些疾病的情况是不可能的。因此，医学上迫切需要抗呼吸系统疾病例如COPD和哮喘的新疗法，特别是具有疾病緩和潜力的疗法。
发明内容本发明提供了药物产品(pharmaceuticalproduct)其包含第一活性成分和第二活性成分的组合，所述第一活性成分为选自以下的毒蕈碱性受体拮抗[2-((S)-环己基-羟基-苯基-曱基)-。恶唑-5-基曱基]-二曱基-(3-苯氧基-丙基)-铵盐，-二曱基-(3-苯氧基-丙基)-铵盐，-二曱基-(2-苯乙基氧基-乙基)-铵盐，P-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基)-噁唑-5-基甲基H3-(3，4-二氯-苯氧基)-丙基]二曱基-铵盐，-[2-(3，4-二氯-卡基氧基)-乙基]-二曱基-铵盐，以及-[2-((尺)-环己基-羟基-苯基-曱基)-。恶唑-5-基曱基]-二曱基-铵盐；所述第二活性成分为|32肾上腺素受体激动剂。在呼吸系统疾病的治疗中若将本发明的毒蕈碱性受体拮抗剂与P2肾上腺素受体激动剂组合使用，则观察到有益的治疗效果。当这两种活性物质同时给药(要么以单一药物制剂形式给药，要么经由分开的药物制剂给药)，或经由分开的药物制剂依次给药或分开给药时，可观察到有益的效果。本发明的药物产品例如可为包含呈混合物形式的第一和第二活性成分的组合物。或者，药物产品可以是例如试剂盒(kit)，其包含第一活性成分的制剂(preparation)和第二活性成分的制剂，和任选的说明书，所述说明书指导对有所述需要的患者同时、依次或分开给予所述制剂。在本发明的组合中的第一活性成分是选自下列的毒蕈碱性受体拮抗剂-二曱基-(3-苯氧基-丙基)-铵盐，-二曱基-(3-苯氧基-丙基)-铵盐，-二曱基-(2-苯乙基氧基-乙基)-铵盐，-[3-(3，4-二氯-苯氧基)-丙基]二曱基-铵盐，[2-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基)-碌、唑-5-基甲基]-[2-(3,4-二氯-苄基氧基)-乙基]-二曱基-铵盐；以及-[2-((R)-环己基-羟基-苯基-甲基)-唾唑-5-基曱基]-二曱基-铵盐。本发明的毒蕈碱性受体拮抗剂是描述于WO2007/017669(PCT/GB2006/002956)中的一类新颖的化合物中的所选择的成员，其显示出对于M3受体的高效能。所述毒蕈碱性受体拮抗剂的名称是由IsisDraw2.5版本(由MDLInformationSystemsInc.提供)的Autonom2000插件基于实施例中描述的结构和根据Cahn-Ingold-Prelog系统指定的立体化学所生成的IUPAC名称。例如，名称[2-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基)-噁唑-5-基甲基]-二曱基-(3-苯氧基-丙基)-铵是从以下结构生成的本发明的毒蕈碱性受体拮抗剂是铵盐。盐阴离子可以是一价或多Y介(如二价)酸的任何药用阴离子。在本发明的一个实施方案中，所述盐阴离子选自氯离子、溴离子、碘离子、硫酸根离子、苯磺酸根离子、曱苯磺酸根离子(tosylate)、1,5-萘二磺酸根离子(napadisylate)(萘-l,5-二磺酸根离子)、乙二磺酸根离子(edisylate)(乙-l，2-二磺酸根离子)、羟乙基磺酸根离子(isethionate)(2-羟基乙基磺酸根离子)、磷酸根离子、乙酸根离子、枸橼酸根离子、乳酸根离子、酒石酸根离子、油酸根离子、曱磺酸根离子(methanesulfonate)、马来酸根离子((Z)-3-羧基-丙烯酸根离子)、富马酸才艮离子、琥珀酸根离子(3-羧基-丙酸根离子)、苹果酸根离子((S)-3-羧基-2-羟基-丙酸根离子)、昔萘酸根离子(xinafoate)和对乙酰氨基苯曱酸根离子。在本发明的一个实施方案中，所述毒蕈碱性受体拮抗剂选自溴化[2-((S)-环己基-羟基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-二曱基-(3-苯氧基-丙基)-铵、澳化[2-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基)-魂唑-5-基曱基]-二曱基-(3-苯氧基-丙基)-铵、曱苯磺酸[2-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基)-魂.唑-5-基曱基]-二曱基-(3-苯氧基-丙基)-铵、马来酸[2-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-二曱基-(3-苯氧基一丙基)-铵、琥珀酸[2-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基)-唾唑-5-基曱基]-二曱基-(3-笨氧基-丙基)-铵、苹果酸[2-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-二曱基-(3-苯氧基-丙基)-铵、1，5-萘二磺酸[2-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-二曱基-(3-苯氧基-丙基)-铵、溴化[2-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基)-。恶唑-5-基曱基]-二曱基-(2-苯乙基氧基-乙基)-铵、1，5-萘二磺酸[2-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基)-噁唑-5-基甲基]-二曱基-(2-苯乙基氧基-乙基)-铵、曱磺酸[2-(4-氯-苄基氧基)-乙基]-[2-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-二曱基-铵、溴化[2-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基)-。恶唑-5-基曱基]-[3-(3,4-二氯-苯氧基)-丙基]二曱基-铵、1,5-萘二磺酸[2-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基)-。恶唑-5-基曱基]-[3-(3，4-二氯-苯氧基)-丙基]二曱基-铵、溴化[2-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基)-口恶唑-5-基曱基]-[2-(3，4-二氯-节基氧基)-乙基]-二曱基-铵、1，5-萘二磺酸[2-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基)-噁唑-5_基曱基]-[2-(3，4-二氯-千基氧基)-乙基]-二甲基-铵、溴化[2-(4-氯-千基氧基)-乙基]-[2-((11)-环己基-羟基-苯基-甲基)-噁唑-5-基曱基]-二甲基-铵、1,5-萘二磺酸[2-(4-氯-千基氧基)-乙基]-[2-((R)-环己基-羟基-苯基-甲基)-。恶唑-5-基甲基]-二曱基-铵，以及曱磺酸[2-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基)-碌、唑-5-基甲基]-[2-(3，4-二氯-千基氧基)-乙基]-二曱基-铵。在本发明的一个实施方案中，所述毒蕈碱性受体拮抗剂呈溴盐或1，5-萘二磺酸盐的形式。在本发明的一个实施方案中，所述毒蕈碱性受体拮抗剂呈1，5-萘二磺酸盐的形式。当毒蕈碱性受体拮抗剂为1,5-萘二磺酸盐时，阳离子/阴离子比例可变化，以及例如可为1:1或2:1或1:1和2:1之间的值。在本发明的一个实施方案中，所述毒蕈碱性受体拮抗剂呈1,5-萘二磺酸盐的形式，其中所述1,5-萘二磺酸盐阳离子/阴离子比例为2:1,即半1,5-萘二磺酸盐。本实施方案的毒蕈碱性受体拮抗剂的实例包括半-萘-l,5-二磺酸[2-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基)-碌、唑-5-基曱基]-二曱基-(3-苯氧基-丙基)-铵，半-萘-l,5-二磺酸[2-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-二曱基-(2-苯乙基氧基-乙基)-铵，半-萘-l，5-二磺酸[2-((R)-环己基-羟基-苯基-甲基)-噁唑-5-基曱基]-[3-(3,4-二氯-苯氧基)-丙基]二曱基-铵，半-萘-l，5-二磺酸[2-((R)-环己基-羟基-苯基-甲基)-噁唑-5-基曱基〗-[2-(3,4-二氯-千基氧基)-乙基]-二甲基-铵，以及半-萘-1，5-二磺酸[2-(4-氯-千基氧基)-乙基]-[2-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-二曱基-铵。在本发明的一个实施方案中，所述毒蕈碱性受体拮抗剂呈溴盐(bromidesalt)的形式。在本发明的组合中的第二活性成分是p2肾上腺素受体激动剂。本发明的卩2肾上腺素受体激动剂可以是能够刺激P2受体并充当支气管扩张剂(bronchodilator)的任何化合物。在本发明说明书的上下文中，除非另有i兌明，任何对于P2肾上腺素受体激动剂的称谓包括可以从所述(32肾上腺素受体激动剂生成的活性盐、溶剂化物或衍生物及其任意对映异构体，以及对映异构体的混合物。p2肾上腺素受体激动剂的可能的盐或衍生物的实例是酸加成盐，例如盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、磷酸盐、曱磺酸盐、乙酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、乳酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、l-羟基-2-萘羧酸盐、马来酸盐和药用酯(例如CrC6烷基酯)。j32-激动剂也可以呈溶剂化物的形式，例如水合物的形式。可用于本实施方案的药物产品的p2肾上腺素受体激动剂的实例包括间羟异丙肾上腺素(metaproterenol)、异丙去甲肾上腺素(isoproterenol)、异丙肾上)、舒喘灵(albuterol)、沙丁胺醇(例如为硫酸盐)、福莫特罗(例如为富马酸盐)、沙美特罗(例如为昔萘酸盐)、特布他林、奥西那4木、比托特罗(例如为曱磺酸盐)、吡布特罗或茚达特罗(indacaterol)。本实施方案的(32肾上腺素受体激动剂可为长效的P2激动剂(即活性持续超过24小时的(32激动剂)，例如沙美特罗(例如为昔萘酸盐)、福莫特罗(例如为富马酸盐)、班布特罗(例如为盐酸盐)、卡莫特罗(carmoterol)(TA2005,以化学方法鉴定为[R-(R、R^)]8-羟基-5-[l-羟基-2-[[2-(4-曱氧基-苯基)-l-曱基乙基]-氨基]乙基]-2(1H)-会诺酮一盐酸盐，也是通过化学摘要"良务登记号(ChemicalAbstractServiceRegistryNumber)137888-ll-0鉴定的，并^^开于美国专利4,579,854中)、茚达特罗(CAS号312753-06-3;QAB-149)、曱酰氨基苯衍生物例如WO2002/76933公开的3-(4-{[6-({(211)-2-[3-(曱酰基氨基)-4-羟基苯基]-2-羟基乙基}氨基)己基]氧基}-丁基)-苯磺酰胺、苯磺酰胺衍生物例如WO2002/88167公开的3-(4-([6-(((2R)-2-羟基-2-[4-羟基-3-(羟基-曱基)苯基]乙基}氨基)-己基]氧基}丁基)苯磺酰胺、如WO2003/042164和WO2005/025555中公开的芳基苯胺受体激动剂、如WO2004/032921和US2005/222144中公开的n引咮衍生物，以及化合物GSK159797、GSK159802、GSK597901、GSK642444和GSK678007。在本发明的一个实施方案中，所述肾上腺素受体激动剂是福莫特罗。福莫特罗的化学名称是A42-羟基-5-[(l)-l-羟基-2-[[(l)-2-(4-曱氧基苯基)-l-曱基乙基]氨基]乙基]苯基]-曱酰胺。福莫特罗的制备例如描述于WO92/05147中。在这种实施方案的一方面中，p2肾上腺素受体激动剂是富马酸福莫特罗。应当理解的是，本发明涵盖福莫特罗的所有光学异构体及其混合物、包括外消旋物的用途。因而例如，术语"福莫特罗"涵盖iV-[2-羟基-5-[(1/)-1-羟基-2-[[(1"-2-(4-曱氧基苯基)-1-曱基乙基]氨基]乙基]苯基]-甲酰胺、A42-羟基-5-[(lQ-l-羟基-^[[(lQ-^(4-甲氧基苯基)-l-曱基乙基]氨基]乙基]苯基]-曱酰胺和这些对映异构体的混合物，包括外消旋体。在本发明的一个实施方案中，所述(32肾上腺素受体激动剂选自7V-[2-(二乙基氨基)乙基]-AK2-([2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢-l，3-苯并噻唑-基)乙基]氨基}乙基)_3-[2-(萘-1-基)乙氧基]丙酰胺，A4:(二乙基氨基)乙基]-AK2-{[2-(4-羟基-2-氧代_2,3-二氢-1,3-苯并噻唑-7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2-(3-氯苯基)乙氧基]丙酰胺，以及7-[(1"-2-({2-[(3-{[2-(2-氯苯基)乙基]氨基}丙基)硫基]乙基}氨基)-1-羟基乙基]-4-羟基-1，3-苯并噻唑-2(3//)-酮，或它们的药用盐。本实施方案的(32肾上腺素受体激动剂可如本申请实验制备部分所述制备。本实施方案的P2肾上腺素受体激动剂的名称由IUPACNAME,ACDLabs8版本命名软件包生成。在本发明进一步的实施方案中，所述P2肾上腺素受体激动剂选自A42-(二乙基氨基)乙基]-AH2-([2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢-l，3-苯并噻唑_7-基)乙基]氨基}乙基)_3-[2-(萘-1-基)乙氧基]丙酰胺二氢澳酸盐，；v-p-(二乙基氨基)乙基]-AK2-U2-(4-羟基-2-氧代-2,3-二氢-l，3-苯并噻唑-7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2_(3-氯苯基)乙氧基]丙酰胺二氢溴酸盐，以及7-[(1"-2-({2-[(3-{[2-(2-氯苯基)乙基]氨基}丙基)硫基]乙基}氨基)小羟基乙基]一4-羟基-1,3-苯并噻唑-2(3//)-酮二氩溴酸盐。在本发明的一个实施方案中，所述毒蕈碱性受体拮抗剂为[2-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基)-。恶唑-5-基曱基]-二曱基-(3-苯氧基-丙基)-铵盐，以及所述卩2肾上腺素受体激动剂为福莫特罗(例如为富马酸盐)。在本实施方案的一个方面中，所述毒蕈碱性受体拮抗剂为溴化[2-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-二曱基-(3-苯氧基-丙基)-铵。在本实施方案的另一个方面中，所述毒蕈碱性受体拮抗剂为1，5-萘二磺酸[2-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-二曱基-(3-苯氧基-丙基)-铵(例如半-萘-l，5-二磺酸盐)。在本发明的一个实施方案中，所述毒蕈碱性受体拮抗剂为[2-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-二曱基-(2-苯乙基氧基-乙基)-铵盐，以及所述|32肾上腺素受体激动剂为福莫特罗(例如为富马酸盐)。在本实施方案的一个方面中，所述毒蕈碱性受体拮抗剂为溴化[2-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-二曱基-(2-苯乙基氧基-乙基)-铵。在本实施方案的另一个方面中，所述毒蕈碱性受体拮抗剂为1,5-萘二磺酸[2-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基)-魂、唑-5-基曱基]-二曱基-(2-苯乙基氧基-乙基)-铵(例如半-萘-1,5-二磺酸盐)。在本发明的一个实施方案中，所述毒蕈碱性受体拮抗剂为[[2-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基)-魂唑-5-基甲基]-[3-(3，4-二氯-苯氧基)-丙基]二曱基-铵盐，以及所述P2肾上腺素受体激动剂为福莫特罗(例如为富马酸盐)。在本实施方案的一个方面中，所述毒蕈碱性受体拮抗剂为溴化[[2-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-[3-(3,4-二氯-苯氧基)-丙基]二曱基-铵。在本实施方案的另一个方面中，所述毒蕈碱性受体拮抗剂为1，5-萘二磺酸[2-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基)-。恶唑-5-基曱基]-[3-(3,4-二氯-苯氧基)-丙基]二曱基-铵(例如半-萘-1，5-二磺酸盐)。在本发明的一个实施方案中，所述毒蕈碱性受体拮抗剂为[2-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基)-。恶唑-5-基曱基]-[2-(3,4-二氯-千基氧基)-乙基]-二曱基-铵盐，以及所述(32肾上腺素受体激动剂为福莫特罗(例如为富马酸盐)。在本实施方案的一个方面中，所述毒蕈碱性受体拮抗剂为溴化[2-((R)-环己基-羟、基-苯基-曱基)-。恶唑-5-基曱基]-[2-(3,4-二氯-千基氧基)-乙基]-二曱基-铵。在本实施方案的另一个方面中，所述毒蕈碱性受体拮抗剂为1,5-萘二磺酸[2-((11)-环己基-羟基-苯基-甲基)-碌唑-5-基曱基]-[2-(3,4-二氯-千基氧基)-乙基]-二曱基-铵(例如半-萘-l,5-二磺酸盐)。在本发明的一个实施方案中，所述毒蕈碱性受体拮抗剂为[2-(4-氯-千基氧基)-乙基]-[2-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基)-碌、唑-5-基曱基]-二曱基-铵盐，以及所述P2肾上腺素受体激动剂为福莫特罗(例如为富马酸盐)。在本实施方案的一个方面中，所述毒蕈碱性受体拮抗剂为溴化[2-(4-氯-千基氧基)-乙基]-[2-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-二曱基-铵。在本实施方案的另一个方面中，所述毒蕈碱性受体拮抗剂为1，5-萘二磺酸[2-(4-氯-千基氧基)-乙基]-[2-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基)-唾唑-5-基曱基]-二曱基-铵(例如半-萘-l,5-二磺酸盐)。在本发明的一个实施方案中，所述毒蕈碱性受体拮抗剂为[2-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-二曱基-(3-苯氧基-丙基)-铵盐，以及所述卩2肾上腺素受体激动剂为iV-[2-(二乙基氨基)乙基]-AK2-U2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢-1,3-苯并噻唑-7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2-(萘-1-基)乙氧基]丙酰胺或其药用盐(例如二氢溴酸盐)。在本实施方案的一个方面中，所述毒蕈石烕性受体拮抗剂为溴化[2-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-二甲基-(3-苯氧基-丙基)-铵。在本实施方案的另一个方面中，所述毒蕈碱性受体拮抗剂为1，5-萘二磺酸[2-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基)-碌、唑-5-基曱基]-二曱基-(3-苯氧基-丙基)-铵(例如半-萘-1,5-二磺酸盐)。在本发明的一个实施方案中，所述毒蕈碱性受体拮抗剂为[2-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-二曱基-(2-苯乙基氧基-乙基)-铵盐，以及所述(32肾上腺素受体激动剂为^-[2-(二乙基氨基)乙基]-丛(2-{[2-(4-羟基-2-氧代-2,3-二氢-1，3-苯并噻唑-7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2_(萘-1-基)乙氧基]丙酰胺或其药用盐(例如二氬溴酸盐)。在本实施方案的一个方面中，所述毒蕈碱性受体拮抗剂为溴化[2-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基)-。恶唑-5-基曱基]-二曱基-(2-苯乙基氧基-乙基)-铵。在本实施方案的另一个方面中，所述毒蕈碱性受体拮抗剂为1,5-萘二磺酸[2-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-二曱基-(2-苯乙基氧基-乙基)-铵(例如半-萘-l，5-二磺酸盐)。在本发明的一个实施方案中，所述毒蕈碱性受体拮抗剂为[[2-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-[3-(3,4-二氯-苯氧基)-丙基]二曱基-铵盐，以及所述p2肾上腺素受体激动剂为A42-(二乙基氨基)乙基]-iV-(2-{[2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢-l,3-笨并噻唑-7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2-(萘-l-基)乙氧基]丙酰胺或其药用盐(例如二氢溴酸盐)。在本实施方案的一个方面中，所述毒蕈碱性受体拮抗剂为溴化[[2-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基)-碌、唑-5-基曱基]-[3-(3,4-二氯-苯氧基)-丙基]二曱基-铵。在本实施方案的另一个方面中，所述毒蕈碱性受体拮抗剂为1，5-萘二磺酸[2-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-[3-(3，4-二氯-苯氧基)-丙基]二曱基-铵(例如半-萘-l,5-二磺酸补、JBLJ。在本发明的一个实施方案中，所述毒蕈碱性受体拮抗剂为[2-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-[2-(3，4-二氯-千基氧基)-乙基]-二曱基-铵盐，以及所述p2肾上腺素受体激动剂为7\42-(二乙基氨基)乙基]-丛(2-{[2-(4-羟基-2-氧代-2,3-二氢-1，3-苯并噻唑-7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2-(萘-1-基)乙氧基]丙酰胺或其药用盐(例如二氢溴酸盐)。在本实施方案的一个方面中，所述毒蕈碱性受体拮抗剂为溴化[2-((R)-环己基-羟基-苯基-甲基)-。恶唑-5-基甲基]-[2-(3,4-二氯-苄基氧基)-乙基]-二曱基-铵。在本实施方案的另一个方面中，所述毒蕈碱性受体拮抗剂为1，5-萘二磺酸[2-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基)一噁唑_5-基曱基]-[2-(3,4-二氯-千基氧基)-乙基]-二曱基-铵(例如半-萘-1,5-二磺酸盐)。在本发明的一个实施方案中，所述毒蕈碱性受体拮抗剂为[2-(4-氯-千基氧基)-乙基]-[2-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基)-。恶唑-5-基曱基]-二曱基-铵盐，以及所述(32肾上腺素受体激动剂为7V-[2-(二乙基氨基)乙基]-AK2-([2-(4-羟基-2-氧代-2,3-二氢-1,3-苯并噻唑-7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2-(萘-1-基)乙氧基]丙酰胺或其药用盐(例如二氢溴酸盐)。在本实施方案的一个方面中，所述毒蕈碱性受体拮抗剂为溴化[2-(4-氯-千基氧基)-乙基]-[2-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基)-。恶唑-5-基曱基]-二曱基-铵。在本实施方案的另一个方面中，所述毒蕈碱性受体拮抗剂为1,5-萘二磺酸[2-(4-氯-千基氧基)-乙基]-[2-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基)-碌、唑-5-基曱基]-二曱基-铵(例如半-萘-l,5-二磺酸盐)。在本发明的一个实施方案中，所述毒蕈碱性受体拮抗剂为[2-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基)-。恶唑-5-基曱基]-二曱基-(3-苯氧基-丙基)-铵盐，以及所述卩2肾上腺素受体激动剂为A42-(二乙基氨基)乙基]-AK2-U2-(4-羟基-2-氧代-2,3-二氢-1,3-苯并噻唑-7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2-(3-氯苯基)乙氧基]丙酰胺或其药用盐(例如二氢溴酸盐)。在本实施方案的一个方面中，所述毒蕈;威性受体拮抗剂为溴化[2-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-二曱基-(3-苯氧基-丙基)-铵。在本实施方案的另一个方面中，所述毒蕈碱性受体拮抗剂为1,5-萘二磺酸[2-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-二曱基-(3-苯氧基-丙基)-铵(例如半-萘-l，5-二磺酸盐)。在本发明的一个实施方案中，所述毒蕈碱性受体拮抗剂为[2-((R)-环己基-羟基-苯基-甲基)-噁唑-5-基曱基]-二曱基-(2-苯乙基氧基-乙基)-铵盐，以及所述p2肾上腺素受体激动剂为Aq2-(二乙基氨基)乙基]-AK2-([2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢-1,3-苯并噻唑-7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2-(3-氯苯基)乙氧基]丙酰胺或其药用盐(例如二氬溴酸盐)。在本实施方案的一个方面中，所述毒蕈碱性受体拮抗剂为溴化[2-((R)-环己基-羟基-苯基-甲基)-。恶唑-5-基曱基]-二曱基-(2-苯乙基氧基-乙基)-铵。在本实施方案的另一个方面中，所述毒蕈碱性受体拮抗剂为1,5-萘二磺酸[2-((R)-环己基-羟基-苯基-甲基)-碌唑-5-基甲基]-二曱基-(2-苯乙基氧基-乙基)-铵(例如半-萘-l，5-二磺酸盐)。在本发明的一个实施方案中，所述毒蕈碱性受体拮抗剂为[[2-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基)-碌唑-5-基曱基]-[3-(3,4-二氯-苯氧基)-丙基]二曱基-铵盐，以及所述p2肾上腺素受体激动剂为7^-[2-(二乙基氨基)乙基]-丛(2-{[2-(4-羟基-2-氧代-2,3-二氢-1,3-苯并噻唑-7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2-(3-氯苯基)乙氧基]丙酰胺或其药用盐(例如二氢溴酸盐)。在本实施方案的一个方面中，所述毒蕈碱性受体拮抗剂为溴化[[2-((R)-环己基-羟基-苯基-甲基)-噁唑-5-基曱基]-[3-(3,4-二氯-苯氧基)-丙基]二曱基-铵。在本实施方案的另一个方面中，所述毒蕈碱性受体拮抗剂为1,5-萘二磺酸[2-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-[3-(3,4-二氯苯氧基)-丙基]二曱基-铵(例如半-萘-1，5-二磺酸盐)。在本发明的一个实施方案中，所述毒蕈碱性受体拮抗剂为[2-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-[2-(3,4-二氯-苄基氧基)-乙基]-二曱基-铵盐，以及所述p2肾上腺素受体激动剂为A42-(二乙基氨基)乙基]-iV-(2-([2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢-1，3-苯并噻唑-7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2-(3-氯苯基)乙氧基]丙酰胺或其药用盐(例如二氢溴酸盐)。在本实施方案的一个方面中，所述毒蕈碱性受体拮抗剂为溴化[2-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-[2-(3，4-二氯-千基氧基)-乙基]-二曱基-铵。在本实施方案的另一个方面中，所述毒蕈碱性受体拮抗剂为1，5-萘二磺酸[2-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-[2-(3，4-二氯-苄基氧基)-乙基]-二曱基-铵(例如半-萘-1，5-二磺酸盐)。在本发明的一个实施方案中，所述毒蕈碱性受体拮抗剂为[2-(4-氯-苄基氧基)-乙基]-[2-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-二甲基-铵盐，以及所述|32肾上腺素受体激动剂为7V-[2-(二乙基氨基)乙基]-AK2-([2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢-1,3-苯并噻唑-7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2-(3-氯苯基)乙氧基]丙酰胺或其药用盐(例如二氢溴酸盐)。在本实施方案的一个方面中，所述毒蕈碱性受体拮抗剂为溴化[2-(4-氯-千基氧基)-乙基]-[2-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-二曱基-铵。在本实施方案的另一个方面中，所述毒蕈碱性受体拮抗剂为1，5-萘二磺酸[2-(4-氯-千基氧基)-乙基]-[2-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基)-。恶唑-5-基曱基]-二曱基-铵(例如半-萘-l,5-二磺酸盐)。在本发明的一个实施方案中，所述毒蕈碱性受体拮抗剂为[2-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-二曱基-(3-苯氧基-丙基)-铵盐，以及所述卩2肾上腺素受体激动剂为7-[(1"-2-({2-[(3-{[2-(2-氯苯基)乙基]氨基}丙基)硫基]乙基}氨基)-1-轻基乙基]-4-羟基-1,3-苯并噻唑-2(3//)-@同或其药用盐(例如二氪溴酸盐)。在本实施方案的一个方面中，所述毒蕈碱性受体拮抗剂为溴化[2-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基)-噁唑-5-基甲基]-二曱基-(3-苯氧基-丙基)-铵。在本实施方案的另一个方面中，所述毒蕈碱性受体拮抗剂为1,5-萘二磺酸[2-((R)-环己基-羟基-苯基-甲基)-噁唑-5-基曱基]-二曱基-(3-苯氧基-丙基)-铵(例如半-萘-1,5-二磺酸盐)。在本发明的一个实施方案中，所述毒蕈碱性受体拮抗剂为[2-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基)-。恶唑-5-基曱基]-二曱基-(2-苯乙基氧基-乙基)-铵盐，以及所述(32肾上腺素受体激动剂为7-[(1司-2-({2-[(3-{[2-(2-氯苯基)乙基]氨基}丙基)硫基]乙基}氨基)-1-羟基乙基]-4-羟基-1,3-苯并噻唑-2(3//)-酮或其药用盐(例如二氬溴酸盐)。在本实施方案的一个方面中，所述毒蕈碱性受体拮抗剂为溴化[2-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基)-碌、唑-5-基曱基]-二曱基-(2-苯乙基氧基-乙基)-铵。在本实施方案的另一个方面中，所述毒蕈碱性受体拮抗剂为1,5-萘二磺酸[2-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-二曱基-(2-苯乙基氧基-乙基)-铵(例如半-萘-l,5-二磺酸盐)。在本发明的一个实施方案中，所述毒蕈碱性受体拮抗剂为[[2-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基)-碌、唑-5-基曱基]-[3-(3，4-二氯-苯氧基)-丙基]二曱基-铵盐，以及所述(32肾上腺素受体激动剂为7-[(1"-2-({2-[(3-{[2-(2-氯苯基)乙基]氨基}丙基)硫基]乙基}氨基)-1-羟基乙基]-4-羟基-l，3-苯并噻唑-2(3/7)-酮或其药用盐(例如二氢溴酸盐)。在本实施方案的一个方面中，所述毒蕈碱性受体拮抗剂为溴化[[2-((R)-环己基-羟基-苯基-甲基)-碌、唑-5-基曱基]-[3-(3，4-二氯-苯氧基)-丙基]二曱基-铵。在本实施方案的另一个方面中，所述毒蕈碱性受体拮抗剂为1,5-萘二磺酸[2-((R)-环己基-羟基-苯基-甲基)-噁唑-5-基曱基]-[3-(3,4-二氯-苯氧基)-丙基]二曱基-铵(例如半-萘-l，5-二磺酸盐)。在本发明的一个实施方案中，所述毒蕈碱性受体拮抗剂为[2-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基)-碌唑-5-基曱基]-[2-(3，4-二氯-千基氧基)-乙基]-二曱基-铵盐，以及所述(32肾上腺素受体激动剂为7-[(1"-2-({2-[(3-{[2-(2-氯苯基)乙基]氨基}丙基)硫基]乙基}氨基)-1-羟基乙基]-4-羟基-1，3-苯并噻唑-2(3//)-@同或其药用盐(例如二氢溴酸盐)。在本实施方案的一个方面中，所述毒蕈^s咸性受体拮抗剂为溴化[2-((R)-环己基-羟基-苯基-甲基)-碌、唑-5-基曱基]-[2-(3,4-二氯-千基氧基)-乙基]-二曱基-铵。在本实施方案的另一个方面中，所述毒蕈碱性受体拮抗剂为1,5-萘二磺酸[2-((R)-环己基-羟基-苯基-甲基)-。恶唑-5-基曱基]-[2-(3，4-二氯-千基氧基)-乙基]-二曱基-铵(例如半-萘-l,5-二磺酸盐)。在本发明的一个实施方案中，所述毒蕈碱性受体拮抗剂为[2-(4-氯-苄基氧基)-乙基]-[2-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-二曱基-铵盐，以及所述P2肾上腺素受体激动剂为7-[(1"-2-({2-[(3-{[2-(2-氯苯基)乙基]氨基}丙基)硫基]乙基}氨基)-1-羟基乙基]-4-羟基-1,3-苯并噻唑-2(3//)-酮或其药用盐(例如二氢溴酸盐)。在本实施方案的一个方面中，所述毒蕈4i性受体拮抗剂为溴化[2-(4-氯-千基氧基)-乙基]-[2-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-二甲基-铵。在本实施方案的另一个方面中，所述毒蕈碱性受体拮抗剂为1，5-萘二磺酸[2-(4-氯-千基氧基)-乙基]-[2-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基)-碌、唑-5-基曱基]-二曱基-铵(例如半-萘-1,5-二磺酸盐)。本发明的组合在呼吸系统疾病的治疗中可提供有益的治疗效果。这种可能的效果的实例包括改善以下参数中的一个或多个降低炎症细胞流入肺中、中度和重度恶化(exacerbation)、FEV"—秒钟用力呼气量(forcedexpiratoryvolumeinonesecond))、肺活量(VC)、最大呼气流量(PEF)、症状评分和生活质量。本发明的毒蕈碱性受体拮抗剂(第一活性成分)和P2肾上腺素受体激动剂(二活性成分)可以同时(simultaneously)、依次(sequentially)或分开(separately)给药，治疗呼吸系统疾病。"依次"是指活性成分按任意顺序给药，给药一种之后，立即给予给药另一种。如果将它们分开给药，则它们仍然具有所需的效果，但是在按这种方式给药时，它们的给药间隔一般小于4小时，更适宜地间隔小于2小时，更更适宜地间隔小于30分钟，最适宜地间隔小于10分钟。可以采用常规的系统剂型(systemicdosageform),例如片剂、胶嚢剂、丸剂、粉剂、水性或油性溶液剂或混悬剂、乳液和无菌注射的水性或油性溶液剂或混悬剂，将本发明的活性成分通过口服或肠胃外(例如静脉内、皮下、肌内或关节内)给药。活性成分也可以以溶液剂、混悬剂、气雾剂和干粉制剂的形式局部给药(至肺和/或气道)。这些剂型通常将包括一种或多种药用成分，它们可以选自例如辅料、载体、粘合剂、润滑剂、稀释剂、稳定剂、緩冲剂、乳化剂、粘度调节剂、表面活性剂、防腐剂、矫味剂和着色剂。正如本领域技术人员所理解的，给药活性成分的最适当方法取决于多种因素。在本发明的一个实施方案中，活性戍分是经由分开的药物制剂给药的。因此，在一方面，本发明提供一种试剂盒，其包含第一活性成分的制剂和第二活性成分的制剂和任选的说明书，所述第一活性成分是本发明的毒蕈碱性受体拮抗剂，第二活性成分是P2肾上腺素受体激动剂，所述说明书指导对有所述需要的患者同时、依次或分开给予所迷制剂。在另一个实施方案中，活性成分可以经由单一的药物组合物给药。因200880010661.5此，本发明进一步提供药物组合物，其包含呈混合物形式的第一活性成分和第二活性成分，所述第一活性成分是本发明的毒蕈碱性受体拮抗剂，第二活性成分是P2肾上腺素受体激动剂。本发明的药物组合物可以如下制备将毒蕈碱性受体拮抗剂(第一活性成分)和P2肾上腺素受体激动剂(二活性成分)与药用辅料、稀释剂或载体混合。因此，在本发明的进一步方面，提供制备药物组合物的方法，包括将本发明的毒蕈碱性受体拮抗剂与肾上腺素受体激动剂和药用辅料、稀释剂或载体混合。应当理解的是，根据本发明，所给药的每种活性成分的治疗剂量随所采用的特定活性成分、给予活性成分的模式和所治疗的病症或疾病而变化。在本发明的一个实施方案中，本发明的毒蕈碱性受体拮抗剂是经由吸入给药的。在经由吸入给药时，本发明的毒蕈碱性受体拮抗剂的剂量一般为如下的范围0.1微克(吗)至5000(Ag、0.1至1000吗、0.1至500吗、0.1至100吗、0.1至50ng、0.1至5pg、5至5000pg、5至1000pg、5至500pg、5至100(ig、5至50pg、5至10^ig、10至5000iig、10至1000pg、10至500^g、10至100|ig、10至50pg、20至5000ng、20至1000jig、20至500|Lig、20至100吗、20至50吗、50至5000昭、50至1000昭、50至500(ig、50至100吗、100至5000吗、100至1000ng或100至500吗。所述剂量一般为每天分1至4次给予，适宜地每天一次或两次，最适宜地每天一次。在本发明的一个实施方案中，p2肾上腺素受体激动剂是经由吸入给药的。在经由吸入给药时，p2激动剂的剂量一般为如下的范围0.1至50吗、0.1至40|ig、0.1至30|ig、0.1至20吗、0.1至10吗、5至10吗、5至50pg、5至40jig、5至30pg、5至20jxg、5至10吗、10至50昭、10至40ng10至30吗或10至20吗。所述剂量一般为每天分1至4次给予，适宜地每天一次或两次，最适宜地每天一次。在一个实施方案中，本发明提供了药物产品，其包含呈组合物形式的第一活性成分和第二活性成分，所述第一活性成分是本发明的毒蕈碱性受体拮抗剂，第二活性成分是|32肾上腺素受体激动剂，其中配制每种活性成分用于吸入给药。本发明的活性成分适宜地以溶液剂、混悬剂、气雾剂或干粉制剂的形18式经由吸入给药(例如局部给药至肺和/或气道)。给药可以是经口吸入或鼻内吸入。例如计量吸入装置可以用于给予分散在适合的推进剂中的活性成分，其中含有或不含额外的赋形剂(例如乙醇)、表面活性剂、润滑剂或稳定剂。适合的推进剂包括烃、氯氟碳和氩氟烷(例如七氟烷)推进剂，或者所述推进剂的任意混合物。优选的推进剂是P134a和P227,它们各自可以单独使用或者与其他推进剂和/或表面活性剂和/或其他赋形剂组合使用。也可以使用单位剂量或多剂量制剂形式的雾化含水混悬剂，或者优选为溶液剂，其中含有或不含适合的pH和/或张力调节剂。活性成分的干粉制剂和加压HFA(七氟烷)气雾剂可经口或经鼻吸入给药。对于吸入给药而言，化合物期望地为微细粉碎的。微细粉碎的化合物优选具有小于10nm的中位直径(mediandiameter),并且可在分散剂如C8-C20脂肪酸或其盐(例如油酸)、胆汁盐、磷脂、烷基糖(alkylsaccharide),全氟化或聚乙氧基化表面活性剂或其它药用分散剂的辅助下悬浮在推进剂混合物中。一种可能是将本发明的微细粉碎的化合物与载体物质例如单糖、二糖或多糖、糖醇或另一种多元醇混合。合适的载体为糖，例如乳糖、葡萄糖、棉子糖(raffinose)、松三糖(melezitose、拉克替醇(lactitol)、麦芽糖醇(maltitol)、海藻糖、蔗糖、甘露醇；以及淀粉。可供选择地所述微细粉碎的化合物可由另一种物质包衣。也可将粉末混合物分配到硬明胶胶嚢中，从而每个胶嚢含有期望剂量的活性化合物。另一个可能是将微细粉碎的粉末加工成在吸入过程中破碎的球。可将这种球形粉末填充到多剂量吸入器(例如称为Turbuhaler⑧的吸入器)的药物贮器中，在所述吸入器中剂量单位量取随后由患者吸入的期望的剂量。在这种系统存在下，将活性成分与载体物质一起或不与载体物质一起递送至患者。本发明的组合用于治疗或预防呼吸道病症如慢性阻塞性肺病(COPD)、所有类型的慢性支气管炎(包括与其相关的呼吸困难)、哞喘(变应性哮喘和非变应性哮喘；"喘鸣-婴儿综合征(wheezy-infantsyndrome)")、成人/急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、慢性呼吸阻塞、支气管高反应性(bronchialhyperactivity)、肺纤维化、肺气胂和变应性鼻炎、由其它药物治疗(特别是其它吸入药物治疗)引起的气道高反应性的恶化，或尘肺(pneumoconiosis)(例如石凡土月申(aluminosis)、炭末5兄着(anthracosis)、石才帛肺(asbestosis)、石末肺(chalicosis)、鸵鸟毛尘肺(ptilosis)、铁沉着(siderosis)、矽肺(silicosis)、烟草尘月申(tabacosis)和棉尘肺(byssinosis))。干粉吸入器可以用于单独地给予活性成分或者给予活性成分与药用载体的组合，在给予活性成分与药用载体的组合情况时，以微细粉碎的粉末或者有序混合物的形式给药。干粉吸入器可以是单剂量或多剂量，并且可以采用干粉或含有粉末的胶嚢。计量吸入器、雾化器和干粉吸入装置是公知的，多种这类装置是可获得的。本发明进一步提供在治疗中同时、依次或分开使用的本发明的药物产品、试剂盒或药物组合物。本发明进一步提供本发明的药物产品、试剂盒或药物组合物在治疗呼吸系统疾病，尤其是慢性阻塞性肺病或哮喘中的用途。本发明进一步提供本发明的药物产品、试剂盒或药物组合物在制备用于治疗呼吸系统疾病，尤其是慢性阻塞性肺病或哞喘的药物中的用途。本发明更进一步提供治疗呼吸系统疾病的方法，包含对有此需要的患者同时、依次或分开给予(a)(治疗有效)剂量的第一活性成分，其是本发明的毒蕈碱性受体拮抗剂；和(b)(治疗有效)剂量的第二活性成分，其是|32肾上腺素受体激动剂。在本申请说明书的上下文中，除非另有相反的具体说明，术语"治疗"也包括"预防"。术语"治疗的"和"治疗地"也可相应地解释。预防被认为与经受所述疾病或病症的先前发作的人员的治疗特别有关，或被认为与面临所述疾病或病症的增加危险之中的人员的治疗特别有关。面临发展具体疾病或病症的危险之中的人员，通常包括具有该疾病或病症的家族史的人员，或已经通过遗传学试验或筛选确定为对特别易发展该疾病或病症的人员。本发明的药物产品、试剂盒或组合物可以任选地包含第三活性成分，该第三活性成分是适合用于治疗呼吸系统疾病的物质。可引入本发明的第三活性成分的实例包括磷酸二酯酶抑制剂，趋化因子受体功能调节剂，激酶功能抑制剂剂，蛋白酶抑制剂，甾类糖皮质激素受体激动剂，以及非甾类糖皮质激素受体激动剂。可用作本实施方案的第三活性成分的磷酸二酯酶抑制剂的实例包括PDE4抑制剂(如同工型PDE4D抑制剂)、PDE3抑制剂和PDE5抑制剂。所述实例包括以下化合物(Z)-3-(3,5-二氯-吡啶-4-基)-2-[4-(2-茚满基氧基-5-曱氧基-2-处咬基]丙烯腈，N-[9-氨基-4-氧代-l-苯基-3,4,6，7-四氢吡咯并[3,2，l-jk][l，4]苯并二氮杂蕈-3(R)-基]吡啶-3-曱酰胺(CI-1044),3-(苯曱基氧基)-1-(4-氟苯曱基)-N-[3-(曱基磺酰基)苯基]-lH-吲哚-2-曱酰胺，(1S-外)-5-[3-(二环[2.2.1]庚-2-基氧基)-4-甲氧基苯基]四氢-2(lH)-嘧啶酮((1S-exo)-5-[3-(bicyclo[2.2.1]hept-2-yloxy)-4画methoxyphenyl]tetrahydro-2(IH)-pyrimidinone)(Atizoram)，N-(3,5-二氯-吡啶-4-基)-2-[l-(4-氟苯曱基)-5-羟基-lH-吲哚-3-基]-2-氧代乙酰胺(AWD-12-281),卩-[3-(环戊基氧基)-4-曱氧基苯基]-1，3-二氢-1，3-二氧代-2H-异吲哚-2-丙酰胺(CDC-801),N-[9-曱基-4-氧代-l-苯基-3，4，6,7-四氢吡咯并[3,2,l-jk][l，4]苯并二氮杂萆-3(R)-基]吡啶-4-曱酰胺(CI-1018),顺式-[4-氰基-4-(3-环戊基氧基-4-曱氧基苯基)环己烷-l-羧酸(西洛司特(Cilomilast))，8-氨基-1,3-二(环丙基曱基)黄嘌呤(西潘茶碱(Cipamfylline)),^(2，5-二氯-3-吡啶基)-8-曱氧基-5-喹啉曱酰胺(D-4418)，5-(3，5-二叔丁基-4-羟基亚千基)-2-亚氨基噻唑烷-4-酮(达布非酮(Darbufelone)),2-曱基-l-[2-(l-曱基乙基)吡唑并[l，5-a]吡啶-3-基]-l-丙酮(异丁司特(Ibudilast))，曱磺酸2-(2，4-二氯苯基羰基)-3-脲基苯并呋喃-6-基酯(Lirimilast)，21(-)-(R)-5-(4-曱氧基-3-丙氧基苯基)-5-曱基碌、唑烷J-酮(Mesopram),(-)-顺式-9-乙氧基-8-曱氧基-2-曱基-1,2,3，4，4a,10b-六氬-6-(4-二异丙基氨基羰基苯基)-苯并[c][l,6]二氮杂萘(普马芬群(Pumafentrine))，3-(环丙基曱氧基)-N-(3,5-二氯-吡啶-4-基)-4-(二氟曱氧基)苯曱酰胺(罗氟司特(Roflumilast))，罗氟司特的N-氧化物，5,6-二乙氧基苯并[b]p塞吩-2-羧酸(硫苯司特(Tibenelast)),2,3,6,7-四氢-2-(均三曱基苯基亚氨基)-9，10-二曱氧基-3-曱基-4H-嘧啶并[6，1-a]异喹啉-4-酮(曲喹辛(Tr叫uinsin)),以及3-[[3-(环戊基氧基)-4-曱氧基苯基]-曱基]-N-乙基-8-(1-曱基乙基)-3H-嘌呤-6-胺(V-11294A)。可用作本实施方案的第三活性成分的趋化因子受体功能的调节剂的实例包括CCR3受体拮抗剂、CCR4受体拮抗剂、CCR5受体拮抗剂和CCR8受体拮抗剂。可用作本实施方案的第三活性成分的激酶功能抑制剂的实例包括p38激酶抑制剂和IKK抑制剂。可用作本实施方案的第三活性成分的的蛋白酶抑制剂的实例包括中性粒细胞弹性蛋白酶(neutrophilelastase)抑制剂或MMP12抑制剂。可用作本实施方案的第三活性成分的甾类糖皮质激素受体激动剂的实例包括布地奈德、氟替卡松(例如为丙酸酯)、莫米松(例如为糠酸酯)、倍氯米松(例如为17-丙酸酯或17，21-二丙酸酯)、环索奈德、氯替泼诺(例如为依碳酸盐)、依替泼诺(etiprednol)(例如为二氯乙酸盐)、曲安西龙(例如为缩酮化合物(acetonide))、氟尼缩松、zoticasone、氟莫奈德、罗氟奈德、布替可特(例如为丙酸酯)、泼尼松龙、泼尼松、替泼尼旦、甾类酯例如6a,9a-二氟-17a-[(2-呋喃基羰基)氧基]-11卩-羟基-16a-曱基-3-氧代-雄甾-1，4-二烯-17卩-硫代羧酸S-氟曱酯、6a，9a-二氟-ll(3-羟基-16a-曱基-3-氧代-17a-丙酰氧基-雄甾-1，4-二烯-17|3-硫代羧酸S-(2-氧代-四氢呋喃-3S-基)酉旨和6a，9a-二氟-ll卩-羟基-16a-曱基-17a-[(4-曱基-1,3-噻唑-5-羰基)氧基]-3-氧代-雄甾-1，4-二烯-17卩-硫代羧酸S-氟曱酯、DE4129535公开的甾类酯、WO2002/00679或WO2005/041980公开的甾类或甾类GSK870086、GSK685698和GSK799943。可用作本实施方案的第三活性成分的非甾类糖皮质激素受体激动剂的实例包括WO2006/046916中公开的非甾类糖皮质激素受体激动剂。现参照以下非限制性实施例解释本发明。在实施例中说明了以下附图图1:毒蕈碱性受体拮抗剂2(MA2)溴化[2-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-二曱基-(3-苯氧基-丙基)-铵结晶形式A的X射线粉末衍射图。图2:毒蕈碱性受体拮抗剂7(MA7)半-萘-l,5-二磺酸[2-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-二曱基-(3-苯氧基-丙基)-铵结晶形式1的X射线粉末衍射图。图3:毒蕈碱性受体拮抗剂7(MA7):结晶形式2的X射线粉末衍射图。图4:毒蕈碱性受体拮抗剂7(MA7):结晶形式3的X射线粉末衍射图。图5:毒蕈碱性受体拮抗剂11(MA11)半-萘-l,5-二磺酸[2-(4-氯-千基氧基)-乙基]-[2-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-二曱基-铵结晶形式A的X射线粉末衍射图。图6:福莫特罗(lnM)、化合物A(MA2)(10nM)和化合物A(10nM)(在福莫特罗(1nM)存在下)在体外豚鼠气管中对lpM乙酰曱胆碱诱发的紧张的％抑制。图7:%福莫特罗(lnM)、化合物B(MAll)(10nM)和化合物B(10nM)(在福莫特罗(lnM)存在下)在体外豚鼠气管中对l|iM乙酰曱胆碱诱发的紧张的％抑制。图8:乙酰曱胆碱诱发的豚鼠支气管收缩3pg/kg和27吗/kg化合物A(BA1),0.2|ig/kg化合物Z(MA2)或3pg/kg化合物A和0.2pg/kg化合物Z的组合。图9:乙酰甲胆碱诱发的豚鼠支气管收缩1pg/kg和27pg/kg化合物A(BA1),0.01叱/kg化合物Y(MA11)或1pg/kg化合物A和0.01吗/kg化合物Y的组合。具体实施例方式毒蕈碱性受体拮抗剂的制备本发明的毒蕈碱性受体拮抗剂可如下制备。本申请所述的盐的供选盐可使用与所述的方法所类似的方法通过常规化学制备。制备毒蕈碱性受体拮抗剂的一般实验细节除非另有说明，在毒蕈碱性受体拮抗剂的制备中使用以下一般条件。除非另有说明，所有反应都在氮气气氛下进行。在以下仪器上获得NMR光镨在400MHz操作的配有5mm反检测三联共振探针(inversedetectiontripleresonanceprobe)的VarianUnityInova400光谱仪，在400MHz操作的配有5mm反检测三联共振TXI探针的BmkerAvanceDRX400光语仪，或在300MHz操作的配有标准5mm双频探针(dualfrequencyprobe)的BrukerAvanceDPX300光诣—义。位移以相对于四曱基硅烷的ppm(百万分之一)形式给出。当产物经柱色谱纯化时，"快速硅胶"是指用于色语的0.035至0.070mm(220至440目)硅胶(例如Fluka硅胶60),并且所应用的至多10p.s.i的氮气压力加速了柱洗脱。当使用薄层色谱(TLC)时，其是指硅胶TLC用板，通常为铝箔板上的3x6cm硅胶，所述硅胶含有荧光指示剂(254nm)(例如Fluka60778)。所有溶剂都是市售的并且原样使用。除非另有说明，获得了含有碱性中心的化合物(经HPLC纯化)，这些化合物都是TFA盐。制备性HPLC条件C18-反相柱(100x22.5mm内径Genesis柱，7粒度)。在230nm进行UY检测。LC/MS系统使用液相色谱质镨(LC/MS)系统LC-MS方法1WatersPlatformLCT,C18-反相柱(100x3.0mmHigginsClipeus,5|im粒度)，用A:水+0.1%甲酸；B:乙腈+0.1%曱酸洗脱。梯度为梯度时间流速mL/min°/。A%B0.001.09551.001.095515.001.059520.001.059522.001.095525.001.0955检测-MS、ELS、UV(100piMS分流液(split)，配备在254nm进行检测的在线uv检测器)。MS离子化方法-电喷雾(正离子)。LC-MS方法2WatersPlatformLC，C18-反相柱(30x4.6mmPhenomenexLuna3粒度)，用A:水+0.1%曱酸；B:乙腈+0.1°/。甲酸洗脱。梯度为梯度时间流速mL/min%A%B0.002.0950.502,0954.502.0955,502.0956.002.0955检测-MS、ELS、UV(100iilMS分流液，配备在线UV检测器)。MS离子化方法-电喷雾(正离子和负离子)。LC-MS方法3WatersMicromassZQ，CI8-反相柱(30x4.6mmPhenomenexLuna3粒度)，用A:水+0.1%曱酸；B:乙腈+0.1%曱酸洗脱。梯度为梯度时间流速mL/min%A%B0.002.09550.502.09554.502.05955.502.05956.002.0955才企测-MS、ELS、UV(100m1MS分流液，配备在线UV^r测器)。MS离子化方法-电喷雾(正离子和负离子)。LC-MS方法4WatersMicromassZQ，C18隱反相柱(100x3,0mmHigginsClipeuswith5pm粒度)，用A:水+0.1%甲酸；B:乙腈+0.1%曱酸洗脱。梯度为梯度时间流速mL/min%A%B0.001.09551.001.095515.001.059520.001.059522.001.095525.001.0955检测-MS、ELS、UV(100plMS分流液，配备在254nm进行检测的在线UV检测器)。MS离子化方法-电喷雾(正离子)。在高分辨PhilipsX-PertMPD机器上以反射模式和6-26构型，在2。至40°26的扫描范围收集X-射线粉末衍射(XRPD)图，每0.03。增量暴露100秒。X射线由在45kV和40m操作的铜管产生。当使用单色器时直束X射线的波长为1.5406A(Kal)。在放有约2mg化合物的零背景固定器(holder)上收集数据。固定器(由PANalytical提供)由硅单晶制成，将所述硅单晶沿着非衍射平面在2。至40。26的范围切割，然后在光学平面抛光台上进行抛光。在该表面上的X射线入射由布拉格消光(Braggextinction)抵消。原始数据以电子形式储存，在原始或经平滑的衍射图上进行评价。在环境温度和相对湿度记录XRPD。差示扫描量热法(DSC)热分析图使用配有铝盘(aluminiumpan)和穿孔盖(piercedlid)TAQ1000差示扫描量热计测量。样品重量在0.5至5mg之间变化。该操作在氮气流(50ml/min)下进行，进行研究的温度为25至300。C，温度增量为每分钟10°C的恒定速率。热重分析(TGA)热分析图使用配有铝盘的TAQ500热重分析仪测量。样品重量在1至5mg之间变化。该操作在氮气流(60ml/min)下进行，进行研究的温度为25至300°C，温度增量为每分钟10。C的恒定速率。GVS分布4吏用动力蒸汽吸收DVS-1(DynamicVapourSorptionDVS國1instrument)设备测量。将约l-5mg固体样品置于玻璃小瓶中，然后在双循环步骤方法(dualcyclestepmethod)(40-卯至0-90至0。/。的相对湿度(RH),幅度为10。/。RH)过程中记录样品的重量。GVS分布在环境温度记录。在实验部分使用以下缩写Aq=水溶液DCM=二氯曱烷DMF=二曱基甲酰胺EtOAc=乙酸乙酯EtOH=乙醇GVS=重量蒸汽吸收(Gravimetricvapoursorption)MeOH=曱醇RT=室温Rt=保留时间THF=四氢^^喃Satd=饱和的将本申请描述的毒蕈碱性受体拮抗剂和在其制备中使用的中间体，给出了由IsisDraw2.5片反本(由MDLInformationSystemsInc.才是供)的Autonom2000插件产生的IUPAC名称。在毒蕈碱性受体拮抗剂的制备中使用的中间体在毒蕈碱性受体拮抗剂的制备中使用的以下中间体1-6如下制备^_中间体1:2-氧代-2-苯基-iV-丙-2-炔基-乙酰胺将草酰氯(6.1g,48mmol)加到苯基乙醛酸(6.0g,40mmol)和3滴DMF于无水DCM(50mL)中的溶液中。将反应混合物在室温搅拌3h,然后除去溶剂。残余物吸收在无水(50mL)DCM中，将溶液冷却至0。C。历时10分钟的一段时间小心加入炔丙胺(2.2g,40mmol)和三乙胺(4.05g，40mmol)的混合物，然后使混合物温热至室温。继续搅拌2.5h,然后加入水(10mL)。混合物先后用1MHC1、饱和碳酸氢钠(aq.)和盐水洗涤。然后将有机相干燥(Na2S04)并除去溶剂。残余物从环己烷结晶得到产物其为淡棕色固体。收率5.75g,76°/。。LC-MS(方法3):Rt2.47分钟，m/z188[Mlf]。中间体2:(5-甲基-噁唑-2-基)-苯基-甲酮27'J、、0将曱磺酸(IOg,104mmol)滴加到2-氧代-2-苯基-iV-丙-2-炔基-乙酰胺(中间体1)(2.4g，12.83mmol)于1，4-二氧杂环己烷(20mL)中的溶液中。将得到的溶液在90。C加热66h。将反应混合物冷却，除去溶剂。深色残余物在DCM和水之间分配。DCM级份先后用1MHC1(2x)、饱和碳酸氢钠溶液(aq.，2x)和盐水洗涤。将溶液干燥(Na2S04)并除去溶剂，得到粗产物。经由柱色谱(用环己烷/EtOAc(4:l)洗脱)进行纯化。这得到产物，其为灰白色固体。收率1.0g,41%。LC-MS(方法3):Rt2.94分钟，m/z188[Mlf]。中间体3:(5-溴甲基-唾、唑-2-基)-苯基-曱酮将(5-曱基-噁唑-2-基)-苯基-甲酮(中间体2)(0.8g,4,28mmo1)、iV-溴-琥珀酰亚胺(0.9g,5.06mmol)和2，2，-偶氮二(2-曱基丙腈)(56mg,0.34mmol)于四氯化碳(8mL)中的混合物回流加热1.5h。将反应混合物冷却至室温并过滤。滤液用DCM稀释，然后用水、饱和碳酸氢钠溶液(aq.)和盐水洗涤。将其干燥(Na2S04)并除去溶剂。经由柱色语(用环己烷/EtOAc(4:1)洗脱)进行纯化。这得到产物，其为黄色固体。收率0.9g,79%。LC-MS(方法3):Rt3.26分钟，m/z266，268[MPT〗。中间体4:(5-二曱基JL&乙基-噁唑-2-基)-苯基-甲酮将(5-溴曱基-噁唑-2-基)-苯基-曱酮(中间体3)(0.18g,0.68mmol)溶于2M二曱胺于THF(3mL，6mmol)中的溶液中。将混合物在室温搅拌1h，此时几乎立即形成沉淀。除去溶剂，残余物在DCM和饱和碳酸氬钠溶液(aq.)之间分配。水相用DCM萃取，合并的有机相干燥(Na2S04),然后除去溶剂得到产物，其为静置时结晶的橙色油状物。收率0.16g,99%。LC-MS(方法2):Rtl.22分钟，m/z231[MH"]。中间体5:环己基-(5-甲基-碌唑-2-基V苯基-甲醇在0。C在氮气下历时10分钟将(5-甲基-碌、唑-2-基)-苯基-甲酮(中间体2)(3.0g,16mmol)于32mL无水THF中的溶液用2M的环己基氯化镁于乙醚(IOmL,20mmol)中的溶液逐滴处理。得到的深黄色、溶液在O'C搅拌约30分钟，在这期间形成沉淀，然后在室温搅拌1.5h。将反应混合物再次冷却至0。C，然后用饱和氯化铵溶液(叫.)小心处理。将混合物在室温搅拌10分钟，然后用水(IOmL)稀释。分离各相，有机相用盐水洗涤。合并的水相用DCM萃取，将合并的有机相干燥(MgS04)并真空浓缩得到粗产物，将其用乙醚研磨，滤出并干燥。收率3.65g,84%。LCMS(方法3):Rt3.78分钟，m/z272[Mir]。中间体6:(5-溴甲基-碌.唑-2-基)-环己基-苯基-甲醇.将环己基-(5-曱基-碌、唑-2-基)-苯基-曱醇(中间体S)(3.0g,11.1mmol)于1,2-二氯乙烷(22mL)中的溶液先后用AT-溴-琥珀酰亚胺(2.16g，12.2mmol)和2，2，-偶氮二(2-曱基丙腈)(0.18g，2.1mmol)处理。将混合物加热至80°C并保持2.5h,然后使其冷却至室温。加入饱和碳酸氢钠溶液(aq.),'然后分离各相。有机层用盐水洗涤，合并的水层用DCM萃取。合并的有机相干燥(MgS04)并真空浓缩，得到粗产物，其为棕色油状物。经由柱色语(先后用33-100Q/。DCM/环己烷和25%EtOAc/DCM洗脱)进行纯化。收率1.85g,48%。LCMS(方法3):Rt4.27分钟，m/z350，352[MKT]。中间体7:2-苯乙基氧基-乙醇2-苯乙基氧基-乙醇的制备描述在JC/7em.1983，26，1570-1576中。中间体8:[2-(2-溴-乙氧基)-乙基l-苯将三苯基膦(1.65g,6.3mmol)加到2-苯乙基氧基-乙醇(中间体7)(950mg,5.7mmol)和四溴化碳(2.09g,6.3mmol)于DCM(25mL)中的溶液中，然后在室温搅拌6h。然后加入另一当量三苯基膦和四溴化碳并搅拌过夜。将反应混合物浓缩，残余物经硅胶柱色i普(使用环己烷作为洗脱剂)纯化。浓缩纯级份得到产物，其为澄清油状物。收率1.25g，96%。画R(CDC13):52.91(t，2H),3.44(t，2H)，3.71(t,2H)，3.76(t，2H),7.19-7.24(m,3H),7.27-7.31(m，2H)ppm。中间体9:2-f4-曱基-苄基氧基)-乙醇将氢氧化钾(1.19g，21.3mmol)于乙二醇(12mL,213mmol)中的混合物在130。C加热3h，然后冷却至35。C，加入4-曱基千基溴(3.94g,21.3mmol)。反应混合物在35。C加热20h，冷却至室温，然后在水和乙醚之间分配。水层用乙醚萃取。合并的有机层用盐水洗涤，干燥(MgS04),并浓缩至干得到棕色油状物。将其经硅胶柱色语(使用0-100%乙醚/环己烷的梯度)纯化。合并纯级份并浓缩，得到黄色液体。收率2.97g,84°/。。&NMR(CDC13):52.04(t,1H),2.35(s，3H),3.58(t,2H)，3.75(m，2H)，4.52(s，2H),7.16(d，2H),7.23(d，2H)ppm。中间体10:1-(2-溴-乙氧基甲基)-4-甲基-苯根据类似于制备中间体8的方法制备，但使用2-(4-甲基-节基氧基)-乙醇(中间体9)替代2-苯乙基氧基-乙醇(中间体7),收率85%。)H画R(CDC13):S2.35(s,3H),3.47(t,2H)，3.76(t,2H),4.55(s，2H)，7.16(d，2H),7.24(d,2H)ppm。中间体11:4-(3-溴-丙氧基)-l,2-二氯-苯将3，4-二氯苯酚(1.98g,12.14薩ol)、1,3-二溴丙烷(6.0mL，59腿ol)和碳酸钾(2.5g,18mmol)于乙腈中的混合物在80°C加热过夜。将反应混合物冷却至室温，过滤，滤液在水和乙醚之间分配。有机层干燥(MgS04)，浓缩，然后经硅胶柱色谱(使用0-10%乙醚/环己烷作为洗脱剂)纯化，得到产物。收率2.96g,86%。'HNMR(CDC13):S2.32(m，2H),3.59(t，2H)，4.08(t，2H)，6.77(dd，1H)，7.00(d，1H),7.32(d,1H)ppm。中间体12:2-C3,4-二氯-苄基氧基)-乙醇根据类似于制备中间体9的方法制备，但使用3,4-二氯爷基氯代替4-甲基苄基溴，收率72%。'HNMR(CDC13):51.83(br.s,1H),3.61(t,2H),3.79(t，2H)，4.52(s，2H)，7.17(dd,1H),7.42(d,1H),7.45(d，1H)ppm。中间体13:4-(2-溴-乙氧基甲基)-l,2-二氯-苯根据类似于制备中间体8的方法制备，但使用2-(3，4-二氯-苄基氧基)-乙醇(中间体12)代替2-苯乙基氧基-乙醇(中间体7)，收率定量。'H画R(CDC13):53.50(t，2H),3.80(t,2H)，4.53(s,2H),7.19(dd,1H),7.42(d,1H)，7.46(d,1H)ppm。中间体14:曱磺酸2-(4-氯-苄基氧基)-乙基酯将曱磺酰氯(980fiL,12.6mmol)于无水DCM(IOmL)中的溶液緩慢加到冷却的(0。C)2-(4-氯-节基氧基)-乙醇(2.14g，11.46mmol)和二异丙基乙胺(2.0mL，23mmol)于无水DCM(IOmL)中的溶液中。使反应混合物温热至室温过夜。加入水，有机层干燥(MgS04)并浓缩。残余物经硅胶柱色谱(使用0-20%乙醚/环己烷的梯度)纯化，得到纯产物。收率1.87g,67%。HNMR(CDC13):53,03(s，3H)，3.74(m,2H),4.39(m,2H)，4.54(s,2H),7.27(d,2H),7.33(d，2H)ppm。中间体15:W2-溴-乙氧基甲基)-4-氯-苯<formula>formulaseeoriginaldocumentpage32</formula>将曱磺酸2-(4-氯-苄基氧基)-乙基酯(中间体14)(1.37g,5.18mmol)和溴化锂(1.80g,20.7mmol)于丙酮(15mL)中的混合物回流加热过夜。将反应混合物浓缩至干，残余物在DCM和水之间分配。有^L层干燥(MgS04)，并浓缩，然后经硅胶柱色谱(使用DCM/环己烷(l:3)作为洗脱剂)纯化，得到产物，其为无色油状物。收率0.67g,78%。NMR(CDC13):53.49(t，2H)，3.79(t,2H),4.55(s,2H)，7.30(d，2H),7.32(d,2H)ppm。中间体16:环己基-(5-二甲基絲甲基-噁唑-2-基)-苯基-甲醇<formula>formulaseeoriginaldocumentpage32</formula>将(5-溴曱基-。恶唑-2-基)-环己基-苯基-曱醇(中间体6)(3.2g,9.2mmol)于THF(40mL)中的溶液用2M的二曱胺于THF(40mL，80mmol)中的溶液处理。搅拌几分钟后形成混悬液。使反应混合物在室温静置，然后滤出固体并弃去。滤液减压浓缩，残余物在DCM和饱和碳酸氢钠溶液(叫,)之间分配。有机层干燥(Na2S04)并蒸发，得到标题化合物，其为固体。收率2.74g，95%。LC-MS(方法1):Rt6.57分钟，m/z315[Mrf]。'HNMR(DMSO-d6):50.92-1.29(m，6H)，1.42-1.74(m，4H),2.10(s，6H)，2.22(m，1H),3.45(s，2H),5.卯(s，1H)，6.98(s,1H)，7.18-7.22(m,1H)，7.27-7.34(m，2H),7,40-7.46(m,2H)ppm。环己基-(5-二曱基氨基曱基-。恶唑-2-基)-苯基-曱醇(中间体16)(2.74g)两种对映异构体经制备性手性HPLC分离，所述制备性手性HPLC使用填充有固定在5pm硅胶上的淀粉酶三(3,5-二曱基苯基-氨基曱酸酯)的250x20mmChiralpakIA柱。该柱用由0.1%二乙胺緩沖的5。/。EtOH/庚烷洗脱，流速15mL/min。首先洗脱出的对映异构体(Rt8.5分钟)得到(S)-环己基-(5-二曱基氨基甲基-。恶唑-2-基)-苯基-曱醇(中间体16a),其为白色固体。中间体16a:fSV环己基-f5-二甲基氨基甲基-噁唑-2-基)-苯基-曱醇收率0.73g,27%。LC-MS(方法1):Rt6.50分钟，m/z315[Mlf]。'H丽R(CDC13):51.12-1.39(m，7H)，1.62-1.76(m,3H),2.25(s,6H),2.29-2.32(m，1H),3.54(ddAB,2H)，3.70(br.s，1H)，6.84(s,1H)，7.24(t，1H),7.33(t，2H),7.64(d,2H)ppm。第二次洗脱出的对映异构体(Rt10.3分钟)得到(R)-环己基-(5-二曱基氨基曱基-噁唑-2-基)-苯基-甲醇(中间体16b)，其为白色固体。中间体16b:nRV环己基-(5-二甲基^^甲基-碌唑-2-基)-苯基-甲醇收率1.04g，38%。LC画MS(方法1):Rt6.48分钟，m/z315[Mtf]。'HNMR(CDC13):51.10-1.39(m,7H)，1.62-1.76(m，3H),2.25(s,6H)，2.29-2.35(m，1H),3.54(ddAB，2H),3.70(br.s，1H),6.84(s，1H)，7.24(t，1H)，7.33(t,2H),7.64(d,2H)ppm。毒蕈碱性受体拮抗剂1fMAl):溴化C-aS)-环己基-羟基-苯基-甲基V噁唑-5-基曱基l-二甲基-(3-苯氧基-丙基)-铵使(S)-环己基-(5-二曱基氨基曱基噁唑-2-基)-苯基-曱醇(中间体16a)(0.060g,0.19mmol)和3-苯氧基丙基溴(0.215g，1mmol)于乙腈(1.33mL)和氯仿(2mL)中的溶液在室温静置5天。除去溶剂，得到粗产物。经柱色语(依次用DCM、2.5%MeOH/DCM、5%MeOH/DCM、10%MeOH/DCM和20%MeOH/DCM洗脱)进行纯化。收率50mg，43°/o。LC隱MS(方法1):Rt8.32分钟，m/z449OVT]。'HNMR(CDC13):51.06-1.17(m，3H),1.23-1.36(m，4H)，1.52-1.85(m,3H),2.28-2.35(m，3H),3.32(s,3H),3.33(s,3H)，3.63(dd，2H),4.04(t,2H),5.23(ddAB，2H),6.85(d,2H)，6.98(t,1H)，7.20(t，1H),7.26-7.30(m，4H),7.55-7.58Cm,3H)ppm。毒蕈碱性受体拮抗剂2(MA2):溴化『2-((R)-环己基-羟基-苯基-甲基p恶唑-5-基曱基l-二曱基-f3-苯氧基-丙基)-铵将(R)-环己基-(5-二曱基氨基曱基噁唑-2-基)-苯基-曱醇(中间体16b)(98mg,0.31mg)和3-苯氧基丙基溴(740mg,3.44mmol)于氯仿(1.5mL)和乙腈(1.5mL)中的溶液在50。C加热22h。将反应混合物浓缩至干，得到无色粘稠的油状物，将其用乙醚研磨得到白色胶状物。将其经柱色语(用2.5-25%MeOH/DCM洗脱)纯化，得到产物，其为混浊粘稠的油状物。在45°C真空干燥l-2天得到白色固体。收率142mg,86%。LC-MS(方法1):Rt8.41分钟，m/z449[]VT]。'H画R(CDC13):M.06-1.16(m,3H),1.21-1.37(m,4H),1.59-1.74(m，3H),2.32(m，3H),3.32(s，3H),3.33(s,3H),3.61(dd,2H),4.03(t，2H),4.14(br.s,IH)，5.20(ddAs,2H),6.85(d，2H)，6.98(t,1H),7.19(t,IH)，7.26-7.30(m,4H)，7.55-7.58(m,3H)ppm。毒蕈碱性受体拮抗剂2HVIA2):溴化2-fflRV环己基-羟基-苯基-甲基)-。恶唑-5-基甲基l-二曱基-(3-苯氧基-丙基)-铵-结晶形式A制备MA2结晶形式A的一般实验条件与下文在MAll的制备[2]中所述的条件相同。OO-环己基-〖5-二曱基氨基曱基-噁唑-2-基V苯基-曱醇1将(5-二曱基氨基乙基-噁唑-2-基)-苯基-曱酮2溶于THF(8.4L/kg)中，然后冷却至0士5。C的温度，历时至少lh向其中加入环己基氯化镁(1.3当量，为20w/w。/。的曱苯/THF溶液)。历时40分钟将反应混合物加热至20。C,然后在20。C搅拌至少1h,此时由HPLC检测产物转化〉96Q/。。将反应混合物加到23.1w/w%NH4Cl(3.97L/kg)和水(3.97L/kg)的混合物中。分离各相，水层用乙酸乙酯(7L/kg)萃取。合并的有机层用水(5.25L/kg)洗涤，然后经蒸馏(p^130毫巴，50。C)除去70%体积。向蒸馏残余物中加入乙腈(7.82L/kg)，然后对混悬液进行加热直到实现完全溶解(70。C)。然后历时7h将反应混合物冷却至0。C,然后在0。C搅拌至少lh。然后经过滤收集反应产物(土)-环己基-(5-二甲基氨基曱基-。恶唑-2-基)-苯基-曱醇，用冷的乙腈(1.65L/kg)洗涤三次。用该操作得到的收率范围在60-70°/。之间，达到的纯度>97%峰面积(HPLC)和〉97%w/w(NMR)。经手性SMB色谱在ChiralpakAD柱(使用乙腈:异丙醇:二乙基曱基胺(90:10:0.1)作为洗脱剂)上从该外消旋混合物中分离(R)-环己基-(5-二曱基氨基曱基-噁唑-2-基)-苯基-曱醇。1(R)-环己基-(5-二曱基氨基曱基-。恶唑-2-基)-苯基-曱醇的供选制备描述在WO2007/017669(实施例6)中。2(5-二曱基氨基曱基-噁唑-2-基)-苯基-曱酮的制备描述在WO2007/017669(中间体4)中。制备fMA2)结晶形式A的晶种的搡作-搡作l将(R)-环己基-(5-二曱基氨基曱基-碌唑-2-基)-苯基-甲醇(1当量)and3-苯氧基丙基溴(l.l当量)悬浮于异丙醇(4.3L/kg)。将得到的混悬液回流加热至少20h,或直到经HPLC检测产物转化>98%。得到的溶液用异丙醇(2L/kg)稀释，然后冷却至50。C。在50。C,加入叔丁基曱基醚(TBME)(9.5L/kg)，然后将溶液在50。C再搅拌2h，此时发生自发结晶。历时3h的一段时间将混合物逐渐冷却至0。C,然后在0。C搅拌至少lh。经过滤收集结晶产物，然后用冷的TBME(0.16L/kg)洗涤四次。用该操作得到的产物收率>80%，纯度>98。/。峰面积(HPLC)和〉97%w/w(NMR)。制备(MA2)结晶形式A的晶种的搡作-搡作2将(R)-环己基-(5-二曱基氨基曱基-唾-唑-2-基)-苯基-曱醇(1当量)和3-苯氧基丙基溴(l.l当量)在异丙醇(3.14L/kg)中浆化。将得到的混悬液加热至回流(100。C)，此时实现完全溶解。回流加热8^h后，将反应混合物冷却至环境温度过夜。经HPLC分析显示完全转化为产物。提取反应混合物样品(0.043L/kg)，然后滴加TBME(0.14L/kg),此时发生沉淀。在环境温度将该混悬液加到反应混合物中，此时发生沉淀。将得到的混悬液冷却至0。C，然后在此温度搅拌3h。经过滤收集产物，使用异丙醇(2.14L/kg)辅助将产物从小瓶转移到滤器中。滤饼用异丙醇(lL/kg)洗涤，然后在旋转蒸发仪上干燥过夜。获得粗产物，其为白色固体，86%收率。将粗产物加到TBME(相对于粗产物为10.4L/kg)中，然后在环境温度搅拌2h。经过滤收集产物，滤饼用TBME(20ml)洗涤，然后在旋转蒸发仪上干燥过夜。从粗产物得到的收率为94%，经HPLC检测的纯度为98.3%峰面积。(MA2)结晶形式A的制备在环境温度向(R)-环己基-(5-二曱基氨基曱基-噁唑-2-基)-苯基-曱醇(1当量)于异丙醇(4.44L/kg)中的溶液中加入3-苯氧基丙基溴(1.1当量)。历时90分钟将混合物加热至回流温度(83。C)，然后回流搅拌20h。之后历时13分钟将混合物冷却至57°C。取样，然后将反应混合物再次加热至回流。经HPLC确定反应转化为98.4%。将反应混合物用异丙醇稀释(5.55L/kg)，然后冷却至57°C。将溶液通过在线加热过滤器(heatedinlinefilter)过滤到搅拌的小瓶中。将反应器和滤器线路用温热的(55。C)异丙醇(U1L/kg)冲洗。将搅拌的小瓶中的内含物转移回反应器中，然后用异丙醇(l.llL/kg)沖洗。在47°C-50°C的温度和200毫巴的压力馏出异丙醇(5.55L/kg)。残条物冷却至52°C。在此温度历时35分钟加入TBME(10L/kg)。将得到的溶液在50。C搅拌2h。加入晶种(1.18%w/w(相对于(R)-环己基-(5-二曱基氨基曱基-噁唑-2-基)-苯基-曱醇)的投入量)，将混合物在50。C再搅拌2h。历时3h将形成的混悬液冷却至0。C，然后在该温度搅拌13h。过滤后，滤饼用1。C-8。C冷的TBME(1.48L/kg、1.67L/kg、2.04L/kg和2.04L/kg)沖洗四次。滤饼在氮气流中预干燥4.5小时，之后将其在旋转蒸发仪上在45。C和212毫巴进一步干燥得到产物，其为结晶白色固体。以2.7kg规模以该方法获得的收率为90.5%，纯度为98.3%峰面积(HPLC)和98.9%w/w(NMR)。干燥失重(Lossondrying)为0.23%w/w(重量分析)。36毒蕈碱性受体拮抗剂2(MA2)结晶形式A的分析由"制备(MA2)结晶形式A的晶种的操作-操作2"获得的结晶形式A的样品由XRPD、DSC和TGA分析。由DSC确定的形式A的熔化温度测定为150°C(起始)(±2°C)。在由TGA熔化之前所观测的重量损失为可忽略的，接近0.0%。GVS测定在80%RH(±0.2%)时得出0.8%的重量增加(o/。w/w)。毒蕈碱性受体拮抗剂2(MA2)结晶形式A的XRPD谱表示在图1中。毒蕈碱性受体拮抗剂3(MA3):溴化〖2WR)-环己基-羟基-苯基-甲基)-魂、唑-5-基甲基l-二曱基-(2-苯乙基氧基-乙基)-铵根据用于制备MA2的方法制备，但是使用[2-(2-溴-乙氧基)-乙基]-苯(中间体IO)代替3-苯氧基丙基溴。收率94%。LC-MS(方法1):Rt8.50分钟，m/z463[Nf]。'H雨R(CD3OD):51.06-1.39(m，6H),1.55(m，1H),1.65-1.79(m，3H)，2.40(m,1H)，2.90(t，2H)，2.94(s，6H)，3.47(m,2H),3.78(t，2H),3.86(m，2H),4.56(s，2H)，7.12(m,1H),7.19-7.28(m，5H)，7.32-7.37(m,3H),7.55(m,2H)。喜蕈碱性受体拮抗剂4fMA4):溴化〖2-((RV环己基-羟基-笨基-甲臬)-。恶唑-5-基甲基l-f3-C3,4-二氯-苯氣基V丙基l-二甲基-铵根据用于制备MA2的方法制备，但是使用4-(3-溴-丙氧基)-1,2-二氯-苯(中间体11)代替3-笨氧基丙基溴。收率'.59%。LC-MS(方法4):Rt8.85分钟，m/z517[M^。'HNMR(CDC13):51.08-1.40(m,7H),1.60-1.76(m,3H)，2.34(m，3H),3.34(s,6H),3.65(m,2H),3.99(m,3H),5.25(ddAB,2H),6.73(dd，1H)，6.96(d,1H),7.22(t,1H),7.26-7.34(m，3H),7.56(m，3H)ppm。毒蕈碱性受体拮抗剂5HV1A5):溴化2-(OQ-环己基-羟基-苯基-甲基)—悉唑-5-基甲基W2-a4-二氯-爷基氧基)-乙基l-二甲基-铵根据用于制备MA2的方法制备，但是使用4-(2-溴-乙氧基曱基)-l,2-二氣_苯(中间体13)代替3-苯氧基丙基溴。收率86°/。。LC-MS(方法1):Rt9,07分钟，m/z517[M^。'HNMR(CDC13):51.09-1.37(m,7H)，1.60-1.77(m,3H)，2.31(m，1H),3.33(s,6H)，3.91(m，2H),3.98(m,3H),4.55(s,2H),5.20(dc^B,2H)，7.17(dd,1H),7.24(m，1H),7.31(t,2H),7.40(d,1H),7.44,(d,1H)，7.48，(s,1H)，7.56(d，2H)ppm。喜蕈碱性受体拮抗剂6fMA6):溴化2-"-氯-苄基氧基V乙基W2-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基)-。恶唑-5-基甲基卜二甲基-铵根据用于制备MA2的方法制备，但是使用1-(2-溴-乙氧基曱基)-4-氯-苯(中间体15)代替3-苯氧基丙基溴。将(R)-环己基-(5-二曱基氨基曱基噁唑-2-基)-苯基-曱醇(0.40g，1.27mmo1)和l-(2-溴-乙氧基曱基)-4-氯-苯(中间体15)(0.67g,2.68mmol)于氯仿(4mL)和乙腈(4mL)中的溶液在50。C加热3天。将反应混合物浓缩至干，得到黄色油状物，将其经柱色镨(用2.5-25。/。MeOH/DCM洗脱)纯化，得到产物，其为白色泡沫。得到0.68g,92%。收率92%。LC-MS(方法1):Rt8.72分钟，m/z483[M""]。'H固R(CDC13):S1.08-1.40(m,7H)，1.61-1.76(m，3H),2.31(m,1H),3.32(s,6H),3.88(m,2H)，3.94(m,2H),4.03(br.s，1H),4.54(s,2H),5.17(ddAB:2H),7.21-7.26(m,3H),7.28-7.34(m,4H)，7.46(s,1H),7.56(d,2H)ppm。毒蕈碱性受体拮抗剂7(MA7):半-^~1,5-二磺酸2-(限)-环己基-羟基-苯基-甲基)-噁唑-5-基曱基卜二曱基-(3-苯^&-丙基)-铵将溴化[2-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基)-唾唑-5-基曱基]-二甲基-(3-苯氧基-丙基)-铵(MA2)(201mg,0.372mmol)、萘-1，5-二磺酸二钠盐(68mg，0.21mmol)、DCM(2.8mL)和水(2.8mL)的混合物在室温剧烈搅拌过夜。经过滤收集固体，用DCM/水混合物洗涤，然后在40°C真空干燥。获得的MA7样品在下文中称为MA7无定形形式。'HNMR显示对应于半盐(比例为2:1的阳离子/阴离子)的光谱。收率208mg,94%。LC-MS(方法1):Rt8.35分钟，m/z449[M+]。'HNMR(CD3OD):S1.04-1.37(m,12H),1.55-1.75(m，8H)，2.22(m，4H),2.40(m，2H),3.01(s，6H)，3.02(s,6H),3.37(m,2H)，3.97(m,4H),4.67(s,4H),6.89(d，4H),6.95(t，2H),7.21(t，2H)，7.28(m,8H)，7.51(m，8H),8.19(d，2H)，9.02(d,2H)ppm。盐形式1在60。C将MA7无定形形式(如上文所述制备)在曱苯中在搅拌下加热48小时，然后在搅拌的同时使其冷却至室温，得到产物，其为小片状物。经过滤收集产物并在50°C真空干燥3h。形式1的熔化温度由DSC确定，在测试过程中形式1进行脱水，随后完全或部分转化为无水形式的脱水形式1,在225。C士2。C(起始)熔化。由TGA确定的水含量为0.7。/。(士0.2。/。)。GVS测定在80%RH(士0.5°/。)时得出3.1%的重量增力口(。/oW/w)。结晶形式l的XRPD谱表示在图2中。另外量的形式1如下制备使用热过滤溶液将MA7无定形形式从回流的乙腈中结晶，并在搅拌的同时使其冷却至室温，得到产物，其为小片状物。经过滤收集产物并在60。C在曱苯中搅拌19h。通过倾析溶剂收集固体，然后在50。C真空干燥3h。XRPD和DSC分析与形式1一致。盐形式2将MA7无定形形式在茴香醚中在154。C加热3小时，然后^f吏其在室温静置48小时。通过倾析溶剂收集固体，然后在45。C真空干燥。由DSC确定的形式2的熔化温度测定为227。C士2。C(起始)。由TGA确定的水含量为0.0%。GVS测定在80。/oRH(士0.2。/o)时得出0.7。/o的重量增力口(。/ow/w)。结晶形式2的XRPD谱表示在图3中。另外量的形式2如下制备将MA7无定形形式从回流的氯苯中结晶，使其緩慢冷却至室温得到产物，其为微细的针状物。经过滤收集产物并在室温真空干燥过夜。XRPD和DSC分析与形式2—致。另外量的形式2如下制备将MA7无定形形式在曱苯中在80°C搅拌至少60小时。通过倾析溶剂收集固体，然后在45。C真空干燥。XRPD和DSC分析与形式2—致。盐形式3.使用热过滤溶液将MA7无定形形式从回流的丙酮/水混合物中结晶，然后在搅拌的同时使其冷却至室温，得到产物，其为白色粉末。经过滤收集产物并在室温真空干燥过夜。形式1的熔化温度由DSC确定，在测试过程中形式3进行脱水，随后完全或部分转化为无水形式的脱水形式3，在224°C±2°C(起始)熔化。由TGA确定的水含量为2.10/。(士0.2o/。)。GVS测定在80。/oRH(土0.2o/o)时得出3.0%的重量增加(。/。w/w)。结晶形式3的XRPD语表示在图4中。毒蕈碱性受体拮抗剂8(MA8):半-^~1.5-二磺酸2-"10-环己基-羟基-苯基-曱基)-。恶唑-5-基曱基l-二甲基-(2-苯乙基氧基-乙基)-铵40根据用于制备MA7的方法制备，但是使用溴化[2-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基)-碌、唑-5-基曱基]-二曱基-(2-苯乙基氧基-乙基)-铵(MA3)代替溴化[2-((R)-环己基-羟基-苯基-甲基)-。恶唑-5-基曱基]-二曱基-(3-苯氧基-丙基)-铵。收率98%。LC-MS(方法1):Rt8.64分钟，m/z463[M"]。'HNMR(CD3OD):S1.05-1.39(m,12H),1.53(m,2H)，1.68(m,4H)，1.77(m,2H)，2.39(m，2H)，2.85(s，12H),2.87(t，4H),3.36(m,4H),3.72(t,4H),3.76(m，4H)，4.46(s，4H)，7.11(m,2H),7.20(m,8H)，7.22-7.27(m，2H),7,33(t,6H),7.54(m，6H)，8.20(dd，2H),9.02(d，2H)ppm。从回流的乙腈中结晶，然后使其緩慢冷却至室温，得到产物，其为微细的针状物。熔点215-216(10。C/分钟)。喜蕈碱性受体拮抗剂9fMA9):半-^~1.5-二磺酸『2-(0^-环己基-羟基-苯基-曱基)-碌、唑-5-基甲基卜〖3"3,4-二氯-苯IL&)-丙基卜二曱基-铵根据用于制备MA7的方法制备，但是使用渙化[2-((R)-环己基-羟基-苯基-甲基)-噁唑-5-基曱基]-[3-(3，4-二氯-苯氧基)-丙基]-二曱基-铵(MA4)代替溴化[2-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-二曱基-(3-苯氧基-丙基)-铵。收率56%。LC-MS(方法1):Rt9.13分钟，m/z517[M^。，HNMR(CD3OD):51.05-1.37(m,12H)，1.56-1.75(m，8H),2.23(m,4H),2.40(m,2H),3.03(s，6H),3.04(s，6H)，3.34(m，4H),3.96(m,4H)，4.68(s，4H)，6.85(dd，2H)，7.09(d,2H)，7.21(m，2H)，7.30(t，4H)，7.42(d，2H),7.52(m，8H):8.20(dd,2H)，9.02(dd,2H)ppm。从热的MeOH中结晶。熔点225-227°C(1。C/分钟)。毒蕈碱性受体拮抗剂10(MA10):半-萘-l,5-二磺酸2-(fR)-环己基-羟基-苯基-甲基)-碌唑-5-基甲基1-『2-(3,4-二氯-爷基猛)-乙基l-二曱基-铵根据用于制备MA7的方法制备，但是使用溴化[2-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基)-。恶唑-5-基曱基]-[2-(3，4-二氯-苄基氧基)-乙基]-二曱基-铵(MA5)代替溴化[2-((R)-环己基-羟基-苯基-甲基)-碌、唑-5-基曱基]-二曱基-(3-苯氧基-丙基)-铵。收率76%。LC-MS(方法1):Rt9.06分钟，m/z517[ivr]。'HNMR(CD30D):51.05-1.37(m,12H),1.54(m,2H)，1.63-1.76(m，6H),2.38(m，2H)，3.03(s,12H),3.47(m,4H),3.86(m,4H),4.51(s,4H)，4.71(s,4H),7.22-7.33(m,8H)，7.46(s,2H),7.52(m,10H),8.20(dd,2H),9.02(d,2H)ppm。喜蕈碱性受体拮抗剂11(MA11):半-萘-l,5-二磺酸C-"-氯-苄基氧基)-乙基W2-"R)-环己基-羟基-苯基-甲基)-魂唑-5-基甲基l-二甲基-铵制备mMAll可根据用于制备MA7的方法制备，但是使用溴化[2-(4-氯-千基氧基)-乙基]-[2-((R)-环己基-羟基-苯基-甲基)-。恶唑-5-基曱基]-二甲基-铵(MA6)代替溴化[2-((R)-环己基-羟基-苯基-甲基)-。恶唑-5-基曱基]-二曱基-(3-苯氧基-丙基)-铵。示例性制备描述于下文中。将溴化[2-(4-氯-苄基氧基)-乙基]-[2-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-二曱基-铵(0.20g,0.36mmol)、萘-1，5-二磺酸二钠盐(0.059g,0.18mmol)、DCM(2.8mL)和水(2.8mL)的混合物在室温剧烈搅拌过夜。加入正庚烷(1.0mL),然后将混合物剧烈搅拌。一旦静置获得两层澄清的层和黄色油状物。加入DCM(1.0mL)(使油溶剂)，然后将混合物在室温搅拌过夜，得到白色固体的沉淀。经过滤收集固体，用DCM/水混合物洗涤，然后在50。C真空干燥。'HNMR显示对应于半盐(比例为2:1的阳离子/阴离子)的光语。LC-MS(方法1):Rt8.62分钟，m/z483pyT]。画R(CD3OD):51.04-1.37(m，12H),1.53(m,2H)，1.64-1.76(m,6H)，2.38(m,2H)，3,03(s，12H),3.46(m，4H),3.85(m，4H)，4.52(s，4H)，4.70(s,4H)，7.24(m,2H)，7.34(m，12H),7.43(s，2H),7,52(m,6H)，8.20(d，2H)，9.02(d,2H)ppm。半-萘-1,5-二磺酸2-(4-氯-苄基氧基)-乙基142"(R)-环己基-羟基-苯基-甲基)-噁唑-5-基甲基l-二甲基-铵的"盐形式A"在室温将半-萘-l，5-二磺酸[2-(4-氯-卡基氧基)-乙基]-[2-((R)-环己基-羟基—苯基-曱基)-碌、唑-5-基曱基]-二曱基-铵(如上文所述制备)(107mg,0.17mmol)溶于最小量的MeCN(乙腈)中。将溶液加热，然后使其再次冷却至室温。滤出得到的结晶固体并真空干燥。收率83mg，78%。由这种途径制备的产物通过XRPD进行分析，鉴定产物为"盐形式A"。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage43</formula>制备『21制备「21的一般实验条件除非另有说明，所有反应都在惰性气体气氛下进行。NMR光语在BmkerAVANCE400光语仪上获得频率400MHz;2-通道；z-梯度。温度范围0-120。C。HPLC条件PhenomenexLunaC18(2)柱(50x4.6mm),3pm粒度。在210nm进行UV检测。用A:水+0.05%三氟乙酸；B:乙腈+0.05%三氟乙酸洗脱。梯度为梯度时间流速mL/min%Ao/oB0,001.090108.001,010909.001.010909.501.0卯1012.001.09010LC-MS方法LC-方法在上文给出。MS:HP-1100MSD。检测-API-ES，正模式。制备「21将(R)-环己基-(5-二甲基氨基曱基鳴唑-2-基)-苯基-曱醇(1当量)和1-(2-溴-乙氧基甲基)-4-氯-苯(2当量)于2-丙醇(5体积)中的混合物在52。C加热64h。HPLC显示转化了98%。将反应混合物蒸发至干，得到溴化[2-(4-氯-节基氧基)-乙基]-[2-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基)-碌-唑-5-基曱基]-二曱基-铵。将溴化[2-(4-氯-苄基氧基)-乙基]-[2-((尺)-环己基-羟基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-二曱基-铵的粗样品溶于二氯曱烷(4.98体积)中，然后在室温历时10分钟的一段时间加入I,5-萘二磺酸二钠盐(1当量)于水(10体积)中的溶液。将混合物用二氯曱烷(4.98体积)稀释，然后在室温搅拌1小时。关闭搅拌器，使乳液沉降，然后进行分离。在室温历时72分钟的一段时间向有机层中加入叔丁基曱基醚(tBME)(10体积)和2-丙醇(1.6体积)的混合物。将得到的混悬液过滤，滤饼用tBME(2.15体积)沖洗。干燥(在旋转蒸发仪上在40-50°C的浴温度在5-10毫巴干燥)，得到半-萘-l，5-二磺酸[2-(4-氯-苄基氧基)-乙基]-[2-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-二甲基-铵。使用130g(R)-环己基-(5-二曱基氨基曱基噁唑-2-基)-苯基-曱醇由该制备方法获得的收率为216g,83%。111>^显示对应于半盐(比例为2:1的阳离子/阴离子)的光谱。转化为"盐形式A"通过以下方式实现将如上所述制备的粗制的一批半-萘-l,5-二磺酸[2-(4-氯-苄基氧基)-乙基H2-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-二曱基-铵悬浮于乙腈(13.8体积)中。将混悬液加热至回流并回流搅拌l小时。然后将混悬液冷却至70°C，并在此温度搅拌过夜。将混悬液冷却至室温，过滤固体，然后用乙腈(1.4体积)洗涤并干燥(在旋转蒸发仪上在40-50。C的浴温度在5-10毫巴干燥)，得到"盐形式A"。使用216g粗制的半-萘-1，5-二磺酸[2-(4-氯-苄基氧基)-乙基]-[2-((11)-环己基-羟基-笨基-曱基)-噁唑-5-基曱基]-二曱基-铵作为原料由该转化获得的收率为203.5g,94%。制备m制备[3]的一般实验条件与制备[2]的相同。使(R)-环己基-(5-二曱基氨基曱基。恶唑-2-基)-苯基-曱醇(1当量)和1-(2-溴-乙氧基曱基)-4-氯-苯(2当量)于2-丙醇(5体积)中的混合物接受以下温度程序历时1小时加热至70。C(内部温度)，在70。C搅拌26小时，然后历时30分钟冷却至20°C。由HPLC枱r验转化。将反应混合物蒸发至干(在旋转蒸发仪上在40-50°C的浴温度在10-15毫巴干燥)，残余物溶于二氯曱烷(8.9体积)中。历时至少10分钟向溶液中加入1,5-萘二磺酸二钠盐(1当量)于水(17.7体积)中的溶液。得到的混合物用二氯曱烷(8.9体积)稀释，然后在室温继续搅拌1小时。关闭搅拌器，使乳液沉降，然后进行分离。在室温历时60分钟的一段时间向有机层中加入叔丁基曱基醚(tBME)(17.7体积)和2-丙醇(2.86体积)的混合物。将形成的混悬液在室温搅拌10至60分钟，然后过滤。滤饼用tBME(2x3.46体积)洗涤并干燥(在旋转蒸发仪上在40-50°C的浴温度在5-10毫巴干燥)，直到获得的干燥失重(L0D)S2w/w%。将该物质悬浮于22.9体积乙腈中，然后使混悬液接受以下的溫度程序历时至少30分钟的一段时间加热至回流。回流搅拌60至70分钟，然后冷却至70。C(内部温度)并在70。C搅拌16至24小时，最后历时1小时冷却至20。C。将混悬液过滤，滤饼用乙腈(4.61体积)洗涤。将该物质干燥(在旋转蒸发仪上在40-50°C的浴温度在5-10毫巴干燥)，直到获得的LOD<145w/w%。使用25.0g(R)-环己基-(5-二曱基氨基甲基噁唑-2-基)-苯基-曱醇由该制备方法获得的收率为38.7g，78%。使用129.9g(R)-环己基-(5-二曱基氨基曱基噁唑-2-基)-苯基-甲醇由该制备方法获得的收率为203.6g，79%。HPLC和NMR显示对应于半盐(比例为2:1的阳离子/阴离子)的光谱。半-萘-l，5-二磺酸[2-(4-氯-苄基氣基V乙基W2-(TR)-环己基-羟基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基l-二曱基-铵的MA11盐形式A的固态分析由DSC确定的形式A的熔化温度测定为233°C(起始)(士3。C)。在由TGA熔化之前所观测的重量损失非常低(0.0。/。-0.5。/。)。GVS测定在80%RH(±0.3%)时得出0.5。/o的重量增力口(。/ow/w)。"MA11盐形式A"的XRPD谦表示在图5中。将"盐形式A，，在50mm气流粉碎机(jetmill)中以5巴的喷射压力和1.5-2巴的粉〃碎压力进行微粒化，得到90%的收率。由配有干粉给料机(drypowderfeeder)Malvern激光衍射确定的孩t粒化物质的粒度为d(O,l)0，77pm:d(0,5),1，45h:d(0，9):2,65nm。对微粒化的"盐形式A"的解聚集性质进行的调查研究评价显示了在横跨一定范围的相对湿度(0-75。/。RH)时优良的细颗粒部分(FineParticleFraction)(FPF>60%)。喜菜碱性受体拮抗剂的生物活性毒蕈碱性受体拮抗剂化合物的抑制性作用由毒蕈碱性受体放射配体结合测定来确定。放射配体结合研究利用了卩H]-N-曱基东莨菪碱tfH]-NMS)和表达人毒蕈碱性受体(M2或M3)的市售细胞膜，该研究用于评价毒蕈碱性受体拮抗剂对M2和M3受体的亲和力。将于TRIS緩沖液中的膜在96孔板中卩H]-NMS和用各种浓度的M3拮抗剂孵育3小时。然后经过滤收集膜和已结合的放射配体，并使其千燥过夜。然后加入闪烁液，4吏用CanberraPackardTopcount闪烁计数器对已结合的放射配体进行计数。每种毒蕈碱性受体拮抗剂的半衰期使用供选的放射配体[3司-QNB和上述亲和力测定的适应性方法进行测量。将拮抗剂以高于其KiIO倍的浓度(用[3H]-QNB配体确定)与表达人毒蕈碱性受体的膜一起孵育3小时。在孵育时间后期，将卩H]-QNB加至高于所研究的受体的Kd25倍的浓度，然后继续孵育不同的时间段，从15分钟至多180分钟。然后经过滤收集膜和已结合的放射配体，并使其干燥过夜。然后加入闪烁液，使用CanberraPackardTopcount闪烁计数器对已结合的放射配体进行计数。所检测的卩H]-QNB与毒蕈碱性受体结合的速率与拮抗剂与受体解离的速率相关，即与拮抗剂在受体上的半衰期相关。在受体结合测定中测试了以下化合物毒覃碱性受体拮抗剂M3结合Ki，nMMA19.4MA20.2MA30.6MA40.9MA52.1MA60.6l肾上腺素受体激动剂的制备可在本发明的组合中使用的以下P2肾上腺素受体激动剂可如下制备。制备^肾上腺素受体激动剂的一般实验细节在Varian/"ova400MHz或VarianMwcm^v-VX300MHz设备上记录NMR光谱。使用氯仿-d(sh7.27ppm)、二曱基亚砜-c^(5H2.50ppm)、乙腈-4(6H1.95ppm)或曱醇-力(SH3.31ppm)的中心峰作为内标。柱色谱使用硅胶(0.040-0.063mm,Merck)进行。除非另有说明，起始原料是市售的。所有溶剂和市售试剂都是实验室级别的并且原样使用。以下方法用于LC/MS分析设备Agilent1100;柱WatersSymmetry2.1x30mm;质量APCI;流速0.7ml/min;波长254nm;溶剂A:水+0.1。/。TFA;溶剂B:乙腈+0.1。/。TFA;梯度15-95%/B8分钟，95%B1分钟。分析性色谱在粒度为3.5)im的Symmetryds-柱2.1x30mm上运行，乙腈/水/0.1%三氟乙酸作为流动相，历时8分钟梯度从5%至95%乙腈，流速为0.7ml/min。在实施例中使用的缩写和术语具有以下含义SCX:带有磺酸吸附剂的固相萃取HPLC:高效液相色镨DMF:A/",;V-二甲基曱酰胺p2肾上腺素受体激动剂和在其制备中使用的中间体在本申请中基于所描述的结构，使用IUPACNAME,ACDLabs8版本命名软件包命名。B^肾上腺素受体激动剂1:(BA1〗制备17V-f2-f二乙基氨基〗乙基l-7V"2-H2-"-羟基-2-氧代-2,3-二氢-1.3-苯并噻哇-7-基)乙基1氨基}乙基V3-『2-(萘-l-基)乙氧基l丙酰胺二氢溴酸盐a)3-[2-(萘-l-基)乙氧基]丙酸叔丁酯将萘_1_乙醇(IOg)用千基三曱基氢氧化铵(TritonB;0.9mL40%的曱醇溶液)处理，将得到的混合物真空搅拌30分钟。然后将混合物冷却至0°C,然后用丙烯酸叔丁酯(8.19g)处理。将得到的混合物緩慢温热至室温并搅拌过夜。随后将粗混合物吸附到氧化铝(30g)上，然后用乙醚(200mL)洗脱。将有机物浓缩，得到粗物质(16.6g),将其经快速硅胶色谱(用1:8乙醚:己烷洗脱)纯化，得到副标题化合物(12.83g)。HNMR(CDC13)S8.05(dd，1H),7.84(dd，1H)，7.72(dd,1H)，7.54-7.34(m，4H),3.81-3.69(m,4H)，3.35(t，2H),2.52-2.47(m,2H)，1.45(s，9H)。b)3-[2-(萘-l-基)乙氧基I丙酸将3-P-(萘-l-基)乙氧基]丙酸叔丁酯(6.19g)吸收在二氯曱烷(30mL)中，然后用三氟乙酸(5mL)处理。将得到的溶液在室温搅拌2小时，加入额外的1mL三氟乙酸，然后将溶液搅拌过夜。将混合物浓缩，吸收在2M氢氧化钠溶液(30mL)中，然后用乙醚(2x20mL)洗涤。随后将水层酸化(使用1M盐酸)，然后用乙醚萃取(2x30mL)。合并的有机物用盐水(20mL)洗涤，经无水硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩，得到副标题化合物(5.66g),其为澄清油状物。NMR(CDC13)58.05(bs,1H)，7.85(bs，1H),7.74(bs，1H),7.50-7.38(m:4H),3.84-3.75(bm,4H),3.39(bs，2H)，2.65(bs，2H)。c)7V-(2-二乙基^J^乙基)-7V-(2-羟基乙基)-3-2-dl-基)乙氧基丙酰胺将草酰氯(0.33g)滴加到3-[2-(萘-l-基)乙氧基]丙酸(0.53g)于二氯曱烷(10mL)中的溶液中，加入二甲基曱酰胺(1滴)，然后继续在室温搅拌l小时。随后将混合物浓缩，再溶于二氯曱烷(10mL)中，然后滴加2-(2-二乙基氨基乙基氨基)乙醇(0.35g)和二异丙基乙胺(0.56g)于二氯曱烷(10mL)中的溶液。将得到的混合物在室温搅拌1小时，稀释(二氯甲烷,50mL),用水(2x20mL)、盐水(20mL)洗涤，经硫酸镁干燥并浓缩，得到粗产物(0.91g),将其经快速柱色谱(用5-7%曱醇/二氯甲烷洗脱)纯化，得到0.63g副标题化合物。'HNMR(CDC13)58.05(d,1H),7.85(d，1H),7.73(d,1H)，7.52-7.47(m,2H),7.42-7.35(m，2H)，3.84-3.78(m,6H)，3.72-3.70(m，1/2H),3.45-3.35(m,6H)，2.79-2.77(m,l+l/2H),2.62-2.58(m,2H),2.54-2.49(m,4H),1.04-1.01(m，6H)。d)iV-[2-(二乙基氨基)乙基-7V-(2-([2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢-l，3-苯并噢唑-7-基)乙基氨基}乙基)-3-[2-(萘-l-基)乙M]丙酰胺在-78。C将二曱基亚砜(0.097g)于二氯曱烷(lmL)中的溶液加到草酰氯(0.079g)于二氯曱烷(10mL)中的溶液中。将反应混合物搅拌15分钟，然后加入AM7-二乙基氨基乙基)-A"-P-羟基乙基)-3-[^(萘-l-基)乙氧基]丙酰胺(0.22g)于二氯甲烷(lmL+lmL洗涤物)中的溶液，将反应混合物再搅拌15分钟。加入三乙胺(0.29g),然后历时1小时^f吏反应混合物温热至室温，随后将混合物稀释(二氯曱烷30mL)，将有机物用碳酸氢钠、盐水(20mL)洗涤，经无水硫酸镁干燥、过滤并真空浓缩，得到副标题化合物(0.21g)。将粗产物溶于曱醇(10mL)中，然后加入7-(2-氨基乙基)-4-羟基-l，3-苯并p塞唑-2(3H)-酮盐酸盐(才艮据OrganicProcessResearch&Development2004，8(4)，628-642中概述的操作制备；0.131g)以及乙酸(0.1mL)和水(O.lmL)。在室温搅拌30分钟后，加入氰基硼氢化钠(0.020g),然后将反应混合物搅拌过夜。加入氨(7N的曱醇溶液，lmL),然后将混合物浓缩。粗残余物经快速柱色谱(用1%氨；5%-7%曱醇/二氯曱烷洗脱)纯化。粗产物直接用于下一步。e)AL[2-(二乙基氨基)乙基l-AK2-U2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢-l，3-苯并噻唑-7-基)乙基1氨基}乙基)J-2-dl-基)乙氧基丙酰胺二氢溴酸盐49将iV-[2-(二乙基氨基)乙基]-iV-(2-([2-(4-羟基-2-氧代-2,3-二氢-l，3-苯并噻唑-7-基)乙基]氨基}乙基)_3-[2-(萘-1-基)乙氧基]丙酰胺(0.052g)溶于乙醇(1.5mL)中，然后用48%氢溴酸(21W)处理。经过滤收集白色固体二氢溴酸盐(0.058g)。MS:APCI(+ve)579(M+l)'H丽RS(DMSO)11.78-11.71(m，1H),10.11-10.06(m，1H),9.51-9.43(m，0.33H)，9.21-9.13(m,0.66H)，8.75-8.66(m，1H)，8.59-8.51(m,1H),8.06(d，1H),7.95-7.90(m,1H),7.79(d，1H)，7.60-7.48(m,2H)，7.47-7.39(m,2H)，6.87(t，1H),6.76(dd,1H),3.78-3.53(m,10H),3.25-3.09(m，IOH)，2.91-2.80(m,2H)，2.73-2.61(m,2H)，1.26-1.15(m，6H)。NMR指示在298K时约2:1的旋转异构体混合物。B^肾上腺素受体激动剂1:(BA1、制备2iV-〖2-f二乙基氨基)乙基l-7V-(22-(4-羟基-2-氧代-2,3-二氢-l,3-苯并噻唑-7-基)乙基1氨基}乙基)-342-f萘小基)乙氧基l丙酰胺二氢溴酸盐在10-15。C将N，N-二乙基乙二胺(150g)于曱醇(500mL)中的溶液用乙二醛二曱基缩醛(60wt。/。的水溶液，225g)快速逐滴处理。加入结束后将溶液温热至15°C，然后温热至22。C，并在此温度静置16小时。反应混合物用5。/。钯/碳(Johnson-Matthey类型38H糊剂，15g)处理，然后在6巴氢化，直到经GC/MS判断反应结束。经过滤除去催化剂，将滤液蒸发至干(曱苯共沸，2.5L)，得到196.2g副标题化合物。NMR(CDC13):4.48(t，1H)，3.39(s，6H),2.75(d，2H),2.69(t，2H)，2.57-2.48(m,6H),1.01(ts,6H)。b)7V-[2-(二乙基氨基)乙基I-7V-(2，2-二曱氧基乙基)-3-2-dl-基)乙氧基丙酰胺a)7V-(2，2-二曱lL基乙基)-AyV-二乙基-乙-l，2-二胺<formula>formulaseeoriginaldocumentpage51</formula>历时45分钟将草酰氯(151mL)滴加到3-[2-(萘-1-基)乙氧基]丙酸。89g)(实施例7步骤b))于二氯曱烷(2.1L)和DMF(0.5mL)中的溶液中。将反应混合物再搅拌16小时。随后将混合物浓缩，再溶于DCM(二氯曱烷)(1.7L)中，然后历时1.75小时在0°C滴加到iV-(2,2-二曱氧基乙基)-AgV-二乙基乙-1,2-二胺(325g)和异丙基二乙胺(551mL)于DCM(1.7L)中的溶液中。将得到的混合物在室温搅拌3小时，用饱和碳酸氢钠水溶液(5xlL)、水(1.5L)洗涤，然后经硫酸钠干燥并浓缩，得到650g副标题化合物。m/e431(M+tf，100%)。c)7V-P-(二乙基氨基)乙基-3-2-(萘-1-基)乙氧基-AT-p-氧代乙基)丙酰胺.在0。C历时1.5小时将Aq2-(二乙基氨基)乙基]-AK2,2-二曱氧基乙基)_3_[2_(萘_1_基)乙氧基]丙酰胺(Wg)于DCM(270mL)中的溶液用三氟乙酸(270mL)逐滴处理。加入后^f吏反应混合物温热至室温，然后再搅拌1小时。将反应混合物浓缩，残余物倒入饱和碳酸氢钠水溶液(1800mL，小心倒入)中。将含水混合物用DCM(4x400mL)萃取，合并的萃取物用硫酸镁干燥并浓缩。残余物直接用于随后的反应。d)iV-2-(二乙基氨基)乙基l-AK2-([2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢-l，3-苯并蓉唑-7-基)乙基氨基}乙基)-3-[2-(萘-l-基)乙氧基丙酰胺二氢溴酸盐将7-(2-氨基-乙基)-4-羟基-3H-苯并噻唑-2-酮盐酸盐(53g)于无水NMP(N-曱基吡啶)(216mL)中的混悬液加热至60。C,然后用NaOH(8.2g)于曱醇(102mL)中的溶液一次性处理。将明亮的橙色混悬液冷却至室温，然后历时20分钟用从[2-(二乙基氨基)乙基]-3_[2-(萘-1-基)乙氧基]-^-(2-氧代乙基)丙酰胺于二氯曱烷(475mL)中的溶液逐滴处理。将反应混合物搅拌25分钟。然后历时20分钟分批加入三乙酰氧基硼氢化钠(91.5g)，将混合物再搅拌50分钟。将反应混合物倒入水(1.8L)中，然后将酸性溶液(pH5)用叔丁基曱基醚(TBME)(3x500mL)处理。通过加入固体碳酸钾将水相碱化至pH8，然后用二氯曱烷(3x750mL)萃取；合并的有机萃取物用硫酸镁干燥并浓缩，得到深色油状物。将其溶于乙醇(200mL)中，然后加入48%氢溴酸水溶液(73mL)。将溶液老化30分钟，然后蒸发至干。将残余物用乙醇(560mL)研磨；经过滤收集得到的固体，然后在50。C真空干燥。将粘稠的固体悬浮于沸腾的乙醇(100mL)中，然后趁热过滤。将收集的固体在50。C真空干燥。将该物质从乙醇/水(3:l，500mL)重结晶。静置过夜后，经过滤收集得到的固体，然后用冰冷的乙醇(75mL)洗涤。在50。C真空干燥24小时，得到57g标题化合物。B^肾上腺素受体激动剂2:fBA2):AM2-f二乙基氨基)乙基l-JV-(2-H2-f4-羟基-2-氧代-2,3-二氢-l,3-苯并噻唑-7-基)乙基lM)乙基)-3J2-f3-氯苯基)乙氧基l丙酰胺二氢溴酸盐a)3-2-(3-氯苯基)乙氧基l丙酸叔丁酯将2-(3-氯苯基)乙醇(20g)用苄基三甲基氢氧化铵(TritonB)(2.67mL)处理，将得到的混合物真空搅拌30分钟。然后将混合物冷却至0。C,然后用丙烯酸叔丁酯(17.40g)处理。将得到的混合物温热至室温并搅拌16小时。随后将混合物吸附到氧化铝(15g)上，用乙醚(75mL)洗脱。将收集的滤液浓缩，得到副标题化合物(34.40g),其为油状物。画R(CDC13)^7.26-7.07(m,4H)，3.69-3.59(m，4H)，2.86-2.81(t,2H):2.50-2.45(t,2H),1.43(s，9H)。b)3-[2-(3-氯苯基)乙氧基l丙酸将3-[2-(3-氯苯基)乙氧基]丙酸叔丁酯(实施例la)，3《々0g)溶于二氯曱烷(150mL)中，然后用三氟乙酸(50mL)处理。将混合物在室温搅拌3小时，然后真空浓缩并与二氯曱烷(2x10mL)共沸。残余物吸收在二氯甲烷(300mL)中，然后用饱和碳酸氬钠(200mL)萃取。碱层用二氯曱烷洗涤(20mL),然后用2M盐酸酸化。酸层用二氯曱烷(2x200mL)萃取。合并有机层，用盐水洗涤，经无水硫酸镁干燥，过滤并浓缩，得到副标题化合物(24.50g)，其为油;)犬物。m/e227[M-H]。c)iV-[2-(二乙基氨基)乙基l-iV-(2，2-二甲氧基乙基)-3-[2-(3-氯苯基)乙氧基丙酰胺<formula>formulaseeoriginaldocumentpage53</formula>历时45分钟将草酰氯(9.50mL)滴加到3-[2-(3-氯苯基)乙氧基]丙酸(22.50g)(实施例lb)于二氯曱烷(120ml)和DMF(0.5mL)中的溶液中。将反应混合物再搅拌16小时。随后将混合物浓缩，再溶于DCM(1.7L)中，然后在0。C历时1.75小时滴加到A^(2，2-二曱氧基乙基)-A^V-二乙胺-l，2-二胺(20.20g)(实施例16a)和异丙基二乙胺(34.43mL)于DCM(200mL)中的溶液中。将得到的混合物在室温搅拌16小时，用饱和碳酸氢钠水溶液(3xlL)、水(1.5L)洗涤，然后经硫酸镁干燥并浓缩，得到39.50g副标题化合物。m/e415(M+H",83%)。d)7V-2-(二乙基氨基)乙基l-3-[2-(3-氯苯基)乙氧基卜7V-(2-氧代乙基)丙酰胺<formula>formulaseeoriginaldocumentpage53</formula>在0°C历时30分钟将A42-(二乙基氨基)乙基]-AH2，2-二甲氧基乙基)-3-[2-(3-氯苯基)乙氧基]丙酰胺(实施例lc)(20g)于DCM(500mL)中的溶液中用三氟乙酸(50mL)逐滴处理。加入后使反应混合物温热至室温，然后再搅拌1小时。将反应混合物浓缩，残余物倒入饱和碳酸氢钠水溶液(1800mL，小心倒入)中。将含水混合物用DCM(3x400mL)萃取，合并的萃取物经硫酸镁干燥并浓缩。残余物直接用于随后的反应。e)iV-2-(二乙基氨基)乙基-7V-(2-U2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢-l，3-苯并瘗哇-7-基)乙基絲}乙基)-3-l2-(3-氯苯基)乙緣丙酰胺二氢溴酸盐将7-(2-氨基-乙基)-4-羟基-3H-苯并噻唑-2-酮盐酸盐(11.77g)于无水NMP(N-曱基吡啶(50mL)中的混悬液加热至65°C，然后用NaOH(1.83g)于曱醇(23mL)中的溶液一次性处理。将明亮的橙色混悬液冷却至室温，然后历时30分钟用iV-卩-(二乙基氨基)乙基]-3-[2-(3-氯苯基)乙氧基]-丛(2-氧代乙基)丙酰胺(实施例ld)于二氯曱烷(50mL)中的溶液逐滴处理。将反应混合物搅拌30分钟。然后历时20分钟分批加入三乙酰氧基硼氢化钠(20.33g),将混合物再搅拌16小时。将反应混合物倒入水(1.8L)中，通过加入固体碳酸钾碱化至pH8，然后用二氯甲烷(2x500mL)萃取；合并的有机萃取物用硫酸镁干燥并浓缩，得到深色油状物。残余物经硅胶色谱纯化(用10。/。(0.1。/。aqNH3/MeOH)/DCM作为洗脱剂)，得到副标题化合物，其为棕色油状物。收率(6.58g)。将其溶于乙醇(150mL)中，然后加入48%氢溴酸水溶液(10mL)。将溶液老化30分钟，然后蒸发至干。将残余物用乙醇(100mL)研磨；经过滤收集得到的固体，然后在50°C真空干燥。将该物质从乙醇/水(6:1,500mL)重结晶;'静置过夜后，经过滤收集得到的固体，然后用水冷的乙醇(75mL)洗涤。在50°C真空干燥24小时，得到4.96g标题化合物。MS:APCI(+ve):563(M+l)99.3%purity(T9505M)。1HNMR(DMSO,90oC),511.75-11.73(m,1H),10.08-10.06(d,1H)，8.65(bs,1H),7.33-7.19(m,4H),6.89-6.84(t,1H),6.77-6.74(m，1H),3.68-3.58(m，8H)，3.17-3.16(m，10H),2.86-2.80(m，4H),2.67-2.62(m，2H),1.23-1.19(t，6H).元素分析CHNSC:46.54%(46.39);H:5.75%(5,70);N:7.94%(7.73);S:4.46%(4.42)。B^肾上腺素受体激动剂3:fBA3):7-『a/)-2-G2-K3"2"2-氯苯基)乙基1氨基！丙基)硫基l乙基)氨基)-l-羟基乙基卜4-羟基-l,3-苯并噻唑-2a^)-酮二氢溴酸盐将2-氯苯曱醛(exAldrich)(10.0g)与硝基曱烷(26.05g)和乙酸铵(21.92g)在乙酸(200mL)中混合，然后将混合物回流加热40分钟。使混合物冷却至室温，真空除去大部分乙酸。残余物溶于二氯曱烷中，先后用水、碳酸钾溶液(x2)和水洗涤。有机物经无水硫酸镁干燥，过滤并蒸发，得到期望的物质，其为橙色油状物(12.83g)。'H觀R5(CDC13)8.41(d,1H),7.62-7.57(m，2H),7.52-7.48(m,1H),7.43(dt，1H),7.34(ddd，1H)。b)2-(2-氯苯基)l^胺氢化铝如下制备在0-10。C在氮气气氛下将硫酸(8.40mL)于无水THF(60mL)中的溶液滴加到搅拌的l.OM氬化铝锂于THF(314mL)中的溶液中。在5。C搅拌30分钟后，滴加1-氯-2-[(￡)-2-硝基乙烯基]苯(12,83g)于无水THF(160mL)中的溶液中，同时维持内部温度在0°C和10°C之间。当加入结束时将反应混合物回流加热5分钟。使混合物冷却至室温，然后冷却至0°C，小心滴加异丙醇(22mL),同时维持温度低于20。C。小心滴加2M氢氧化钠(35mL),同时维持温度低于20°C。混合物在室温搅拌30分钟，然后经过一层硅藻土过滤，然后将其用THF(x3)洗涤。滤液蒸发至干。残余物使用硅胶柱色谱(使用乙酸乙酯负载物质，然后先后用10%三乙胺/乙酸乙酯、10%三乙胺/45°/。乙醇45%乙酸乙酯作为洗脱剂)纯化，得到期望的物质(4.66g)。l-氯-2-(^)-2-硝基乙烯基苯'HNMRS(CDC13)7.36(dd,1H),7.25-7.13(m,3H),2.98(dt,2H):2.91-2.87(m,2H)c)[2-(2-氯苯基)乙基I氨基甲酸叔丁酯历时10分钟在环境温度在氮气气氛下向搅拌的2-(2-氯苯基)乙胺(25.57g)和三乙胺(22.87mL)于水THF(300mL)中的溶液中加入一缩二碳酸二叔丁酯(35.85g)于无水THF(50mL)中的溶液。将反应混合物在室温搅拌3小时。真空除去溶剂，得到期望的物质，其为黄色油状物(42.0g)。'HNMR5(CDCL3)7.35(d，1H)，7.25-7.14(m,3H),4.57(s，1H)，3.43-3.35(m,2H),2.95(t,2H)，1.43(d,9H)。d)烯丙基[2-(2-氯苯基)乙基l氨基曱酸叔丁酯厄时15分钟的一段时间在35°C在氮气气氛下向已经用乙醚洗涤(x3)悬液中加入[2-(2-氯苯基)乙基]氨基甲酸叔丁酯(42,0g)于无水DMF(50mL)中的溶液。当加入结束时，混合物在50。C搅拌90分钟。使混合物冷却至室温，然后缓慢加入烯丙基溴(15.63mL)，使用外部冷却保持温度在25。C。将混合物在室温搅拌2小时，然后用水稀释并用乙酸乙酯萃取(x3)。有机物合并，用水洗涤，经无水硫酸镁干燥，过滤并蒸发。残余物使用硅胶柱色谙(用1%乙酸乙酉旨/异己烷负载，然后使用含有乙酸乙酯(0%、1%、2%、％5)的异己烷作为洗脱剂)纯化，得到期望的物质(27.0g)。存在几种混合的级份，将这些级份合并，然后使用如上所述的硅胶柱色语再次纯化，又得到4g期望的物质。将两次收集的产物合并，共得到31.0g。'HNMRS(CDC13)7.36-7.31(m,1H),7.21-7.12(m，3H)，5.83-5.68(m,1H)，5.17-5.05(m，2H)，3.86-3.66(m，2H)，3.41(t,2H)，3.03-2.90(m,2H)，1.43(s，9H)。HPLC:95.90%@220nm[M+H陽Boc]十=196.1(计算值=295.1339)(多模的氢式+)。e)[2-(2-氯苯基)乙基{3-[(2-幾基乙基)硫基丙基}氨基甲酸叔丁酯将烯丙基[2-(2-氯苯基)乙基]氨基曱酸叔丁酯(31.0g)与2-巯基乙醇(7.37mL)和AIBN(偶氮二异丁腈)(U5g)混合，然后在65。C搅拌45分钟。将混合物冷却，然后加入更多的巯基乙醇(lmL)和AIBN(200mg)。然后将混合物在65。C再加热30分钟。该物质经硅胶柱色镨(将物质负载在20%乙酸乙S旨/异己烷中，然后先后用20%乙酸乙酯/异己烷和50%乙酸乙酯/异己烷洗脱)纯化，得到期望的物质(31.94g)。'HNMRS(CDC13)7.38-7.32(m,1H),7.22-7.13(m,3H)，3.75-3.68(m,2H),3.41(t,2H)，3.32-3.14(m，2H),3.03-2.91(m,2H),2.72(t,2H),2.54-2.36(m，2H),1.85-1.71(m，2H),1.42(s，9H)。HPLC:92.3l%@220nm[M+H-Boc]+=274.1(计算值=373.1478)(多模式+)。&2-(2-氯苯基)乙碁l(3-(2-氧代乙基)疏基l丙基}^甲酸叔丁酯将三氧化硫:吡咬复合物(30.52g)溶于DMSO(200mL)中，然后在室温在氮气气氛下搅拌15分钟。加入DCM(100mL),接着一次性加入[2-(2-氯苯基)乙基]{3-[(2-羟基乙基)硫基]丙基}氨基曱酸叔丁酯(23.9g)和许尼系碱(Hunigsbase)(63.5mL)于DCM(160mL)中的溶液(放热)。将得到的混合物在环境温度搅拌15分钟。反应混合物用乙酸乙酯稀释，先后用水、INHC1和饱和碳酸氪钠溶液洗涤，经无水疏酸镁干燥，过滤，真空除去溶剂。该物质经硅胶柱色语(用20%乙酸乙酯/异己烷洗脱)纯化，得到期望的物质(12.43g)。'HNMR5(CDC13)9-46(t,1H)，7.36-7.32(m，1H)，7.21漏7.13(m,3H)，3.40(t,2H)，3.29-3.13(m，4H)，3.02-2.90(m,2H),2.45-2.34(m,2H),1.82-1.69(m,2H)，1.49-1.36Cm,9H)。g)[2-(2-氯苯基)乙基{3-[(2-{[(2/)-2-羟基-2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢,3-苯并噻唑-7-基)乙基氨基}乙基)硫基I丙基}氨基曱酸叔丁酯将[2-(2-氯苯基)乙基]{3-[(2-氧代乙基)硫基]丙基}氨基曱酸叔丁酯(11.32g)溶于曱醇(200mL)和乙酸(1.74ml)的混合物中。将7-[(LR)-2-氨基-1-羟基乙基]-4-羟基-1,3-苯并噻唑-2(3/7)-酮盐酸盐(8.0g)加到溶液中，然后在室温在氮气气氛下将混合物搅拌l小时。加入氰基硼氢化钠(1.92g),然后将混合物再搅拌2小时。真空除去溶剂，残余物用水稀释，用0.880氨水碱化，用乙酸乙酯萃取(x3)(在萃取过程中通过硅藻土过滤)。合并有机物，用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并蒸发，得到棕色残余物(15.5g)。该物质使用硅胶柱色谱(使用含有MeOH(2。/。、5%、10%、20°/。和30%)并且都含有1。/。0.880aqNH3的DCM作为洗脱剂)纯化，得到期望的物质(6.67g)(38%收率)。'HNMRS(DMSO)7.43-7.38(m,1H)，7.30-7.21(m,3H),6.86(d,1H),6.69(d,1H)，4.56(dd，1H),3,23-3.10(m,2H),2.88(t,2H),2.71-2.48(m,8H)，2.46-2.39(m，2H),1.72-1.62(m,2H),1.40-1.22(m,9H)。HPLC:97.46%@220nm[M+H]+=582.1(计算值=582.1863)(多模式+)。h)7-(1及)-2-({2-[(3-{2-(2-氯苯基)乙基氨基}丙基)硫基乙基}氨基)-1画羟基乙基-4-羟基-l，3-苯并噻唑-2(3^)-酮二氢溴酸盐在0°C向搅拌的Boc化合物(来自g)部分)(5.93g)于DCM(20mL)中的混悬液中加入三氟乙酸(20mL)，将得到的混合物在氮气下搅拌30分钟。混合物用曱苯稀释，除去溶剂，然后与曱苯(x2)共沸。将残余物溶于乙腈中，用48%aqHBr酸化，并真空浓缩(并非浓缩至干)。混合物进一步用乙腈稀释，经过滤收集沉淀的固体，用乙腈洗涤并真空干燥，得到6.35g。存在3.8%的杂质(e)部分的异构体)，因此将该物质再溶于1:1乙腈:水混合物中，然后使用制备性HPLC(Sunfire30x80mmC8柱；NH4OAc緩冲液;历时10分钟乙腈5-50%)纯化。将得到的物质在水提取器中在10毫巴在KOH和H2SO4上干燥过夜。将得到的二乙酸盐溶于水中，然后用0.880氨水碱化。形成白色胶状物，因此将水层倾析出，胶状物真空干燥，得到游离碱(4.11g)。将其溶于热乙醇中，对溶液进行过滤，然后使其冷却至室温。将溶液用48%aq.HB酸化并静置结晶。经过滤收集白色固体，用乙醇洗涤并真空干燥，得到3.81g收集物l。'HNMR5(DMSO)11.67(s,1H)，10.15(s,1H),8.70(s,4H),7.50-7.30(m,4H),6.94(d，1H),6.78(d,1H),6.45(s，1H),4.96-4.90(m，1H)，3.22-3.02(m,10H)，2.86-2,76(m,2H),2.66(t,2H),1.91(五重峰，2H)。HPLC:99.63%@220nm[M+H]+=482(计算值=482.1339)(多模式+)元素分析CHNS计算值41,044.706.539.96观测值1:41.074.696.679.722:41.084.686.749.673:40.964.686.759.67将母液蒸发至干，然后用乙腈研磨。经过滤收集固体，得到719mg收集物2(共4.53g)。'HNMR5(DMSO)11.67(s，1H),10.15(s，1H)，8.80-8.60(m,4H),7.50-7.29(m,4H),6.94(d，1H),6.78(d，1H)，6.45(s,1H),4.96-4.89(m,1H),3.22-3.00(m,10H),2.85-2.76(m,2H)，2.66(t，2H),1.90(五重峰，2H)。HPLC:99.20%@220nm[M+H]+=482(计算值=482.1339)(多模式+)元素分析:CHNS计算值41.044.706.539.96观测值1::40.904.696.789.602:41.014.706.839.603:40.974.696.769.63^肾上腺素受体激动剂的生物活性肾上腺素能B2介导的cAMP产生细胞制备将H292细胞在孵育器中的225cn^烧瓶中在37°C，5%<:02在RPMI培养基中培养，所述培养基含有10%(v/v)FBS(胎牛血清)和2mML-谷氨酰胺。实验方法通过用AccutaseTM细胞脱离溶液处理15分钟从组织培养瓶中除去粘附的H292细胞。将烧瓶在加湿孵育器中在37。C，5。/。C02孵育15分钟。将脱离的细胞以0.05x1(^细胞/mL再悬浮于RPMI培养基(含有10%(v/v)FBS和2mML-谷氨酰胺)中。将100中的5000个细胞加到组织培养物处理的96孔板的每孔中，然后将细胞在加湿孵育器中在37。C,5%C02將育过夜。除去培养基，将细胞用100^iL测定緩沖液洗涤，并用50piL测定緩沖液(含有10mMHEPESpH7.4和5mM葡萄糖的HBSS溶液)代替。将细胞在室温静置20分钟，之后加入25咯利普兰(1.2mM，在含有2.4%(v/v)二甲基亚砜的测定緩冲液中制成)。将细胞用咯利普兰孵育IO分钟，之后加入化合物A,然后将细胞在室温孵育60分钟。测定中最终咯利普兰的浓度为300pM且最终媒介物浓度为1.6。/。(v/v)二甲基亚砜。通过除去上清液停止反应，用100iliL测定緩冲液洗涤一次并用50溶解緩沖液(lysisbuffer)代替。将细胞单层在-80。C冷冻30分钟(或过夜)。AlphaScreencAMP检测使用AlphaScreen方法学确定细胞溶解产物中cAMP(环磷腺苷)的浓度。将经冷冻的细胞板在板摇动器上解冻20分钟，然后将10pL细胞溶解产物转移到96孔白色板中。将40pL用生物素化的cAMP预孵育的混合AlphaScreen检测珠加到每孔中，然后将板避光室温孵育10小时。AlphaScreen信号使用EnVision分光光度计(Perkin-ElmerInc.)测量，使用推荐的制造商设置。cAMP浓度如下确定使用标准cAMP浓度参考在相同实验中确定的校准曲线。构建针对化合物A的浓度响应曲线，将数据拟合成四参凄t凄t理逻辑方牙呈(fourparameterlogisticequation)以确定pECs。和固有活性。固有活性表达为相对于在每个实验中针对福莫特罗确定的最大活性60的分数。结果在表1中列出。选择性测定肾上腺素能alD膜制备从表达重组人类alo受体的人胚肾293(HEK293)细胞制备膜。将这些膜在测定緩冲液(50mMHEPES,lmMEDTA,0.1%凝胶，pH7.4)中稀释，从而提供在最大特异结合和最小特异结合之间得到清楚区域(clearwindow)的膜的最终浓度。实验方法测定在U形底96孔聚丙烯板中进行。将10卩H]-哌唑n秦(0.3nM最终浓度)和10化合物A(10x最终浓度)力。到每个测试孔中。针对每种测定板在10pL媒介物(10%(v/v)DMSO于测定緩冲液中的溶液；定义最大结合)或lOpLBMY7378(10pM最终浓度；定义非特异性结合(NSB))的存在下针对[3司-哌唑溱结合进行一式八份。然后加入膜以达到最终体积为100iaL。将板在室温孵育2小时，然后过滤到PEI涂覆的GF/B滤板上，在测定緩冲液中使用96孔板Tomtec细胞收集器预浸渍1小时。在4°C用250洗涤緩冲液(50mMHEPES,lmMEDTA，pH7.4)进行五次洗涤以除去非结合放射性。将板干燥，然后使用Packard板密封器从底下密封，将MicroScint-O(50pL)加到每孔中。将板密封(TopSealA)，然后用闪烁计数器(TopCount,PackardBioScience)使用3分钟计数方案测量与滤器结合的放射性。通过从平均最大结合中减去平均NSB确定总特异性结合(B。)。也从来自其它孔的值中减去NSB值。这些数据表达为Bo的百分数。使用通常在O.InM至lO(iM范围的连续稀释确定化合物浓度-效应曲线(对[3司-哌唑溱结合的抑制)。将数据拟合成四参数数理逻辑方程以确定化合物效能，其表达为pIC50(引起对卩H]-哌唑。秦结合的50%抑制的摩尔浓度的负对数)。结果显示于下表l中。肾上腺素能B1膜制备含有重组人类肾上腺素能P1受体的膜获自Euroscreen。将这些膜在测定緩冲液(50mMHEPES,lmMEDTA，120mMNaCl,0.1%凝胶，pH7.4)中稀释，从而提供在最大特异结合和最小特异结合之间得到清楚区域的膜的最终浓度。实验方法测定在U形底96孔聚丙烯板中进行。将10^[1251]-碘氰叼|咪洛尔(Iodocyanopindolol)(0.036nM最终浓度)和10化合物A(10x最终浓度)加到每个测试孔中。针对每种测定板在10pL媒介物(10。/。(v/v)DMSO于测定緩冲液中的溶液；定义最大结合)或10pL普萘洛尔(10pM最终浓度；定义非特异性结合(NSB))的存在下针对[^I]-碘氰吲哚洛尔结合进行一式八份。然后加入膜以达到最终体积为100^L。将板在室温孵育2小时，然后过滤到PEI涂覆的GF/B滤板上，在测定緩沖液中使用96孔板Tomtec细胞收集器预浸渍1小时。在4°C用250nL洗涤緩冲液(50mMHEPES，lmMEDTA，120mMNaCl，pH7.4)进行五次洗涤以除去非结合放射性。将板干燥，然后使用Packard板密封器从底下密封，将MicroScint-0(50(iL)加到每孔中。将板密封(TopSealA)，然后用闪烁计数器(TopCount,PackardBioScience)使用3分钟计数方案测量与滤器结合的放射性。通过从平均最大结合中减去平均NSB确定总特异性结合(Bo)。也从来自其它孔的值中减去NSB值。这些数据表达为Bo的百分数。使用通常在0.1nM至10pM范围的连续稀释确定化合物浓度-效应曲线(对[^I]-碘氰p引哚洛尔结合的抑制)。将数据拟合成四参数数理逻辑方程以确定化合物效能，其表达为pIC50(引起对[1251]-碘氰吲哚洛尔结合的50%抑制的摩尔浓度的负对数)。结果显示于下表1中。多巴胺D2膜制备含有重组人类多巴胺亚型D2受体的膜获自PerkinElmer。将这些膜在测定緩沖液(50mMHEPES,lmMEDTA,120mMNaCl，0.1%凝胶，pH7.4)中稀释，从而提供在最大特异结合和最小特异结合之间得到清楚区域的膜的最终浓度。实验方法测定在U形底96孔聚丙烯板中进行。将30^L^H]-螺派隆(0.16nM最终浓度)和30pL化合物A(10x最终浓度)加到每个测试孔中。针对每种测定板在30jiL媒介物(10%(v/v)DMSO于测定緩冲液中的溶液；定义最大结合)或30|iL氟哌啶醇(IOpM最终浓度；定义非特异性结合(NSB))的存在下针对[3H]-螺派隆结合进行一式八份。然后加入膜以达到最终体积为300pL。将板在室温孵育2小时，然后过滤到PEI涂覆的GF/B滤板上，在测定緩冲液中使用96孔板Tomtec细胞收集器预浸渍1小时。在4。C用250洗涤緩冲液(50mMHEPES，lmMEDTA，120mMNaCl，pH7.4)进行五次洗涤以除去非结合放射性。将板干燥，然后使用Packard板密封器从底下密封，将MicroScint-O(50(iL)力a到每孔中。将板密封(TopSealA)，然后用闪烁计数器(TopCount,PackardBioScience)使用3分钟计数方案测量与滤器结合的放射性。通过从平均最大结合中减去平均NSB确定总特异性结合(Bo)。也从来自其它孔的值中减去NSB值。这些数据表达为Bo的百分数。使用通常在0.1nM至10pM范围的连续稀释确定化合物浓度-效应曲线(对[3司-螺派隆结合的抑制)。将数据拟合成四参数数理逻辑方程以确定化合物效能，其表达为pIC50(引起对fH]-螺派隆结合的50%抑制的摩尔浓度的负对数)。结果显示于下表l中。化合物<table>tableseeoriginaldocumentpage63</column></row><table>体外组合数据对化合物对来自用乙酰甲胆碱预收缩的豚鼠的离体气管环的活性的评处加入P2肾上腺素受体激动剂和/或毒蕈碱M3受体拮抗剂引起用毒蕈碱激动剂乙酰曱胆碱预收缩的豚鼠的离体气管环的舒张。通过颈脱位法除气管。除去粘附的结^組织，然后将气管切成环片i(2-3mm宽)。、;这些片段悬浮于lOmL器官浴槽中，该浴槽中含有改良的克雷布斯液(modifiedKrebs，solution),组成为(mM):NaCl117.56、KCI5.36、NaH2P041.15、MgS041.18、葡萄糖11.10、NaHC0325.00和CaCl22.55。将其维持在37°C，然后用5。/。C02/02不断通气。将吲哚美辛(2.8pM)、皮质酮(10pM)、抗坏血酸(lmM)、CGP20712A(1(iM)和酚妥拉明(3pM)加到克雷布斯液中叼l咪美辛用于阻止由于环氧合酶产物合成导致的平滑肌紧张的发展，皮质酮用于抑制摄取2过程(uptake2process),抗坏血酸用于阻止儿茶酚胺氧化，CGP20712A和酚妥拉明分别用于避免卩l-和a-肾上腺素受体活化的任何合并作用。将气管环悬挂在两个不锈钢钩(stainlesssteelhook)之间，一个钩与等长力传感器连接，另一个钩与气管浴槽中的固定支撑物连接。记录等长力的变化。乙酰基-(3-甲基氯化胆碱(乙酰曱胆碱)、吲咮美辛、皮质酮-21-乙酸酯、酚妥拉明盐酸盐、抗坏血酸、CGP20712A曱磺酸酯获自SigmaChemicalCompany。将吲咪美辛溶于10%w/vNa2C03中，皮质酮21-乙酸酯溶于乙醇中，其它化合物溶于DMSO中。将毒蕈碱性受体拮抗剂(MA2)、(MA11)和福莫特罗稀释在克雷布斯液中，然后加到组织中，浴槽中DMSO的水平<0.1%。毒蕈碱性受体拮抗剂2(MA2):溴化f2-(m)-环己基-羟基-苯基-曱基V噁唑-5-基曱基l-二甲基-(l-苯氧基-丙基)-铵和福莫特罗在每个实验的开始，将1.0g重量的力施加到组织上，然后历时30分钟的平衡时间使其复原，直到其保持稳定。然后将组织暴露于l幽毒蕈碱激动剂乙酰曱胆碱中，以评价组织生存力。通过交换浴槽的克雷布斯液三次来洗涤组织。30分钟后，将组织再次用l(xM乙酰甲胆碱预收缩。当收缩达到平台时，将lnM福莫特罗、10nM毒蕈碱性受体拮抗剂(MA2)(结晶形式A)或两者的组合加到浴槽培养基中，然后静置60分钟。使用用于Windows软件的ADInstrumentsChart5收集数据，在加入乙酰曱胆碱前及其响应到达平台后测量所产生的张力。对化合物MA2和/或福莫特罗的响应在它们加入后以10分钟间隔测量。所有响应都表达为对乙酰甲胆碱诱发的收缩的抑制百分数。结果描述于图6和2中，其中化合物A为(MA2)。<table>tableseeoriginaldocumentpage64</column></row><table>表2.福莫特罗(lnM)、化合物A(10nM)和化合物A(10nM)(在福莫特罗(lnM)存在下)在体外豚鼠气管中对l|aM乙酰曱胆碱诱发的紧张的％抑制毒蕈碱性受体拮抗剂1UMA11):半-萘-1,5-二磺酸「2-(4-氯-苄基氧基)-乙基l-「2-((R)-环己基-羟基-苯基-曱基V。恶唑-5-基曱基l-二曱基-铵和福莫特罝在每个实验的开始，将1.0g重量的力施加到组织上，然后历时30分钟的平衡时间使其复原，直到其保持稳定。然后将组织暴露于lpM毒蕈碱激动剂乙酰曱胆碱中，以评价组织生存力。通过交换浴槽的克雷布斯液三次来洗涤组织。30分钟后，将组织再次用l|iM乙酰曱胆碱预收缩。当收缩达到平台时，将lnM福莫特罗、10nM毒蕈碱性受体拮抗剂MA11或两者的组合加到浴槽培养基中，然后静置60分钟。使用用于Windows软件的ADInstrumentsChart5收集数据，在加入乙酰曱胆碱前及其响应到达平台后测量所产生的张力。对化合物(MA11)和/或福莫特罗的响应在它们加入后以IO分钟间隔测量。所有响应都表达为对乙酰曱胆碱诱发的收缩的抑制百分数。结果描述于图7和3中，其中化合物B为(MAll)。表3<table>tableseeoriginaldocumentpage65</column></row><table>表3.福莫特罗(lnM)、化合物B(10nM)和化合物B(10nM)(在福莫特罗(lnM)存在下)在体外豚鼠气管中对lpM乙酰曱胆碱诱发的紧张的％抑制体内组合数据经麻醉的豚鼠中肺功能的评价对雄性Dunkin-Hartley豚鼠(300-600g)进行称重并在可恢复的气体(5。/0氟烷/氧气)麻醉下经由气管内途径给药媒介物(0.05M磷酸盐，0.1%吐温80,0.6。/。生理盐水，pH6)或化合物。在给药乙酰曱胆碱两小时前将动物给药化合物或媒介物。在第一次给药支气管收缩剂约30分钟前将豚鼠用戊巴比妥麻醉(1mL/kg60mg/mL溶液，腹膜内注射)。将气管进行插管，使用恒定体积呼吸泵(HarvardRodentVentilator型号683)以60呼吸/min的速率和5ml/kg的潮气量对动物进行通风换气。进行颈静脉插管用于给药乙酰曱胆碱或维持麻醉(O.lmL戊巴比妥溶液，60mg/mL,^见需要)。将动物转移至Flexivent系统(SCIREQ,Montreal,Canada)中以便测量气道阻力。以60呼吸/min的速率和5ml/kg的潮气量对动物进行通风换气(半正弦曲线通气型式)。应用2-3cmH20的呼吸末正压(positiveendexpiratorypressure)。使用Flexivent"快照，，装置(持续1秒，1Hz频率)测量气道阻力。一旦获得稳定的基线阻力值，以上升的剂量(0.5、1、2、3和5吗/kg，静脉注射)以约4分钟间隔通过颈静脉导管将动物给药乙酰曱胆碱。每次给药支气管收缩剂后记录峰阻力值。在完成肺功能测量后通过静脉注射约l.OmL戊巴比妥钠(Euthatal)对豚鼠施行安乐死。在每次给药支气管收缩剂时由化合物产生的支气管保护百分数如下计算0/o变化R媒介扭一0/o变化R化会浙%支气管保护=-%变4匕R媒介浙其中。/。变化Rveh为媒介物处理组中气道阻力的最大变化百分数的均值。所报道的结果在给药5吗/kg乙酰曱胆碱之后测量，并表达为支气管保护百分数(均值士标准误差)。(^肾上腺素受体激动剂1:(BAl):JV-「2-(二乙基氨基)乙基l-JV-(2-n2-(4-羟基-2-氣代-2,3-二氢-U-苯并噻唑-7-基)乙基1氨基1乙基V3-r2-(萘-l-基)乙氣基l丙酰胺二氢溴酸盐和毒蕈碱性受体拮抗剂2(MA2)溴化「2-(OQ-环己基-羟基-苯基-曱基)-噁唑-5-基曱基l-二曱基-(3-苯氧基-丙基V铵经由气管内途径将豚鼠给药媒介物、1和27pg/kg化合物(BA1)，0.2(ig/kg化合物(MA2)(结晶形式A)或3pg/kg化合物(BA1)和0.2pg/kg化合物(MA2)的组合。给药增加的静脉内剂量的乙酰曱胆碱(0.5、1、2、3和5吗/kg)在媒介物处理的动物中诱发了剂量相关的支气管收缩，收缩程度为给药媒介物两小时后13±2.6%/0.5吗/kg至2530士2800/。/5pg/kg(n=9)。将化合物(MA2)以0.2吗/kg进行气管内给药产生了对乙酰曱胆碱诱发的支气管收缩的13%抑制(阻力增加2210±268%，n=8)。在给药乙酰甲胆石成2小时前对化合物(BA1)(3和27i!g/kg)进行气管内给药产生了对乙酰曱胆碱诱发的支气管收缩的17和81%抑制(阻力分别增加2090±239和470±221%;n分别为8和6)。化合物(MA2)(0.2吗/kg)和化合物(BAl)(3(ig/kg)的组合产生了对乙酰曱胆碱诱发的支气管收缩的55%抑制(阻力增加1140±151%;n=8)(参见图8-其中化合物A为(BA1),化合物Z为(MA2))。B，肾上腺素受体激动剂1:(BA1):7V-『2-(二乙基氨基)乙基l-A^24^2-(4-羟基-2-氧代-2,3-二氢-U-苯并噻唑-7-基)乙基1氨基}乙基V3-「2-(萘-l-基)乙氧基l丙酰胺二氢溴酸盐和毒蕈碱性受体拮抗剂1UMA11):半-萘-l,5-二磺酸r2-〖4-氯-苄基氧基〗-乙基l-「2-(TR)-环己基-羟基-苯基-曱基V噁唑-5-基曱基l-二曱基-铵经由气管内途径将豚鼠给药媒介物、1和27jng/kg化合物(BA1),0.2pg/kg化合物(MA11)或lpg/kg化合物(BA1)和0.01吗/kg化合物(MA11)的组合。给药增加的静脉内剂量的乙酰曱胆碱(0.5、1、2、3和5pg/kg)在媒介物处理的动物中诱发了剂量相关的支气管收缩，收缩程度为给药媒介物两小时后14±2.6%/0.5吗/kg至2240±269%/5pg/kg(n=10)。将化合物(MAll)以0.2iig/kg进行气管内给药产生了对乙酰曱胆碱诱发的支气管收缩的16%抑制(阻力增加1880±272%，n=6)。在给药乙酰曱胆碱2小时前对化合物(BA1)(1和27昭/kg)进行气管内给药产生了对乙酰曱胆碱诱发的支气管收缩的38和89%抑制(阻力分别增力口1380±333和242±69%;n分别为8和6)。化合物(MAll)(0.2pg/kg)和化合物(BAl)(3吗/kg)的组合产生了对乙酰曱胆碱诱发的支气管收缩的43%抑制(阻力增加1273±260%;n=7)(参见图9-其中化合物A为(BA1),化合物Y为(MAll))。权利要求1.一种药物产品，其包含第一活性成分和第二活性成分的组合，其中所述第一活性成分为选自以下的毒蕈碱性受体拮抗剂[2-((S)-环己基-羟基-苯基-甲基)-噁唑-5-基甲基]-二甲基-(3-苯氧基-丙基)-铵盐，[2-((R)-环己基-羟基-苯基-甲基)-噁唑-5-基甲基]-二甲基-(3-苯氧基-丙基)-铵盐，[2-((R)-环己基-羟基-苯基-甲基)-噁唑-5-基甲基]-二甲基-(2-苯乙基氧基-乙基)-铵盐，[2-((R)-环己基-羟基-苯基-甲基)-噁唑-5-基甲基]-[3-(3，4-二氯-苯氧基)-丙基]二甲基-铵盐，[2-((R)-环己基-羟基-苯基-甲基)-噁唑-5-基甲基]-[2-(3，4-二氯-苄基氧基)-乙基]-二甲基-铵盐，以及[2-(4-氯-苄基氧基)-乙基]-[2-((R)-环己基-羟基-苯基-甲基)-噁唑-5-基甲基]-二甲基-铵盐；所述第二活性成分为β2肾上腺素受体激动剂。2.权利要求1的产品，其中所述第一活性成分为毒蕈碱性受体拮抗剂，所述毒蕈碱性受体拮抗剂为溴盐或1，5-萘二磺酸盐。3.权利要求1的产品，其中所述第一活性成分为毒蕈碱性受体拮抗剂，所述毒蕈碱性受体拮抗剂为溴盐。4.权利要求1的产品，其中所述第一活性成分为毒蕈碱性受体拮抗剂，所述毒蕈碱性受体拮抗剂为1,5-萘二磺酸盐。5.权利要求1至4中任一项的产品，其中所述P2肾上腺素受体激动剂为福莫特罗。6.权利要求1至4中任一项的产品，其中所述(32肾上腺素受体激动剂选自以下化合物或其药用盐A42-(二乙基氨基)乙基]-AK2-([2-(4-羟基-2-氧代-2，3-二氢-l,3-苯并噻唑-7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2-(萘-1-基)乙氧基]丙酰胺，A42-(二乙基氨基)乙基]-AK2-([2-(4-羟基-2-氧代-2,3-二氢-l，3-苯并噻唑-7-基)乙基]氨基}乙基)-3-[2-(3-氯苯基)乙氧基]丙酰胺，以及7-[(1/)-2-({2-[(3-{[2-(2-氯苯基)乙基]氨基}丙基)硫基]乙基}氨基)-1-羟基乙基]-4-羟基-1，3-苯并噻唑-2(3//)-酮。7.权利要求1至6中任一项的产品在制备用于治疗呼吸系统疾病的药物中的用途。8.权利要求7的用途，其中所述呼吸系统疾病为慢性阻塞性肺病。9.治疗呼吸系统疾病的方法，包括对有此需要的患者同时、依次或分并给予(a)(治疗有效)剂量的第一活性成分，其是如权利要求1至4中任一项定义的毒蕈碱性受体拮抗剂；和(b)(治疗有效)剂量的第二活性成分，其是P2肾上腺素受体激动剂。10.—种试剂盒，其包含第一活性成分的制剂和第二活性成分的制剂和任选的说明书，所述第一活性成分是如权利要求1至4中任一项定义的毒蕈碱性受体拮抗剂，第二活性成分是{32肾上腺素受体激动剂，所述说明书指导对有所述需要的患者同时、依次或分开给予所述制剂。11.一种药物组合物，其包含呈混合物形式的第一活性成分和第二活性成分，所述第一活性成分是如权利要求1至4中任一项定义的毒蕈碱性受体拮抗剂，第二活性成分是(32肾上腺素受体激动剂。全文摘要本发明提供了包含第一活性成分和第二活性成分的药物产品、试剂盒或组合物在治疗呼吸系统疾病如慢性阻塞性肺病和哮喘中的用途，所述第一活性成分为选择性毒蕈碱性受体拮抗剂，第二活性成分为β₂肾上腺素受体激动剂。文档编号A61K31/167GK101678005SQ200880010661公开日2010年3月24日申请日期2008年2月6日优先权日2007年2月7日发明者凯瑟琳·威利,哈里·芬奇,约翰·狄克逊申请人:阿金塔探索有限公司;阿斯利康(瑞典)有限公司