专利名称：治疗小肠感染的包含寡聚糖及不溶性多孔材料的制剂的制作方法
技术领域：
本发明与肠内病原体感染的治疗相关。对人有危害的三类最有名病原体包括沙 门氏菌、艰难梭菌("C. difficile”)及某些大肠杆菌("E. coli”)。目前医院里感染艰难 梭菌患者数量在增加，导致患者出现严重的并且在某些情况下是威胁到生命症状的情况在 明显增加。目前的治疗方案包括主要基于抗生素的使用，例如甲硝哒唑、万古霉素及利奈唑 酮。然而C. difficile对于多数抗生素是有抗性的。另外它是一部分人体内共生菌(即一 种生存于宿主小肠内对宿主无害的细菌)。对于艰难梭菌的无症状携带者，如果因另一种疾 病使用“广谱”抗生素治疗，可能因此突发严重的艰难梭菌感染症状，例如伪膜性肠炎。此 种情况的出现是因为广谱抗生素减少了正常肠内菌群水平而对艰难梭菌没有影响，意味着 艰难梭菌因为竞争减少而兴盛。沙门氏菌感染通常被认为是食源性疾病。沙门氏菌感染的治疗通过抗生素来实 现。然而这种治疗可能会导致与上文艰难梭菌感染类似的情况，在家禽及牛肉产业长期使 用抗生素可能会产生一种对抗生素具有潜在抗性的沙门氏菌株。大肠杆菌致病菌株的感染途径广泛。这种生物常通过排泄物污染传播，并且可通 过食物，水传递或来自环境。抑制肠内大肠杆菌群活性的治疗方法将会增强宿主对于这些 病原体感染的抵御能力。
背景技术：
人类的肠，特别是结肠中包含了很多被认为通过帮助消化并阻止有害菌群的增长 而与人类宿主共生的微生物群，它们可。这些被认为帮助人类宿主对抗多种感染的有益微 生物中的一种特定群体是乳酸菌群，此后常指其中的主要成员，乳酸菌。一般认为乳酸菌 通过一系列方法帮助对抗传染性的细菌，例如艰难梭菌。首先，当作用于特定发酵底物时， 乳酸菌使肠内容物PH值降低，从而抑制病原菌生长。相比之下，艰难梭菌在一个更中性PH 的环境中生长，意味着乳酸菌的存在将引起对艰难梭菌有害的环境。其次，乳酸菌可能有抗 菌作用，与细菌如艰难梭菌形成竞争。感染艰难梭菌的宿主肠道内乳酸菌的增加能使艰难 梭菌感染相关症状减轻。因此对于这种与肠道感染问题的一种看似有吸引力的解决方案是 引进额外的乳酸菌。然而，发现这种办法很少生效，因为此种额外的细菌的数量是不能忍受 的，且添加的物种可能不适应在宿主肠道内生存。宿主体内乳酸菌群体主要取决于适合其 生长繁荣的条件。本发明所述治疗方案作用是增强宿主自身乳酸菌的数量，它们已适应于 肠道内生存所以如遇到合适的营养成分可迅速增加数量及活性。现已知乳酸菌在富含某些特定糖的环境中可以快速生长。然而普通的糖很难被传 送至肠道后面的部分因为在消化过程的早期它们已被大量吸收并消耗。所以，当食物团块 到达结肠——目标感染主要出现的地方——是不可能含有任何大量的糖。因此对宿主饮食 中提供糖不会给位于肠道下部的乳酸菌提供必需条件。然而某些寡聚糖，其为通常含有3 至10个单糖的多聚体，很难在早期的消化过程中被分解。已报道施用特定寡聚糖增加友好 菌种数量并同时减少了有害菌群的数量。
发明内容
本发明一方面提供了一种在肠道下部通过使用寡聚糖提供合适的乳酸菌培养环 境。根据本发明的第一方面，提供了一种包含寡聚糖与可食用不溶性多孔材料混合物的制 剂。在本发明的一个具体实施方式
中，所述多孔材料包括了半纤维素或其他不溶性细胞成 分。可食用材料可以是一些天然或脱水材料的粘浆，按照需要，取决于诸如消费者的消费意 向及审美观等因素。所以，例如，所述制剂可制作为容易运输和消费的相对长寿的配制食 物，例如包装过的，干的水果或水果条(内部包含气密的包装或其他)。或者，所述制剂可 以是新鲜的并为饮品的形式(例如，这种饮品目前正流行并被称为‘冰沙’)或者酸乳饮品。 在一个具体实施方式
中，所述制剂可用于肠道感染(如艰难梭菌或沙门氏杆菌)治疗(预 防或修复感染)。如果用于预防，它可以增强肠道微生物菌群抵制随后感染的能力。寡聚糖 可以是任何形式的合适的寡聚糖。在一个具体实施方式
中使用的是半乳糖寡聚糖；在另一 个具体实施方式
中，优选甘露寡糖。更多的寡聚糖包括果糖寡糖。制剂中包含粘浆时，所述粘浆可以是水果或蔬菜果肉甚至两者混合物。根据一个具体实施方式
，粘浆由整个，碾碎的酸果蔓制成。主要由植物细胞的化学复合结构物构成的 更难在早期消化分解的水果或蔬菜粘浆，有助于递送大量寡聚糖至肠道下部。本发明另一方面提供了用于治疗有害细菌肠道感染的制剂，所述制剂包含寡聚糖 和来源于酸果蔓的半多孔材料。在一个优选的具体实施方式
中，所述寡聚糖是半乳糖寡聚 糖或甘露寡聚糖。在一个优选的具体实施方式
中，所述肠道感染包括沙门氏菌或艰难梭菌。 在一个优选的具体实施方式
中，所述治疗可以是预防性或减轻症状。在一个优选的具体实 施方式中，所述半多孔材料包括酸果蔓果肉或全部碾碎的酸果蔓。本发明的另一方面提供了寡聚糖与来自酸果蔓的半多孔材料在制备治疗有害细 菌肠道感染制剂中的应用。在一个优选的具体实施方式
中，所述寡聚糖是半乳糖寡聚糖或 甘露寡聚糖。在一个优选的具体实施方式
中，所述肠道感染包括沙门氏菌或艰难梭菌。在 一个优选的具体实施方式
中，所述治疗可以是预防性或减轻症状。在一个优选的具体实施 方式中，所述半多孔材料包括酸果蔓果肉或全部碾碎的酸果蔓。本发明的另一方面还提供了治疗艰难梭菌引起的消化道释放肠毒素的制剂，所述 制剂包含来源于酸果蔓的半多孔材料。在一个优选的具体实施方式
中，所述制剂包括寡聚 糖以此利于益生菌群的生长；在一个进一步优选的具体实施方式
中，所述寡聚糖为半乳糖
寡聚糖。来源于酸果蔓的半多孔材料在制备用于治疗艰难梭菌引起的人消化道中肠毒素 释放的制剂的应用。本发明的另一方面还提供了来源于酸果蔓的半多孔材料在制备用于治疗艰难梭 菌引起的人消化道中肠毒素释放的制剂的应用。在一个优选的具体实施方式
中，包括了上 述制造过程中寡聚糖的应用，因此利于益生菌群的生长；在一个进一步优选的具体实施方 式中，所述寡聚糖为半乳糖寡聚糖。本发明的另一方面还提供了一种用于治疗有害肠道细菌的制剂，其包含寡聚糖和 至少一种有益于肠道健康的并能在上述寡聚糖中培养的菌株。在一个优选的具体实施方式
中，所述细菌是在含有寡聚糖情况下培养选择出的菌株。在一个进一步优选的具体实施方
4式中，所述寡聚糖为半乳糖寡聚糖而细菌株是唾液乳杆菌(lactobacillus salivarius), 短乳杆菌(lactobaciulls brevis)，布氏乳杆菌(lactobacillusBuchner)中一种或多种， 以上菌种均已证实在半乳糖寡聚糖存在时利于其增长。在一个优选的具体实施方式
中，所 述制剂用于沙门氏菌感染治疗。本发明的另一方面还提供了寡聚糖和至少一种有益于肠道健康的并能在上述寡 聚糖中培养的菌株在制备治疗有害肠道细菌的制剂中的应用。在一个优选的具体实施方式
中，所述细菌是在含有寡聚糖情况下培养选择出的菌株。在一个进一步优选的具体实施方 式中，所述寡聚糖为半乳糖寡聚糖而细菌株是唾液乳杆菌(lactobacillus salivarius), 短乳杆菌(lactobaciulls brevis)，布氏乳杆菌(lactobacillusBuchner)中一种或多种， 以上菌种均已证实在半乳糖寡聚糖存在时利于其增长。在一个优选的具体实施方式
中，所 述制剂用于沙门氏菌感染治疗。本发明的另一方面提供了一种产生前生命期及原生命期混合物的方法，包括以下 步骤以原生命期的寡聚糖处理一系列乳酸菌株，鉴定一种或多种有利于感染的乳酸菌株， 整合一种或多种最有益的感染菌株群体进入原生命期。结果产生的混合物可施用于具有提 高肠道健康目的的个人，从而确保他们能拥有一种最受益于半乳糖寡聚糖原生命体感染的 菌群。本发明还提供了一种治疗有害肠道细菌的方法，包括对患者施用寡聚糖及半多孔 粘浆。在一个优选的具体实施方式
中，所述半多孔粘浆包括来源于酸果蔓的物质而寡聚糖 是半乳糖寡聚糖。优选地，治疗至少每日进行。在一个优选的具体实施方式
中，所述方法治 疗一种或多种沙门氏杆菌及艰难梭菌。在一个优选的具体实施方式
中，所述施药方式是口 服或直肠给药。本发明还提供了治疗沙门氏杆菌的方法，包括向患者施用半乳糖寡聚糖和包括唾 液乳杆菌(lactobacillus salivarius),短乳杆菌(lactobaciulls brevis),布氏乳杆菌 (lactobacillus Buchner)乳酸菌群中一种或多种的制剂。本发明提供了一种治疗艰难梭菌产生的肠毒素方法，包括口服或直肠给药酸果蔓 果肉。在本发明前述方面或其具体实施方式
中，所述寡聚糖可以为任何适合的寡聚糖， 包括果糖_，甘露糖_或半乳糖_寡聚糖。
本发明的具体实施方式
将以实施例的方式描述，及参考附图图1为用于检查不同底物用于传输寡聚糖的效率的内置管道的发酵罐的图示；图2为通过图1的发酵罐完成检测的流程图。
具体实施例方式肠道感染的治疗(在本申请中，术语‘治疗’包括在该范围，除非特定内容需要，预 防治疗及补偿性性治疗)可能会根据病原性质的而不同。然而无论在哪种情况下患者都可 能从乳酸菌群增长上受益。根据本发明的一个具体实施方式
，寡聚糖作为包含可食用的、不溶性多孔材料的混合物的一部分摄入。在本申请中，术语‘不溶性’指内容可以由消化道传输至结肠。所以 如果一种物质在从消化道到结肠一段时间通常从消化道传输至结肠要经历一段时间(所 以，通常不限于一至十天)的条件下是不溶性的，则其是符合本发明目的的不溶性物质。本 实施例中可食用物质，是来自植物的可食用的纤维粘浆物质。优选的但不是必须的，寡聚糖 为半乳糖-寡聚糖(G0S)，也可以应用果糖-寡聚糖或菊粉。G0S或者注入粘浆或者简单 的组合施用。优选但不是必须的，粘浆包括蔬菜或者水果残渣，这可通过榨汁或挤压程序实 现。所以粘浆可以是果皮，种子及其他纤维素物质，这些在榨汁或压榨过程中保留下来，例 如酸果蔓或其他水果越橘、草莓、悬钩子、罗甘莓、醋栗、黑醋栗、黑莓、苹果、桔子、几维果、 桃、油桃、李子、杏、葡萄之类及西红柿。可替代的方案，或另外，蔬菜粘浆也可用，不论是否 来自榨汁或压榨的残渣，例如，胡萝卜，无论是否捣碎或挤汁。可能适合产生特定粘浆的蔬 菜的例子包括但不限于，马铃薯(例如，烤马铃薯的皮)、胡萝卜、甜菜、芹菜、韭菜、胡椒、芸 薹诸如椰菜，青蒜，花椰菜及甘蓝。可通过不同方式注入寡聚糖。例如通过将寡聚糖，例如G0S，以粉末或糖浆形式， 同一个可食用的粘浆以合适比例混合产生混合物。优选地，纤维粘浆与寡聚糖的比例为 50 50(干重)。比例根据其治疗感染的性质而不同，在10 90及90 10之间，因为下 文更加详细描述的体外实验，已经证实根据治疗时病原的性质提供不同效果。作为多聚物的寡聚糖，比单糖，如葡萄糖，果糖，半乳糖及蔗糖有更高的能力承受 在大肠中提供给乳酸菌居住的有益环境，这些单糖在小肠中很容易被宿主吸收或被细菌消 化。假设本发明的具体实施方式
提供了一种向大肠增强传输寡聚糖的能力，相关的，减少了 在消化道，在胃，十二指肠，或回肠中消化作用。据信这种增强递送发生因为‘不溶性’多孔 材料，其中寡聚糖在混合时实现定位，然而在消化道很难分解，对于结肠中的细菌更容易分 解及溶解。多孔材料分解释放了寡聚糖，其被从消化道向远处输送时被限制在多孔结构中， 而寡聚糖的释放使乳酸菌大量成长。所以，比寡聚糖自身导入情况下更高水平的寡聚糖可 被传送至结肠，结果使乳酸菌增加。其他生产乳酸的细菌如链球菌及bacteriodes同样可 以对于肠内有害细菌感染的治疗有益，而此类细菌同样可以通过增长促进治疗。沙门氏菌内置管道发酵罐的模拟体外感染沙门氏菌病原实验通过加入G0S混合物及酸果 蔓浓汁来处理。结果表明，处理两天后，沙门氏菌数量减少了一千倍。假设，在沙门氏菌与 至少两种有机物组合的情况下产生了有益的结果。首先，G0S的存在(一般认为，植物材料 体外提供传输至大肠的数量比G0S 口服的情况下的传输数量大很多)提供了有利的环境对 于乳酸菌群的生长，导致更低的PH和可能的抗生素的效果抑制沙门氏菌。第二，沙门氏菌 被认为机械地吸附到粘浆上。这使得在管道内正常蠕动流过程中去除了粘浆因此去除了吸 附上面的沙门氏菌，导致菌数量下降。如果该治疗用于体外预防性方案，以及随后的感染， 三天内沙门氏菌减少到不能检测的水平，反之仍维持在未治疗的数量。艰难梭菌体外模拟感染，在内置管道的发酵罐中，如果通入G0S及酸果蔓粘浆混合物，导致 48小时内菌落形式的艰难梭菌的数目显著减少。这假设归因于乳酸菌数量的增加，这降低 了 PH值以及，可能同样有一个对于艰难梭菌的抗菌作用一与仅使用G0S相比。假设G0S的 作用是提供一个合适的利于乳酸菌生长的环境，而酸果蔓提供了一个传输机制，传输更多的G0S —即未消化的糖一至该区域增长的乳酸杆菌群，对于治疗艰难梭菌有益。虽然艰难 梭菌群未被完全根除，同样可认为减少达到了显著水平允许使用特定抗生素的治疗方法在 提供一个治愈的可能与其他微生物群替代关联的治疗方案。该假设受到一些事情的支持， 以下会讨论。迄今的实验似乎表明，关于沙门氏菌感染的治疗，酸果蔓混合成分更有效。相反， 对于艰难梭菌的治疗，G0S似乎是更有活力的试剂并且在减少艰难梭菌群体水平方面有更 好的效果。然而，结合了酸果蔓或其他可食用物质其中包含不溶性多孔材料，例如不同种类 的纤维粘浆一及G0S产生了一种可能覆盖一个范围很宽的病原菌群的制剂，因为讨论的这 两者来自于不同的分类学种群。因此发现不只一种酸果蔓/G0S混合物可以提高乳酸菌对 大肠型细菌的比例至一个很高的程度一与单独一种底物相比。近来的观察表明，对于一般 的预防性使用可食用粘浆及寡聚糖混合物，例如酸果蔓及G0S，效果好于单独组分使用。关于上述假设基于的实验及其结果将在此描述。图1，体外模拟内置管道发酵罐， 内置发酵管道10被组装，而其底部，有玻璃珠12，此处插图表示在管道10里面的平面在其 下面。玻璃珠12模拟叶片，作为大肠里面的长绒毛内部有大肠菌及其他菌群聚集-所以避 免在消化和蠕动过程中很容易被冲出大肠。发酵罐有两个进口 14，16。进口 14运载培养 基，作为模拟正常的消化条件，在大肠内。发酵罐中灌输猪排泄物来提供试验用基本微生物 菌群。所以进口 14运输淀粉，胶质，木聚糖之类培养基。进口 16输入的是测试底物，即待 测试在病原菌治疗中效力的混合物或制剂。发酵罐10也有两个出口，18和20。出口 18提供培养基及底物混合物的废物排 放，以此模拟大肠的正常功能，大肠中的内容物通过蠕动连续运动。去除废物同时加入新鲜 培养基以保持发酵罐内物质在实验过程中恒定。出口 20是测试样品排放的出口，实验过程 中不同距离的培养基均由此排放。进一步模拟肠内活动，搅拌器22，旋转轴24，通过发动机 传动(未显示)，转动速率约为60rpm，及桨26在旋转轴24末梢，以增强对肠下部活动的模 拟。关于图2，运行模拟发酵罐以提供模拟猪下部肠道病原感染，以如下方式完成。为了检验对于现有感染的治疗效果，发酵罐中通过预准备排泄物接种体来提供微 生物群，新鲜培养基及病原菌，在步骤200进行检测。病原菌在此阶段加入以允许其组成微 生物群，增强检测底物的挑战性。内容物然后进行繁殖并在加入额外剂量的病原菌之前在 步骤202 (3天)达到稳定接下来检测底物，其在当前的实施例中包含酸果蔓残余及G0S，见 步骤204.如果要检测预防疾病的效果，底物在步骤200时被加入，之后每天操作。病原菌在 步骤204被引入。关于相似的系统的详细描述已在下列参考文献中发表，其中提供了更多的系统操 作的细节。Hillman, K.，Murdoch, T. A.，Spencer, R. J. and Stewart, C. S. (1994)，《利用半连 续体外灌注培养系统，来研究猪回肠微生物对产肠毒素性大肠杆菌的抑制作用》，应用细菌 学，第76期；294-300页。Hillman, K, Spencer, R. J.，Murdoch, T. A. and Stewart, C. S. (1995)，《利用连续体外灌注培养系统，来研究乳酸菌混合物对产肠毒素性大肠杆菌存活的影响》，应用微生物 学快报，第20期130-133页。Khaddour，R.，Reid，C_A. and Hillman，K. (1998)，《体外微生物养护以及猪肠发酵 模型》，养猪新闻与消息第19期111N-114N。Blake, D. P.，Hillman, K. and Fenlon, D. R. (2003)，《利用案例猪肠，来调查新式 和现有抗菌剂对当地猪胃肠微生物的研究以万古霉素为例》，动物饲养科学与技术，第103 期=123-139 页。最初的接种体可能包含低水平的病原菌(样品来自健康个体)但是任何存在的病 原体将被高水平的作为实验部分添加的所覆盖，并在任何情况下受限于测试底物的效果。肠道流动性效果然后被通过新鲜灭菌培养基补充内容物来模拟(步骤206)。通过 每天三次每次间隔八小时添加80%来实现，而废物泵排出保持总体积不变。在允许发酵罐 短时间重新加入在步骤208，样品撤回在步骤210并确定特异性菌群的数量。实验在该循环继续直到获得足够的数据为止，然后一个最终的样品在步骤212撤 回然后实验终止。目前，四个发酵罐同时运行允许三个测试底物联合及一个对照。从一个单一的原 向所有发酵罐提供培养基保证不会由于培养资源而产生区别，测试底物从入口 16手动通 入(图1)。实验1——通过G0S及酸果蔓浆对于沙门氏菌的预防性治疗材料及方法酸果蔓残留及G0S通过手工磨压碎酸果蔓待用，以减少在发酵罐操作中堵塞管子的可能性。酸果蔓 不包含在培养基里因为底物不能有效混合，但是每天通过独立的入口加入发酵罐液体中。 为保持一致性，G0S及一个70 30酸果蔓/G0S混合物分别以相同方式加入各自发酵罐，所 有发酵罐中发酵物最终浓度为1%。在添加之前酸果蔓或G0S均未被灭菌或经化学处理。体外模拟使用四个发酵罐。每个发酵罐工作容积是300ml，流动速率为2. 4d/ (720ml/d)。所 有发酵罐在水浴锅中加热以使内容物为37 (士 1) °C。样品通过汲取管出口被提取，此管约深 入液面下三分之二。培养基组成(g/1)木聚糖，0.6 ；胶质，0.6 ；马铃薯淀粉，5.0 ；干酪素，3.0 ；蛋白胨，3.0 ;K2HP04，2.0 ； NaHC03,1. 0 ；NaCl，4. 5 ；MgS04. 7H20，0. 5 ； CaCl2. 2H20，0. 45 ；血晶素，0. 01 ；胆汁盐(氧化 型)，0. 05 ；防沫剂A (0. 5ml/l)及吐温80 (2ml/l)。除指明外所有成分均来自Sigma集团公
司o在包含大约21蒸馏水的51发酵罐中制备培养基，以恒定的(磁化的)搅拌来减 少聚集形成。完全培养基加蒸馏水至51，安装传输管，在121°C 15分钟高压灭菌之前通过 棉花絮塞紧发酵罐。高压灭菌后，在热(75-80°C )的时候发酵罐被置于磁力搅拌器上，并允许恒定搅 拌降温。这样阻止发酵罐底部糖类凝胶形成，并破坏高压灭菌时形成的聚集。
8
培养基冷却后，加入痕量元素溶液(2ml/l)及维生素溶液(lml/1)。整个实验过程 中持续搅拌发酵罐。痕量元素溶液组成(mg/1)EDTA, 500 ；FeS04. 7H20, 200 ；ZnS04. 7H20,10 ；MnCl24H20, 3 ；H3B03, 30 ；CoCl2. 6H20,20 ；CuCl2. 2H20,1 ；NiCl2. 6H20, 2 ；Na2Mo04. 2H20，3。维生素溶液组成(mg/1)维生素k，l ；生物素，2 ；泛酸钠，10 ；烟碱，5 ；维生素B12，0.5 ；硫胺，4;对氨基苯
酸，5。由于培养基的微粒性质需使用孔径大的传输管，不连续泵的操作导致培养基于管 道内残留，引起错误的分配及潜在的堵塞。因此培养基被连续泵入再流通回路，并于每8小 时转移(通过螺旋操作阀)至发酵罐中15分钟，以提供日常补给及稀释率。在开始实验之前发酵罐运行三天，以确定系统稳定性。测试底物在稳定运行期间 进入发酵罐，除了对照组(没有加入)，与新鲜的猪粪便1 1 一起加入，用预热的最大量的 回收稀释(Oxoid)来提供健康结肠微生物群背景。发酵罐内容物测试安排见表1.表1 发酵罐运行方案
发酵罐编号
天数12341-3 (没有样品)酸果蔓GOS酸果蔓/GOS对照4-6 (样品组1)酸果蔓GOS酸果蔓/GOS对照7-9 (没有样品)对照酸果蔓GOS酸果蔓/GOS10-12 (样品组2)对照酸果蔓GOS酸果蔓/GOS13-15 (没有样品)酸果蔓/GOS对照酸果蔓GOS16-18 (样品组3)酸果蔓/GOS对照酸果蔓GOS所有发酵罐的分配剂量都通过在每个样品设定开始时过夜培养沙门氏菌来决定。细菌学分析对于每个三天样品设定组每天取5ml样品。在输入新鲜培养机制前样品立即取出 以保证发酵过程中的差异最大化。在取出样品并加入新鲜培养基之后，进行每天的测试底 物接种。在每个数据设定的开始，取出一个样品来估计沙门氏杆菌起始浓度及加入新鲜培 养基后发酵罐内PH值。在测定pH之后，每种样品1ml加入9ml灭菌的最大量回收稀释液(MRD Oxoid)并 连续稀释到10_6。该稀释液放置并孵育，如表2所示。表2 用于细菌菌群计数的培养基及孵育条件。
菌群培养基孵育总好氧菌哥伦比亚血液琼脂24h有氧总厌氧菌哥伦比亚血液琼脂48h厌氧大肠菌MacConkey3 号琼脂24h有氧总乳酸菌MRS琼脂48h厌氧耐氧乳酸菌MRS琼脂24h有氧沙门氏菌XLD琼脂24h有氧
所有的孵育在37°C进行。应用厌氧罐和Oxoid Anaerogen小袋获得厌氧条件。结果培养并测试沙门氏菌剂量后立即取出样品，在每次运行前，对样品只进行PH分析 及对沙门氏菌计数。这在结果中表示为“O天”数据。第二批数据测试开始后取出的样品进行全部数据分析。完成该检测以检验在输入 菌群方面培养效果，不计划进行统计分析。该组结果见表3。表3.数据设定点2开始时单样本菌群数(log cfu/ml)
~~耐氧乳酸乳酸菌m乳酸菌大 _好氧菌总数菌 菌总数 总数 肠杆菌
蔓 蔓§ 果g果8照 酸Go酸/G对
8.78 8.48
8.65 8.88
8.60 8.30
8.18 8.40
7.16 8.06
7.65 7.54
7.85 8.32
8.08 7.48
8.74 8.88
8.65 8.88
0.91 1.00
0.99 0.89看起来在发酵罐中培养后立即得到的数据之间似乎没有不同，因此可假定以后产 生的效果来自于加入的底物。确定生长培养基，以及10%酸果蔓悬浮/溶液，GOS及70 30酸果蔓/GOS在蒸 馏水中混合物的PH起始值。见表4.表4.新鲜牛长培养某及底物的PH测定。
成分测试条件PH发酵培养基未稀释6.91酸果蔓蒸馏水中10% (w/v)悬浮3.00GOS蒸馏水中10% (w/v)溶解4.0570 30酸果蔓GOS蒸馏水中10% (w/v)悬浮/溶解3.34蒸馏水N/A6.55每组样品中发酵培养基PH值的检测时间见表5。这是三组数据平均值，加入测试 底物后PH表现了立即的下降，随时间而放大。对照组发酵培养基在孵育时间内PH没有表 现明显的变化，表明对于正常的模拟，增加的缓冲系统足够。表5.从发酵罐中取得的样品的DH
天数酸果蔓GOS酸果蔓/GOS对照SEMP05.39aa5.05ab5.70ac6.51d0.0860.0514.63ba3.61bb4.81ba6.21c0.0930.0524.51ba3.47bcb4.45ca6.51c0.1750.0534.54ba3.31cb4.38°a6.41c0.1370.05SEM0.1430.0890.1340.17P0.0010.050.05ns 在每一栏里的带有同样上角标字母的值没有显著的不同(P > 0. 05)。每一竖行里
10带有相同下脚标的值没有显著的不同。_ns-没有显著差异。细菌计数结果在表6-11中显示，且乳酸菌大肠菌比例来自大肠菌的计数机且总 乳酸菌计数如表12所示。所有的细菌计数均以loglOcfu/ml为单位，所有数据是三次实验 的平均值。表中的数据在讨论部分分析。表6.好氧菌总数
权利要求
一种用于治疗肠道细菌感染的包含寡聚糖与可食用不溶性多孔材料的混合物的制剂。
2.权利要求1的制剂，其中所述可食用不溶性多孔材料为半纤维素或其他不溶性多孔 组分。
3.权利要求1或权利要求2的制剂，其中所述肠道感染包括选自艰难梭菌、沙门氏菌及 大肠杆菌的病原体。
4.前述任一项权利要求的制剂，其中所述寡聚糖为半乳糖寡聚糖。
5.前述任一项权利要求的制剂，其中所述可食用物质为包括来自一种或多种水果和/ 或蔬菜的物质的粘浆。
6.前述任一项权利要求的制剂，其中所述粘浆包括果皮、种子及其它一种或多种蔬菜 水果在压榨或榨汁过程中残留的含纤维素的物质。
7.权利要求6的制剂，其中所述水果或蔬菜选自酸果蔓、越橘、草莓、悬钩子、罗甘莓、 醋栗、黑醋栗、黑莓、苹果、桔子、几维果、桃、油桃、李子、杏、葡萄、西红柿、胡萝卜、甜菜、芹 菜、韭菜、胡椒、青花菜、青蒜、花椰菜以及甘蓝。
8.权利要求4的制剂，其中所述可食用物质包括来自酸果蔓的材料。
9.权利要求8的制剂，其中所述可食用物质包括成浆的，煮成汤的，干的或碾碎的酸果蔓。
10.前述任一项权利要求的制剂，其中所述制剂包括以下细菌的至少一种唾液乳杆 菌，短乳杆菌，布氏乳杆菌。
11.一寡聚糖及半多孔材料在制备用于治疗艰难梭菌及沙门氏菌之一的制剂中的应用。
12.权利要求11的应用，其中所述半多孔材料包括来自酸果蔓的半多孔材料。
13.权利要求11或权利要求12的应用，其中所述寡聚糖是半乳糖寡聚糖。
14.前述任一项权利要求的应用，其中所述处理是针对于沙门氏菌，且所述应用进一 步包括在所述制剂的制备中应用至少一种下列细菌菌株唾液乳杆菌，短乳杆菌，布氏乳杆菌。
全文摘要
用于治疗艰难梭菌或沙门氏菌感染的制剂，所述制剂包含半乳糖寡聚糖以及源于酸果蔓物质的混合物。
文档编号A61K36/45GK101951922SQ200880111844
公开日2011年1月19日 申请日期2008年10月13日 优先权日2007年10月11日
发明者佛侬·福勒, 凯文·希尔曼, 莱斯利·普瑞斯特 申请人:菲尔菲德食品有限公司