专利名称：用于调节免疫、增强疫苗效能、降低慢性fhv-1感染相关发病率以及预防或治疗结膜炎的 ...的制作方法
用于调节免疫、增强疫苗效能、降低慢性FHV-1感染相关发病率以及预防
或治疗结膜炎的组合物和方法
相关申请益生生物在人药物中曾用于调控多种感染性疾病的进程。相 反，在兽医学方面已进行的研究很少。大多数兽医学研究在大型动物中进 行，其中益生生物用于尝试改变粪便病原体的释放或改良生产参数，例如 体重增加、饲料转换率和死亡率的减少。
在一个动物研究中，用粪肠球菌(^Vite/Y a cc附/"ec/"附)菌林 NCEMB 10415 (SF68)饲喂已接种犬瘟热病毒(CDV)的幼犬组，并与仅接受 接种的对照组相比。与对照幼犬相比，补充SF68的幼犬具有增加的血清 和粪便的总IgA浓度、增加的CDV特异性IgG和IgA血清浓度和增加的 循环B淋巴细胞的百分数，证明该益生生物可诱导免疫增强效应。因此，本发明的目的是提供调节免疫、增强疫苗效能、降低慢 性FHV-I感染相关发病率和预防或治疗结膜炎的方法和组合物。本发明另 一个目标是提供用于预防或治疗结膜炎的方法。图2.补充(治疗组)或未补充(安慰剂组)SF68的小猫血清(a)和 唾液(b)中的FHV-l特异性的IgA结果。方框和虚线代表最小值、最大值、 中位数和第25及第75百分位数。在所有时间点p>0.05。在说明书和实施例中可能用到的缩写如下FHV-1，猫鼻气管 炎病毒；FCV,猫杯状病毒；FPV，猫瘟病毒；spp.,种；ELISA，酶联免 疫吸附测定；DM，干物质；CFU，集落形成单位；kg，千克；BW，体重。"细胞免疫"或"细胞免疫应答"或"细胞介导的免疫"在 此处可以互换使用，意思是应答抗原攻击而激活的细胞毒性T淋巴细胞或 辅助T淋巴细胞、单核细胞和细胞因子。该术语包括所有不能转化为抗体 初始受体的适应性免疫。"有效量"意思是有效地获得特定的生物学结果的一定量的化 合物、材料或组合物。这种结果包括但是不限于在动物中调节免疫、增强 疫苗效能或降低慢性FHV-1感染相关发病率。这种有效的活性可例如通过 向动物施用本发明的组合物来获得。
0031"为人消耗配制的食物产品"是计划由人^7v的任何组合物。"虚拟包装，，意思是药盒的组分通过一个或多个物理的或虛拟 的药盒组分上的说明指导使用者如何获得其它的组分而相关联，如，在袋 子中包含一种组分和说明，指导使用者去网站、联系录音信息、浏览可视 信息或联系看护者或指导者以获得怎样使用药盒的使用说明。由于其可根据情况改变，本发明不限于此处所述的特定的方 法、流程和试剂。而且，本文所使用的专门用语仅是为了描述特定的实施 方案，不是为了限制本发明的范围。如本文和所附的权利要求中所使用的 单数形式"一个"、"一种，，、"该"，除非上下文另有明确指示，包括 复数指代。类似地，词"包含"、"包括"、"含有"将解释为包含在内 而不是排他的。在另一个实施方案中，本发明的组合物是为人消耗所配制的食 物产品。这些有利地包括旨在供给人必需饮食需要的食品和营养素，和其 他人饮食补充物。在一个详细的实施方案中，为人消耗所配制的食物产品 是完全的和营养均衡的。在一个实施方案中，组合物是完全的和营养均衡的宠物或动物食品。在本文中，宠物食品可以是湿食品、干食品或含水量中等的食品，正如宠物食品配制和生产领域技术人员所认可的那样。"湿食品"描述通常以罐或箔袋装售卖的宠物食品，其含水量通常在约70%到约90%范围内。"干食品，，描述与湿食品组分相似的宠物食品，但是其含水量有限，通常在约5%到约15%范围，并且因此例如以小的饼干状粗粒形式存在。组合物和饮食补充物可以为成年动物或老年或年幼动物，例如"幼犬"、"小猫"或"老年"配方特别地配制。通常，特定的配方包含适合动物不同发育阶段或年龄所需的能量和营养。根据本发明的方法，包含一种或多种益生生物的组合物的施用，包括作为饮食部分的施用，可以跨越动物从妊娠期到整个生命期的范围。在某些实施方案中，疫苗是针对猫瘟病毒、猫鼻气管炎病毒或
猫杯状病毒。另一方面，本发明提供了包含一种或多种益生肠球菌属细菌的 组合物在制备药物中的应用。另一方面，本发明提供了所述组合物在制备 用于在动物中调节免疫、增强疫苗效能、降低慢性FHV-1感染相关发病率 和/或预防或治疗结膜炎的药物中的应用。通常，通过将一种或多种本发明 益生生物与适合向动物施用的技术人员已知的可用于制备药物和配制药物 的赋形剂、緩冲剂、粘合剂、增塑剂、着色剂、稀释剂、压缩剂、润滑剂、 矫味剂、润湿剂和其它组分混合来制备药物。所述药物包含用于在动物中 调节免疫、增强疫苗效能、降低慢性FHV-1感染相关发病率和/或预防或 治疗结膜炎的量的益生生物。
实施例尽管应当理解除非另有特别说明所包括的这些实施例仅仅意 在说明而不是要限制本发明的范围，但是，本发明可通过以下实施例进一 步阐述。
实施例1 动物和实验参数猫科动物研究群体。20只6周龄的SPF小猫购自Liberty实验室(Liberty, NY)。经ELISA鉴定，小猫为猫白血病病毒抗原和猫免疫缺陷 病病毒抗体血清阴性。(Snap Combo, IDEXX实验室，波特兰，ME)。实验没计。10天平衡期之后，将小猫随机分为两组，每组10 只，从7周龄开始治疗研究。将0.25-0.28 g( 5 x 109CFU，基于稀释液的 计数测定)的LBC ME5 PET粪肠球菌NCIMB 10415(SF68) (Cerbios-Pharma SA，瑞士)加入到单个50 mL圆锥底聚丙烯离心管中，盖 紧，并在研究期间储存于4。C。也同样制备增味剂(使用了包含作为主要成 分的肝消化物的通常的宠物食品包被物)的等分试样，每管150 mg。将等 分试样进行吸水的测定，如果益生生物或增^^木剂出现任何凝集则丢弃。在 临施用之前，将增味剂的一个等分试样转移到一个储存SF68的管中(治疗 组)或空管中(安慰剂组)，并用室温的水稀释至总体积为10 mL。将内容物 涡旋至少3分钟，吸入12 cc注射器。悬浮液涡旋后，立即向适合的小猫 口服施用1 ml SF68 (日总剂量每天5xl08 CFU)或单独的增味剂(对照小 猫)， 一直到27周龄。两组均随意喂养干的猫食(符合所有AAFCO需求的 常用猫生长配方，使用鸡肉和稻米作为主要成分)，并分置于两个分离的房 间从而避免益生生物的交互污染。在9和12周龄，所有的小猫皮下接种由 美国猫医生协会推荐的用于猫疱渗病毒-1、嵌杯状病毒和猫瘟病毒的减毒 活组合疫苗(辉瑞动物健康，Exton, PA)。 (Richards J等(2001))。在补充的早期阶段(7周龄)，所有小猫的粪便都是正常的。由于 与研究不相关的原因从各组移除一只小猫，因此其也从最终数据分析中移 除。在整体时间或在任何个别时间点，两组的体重和粪^f更评分没有统计学 差异(
图1)。在研究过程中，两组猫之间的全血细胞计数、生化参数和体重 相似。两组之间粪便评分也相似，说明使用此处所述剂量的SF68没有诱 导显著临床差异。
实施例3 粪便测定补充SF68并不能i秀导沙门氏菌属菌种和弯曲杆菌属菌种的释 放。在两组小猫中的几个粪便样品为难辨梭菌或产气荚膜杆菌肠毒素阳性； 然而，组间的阳性样本数没有显著差异，并且阳性结果与腹泻不相关。在 补充期间多数治疗组小猫的粪便中可检测到SF68,但是在停止补充之后的 一周不再能检测到，这表明所述生物在猫中仅为短暂持续。因此，施用此 处所述剂量的SF68没有有害作用，并且研究期间的施用是安全的。
实施例4 免疫测定在27周龄，治疗组中的CD4+计数与安慰剂组相比有所增加， 而CD8+计数没有同时增加，证明益生生物对系统的免疫调控作用。具有慢性FHV-1感染的年轻的成年、混合性别的猫(n = 12)从 另外的研究中转移过来，并施用SF68或安慰剂5.5个月的时间。在平衡期 间和补充之后，每天监测猫的结膜炎、打喷喷和流弟。在补充期间，猫从 成组饲养中移出进行单独饲养，进行外科手术标准的消毒以激活潜在的 FHV-1感染。监测动物的结膜炎。
[0099结果显示，总体上，结膜炎是常见的，在观察时间点，SF68 治疗组的猫和安慰剂组的猫中分别为755只中122只(16.3%)出现和755只 中210只(27.8%)出现。在平衡期间，注意到在观察时间点两组之间观察到 结膜炎的数量没有变化，但是开始施用SF68或安慰剂后，在每个治疗期 间，补充SF68的猫比安慰剂组的猫发作结膜炎的数量显著较少。结果显 示SF68降低慢性FHV-1感染相关发病率。
[00100在说明书中，公开了本发明典型的优选实施方案，虽然采用 了专用术语，但它们仅在普通的和描述性的意义上使用，而不为限制的目 的，本发明的范围在权利要求中提出。显然，鉴于上述指导，本发明许多 修改和变化是可能进行的。因此，应理解，在所附权利要求范围内，可以 以另外的方式实施本发明，而非按照具体的描述的来实施。
权利要求
1.用于在动物中预防或治疗结膜炎的方法，包括向动物施用包含一种或多种预防或治疗结膜炎有效的量的益生肠球菌属细菌的组合物。
2. 权利要求l所述方法，其中动物是猫科动物。
3. 权利要求1所述方法，其中益生肠球菌属细菌是粪肠球菌菌林 NCIMB 10415 (SF68)。
4. 用于在动物中调节免疫、增强疫苗效能或降低^t性FHV-1感染相 关发病率的方法，包括向动物施用包含一种或多种对调节免疫、增强疫苗 效能或降低慢性FHV-1感染相关发病率有效的量的益生肠球菌属细菌的 组合物。
5. 权利要求4所述方法，其中组合物是动物食品组合物或饮食补充物。
6. 权利要求4所述方法，其中益生肠球菌属细菌是粪肠球菌菌林 NCIMB 10415 (SF68)。
7. 权利要求4所述方法，其中每克組合物中存在的益生肠球菌属细菌 的量至少为约102到约1011 CFU。
8. 权利要求4所述方法，其中动物是猫科动物。
9. 权利要求4所述方法，其中改善的免疫包括抗FVH、 FCV或FPV 的免疫。
10. 权利要求4所述方法，其中在动物中增强的疫苗效能导致动物中 CD4+淋巴细胞的产生增加。
11. 权利要求4所述方法，其中在动物中增强的疫苗效能导致动物的 血清、粪便、乳汁、泪液、唾液、呼吸上皮或胃肠上皮中针对特异性病原 体的抗原而反应的免疫球蛋白浓度增加。
12. 包含一种或多种对在动物中调节免疫、增强疫苗效能、降低慢性 FHV-1感染相关发病率或预防或治疗结膜炎有效的量的益生肠球菌属细菌 的组合物。
13. 权利要求12所述组合物，其中组合物是食品组合物或饮食补充物。
14. 权利要求12所述组合物，其中益生肠球菌属细菌是粪肠球菌菌林 NCIMB 10415 (SF68)。
15. 权利要求12所述组合物，其中每克组合物中存在的益生肠球菌属 细菌的量至少为约102到约10"集落形成单位(CFU)。
16. 权利要求12所述组合物，其进一步包含一种或多种在动物中有效 调节免疫、增强疫苗效能、降低慢性FHV-1感染相关发病率的物质，或者 预防或治疗结膜炎的物质。
17. 权利要求12所述组合物，其进一步包含至少一种其它类型的益生 生物。
18. 权利要求12所述组合物，其中动物是猫科动物。
19. 权利要求12所述组合物，其中疫苗是FVH-1疫苗、FCV疫苗或 FPV疫苗。
20. 权利要求12所述组合物，其中改善的免疫包括抗FVH、 FCV或 FPV免疫。
全文摘要
用于在动物中调节免疫、增强疫苗效能、降低慢性FHV-1感染相关的发病率和/或预防或治疗结膜炎的组合物和方法。所述组合物包含有效量的益生肠球菌，所述方法包括向动物单独地、在补充物中或在食品组合物中施用适合预期目的的量的所述组合物。在某些实施方案中，益生生物是粪肠球菌菌株NCIMB 10415(SF68)，并且动物是猫科动物。
文档编号A61K39/02GK101686690SQ200880017350
公开日2010年3月31日 申请日期2008年5月13日 优先权日2007年5月24日
发明者C·卡瓦迪尼, E·萨蒂亚拉, J·本雅各布, R·诺尔 申请人:雀巢产品技术援助有限公司