新的硫酸化寡糖衍生物的制作方法

专利名称：新的硫酸化寡糖衍生物的制作方法
技术领域：
本文所述的 发明涉及具有作为硫酸乙酰肝素-结合蛋白包括类肝素酶的抑制剂 活性的化合物。尤其，本发明涉及硫酸化寡糖衍生物，虽然本发明的范围并不一定局限于 此，但特别地，本发明涉及用特定的、高亲脂性基团修饰的多硫酸化寡糖。本发明还涉及制 备所述化合物、包含所述化合物的组合物的方法、以及所述化合物及其组合物在用于哺乳 动物受试者抗血管生成、防转移、抗炎、抗微生物、抗凝和/或抗血栓形成治疗中的用途。当 将其施用于哺乳动物受试者时，该化合物还具有预防上述病症的作用。
背景技术：
被称作PI-881’2的硫酸化寡糖剂是一种有前途的肿瘤生长和转移抑制剂3’4a并已 在癌症患者中进了临床试验5’6。PI-88是大小在二糖至六糖范围的高度硫酸化、单磷酸化 的甘露糖寡糖混合物7’8。PI-88通过抑制血管生长因子(主要是FGF-I、FGF-2和VEGF)及 其受体与硫酸乙酰肝素的相互作用9a来发挥抗血管生成作用。此外，PI-88是一种有效的 类肝素酶抑制剂，类肝素酶是一种裂解蛋白聚糖的硫酸乙酰肝素侧链的糖苷酶，该蛋白聚 糖是肿瘤细胞周围细胞外基质(ECM)和基底膜的主要成分工’2。类肝素酶与血管生成密切相 关它能从ECM中释放活性的与硫酸乙酰肝素_结合的血管生长因子并且它还参与ECM的 降解和随后的与新血管的生长有关的组织重塑1(1。通过类肝素酶进行的ECM降解在肿瘤细 胞的扩散(转移)中也是至关重要的lia°，允许肿瘤细胞进入血流并停留在远处(在此处其 可形成继发性肿瘤)。除了其抗血管生成作用外，PI-88可通过(i)抑制内源性途径中的蛋白酶，(ii)刺 激组织因子途径抑制物(TFPI)释放，和(iii)激活肝素辅因子II介导的凝血酶抑制来抑 制凝血级联系统。但PI-88不与ATIII相互作用，并因此没有表现出抗-Xa或AT III介导 的抗-IIa活性12’13。在猴子的体内研究表明低剂量的PI-88会刺激所有硫酸乙酰肝素_结 合TFPI从血管细胞壁释放12。除了其对凝血的作用外，TFPI还是一种抗血管生成剂14和 转移抑制剂15。PI-88还显示出阻滞血管平滑肌细胞增殖和内膜增厚16，抑制细胞的单纯疱 疹病毒(HSV)感染和HSV-I及HSV-2的细胞间播散17，抑制登革热和脑炎虫媒病毒小鼠模 型中的传染性和提高存活率，18抑制被动海曼肾炎中的蛋白尿19和在体外对抗恶性疟原虫 (Plasmodium falciparum)的抗疟疾活性 2°。各种其他的多硫酸化寡-和多糖及其衍生物显示出与PI-88类似的生物活性类型 已为人们所熟知21_26。这些生物活性归结于各种硫酸乙酰肝素(HS)-结合蛋白的抑制。近 来，公开了某些具有改善的药物代谢动力学和/或ADME(吸收、分布、代谢、排泄)特征的 硫酸化寡糖衍生物27’28。所述化合物包含一个单一的碳骨架，并因此具备了优于混合物如 PI-88的合成和表征优势。本发明的目的是产生具有更强效力、改善的药物代谢动力学性质和减少了副作用 的HS-类似物。
发明内容
根据本发明的第一个实施方案，本发明提供了一种以下通式的化合物[XJn-Y-ZR1R2I其中X和Y各为一个单糖单元，其中不参与形成糖苷键的各个羟基独立地被SO3M或H 所取代，其中M是任何可药用的阳离子；X和Y是任何D-或L-己糖或戊糖；Y是环状或开环的形式；当Y是还原单糖时，Z是0、N、S或C或其更高的氧化态，或是一个键，与端基碳相 连；R1是选自包括烷基、烯基、炔基、芳基、杂烷基、杂芳基、酰基、芳酰基、烷基酰胺基、 烷基硫酰胺基(alkylthioamido)、三唑基的组的联结子(linker)，或是一个键；R2是选自包括胆留醇基、胆留烷基、胆酸盐、脱氧胆酸盐、直链烷基、支链烷基、取 代烷基、直链酰基，支链酰基、取代酰基的组的亲脂部分；η是0-6的整数；各个化合物的硫酸化程度为总羟基的70至100%，其中当R1是一个键时，则R2不为甘草次酸或其衍生物；当R1是一个键，和η = 0或1，和Z是S时，则R2不为C8或C18直链烷基；当η是3-6，和R1是一个键，及X和Y是α (1 — 4)-连接的葡萄糖时，则R2不为 C12至C18直链烷基；当η是3-5，和R1是一个键，及X和Y是β (1 — 3)-连接的葡萄糖时，则R2不为 C4至C12直链烷基或胆留醇基；和当X和Y是核糖，和R1是一个键时，则R2不为C18基团。根据本发明的第二个实施方案，其提供了一种用于预防或治疗哺乳动物患者的由 血管生成、转移、发炎、凝血/血栓形成、血液甘油三酯浓度升高、微生物感染和/或心血管 疾病引起的病症的药物或兽药组合物，该组合物包含至少一种如第一个实施方案所述的化 合物和用于至少一种所述化合物的可药用或兽用的载体或稀释剂。本发明的第三个实施方案包含式II化合物在用于生产预防或治疗患有由血管生 成、转移、发炎、凝血/血栓形成、血液甘油三酯浓度升高、微生物感染和/或心血管疾病引 起的病症的哺乳动物患者的药物中的用途[XJn-Y-ZR1R2 II其中X和Y各为一个单糖单元，其中不参与形成糖苷键的各个羟基独立地被SO3M或H 所取代，其中M是任何可药用的阳离子；X和Y是任何D-或L-己糖或戊糖；Y是环状或开环的形式；当Y是还原单糖时，Z是0、N、S或C或其更高的氧化态，或是一个键，和与端基碳 相连；R1是选自包括烷基、烯基、炔基、芳基、杂烷基、杂芳基、酰基、芳酰基、烷基酰胺基、烷基硫酰胺基、三唑基的组的联结子(linker)，或是一个键；R2是选自包括胆留醇基、胆留烷基、胆酸盐、脱氧胆酸盐、直链烷基、支链烷基、取 代烷基、直链酰基，支链酰基、取代酰基的组的亲脂部分；n是0-6的整数；和各个化合物的硫酸化程度为总羟基的70至100%。根据本发明的第四个实施方案，本发明提供了一种预防或治疗哺乳动物患者的由 血管生成、转移、发炎、凝血/血栓形成、血液甘油三酯浓度升高、微生物感染和/或心血管 疾病引起的病症的方法，该方法包含给予受试者有效量的至少一种式II的化合物，或包含 至少一种所述化合物的组合物。为了使本发明可以被更容易地理解和实施，现将仅以实施例的方式参照附图，对 其一个或多个优选的实施方案进行描述。附图的简要说明

图1所示为在用于证明化合物的抗血管生成活性的大鼠主动脉血管生成试验中， 血管生成萌芽(angiogenic sprouting)的范围的实例。图2所示为从第0天开始每48天用培养基(用于未经处理的对照组)或试验化 合物处理7天的主动脉培养物的数据。在第7天，在随后的7天中每2-3天向培养物中加 入VEGF(10mg/mL)，然后对血管生成范围进行评分，从而证明该化合物是通过抗血管生成机 制而不是诱导对组织的毒性作用来发挥其抑制作用的。所有这三个化合物都有效抑制了血 管生成(参见表4)。图3所示为在B16小鼠黑色素瘤模型中，未经处理的对照组小鼠和用所选的试验 化合物处理的小鼠的肿瘤体积的中值。就本发明的化合物而言尽管减少了剂量水平，或限 定了暴露时间，但抗肿瘤活性与PI-88或非亲脂性类似物相比仍有所增加。Bid = —日二次 (每天两次)，sid= —日一次(每日一次)，qd=每天(每天)。图4所示为在B16小鼠黑色素瘤模型中，用所选试验化合物处理的荷瘤小鼠的肿 瘤生长抑制百分比(％TGI)数据。尽管减少了本发明化合物的剂量水平，但％TGI值与 PI-88或非亲脂性类似物相比仍有提高。bid =—日二次(每天两次)，sid =—日一次(每
日一次)。图5所示为该试验化合物阻滞小鼠肺部B16F1黑色素瘤细胞群形成的实例。在各 图像下面说明了化合物和给药剂量。图6所示为B16肺转移模型中，以所选试验化合物与盐水对照组相比的百分数计 的肺转移性瘤(lung metastatic nodules)数。与盐水对照组相比，用PI-88和所选化合 物处理的小鼠表现出较少的肺转移性瘤。尽管在大多数情况下减少了本发明化合物的剂量 水平，但肿瘤转移抑制仍然类似于观察到的较高剂量的PI-88的情况。bid= —日二次(每 天两次)，sid= —日一次(每日一次)。图7所示为结肠直肠癌HT29异种移植模型中，用所选试验化合物处理的荷瘤小鼠 的肿瘤生长抑制百分比(％TGI)的数据。就本发明的化合物而言，尽管减少了剂量水平， 但％ TGI值与PI-88或非亲脂性类似物相比仍有提高。bid = —日二次(每天两次)，sid =一日一次(每日一次) 图8所示为试验化合物对细胞与细胞间HSV传递的影响。用 200 PFU HSV-1或HSV-2中的一种感染细胞，然后用补充以甲基纤维素和10 u g/ml试验化合物的EMEM将 其覆盖。该结果用药物处理的细胞中相对于模拟处理对照组中产生的病毒斑块的平均面积 的百分比来表示。捕捉到20个病毒斑块的图像，并使用IM500软件对其进行面积测定。图9所示为试验化合物对HSV病毒粒子结合细胞的影响。在GMKAH1细胞吸附病 毒的2小时期间，在4°C下将特定浓度的试验化合物与用甲基_[3H]胸苷标记的HSV-1或 HSV-2的一起培养。该结果以在用化合物处理的病毒粒子时发现的附着病毒cpm相对于用 模拟处理的对照组的附着病毒cpm的百分比来表示。在用化合物4的试验中，在4°C下附着 在细胞上的模拟处理病毒的附着cpm的平均数就HSV-1而言为4263，就HSV-2而言为1742。 所示值是来自两个独立实验的四次测定的平均值。图10至40所示为本发明的反应流程图和化学结构。优选实施方案的详细说明W0 2005/085264中所述的硫酸化寡糖衍生物为优良的血管生成和由HS-结合蛋 白介导的其他过程的抑制剂。此类化合物具有预防或治疗哺乳动物患者的由血管生成、转 移、发炎、凝血、血栓形成、血液甘油三酯浓度升高、微生物感染和/或心血管疾病引起的病 症的用途。该用途是由于所述化合物能够抑制HS-结合蛋白如生长因子FGF-2和VEGF，以 及类肝素酶的活性产生的。发明人发现如果将硫酸化寡糖用高亲脂性基团例如胆留烷醇或 硬脂酸修饰，所述基团直接或通过联结子与糖类连接，则生成的新化合物显著增强了作为 抗血管生成剂的能力和改善了药物代谢动力学性质。这可由其在各种体外和离体血管生成 试验如生长因子-诱导内皮细胞增殖和迁移试验、Matrigel上的内皮管腔形成试验以及大 鼠主动脉试验中的活性来证明。增强的效力还可在动物肿瘤生长模型中被证明。特别值得 注意的是，较小的硫酸化糖(例如单_至三糖)，与较长的同系物相比通常无活性或仅有弱 的抗血管生成活性(或其他拟HS-活性)，一旦将其加以修饰，其显著增强的活性相似于或 优于其较长的但未经修饰的同系物。某些该化合物还显示出增强的作为抗病毒剂的能力。例如，亲脂性修饰产生了增 强抑制单纯疱疹病毒(HSV)、呼吸道合胞病毒(RSV)、或HIV的细胞感染和细胞与细胞间传 播能力的结果。此外，该修饰可使得某些化合物具有完全灭活病毒颗粒的能力，因而使得这 些化合物具有了比可以抑制病毒结合/进入步骤但不能灭活病毒的未修饰的硫酸化寡糖 (如PI-88)的更强的抗病毒效力。未修饰的硫酸化寡糖的副作用之一是抗凝血活性。本文所述的亲脂性修饰产生了 一种新的化合物，与PI-88相比其具有显著降低的抗凝血活性，这可以产生更宽的治疗窗。 还可消除用PI-88治疗动物时常见的注射部位青肿，因此有效地提高了患者的依从性。如下文概括地描述和实施例中所阐明的那样，可使用各种不同方案来合成本说明 书中所述的硫酸化寡糖衍生物。就式I和式II的主题化合物而言，所述单糖单元X和Y可以是例如任何己糖或戊 糖以及可以是D或L异构体。此类己糖包括葡萄糖、甘露糖、阿卓糖、阿洛糖、塔罗糖、半乳 糖、艾杜糖以及古洛糖.此类戊糖包括核糖、阿拉伯糖、木糖以及来苏糖。所述单糖单元的 糖苷键可以是仅为一种类型或是在构型和连接方面的不同类型。所述的可药用阳离子M可以是任何这类阳离子，但优选地是钠。就整数n而言，n为0-6的整数，优选2、3或4，以提供三_、四-或五-糖化合物。
所述的基团R2可以是任何适合的亲脂部分。但优选地是胆留烷基或丙基硬脂酰 胺。在适用的情况下，式I化合物ZR1上的端基构型可以是a或0或a 端基碳 的混合物。就上文定义的式I和式II化合物中给出的取代基而言，术语“烷基”，当其被单独 地或在复合词如“芳基烷基”中使用时，是指直链、支链或环烃基团。术语“芳基”，当其被单独地或在复合词如“芳基烷基”中使用时，表示芳香烃的单 一的、多环的、共轭的或稠合的残基。芳基可以任选地被一种或多种任选的取代基所取代。术语“酰基”是指基团-C(0)-R，其中R是烷基或芳基基团。由于该R基团可以如 上所述任选地被取代，因此“酰基”是指任选取代的酰基。烷基、芳基或酰基的任意取代基包括卤素(溴、氟、氯、碘)、羟基，(V6烷基(例如甲 基、乙基、丙基(n-和i-异构体))、(^_6烷氧基(例如甲氧基、乙氧基、丙氧基(n-和i-异构 体)、丁氧基(n-，仲-和t-异构体)、硝基、氨基、(V6烷氨基(例如甲基氨基，乙基氨基，丙 基(n-和i-异构体)氨基)、(^_6 二烷基氨基(例如二甲氨基、二乙氨基，二异丙基氨基)、 卤代甲基(例如三氟甲基、三溴甲基、三氯甲基)、卤代甲氧基(例如三氟甲氧基、三溴甲氧 基、三氯甲氧基)和乙酰基。本发明化合物的硫酸化程度通常为至少70%。即，寡糖衍生物的不形成糖苷键中 的羟基的至少70%被SO-所取代。硫酸化程度通常为70至100%，并且优选地是至少高 达 90%。可以通过从糖类结构单元逐步合成的路线或通过从适当长度的寡糖开始并对进 行所需的修饰来制备式I和式II化合物。式I的单糖可以从单糖起始原料直接制备。可 通过多种不同的本领域技术人员所熟知的方法向糖中引进亲脂性修饰。例如，亲脂性基团 可以通过0-、N-、S-或C-糖苷键被引到末端还原糖的端基位置，且可以将所述基团直接连 接于端基位置或可以通过联结子将其连接。本领域技术人员应当能够认可有许多类型的适 当的联结子。应当注意的是然后对所有如上文所述制备的衍生物进行脱保护(通常用NaOMe脱 乙酰基)，并用磺化剂如三氧化硫吡啶复合物或三氧化硫三甲胺复合物磺化所得的多元醇。如上所述，本发明化合物具有预防或治疗哺乳动物受试者的由血管生成、转移、发 炎、凝血、血栓形成、血液甘油三酯浓度升高、微生物感染或心血管疾病引起的病症的用途。 该化合物特别是具有治疗人的上述疾病的用途。该化合物通常以如下文段落所述的药物组 合物的一种成分的形式被给药。用于口服的药物组合物可以是片剂、胶囊、粉末或液态形式。片剂可以包括固体载 体如明胶或辅助剂或惰性稀释剂。液体药物组合物通常包括液体载体如水、石油、动物或植 物油、矿物油或合成油。可以包括生理盐水溶液，或二醇类如乙二醇、丙二醇或聚乙二醇。此 类组合物和制剂一般会含有至少0. 的该化合物。肠胃外给药包括通过以下途径给药静脉内、皮肤或皮下、鼻、肌内、眼内、经上皮 给药、腹膜内和局部给药。局部给药包括皮肤、眼、直肠、鼻的给药，以及通过吸入或通过气 雾剂方式给药。就静脉内、皮肤或皮下注射，或在需要治疗的位置注射而言，所述的活性成 分应该是一种肠胃外可接受的水溶液形式，其应该是无热原和具有适宜的PH、等渗性和稳定性的。使用例如该主题化合物或其衍生物的溶液，本领域技术人员应该可以制备出适宜的溶液。除了至少一种所述化合物和载体或稀释剂之外，本发明的组合物可以进一步包 括可药用或兽药可用的赋形剂、缓冲剂、稳定剂、等渗化剂、防腐剂或抗氧化剂或任何其他 本领域技术人员所熟知的材料。本领域技术人员应该可以理解此类材料应该是无毒的且 不会干扰所述化合物(S)的效力。任何添加剂的确切性质可以取决于该组合物的给药途 径即该组合物是将被口服给药或是肠胃外给药。就缓冲剂而言，水性组合物(aqueous compositions)通常包括这样的物质以使得该组合物保持在接近生理pH或至少pH在约 5. 0至8. 0范围内。本发明的组合物还可以包括除至少一种所述化合物外的活性成分。此类成分将主 要根据它们的效力来选择，例如抗血管生成、抗转移、抗凝血、抗微生物以及抗血栓形成剂， 以及有效对抗升高的血液甘油三酯水平和心血管疾病的物质，但可以根据任何相关的情况 来选择它们。本发明的药物或兽药组合物将以所考虑的具体情况所必需的预防有效或治疗有 效量给予受试者。以组合物方式被给药的至少一种化合物的实际量，以及给药频率和时程 将取决于所治疗的病情或所需的预防的性质和严重度。治疗处方如剂量的确定等将在照料 受试者的执业医师或兽医师的技能范围内。然而通常，用于向人类受试者给药的组合物将 包括每kg体重约0. 01至IOOmg的该化合物，更优选地是包括每kg体重约0. 1至10mg。该化合物可以以其可药用或兽药用的衍生物形式被包括在组合物中。本文所用的 所述化合物的“衍生物”包括盐、与金属离子例如Mn2+和Zn2+的配位络合物、酯类如体内可 水解的酯、游离酸或碱、水合物或前体药物。具有酸性基团如磷酸根或硫酸根的化合物可以 与碱金属或碱土金属如Na、K、Mg以及Ca，和与有机胺如三乙胺和三(2_羟乙基)胺形成盐。 还可以在带有碱性基团如胺的化合物与无机酸(如盐酸、磷酸或硫酸)或有机酸(如醋酸、 柠檬酸、苯甲酸、富马酸或酒石酸)之间形成盐。既具有酸性基团又具有碱性基团的化合物 可以形成内盐。使用本领域技术人员所熟知的技术，在所述化合物上的羟基或羧酸基团与适当的 羧酸或醇反应配偶子之间形成酯。可以在体内或体外将本发明化合物的前体药物衍生物转化成所述的母体化合物。 通常，母体化合物的至少一种生物活性可以在化合物的前药形式中被抑制，和可以通过将 前体药物转化成母体化合物或其代谢产物而将其活化。本发明化合物的前体药物包括使用 保护基，其可以在体内被除去从而释放活性化合物或用来抑制药物的清除。适合的保护基 对本领域技术人员是已知的。仍然如上所述，本发明化合物具有用于制备预防或治疗哺乳动物受试者的由血管 生成、转移、发炎、凝血/血栓形成、微生物感染、升高的血液甘油三酯浓度和/或心血管疾 病引起的病症的药物的用途。此类药物的制备方法对本领域技术人员而言是已知的，并且 其包括用于生产上述药物组合物的方法。现将给出本发明化合物合成路线的一般说明。常规方法脱乙酰基的常规方法
用甲醇钠甲醇溶液(1. 35M，0. 2-0. 6当量)处理全醋酸酯的无水甲醇(0. 1M)(或 甲醇-THF)溶液。室温下搅拌该混合物1-3小时(用TLC进行监测)。加入酸性树脂AG -50W-X8 (H+型)直至调节pH = 6-7，过滤该混合物，并用甲醇冲洗该树脂。真空浓缩合并 的滤液和冲洗液，并彻底干燥从而得到多元醇产物。磺化作用的常规方法将DMF中的多元醇与S03 三甲胺或S03 吡啶复合物(2当量/醇)的混合物进行 加热(60°C，o/n)。用甲醇处理冷却(r. t.)的反应混合物，然后通过添加Na2C03(10% w/w) 使其变为碱性(以使PH> 10)。将该混合物过滤，并蒸发以及共蒸发(水)该滤液。将粗制 的多硫酸化的物料溶解于水中，并用分子排阻色谱法(参见下文)进行处理，从而得到所述 的硫酸化产物。当需要时，在冷冻干燥之后，将该产物通过离子交换树脂柱(AG -50W-X8， Na+型，1\4(^，去离子水，15!^)以将该产物均一地转化为钠盐形式。蒸发收集到的溶液并 冷冻干燥从而得到最终产物。分子排阻色谱法在5X 100cm 柱中的 Bio-Gel P-2 上用 0. 1M 的 NH4+ HCOf 以 2. 8mL/ 分钟的流速 进行分子排阻色谱(SEC)，收集2. 8分钟(7. 8mL)的级分。通过在硅胶板上点样和炭化显像 来分析级分的糖类含量，和/或通过二甲基亚甲蓝(DMB)试验来分析多带电粒种29。最后， 通过CE8来检测组分的纯度并将那些被认为是无盐的收集起来并冷冻干燥。实施例1 十二烷基2，3，4，6-四-0-乙酰基-a _D_甘露吡喃糖基_ (1 — 3) _2，4， 6-三-0-乙酰基-a-D-甘露吡喃糖基-(1 — 3)-2，4，6-三-0-乙酰基-a_D_甘露吡喃 糖基-(1 — 3)-2，4，6-三-0-乙酰基-a-D-甘露吡喃糖基-(1 — 2) _3，4，6_三_0_乙酰 基-a-D-甘露吡喃糖苷(2)向三氯乙酸亚氨酸酯128(0. 469g,0. 285mmol)的DCM(15mL)溶液中加入1_十二 烷醇(0. 849mmol, 3当量)和3A MS (50mg)。在-20°C下搅拌该混合物20分钟。加入 TMSOTf (103u L,0. 57mmol,2 当量)并在用 Et3N(38 ii L，0. 285mmol, 1 当量)淬灭前将该 混合物在-20°C下搅拌50分钟。升至室温后，过滤该混合物并用DCM冲洗固形物。将合 并的滤液和冲洗液在硅胶上蒸发，并通过柱层析(二氧化硅2X20cm，CHC13, CHCI3-甲醇 99 1至98 2梯度洗脱)进行纯化从而得到无色胶质形式的糖苷2。获得每部分中 都含有副产物的两部分级分 BnNHAc (76mg, 2 BnNHAc = 5:3 ； 179mg, 2 BnNHAc = 5 11)。屮 NMR(CDC13,400MHz) :5. 30-5. 16 (m，8H)，4. 99-4. 87 (m，8H)，4. 31-3. 77 (m，19H)， 3. 68-3. 6 l(m, 1H, 0CH2)，3. 44-3. 36 (m, 1H, 0CH2)，2. 18，2. 17，2. 15，2. 11，2. 10，2. 09，2. 07， 2. 06,2. 05,2. 02,2. 01，1. 97，1. 95(都是单峰，总计 48H, 16XAc)，1. 58(五重峰，2H，J = 6. 7，CH2)，1. 33-1. 22 (m, 18H，9 X CH2)，0. 86(t，3H，J = 6. 7，CH3)。十二烷基a -D-甘露吡喃糖基_ (1 — 3) - a _D_甘露吡喃糖基-(1 — 3) - a _D_甘 露吡喃糖基_ (1 — 3) - a -D-甘露吡喃糖基-(1 — 2) - a -D-甘露吡喃糖苷(3)按照脱乙酰基的常规操作，用NaOMe(甲醇中llM，5ii L，0. 055 u U mol)处理甲醇 (3mL)中的糖苷2 (72mg, 0. 043mmol)。室温下搅拌该混合物20小时，加入AG50WX8树脂(H+ 型)对其进行中和，过滤并用水清洗。用乙酸乙酯(X2)萃取该溶液以除去BnNHAc。将水相 进行蒸发以至干燥，将残留物冷冻干燥从而得到无定形固体多元醇3，将其直接用于下一步 骤。1HNMR(D20，400MHz，内标 4. 60ppm DOH) 8 4. 97-4. 83(m，5H)，4. 06-3. 21 (m, 32H), 1. 41 (brs，2H)，1. 11 (br s, 18H)，0. 71(t，3H，J = 6. 7，CH3)。十二烷基2，3，4，6_四_0_磺酸钠-a-D-甘露吡喃糖基_(1 — 3)_2，4， 6-三-0-磺酸钠-a -D-甘露吡喃糖基_ (1 — 3) -2,4,6_三_0_磺酸钠-a _D_甘露吡喃 糖基-(1 — 3)-2，4，6-三-0-磺酸钠-a-D-甘露吡喃糖基-(1 — 2)_3，4，6_三_0_磺酸 钠-a -D-甘露吡喃糖苷(4)按照磺化作用的标准操作，对多元醇3(0. 43mmol)进行磺化并用SEC对其进行 纯化从而得到白色粉末产物 4(77mg)。1HNMR(D20,400MHz,内标 4. 60ppm DOH) 8 5. 19(s， 1H) ,5. 15 (d, 1H, J = 1. 9) ,5. 10 (d, 1H, J = 1. 9) ,5. 07 (d, 1H, J = 1. 9)，4. 89 (m，1H)， 3. 77-3. 64 (m, 30H,糖)，3. 48-3. 41 (m, 1H, 0CH2)，3. 33-3. 27 (m, 1H, 0CH2)，1. 30 (m, 2H, CH2)， 1. 10-0. 90 (m, 18H，9xCH2)，0. 54(t，3H，J = 6. 7，CH3) 实施例2 :12-叠氮基-1-十二烷醇以如下次序用叠氮化钠(121mg，1.855mm0l，2当量)、碘化四丁基铵(17mg，
0.0464mmol, 0. 05当量)和饱和的碳酸氢钠水溶液(0. 9mL)处理12-溴-1-十二烷醇 (246mg,0. 927mmol)在叔-丁醇(1.8mL，0. 5M)中的混合物。室温下搅拌该混合物4天。用 Celite的短柱过滤该混合物，并用乙酸乙酯(20mL)冲洗滤饼。将合并的滤液和冲洗液在硅 胶上蒸发，并用快速柱层析(2. 5X 18cm，己烷-乙酸乙酯6 1,4 1至2 1梯度洗脱)将 其纯化从而得到无色油状12-叠氮基-1-十二烷醇(1931^，92%)。屮NMR(⑶Cl3，400MHz) 3. 62 (t,2H, J = 7. 0, 0CH2)，3. 24 (t，2H，J = 7. 0，NCH2)，1. 61-1. 51 (m, 4H)，1. 35-1. 25 (m, 16H).12-叠氮基十二烷基2，3，4，6-四_0_乙酰基-a _D_甘露吡喃糖基-(1 — 3)_2， 4，6-三-0-乙酰基-a -D-甘露吡喃糖基-(1 — 3) -2，4，6-三-0-乙酰基-a _D_甘露吡喃 糖基-(1 — 3)-2，4，6-三-0-乙酰基-a-D-甘露吡喃糖基-(1 — 2) _3，4，6_三_0_乙酰 基-a-D-甘露吡喃糖苷(5)向三氯乙酸亚胺酸酯1 (0. 325g，0. 197mmol)的DCM(15mL)溶液中加入12-叠 氮基十二烷醇(1.5当量)和3人MS(50mg)。在-20°C下搅拌该混合物20分钟。加入 TMS0Tf(54uL,0. 296mmol，1. 5当量)并在用Et3N(l当量)猝灭前在_20°C下搅拌该混合 物30分钟。升至室温后，过滤该混合物并用DCM冲洗固形物。将合并的滤液和冲洗液在 硅胶上蒸发，并用柱层析对其进行纯化(二氧化硅2X20cm，用CHC13，CHC13-甲醇99 1 至98 2梯度洗脱)从而得到含有副产物BnNHAc的无色胶质糖苷5(71. lmg，5 BnNHAc =1:1)。力 NMR(CDC13，400MHz) S 5. 29-5. 14(m，8H)，5. 01-4. 86(m，8H)，4. 28-3. 75(m， 19H)，3. 64 (dt, 1H，J = 9. 5，7. 0，0CH2)，3. 39 (dt, 1H，J = 9. 5，7. 0，0CH2)，3. 22 (t, 2H, J = 7. 0，NCH2), 2. 16，2. 15，2. 11，2. 10，2. 09，2. 09，2. 09，2. 09，2. 07，2. 06，2. 04，2. 04，2. 01，
1.95 (都是单峰，总计 48H, 16XAc)，1. 57 (m, 4H, 2XCH2)，1. 36-1. 22 (m, 16H，8XCH2)。12-(4-苯基-[1，2，3]三唑 基)十二烷基 2，3，4，6_ 四 _0_ 乙酰基-a _D_ 甘 露吡喃糖基-(1 — 3)-2，4，6_三-0-乙酰基-a-D-甘露吡喃糖基-(1 — 3)_2，4， 6-三-0-乙酰基-a -D-甘露吡喃糖基-(1-3) -2,4,6_三_0_乙酰基-a _D_甘露吡喃糖 基-(1 — 2)-3，4，6-三-0-乙酰基-a-D-甘露吡喃糖苷(6)以下列顺序向lmL HPLC样品瓶中装载叠氮化物5(71mg，41.5iimol)、叔-丁醇 (100iiL，0. 4M)、苯乙炔(83umol,2 当量)、硫酸铜溶液(水中 0. 3M, 14 u L, 4. 2 u mol,lOmol % )和抗坏血酸钠溶液(水中1M，12. 4uL,12. 4u mol，30mol % )。室温下搅拌该混合 物2天。然后在硅胶上蒸发该混合物并通过快速柱层析(lX18cm，用己烷-乙酸乙酯6 1， 4 1,2 1,1 1,1 2至1 3梯度洗脱)对其进行纯化，从而得到无色胶质苯基三唑 6(46. 3mg,62% )。NMR(CDC13，400MHz) 8 7. 82(d,2H, J = 7. 2，Ph)，7. 75 (s，1H，三唑)， 7. 41 (t,2H, J = 7. 2, Ph)，7. 31 (t，1H，J = 7. 2，Ph)，5. 30-5. 15 (m, 8H)，5. 03-4. 87 (m, 8H)，
4.38 (t，2H，J = 7. 2，NCH2)，4. 29-3. 77 (m, 19H)，3. 64 (dt, 1H，J = 9. 6，6. 8，0CH2)，3. 40 (dt, 1H, J = 9. 6,6. 8，0CH2), 2. 17，2. 16，2. 16，2. 13，2. 11，2. 11，2. 11，2. 10，2. 09，2. 07，2. 05，
2.05,2. 02,2. 00，1. 96(都是单峰，总共 48H，16XAc)，1. 93 (m, 2H, CH2)，1. 57 (m, 2H, CH2)，
1.34-1. 24 (m, 16H，8XCH2).12-(4-苯基-[1，2，3]三唑 基)十二烷基 2，3，4，6_ 四 _0_ 磺酸钠-a _D_ 甘 露吡喃糖基-(I — 3)-2，4，6-三-0-磺酸钠-a-D-甘露吡喃糖基-(1 — 3)_2，4， 6-三-0-磺酸钠-a -D-甘露吡喃糖基-(1-3) -2,4,6_三_0_磺酸钠-a _D_甘露吡喃糖 基-(1 — 2)-3，4，6-三-0-磺酸钠-a-D-甘露吡喃糖苷(8)(a)按照脱乙酰基作用的常规操作，用NaOMe(甲醇中11M，50 y L，0. 55 y mol)处 理甲醇(4. 5mL)中的全醋酸酯6(46mg，0. 0254mmol)。室温下搅拌该混合物18小时，通过 加入AG50WX8树脂(H+型)将其中和，过滤，并用甲醇冲洗。蒸发该滤液并在下面为P205 的真空干燥器中干燥残余物，并使用而不用进行进一步的纯化和鉴别。(b)按照磺化作 用的标准操作，对上述多元醇7进行磺化并通过SEC进行纯化，从而得到白色粉末产物 8(45mg)。屯 NMR(D20，400MHz，内有 4. 60ppm DOH) S 7. 88 (s，1H，三唑-CH)，7. 47-7. 44 (m， 2H) ,7. 21-7. 10(m,3H) ,5. 23 (br s，1H)，5. 19 (d，1H，J = 1. 5)，5. 12 (d，1H，J = 1.8)，
5.10 (d, 1H, J = 1. 5)，4. 91 (m, 1H)，4. 76-3. 72 (m, 32H,糖和 NCH2)，3. 37-3. 30 (m, 1H, 0CH2)，
3.23-3. 17 (m, 1H, 0CH2)，1. 51 (m, 2H, CH2)，1. 12 (m, 2H, CH2)，0. 90-0. 63 (m, 16H, 8 X CH2)。实施例3 12-(4-萘基-1-基_[1，2，3]三唑基)十二烷基2，3，4， 6-四-0-乙酰基-a-D-甘露吡喃糖基-(1 — 3)-2，4，6-三-0-乙酰基-a_D_甘露吡喃 糖基-(1 — 3)-2，4，6-三-0-乙酰基-a-D-甘露吡喃糖基-(1 — 3) _2，4，6_三_0_乙酰 基-a-D-甘露吡喃糖基-(1 — 2)-3，4，6-三-0-乙酰基-a-D-甘露吡喃糖苷(9)以下列顺序向lmL HPLC样品瓶中装载叠氮化物5(86mg，50. 3iimol)、叔-丁醇 (100 u L，0. 4M)、1-乙炔基萘(83 umol,2 当量)、硫酸铜溶液(水中 0. 3M，14uL,4. 2u mol， 10mol% )以及抗坏血酸钠溶液(1M，在水中，12. 4iiL，12. 4iimol，30mol% )。室温下搅拌 该混合物11天。然后在硅胶上蒸发该混合物并用快速柱层析(IX 18cm，用己烷-乙酸乙 酯6 1,4 1,2 1,1 1，1 2至1 3梯度洗脱)将其纯化，从而得到无色胶质萘 基三唑 9 (24. 2mg, 26 % ) o NMR (CDC13，400MHz) 8 8. 38-8. 33 (m, 1H)，7. 92-7. 86 (m, 2H)， 7. 80 (s, 1H,三唑-CH)，7. 72 (dd, 1H，J = 7. 3，1. 5)，7. 54-7. 48 (m, 3H)，5. 31-5. 15 (m, 8H)，
5.03-4. 87 (m, 8H)，4. 47 (t，2H，J = 7. 3，N_CH2)，4. 30-3. 77 (m, 19H)，3. 64 (dt, 1H，J = 9. 7，
6.8，0CH2), 3. 40 (dt, 1H, J = 9. 7,6. 8，0CH2), 2. 17，2. 16，2. 16，2. 13，2. 12，2. 11，2. 11，
2.10，2. 09，2. 07，2. 06，2. 05，2. 02，2. 00，1. 97，1. 57 (15s，都是 3H, 2. 100 为 6H, 16XAc)， 2. 07-1. 95 (m,与 Ac 的单峰重叠，2H, CH2)，1. 57 (m, 1H, CH2)，1. 42-1. 23 (m, 16H, 8 X CH2)。12-(4-萘-1-基 _[1，2，3]三唑 基)十 二烷基 2，3，4，6_ 四 _0_ 磺酸 钠-a -D-甘露吡喃糖基_ (1 — 3) -2,4,6-三_0_磺酸钠-a _D_甘露吡喃糖基-(1 — 3) _2，4，6-三-0-磺酸钠-a -D-甘露吡喃糖基-(1-3) -2,4,6_三-0-磺酸钠-a _D_甘露吡喃 糖基-(1 — 2)-3，4，6-三-0-磺酸钠-a-D-甘露吡喃糖苷(11)(a)按照脱乙酰基作用的常规方法，用NaOMe(甲醇中11M，40 y L，0. 44 y mol)处 理甲醇(3mL)中的糖苷9(39.6mg，0.0213mmol)。室温下搅拌该混合物24小时，通过加入 AG50WX8树脂(H+型)将其中和，过滤并用甲醇进行冲洗。蒸发滤液并在下面为P205的真 空干燥器中干燥残余物。(b)按照磺化作用的标准操作，磺化上述多元醇10并用SEC进 行纯化，从而得到白色粉末产物11 (40mg，68% )。NMR(D20，400MHz，内有4. 60ppm DOH) 8 8. 05 (s, 1H,三唑-CH)，7. 97 (d, 1H, J = 8. 3)，7. 90 (d, 2H, J = 7. 8)，7. 55-7. 40 (m, 4H)， 5. 44-5. 22 (m, 4H)，5. 09-3. 82 (m, 33H,糖和 NCH2)，3. 41-3. 33 (m, 1H, 0CH2)，3. 25-3. 16 (m, 1H, 0CH2)，1. 78 (五重峰，2H, CH2)，1. 14-0. 79 (m, 18H, 9 X CH2)。实施例4 :2，3，4，6-四-0-乙酰基-a-D-甘露吡喃糖基_(1 — 3)_2，4， 6-三-0-乙酰基-a -D-甘露吡喃糖基-(1-3) -2,4,6_三_0_乙酰基-a _D_甘露吡喃糖 基-(1 — 2)-2，3，4，6-四-0-乙酰基-D-甘露吡喃糖(13)将四糖123°全乙酰化(Ac20、吡啶、DMAP，室温，4天)并用快速色谱法(硅胶，己 烷-乙酸乙酯梯度洗脱)进行纯化，从而得到油状全醋酸酯13。屮NMR(400MHz，⑶Cl3) 8 6. 20 (d, 1H, Jlj2 = 1.8，H-l)，5. 35-5. 15 (m, 7H)，5. 05-4. 92 (m, 5H)，4. 30-3. 85 (m, 15H)， 2. 18 (s,6H, OAc)，2. 14 (s,6H, OAc)，2. 12 (s,6H, OAc)，2. 10 (s, 3H, OAc)，2. 08 (s,6H, OAc)， 2. 06 (s, 3H, OAc)，2. 03 (s, 3H, OAc)，2. 02 (s,6H, OAc)，1. 97 (s, 3H, OAc)。2,3,4,6-四-0-乙酰基-a-D-甘露吡喃糖基-(1 — 3)_2，4，6_三_0_乙酰 基-a -D-甘露吡喃糖基_ (1 — 3) -2,4,6-三_0_乙酰基-a _D_甘露吡喃糖基-(1 — 2) _3， 4,6-三-0-乙酰基- a -D-甘露吡喃糖基三氯乙酸亚胺酸酯(14)在0°C下用苄胺(0. 137g, 1. 3mmol, 139 u L)处理乙醚(3. OmL)和 THF (750 u L)中 的全醋酸酯13(5001^，3981111101)。将该混合物缓慢地升至室温并反应一整夜。蒸发掉溶 剂并将残留物溶于DCM中，用0. 5M冷HC1 (X3)冲洗，然后用盐水冲洗，并将该有机溶液进 行干燥(Na2S04)，过滤，蒸干。将残留物溶于无水DCM中，并加入分子筛(3人，30mg)、无水碳 酸铯(12. 9mg,39. 8umol)和碳酸钾(llOmg, 796 u mol) 在加入三氯乙腈(115mg,80uL, 796umol)前，将该混合在0°C下进行搅拌。在室温下搅拌该混合物5小时直至通过TLC显 示完全转化。过滤该混合物并蒸发溶剂，从而得到粗制品，将该粗制品进行柱层析(Si02， 6 1 Hex EtOAc 至 1 3 Hex EtOAc，用 1 2 Hex EtOAc 洗脱产物)，从而得到 澄清油状的在置于冰箱中固化的三氯乙酸亚胺酸酯14(307. 5mg，57% )。NMR(400MHz, CDC13) 6 6. 40 (d,0. 7H, Jlj2 = 1. 5,H-l1 a ) ,6. 22 (d,0. 3H, Jlj2 = 1. 5,H-l1 3 )，5. 40-5. 14(m, 7H)，5. 05-4. 89 (m, 5H)，4. 31-3. 84 (m, 15H)，2. 19-1. 98 (m, 39H, OAc)。33-胆甾醇基2，3，4，6_四_0_乙酰基-a _D_甘露吡喃糖基-(1 — 3)_2，4， 6-三-0-乙酰基-a -D-甘露吡喃糖基-(1-3) -2,4,6_三_0_乙酰基-a _D_甘露吡喃糖 基-(1 — 2)-3，4，6-三-0-乙酰基-a-D-甘露吡喃糖苷(15)在-20°C下将 DCE (在3AMS 上干燥，0. 7mL，0. 094M)中的 14 (90mg，0. 0663mmol) 和胆固醇(39. 8mg,0. 0995mmol, 1. 5当量)溶液与3AMS( 50mg) —起进行搅拌同时用注 射器加入11^(7^(181^，0.0995讓01，1.5当量)。在40分钟的时间内将温度(外部)升 至-5°C。黄色慢慢转变成橙色(略带红色)。加入Et3N(50iiL)。该颜色立即消失。将该混合物用DCM(20mL)进行稀释并用饱和的Na2C03-盐水冲洗，干燥(Na2S04)并过滤。在硅 胶上蒸发滤液并用柱层析进行纯化(二氧化硅IX 18cm，用己烷-乙酸乙酯4 1,2 1， 1 1，1 2至1 3梯度洗脱)，从而得到无色胶质的糖苷15(581^，55%)。屮NMR(CDC13， 400MHz) 5. 34-5. 14 (m, 8H,糖和胆固醇-H6)，5. 05-4. 90 (m, 6H，糖)，4. 30-3. 84 (m, 15H, 糖)，2. 34-0. 80 (m, 30H,胆固醇)，2. 17，2. 16，2. 13，2. 06，2. 05，2. 02，2. 01，2. 01，1. 96 (都 是单峰，每个 3H，9XAc)，2. 11，2. 10 (都是单峰，每个 6H,4XAc) ,0. 98(s，3H，Me) ,0. 90 (d, 3H, J = 6. 4，Me)，0. 85(d，3H，J = 6. 4，Me)，0. 84(d，3H，J = 6. 4，Me)，0. 66(s，3H，Me) ；ESMS m/z 1604([M+Na]+)。33 -胆甾醇基a -D-甘露卩比喃糖基-(1 — 3)_a -D-甘露卩比喃糖 基-(1 — 3) - a -D-甘露吡喃糖基-(1 — 2) - a -D-甘露吡喃糖苷(16)将甲醇(在3 A MS上干燥，3mL)中的15 (56mg，0. 0354mmol)的溶液与甲醇(50 y L) 中的11M NaOMe —起搅拌40分钟。形成一种白色沉淀。加入THF(lmL)而没有成功的提高 溶解度。加入DMF(4mL)。一些沉淀溶解。将该混合物总共搅拌6小时。加入水(0. 8mL)以 使得成为澄清溶液。加入AG50W-X8树脂(H+型)将pH调节到6 7。过滤该混合物并用 甲醇(lmL)冲洗树脂。由于产生严重的泡沫所以停止了在旋转蒸发器上进行的蒸发。通过 用气流蒸发和冻干该混合物，从而得到白色固体多元醇16，该白色固体在下面为P205的真 空干燥器中干燥一整夜并直接用于下一步骤。33-胆甾醇基2，3，4，6_四_0_磺酸钠-a-D-甘露吡喃糖基-(1 — 3)_2，4， 6-三-0-磺酸钠-a -D-甘露吡喃糖基-(1-3) -2,4,6_三_0_磺酸钠-a _D_甘露吡喃糖 基-(1 — 2)-3，4，6-三-0-磺酸钠-a-D-甘露吡喃糖苷(17)按照磺化作用的标准操作，磺化多元醇16 (0. 0354mmol)。通过加入5M Na0H(561 u L，2. 81mmol,以S03吡啶复合物计2. 05当量)将该冷却的粗制混合物进行碱 化。蒸干后，将残留物溶解于水中(3mL)并通过SEC进行纯化。将纯化组分合并在加有1M Na2C03 的纯水中用 Slide-A-Lyser Cassette 2K(0. 5_3mL)透析一整夜。另外加 lMNa2C03
并更换新鲜的纯水。进行一整夜透析。除去黄色溶液并冷冻干燥，从而得到灰白色粉末 产物 17 (34. 8mg, 42 % ) o NMR(D20,400MHz) 8 6. 41-6. 26 (m, 4H,糖和胆甾醇基-H6)， 5. 09 (s，1H)，5. 03 (d, 1H, J = 2. 2) ,4. 86 (s, 1H)，4. 73-3. 94 (m, 22H)，3. 51 (m, 1H,胆甾醇 基-H3)，2. 35(dm，lH，J = 11. 7，胆甾醇基-H4)，2. 24(dm，lH，J = 11. 7，胆甾醇基-H4)， 1. 90-0. 51 (m,包括 0. 869 [s, 3H]，0. 766 [d, 3H, J = 6. 6]，0. 689 [d, 3H, J = 6. 6]，0. 686 [d, 3H, J = 6. 6]，和 0. 533[8，3扣，43扎胆甾醇基)。实施例5:胆甾烷醇将胆固醇(500mg)加入到乙酸乙酯中。加入10%钯碳(cat.)，并在氢气球下 搅拌该混合物一整夜。过滤该混合物，蒸发溶剂，从而得到定量产率的白色固体产物。咕 NMR(400MHz, CDC13) 6 3. 58 (m, 1H，CHOH)，2. 44 (宽峰，1H，OH)，1. 97-0. 83(m，31H)，0. 88 (d, 3H，J = 6. 6，CH3)，0. 85 (dd, 6H, J = 1. 5，J = 6. 6，CH3)，0. 79 (s, 3H, CH3)，0. 64 (s, 3H, CH3)。33-胆甾烷基2，3，4，6_四-0-乙酰基-a _D_甘露吡喃糖基-(1 — 3)_2，4， 6-三-0-乙酰基-a -D-甘露吡喃糖基-(1-3) -2,4,6_三_0_乙酰基-a _D_甘露吡喃糖 基-(1 — 2)-3，4，6-三-0-乙酰基-a-D-甘露吡喃糖苷(18)在氩气条件下向14(600mg，4.42X10_4摩尔)的DCM(32mL)溶液加入胆甾烷醇(300mg)。在-20°C下搅拌该混合物20分钟。加入TMS0Tf(40 y L)。在_20°C下搅拌该混 合物40分钟，然后加热到-10°C 20分钟。向该混合物加入三乙胺(70 y L)并将其升至室 温。蒸发溶剂。用柱层析(Si02:3 1 Hex EtOAc至1 2Hex EtOAc)纯化该粗制 品，从而得到澄清的油状糖苷 18(220mg，31% )。NMR(400MHz，CDC13) S :5. 35-5. 15 (m， 7H)，5. 03-4. 91 (m, 6H)，4. 31-3. 85 (m, 15H)，3. 51 (m, 1H, C_3)，2. 18 (s, 3H, OAc)，2. 17 (s, 3H, OAc), 2. 14(s，3H，OAc), 2. 12(s，6H，OAc)，2. ll(s，3H，OAc)，2. 10(s，3H，OAc)，2. 07(s，3H， OAc)，2. 06 (s, 3H, OAc)，2. 05 (s, 3H, OAc)，2. 03 (s, 3H, OAc)，2. 00 (s, 3H, OAc)，1. 97-0. 78 (m, 31H，胆甾烷醇)，1. 97(s，3H，OAc), 0. 88(d，3H，J = 6. 6，CH3)，0. 85(dd，6H，J = 1. 5，J = 6. 6，CH3)，0. 79 (s, 3H, CH3)，0. 63 (s, 3H, CH3)。33 -胆甾烷基ci-D-甘露卩比喃糖基-(1 — 3)-a-D-甘露卩比喃糖 基-(1 — 3) - a -D-甘露吡喃糖基-(1 — 2) - a -D-甘露吡喃糖苷(19)按照常规操作将糖苷18(43. lmg)进行脱乙酰化，从而得到白色固体多元醇 19 (21mg，74% )，将该多元醇进行反应而不进行纯化或鉴定。33-胆甾烷基2，3，4，6_四-0-磺酸钠-a-D-甘露吡喃糖基-(1 — 3)_2，4， 6-三-0-磺酸钠-a -D-甘露吡喃糖基-(1-3) -2,4,6_三_0_磺酸钠-a _D_甘露吡喃糖 基-(1 — 2)-3，4，6-三-0-磺酸钠-a-D-甘露吡喃糖苷(20)将多元醇19(19mg，18. 3iimol)溶解于 DMF(1.3mL，0. 015M)中。加入 S03.批 啶(6当量/0H，1.43mmOl，227mg)并在60°C下搅拌该混合物一整夜。在一次性加入5M Na0H(613uL)从而中和该溶液之前将该混合物在冰水中冷却。蒸发溶剂。残留物用C18 SPE 柱脱色，并通过用2000MWC0透析盒，在48小时的时间换三次水的透析方法除去盐分，然后 冷冻干燥，从而得到白色固体产物20 (19. 2mg,44% )。咕NMR(400MHz, D20) 8 5. 52-5. 46 (m, 3H)，5. 26-5. 20 (m, 2H)，5. 04 (m, 1H)，4. 88 (m, 1H)，4. 84-4. 15 (m，21H)，3. 76 (m, 1H, C_3)， 2. 00-0. 81 (m, 31H,胆甾烧醇)，0. 91 (d, 3H, CH3)，0. 86 (d, 6H，J = 6. 2，CH3)，0. 81 (s，3H, CH3)，0. 66(s，3H，CH3)。实施例6. 3-叠氮基丙基-1-基2，3，4，6_四_0_乙酰基-a-D-甘露吡喃糖 基-(1 — 3)-2，4，6_三-0-乙酰基-a-D-甘露吡喃糖基-(1 — 3) _2，4，6_三_0_乙酰 基-a-D-甘露吡喃糖基-(1 — 2)-3，4，6-三-0-乙酰基-a-D-甘露吡喃糖苷(21)将BF3 .Et20 (78mg，550 u mol)加入到全醋酸酯 13 (276mg，220 u mol)和 3-叠氮基 丙烷-1-醇31 (67mg, 660 u mol)的无水DCE (8mL)溶液中。在一个密封的容器中，在加入另外 一部分BF3 -E^OdlSmg^lO u mol)和将该溶液在加热3小时之前，在60°C下搅拌该溶液2 小时。将该溶液冷却至室温并将其倒入到碎冰、NaHC03(饱和水溶液)和盐水的混合物中。用 乙酸乙酯萃取该混合物，并用1 1盐水NaHC03 (饱和水溶液)进一步冲洗该有机层，然 后干燥(Na2S04)，蒸发和用无水甲苯共蒸馏。加入无水DCM(5mL)、醋酸酐(66mg，648 y mol)、 Et3N(89mg, 875 u mol)和DMAP (晶体)，在_20°C下储存该溶液一整夜。直接将溶液加到准 备好的快速色谱柱(17X2cm硅胶，60 40至75 25 EtOAc Hx梯度洗脱)上，从而 得到油状的糖苷 21(176mg，61% )。ESMS :m/z 1319. 69 ([M+Na]+) NMR(400MHz, CDC13) 8 5. 31-5. 12(m，7H)，5. 00-4. 87(m，6H)，4. 26-3. 94(m，11H)，3. 90-3. 81 (m，2H)，3. 77 (dt, 1H, J = 9. 9,6. 0) ,3. 47 (dt, 1H, J = 9. 9，6. 0)，3. 42-3. 32 (m, 2H)，2. 14 (1)，2. 13 (5) ,2. 10, 2. 08X2,2. 06X2,2. 05，2. 03 (2)，2. 02(5)，1. 99，1. 98，1. 93(13Xs, 13X3H, OAc X 13)，1.84(五重峰，1H，J = 6. 2). 13C NMR(100MHz，CDC13) S : 170. 6，170. 5，170. 4，170. 3， 170. 1 (4)，170. 0 (9)，169. 9 (2)，169. 8 (8)，169. 7，169. 6，169. 5 (4)，169. 4 (5)，169. 3，99. 4， 98. 9,98. 8,98. 1,76. 8,75. 1(5) ,75. 1(1) ,70. 9,70. 8,70. 1,69. 6,69. 5,69. 4,69. 2,68. 5， 68. 3,67. 3,66. 6,66. 1,65. 5,64. 7,62. 5,61. 9,61. 7,48. 0,28. 5，20. 8 (4)，20. 7 (6)，20. 7， 20. 6，20. 5 (4)，20. 5 (2)，20. 4 (9)，20. 4 (7)。3-硬酯酰胺丙基2，3，4，6_四_0_乙酰基-a-D-甘露吡喃糖基-(1 — 3)_2，4， 6-三-0-乙酰基-a -D-甘露吡喃糖基-(1-3) -2,4,6_三_0_乙酰基-a _D_甘露吡喃糖 基-(1 — 2)-3，4，6-三-0-乙酰基-a-D-甘露吡喃糖苷(22)(a)将糖苷21(500mg，386iimol)溶解于THF(lOmL)中。加入三苯膦，聚合物键合 (725mg)，并在室温下搅拌该混合物1小时。加入水(210 y L)，在50°C下搅拌该混合物4小 时。冷却该混合物，过滤，并蒸发溶剂，从而得到一种白色固体，不进行进一步的纯化或鉴定 将该固体用于下一步骤中。(b)将上述胺(250mg，197iimol)溶解于DCM(6mL)中。加入硬酯酰氯(2当量， 394 u mol, 119mg, 133 u L)，接着加入三乙胺，室温下搅拌该混合物5小时。蒸发溶剂，将 残留物加到DCM中，用NaHC03(饱和的)冲洗，干燥(Na2S04)，蒸发溶剂。将该粗制的产 物用柱层析(Si02 :DCM —4%甲醇/DCM)进行纯化，从而得到澄清的油状酰胺22 (102mg， 33% ) o NMR (400MHz, CDC13) S 5. 86 (宽峰 m，1H，NH)，5. 32-5. 12 (m，7H)，5. 02-4. 88 (m， 6H)，4. 28-3. 96 (m, 15H)，3. 73 (m, 1H, CH20)，3. 45 (m, 1H, CH20)，3. 32 (m, 2H, CH2N)，2. 15 (s， 3H，0Ac)，2. 15(s，3H，OAc)，2. 12 (m，2H，CH2C0)，2. 11 (s，3H，OAc)，2. 10 (s，6H，OAc)，2. 08 (s, 6H, OAc)，2. 06 (s,3H, OAc)，2. 04 (s,6H, OAc)，2. 00 (s,3H, OAc)，1. 99 (s,3H, OAc)，1. 95 (s, 3H, OAc)，1. 79 (m, 2H, CH2)，1. 58 (m, 2H, CH2)，1. 28-1. 20 (m, 28H, CH2)，0. 84 (t, 3H, CH3)。3-硬酯酰胺丙基a -D-甘露吡喃糖基_(1 — 3) _ a _D_甘露吡喃糖 基-(1 — 3) - a -D-甘露吡喃糖基-(1 — 2) - a _D_甘露吡喃糖苷(23)按照常规操作将酰胺22(101. 6mg)脱去乙酰基，从而得到白色固体多元醇 23 (61mg, 93% ),不进行进一步纯化或鉴定而用于反应。3-硬酯酰胺丙基2，3，4，6_四_0_磺酸钠-a-D-甘露吡喃糖基-(1 — 3)_2，4， 6-三-0-磺酸钠-a -D-甘露吡喃糖基-(1-3) -2,4,6_三_0_磺酸钠-a _D_甘露吡喃糖 基-(1 — 2) -3，4，6-三-0-磺酸钠-a _D_甘露吡喃糖苷(24)将多元醇23(60. 9mg，62iimol)溶解于 DMF(0. 02M，3. lmL)中。加入 S03.批啶(3 当量/0H，2. 42mmol,385mg)，并在60°C下搅拌该溶液一整夜。在冰水中冷却该混合物，并在 蒸发掉溶剂前一次性加入5M Na0H(2. 1当量/S03.吡啶，5. 08mmol, 1. 02mL)。将该化合物加 入到甲醇水中，并在C18 SPE柱上将其纯化。然后在冷冻干燥之前，用2000MWC0透析盒 将该化合物透析两个晚上以上，从而得到白色固体产物24 (113mg，79% )。NMR(400MHz, D20) 8 5. 56 (m, 1H)，5. 48 (m, 2H)，5. 28 (m, 1H)，5. 11 (m, 1H)，5. 06 (m, 1H) ,4. 91-4. 13 (m, 22H)，3. 87 (m, 1H, CH20)，3. 70 (m, 1H, CH20)，3. 32 (m, 2H, CH2N)，2. 29 (t, 2H, CH2C0)，1. 88 (m, 2H, CH2)，1. 62 (m, 2H, CH2)，1. 33-1. 28 (m, 28H, CH2)，0. 90 (t, 3H, CH3)。实施例7. 33-胆甾烷基2，3，4，6_四_0_乙酰基-a-D-甘露批喃糖 基-(1 — 3)-2，4，6_三-0-乙酰基-a-D-甘露吡喃糖基-(1 — 3)_2，4，6_三-0-乙酰 基-a -D-甘露吡喃糖基_ (1 — 3) -2,4,6-三_0_乙酰基-a _D_甘露吡喃糖基-(1 — 2) _3，4，6-三-0-乙酰基-a -D-甘露吡喃糖苷(25)在无水DCM中将三氯乙酸亚胺酸酯l(165mg，0. lmmol)、胆甾烷醇(78mg，2当量， 0. 2mmol)和3人分子筛(lOOmg)搅拌2小时。在0°C下逐滴地加入TMS-三氟甲磺酸酯的无 水DCM(0. 4M，0. 075mL，0. 03mmol,0. 3当量)溶液，并 在相同的温度下不断地搅拌40分钟。 通过加入Et3N(5iiL)来淬灭该反应，用乙酸乙酯(100mL)将其稀释，超声处理(3分钟)， 缓慢地倾析。用饱和的NaHC03溶液(3X20mL)冲洗有机溶液，用乙酸乙酯(3X20mL)萃取 有机相，用盐水(lX20mL)冲洗，干燥(Na2S04)并真空浓缩，从而得到无色泡沫状糖苷。在 硅胶柱(20X2cm，甲苯乙酸乙酯，1 2)上纯化该产物。纯化得到了 2个组分(A，B)， 其中组分A(90mg，48%得率)含有纯的产物但组分B为纯产物与脱去乙酰基产物的混合物 (1 l，74mg)。为了提高想要得到的糖苷的得率，将干燥的组分B和DMAP(cat)溶解于无 水吡啶(2mL)中和通过在0°C下逐滴滴加Ac20(0. lmL)将其乙酰化并在室温下不断地搅拌2 小时。通过在0°C下加入无水甲醇(5mL)和连续搅拌30分钟来淬灭该混合物。真空浓缩和 与甲苯(3X20mL)共蒸发该溶液，从而生产得到纯的糖苷25(71mg，38%得率)，得到86%的 总得率。屯 NMR(400MHz, CDC13) 6 5. 14-5. 32 (m，9H，5H-4，2H-3，H_2IV)，4. 90-5. 05(m，8H， 5H-l,3H-3) ,3. 90-4. 31(m, 19H, H_2，H-31，H-311，H_3m，5H-5，5H-6，5H_6b)，3. 80(ddd，lH， H-5) ,3. 52 (m, 1H, H_3Chol. )，2. 18，2. 17，2. 14，2. 12，2. 11，2. 10，2. 08，2. 07，2. 06，2. 03， 2. 01，1. 98，(s，48H，16XAc) ,0. 55-1. 82 (m, 33H, 12CH2，9CH)，0. 89(d，3H，J = 6. 8，胆甾烷 基-CH3)，0. 857(d，3H，J = 6. 8，胆甾烷基-CH3)，0. 853(d，3H，J = 6. 6，胆甾烷基 _CH3)， 0. 79 (s，3H，胆甾烷基-CH3)，0. 64 (s，3H，胆甾烷基 _CH3)。33 -胆甾烷基a -D-甘露吡喃糖基-(1 — 3) _ a _D_甘露卩比喃糖 基-(1 — 3) - a -D-甘露吡喃糖基-(1 — 3) - a -D-甘露吡喃糖基-(1 — 2) - a -D-甘露吡 喃糖苷(26)按照常规操作将糖苷25(181mg，0.097mmol)脱去乙酰基从而得到白色晶状的多 元醇26(116mg，100% )，将其用于下一步骤而不进行进一步的纯化或鉴定。33-胆甾烷基2，3，4，6_四-0-磺酸钠-a-D-甘露吡喃糖基-(1 — 3)_2，4， 6-三-0-磺酸钠-a -D-甘露吡喃糖基_ (1 — 3) -2,4,6_三_0_磺酸钠-a _D_甘露吡喃 糖基-(1 — 3)-2，4，6-三-0-磺酸钠-a-D-甘露吡喃糖基-(1 — 2) _3，4，6_三_0_磺酸 钠-a -D-甘露吡喃糖苷(27)将干燥的多元醇26(40mg，0. 033mmol)溶解于无水DMF(0. 83mL)中，并加入将刚刚 洗过和干燥的S03.吡啶(250mg，3当量每0H-基团，1.85mm0l)，在60°C下搅拌16小时。通 过在0°C下(pH 12)逐滴地滴加NaOH水溶液(5M，2. 1当量S03，0. 66mmol)来淬灭该反应，并 在40°C下真空浓缩从而得到一种黄色粉末。将该粉末溶解于水中(HPLC级，12mL)，在2K柱 中用纯水交换透析36小时。16小时后向该柱中加入NH4HC03(0. 1M，0. 5mL)的水溶液以确保 pH大于7。通过用反相HPLC，10% MeCN-水一35% MeCN-水梯度洗脱，5mL/min的流速，用 ELS检测来纯化该产物。合并含有纯的产物的组合并将其冻干，从而得到蓬松的白色粉末 27(23. 8mg，得率 25% ) NMR(400MHz, D20) ^ NMR(400MHz, CDC13) 8 5. 48-5. 57(m，4H， 4H-2)，5. 29，5. 23(bs，4H，H-l'，H_l〃，H_l〃 ‘，H_l〃 “ )，4. 35-4. 90 (m，23H，H_l，5H-3， 5H-4, 2H-5, 5H-6, 5H_6b，4. 28 (t, 1H, H_2)，4. 15-4. 24 (m, 3H, 3H-5)，3. 81 (m, 1H, H_3Chol.)， 0. 66-2. 05 (m, 33H, 12CH2, 9CH)，0. 96，0. 94，0. 90，0. 88，0. 85，0. 70 (s, 15H, CH3) 0. 85 (d,3H，J = 6. 8，胆甾烷基-CH3)，0. 88(d，6H，J = 6.8,2X 胆甾烷基 _CH3)，0. 85(s，3H，胆甾烷 基-CH3)，0. 70 (s，3H，胆甾烷基-CH3)。实施例8.苄基2，3，4，6_四-0-苯甲酰基-a-D-甘露吡喃糖基-(1 — 2)_3，4， 6-三-0-苯甲酰基-a -D-甘露吡喃糖苷(28)将2，3，4，6-四-0-苯甲酰基-a-D-甘露吡喃糖基三氯乙酸亚胺酸酯32 (0. 609g， 0. 822mmol,l. 1当量)和苄基3，4，6-三-0-苯甲酰基-a-D_甘露吡喃糖苷33(0. 435g，
0.747mmol)溶解于无水DCM(6mL)中。加入粉末状MS 3人(80mg，刚活化的)。在0°C下搅 拌该混合40分钟。逐滴地加入TMSOTf (0. 027mL，0. 149mmol,0. 2当量)的DCM(1. 5mL)溶 液。在0°C下搅拌该混合物同时用TLC(己烷-乙酸乙酯=65 35)对反应进行检测。40 分钟后，反应完全并加入Et3N(0. 3mL, 2. 15mmol)。将该粗制的混合物与另一批粗制品(TCA
1.42g，2. 098mmol ；2-醇1. 22g，2. 098mmol, TMSOTf 0. 114mL，0. 629mmol,0. 3 当量，0 °C， 40分钟)合并。通过用Celite短柱过滤该混合物，用DCM(3X lmL)冲洗。向合并的滤液 和冲洗液中加入吡啶(0. 121mL, 1. 494mmol,2当量)和苯甲酰氯(0. 130mL, 1. 212mmol, 1. 5 当量)。室温下搅拌该混合物o/n，在硅胶上蒸发并用柱层析进行纯化(硅胶3X20cm，己 烧-乙酸乙酯 200 20，400 80，200 50，240 80，200 90，200 100 梯度洗脱) 从而得到无色胶质状的二糖 28(594mg,68% )。NMR(CDC13,400MHz) 8 8. 15-7. 88 (m, 14H， Ph)，7. 59-7. 25 (m, 26H, Ph)，6. 16-5. 94 (m, 5H)，5. 30-5. 27 (m, 2H)，4. 82 (d, 1H，J = 11. 7)， 4. 68-4. 39 (m, 8H)。2,3,4,6-四-0-苯甲酰基-a-D-甘露吡喃糖基_(1 — 2)_3，4，6_三_0_苯甲酰 基-D-甘露吡喃糖(29)将二糖28(670mg，0. 577mmol)溶解于甲醇(3mL)和乙酸乙酯(30mL)中。加入钯炭 (5%，80mg)。在室温o/n，50psi的氢气条件下搅拌该混合物。TLC指示有 60%的转化。 加入更多的钯炭(5%，80mg)。在50psi下连续搅拌3天。TLC指示转化完全。用Celite 短柱过滤该混合物并用乙酸乙酯进行冲洗(5XlmL)。蒸发合并的滤液和冲洗液以至干燥， 从而得到无色泡沫状的标题化合物29(609mg，99% )。不进行纯化将该产物直接用于下一 步骤。2,3,4,6-四-0-苯甲酰基-a-D-甘露吡喃糖基_(1 — 2) _3，4，6_三_0_苯甲酰 基-D-甘露吡喃糖基三氯乙酸亚胺酸酯(30)向预冷(0°C )的 29(609mg，0. 569mmol)的无水 DCM(2. 8mL，0. 2M)溶液中加入三 氯乙腈(114uL,l. 138mmol,2 当量)。加入 DBU(4. 3 ii L，0. 05 当量，0. 0285mmol)的无水 DCM(0. 3mL)溶液。在0°C下搅拌该混合物4小时，TLC (己烷-乙酸乙酯=65 35)指示反应 完全。在硅胶上蒸发该粗制的混合物，通过硅胶柱层析(2.5\14_，己烷-乙酸乙酯4# 210 20 0. 5,200 50 0. 5，180 60 0. 5，150 70 0. 5 梯度洗脱)进行纯化。 合并产物的组分，蒸发，并在下面为P205的真空干燥器中干燥o/n，从而得到白色泡沫状三 氯乙酸亚胺酸酯30 (530mg, 77%),不进行进一步纯化而将其用于下一步骤。33-胆甾烷基2，3，4，6_四_0_苯甲酰基-a-D-甘露吡喃糖基-(1 — 2)_3，4， 6-三-0-苯甲酰基-a-D-甘露吡喃糖苷(31)向三氯乙酸亚胺酸酯30(260mg，0. 214mmol)和 3 胆甾烷醇(166mg，0. 428mmol， 2当量)的无水DCM(3.8mL)溶液中加入刚活化的、粉末状的分子筛3人(50mg)。在0°C下搅
19拌该混合物0. 5小时，在0°c下逐滴地加入tmsotf (7. 7ul,0. 0428mmol,0. 2当量)的无水 dcm(0. 3ml)溶液。在0°c下搅拌该混合物1. 5小时，tlc指示反应完全。加入et3n(150 y l)， 并在硅胶上蒸发该混合物，通过硅胶柱层析(2 x 15cm，己烷-乙酸乙酯210 20,200 50, 180 60,180 90梯度洗脱)进行纯化，从而得到白色泡沫状苷31(301mg，98% )。 匪R(CDC13，400MHz) S 8. 11-7. 28(m，35H，bz)，6. 09(ddor t，1H，JH3(II)_H4(II) = 10. 3, Jh4(ii)-h5(ii) = 9. 6，h4n)，5. 97-5. 87 (m, 3h, h211，h31 and h41)，5. 28 (d, 1h, jhi_h2 = 2. 2，hi)， 5. 28 (d, 1h, jhi_h2 = 1. 5, hi), 4. 69-4. 44 (m, 6h, h51, h5n, h61 and h6n), 4. 33 (br s, 1h,h2i), 3. 59 (m, 1h, och-chol)，3. 02 (dd, 1h, jh2(ii)_h3(ii) = 2. 9，h3n)，1. 99- 0. 47 (m, 31h,胆甾烷 基)，0. 91 (d，3h，j = 6. 6，胆甾烷基-ch3)，0. 872 (d，3h，j = 6. 6，胆甾烷基 _ch3)，0. 867 (d， 3h，j = 6. 6，胆甾烷基-ch3)，0. 75 (s，3h，胆甾烷基 _ch3)，0. 65 (s，3h，胆甾烷基 _ch3)。33-胆甾烷基0-0-甘露吡喃糖基-(1 — 2)-0-0-甘露吡喃糖苷(32)用11m naome 的甲醇(0. lml, 1. lmmol，5. 4 当量)溶液处理 31 (293mg，0. 203mmol) 在无水thf(4ml)和甲醇(6ml)中的溶液。室温下搅拌该混合物o/n。用ac0h(50iil)处理 该混悬液从而产生立即澄清的溶液。加入ag50wx8树脂(h+型)以调节ph到6。过滤该混 合物并用甲醇冲洗树脂(2x2ml)。蒸发合并的滤液和冲洗液至干，并在真空干燥器中干燥 o/n，从而得到浅黄色粉末多元醇32(171mg，118% )，不进行进一步纯化而将其用于下一步 马聚o33-胆甾烷基2，3，4，6_四_0_磺酸钠-a-d-甘露吡喃糖基-(1 — 2)_3，4， 6-三-0-磺酸钠-a -d-甘露吡喃糖苷(33)将多元醇32(96mg，0. 135mmol)溶解于无水dmf(3. 4ml，0. 04m)中。加入三氧化 硫_吡啶复合物(451mg，2. 835mmol,3当量每羟基，刚刚用水、甲苯、乙醇、dcm清洗的，并在 p205真空干燥器中干燥1小时)。在60°c下搅拌该混合物o/n，并将其冷却至0°c。加入5m na0h(794u l,3. 969mmol,以 s03 计 1. 4 当量)和饱和的 na2c03(2. 5m，690ml，1. 701mmol，基 于s03为0. 6当量)。颜色稍微变深(黄橙色)。将该混合物蒸发至干。将残留物溶解于4ml 水(ph > 9)中，用bio-gel p-2柱层析进行纯化(用0. 1m nh4hc03 196ml/h洗脱，每次收集 6分钟)。用MBT和CE鉴定产物组分。冷冻干燥产生得到浅黄色粉末产物33 (33mg，两步的 收率为 20% ). nmr(d20, 300mhz) 8 5. 27 (s, 1h), 4. 98 (s, 1h), 4. 81 (s, 1h), 4. 64-4. 48 (m, 4h)，4. 38-4. 18 (m, 4h)，4. 08-3. 85 (m, 4h)，3. 50 (m, 1h, 0ch)，1. 75-0. 49 (m, 46h,胆甾烷基)。实施例9. 2，3，4，6-四-0-乙酰基-a _D_甘露吡喃糖基_ (1 — 3) _2，4，6_三_0_乙 酰基-a -D-甘露吡喃糖基-(1 — 2) -3，4，6-三-0-乙酰基-a -D-甘露吡喃糖基三氯乙酸 亚胺酸酯(36)将三糖343°全乙酰化(ac20、吡啶、dmap，室温，4天)并用快速色谱法(硅胶，己 烷-乙酸乙酯梯度)进行纯化从而得到油状的全醋酸酯35。在0°c下向乙二胺(1.2mm0l， 0. 08ml)在无水thf(15ml)中的溶液中逐滴地加入冰醋酸(0. 65mmol,0. 038ml)，结果立即 产生沉淀，该沉淀在水后处理之前一直存在。在0°c下加入全醋酸酯35(500mg，0. 52mmol)， 并在室温下搅拌该混合物2. 5小时，在-20°c下储存一整夜。然后tlc(甲苯/乙酸乙酯， 1 2)表明没有了起始物料和产物慢慢的产生出现，该产物主要以端基混合物的形式出 现。通过加入醋酸(0. 12ml)中和该溶液以使ph达到6。在空气流条件下蒸发掉溶剂，将 残留物溶解于乙酸乙酯(100ml)中，用饱和的nahc03-溶液(3x50ml)、水(3x10ml)、盐水(30mL)对其进行冲洗，干燥(Na2S04)，并真空浓缩从而得到黄色泡沫状不经进一步纯化 而使用的半缩醛(500mg)。将该半缩醛(500mg， 0. 54mmol)溶解于无水DCM(4mL)中，在 0°C下加入K2C03(0. 95g，6. 81mmol)和三氯乙腈(0. 67mL，6. 63mmol)，并在室温下连续地搅 拌120分钟。将该混合物直接在硅胶柱(30X2. 5cm，甲苯-乙酸乙酯，1 1 — 1 2—乙 酸乙酯)上进行纯化，得到蓬松的白色粉末三氯乙酸亚胺酸酯36(300mg，65%)。在_20°C 下用P205干燥该化合物存放一整夜。33-胆甾烷基2，3，4，6_四_0_乙酰基-a-D-甘露吡喃糖基-(1 — 3)_2，4， 6-三-0-乙酰基-a -D-甘露吡喃糖基-(1-2) -3,4,6_三_0_乙酰基-a _D_甘露吡喃糖 苷(37)在干DCM中搅拌亚氨酯(imidate)36(295mg，0. 28mmol)、胆甾烷醇(210mg，2 当量， 0. 56mmol)和3人分子筛(lOOmg) 0. 5小时。在0°C下逐滴地加入TMS-三氟甲磺酸酯的无水 DCM(0. 4M，0. 21mL，0. 084mmol,0. 3当量)溶液，并在室温下将其持续地搅拌30分钟。通过 在0°C (pH 5)下加入Et3N(0.02mL)来淬灭该反应，用DCM(25mL)进行稀释，超声处理(3分 钟)，轻轻倒出。用饱和的NaHC03-溶液(3 X 20mL)冲洗该有机溶液，用乙酸乙酯(50mL)再 次萃取水相，用盐水冲洗(20mL)，干燥(Na2S04)并真空浓缩，从而得到粗制的白色固体糖苷 (564mg)。在硅胶柱(20X 2cm，甲苯乙酸乙酯3 2—1 1 — 1 2)上纯化该产物。纯 化得到混合组分A (56mg， 80%糖苷)和白色固体状含有纯的糖苷37的组分B(170mg，得 率 58 % )。咕 NMR (CDC13，400MHz) 8 5. 26-5. 34 (m, 3H, 2 X H4，H3)，5. 17-5. 24 (m, 3H, H21，H311， H4), 5. 28 (dd, 1H，JHI_H2 = 2. 0，H2n)，5. 05 (d, 1H，JHI_H2 = 2. 0，H1)，5. 02 (d, lH，Hln)，4. 93 (d, 1H, JHI_H2 = 2. 0，HI1), 4. 30 (dd, 1H，JH6a_H6b = -12. 7，JH6_H5 = 3. 9，H6a)，3. 97-4. 22(m，9H， 2XH6a,3XH6b, HS^SXHS^. 95 (dd，1H，H2)，3. 53(m，lH，胆甾烷基-H3)，2. 19,2. 15,2. 14， 2. 11,2. 10,2. 08,2. 07,2. 03,2. 03,2. 02，1. 99(s，30H，lOXAc) ,0. 55-1. 85(m，33H，12CH2, 9CH)，0. 89 (d，3H，J = 6. 8，胆甾烷基-CH3)，0. 860 (d，3H，J = 6. 8，胆甾烷基-CH3)，0. 854 (d， 3H，J = 6. 6，胆甾烷基-CH3)，0. 80 (s，3H，胆甾烷基 _CH3)，0. 64 (s，3H，胆甾烷基 _CH3)。33 -胆甾烷基a -D-甘露吡喃糖基-(1 — 3) _ a _D_甘露卩比喃糖 基-(1 — 2) - a -D-甘露吡喃糖苷(38)按照常规操作将全醋酸酯37(165mg，0. 127mmol)脱去乙酰基从而得到白色晶状 多元醇38(107mg，得率96% )，将其用于下一步骤而不进行进一步的纯化或鉴定。33-胆甾烷基2，3，4，6_四-0-磺酸钠-a-D-甘露吡喃糖基-(1 — 3)_2，4， 6-三-0-磺酸钠-a -D-甘露吡喃糖基-(1-2) -3,4,6_三_0_磺酸钠-a _D_甘露吡喃糖 苷(39)将无水多元醇38(50mg，0. 058mmol)溶解于无水DMF(2. 9mL,0. 02M)中，并加入刚 刚清洗过和干燥了的S03.吡啶(1 l，277mg，3当量每0H基团，1.74mm0l)。在60°C下搅拌 该混合物16小时，然后冷却至0°C 15分钟，并在0°C下通过一次性加入冰冷的NaOH水溶液 (5M，2. 1当量/S03，0. 731mL，3. 65mmol)来对其进行中和(达到pH 12)。在0°C下搅拌该混 悬液15分钟，用水(10mL)将其稀释转移到500mL-圆底烧瓶中，并在40°C下真空浓缩。得 到一种浅黄色粉末，将该粉末溶解于水中(10mL)得到pH 10的溶液。通过加入NaOH水溶 液(5M，5滴)将该溶液调整到pH 12，室温下使用Slide-A-Lyzer 盒(2000MWC0，4_12mL) 用水(4L)交换透析16小时。在0°C下用水(4L)交换继续不断地透析3天，其中在即后的每24小时，向水中加入NH4HC03的水溶(3M，0. 6mL)液以调节pH至 6. 5。然后将除去盐 分的溶液冷冻干燥从而得到蓬松的白色粉末状全硫酸酯39 (91mg，83% )。NMR(400MHz, D20) 8 5. 50 (m,2H, HI or H2)，5. 23，5 (m，2H，HI or H2)，4. 12—4. 92 (m，17H，HI，1 X H2， 3XH-3，3XH-4，3XH-5，3H-6，3H-6b)3. 80 (m, 1H, H-3Chol. ), 0. 66-2. 04(m，33H，12CH2, 9CH)，0. 95 (d，3H，J = 6. 8，胆甾烷基-CH3)，0. 887 (d，3H，J = 6. 8，胆甾烷基-CH3)，0. 882 (d， 3H，J = 6. 8，胆甾烷基-CH3)，0. 85 (s，3H，胆甾烷基 _CH3)，0. 70 (s，3H，胆甾烷基 _CH3)。实施例10. 3-叠氮丙基2，3,4,6-0 _0_乙酰基-a _D_甘露吡喃糖基_ (1 — 3) _2， 4，6-三-0-乙酰基-a -D-甘露吡喃糖基-(1-3) -2,4,6_三-0-乙酰基-a _D_甘露吡喃 糖基-(1 — 3)-2，4，6-三-0-乙酰基-a-D-甘露吡喃糖基-(1 — 2) _3，4，6_三_0_乙酰 基-a-D-甘露吡喃糖苷(41)将BF3 Et20(115mg，810iimol)加入到五糖全醋酸酯 4028(500mg，324 y mol)和 3_叠氮基丙烷-1-醇(98mg，972iimol)的无水DCE(8mL)的溶液中。在加入另一部分 BF3 Et20(115mg,810umol)之前，在60°C下在一个密封的容器中搅拌该溶液2小时，并 将该溶液再加热3小时。将溶液冷却至室温，倾倒在碎冰、NaHC03 (饱和水溶液)和盐水 的混合物中。用乙酸乙酯萃取该混合物，用1 1盐水NaHC03 (饱和水溶液)进一步冲 洗有机层，然后干燥(Na2S04)，蒸发和与无水甲苯一起共蒸馏。加入无水DCM(5mL)、醋酸 酐(66mg，648 u mol)、Et3N (89mg，875 u mol)和 DMAP (结晶)，在-20 °C 下存放该溶液一整 夜。将该溶液直接用于准备好的快速色谱柱(17X 2cm硅胶，梯度洗脱60 40至75 25 乙酸乙酯Hx)上，从而得到油状的糖苷41(387mg，75% )。ESMS :1601. 81，[M+NHJ +。 NMR(400MHz, CDC13) 8 :5. 30-5. 13 (m，8H)，5. 02-4. 88 (m，8H)，4. 28-3. 75 (m，20H)，3. 49 (dt， 1H, J = 9. 8，6. 1，0CH2CH2B), 3. 42-3. 35 (m, 2H, CH2N3)，2. 16，2. 14(9) ,2. 14(7) ,2. 11，2. 10， 2. 09(2) ,2. 08(8) ,2. 08 (7)，2. 08，2. 07，2. 06，2. 05，2. 04，2. 00，1. 99，1. 95 (16s，16X3H, AcOX 16)，1. 89-1. 84(m，2H，CCH2C)。13C NMR(100MHz, CDC13) 8 :170. 4，170. 3，170. 2， 170. 1，169. 9，169. 8(2)，169. 7 (7)，169. 6，169. 5，169. 4，169. 3，169. 2，99. 1 (2) ,99. 1 (0)， 98. 8(4) ,98. 7(7) ,98. 1, 76. 7,75. 0，74. 9，74. 7，71. 0,70. 8,70. 7,70. 0,69. 5,69. 3, 69. 2,68. 5,68. 2,67. 2,66. 7,66. 6,66. 0,65. 4,64. 6,62. 4,62. 3,61. 9,61. 5,47. 9,28. 5， 20. 7 (4)，20. 7 (2)，20. 6 (9) ,20. 6, 20. 4 (9)，20. 4 (6)，20. 4.3-硬酯酰胺丙基2，3，4，6_四_0_乙酰基-a-D-甘露吡喃糖基-(1 — 3)_2，4， 6-三-0-乙酰基-a-D-甘露吡喃糖基-(1 — 3)-2，4，6-三-0-乙酰基-a_D_甘露吡喃 糖基-(1 — 3)-2，4，6-三-0-乙酰基-a-D-甘露吡喃糖基-(1 — 2) _3，4，6_三_0_乙酰 基-a-D-甘露吡喃糖苷(42)将叠氮化物41 (460. 5mg,291umol)溶解于THF(lOmL)中。加入聚合物结合的三苯 膦(725mg)，并在室温下搅拌该混合物1小时。加入水(200 y L)，并在50°C下搅拌该混合物 4小时。冷却该混合物，过滤，蒸发溶剂，从而得到一种白色固体(APCIMS =1558. 25[M+H]+)。 将产物溶解于DCM(lOmL)中。加入硬酯酰氯(2当量，5801111101，1761^，1961^)，接着加入三 乙胺(2当量，580 u mol, 80 u L)，并在室温下搅拌该混合物6小时。蒸发溶剂，将残留物加到 DCM中，然后用NaHC03(饱和的)进行冲洗，干燥(Na2S04)，蒸发溶剂。将该粗制的产物用柱层 析进行纯化(Si02 :DCM — 2%甲醇/DCM)从而得到澄清的油状酰胺42 (232mg,44%,两个步 骤)。NMR(400MHz, CDC13) 6 6. 10 (宽峰 m，1H，NH)，5. 24-5. 09 (m，8H)，4. 96-4. 83 (m，8H)，4. 22-3. 71 (m, 19H)，3. 68 (m, 1H, CH20)，3. 40 (m, 1H, CH20)，3. 26 (m, 2H, CH2NH)，2. 12-2. 09 (m, 2H, CH2C0)，2. 11 (s，3H, OAc)，2. 10 (s,6H, OAc)，2. 06 (s, 3H, OAc)，2. 04 (s, 3H, OAc)，2. 03 (s, 12H, OAc)，2. 02 (s, 3H, OAc)，2. 01 (s，3H, OAc)，1. 99 (s,6H, OAc)，1. 95 (s, 3H, OAc)，1. 94 (s, 3H, OAc)，1. 90 (s, 3H, OAc)，1. 74 (m, 2H, CH2CH2N)，1. 53 (m, 2H, CH2CH2CO)，1. 23-1. 16 (m, 28H, CH2), 0. 79(t，3H，CH3)。3-硬酯酰胺丙基a -D-甘露吡喃糖基_(1 — 3) - a _D_甘露吡喃糖 基-(1 — 3) - a -D-甘露吡喃糖基-(1 — 3) - a -D-甘露吡喃糖基-(1 — 2) - a -D-甘露吡 喃糖苷(43)按照常规操作将酰胺42(231. 5mg)脱去乙酰基，从而得到白色固体多元醇 43(140mg，96% )，将其直接反应而不进行进一步的纯化或鉴定。3-硬酯酰胺丙基2，3，4，6_四_0_磺酸钠-a-D-甘露吡喃糖基-(1 — 3)_2，4， 6-三-0-磺酸钠-a -D-甘露吡喃糖基_ (1 — 3) -2,4,6_三_0_磺酸钠_ a _D_甘露吡喃 糖基-(1 — 3)-2，4，6-三-0-磺酸钠-a-D-甘露吡喃糖基-(1 — 2)_3，4，6_三_0_磺酸 钠-a -D-甘露吡喃糖苷(44)将多元醇43(140mg，122iimol)溶解于 DMF(0. 02M，6. lmL)中。加入 S03.批啶(3 当量/0H，5. 83mmol,928mg)，在60°C下搅拌该溶液一整夜。在冰水中冷却该混合物，并在蒸 发掉溶剂前同时加入5M Na0H(2. 1当量/S03.吡啶，2. 45mL)。将该化合物加入到1 %甲醇水 中，并在C18SPE柱上将其纯化。然后在冻干之前，用2000MWC0透析盒透析该化合物两整夜， 从而得到白色固体产物 44(220mg，65% )。NMR(400MHz, D20) 8 5. 55 (d，1H，H_l)，5. 53 (d, 1H, H-l)，5. 50 (d, 1H, Jlj2 =1.8，H_l)，5. 49 (d, 1H, H_l)，5. 28 (m, 1H)，5. 12 (m, 1H)，5. 08 (m, 1H)，4. 90-4. 12 (m, 28H)，3. 85 (ddd, 1H，J = 6. 2，J = 7. 0，J = 10. 5，CH20)，3. 68 (ddd, 1H, J =6. 2，J = 6. 2，J = 9. 7，CH20)，3. 31 (m, 2H, CH2N)，2. 29 (t,2H, J = 7. 0, CH2C0)，1. 88 (t, 2H，J = 6. 2，CH2CH2N)，1. 62 (m, 2H, CH2CH2C0)，1. 31 (m，28H, CH2)，0. 90 (t，3H，J = 7. 0，CH3)。实施例11. 3 0 _(丙炔-2-基氧基)胆甾烷醇在室温下将30-胆甾烷醇(1.23g，3. 16mmol)完全地溶解于无水甲苯(7mL， 0.45M)中。一次性加入粉末状叔丁醇钾(1.06g，9.49mmol，3当量)。室温下搅拌该混合 物3小时。加入炔丙基溴溶液(甲苯中的80wt%，0. 94g，6. 32mmol,2当量)。室温下搅拌 该混合物3天。用己烷(30mL)和乙酸乙酯(10mL)稀释该混合物，用水(2X60mL)和盐水 (60mL)对其进行冲洗。用乙酸乙酯(20mL)萃取水相一次。干燥(Na2S04)合并的有机相，过 滤，并在硅胶上蒸发滤液，用柱层析进行纯化(硅胶2. 5X 24cm,己烷250mL，己烷-乙酸乙 酯125 5梯度洗脱)，从而得到黄色固体产物。从乙酸乙酯(3mL)中重结晶，得到灰白色 结晶(736mg,55% )。NMR(CDC13，400MHz) 8 4. 18(d，2H，J = 2. 2)，3. 45 (m, 1H)，2. 38 (t, 1H, J = 2. 2)，1. 99-0. 57 (m, 31H)，0. 89 (d, 3H, J = 6. 6)，0. 86 (d, 3H, J = 6. 6)，0. 86 (d, 3H, J = 6. 6)，0. 79 (s, 3H)，0. 64 (s, 3H)。3-叠氮基丙基2，3，4，6_四_0_乙酰基-a _D_甘露吡喃糖基-(1 — 3)_2，4， 6-三-0-乙酰基-a -D-甘露吡喃糖基-(1-2) -3,4,6_三_0_乙酰基-a _D_甘露吡喃糖 苷(45)将全醋酸酯35(1000mg，1.03mmol)和 3_ 叠氮基丙醇(1. 2 当量，124mg，1. 24mmol) 溶解于无水DCM(5mL)中，然后在0 °C下逐滴地加入BF3-乙醚配合物(5当量，0. 546mL，
235. 17mmol)，在60°C下搅拌该混合物3小时。在0°C下通过加入Et3N(2. 2mL, 15. 5mmol)终 止该反应。然后在0°C下通过加入吡啶(lmL)、DMAP(cat.)和Ac20(0. 585mL)将该粗制的 反应混合物乙酰化，并在室温下不断地搅拌o/n。在0°C下通过加入干甲醇(5mL)来淬灭 该暗红色的溶液，并在室温下搅拌2小时。与甲苯(50mL)共蒸发后，将残留物溶解于乙酸 乙酯(100mL)中，用饱和的NaHC03-溶液(3X20mL)、水(50mL)对其进行清洗，用乙酸乙 酯(3X20mL)再次萃取水相，与其他有机提取物合并，用盐水冲洗(20mL)，干燥(Na2S04)， 真空浓缩，从而得到粗制的胶质状糖苷( lg)。在硅胶柱上(20X2cm，甲苯-乙酸乙 酯，2 1 — 1 1 — 1 2)纯化该粗制的产物，得到了想要得到的灰白色白色泡沫状糖 苷 45(374mg，36 % ) NMR(CDC13，400MHz) 8 5. 19-5. 38 (m，6H，3 XH4，H211，H31，H3m)， 5. 08 (dd 1H, JH2_H3 = 3. 3，H2ni)，5. 04 (d, 1H, JHI_H2 =1.7，HI111)，4. 94 (m, 2H, HI1, H_ln)， 4. 31(dd，lH，JH6a_H6b = 12.5，JH6_H5 = 4.2，H6a)，3. 93-4. 26 (m，9H，2 XH6a，3 XH6b，H21，H311， H51，H5n 或 H5m)，3. 93 (ddd, 1H, H5n 或 H5m)，3. 82 (dt, 1H, Jgem = 10. 0, J = 6. 6，0CH2)，
3.53 (dt, 1H, J = 6. 6，0CH2)，3. 43(t，2H，J = 6. 6，CH2N3)，2. 20，2. 161,2. 157,2. 12，2. 11， 2. 10，2. 19，2. 05，2. 04，2. 00(s，30H，lOXAc)，1. 90(五重峰，2H，J = 6. 6，CH2)。3-{4_(胆甾-30-基-氧甲基)_[1，2，3]三唑_1_基}丙基2，3，4，6_四_0_乙酰 基-a -D-甘露吡喃糖基_ (1 — 3) -2,4,6-三_0_乙酰基-a _D_甘露吡喃糖基-(1 — 2) _3， 4，6-三-0-乙酰基-a -D-甘露吡喃糖苷(46)将丙炔-2-基氧基)胆留烷醇(156mg，2当量，0. 367mmol)和叠氮化物 45(185mg，0. 183mmol)溶解于 DCM/叔-丁醇(3 2，w/w，0. 4M，0. 562mL)的混合物中。向 该混合物中加入CuS04水溶液(0. 3M，0. 1当量.，0. 061mL)和抗坏血酸钠水溶液(1M，0. 3 当量，0.055mL)，在无光条件下剧烈地搅拌该混合物48小时。TLC分析(甲苯乙酸乙酯， 1 1)显示反应终点出现了比起始叠氮化物极性更大的产物。用DCM(50mL)稀释该混合物， 用饱和的NaHC03-溶液(3X30mL)冲洗。用乙酸乙酯(3X20mL)再次萃取水相，合并有机提 取物，用盐水(20mL)冲洗，干燥(Na2S04)，真空浓缩从而得到黄色泡沫状粗制品(475mg)。在 硅胶柱(25X2. 5cm，甲苯-乙酸乙酯，1 2—1 3—1 4)上纯化该粗制品从而得到白 色泡沫状三唑 46(214mg，81% )。咕 NMR(CDC13,400MHz) 8 7. 76 (s, 1H, = CH)，5. 18-5. 36 (m, 6H, 3xH4, H211，H31，H3ni)，5. 06 (dd 1H, JH2_H3 = 3. 2，H2m)，5. 02 (d, 1H, JHI_H2 =1.7，HI111)，
4.94(d，2H，JHI_H2 = 1. 6，H-ln)，4. 92 (d, 1H，JHI_H2 = 1. 6, HI1) ,4. 71 (s，2H，0CH2)，4. 49(t，2H， J = 6. 6，CH2N), 4. 30 (dd, 1H, JH6a_H6b = -11. 9，JH6_H5 = 4. 0，H6a)，3. 96-4. 26 (m, 9H, 2 XH6a, 3 XH6b，H21，H311，H51，H5n 或匪m)，3. 92 (ddd, lH,H5n 或 H5m)，3. 43 (m, 2H, 0CH2，H_3Chol)， 2. 31 (m，2H，CH2)，2. 19,2. 145,2. 142,2. 11,2. 09,2. 08,2. 06,2. 04，1. 99(s，30H，lOXAc)， 1. 90(五重峰，2H，J = 6. 6，CH2), 0. 56-2. 04(m，33H，12CH2，9CH)，0. 89(d，3H，J = 6. 8，胆甾 烷基-CH3)，0. 858(d，3H，J = 6. 8，胆甾烷基-CH3)，0. 855(d，3H，J = 6. 8，胆甾烷基 _CH3)， 0. 79 (s，3H，胆甾烷基-CH3)，0. 64 (s，3H，胆甾烷基 _CH3) 3-{4_(胆甾(cholestarO-33-基-氧甲基)_[1，2，3]三唑-l-基}丙基 a_D_甘 露吡喃糖基_ (1 — 3) - a -D-甘露吡喃糖基-(1 — 2) - a _D_甘露吡喃糖苷(47)按照常规方法将干燥的全醋酸酯46(202mg，0. 141mmol)脱去乙酰基，从而得到白 色结晶体多元醇47(138mg，97%)，将其用于下一步骤而不进行进一步的纯化或鉴定。3-{4_(胆甾(cholestarO-33-基-氧甲基)_[1，2，3]三唑-1-基}丙基 2，3，4，6-四-0-磺酸钠-a -D-甘露吡喃糖基_ (1 — 3) -2,4,6_三_0_磺酸钠-a _D_甘露吡喃糖 基-(1 — 2)-3，4，6-三-0-磺酸钠-a-D-甘露吡喃糖苷(48)将干燥的多元醇47(50mg，0. 049mmol)溶解于无水DMF(2. 45mL,0. 02M)中，并加入 刚刚洗过和干燥的S03.吡啶复合物(234mg，每个0H基团3当量，1. 47mmol)，在60°C搅拌该 混合物16小时。将该反应混合物冷却至0°C 15分钟，然后在0°C在一部分中(达到pH 12) 通过加入冰冷的NaOH水溶液(5M，2. 1当量/S03，0. 617mL，3. 09mmol)将其中和。0°C下搅 拌该混悬液15分钟，用水(10mL)将其稀释，并在40°C真空条件下与(3X20mL)水共蒸发。 将黄色固体溶解于水中(9mL，一 pH10. 5)，然后通过加入NaOH水溶液(5M，5滴)将该溶液 调到pH 12，并在室温下使用Slide-A-Lyzer 透析盒(2000MWC0，4_12mL)用水(4L)交换 透析16小时。0°C下继续用水(4L)交换透析2天，其中每隔24小时后加入NH4HC03水溶液 (3M，0.6mL)以交换水(4L)从而调节pH到6-6. 5。然后冷冻干燥已脱盐的溶液从而得到蓬 松的白色粉末产物 48(94mg，94% )。匪R(400MHz，D20) 8 8. 08 (s, 1H, = CH), 5. 50 (m, 2H, H211，H2ni) ,5. 22,5 (m, 1H, HI11 or HI111)，5. 07 (m, 1H, HI1)，4. 33-4. 93 (m, 19H, Hlnor Hlm, 3XH3，3XH4，3XH4，CH2N，4H6，H2, 0CH2),4. 15 (m，4H，2XH6，2XH_5)，4. 02 (m, 1H, H_5)，
3.83 (m, 1H, 0CH2)，3. 71 (m, 1H, 0CH2)，3. 51 (m, 1H, H_3Chol)，2. 28 (m, 2H, CH2)，0. 62-2. 06 (m, 33H，12CH2，9CH)，0. 94 (d，3H，J = 5. 8，胆甾烷基_CH3)，0. 86 (d，9H，J = 6. 7，胆甾烷基 _CH3)，
0.70(s，3H，胆甾烷基-CH3)。实施例12.苄基3-0-烯丙基-2，4，6_三-0-苯甲酰基-a-D-甘露吡喃糖 基-(1 — 3)-2，4，6-三-0-苯甲酰基-a-D-甘露吡喃糖苷(49)将3-0-烯丙基-2，4，6-三_0_苯甲酰基-a _D_甘露吡喃糖基三氯乙酸亚胺酸 酯34 (0. 504g, 0. 744mmol, 1. 05当量)和苄基2，4，6-三-0-苯甲酰基-a -D-甘露吡喃糖苷 (0. 413g,0. 709mmol)溶解于无水DCM(6. 4mL，0. 11M)中。加入粉末状MS 3人(70mg刚活化 的)。在0°C下搅拌该混合物30分钟。逐滴地加入TMSOTf (26 u L，0. 142mmol,0. 2当量) 的DCM(0. 6mL)溶液(最终浓度1M)。在0°C下搅拌该混合物同时用TLC(己烷-乙酸乙酯 =65 35)监测该反应。60分钟后，转化完全，并加入Et3N(0. 15mL)。用吡啶(0. 115mL，
1.418mmol，2当量)和苯甲酰氯(0. 124mL, 1. 064mmol, 1. 5当量)处理该粗制混合物。室温 下搅拌该混合物o/n并将其过滤。用DCM(6XlmL)清洗该固体。将合并的滤液和冲洗液在 硅胶上蒸发，并用柱层析进行纯化(硅胶2.5 X 24cm，己烷-乙酸乙酯200 20,210 40， 200 50,180 60,170 85梯度洗脱)从而得到纯的淡黄色胶质状产物49 (0. 738g， 95%) o'H 匪 R (CDC13,400MHz) 8 8. 20-8. 06 (m, 8H, Ph)，7. 90-7. 80 (m, 4H, Ph)，7. 67-7. 23 (m, 23H，Ph), 5. 98 (dd or t，1H，JH3⑴_H4⑴=9.8，JH4⑴_H5⑴=9.8，H41)，5. 75 (dd or t，1H， Jh3(ii)-h4(ii) = 9. 8，JH4(II)_H5(II) = 9. 8，H4n)，5. 41 (m，1H，烯丙基-2' )，5. 23 (d，1H，J = 2. 0)， 5. 18-5. 15 (m, 2H)，4. 87-4. 71 (m, 3H)，4. 64-4. 56 (m, 4H)，4. 48 (dd 或 t，1H，J = 12. 7，J =
4.9)，4. 34-4. 27 (M, 2H)，4. 22 (dd, 1H，J = 12. 7，J = 3. 9)，3. 87 (dd, 1H，J = 9. 8，J = 2. 9)， 3. 74 (dd, 1H，J = 12. 7，J = 5. 9)，3. 59 (dd, 1H, J = 12. 7，J = 5. 9)。苄基2，4，6-三-0-苯甲酰基-a-D-甘露吡喃糖基-(1 — 3) _2，4，6_三_0_苯甲 酰基-a-D-甘露吡喃糖苷(50)用固体二氯化钯(25mg)处理烯丙基醚49 (688mg，0. 627mmol)的甲醇溶液(6mL) 和1，2- 二氯乙烷(6mL) (0. 05M)。70°C下(外部油浴)搅拌该混合物2小时。TLC指示转化完全。在二氧化硅上蒸发该混合物并用柱层析(二氧化硅2. 7X 17cm，己烷-乙酸乙酯 200 20,200 40,200 50,210 70,200 100梯度洗脱)对其进行纯化，从而得到无色 胶质状醇 50 (0. 539mg,81% )。力 NMR (CDC13，400MHz) 8 8. 18-8. 03 (m, 8H, Ph)，7. 85-7. 81 (m, 4H, Ph)，7. 68-7. 25 (m，23H，Ph)，5. 97 (dd or t，1H，JH3⑴_H4⑴=9. 8，JH4⑴-H5⑴=9. 8，H41)， 5. 68 (dd, 1H, Jh1(i)-H2(i) = 2. 0，Jh2(i)-H3(i) = 2. 9, H21), 5. 60 (dd ort, 1H, Jh3(ii)-h4(ii) = 9. 8, JH4( )-H5(ii) = 9. 8，H4n)，5. 28 (br s，1H，HI11)，5. 15 (d，1H，JH1(II)_H2(II) = 2. 0，HI1)，5. 05 (dd, 1H, JH1(H)-H2(II) = 2. 0, Jh2(II)-h3(ii) = 2.9，H2n)，4. 77 (d，1H，Jgem = 11.7，CH2)，4. 65-4. 56 (m， 4H, CH2，I^eq，H31 and H6n)，4. 44 (dd, 1H，Jgem = 12. 7，JH5⑴_H6⑴ax = 4. 9，I^ax)，4. 34 (m， lH，H5n)，4. 32 (dd, 1H，Jgem = 10. 7, JH5(II)_H6(II) = 2. 9，H6n)，4. 28(ddd，1H，JH5⑴,Wax = 4. 9， JH5⑴-H6roeq = 2.9, H51)，4. 17 (dd, 1H，H3n)。苄基2，3，4，6-四-0-苯甲酰基-a-D-甘露吡喃糖基-(1 — 3) _2，4，6_三_0_苯 甲酰基-a -D-甘露吡喃糖基_ (1 — 3) -2,4,6-三_0_苯甲酰基-a _D_甘露吡喃糖苷(51)0°C 下将醇 50(424mg，0. 401mmol)和 2,3,4,6-四-0-苯甲酰基-a -D-甘露吡 喃糖基三氯乙酸亚胺酸酯(357mg，0. 481mmol, 1. 2当量)的无水DCM(7. 5mL)溶液与粉末 状分子筛3A (50mg) 一起搅拌1小时。用注射器逐滴地加入TMS0Tf(15iiL，0.0802mmOl， 0. 2当量)的DCM(0. 5mL)溶液。在0°C下搅拌该混合物2小时，TLC指示转化完全。加入 Et3N(100ii L)。加入吡啶(65u L,0. 802mmol)和苯甲酰氯(47u L,0. 401mmol) 室温下 搅拌该混合物o/n并在硅胶上蒸发。通过柱层析(二氧化硅2. 5X 17cm，己烷-乙酸乙酯 210 30,200 50,180 60,160 80以及150 100梯度洗脱)进行纯化，得到无色胶质 状三糖 51 (392mg, 60%) o'H 匪 R (CDC13，400MHz) 8 8. 19-7. 89 (m, 16H, Ph)，7. 68-7. 63 (m, 4H, Ph)，7. 61-7. 15 (m, 35H, Ph)，6. 00 (dd or t, 1H, JH3_H4 = 10. 7，JH4_H5 = 9. 8，H4)，5. 98 (dd or t, 1H，JH3_H4 = 9. 8，J = 9. 8，H4)，5. 92 (dd or t，1H，J = 10. 7，J = 9. 8，H4)，5. 72 (dd, 1H，JH1_H2 =2. 0，JH2_H3 = 3. 9，H2)，5. 56 (dd, 1H，JH2_H3 = 2. 9，H3)，5. 33 (d, 1H, J = 2. 0，H1)，5. 26 (dd, 1H，J = 2. 0，H2)，5. 19 (d，1H，J = 2. 0，J = 3. 9，H2)，5. 16 (d, 1H，J = 2. 0，HI)，4. 90 (d, 1H，H1)，4.78 and 4. 62 (AB quartet, 2H, Jgem = 11. 7，CH2)，4. 65-4. 56 (m，3H)，4. 45 (dd，1H， Jgem = 12. 7，JH5_H6 = 3. 9，H6)，4. 35 (dd, 1H，H 3) ,4. 34-4. 28(m，2H)，4. 24 (dd, 1H, J = 12. 7， JH5_H6 = 2.9，H6)，4. 10 (dt or dm, 1H，H5)，4. 01 (dd，1H，J = 12. 7，H6)，3. 95 (dd，1H，JH5_H6 = 2. 0，H6)。2,3,4,6-四-0-苯甲酰基-a-D-甘露吡喃糖基_(1 — 3)_2，4，6_三_0_苯甲酰 基-a-D-甘露吡喃糖基-(1 — 3)-2，4，6-三-0-苯甲酰基-D-甘露吡喃糖(52)将苄基糖苷51 (385mg，0. 235mmol)溶解于甲醇(5mL)和氯仿(5mL)中。加入钯炭 (5%,538mg)0在氢气气氛下以lOOpsi搅拌该混合物3天。TLC指示转化完全。用Celite 短柱过滤该混合物并用乙酸乙酯对其进行冲洗(5XlmL)。蒸发合并的滤液和冲洗液至干， 与DCM(3mL) —起共蒸发，从而得到淡黄色泡沫状半缩醛52 (338mg, 93%),将其用于下一步 骤而不进行进一步的纯化或鉴定。2,3,4,6-四-0-苯甲酰基-a-D-甘露吡喃糖基_(1 — 3) _2，4，6_三_0_苯甲酰 基-a -D-甘露吡喃糖基_ (1 — 3) -2,4,6-三_0_苯甲酰基_D_甘露吡喃糖基三氯乙酸亚 胺酸酯(53)将半缩醛52(330mg，0. 214mmol)溶解于无水DCM(1. lmL，0. 2M)中。向该溶液中加入三氯乙腈(43iiL，0.427mmol，2当量)。在0°C下搅拌该混合物同时加入DBU(1. 6 y L，
0.05当量，0. 0107mmol)的无水DCM(0. 15mL)溶液。在0°C下搅拌该混合物4小时，TLC(己 烷-乙酸乙酯=65 35)指示转化完全。在硅胶上蒸发该粗制品，并通过硅胶柱层析 (2X 14cm，己烧-乙酸乙酯 200 20，150 30，120 30，150 50 和己烧-乙酸乙 酯-Et3N 140 70 0.3梯度洗脱)对其进行纯化，从而得到白色泡沫状三氯乙酸亚胺酸 酯53 (261mg, 72%),将其直接用于下一步骤而不进行进一步鉴定。33-胆甾烷基2，3，4，6_四-0-苯甲酰基-a-D-甘露吡喃糖基-(1 — 3)_2，4， 6-三-0-苯甲酰基-a -D-甘露吡喃糖基_ (1 — 3) -2，4，6-三-0-苯甲酰基_ a _D_甘露吡 喃糖苷(54)向三氯乙酸亚胺酸酯53(128mg，0.0757mmol)和3 3-胆甾烷醇(59mg，0. 151mmol, 2当量)的无水DCM(2mL)溶液中加入刚活化的、粉末状分子筛3人(50mg)。在0°C下搅拌 该混合物0. 5小时，并在0°C下逐滴地加入TMSOTf (2. 7uL,0. 0151mmol,0. 2当量)的无水 DCM(0. 15mL)溶液。在0°C下搅拌该混合物2小时，TLC指示反应完全。加入Et3N(150 y L)。 在硅胶上蒸发该混合物，并通过硅胶柱层析(2X 14cm，己烷-乙酸乙酯180 20,150 30， 120 30,120 40和120 60梯度洗脱)进行纯化，从而得到无色胶质状糖苷54 (74mg， 51 % ) o NMR(CDC13，300MHz) S 8. 21-7. 15 (m，50H，Bz)，6. 00 (dd 或 t，1H，JH3(II)_H4(II)= 10. 0，JH4(II)_H5(II) = 10.0, H4n)，5. 93 (dd 或 t，1H，JH3_H4 = 10.0, JH4_H5 = 10.0, H41 和 H4m)， 5. 61 (dd, 1H, JH2(i)-h3(i) = 3. 0, Jhkii)-h2(ii) = 1.5，H21), 5. 57 (dd, 1H, Jh3(ih)-h4(iii) = 10.0， Jh2(iii)-h3(iii) = 3. 0, H3in), 5. 36 (d, 1H, JH1(n)-H2(n) = 1.5, HI11), 5. 26 (dd, 1H, JH2(n)-H3(n)= 3.0，H2n)，5. 21(m，2H，HI1 和 H2m)，4. 91 (s，1H，Hlm)，4. 68-3. 90 (m，11H)，3. 62 (m，1H， OCH-chol)，1. 99-0. 50 (m, 31H,胆甾烷基),0. 90 (d, 3H，J = 6. 9，胆甾烷基 _CH3)，0. 87 (d, 3H，J = 6. 9，胆甾烷基-CH3)，0. 86(d，3H，J = 6. 9，胆甾烷基 _CH3)，0. 80(s，3H，胆甾烷 基-CH3)，0. 65 (s，3H，胆甾烷基-CH3)。33 -胆甾烷基a -D-甘露吡喃糖基-(1 — 3) - a-D-甘露卩比喃糖 基-(1 — 3) - a -D-甘露吡喃糖苷(55)按照常规方法将糖苷54(70mg，0. 0365mmol)脱去乙酰基，从而得到浅黄色粉末状 的多元醇55，将其直接用于下一步中。3'-胆甾烷基2，3，4，6_四-0-磺酸钠-a-D-甘露吡喃糖基-(1 — 3)-2，4， 6-三-0-磺酸钠-a -D-甘露吡喃糖基-(1-3) -3,4,6_三_0_磺酸钠-a _D_甘露吡喃糖 苷(56)将上述粉末(55)溶解于无水DMF(1. 8mL,0. 02M)中。加入S03.吡啶复合物(174mg，
1.096mmo 1，3当量每羟基，刚用水、甲苯、乙醇、DCM洗过的，在P205真空干燥器中干燥1小 时)。在60°C搅拌该混合物o/n (18小时)，将其冷却至0°C。加入5M NaOH直到pH > 10 为止。加入乙醇(6mL)，在0°C下搅拌该混合物20分钟。通过离心分离沉淀物，在旋转蒸发 器上将其蒸干。将残留物再溶解于水(1.5mL)中。把该溶液装入Slide-A-Lyzer 透析盒 (2000MWC0，0.5-3. OmL容量)中。用水(2X0. 5mL)清洗该烧瓶并将清洗液也加入到透析 盒中。透析在10L纯水中，在室温下进行4小时。更换水(10L)并在0°C o/n继续进行透 析。更换水(4L)并继续再进行一天透析。移出浅黄色溶液并冻干，从而得到浅橙色的粉末 全硫酸酯 56 (46. 8mg)。1HNMR(D20, 300MHz) 8 5. 28 (s, 1H)，5. 21 (s，1H)，5. 16 (s, 1H)，5. 05 (br
27s，1H)，4. 76 (br s，1H)，4. 67-3. 88 (m, 16H)，3. 53 (m, 1H, 0CH)，1. 82-0. 44 (m, 31H,胆甾烧 基)，0. 74 (d，3H，胆甾烷基-CH3)，0. 67 (d，6H，胆甾烷基-CH3)，0. 65 (s，3H，胆甾烷基 _CH3)， 0. 49(s，3H，胆甾烷基-CH3)。实施例13. 3-叠氮基丙基2，3，4，6_四_0_苯甲酰基-a-D-甘露吡喃糖 基-(1 — 3)-2，4，6-三-0-苯甲酰基-a-D-甘露吡喃糖基-(1 — 3)_2，4，6_三_0_苯甲 酰基-a-D-甘露吡喃糖苷(57)向三氯乙酸亚胺酸酯53(128mg，0. 0757mmol)和3-叠氮基丙醇(15mg，0. 151mmol, 2当量)的无水DCM(2mL)溶液中加入刚活化的，粉末状分子筛3人(50mg)。在0°C下搅拌 该混合物0. 5小时，在0°C下逐滴地加入TMSOTf (2. 7ii L，0. 0151mmol,0. 2当量)的无水 DCM(0. 15mL)溶液。在0°C下搅拌该混合物2小时，TLC指示反应完全。加入Et3N(150 y L)。 在硅胶上蒸发该混合物，并通过硅胶柱层析(2X 14cm，己烷-乙酸乙酯150 20,150 30， 120 30,120 40,120 60和120 80梯度洗脱)对其进行纯化，从而得到无色胶质 状糖苷 57(86mg，70% )。匪R(CDC13，300MHz) 8 8. 22-7. 16 (m，50H，Bz)，6. 02 (dd 或 t，1H， Jh3(II)-H4(II) = 10. 0，Jh4(II)-H5(II) = 9. 5, H4H) , 6. 00 (dd 或 t, 1H, JH3(I)-H4(I) = 10. ，Jh4(I)-H5(I) =9. 5，H41)，5. 96 (dd 或 t，1H，JH3(III)-H4(III) = 10.0, JH4(III)_H5(III) = 9. 5，H4m)，5. 69 (dd, 1H，
Jh2(I)-H3(I) — 3. 2，Jhi(II)-H2(II) — 1. 6，H2 )，5. 59 (dd, 1H, Jh3(III)-H4(III) — 10. 3，Jh2(III)-H3(III)—
3.2, H3m), 5. 37 (d, 1H, Jm(n)-H2(n) = 2. 4, HI11), 5. 29 (dd, 1H, JH1(n)-H2(n) = 1. 6, JH2(n)-H3(n) =2.4, H2n)，5. 23(dd，lH，JH1(III)-H2(III) = 1.6, H2ni)，5. 09 (d，1H，JH1 ⑴_H2⑴=1.6, HI1)，
4.94 (d，1H，JH1(in)-H2(iii) = 1- 6，HI111)，4. 71 (dd, 1H，Jgem = 11. 9，J = 2. 4，H6)，4. 60 (dd, 1H，J =11. 9, J = 2. 4，H6)，4. 58 (dd, lH^S1) ,4. 50 (dd, 1H, J = 4. 8，H6)，4. 38 (dd, 1H，JH2(II)_H3(II) =3. 2，H3n)，4. 34-4. 22 (m, 3H)，4. 14-3. 94 (m, 3H)，3. 91 (dt，1H, Jgem = 9. 5，J = 6. 4，J = 6. 4，0CH2)，3. 59 (dt, 1H, J = 6. 4，J = 6. 4，0CH2)，3. 44 (t, 2H, J = 6. 4，NCH2)，1. 91 (五重 峰，2H，J = 6. 4，CH2)。3-{4_(胆甾-33-基-氧甲基)_[1，2，3]三唑 基}丙基 2，3，4，6_ 四 _0_ 苯 甲酰基-a-D-甘露吡喃糖基-(1 — 3)_2，4，6_三-0-苯甲酰基-a-D-甘露吡喃糖 基-(1 — 3)-2，4，6-三-0-苯甲酰基-a-D-甘露吡喃糖苷(58)向 DCM(64iiL)和叔-丁醇(60 u L) (0. 4M)中的 57 (81mg，0. 0497mol)、3 3 -(丙 炔-2-基氧基)胆留烷醇(43mg，0. 0994mmol,2当量)的混合物中，加入CuS04溶液(在水 中 0. 3M,33u L,0. 00994mmol,0. 2 当量)和抗坏血酸钠溶液(水中 lM,20u L,0. 0199mmol, 0.4当量)。室温下剧烈地搅拌该混合物3天。在硅胶上蒸发该混合物，并通过硅胶柱层析 (2X 14cm，己烧-乙酸乙酯 170 20，150 30，120 30，120 40，120 60，120 80 和100 100梯度洗脱)对其进行纯化，从而得到无色胶质状三唑58(74mg，72% )。 NMR (CDC13, 300MHz) 8 8. 19-7. 88 (m, 16H, Bz)，7. 69-7. 15 (m, 35H, Bz and 三唑 _CH)，5. 99 (dd 或 t，lH，JH3_H4 = 9.9，JH4_H5 = 9.9，H4)，5. 98((1(1或扒111，了 = 9. 9, J = 9.9，H4)，5. 94(dd 或 t，1H, H4) ,5. 66(dd, 1H, JH2⑴_H3⑴=3. 1，JH1(I)-H2⑴=1. 6, R21) ,5. 57 (dd, 1H, JH3(m)_H4(m)= 10. 0, JH2(III)_H3(III) = 3. l,H3in), 5. 36 (d, 1H, JH1(II)_H2(II) = 1.6, HI11), 5. 28 (dd, 1H, JH2(II)_H3(II) =3. 1，H2n)，5. 21(dd，lH，JH1(ni)-H2(in) = 1.6，H2ni)，5. 04(d，lH，HI1), 4. 94(d，lH，Hlm)， 4. 70(s，2H，0CH2), 4. 70-3. 92 (m, 11H) ,3. 84 (dt 或 ddd，1H, Jgem = 9. 9，J = 6. 3，J = 6. 3， 0CH2)，3. 50 (dt 或 ddd, 1H，J = 5. 5，J = 5. 5，0CH2)，3. 37 (m, 1H, OCH-chol)，2. 26 (m, 2H, CH2)，1. 99-0. 53 (m，31H，胆甾烷基)，0. 90 (d，3H，J = 6. 8，胆甾烷基 _CH3)，0. 87 (d，3H，J = 6. 8， 胆甾烷基-CH3)，0. 86 (d，3H，J = 6. 8，胆甾烷基 _CH3)，0. 76 (s，3H，胆甾烷基 _CH3)，0. 64 (s， 3H，胆甾烷基-CH3)。3-{4_(胆甾-33-基-氧甲基)_[1，2，3]三唑-l-基}丙基a-D-甘露吡喃糖 基-(1 — 3) - a -D-甘露吡喃糖基-(1 — 3) - a _D_甘露吡喃糖苷(59)将全苯甲酸酯(perbenzoate)58(70mg，0.0341mmol)溶解于无水 THF (2mL)和甲醇 (2mL)中。用11M NaOMe的甲醇(0. 2mL，2. 2mmol)溶液对该混合物进行处理。室温下搅拌 2天后，通过加入AG50WX8树脂(H+型)来中和该白色悬浮液。通过过滤将澄清的溶液从树 脂中分离出来。用甲醇(3X2mL)清洗该树脂。蒸发合并的滤液和冲洗液至干，并在P205真 空干燥器中进行干燥o/n，从而得到多元醇59，将其直接用于下一步骤。3-{4_(胆甾-30-基-氧甲基)_[1，2，3]三唑_1_基}丙基2，3，4，6_四_0_磺酸 钠-a -D-甘露吡喃糖基_ (1 — 3) -2,4,6-三_0_磺酸钠-a _D_甘露吡喃糖基-(1 — 3) _3， 4，6-三-0-磺酸钠-a -D-甘露吡喃糖苷(60)将多元醇59溶解于无水DMF(1.7mL，0. 02M)中。加入S03.吡啶复合物(163mg， 1. 023mmol,3当量每羟基，刚刚用水、甲苯、乙醇、DCM清洗过的，并在P205的真空干燥器中干 燥了 1小时)。60°C o/n下搅拌该混合物(19h)，将其冷却到0°C。加入5M NaOH直到pH > 10为止。加入乙醇(6mL)，在0°C下搅拌该混合物20分钟。用离心法分离该沉淀物，并用乙 醇(lmL)对其进行清洗，将其再次溶解在水中(1. 5mL)。将该橙黄色的溶液装载到Waters C18 SPE(200mg，分别用甲醇、甲醇-水50 50,10 90,5 95和1 99，3mL重力洗脱 对其进行预处理)上，并用甲醇-水(1 99)洗脱。将产物部分装入到Slide-A-Lyzer 透析盒(2000MWC0，0. 5-3. OmL容量)中。透析在室温下，在10L纯水中进行1天。更换水 (10L)并在0°C下另外继续透析一天。分离浅黄色溶液并冻干，从而得到微黄色粉末全硫酸 酯 60(43mg，62%)。屮匪 R(D20，300MHz) 8 7. 92 (s, 1H，三唑)，5. 27 (d, 1H, J= 1. 8)，5. 20 (d, 1H, J = 1. 4) ,5. 04 (m, 1H)，4. 89 (br s，1H)，4. 72 (m, 1H)，4. 65-3. 28 (m, 23H)，2. 07 (m, 2H, CH2)，1. 83-0. 45 (m, 31H,胆留烧基)，0. 73 (d, 3H, J = 6. 4, CH3)，0. 66 (d, 6H, J = 6. 4, 2xCH3)， 0. 63 (s, 3H, CH3)，0. 49 (s, 3H, CH3)。实施例14.2,3,4,6-四_0_乙酰基-a-D-吡喃葡萄糖基_(1 — 4)_2，3， 6-三-0-乙酰基-a -D-吡喃葡萄糖基_ (1 — 4) -2，3，6-三-0-乙酰基-a _D_吡喃葡萄糖 基-(1 — 4) -1，2，3，6-四-0-乙酰基-D-吡喃葡萄糖(61)将干燥的麦芽四糖(502mg,0. 753mmol)和DMAP(cat.)溶解于无水吡啶(10mL) 中，然后在0°C下逐滴地加入Ac20(2.8g)的吡啶(5mL)溶液，在0°C下搅拌4小时，在_20°C 下放置48小时。该反应不完全，因此在0°C下加入Ac20(lg，mmOl)，在室温下16小时后，在 0°C下通过加入无水甲醇(10mL)淬灭该反应，并在室温下对其进行持续的搅拌2小时。与 甲苯(3X30mL) —起共蒸发该溶液，从而得到白色固体全醋酸酯6135(920mg，97%)。2,3,4,6-四-0-乙酰基-a-D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4) _2，3，6-三_0_乙酰 基-a -D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4) -2，3，6-三-0-乙酰基-a _D_吡喃葡萄糖基-(1 — 4) _2， 3，6-三-0-乙酰基- a -D-吡喃葡萄糖基三氯乙酸亚胺酸酯(62)在0°C下向乙二胺(1. 66mmol,0. llmL)的无水THF(15mL)溶液中，逐滴地加入冰 醋酸(0.90mmOl，0.053mL)立即产生沉淀物，该沉淀物在含水后处理之前一直存在。在0°C下加入全醋酸酯61(900mg，0. 717mmol)，并在室温下搅拌该混合物2小时。然后TLC(甲 苯/乙酸乙酯，1 2)显示起始物料消失，和位移较小的产物出现，位移较小的产物似乎 大多数为端基混合物。逐滴地滴加醋酸(0. 15mL)来中和该溶液使其达到pH 6。用空气 流吹走溶剂，将残留物溶解于乙酸乙酯(100mL)中，用饱和的NaHC03-溶液(3X50mL)、水 (3X10mL)、盐水(30mL)对其进行冲洗，干燥(Na2S04)并真空浓缩，从而得到黄色泡沫状半 缩醛(830mg)。将干燥的半缩醛(830mg，0.684mmol)溶解于无水DCM(5mL)中，在0°C下加 A K2C03(1. 20g，8. 60mmol)和三氯乙腈(0. 849mL，8. 40mmol)并在室温下连续搅拌2小时。 在硅胶柱(20X1. 5cm，甲苯-乙酸乙酯，1 2—乙酸乙酯，含有0. 2% (v/v)Et3N)上纯化 该混合物，得到想得到的蓬松白色粉末状的三氯乙酸亚胺酸酯6235(795mg，86% )。用P205 干燥该混合物一整夜并将其储存在-20C条件下。胆甾烷基2，3，4，6_四-0-乙酰基-a-D-吡喃葡萄糖基_(1 — 4)_2，3， 6-三-0-乙酰基-a -D-吡喃葡萄糖基_ (1 — 4) -2，3，6-三-0-乙酰基-a _D_吡喃葡萄糖 基-(1 — 4)-2，3，6-三-0-乙酰基-3-D-吡喃葡萄糖苷(63)在无水DCM(1. 5mL)中搅拌三氯乙酸亚胺酸酯62 (300mg，0. 221mmol)、胆甾烷醇(2 当量，172mg,0. 442mmol)和3 A分子筛(100mg)0. 5小时。在0°C下逐滴地滴加TMS-三氟乙 酸酯的无水DCM(0. 5当量.，0. 4M，0. 275mL，0. llmmol)溶液。室温下30分钟后，加入另外 一部分无水DCM中的TMS-三氟乙酸酯(0. 36当量.，0. 4M，0. 2mL，0. 08mmol)，在室温下连 续搅拌30分钟。在0°C下加入Et3N(0. 025mL)用10分钟来淬灭该反应，使其通过Celite 短柱(0. 5cm)来进行过滤，用DCM(5X25mL)和乙酸乙酯(3X25mL)清洗。两个有机相都 分别用饱和的NaHC03-溶液(3X25mL)和盐水(25mL)冲洗。合并水提取物并用乙酸乙 酯(3X30mL)再次萃取，用盐水冲洗(30mL)，将其与其他有机提取物合并，干燥(Na2S04)， 真空浓缩从而得到黄色泡沫状粗制品(480mg)。在硅胶柱(30X5cm，甲苯乙酸乙酯 3:2 — 1:1 — 1: 2—乙酸乙酯，含有0. 2%Et3N(v/v))上对该产物进行纯化。该纯 化结果在部分A中得到了所想要得到的白色泡沫状0 -连接的糖苷63 (81mg, 23% )，在部 分B含有77%部分脱去乙酰基的a-连接的糖苷和23%部分脱去乙酰基的连接的糖 苷(118mg)。力 NMR(CDC13,400MHz) 8 5. 24-5. 45 (m, 7H, 3 X HI, 4 X H3), 5. 08 (t, 3H, JH3_H4 = JH4-H5 9. 80，H4mi，)4. 86 (dd，1H，JHI_H2 = 4. 1，JH2_H3 = 10. 4，H2im)，4. 70-4. 80 (m，3H，3 X H2)， 4. 63 (d, 1H, JHI_H2 = 1.1，HI1) ,4. 33-4. 54 (m, 4H, 4XH6), 3. 86-4. 31 (m, 10H, 3XH4, 3XH5, 4XH6) ,3. 70(ddd，lH，H51)，3. 56 (m，1H，胆甾醇基-H3)，2. 20，2. 19，2. 16，2. 11，2. 07，2. 04， 2. 03，2. 02，2. 015,2. 010,2. 00，1. 99(s，39H，13XAc) ,0. 55-2. 00 (m, 33H, 12CH2，9CH)， 0. 90(d，3H，J = 6. 6，胆甾烷基-CH3)，0. 871(d，3H，J = 6. 6，胆甾烷基 _CH3)，0. 867(d，3H，J =6. 6，胆甾烷基-CH3)，0. 78 (s，3H，胆甾烷基 _CH3)，0. 65 (s，3H，胆甾烷基 _CH3)。33 -胆甾烷基a -D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4)-a-D-吡喃葡萄糖 基-(1 — 4) - a -D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4) - 3 -D-吡喃葡萄糖苷(64)按照常规操作将全醋酸酯63(75mg，0. 047mmol)脱去乙酰基，从而得到白色固体 状多元醇64(48mg，98% )，将其用于下一步骤而不进行进一步的纯化或鉴定。3 3 -胆甾烷基2，3，4，6-四-0-磺酸钠-a -D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4) -2，3， 6-三-0-磺酸钠-a -D-吡喃葡萄糖基_ (1 — 4) -2，3，6-三-0-磺酸钠-a _D_吡喃葡萄糖 基-(1 — 4)-2，3，6-三-0-磺酸钠-3-D-吡喃葡萄糖苷(65)
将多元醇64(48mg，0. 046mmol)溶解于无水DMF(2. 3mL,0. 02M)中，加入刚刚清洗 和干燥的S03.吡啶复合物(285mg，3当量每0H-基团，1. 79mmol)，在60°C搅拌该混合物 16小时。将反应混合物冷却至0°C 10分钟，然后在0°C下向一部分中(达到pH 12)加入 冰冷的NaOH水溶液(5M，2. 1当量/S03，0. 752mL，3. 76mmol)将其中和。在0°C搅拌该混悬 液15分钟，用水(10mL)稀释，在40°C下真空浓缩。得到一种浅黄色粉末，将该粉末溶解于 水(10mL)中得到pH 11. 5的溶液。通过加入NaOH水溶液(5M，5滴)将该溶液调整到pH 12. 5，使用Slide-A-Lyzer 盒(2000MWC0，4_12mL)在室温下用水(4L)交换透析16小时。 在0°C下继续用水(4L)交换透析3天，其中每隔24小时更换水，并向水中加入NH4HC0yK 溶液(3M，0. 6mL)以调整pH到 6. 0-6. 5。然后冷冻干燥脱去盐的溶液，从而得到蓬松的白 色粉末状全硫酸酯 65(97mg,89% )。NMR(400MHz, D20) 8 5. 72 (d，1H，JHI_H2 = 3. 3，1H1)， 5. 69 (d，1H，JHI_H2 = 3.6, HI), 5. 59 (d，1H，JHI_H2 = 3.6, HI), 5. 10 (d，1H，JHI_H2 = 4.8, HI1)，
4.19-5. 02(m，23H，4XH2，4XH 3，4XH_4，3XH5，8XH6)，4. 14 (m, 1H, H51)，3. 85 (m, 1H, H-3Chol.) ,0. 63-2. 06 (m, 33H, 12CH2，9CH)，0. 95(d，3H，J = 6. 5，胆甾烷基 _CH3)，0. 885 (d, 3H，J = 6. 6，胆甾烷基-CH3)，0. 882 (d，3H，J = 6. 6，胆甾烷基 _CH3)，0. 85 (s，3H，胆甾烷 基-CH3)，0. 70 (s，3H，胆甾烷基-CH3)。实施例15.2,3,4,6-四_0_苯甲酰基-a-D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4)_2，3， 6-三-0-苯甲酰基-a -D-吡喃葡萄糖基_ (1 — 4) -2，3，6-三-0-苯甲酰基_ a _D_吡喃葡 萄糖基-(1 — 4)-1，2，3，6-四-0-苯甲酰基-D-吡喃葡萄糖(66)将G4糖浆(1. 8g，冻无水，含有 72 %麦芽四糖(w/w)， 1. 94mmol)，和 DMAP (75mg)溶解于无水吡啶(36mL)中，在0°C下逐滴地滴加苯甲酰氯(94. 7mmol，llmL) 的吡啶(8mL)溶液，并在室温下连续搅拌16小时。在0°C下加入甲醇(50mL)和连续搅拌 2小时来淬灭该混合物。该混合物与甲苯(3X50mL) —起共蒸发从而得到一种黄色糖浆。 将该糖浆悬浮于乙酸乙酯(150mL)中，用饱和的碳酸氢钠溶液(5X50mL)、盐酸水(5%， 5X50mL)、和水(5X50mL)对其进行冲洗。用乙酸乙酯(2X50mL)再次萃取水相，将其与 主要的有机提取物合并，用盐水冲洗(50mL)，干燥(Na2S04)，过滤和真空浓缩。为了除去大 部分芳香族杂质，用沸腾的正己烷(5X50mL)冲洗该糖浆，超声处理，并在高真空条件下干 燥o/n，从而得到淡米黄色泡沫状的全苯甲酰化的麦芽低聚糖混合物(6.0g)。在50°C下 将残留物溶解于最小容量的甲苯/乙酸乙酯(15 l，25mL)的混合物中，将其加到硅胶柱 (21 X 5. 5cm，用甲苯预先处理)上，用甲苯/乙酸乙酯15 1， 1柱体积)至10 1(1.5 柱体积)至5 1(1. 5柱体积)梯度洗脱。在TLC上通过紫外来检查级分，合并化学着色 和纯的麦芽四糖全苯甲酸酯的级分，真空浓缩，在高真空下干燥，从而得到白色泡沫状的纯 的产物66 (3. 04g，76%，以干糖浆中72%的麦芽四糖为基础)。t-NMR显示存在端基混合物 (a 3=1: 1)和所有0H-基团全苯甲酰化(纯度> 95% )。屮NMR (400MHz，CDC13) 3 -端基8. 26-7. 09(m，65H，13XBz) ,6. 33 (d, 1H, J1(I)_2(I) = 7. 5，HI1) ,6. 19 (dd or t, 1H, J2(iv)-3(iv) = 10- 2，J3(iv)-4(iv) = 10- 2，H3IV)，6. 07 (dd, 1H, J2(n)-3(n) = 10. 2，J3(n)-4(n) = 8. 9, H3n)，5. 96 (dd, 1H, J2(m)-3(in) = 10. 2，J3(III)_4(III) = 8. 2, H3in)，5. 83 (d, 1H, JkiV)-2(iv) = 4. 1， H1IV)，5. 82 (dd or t，1H，⑴=6. 8，J3⑴_4⑴=8. 2，H31)，5. 76 (dd or t，1H，J4(IV)_5(IV) =9.6，H4IV)，5.71 (d，lH，J1(II)_2⑶=4. 1，HI11)，5. 69 (d，1H，J1(III)_2(III) = 4.1，Hl111)，
5.65 (dd, 1H, H21)，5. 34 (dd, 1H, H2IV)，5. 20 (dd, 1H, H2n)，5. 14 (dd, 1H, H2m)，5. 03-4. 22 (m,15H，3XH4(分别在 4. 70,4. 52 和 4. 40ppm)，和 4XH5 和 8XH6).注糖环 II 和 III 的归 属是不明确的。^-端基异构体必^彳⑷识，丄⑴如)=3.6, HI1), 5. 46(dd,lH, J1(I)_2(I)= 10. 2，J2m_3⑴=3. 6，H21)2,3,4,6-四_0_苯甲酰基-a _D_吡喃葡萄糖基-(1 — 4) _2，3，6_三_0_苯 甲酰基-a-D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4)_2，3，6_三-0-苯甲酰基-a-D-吡喃葡萄糖 基-(1 — 4)-2，3，6-三-0-苯甲酰基-0-0-吡喃葡萄糖叠氮化物(67)将全苯甲酸酯66(500mg，0. 235mmol)溶解于无水DCM(2mL)中，然后在0°C下加入 30% HBr的醋酸溶液(0. 5mL)，并在室温下搅拌2小时。将所述溶液倒入冰水-DCM(lOOmL) 中来淬灭该反应，用冰水(3X50mL)、饱和的NaHC03-溶液(3X30mL)、盐水(25mL)冲洗有机 相，干燥(Na2S04)，并在室温下真空浓缩，从而得到粗制的溴化物。将该粗制的溴化物溶解于 氯仿(2mL)中，然后加入NaN3(130mg，2mmol)、溴化四丁基铵(129mg，0. 4mmol)、和最后加入 饱和的NaHC03-溶液(3. 5mL)，并在室温下剧烈地搅拌24小时。用空气流吹去溶剂。然后将 残留物溶解于乙酸乙酯(10mL)中，用水(3X50mL)、饱和的NaHC03-溶液(4X25mL)对其进 行冲洗。用乙酸乙酯(2X50mL)再次萃取水相，合并有机提取物，用盐水冲洗(2X25mL)，干 燥(Na2S04)并真空浓缩。得到黄色泡沫状的糖基叠氮化物67 (466mg，97%)，不进行进一步 纯化而将其用于下一步骤。NMR(CDC13,400MHz) S 7. 03-8. 24 (m，65H，13 XBz)，6. 10 (dd， 1H, JH2_H3 = 10. 4，JH3_H4 9. 9，H3im, )5. 99 (dd, 1H，JH2_H3 = 10. 1，JH3_H4 8. 7，H3m)，5. 84 (dd, 1H, JH2_H3 = 9.9, JH2_H3 = 8. 2，H3n)，5. 75 (d，1H，JHI_H2 = 3.9, HI1111)，5. 67 (m，2H，H3，H4im)，
5.63 (d，1H，JHI_H2 = 4. 1，HI111)，5. 58 (d，1H，JHI_H2 = 3. 9，HI11)，5. 26 (dd, 1H，JHI_H2 = 4. 1，JH2_H3 =10. 4，H2im)，5. 20 (dd, 1H，JHI_H2 = 8. 4，JH2_H3 = 9. 2，H2)，5. 10 (dd, 1H，，JH2_H3 = 10. 1， H2mi)，5. 04(dd，lH，H2n)，4. 98 (dd，1H，JH6b_H5 = 2. l，JH6bH6a = -12. 0，H6b)，4. 88 (d，1H，JHI_H2 =8. 4，HI)，4. 82 (dd, 1H，JH6b_H5 = 1. 7, J删6a = -12. 0，H6b)，4. 67-4. 76 (m，2H，H_6a，H_6b)， 4. 53-4. 63 (m, 2H, H_6a，H_6b)，4. 30-4. 47 (m, 7H, 3 X H4, 2 XH6, 2 X H5)，4. 10-4. 21 (m, 2H, 2XH5).4-(胆甾-33 -基-氧甲基)[1，2，3]三唑基2，3，4，6_四_0_苯甲 酰基-a-D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4)_2，3，6_三-0-苯甲酰基-a-D-吡喃葡萄糖 基-(1 — 4)-2，3，6-三-0-苯甲酰基-a-D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4) _2，3，6_三_0_苯甲 酰基_ 0 -D-吡喃葡萄糖苷(68)将丙炔-2-基氧基)胆甾烷醇(84mg，2当量，0. 196mmol)和叠氮化物 67(200mg，0. 098mmol)溶解于 DCM/t-Bu0H(3 2，w/w，0. 21M，0. 200mL)的混合物中。加入 CuS04水溶液(0. 3M，0. 1当量.，0. 033mL)和抗坏血酸钠水溶液(1M，0. 3当量.，0. 029mL)， 避光下剧烈地搅拌该混合物48小时。TLC分析(甲苯乙酸乙酯，1 1)指示反应终点，产 生极性大于起始的叠氮化物的产物。用DCM(lOOmL)稀释所述混合物，用饱和的NaHC03-溶 液(3X50mL)对其进行清洗。用DCM(3X20mL)再次萃取水相，合并有机提取物，用盐水 冲洗(50mL)，干燥(Na2S04)并真空浓缩，从而得到黄色泡沫状粗制品(279mg)。在硅胶 柱(30X5cm，甲苯-乙酸乙酯，7 1 —5 1 —3 1)上纯化该粗制品，从而得到微黄 色泡沫状三唑 68(153mg，63 % )。NMR(CDC13,400MHz) 8 7. 05-8. 24(m,65H, 13 XBz),
6.14(d，lH，Jh1-H2 = 8. 9, HI1), 6. ll(dd,lH, JH2_H3 = 10.6，JH3_H4 9.8，H3im)，6. 00 (dd，1H， JH2_H3 = 10. 1，JH3_H4 = 8. 6，H3ni)，5. 86 (m，2H，H31，HI111)，5. 76 (d，1H，JHI_H2 = 3. 8，HI1111)，5. 64-5. 71 (m, 3H, Hlm, H21，H4mi)，5. 63 (d, 1H, JHI_H2 = 3.8, HI11)，5. 26 (dd, 1H, H2mi)， 5. 12 (dd, 1H，JHI_H2 = 3.8, H2ni)，5. 08 (dd, 1H，，JH2_H3 = 9.8, H2n)，4. 98 (dd, 1H，JH6b_H5 = 1. 7，J删6a = -12. 5，H6b)，4. 87 (dd, 1H, H6b)，4. 69-4. 77 (m, 2H, H6a, H6b)，4. 53-4. 66 (m, ffl^XHB^CH^H^) ,4. 29-4. 50 (m，7H，2 XH4，2H6，3 XH—5)，4. 18 (m, 1H,H5) ,4. 10-4. 21 (m, 2H，2XH5)，3. 26 (m, 1H，H_3Chol)，0. 52-2. 00 (m, 33H, 12CH2，9CH)，0. 90(d，3H，J = 6. 5，胆甾 烷基-CH3)，0. 869(d，3H，J = 6. 7，胆甾烷基-CH3)，0. 864(d，3H，J = 6. 6，胆甾烷基 _CH3)， 0. 77 (s，3H，胆甾烷基-CH3)，0. 65 (s，3H，胆甾烷基 _CH3) 4-(胆甾-33 -基-氧甲基)[1，2，3]三唑-1-基a-D-吡喃葡萄糖 基-(1 — 4) - a -D-吡喃葡萄糖基_ (1 — 4)-1-脱氧-3 -D-吡喃葡萄糖苷(69)将全苯甲酸酯68(95mg，0. 038mmol)溶解于甲醇/THF(4 1 (w/w)，7. 5mL)混合 物中，然后在0°C下加入NaOMe的甲醇(11M，0. 040mL)溶液并同时连续地在室温下进行搅 拌。16小时后仍然存在部分苯甲酰化的化合物(TLC:甲醇乙酸乙酯，3 1)，所以再加入 NaOMe的甲醇溶液(11M，0. 040mL)并同时在连续地搅拌3小时。加入强酸性阳离子交换树 脂(BioRad AG-X8，H+)来中和该溶液以调整pH到7，然后过滤溶液，用甲醇(5X20mL)清 洗，真空浓缩。在硅胶柱(15X lcm，乙酸乙酯，一甲醇-乙酸乙酯，3 1—甲醇，含0.2% Et3N)上纯化残留物，从而得到白色固体状多元醇69(47mg，100% )04_(胆甾-3-基-氧甲基)[1，2，3]三唑-1-基2，3，4，6-四-0-磺酸钠-a-D-吡 喃葡萄糖基_ (1 — 4) -2，3，6-三-0-磺酸钠-a _D_吡喃葡萄糖基-(1 — 4) 脱氧_2，3， 6-三-0-磺酸钠-0 -D-吡喃葡萄糖苷(70)将多元醇69(45mg，0. 040mmol)溶解于无水DMF(2mL，0. 02M)中，加入刚刚清洗和 干燥的S03.吡啶复合物(248mg，每0H-基团3当量，1. 56mmol)，并在60°C下搅拌该混合 物16小时。将该反应混合物冷却至0°C 10分钟，然后在0°C下在一部分中通过加入冰冷的 NaOH水溶液(5M，2. 1当量/S03，0. 656mL，3. 28mmol)将其中和(达到pH12)。在0°C下搅拌该 混悬液15分钟，用水(20mL)稀释，在40°C真空浓缩。将该溶解于水(llmL)中得到pH 10. 5 的溶液。通过加入NaOH水溶液(5M，5滴)将该溶液调整到pH 12，使用Slide-A-Lyzer 盒(2000MWC0，4-12mL)在室温下用水(4L)交换透析16小时。在0°C下用水(4L)继续交 换透析3天，其中每24小时后更换水(4L)和向水中加入NH4HC03水溶液(3M，0.6mL)以调 整pH到 6. 0-6. 5。然后冷冻干燥已脱盐的溶液，从而得到蓬松的白色粉末状全硫酸酯 70 (80mg, 82%) o'H 匪 R (400MHz，D20) 8 8. 31 (s,lH, = CH)，6. 25 (d, 1H, JHI_H2 = 6. 9,1H, HI1)， 5. 70(m，2H，2XHl)，5. 65 (d, 1H, JHI_H2 = 3. 6，HI) ,4. 72-5. 03 (m, 11H，4XH2，4xH3，H41111， 0CH2), 4. 13-4. 69 (m, 15H，3 XH4，4 XH5，8 X H6)，3. 58 (m, 1H, H_3Chol. ) ,0. 63-2. 05(m，33H， 12CH2,9CH)，0. 95 (d, 3H, J = 6. 3，胆甾烷基 _CH3)，0. 87 (d, 6H, 2 X 胆甾烷基 _CH3)，0. 84 (s, 3H,胆甾烷基-CH3)，0. 70 (s，3H，胆甾烷基 _CH3) 实施例16.2,3,4,6-四_0_乙酰基-a-D-吡喃葡萄糖基_(1 — 4)_2，3， 6-三-0-乙酰基-a -D-吡喃葡萄糖基_ (1 — 4) -2，3，6-三-0-乙酰基-a _D_吡喃葡萄糖 溴化物(72)在0°C下将麦芽三糖全醋酸酯(71)36(200mg,207umol)加入到DCM(lmL)和33% HBr/HOAc (0. 7mL)中。在0°C下搅拌该混合4小时。在干燥(Na2S04)和蒸发溶剂前，用DCM 稀释该溶液，用冰水(X2)、NaHC03(饱和的)(X2)和盐水(XI)对其进行冲洗，从而得到白色固体状溴化物72，将其用于反应而不进行进一步的纯化或鉴定。2,3,4,6-四-0-乙酰基-a-D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4) _2，3，6-三_0_乙酰 基-a -D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4) -2，3，6-三-0-乙酰基-3 _D_吡喃葡萄糖叠氮化物(73)将溴化物72 ( 200mg)加入到乙酸乙酯(5mL)和NaHC03 (饱和的)(5mL)的混合物 中。加入NaN3 (500mg)，然后加入Bu4NBr (cat.)。室温下剧烈地搅拌该混合物一夜。用乙酸乙 酯稀释该溶液，用NaHC03(饱和的)(X2)和盐水(XI)对其进行冲洗，然后干燥(Na2S04)， 蒸发溶剂，从而得到白色固体状叠氮化物73 (198. 9mg, 100%,两个步骤)，将其用于反应而 不进行进一步的纯化或鉴定。4_(胆甾-33-基氧甲基)[1，2，3]三唑-1-基2，3，4，6_四-0-乙酰基-a-D-吡喃 葡萄糖基_ (1 — 4) -2，3，6-三-0-乙酰基-a _D_吡喃葡萄糖基-(1 — 4) _2，3，6_三_0_乙 酰基-1-脱氧_ 0 -D-吡喃葡萄糖苷(74)室温下剧烈地搅拌叠氮化物73 (200mg, 211 u mol)、3_(丙炔_2_基氧基)胆甾烷 醇(3 当量，267mg)、CHC13 (2mL)、叔-BuOH(2mL)、CuS04 (50 y L 的 0. 3M 水溶液)和抗坏血酸 钠(62.5PL的1M水溶液)一夜。蒸发溶剂，在柱层析(Si02 己烷至2 3己烷乙酸乙 酯)上纯化残留物，从而得到三唑 74(197mg,68% )。NMR(300MHz, CDC13) 6 7. 66 (s，1H， 三唑-H)，5. 85 (d, 1H, Jlj2 = 9. 3，H-l1)，5. 46-5. 27 (m, 6H, H-l11，H-l111，H-21，H_4m，H-311， H-3m)，5. 03 (dd, 1H, J3,2 = 9. 8，J3,4 = 9. 8，H-31), 4. 82 (dd, 1H, J2a = 4. 1，J2,3 = 10. 3， H-2)，4. 72 (dd, 1H, H-2)，4. 63 (s,2H, CH20)，4. 47-4. 41 (m, 2H)，4. 32-3. 88 (m, 9H)，3. 31 (m, 1H, CHO)，2. 12 (s,6H, OAc)，2. 06 (s,3H, OAc)，2. 03 (s,3H, OAc)，2. 00 (s,3H, OAc)，1. 99 (s, 3H, OAc)，1. 98 (s, 3H, OAc)，1. 96 (s, 3H, OAc)，1. 96-0. 83 (m, 31H)，1. 82 (s, 3H, OAc)，0. 85 (d, 3H，J = 6. 7，CH3)，0. 82 (m, 6H, CH3)，0. 76 (s, 3H, CH3)，0. 60 (s, 3H, CH3).4-(胆甾-3-基-氧甲基)[1，2，3]三唑-1-基a -D-吡喃葡萄糖 基-(1 — 4) - a -D-吡喃葡萄糖基_ (1 — 4)-1-脱氧-0 -D-吡喃葡萄糖苷(75)按照常规方法将全醋酸酯74(197. 2mg)脱去乙酰基，从而得到白色固体状多元醇 75(131mg，96% )，将其用于反应而不进行进一步的纯化或鉴定。4-(胆甾-3 0 -基-氧甲基)[1，2，3]三唑-1-基2，3，4，6-四-0-磺酸钠-a _D_吡 喃葡萄糖基_ (1 — 4) -2，3，6-三-0-磺酸钠-a _D_吡喃葡萄糖基-(1 — 4) 脱氧_2，3， 6-三-0-磺酸钠-0 -D-吡喃葡萄糖苷(76)将多元醇75(131.2mg，137iimol)溶解于 DMF(0.02M，6.9mL)中。加入 S03.批啶 (每羟基3当量，4. 12mmol，655mg)并在60°C下搅拌该溶液一夜。在冰水中冷却该溶液，然 后用5M Na0H(2. 1当量/S03.吡啶，1.73mL)进行中和。蒸发溶剂并在C18 SPE柱(2Xlg 柱)上纯化该粗制品，然后进行透析(48小时，2000MWC0盒)。冷冻干燥该灰白色溶液，从而 得到灰白色固体状全硫酸酯 76 (156mg，58% )。NMR(400MHz, D20) 8 8. 32 (s, 1H，三唑 _H)， 6. 22 (d, 1H, Jlj2 = 7. 5，H-l1)，5. 69 (d, 1H, Jlj2 = 3. 4，H-l)，5. 63 (d, 1H, H-l)，5. 04-4. 17 (m, 18H)，3. 58 (m, 1H, CHO)，2. 03-0. 85 (m, 31H)，0. 95 (d, 3H, J = 6. 2，CH3)，0. 88 (d, 6H, CH3)， 0. 85 (s, 3H, CH3)，0. 71 (s，3H, CH3).实施例17. 33-胆甾烷基2，3，4，6-四-0-苯甲酰基-a-D-甘露吡喃糖苷(77)将2，3，4，6-四-0-苯甲酰基-a-D-甘露吡喃糖基三氯乙酸亚胺酸酯(0. 372g, 0. 502mmol)禾P 3 3 -胆留烧醇(0. 390g, 1. 004mmol，2 当量)溶解于无水 DCM(5mL，0. 1M)中。加入粉末状MS 3A (120mg刚活化的)。在0°C下搅拌该混合物30分钟。用一个注射器逐 滴地滴加 TMSOTf (0. 018mL，0. 100mmol,0. 2 当量)的 DCM(0. 3mL)溶液。在 0°C 下搅拌该 混合物同时用TLC(己烷-乙酸乙酯=83 17)监测该反应。1.5小时后转化完全，加入 Et3N(0. 2mL)。过滤该粗制混合物，用DCM(5X1. 5mL)冲洗固体物。将合并的滤液和冲洗液在 硅胶上蒸发，并用柱层析(硅胶2.5 X 22cm，己烷-乙酸乙酯200 20,210 30,400 80 梯度洗脱)进行纯化，从而得到无色泡沫状糖苷77 (368mg，76% )03 3 -胆甾烷基a _D_甘露吡喃糖苷(78)将上述无色泡沫状物(358mg，0. 370mg)溶解于无水THF(5mL)和甲醇(3mL)中， 加入11M NaOMe的甲醇(0. 4mL)溶液。立即产生白色沉淀。室温下搅拌该混合物o/n。再 次加入THF(3mL)，并在室温下再搅拌该浓的混悬液一天。加入AG50WX8树脂(H+型)来中 和该混合物从而使该混悬液变成一种澄清溶液。过滤除去树脂，并用甲醇(4X1. 5mL)清 洗。在5分钟内合并的滤液和洗涤液变成一种胶体(半透明的)。将该混合物蒸发至小体 积，使其从乙醇(10mL)中结晶。室温下整个混合物变成一种胶体，对其进行过滤和按压以 排出液体。用乙醇(1.5mL)清洗残留物，风干，和P205真空干燥o/n，从而得到白色粉末状 四醇78(131mg)。滤液产生一种沉淀物，将该滤液加热回流。结果成为澄清的溶液，在硅胶 上蒸发该溶液，通过硅胶柱层析(3 X 8cm，CHC13 200mL和甲醇_CHC13 20 200,20 160， 30 150梯度洗脱)对其进行纯化。合并产物的级分，浓缩蒸发，并在P205真空条件下干 燥3天，从而得到第二次得到白色粉末状产物白色粉末(79mg)。咕NMR(DMS0-d6, 300MHz) 8 4. 73 (d, 1H，J = 1. 5，HI)，4. 64 (d,可用 D20 交换，1H，J = 4. 6，OH)，4. 61 (br d,可用 D20 交换，1H，J = 4. 1，OH)，4. 48 (d，可用 D20 交换，1H，J = 5. 7，OH)，4. 37 (t，可用 D20 交换，1H， J = 6. 0，OH)，3. 62 (dd, 1H, J = 10. 3,5. 7)，3. 56-3. 29(m，6H，糖 5XH 和胆甾烷基的 H3)， 1. 95-0. 56(m，46H，胆甾烷基)。30-胆甾烷基2，3，4，6-四-0-磺酸酯基(sulfonate) - a-D-甘露吡喃糖苷四钠 盐(79)将四醇78(102. 8mg，0. 187mmol)溶解于无水 DMF(4. 67mL，0. 04M)中。加入 S03. 吡啶复合物(357mg，2. 244mmol，每羟基3当量，刚刚用水、甲苯、乙醇、DCM清洗的和在 P205真空干燥器中干燥1小时的)。60°C下搅拌该混合物18小时，将其冷却至0°C。加入 5MNa0H(3X0.45mL)。所述混合物(pH > 10)的颜色变成黄橙色。将该混合物蒸发至干。将 残留物(浅黄色粉末)溶解于4mL的水(pH > 10)中，并用SPE-C18柱(800mg，分别用MeCN、 MeCN-水1 1，1 9，1 99，4mL洗脱预处理)对其进行纯化。上样后，用水(12mL)、1 % MeCN 水(4. 04mL) ,5% (4. 2mL) ,10% (4. 4mL) ,20% (4. 8mL) ,30% (5. 2mL) ,40% (5. 6mL)、 50% (6mL) ,60% (4. 8mL)和 70% (5. lmL)洗脱该 SPE。通过用 MBT，Char 检验，CE 来检测 级分，然后将其合并和冻干。从 5% MeCN-水中得到少量产物79(25mg的褐色粉末)。 多数产物被10%，20%和30%的MeCN水洗脱下来(浅黄色粉末，120mg，67 % )。另一些 少量产物被40%的MeCN水(浅黄色粉末，4mg)洗脱下来。NMR(D20,400MHz) 8 5. 16 (br s, 1H, HI)，4. 70 (br s,与 HOD 重叠 1H，H2)，4. 6 (与 HOD 重叠，1H, H3)，4. 35 (br m, 1H, H4)， 4. 22 (br m，lH，H6)，4. 14 (br m, 1H,H6) ,3. 96 (br m，lH，H5)，3. 54 (br m，1H，胆甾烷基-H3)， 1. 90-0. 50(m，46H，胆甾烷基)。实施例18.2,3,4,6-四_0_苯甲酰基-a-D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4)_2，3，
356-三-0-苯甲酰基-a -D-吡喃葡萄糖基_ (1 — 4) -2，3，6-三-0-苯甲酰基_ a _D_吡喃葡 萄糖基-(1 — 4)-2，3，6-三-0-苯甲酰基-0-0-吡喃葡萄糖胺(80)将叠氮化物67(201mg，0. 098mmol)溶解于乙酸乙酯(10mL)中，将其与Pd_C(10%， (w/w), lOOmg) 一起在H2气氛下搅拌3小时(TLC:甲苯乙酸乙酯，7 1)。用氩气代替氢 气然后用硅藻土(甲醇和乙酸乙酯预先洗涤的，5mL)过滤该混合物，乙酸乙酯(5X20mL，+ 超声处理)洗涤，最后在室温下真空浓缩，从而得到白色固体状胺80 (200mg，100，将其 用于下一步骤而不进行进一步的纯化或鉴定。N-(2，3，4，6_ 四 _0_ 苯甲酰基-a-D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4) _2，3，6_ 三 _0_ 苯 甲酰基-a-D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4)-2，3，6-三-0-苯甲酰基-0_0-吡喃葡萄糖 基-(1 — 4)-2，3，6_ 三-0-苯甲酰基-3-D-吡喃葡萄糖基)-4-((3R，10S，12S，13R)-3， 12-二-0-乙酰基-10，13-二甲基十六氢-1H-环戊二烯并[a]菲-17-基)戊酰胺(81)将双乙酰脱氧胆酸37 ( 53mg，0. lllmmol)和DMAP (cat.)溶解于无水DCM(3mL)中， 然后在0°C下加入DCC在DCM(1M，1当量，0. lllmL)和HOBt (17mg，0. lllmmol)中的溶液，室 温下搅拌该混合物30分钟。加入Et3N(2滴)来碱化该溶液以将pH调整至8，然后在0°C 下加入胺80(150mg，0. 074mmol)在DCM/DMF(5 1，(w/w)，2. 5mL)的混合物中的溶液并在 室温下连续搅拌16小时(pH 8)。TLC(甲苯乙酸乙酯，3 1)显示没有进展，所以再加双 乙酰脱氧胆酸(53mg，0. lllmmol)、DCC 的 DCM(1M，1 当量，0. lllmL)、H0Bt (17mg，0. lllmmol) 和Et3N(3滴)并继续搅拌56小时。TLC指示反应结束，因此用硅藻土(预先洗涤过的， 2mm)滤过该溶液，用DCM(3X40mL)洗涤。用饱和的NaHC03-溶液(4X30mL)洗涤该澄清的 溶液。用DCM(2X20mL)再次萃取水相，合并有机提取物，用HC1水(3%，5X30mL)、饱和的 NaHC03-溶液(20mL)洗涤，干燥(Na2S04)并真空浓缩。在硅胶柱(30X5cm，甲苯-乙酸乙 酯，7 1 — 5 1 — 1 1)上纯化残留物，从而得到微黄色固体状酰胺81 (58mg，32% )。
NMR(CDC13，400MHz) 8 7. 01-8. 28 (m，65H，13 XBz)，6. 31 (d，1H，JH1_冊=9. 3，NH)，6. 10 (dd, 1H, JH2_H3 = JH3_H4 10. 1，H3im)，6. 00 (dd, 1H，JH2_H3 = 10. 2，JH3_H4 = 8. 9，H31)，5. 82 (m，2H，H311， H3m)，5. 74 (d，1H，JHI_H2 = 3.9, HI1111)，5. 67 (t，1H，H4im) ,5.61 (d，1H，JHI_H2 = 4.0, HI111)， 5. 57 (d，1H，JHI_H2 = 4.0, HI11)，5. 48 (t，1H，JH1_H2 = 9. 4H11)，5. 25 (dd, 1H，JH2_H3 = 10.6, H2mi)，4. 99-5. 15 (m，4H，3 X H2，H3-去氧胆酸.)，4. 92 (dd, 1H，JH6b_H5 = 1. 7，JH6bH6a = -12. 4， H6b)，4. 63-4. 81 (m，4H，3XH6, H12-去氧胆酸)，4. 56 (dd, 1H，JH6b_H5 =1.7，JH6bH6a = -12. 6， H6b)，4. 08-4. 52 (m, 10H，3 XH4，4XH5，3H6)，2. 07(s，3H，Ac)，2. 03(s，3H，Ac) ,0. 8-2. 15 (m, 26H, 10xCH2，6XCH)，0. 89(s，3H，CH3)，0. 70(d，3H，J = 6. 4，CH-CH3), 0. 63(s，3H，CH3).N- ( a _D_吡喃葡萄糖基-(1 — 4) - a _D_吡喃葡萄糖基-(1 — 4) - a _D_吡喃葡萄 糖基-(1 — 4)-3-D-吡喃葡萄糖基)-4-((3札105，125，1310-12-0-乙酰基-10，13-二甲 基十六氢-1H-环戊二烯并[a]菲-17-基)戊酰胺(82)将化合物81 (53mg，0. 021mmol)溶解于甲醇 /THF(7 1 (w/w)，4mL)的混合物中， 然后在0°C下加入NaOMe的甲醇溶液(11M，0. 040mL)并在室温下不断地搅拌。16小时后仍 有10%的部分苯甲酰化的非极性(unpolar)化合物存在(TLC 甲醇乙酸乙酯，2 1)，因 此再一次加入NaOMe的甲醇溶液(11M，0. 050mL)并继续搅拌1小时(pH 12)。加入强酸性 阳离子交换树脂(BioRad AG-X8，H+)来中和该溶液以调整其pH到7，然后过滤溶液，用甲 醇(3X30mL，+超声处理)洗涤，真空浓缩。在硅胶柱(10X lcm，乙酸乙酯，一甲醇-乙酸乙酯，2 1—甲醇，含0.2% Et3N)上纯化具有强烈芳香气味的残留物，从而得到白色固体 状多元醇 82(23mg，100% )。N- (2，3，4，6-四-0-磺酸钠-a -D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4) -2，3，6-三-0-磺酸 钠-a -D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4) -2，3，6-三-0-磺酸钠-a -D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4) _2， 3，6-三-0-磺酸钠-3 -D-吡喃葡萄糖基)-4- ((3R，10S, 12S，13R) -3-0-磺酸钠-12-0-乙 酰基-10，13-二甲基十六氢-1H-环戊二烯并[a]菲-17-基)戊酰胺(83)将多元醇82(22mg，0. 020mmol)溶解于无水DMF(0. 02M, 1. 05mL)中，加入刚刚洗涤 和干燥过的S03.吡啶复合物(每0H基团3当量，150mg, 0. 945mmol)，并在60°C下搅拌该混 合物16小时。在0°C下通过一次性加入NaOH水溶液(5M，2. 1当量S03，0. 397mL, 1. 985mmol) 来淬灭该反应(PH 12)，并在0°C下搅拌15分钟。在40°C真空浓缩该混悬液，从而得到黄色 粉末。将该粉末溶解于水中(llmL) (pHll. 5)，使用 Slide-A-Lyzer 盒(2000MWC0，4_12mL) 在室温下用水交换透析2小时。在室温下继续进行用水交换的透析(4L，含0. 6mL的3M NH4HC0jK溶液，pH 6) 16小时。在0°C下继续进行透析46小时，其中每24小时后更换水(4L) 和加入NH4HC03水溶液(3M，0. 6mL)以将水的pH调整到 6. 0-6. 5。然后冷冻干燥已脱盐 的溶液从而得到蓬松的白色粉末。CE分析表明出现了 3个化合物，分别对应5. 228分钟上 的一个主峰(80% )，和5. 121(5% )及5. 278分钟(10%)上两个较小的峰。在C18 HPLC 柱上纯化该混合物( 54mg)溶剂A :100%7jC ；溶剂B :100%乙腈；流速:10mL/min ；级分 大小5mL ；检测器ELS ；梯度洗脱5% B。收集仅仅是较弱的吸附在C18基质上，但是纯的 级分83并通过CE分析。冷冻干燥得到蓬松的白色粉末状全硫酸酯83 (12. lmg，24%，CE纯 度 98% )。NMR(400MHz, D20) 8 5. 96 (d, 1H，NH)，5. 79 (d，2H，2XH11111，Hlm)，5. 68 (d, 1H, Hln)，5. 19 (s, 1H, H3-去氧胆酸)，5. 00-5. 10 (m，3H1，3XH3)，4. 67-4. 98(m，6H，H1I,4XH2, H3)，4. 18-4. 60 (m, 16H, 3 XH4,4XH5,8 XH6, H12-去氧胆酸.)，2. 46 (m, 2H, 0CH2)，2. 28 (s, 3H, 12-0 Ac-去氧胆酸)，1. 08-2. 13 (m, 24H, 9 X CH2，6 X CH)，1. 05 (s, 3H, CH3)，0. 93 (d, 3H, J =6. 2，CH-CH3)，0. 88 (s, 3H, CH3) (2，3，4，6-四-0-苯甲酰基-a _D_吡喃葡萄糖基)-(1 — 4) - (2，3，6_三_0_苯甲 酰基-a -D-吡喃葡萄糖基)-(1 — 4) - (2，3，6-三-0-苯甲酰基-a -D-吡喃葡萄糖基)溴 化物(84)在0°C下将麦芽三糖全苯甲酸酯(200mg，207iimol)加入到DCM(lmL)和HBr/ HOAc (0. 7mL)中。在0°C下搅拌该混合6小时。用DCM稀释该溶液，用冰水(x2)、NaHC03 (饱和 的)(x2)以及盐水(xl)洗涤，然后干燥(Na2S04)，蒸发溶剂，从而得到白色固体产物(定量 的)，将其用于反应而不进行进一步纯化。1H NMR(CDC13,400MHz) 8 8. 19 (m, 2H, Ar), 8. 05 (m, 2H, Ar)，7. 95 (m, 2H, Ar)，7. 88-7. 85 (m, 4H, Ar)，7. 74-7. 70 (m, 4H, Ar)，7. 63-7. 09 (m, 36H, Ar)，6. 73 (d, 1H, Jlj2 = 3. 4，H—l1)，6. 13-6. 08 (m, 2H, H_3m，H—31)，5. 95 (m, 1H, H_3n)， 5. 76 (d, 1H, Jlj2 = 4. 1, H-lm)，5. 67 (m, 1H, H_4ni)，5. 65 (d, 1H, Jlj2 = 3. 4, H_ln)，5. 27 (dd, 1H, H-2111)，5. 11 (dd, 1H, H_2n)，5. 03 (dd, 1H, H—21)，4. 99 (dd, 1H, H—61)，4. 76-4. 72 (m, 2H, H-611，H-61), 4. 66-4. 58 (m, 2H, H-611，H-51) ,4. 55-4. 35(m，5H，H-41，H-411，H-511，H_5m， H-6m)，4. 23(dd，lH，H_6m)。实施例19. 33-胆甾烷基2，3，4，6_四_0_苯甲酰基-a _D_吡喃葡萄糖 基-(1 — 4)-2，3，6-三-0-苯甲酰基-0-0_吡喃葡萄糖基-(1 — 4)-2，3，6-三-0-苯甲酰基_ 0 -D-吡喃葡萄糖苷(85)在氩气气氛下将2，3，4，6-四-0-苯甲酰基_ a _D_吡喃葡萄糖基_ (1 — 4) _2，3， 6-三-0-苯甲酰基-a -D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4) -2，3，6-三_0_苯甲酰基_ a _D_吡喃 葡萄糖溴化物84(20011^，1241111101)，38分子筛( 50mg)和胆甾烷醇(3当量，370 y mol， 145mg)加入到无水DCM中，并将其冷却至0°C。加入AgOTf(l. 5当量，187 y m。l，48mg)，并 在0°C下搅拌该溶液2小时。加入三乙胺(600 yL)，并将该溶液升至室温。将该混合物通 过一个短的硅胶柱(用1 1乙酸乙酯Hex与0.5% (v/v)三乙胺作洗脱溶剂)。蒸发 溶剂(水浴温度保持在室温)。在氩气气氛下将生成的混合物加入到含分子筛的无水DCM 中，然后将其冷却到0°C，接着在超过20分钟的时间里慢慢地加入TMSOTf (1. 24mL在DCM 中的0. 1M溶液)。在0°C下搅拌该溶液1小时，然后在室温下用超过15分钟的时间加入另 外0.5当量的TMSOTf。再过30分钟后，加入三乙胺(lmL)，过滤溶液并将溶剂蒸发。将该 粗制产物用柱层析(Si02 己烷至35%乙酸乙酯/Hex)进行，纯化从而得到纯的白色固体状 糖苷 85(91mg，38% )。NMR(300MHz, CDC13) 6 8. 17(m，2H，Ar) ,8. 06 (m, 2H, Ar), 7. 96 (m, 2H, Ar)，7. 88 (m, 2H, Ar)，7. 82 (m, 2H, Ar)，7. 72 (m, 4H, Ar)，7. 57 (m, 4H, Ar)，7. 52-7. 09 (m, 32H, Ar)，6. 10 (t，1H，J = 9. 7，H_3m)，5. 92 (t, 1H, H_3n)，5. 75 (d, 1H, Jlj2 = 3. 8，H_lm)， 5. 71-5. 64 (m, 2H, H_4m，H—31)，5. 58 (d, 1H, Jlj2 = 3.8, H_ln)，5. 30-5. 19 (m, 2H, H—2111， H-21)，5. 10 (dd, 1H, H_2n)，4. 95 (m, 1H, H_6n)，4. 84 (d, 1H, Jlj2 = 1.1’ H—l1)，4. 77-4. 61 (m, 3H, H-61，H-61，H-611)，4. 49-4. 34 (m, 5H, H_6m，H-51，H-5111，H-41，H_4n)，4. 25 (m, 1H, H_6m)，
4.06 (m, 1H, H-511)，3. 53 (m, 1H, CHO)，1. 99-0. 47 (m, 31H)，0. 91 (d, 3H, CH3)，0. 87 (m, 6H, CH3)， 0. 64 (s, 3H, CH3)，0. 62 (s, 3H, CH3)。33 -胆甾烷基a -D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4) _ a _D_吡喃葡萄糖 基-(1 U -D-吡喃葡萄糖苷(86)将糖苷85(91mg，47. 5iimol)加入到1 1甲醇THF中，并按照常规方法去乙酰 基化，从而得到白色固体状多元醇86(48mg)(含微量苯甲酸甲酯)，将其用于反应而不进行 进一步的纯化或鉴定。3 3 -胆甾烷基2，3，4，6-四-0-磺酸钠-a -D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4) -2，3， 6-三-0-磺酸钠-a -D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4) -2，3，6-三-0-磺酸钠-3 _D_吡喃葡萄糖 苷(87)将多元醇86 (47. 8mg, 54. 6 u mol)溶解于 DMF (0. 02M, 2. 73mL)中。加入 S03.吡啶 (每羟基3当量，1.6411111101，2611^)，并在601下搅拌该溶液一夜。在冰水中冷却该溶液，在 蒸发掉溶剂之前，用5M Na0H(700uL)中和该溶液。将残留物加入到水中，用甲醇/水作为 流动相在C18 SPE柱上对其进行纯化。合并含有产物的部分，在使用40微米注射器式滤器 过滤前用2000MWC0透析盒透析48小时以上，冷冻干燥，从而得到灰白色固体状全硫酸酯 87(4311^，48%以上两个步骤)。NMR(400MHz, D20) S 5. 68 (d，1H，H_l)，5. 58 (d，1H，H_l)，
5.05-4. 03 (m, 19H) ,3. 82 (m, 1H,胆甾烧基 H_3)，2. 05-0. 65(m，31H)，0. 96(d，3H，J = 5. 6， CH3)，0. 90 (d, 6H, J = 6. 4，CH3)，0. 86 (s, 3H, CH3)，0. 71 (s，3H, CH3) 实施例20.2,3,4,6-四_0_乙酰基吡喃半乳糖基_(1 — 4)_1，2，3， 6-四-0-乙酰基-D-吡喃葡萄糖(88)将乳糖(5. 0221g, 13. 88mmol)悬浮于无水吡啶(40mL)中，并加入DMAP (50mg)。在0°C下在超过15分钟的时间内向该混悬液中逐滴地滴加醋酸酐(26. 24mL，277. 6mmol)，在 室温下将该混合物搅拌过夜。在0°C下逐滴地加入无水甲醇来淬灭该反应并搅拌所述溶液。 蒸发溶剂，然后与无水甲苯(3x50mL) —起洗脱出来，在真空条件下过夜减少剩余的溶剂， 从而得到一种白色固体(9g，13. 26mmol，95% )，将其用于反应而不进行进一步的纯化或鉴定。2,3,4,6-四_0_乙酰基-3 _D_吡喃半乳糖基-(1 — 4) _2，3，6_三_0_乙酰基_ -D-吡喃葡萄糖溴化物(89)将全醋酸酯88(510. 3mg,0. 75mmol)溶解于无水DCM(1. 5mL)中，在0°C下逐滴地加 入HBr/醋酸(30%，lmL)。室温下搅拌该混合物3小时，然后用DCM(30mL)将其稀释，用冰 水(2x40mL)、冰冷的饱和NaHC03溶液(3x30mL)和盐水(2x30mL)洗涤。用Na2S04干燥该溶 液，在真空下浓缩从而生产出粗制的溴化物。浓缩后立即进行接下来的反应。2,3,4,6-四-0-乙酰基-3 _D_吡喃半乳糖基-((1 — 4)_2，3，6_三_0_乙酰 基-0 -D-吡喃葡萄糖叠氮化物(90)将粗制的糖基溴化物89(0. 75mmol)溶解于CHCl3(4mL)中，加入 Bu4NHBr(193. 42mg，0. 6mmol)、NaN3(195. 03mg，3. Ommol)和饱和的 NaHC03 溶液(7mL)。室温 下剧烈地搅拌所述反应物过夜。反应物被还原，在乙酸乙酯中被稀释，并用饱和的NaHC03 溶液(3x30mL)和盐水(3x30mL)对其进行洗涤。用Na2S04干燥有机层，真空浓缩，并通过 用含0.2%Et3N的乙酸乙酯/己烷(1 1)快速色谱法对其进行纯化，从而得到叠氮化 物(34811^，70%，2个步骤)。NMR(300MHz，CDC13) 8 5. 33 (dd, 1H, JH4, ,H3, = 3. 4Hz，JH4,, H5, = 1. 1Hz, H-4' ) ,5. 19 (dd, 1H, JH3,H4 = 9. 4Hz, JH2,H3 = 9. 0Hz, H_3)，5. 09 (dd, 1H, JH2,, H3, = 10. 4Hz, JH2, ,H1, = 7. 8Hz, H-2' ) ,4. 94 (dd, 1H, JH2, ,H3, = 10. 4Hz, JH3, ,H4, = 3. 4Hz, H-3' )，4. 84(dd，1H，JH2,H3 = 9.5Hz，JH2,m = 8. 8Hz，H_2)，4. 61 (d，1H，JH2,H1 = 8.8Hz，H_l)， 4. 49(dd，lH，JH6a,H6b = 11.9Hz，JH6a,H5 = 2. 2Hz，H-6a)，4. 46(d，lH，Jm, ,H2, =7. 8Hz，H_l')，
4.14-4. 03(m，3H，H-6b，H-6a' , H-6b' )，3. 87 (dd，1H，JH5, ,H4, = 1. 1Hz，H_5' ), 3. 80 (t, 1H, Jh4,h5 and h4,h3 = 9. 4Hz，H_4)，3. 68 (ddd，1H，JH6a,H5 = 2. 0Hz，JH6b,H5 = 5. 0Hz,JH4,H5 = 9. 9Hz， H-5)，2. 13 (s, 3H, OAc)，2. 12 (s, 3H, OAc)，2. 05 (s, 3H, OAc)，2. 05 (s, 3H, OAc)，2. 03 (s, 3H, OAc)，2. 03 (s, 3H, OAc)，2. 02 (s, 3H, OAc)，1. 95 (s, 3H, OAc)。4-(胆甾-3 0 -基-氧甲基)[1，2，3]三唑-1 -基2，3，4，6-四-0-乙酰基-3 _D_吡 喃半乳糖基-(1 — 4)-2，3，6-三-0-乙酰基-0-D-吡喃葡萄糖苷(91)将干燥的叠氮化物90(100mg，0. 15mmol)和3 3-(丙炔_2_基氧基)胆甾烷醇 (129mg，0. 302mmol，2 当量)溶解于 DCM/t_Bu0H(3 2,0. 21M)中。将 CuS04/K溶液(0. 3M, 0. 1当量，0.015讓01，501^)加入到该混合物中，然后加入抗坏血酸钠水溶液(1M，0. 3当 量，0.045mmol，45. 3iiL)。使该反应避光并将其剧烈地搅拌整夜。在DCM(lOOmL)中稀释 该混合物并用饱和的NaHC03溶液(3x30mL)对其进行洗涤。用DCM(20mL)再次萃取水相， 然后用盐水冲洗(2x30mL)合并的有机层，并用Na2S04干燥。真空蒸发溶剂，从而得到粗 制品。用含有0.2%Et3N的己烷/乙酸乙酯(3 2)通过快速色谱法对粗制品进行纯化， 从而得到白色固体状产物(135. 3mg,82% ) NMR(300MHz, CDC13) 8 7. 67 (s, 1H, CH-N)，
5.79 (d, 1H, JH1,H2 = 9. 2，H_l)，5. 43-5. 37 (m, 2H, H_2，H_3)，5. 35 (dd, 1H, JH3, ,H4, = 3. 4， JH4, ,H5, = 0. 8,H-4' )，5. ll(dd，lH，JH2, ,H3, = 10.4，JH2, ,H1, = 7.8，H_2' )，4. 95 (dd，1H，JH2, ,H3, = 10.4, JH3, ,H4, = 3.4, H-3' )，4.64(s，2H，CH2_N)，4. 50 (d，1H，JH1, ,H2, = 7.9, H-l' )，4.46(dd，lH，JH6a, ,H6b, = 12.4，JH6a, ,H5, = 1.6，H_6a' )，4. 16-4. 04 (m，3H，H_6b ‘， H-6a, H-6b)，3. 96-3. 85(m,3H, H_4，H_5，H_5 ' )，3. 39-3. 28(m,1H, H-Chol)，2. 14(s,3H, OAc)，2. 09 (s, 3H, OAc)，2. 06 (s, 3H, OAc)，2. 05 (s, 3H, OAc)，2. 04 (s, 3H, OAc)，1. 95 (s, 3H, OAc)，1. 88-1. 80 (m, 31H)，1. 85 (s, 3H, OAc)，0. 88-0. 80 (m, 3H, CH3_CH)，0. 85 (d, 3H, J = 1. 3, CH3-CH)，0. 83 (d, 3H, J = 1.2，CH3_CH)，0. 77 (s, 3H, CH3)，0. 62 (s, 3H, CH3)。4-(胆甾-3-基-氧甲基)[1，2，3]三唑基日-D-吡喃半乳糖 基-(1 U -D-吡喃葡萄糖苷(92)将干燥的N-糖苷91(100mg，0. 092mmol)溶解于无水CH30H中，在0°C氩气气氛下向 混合物中逐滴地加入Na0Me/CH30H溶液(11M，30 y L)。室温下搅拌该溶液整夜。用TLC检 测后，加入无水CH30H (2mL)和Na0Me/CH30H(llM, 50 u L),并发现该反应混合物的pH为11。 在反应完全后，加入Dowex H+离子交换树脂来中和反应物至pH 6，在所得的混悬液在40°C 溶解在CHC13/CH30H(1 1)中。过滤该溶液，浓缩并用P205将其干燥，从而得到粗制品。4_(胆甾(cholestarO-33-基-氧甲基)[1，2，3]三唑 基 2，3，4，6_ 四 _0_ 磺 基-0 -D-吡喃半乳糖基-(1 — 4) -2，3，6-三-0-磺基-0 -D-吡喃葡萄糖苷，七钠盐(93)在60°C下将S03-吡啶(124. 89mg，0. 785mmol,3当量/0H，被预先洗涤和干燥) 一次性加到无水DMF(0. 02M，1.85mL)中的干燥多元醇92 (29. 7mg，0. 037mmol)中。搅拌所 述反应物整夜。将反应物冷却至0°C，在搅拌的同时将冷却的5M NaOH溶液(329. 7 ii L， 1.65mmol,2. 1当量的S03-吡啶)一次性加入。立即检测pH，发现其仅稍为碱性。向反应物 中加入冷却的5M NaOH溶液(50 y L)，发现pH大约为13。0°C下搅拌该混悬液15分钟，然后 用HPLC级水(100mL)将其稀释，并缓慢地蒸发溶剂。在C18固相萃取柱(WatersS印Pak，lg) 用100% HPLC级水至ACN/水(1 1)梯度洗脱对产物脱盐。加入0. 1M NH4HC03使所述级 分保持碱性，并对所有级分进行char检验。用CE分析阳性char级分，合并含有JR245_33 的级分，并在C18液相色谱上在大于35分钟的时间内用5-50% ACN水梯度洗脱来分离。 用10 y L样品与40 y L 1，9_ 二甲基-亚甲蓝水溶液对所有级分都进行了糖检验，并用CE 分析了糖呈阳性的级分。收集纯的级分并将其冻干，从而得到灰白色粉末产物(21. lmg， 得率 37% )CE 纯度 98%。NMR(300MHz, D20) 8 8. 29 (s, 1H, CH = C_)，6. 27 (d，1H，JH1, H2 = 8. 1Hz, H-l) ,5. 14 (d, 1H, JH3, ,H4, = 3. 0Hz, H_4' ) ,4. 98 (t, 1H, JH1,H2 = 7. 8Hz, H_2)， 4. 91-4. 82 (m, 1H, H_3)，4. 89 (d, 1H, JH1, ,H2, = 7. 5Hz, H-l' ) ,4. 74(s，2H，CH2), 4. 57 (dd, 2H, JH2, ,H3, = 10.2Hz，JH3, ,H4, = 3.0Hz，H-3'，H-5' )，4. 46 (dd，1H，JH2, ,H3, = 9.9，JH1,, H2, = 7. 5, H-2' )，4. 36(m，5H，H-4，H-5，H-6a，H-6a' , H-6b' )，4. 18-4. 14(m，1H，H_6b)， 3. 63-3. 49 (m, 1H, Chol-H)，2. 04-0. 98 (m, 31H, Choi)，0. 97-0. 83 (m, 12H, CH3)，0. 70 (s, 3H, CH3).实施例21.2,3,4,6-四_0_乙酰基-a-D-吡喃葡萄糖基_(1 — 4)_2，3， 6-三-0-乙酰基-0 -D-吡喃葡萄糖叠氮化物(94)在0°C下将麦芽糖全醋酸酯(200mg，295 u mol)加入到DCM(lmL)和HBr/ HOAc (0. 7mL)中。在0°C下搅拌该混合4小时。在将其干燥(Na2S04)前，用DCM稀释该溶 液，并用冰水(x2)、NaHC03(饱和的)(x2)和盐水(xl)洗涤，蒸发溶剂，从而得到白色固体 溴化物产物，将该产物加入到乙酸乙酯(5mL)和NaHC03(饱和的)(5mL)的混合物中。加入NaN3 (2. 0g)，接着加入Bu4NBr (cat.)。室温下剧烈地搅拌该混合物一整夜。在将其干燥 (Na2S04)前，用乙酸乙酯稀释该溶液，用NaHC03(饱和的)(x2)和盐水(xl)洗涤，蒸发溶剂， 从而得到粗制品，用柱层析(Si02:己烷至50%乙酸乙酯/己烷，用甲苯载样)对该粗制品 进行纯化，从而得到170. 6mg的白色固体产物(87%，两步)，将其用于反应而不进行进一步鉴定。4_(胆甾-3 基-氧甲基)[1，2，3]三唑-1-基2，3，4，6-四-0-乙酰基-0-0_口比 喃葡萄糖基-(1 — 4)-2，3，6-三-0-乙酰基-0-D-吡喃葡萄糖苷(95)室温下剧烈地搅拌叠氮化物94 (170mg, 257 u mol)、3 0 -(丙炔_2_基氧基)胆甾 烷醇(2 当量，219mg)、CHCl3(2mL)、t_Bu0H(2mL)、CuS04 (50 u L 的 0. 3M 水溶液)和抗坏血 酸钠(62.5yL of a 1M水溶液)一整夜。蒸发溶剂，将残留物装载到二氧化硅柱上(Si02 己烷至50%乙酸乙酯/己烷)，从而得到190mg的纯的物质95(68% )。NMR(300MHz, CDC13) 6 7. 67 (s, 1H,三唑-H)，5. 85 (d, 1H, Jlj2 = 9. 3，H-l1)，5. 46-5. 29 (m, 4H, H-l11， H-21，H-411，H-3n)，5. 04(t，1H，J2,3 = 10. 3, J3,4 = 10. 3, H-31)，4. 85 (dd，1H，Jlj2 = 4.1， J2,3 = 10. 8, H-211)，4. 63 (s, 2H, CH2)，4. 45 (ddd, 1H, H—61)，4. 25-4. 19 (m, 2H, H—51，H_6n)， 4. 14-3. 92 (m, 4H, H-511，H-61，H-611，H-41)，3. 32 (m, 1H, CHO)，2. 31-0. 53 (m, 31H)，2. 10 (s, 3H, OAc)，2. 08 (s, 3H, OAc)，2. 03 (s, 3H, OAc)，2. 00 (s,6H, OAc)，1. 98 (s, 3H, OAc)，1. 82 (s, 3H, OAc)，0. 83 (d, 3H，J = 1. 0，CH3)，0. 81 (d, 3H，J = 1. 5，CH3)，0. 76 (s, 3H, CH3)，0. 61 (s， 3H，CH3) 4-(胆甾)-33-基-氧甲基)[1，2，3]三唑基a-D-吡喃葡萄糖 基-(1 U -D-吡喃葡萄糖苷(96)将全醋酸酯95(190mg)溶解于THF/甲醇(1 1)中。加入甲醇中的NaOMe (11M， 20uL),在室温下搅拌该溶液3小时。用H+树脂中和该溶液，过滤，蒸发溶剂，从而得到 125mg(90% )的灰白色固体产物，将其用于反应而不进行进一步的纯化或鉴定。4_(胆甾-30-基-氧甲基)[1，2，3]三唑 基 2，3，4，6_ 四 _0_ 磺基-a-D-口比 喃葡萄糖基_ (1 — 4) -2，3，6-三-0-磺基-0 -D-吡喃葡萄糖苷，七钠盐(97)将多元醇96(124.511^，1571111101)溶解于01^(0.0211，7.8411^)中。加入 S03.批 啶(3当量/0H，3. 3mmol,525mg)，在60°C下搅拌该溶液一整夜。将所述溶液冷却至0°C，用 5M Na0H(2. 1当量/S03.吡啶，1.4mL)将其中和。将混合物用水转移到一个大圆底烧瓶中， 蒸发和用纯水(5L，每12小时换水)交换透析(2000MWC0盒，Pierce) 24小时。冻干溶液， 并将其加入到水中，然后在制备C18 RP-HPLC系统上(5%至95%乙腈水超过20分钟)将 其纯化。HPLC纯化后，用CE检测收集到的每个级分的纯度。合并纯度超过90%的级分， 并将其冻干，从而得到白色固体产物(55mg,23% ) 0 NMR(300MHz,D20) 8 :8.25(s，lH，三 唑)，6. 20 (d, 1H, Jlj2 = 6. 0，H-l1)，5. 65 (d, 1H, H-l11)，5. 04-4. 94 (m, 3H, H-31, H-311, H-21)， 4. 80 (s, 2H, CH2)，4. 73 (m, 1H, H-211)，4. 58 (dd, 1H, H-411)，4. 49-4. 23 (m, 7H, H-41, H-51, H-511, 4xH-6)，3. 57 (m, 1H, CHO)，2. 09-0. 56 (m, 46H).实施例22.2,3,4,6-四_0_苯甲酰基-a _D_吡喃葡萄糖基-(1 — 4)_1，2，3， 6-四-0-苯甲酰基-D-吡喃葡萄糖(98)在0 °C下将麦芽糖(2. 0g，5. 84mmol)溶解于无水吡啶(40mL)中。加入 DMAP (cat.)。逐滴地加入苯甲酰氯(2. 5当量，14. 6mmol, 16. 4g，13. 6mL)，并在室温下搅拌该溶液一整夜。将所述溶液倒入冰水和DCM的混合物中。用NaHC03(饱和的)(x7)、盐水、 H2S04(5% ) (x2)，然后盐水洗涤有机层。干燥(Na2S04)该溶液，并蒸发溶剂。使产物通过一 个短的硅胶柱以除去剩余的苯甲酰氯，蒸发溶剂从而得到3. 5g(51% )的白色固体产物，将 其用于反应而不进行进一步的纯化或鉴定。2,3,4,6-四_0_苯甲酰基-a-D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4) _2，3，6_三_0_苯甲酰 基-D-吡喃葡萄糖基三氯乙酸亚胺酸酯(99)将全苯甲酸酯98(0. 5g)溶解于吡啶(5mL)中。加入二甲胺(3. 5mL ；乙醇中5. 6M)。 在室温下下搅拌该反应混合物1小时。加入甲苯(10mL)，用盐水、H2S04(5% ) (x2)、盐水、 NaHC03(饱和的)以及盐水冲洗该溶液。干燥(Na2S04)该溶液，并蒸发掉溶剂。将粗制的 半缩醛与分子筛、碳酸钾(200mg)和碳酸铯(70mg) —起加入到无水DCM中。在加入三氯乙 腈(120iiL)前，将该溶液冷却至0°C。室温下搅拌所述混合物3小时。过滤混合物并蒸发 溶剂。用柱层析(Si02 己烷至50%乙酸乙酯/己烷)纯化粗制品，从而得到白色固体产物 (336mg，66%超过两步)，将其用于反应而不进行进一步的鉴定。3'-胆甾烷基2，3，4，6_四-0-乙酰基-a-D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4)_2，3， 6-三-0-乙酰基-0 -D-吡喃葡萄糖苷(100)在氩气气氛下将三氯乙酸亚胺酸酯99 (336. 2mg，280 iimol)、胆甾烷醇(3当量， 326mg)和分子筛加入到无水DCM中。在缓慢地加入TMSOTf (DCM中的0. 1M溶液，0. 33当量， 924 u L)之前，搅拌该溶液15分钟。30分钟后，慢慢地加入另一当量的TMSOTf (2. 77mLDCM 中的0. 1M溶液)，并再搅拌所述溶液40分钟。加入三乙胺(200 yL)，蒸发掉溶剂。将该粗 制的产物用柱层析(Si02 己烷至15%乙酸乙酯/己烷)进行纯化，但洗脱接近于过量的胆 甾烷醇起始物料。因此将混合物去苯甲酰化，乙酰化，并再纯化，以使得分离充分。将化合物 加到甲醇/THF(1 1)中。加入11M NaOMe的甲醇(50 y L)溶液，并在室温下搅拌该溶液5 小时。用H+树脂中和该溶液，过滤，蒸发溶剂。将粗制的多元醇产物加入到吡啶(5mL)和醋 酸酐(5mL)中。加入DMAP(cat.)并在室温下搅拌该溶液一整夜。将该混合物加到冰水中，用 DCM对其进行萃取，然后5%H2S04、接着用盐水对其进行洗涤。干燥(Na2S04)溶液并蒸发溶 剂，然后将该粗制的样品用柱层析(Si02 己烷至50%乙酸乙酯/己烷)进行纯化，从而得到 118mg 的白色固体状全乙酰化的产物(42%)。NMR(300MHz,CDC13) 6 5. 40(d, 1H,J1j2 = 4. l，H-ln)，5. 35 (dd, 1H，J3,2 = 10. 6，J3,4 = 9. 5，H_3n)，5. 23 (dd, 1H，J3,2 = 9. 0，J3,4 = 9. 0， H-31)，5. 03 (dd, 1H, J4,3 = 10. 0，J4'5 = 10. 0，H_4n)，4. 83 (dd, 1H, J2a = 3. 9, J2,3 = 10. 3， H-211)，4. 76 (dd, 1H, J2jl = 8. 0, J2j3 = 9. 3, H—21)，4. 60 (d, 1H, J1'2 = 8. 0，H—l1)，4. 42 (dd, 1H, H-61)，4. 26-4. 20 (m, 2H, H-61，H_6n)，4. 04-3. 92 (m, 3H, H-41，H-511，H_6n)，3. 64 (ddd, 1H, H-51)，3. 53 (m, 1H, CH0)，2. 12 (s, 3H, OAc)，2. 09 (s, 3H, OAc)，2. 03 (s, 3H, OAc)，2. 01 (s， 3H, OAc)，2. 00 (s, 3H, OAc)，1. 99 (s, 3H, OAc)，1. 98 (s, 3H, OAc)，1. 96-0. 52 (m, 31H)，0. 87 (d, 3H, J = 6. 4，CH3)，0. 86 (d, 3H, J = 1.5，CH3)，0. 83 (d, 3H, J = 1.3，CH3)，0. 76 (s, 3H, CH3)， 0. 63(s，3H，CH3)。3'-胆甾烷基a-D-吡喃葡萄糖基-(1 —4)-3_D-吡喃葡萄糖苷(101)将糖苷100(118mg)溶解于THF/甲醇(1 1)中。加入甲醇中的NaOMe (11M，30uL) 并在室温下搅拌该溶液3小时。用H+树脂中和该溶液，过滤，蒸发溶剂，从而得到一种定量 得率的灰白色固体，将其用于 应而不进行进一步的纯化或鉴定。
3 ‘-胆甾烷基2，3，4，6_四-0-磺基-a-D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4)-2，3， 6-三-0-磺基-0 -D-吡喃葡萄糖苷，七钠盐(102)将多元醇101(99.511^，1401111101)溶解于DMF (0. 02M，7mL)中。加入 S03.吡啶(3 当 量/0H，2. 9mmol,467mg)并在60°C下搅拌该溶液一整夜。将溶液冷却至0°C，用5M Na0H(2. 1 当量/S03.吡啶，1.23mL)将其中和。将该混合物用水转移到一个大的圆底烧瓶中，蒸发，用 水(5L，每12小时更换水)交换透析(2000MWC0盒，Pierce) 48小时。冻干该溶液，将其加 入到水中，然后在制备C18RP-HPLC系统(水中的5%至95%乙腈，超过20分钟)上进行纯 化。在HPLC纯化后，用CE测定收集的每个级分的纯度。合并纯度超过90%的部分并冷冻 干燥，从而得到白色固体状产物(27mg，14% )。NMR(400MHz, D20) 8 :5. 59 (d，1H，Jlj2 = 3. 4，H-l11)，5. 09 (d, 1H, Jlj2 = 5. 0，H—l1)，4. 89 (m, 1H, H_3n)，4. 73 (m, 1H, H—31)，4. 61 (dd, 1H, H-211)，4. 53-4. 42 (m, 3H, H—21，H—411，H_6n)，4. 37-4. 14 (m, 6H, H—41，H—511，H—51，3xH_6)， 3. 85 (m, 1H, CHO)，2. 08-0. 64 (m, 46H).实施例23.2,3,4,6-四_0_苯甲酰基-0 _D_吡喃葡萄糖基-(1 — 4)_1，2，3， 6-四-0-苯甲酰基-D-吡喃葡萄糖(103)在0 °C下将纤维二糖(1. 0g，2. 92mmol)溶解于无水吡啶(20mL)中。加入 DMAP(cat.)。逐滴地加入苯甲酰氯(2. 5当量，58mmol，6.8mL)并在室温下搅拌该溶液一 整夜。将该溶液倒在冰水和DCM的混合物中。用NaHC03(饱和的)(x7)、盐水、H2S04(5% ) (x2)、接着用盐水洗涤有机层。干燥(Na2S04)所述溶液，并蒸发溶剂。将该产物通过一个短 的硅胶柱以除去剩余的苯甲酰氯，蒸发掉溶剂从而得到740mg(22% )的白色固体状产物， 将其用于反应而不进行进一步的纯化或鉴定。2,3,4,6-四_0_苯甲酰基-0 _D_吡喃葡萄糖基-(1 — 4) _2，3，6_三_0_苯甲酰 基-D-吡喃葡萄糖基三氯乙酸亚胺酸酯(104)将全苯甲酸酯103(740mg，0. 63mmol)溶解于吡啶(5mL)中。在加入二甲胺(3. lmL ； 乙醇中5.6M)之前，将该溶液冷却至0°C。在室温下搅拌该反应混合物2小时。加入甲 苯(20mL)，用盐水、H2S04(5% ) (x2)、盐水、NaHC03(饱和的)以及盐水洗涤该溶液。干燥 (Na2S04)溶液并蒸发溶剂。将该粗制的半缩醛与分子筛和碳酸钾(1. 17g) 一起加入到无水 DCM(5mL)中。在加入三氯乙腈(782 y L)前，将该溶液冷却至0°C。室温下搅拌该混合物2 小时。滤该混合物，蒸发溶剂。通过柱层析(Si02;甲苯乙酸乙酯(5 1)至100%乙酸 乙酯)纯化该粗制品，从而得到白色泡沫状产物(566mg，75%超过两步)，将其用于反应而 不进行进一步的鉴定。3'-胆甾烷基2，3，4，6-四-0-苯甲酰基-3-D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4)-2，3， 6-三-0-苯甲酰基-0 -D-吡喃葡萄糖苷(105)在氩气气氛下将三氯乙酸亚胺酸酯104(2501^，2101111101)、胆甾烷醇(2当量， 163mg)和分子筛加入到无水DCM中。在慢慢地加入TMSOTf (DCM中的0. 4M溶液，0. 5 当量，260iiL)之前，在0°C下搅拌该溶液30分钟。30分钟后，慢慢地加入另一当量的 TMS0Tf(130iiL&DCM*m0. 4M溶液)，并再搅拌该溶液20分钟。加入三乙胺(15iiL)，过 滤该溶液，蒸发溶剂。通过用柱层析(Si02;甲苯乙酸乙酯，10 1至5 1)纯化该粗制 的产物，从而得到 208mg 的白色固体产物(69%)。1H nmr (300MHz, CDC13) 6 :7. 99-7. 16 (m, 35H, Ar)，5. 73 (m, 2H, H—31，H_3n)，5. 51 (dd, 1H, J2a = 7. 9, J2j3 = 9. 8, H-211)，5. 37 (m, 2H,
43H-411，H-21)，4. 93(d，1H，Jlj2 = 7. 9，H_ln)，4. 76 (d，1H，Jlj2 = 7. 9，H-l1)，4. 59 (dd，1H， H-6)，4. 45 (dd, 1H, H_6)，4. 19 (dd, 1H, J4,3 = 9. 5，J4,5 = 9. 5，H-41)，4. 07 (dd, 1H, H_6)，
3.84-3. 79 (m, 2H, 2xH_5)，3. 72 (dd, 1H, H-6)，3. 46 (m, 1H, CHO)，1. 95-0. 45 (m, 31H)，0. 88 (d, 3H，J = 7. 3，CH3)，0. 86 (d, 3H, J = 1. 4，CH3)，0. 84 (d, 3H, J = 1. 4，CH3)，0. 62 (s, 3H, CH3)， 0. 60(s，3H，CH3)。3'-胆甾烷基3-D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4)-3-D-吡喃葡萄糖苷(106)将糖苷105(152mg)溶解于THF/甲醇(1 1)中。加入甲醇中的NaOMe (11M， 30uL)，并在室温下搅拌该溶液24小时。用H+树脂中和该溶液，过滤，蒸发溶剂，从而得到 23mg(30% )的灰白色固体，将其用于反应而不进行进一步的纯化或鉴定。3 ‘-胆甾烷基2，3，4，6_四-0-磺基-3-D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4)-2，3， 6-三-0-磺基-0 -D-吡喃葡萄糖苷，七钠盐(107)将多元醇106(23mg，32iimol)溶解于 DMF(0. 02M，1. 6mL)中。加入 S03.批啶(3 当量/0礼6721111101，1071^)，并在601下搅拌该溶液一整夜。将该溶液冷却至0°C，用5M Na0H(2. 1当量/S03.吡啶，0. 282mL)中和该溶液。用水将该混合物转移到一个大的圆底烧 瓶中，蒸发，并用水(5L，每12小时更换水)交换透析(2000MWC0盒，Pierce)48小时。冻 干该溶液，将其加入到水中，然后在制备C18RP-HPLC系统(水中的5 %至95 %乙腈，超过 20分钟)上对其进行纯化。在HPLC纯化后，用CE测定所收集的每个级分的纯度。合并纯 度超过90%的部分，冻干，从而得到白色固体状产物(11.6mg,25% )0 NMR(400MHz，D20) 8 5. 06 (d, 1H, Jlj2 = 6. 3，H-l11)，4. 86 (d, 1H, Jlj2 = 6. 3，H-l1)，4. 72-4. 66 (m, 2H, H—31， H-311)，4. 57-4. 48 (m, 2H, H-411, H-6)，4. 40-4. 35 (m, 3H, H-21, H-211, H-6)，4. 30 (dd, 1H, H-6)，
4.24-4. 20 (m, 2H, H-41, H-6)，4. 08 (m, 2H, H-51，H_5n)，3. 62 (m, 1H, CHO)，2. 00-0. 67 (m, 31H)， 0. 93 (d, 3H, CH3)，0. 87 (d, 3H, CH3)，0. 86 (d, 3H, CH3)，0. 83 (s, 3H, CH3)，0. 68 (s, 3H, CH3)。实施例24.2,3,4,6-四_0_苯甲酰基-0 _D_吡喃半乳糖基-(1 — 4)_1，2，3， 6-四-0-苯甲酰基-D-吡喃葡萄糖(108)在0°C下将乳糖(1. 0g，2. 92mmol)溶解于无水吡啶(20mL)中。加入DMAP(cat.)。 逐滴地加入苯甲酰氯(2.5当量，58mmol，6.8mL)并在室温下搅拌该溶液一整夜。将该溶液 倒在冰水和DCM的混合物中。用NaHC03(饱和的)(x7)、盐水、H2S04(5% ) (x2)、接着用盐水 洗涤有机层。干燥(Na2S04)溶液并蒸发溶剂。将该产物通过一个短的硅胶柱以除去剩余的 苯甲酰氯，蒸发掉溶剂从而得到3. 67g(定量的)的白色固体产物，将其用于反应而不进行 进一步的纯化或鉴定。2,3,4,6-四_0_苯甲酰基-0 _D_吡喃半乳糖基-(1 — 4) _2，3，6_三_0_苯甲酰 基-D-吡喃葡萄糖基三氯乙酸亚胺酸酯(109)将全苯甲酸酯108(500mg，0. 43mmol)溶解于吡啶(3. 5mL)中。在加入二甲胺 (2. lmL ；乙醇中5. 6M)前，将该溶液冷却至0°C。室温下搅拌该反应混合物2小时。加入 甲苯(20mL)，用盐水、H2S04(5% ) (x2)、盐水、NaHC03(饱和的)以及盐水洗涤该溶液。干燥 (Na2S04)该溶液并蒸发掉溶剂。将粗制的半缩醛与分子筛和碳酸钾(871mg) —起加入到无 水DCM(5mL)中。在加入三氯乙腈(582 y L)之前，将该溶液冷却至0°C。室温下搅拌该混合 物2小时。过滤该混合物并蒸发溶剂。用柱层析(Si02 ；甲苯乙酸乙酯(5 1)至100% 乙酸乙酯)纯化该粗制品，从而得到白色泡沫状产物(152mg，29%超过两步)，将其用于反应而不进行进一步的鉴定。3'-胆甾烷基2，3，4，6-四-0-苯甲酰基-3-D-吡喃半乳糖基-(1 — 4)-2，3， 6-三-0-苯甲酰基-3-D-吡喃葡萄糖苷(110)在氩气气氛下将三氯乙酸亚胺酸酯109(2501^，2101111101)、胆甾烷醇(2当量， 163mg)和分子筛加入到无水DCM中。在慢慢地加入TMSOTf (0. 4M溶液in DCM，0. 5当 量，260iiL)之前，在0°C下搅拌该溶液30分钟。30分钟后，慢慢地加入另一当量的 TMSOTf (130 ii L的DCM中的0. 4M溶液)，再搅拌该溶液20分钟。加入三乙胺(12 y L)，过 滤溶液，然后蒸发掉溶剂。将该粗制的产物用柱层析(Si02;甲苯乙酸乙酯，15 1至
7 1)进行纯化，从而得到237mg的白色固体产物(78% )。1H nmr(400MHz，CDC13) S 8. 02-7. 11 (m, 35H, Ar)，5. 77 (dd, 1H, J3,2 = 9. 6，J3,4 = 9. 6，H-31)，5. 74-5. 69 (m, 2H, H-211， H-411)，5. 43-5. 35 (m, 2H, H-21, H-311)，4. 86 (d, 1H, Jlj2 = 7. 9，H_ln)，4. 78 (d, 1H, Jlj2 = 7. 9， H-l1)，4. 57 (dd, 1H, H—61)，4. 47 (dd, 1H, H—61)，4. 20 (dd, 1H, J4,3 = 9. 6，J4,5 = 9. 6，H-41)， 3. 89 (ddd, 1H, H_5n)，3. 83 (ddd, 1H, H-51)，3. 75 (dd, 1H, H_6n)，3. 65 (dd, 1H, H_6n)，3. 49 (m, 1H, CHO)，1. 94-0. 47 (m, 31H)，0. 88 (d, 3H，J = 6. 5，CH3)，0. 86 (d, 3H, J = 1.7，CH3)，0. 84 (d, 3H，J = 1. 9，CH3)，0. 63 (s, 3H, CH3)，0. 60 (s, 3H, CH3).3'-胆甾烷基3-D-吡喃半乳糖基-(1 —4)-3_D-吡喃葡萄糖苷(111)将糖苷110(231mg)溶解于THF/甲醇(1 1)中。加入甲醇中的NaOM(llM， 150uL)并在室温下搅拌该溶液24小时。用H+树脂中和该溶液，过滤，蒸发溶剂，从而得到 61mg(54% )的白色固体，将其用于反应而不进行进一步的纯化或鉴定。3 ‘-胆甾烷基2，3，4，6_四-0-磺基-3-D-吡喃半乳糖基-(1 — 4)-2，3， 6-三-0-磺基-0 -D-吡喃葡萄糖苷，七钠盐(112)将多元醇lll(30mg，42iimol)溶解于 DMF(0. 02M，2. lmL)中。加入 S03.批啶(3 当量/0H，882 u mol, 140mg)并在60°C下搅拌该溶液一整夜。将该溶液冷却至0°C，并用5M Na0H(2.5当量/S03.吡啶，0.442mL)将其中和。将该混合物用水转移到一个大的圆底烧瓶 中，蒸发，用水(5L，每12小时更换水)交换透析(2000MWC0盒，Pierce)48小时。冻干该 溶液，将其加入到水中，然后在制备C18 RP-HPLC系统上(水中的5%至95%乙腈超过20 分钟)对其进行纯化。在HPLC纯化后，用CE测定收集的每个级分的纯度。合并纯度超过 90%的部分，并将其冻干，从而得到灰白色固体产物(13mg，22% )。NMR (300MHz，D20)
85. 15 (d, 1H, H-l)，4. 70 (d, 1H, H-l)，4. 55-3. 88 (m, 12H)，3. 50 (m, 1H, CHO)，1. 88-0. 44 (m, 46H).实施例25. 1，2，3，4-四-0-苯甲酰基-a-D-甘露吡喃糖(113)将6-0-三苯甲基-1，2，3，4-四-0-苯甲酰基-a-D-甘露吡喃糖(5g,6. Ommol), 溶解于甲醇中。小心地加入吐504((01^.)(15(^1^，并在室温下搅拌该溶液一整夜。将该 溶液倒入冰水(300mL)中，用乙酸乙酯(80mL)进行萃取。分离有机层，并用盐水(80mL)、 接着用NaHC03 (饱和的)对其进行冲洗。干燥(Na2S04)该溶液，过滤，并蒸发溶剂。用柱层 析(Si02;Hex 乙酸乙酯，500 50至200 200)纯化该粗制品，从而得到1. 79g的白色 固体产物(50%)。NMR(300MHz, CDC13) 6 :8. 20-8. 12 (m，4H，Ar)，8. 02-7. 98 (m，2H，Ar)， 7. 87-7. 84 (m, 2H, Ar)，7. 70-7. 26 (m, 27H, Ar)，6. 63 (d, 1H, Jlj2 = 2. 1, H-l)，6. 12 (dd, 1H, J3,2 =3. 3，J3,4 = 10. 2，H-3)，6. 02 (dd, 1H, J4,3 = 10. 0, J4,5 = 10. 0，H-4)，5. 89 (dd, 1H, J2a =1. 8，J2,3 = 3. 1，H-2), 4. 25(ddd, 1H, H_5)，3. 90-3. 76 (m, 2H, H_6) 2,3,4,6-四_0_苯甲酰基-a _D_吡喃葡萄糖基-(1 — 4) _2，3，6_三_0_苯甲酰 基-a -D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4) -2，3，6-三-0-苯甲酰基_D_吡喃葡萄糖基三氯乙酸亚 胺酸酯(114)在0°C下将麦芽三糖全苯甲酸酯(400mg)溶解于THF (3mL)中。加入饱和的NH3的 甲醇(6mL)溶液，并在0°C下搅拌该溶液4小时。用DCM稀释该溶液，用0.5M冰HC1、然后 用盐水洗涤，蒸发掉溶剂。用柱层析(Si02:10-50%乙酸乙酯/己烷)纯化粗制品，从而得 到211mg的纯的半缩醛，将其与分子筛、碳酸钾(129mg)和碳酸铯(45mg) —起加入到无水 DCM中。在加入三氯乙腈(93 yL)之前，在0°C下搅拌该混合物。将该混合物升至室温，并 搅拌5小时。过滤溶液，蒸发溶剂。用柱层析(Si02:己烷至50%乙酸乙酯/己烷)纯化该 粗制品，从而得到149. 2mg的白色固体产物(36%，两步)，将其用于反应而不进行进一步的 鉴定。2,3,4,6-四-0-苯甲酰基-a-D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4) _2，3，6_三_0_苯 甲酰基-a-D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4)_2，3，6_三-0-苯甲酰基-3-D-吡喃葡萄糖 基-(1 — 6)-1，2，3，4_四-0-苯甲酰基-D-甘露吡喃糖(115)将三氯乙酸亚胺酸酯114(279iimol，435mg)、l，2，3，4-四_0_苯甲酰基甘露吡喃 糖113(1. 2当量，200mg，335iimol)和分子筛加入到DCM中，在慢慢逐滴地加入TMSOTf (1. 1 当量，68. 2mg，600iiL DCM中的56 y L)之前，在0 °C下将其搅拌30分钟。在用三乙胺 (200 uL)进行中和之前，在0°C下搅拌该混合90分钟，过滤并蒸发掉溶剂从而得到粗制品， 通过柱层析(Si02:己烷至50%乙酸乙酯/己烷)对该粗制品进行纯化，从而得到312. 8mg 的白色固体产物(53% )，将其用于反应而不进行进一步的鉴定。2,3,4,6-四_0_苯甲酰基-a-D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4) _2，3，6_三_0_苯 甲酰基-a-D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4)_2，3，6_三-0-苯甲酰基-3-D-吡喃葡萄糖 基-(1 — 6) -2，3,4-三-0-苯甲酰基-D-甘露吡喃糖基三氯乙酸亚胺酸酯(116)将全苯甲酸酯115(312. 8mg)溶解于吡啶(4. 5mL)中。加入二甲胺(3mL ；乙醇中 5.6M)。室温下搅拌该反应混合物2小时。加入DCM(lOmL)并用盐水、H2S04(5% ) (x2)、盐 水、NaHC03(饱和的)洗涤溶液。干燥(Na2S04)该溶液并蒸发掉溶剂。将粗制的半缩醛与分 子筛、碳酸钾(600mg)和碳酸铯(lOOmg) —起加入到无水DCM中。在加入三氯乙腈(200 y L) 之前，将该溶液冷却至0°C。室温下搅拌该混合物4小时。过滤该混合物并蒸发溶剂。用 柱层析(Si02 己烷至60%乙酸乙酯/己烷)纯化所述的粗制品，从而得到白色的固体产物 (153. 9mg，48%，2个步骤)，将其用于反应而不进行进一步的鉴定。3'-胆甾烷基2，3，4，6-四-0-苯甲酰基-a-D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4)-2，3， 6-三-0-苯甲酰基-a -D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4) -2，3，6-三-0-苯甲酰基-3 -D-吡喃葡 萄糖基-(1 — 6)-2，3，4-三-0-苯甲酰基-a-D-甘露吡喃糖苷(117)在雅琪气氛下将三氯乙酸亚胺酸酯116(153. 9mg，71. lymol)、胆甾烷醇(3当 量，83mg)和分子筛加入到无水DCM中。在慢慢地加入TMSOTf (1. 1当量，200uL DCM中的 17.4uL)之前，在0°C下搅拌该溶液15分钟。在0°C下搅拌该溶液90分钟。加入三乙 胺(20PL)并蒸发掉溶剂。用柱层析(Si02:己烷至40%乙酸乙酯/己烷；用甲苯载样) 纯化该粗制产物，从而得到71. 4mg的白色固体产物(42%)。NMR(300MHz, CDC13) 6 8. 00-6. 94(m，65H，Ar), 5. 94 (dd, 1H, J3,2 = 9.7，J3,4 = 9.7，H_3IV)，5. 76 (dd，1H，J3,2 = 10. 0，J3,4 = 7. 9，H-3111)，5. 68 (dd, 1H, J3,2 = 3. 3，J3,4 = 10. 0, H—31)，5. 59 (d, 1H, Jlj2 =
3.8，H-1IV)，5. 57-5. 49 (m, 3H, H-311, H_4IV，H-41)，5. 42 (d, 1H, Jlj2 = 3. 8，H_lm)，5. 35 (dd, 1H, J2a = 1. 8, J2,3 = 3. 3，H-21)，5. 16 (dd, 1H, J2a = 7. 4，J2,3 = 9. 5，H_2n)，5. 12 (dd, 1H, J2jl = 3. 8，J2,3 = 10. 5，H-2IV), 4. 93 (dd, 1H, J2a = 3. 8，J2,3 = 10. 0，H_2m)，4. 76 (dd, 1H, H-6m)，4. 73 (d, 1H, Jlj2 =1.8，H—l1)，4. 71 (d, 1H, Jlj2 = 1.1’ H_ln)，4. 53 (dd, 1H, H_6n)，
4.48-4. 41 (m，2H，H-611，H_6m)，4. 32-4. 16(m，6H，H_5IV，H-511，H-51，H-411, H-4111，H_6IV)， 4. 11-4. 03 (m, 2H, H-61, H_6IV)，3. 88 (ddd, 1H, H_5m)，3. 60 (dd, 1H, H-61)，3. 23 (m, 1H, CHO)， 1. 87-0. 38 (m, 31H)，0. 77 (d, 3H, J = 6. 4，CH3)，0. 74 (d, 3H, J = 1.3，CH3)，0. 72 (d, 3H, J = 1. 5，CH3)，0. 61 (s，3H, CH3)，0. 51 (S，3H, CH3) 3 ‘-胆甾烷基a -D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4) _ a _D_吡喃葡萄糖 基-(1 — 4) - 3 -D-吡喃葡萄糖基-(1 — 6) - a -D-甘露吡喃糖苷(118)将糖苷117 (80mg)溶解于甲醇/THF 1 1中。加入NaOMe (200 ii L的11M溶液) 并在室温下搅拌该溶液一整夜。用酸性树脂中和该混合物，过滤溶液，蒸发掉溶剂，从而得 到白色固体产物，将该产物与乙酸乙酯一起磨碎，并轻轻地倒出溶剂(x3)。在真空下干燥该 固体，从而得到定量的白色固体产物，将其用于反应而不进行进一步的纯化或鉴定。3 ‘-胆甾烷基2，3，4，6_四-0-磺基-a-D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4)-2，3， 6-三-0-磺基-a -D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4) -2，3，6-三-0-磺基-3 _D_吡喃葡萄糖 基-(1 — 6)-2，3，4-三-0-磺基-a-D-甘露吡喃糖苷，十三钠盐(119)将多元醇118(72. 8mg，70. 2iimol)溶解于 DMF(0. 02M，3. 5mL)中。加入 S03.吡啶 (3当量/0H，2. 7mmol，436mg)，并在60°C下搅拌该溶液一整夜。将该溶液冷却至0°C，用5M Na0H(2. 1当量/S03.吡啶，1. 15mL)将其中和。将该混合物用水转移到一个大的圆底烧瓶 中，蒸发，用水(5L，每12小时更换水)交换透析(200(MWC0盒，Pierce) 24小时。冻干该溶 液，在制备C18 RP-HPLC系统(水中5%至95%乙腈，大于20分钟)上对其进行纯化前将 其加入到水中。在HPLC纯化后，用CE测定收集的每个部分的纯度。合并纯度超过90%的 部分，并将其冻干，从而得到白色固体产物(25mg,15% )0 NMR (300MHz, D20) 6 :5. 70 (d, 1H, Jlj2 = 3. 5，H-l)，5. 55 (d, 1H, H_l)，5. 36 (m, 2H, H2xH_l)，5. 03-4. 05 (m, 24H)，3. 88 (m, 1H, CHO)，2. 00-0. 70 (m, 31H)，0. 94 (d, 3H, J = 6. 4，CH3)，0. 89 (d, 3H, J = 1.3，CH3)，0. 86 (s, 3H, CH3)，0. 86 (d, 3H, J = 1.3，CH3)，0. 70 (s, 3H, CH3) 实施例26. 3-叠氮基丙基2，3，4，6-四_0_苯甲酰基-a-D-吡喃葡萄糖 基-(1 — 4)-2，3，6-三-0-苯甲酰基-0-0_吡喃葡萄糖基-(1 — 4)-2，3，6-三-0-苯甲 酰基-D-吡喃葡萄糖苷(120)将三氯乙酸亚胺酸酯114(2g，1. 3mmol)、3_叠氮基丙醇(2当量，260mg)和分子筛 加入到DCM(lOmL)中，并将其冷却至0°C。逐滴地加入TMS0Tf(l. 1当量，318mg，260 y L)(逐 滴地，每30分钟一次1/3，在2. 6mL DCM中)。在用三乙胺(300 y L)将其中和前，在0°C下 搅拌该溶液90分钟，过滤，用水洗涤，干燥(Na2S04)并蒸发掉溶剂，从而得到粗制品。通过柱 层析(Si02 甲苯至5%乙酸乙酯/甲苯，用甲苯装载)将其纯化，从而得到2. 06g的澄清的 油状产物 120(97% )。匪R(400MHz，CDC13) 8 8. 18 (m, 2H, Ar), 8. 04 (m, 2H, Ar), 7. 95 (m, 2H, Ar)，7. 87 (m, 2H, Ar)，7. 84 (m, 2H, Ar)，7. 74-7. 70 (m, 4H, Ar)，7. 61-7. 10 (m, 36H, Ar)，6.09 (t, 1H, J3,2 = 10. 2，J3,4 = 10. 2, H-3m)，5. 92 (dd, 1H, J3,2 = 9. 9，J3,4 = 8. 2，H_3n)， 5. 75 (d, 1H, Jlj2 = 3. 8，H-lm)，5. 70-5. 64(m，2H，H-31，H_4in)，5. 60 (d，1H，Jlj2 = 4.1， H-l11)，5. 30-5. 23 (m, 2H, H_2m，H—21)，5. 08 (dd, 1H, J2a = 3. 8, J2j3 = 9. 9, H_2n)，4. 99 (dd, 1H, H-61)，4. 75-4. 59 (m, 3H, H2xH_6n，H-61)，4. 74 (d, 1H, Jlj2 = 7. 5，H-l1)，4. 48-4. 36 (m, 5H, H-5111，H-511，H-41，H-411，H_6m)，4. 23 (dd, 1H, H_6m)，4. 05 (ddd, 1H, H-51)，3. 92 (m, 1H, CH20)，3. 57 (m, 1H, CH20)，3. 19 (m, 2H, CH2N3)，1. 74 (m, 2H, CH2).3-硬酯酰胺丙基2，3，4，6-四-0-苯甲酰基_ a _D_吡喃葡萄糖基_ (1 — 4) _2，3， 6-三-0-苯甲酰基-a -D-吡喃葡萄糖基)-(1 — 4) -2，3，6-三-0-苯甲酰基-3 -D-吡喃 葡萄糖苷(121)将糖苷120 (2g, 1. 23mmol)溶解于THF(lOmL)中。加入三苯膦(3当量，966mg)并 氩气气氛，室温下搅拌该混合物1小时。加入水(30当量，665iiL)并在50°C下搅拌该溶 液4.5小时。蒸发掉溶剂，将该粗制的胺加入到DCM中。加入硬酯酰氯(3当量，1.18g， 1.25mL)，接着加入三乙胺(3. 1当量，386mg，532i!L)，室温下搅拌该溶液一整夜。蒸发掉 溶剂，通过柱层析(Si02:甲苯至8 1甲苯乙酸乙酯，甲苯载样)纯化该粗制品，从而得 到 1. 65g 的澄清的油状产物 121(72%，2 步)。NMR(400MHz, CDC13) 6 8. 16(m,2H, Ar), 8. 05 (m, 2H, Ar)，7. 95 (m, 2H, Ar)，7. 86 (m, 2H, Ar)，7. 82 (m, 2H, Ar)，7. 74-7. 70 (m, 4H, Ar)，
7.63-7. 10 (m, 36H, Ar)，6. 10 (t, 1H, J3,2 = 10. 2，J3,4 = 10. 2，H_3ni)，5. 98-5. 91 (m, 2H, H-311, NH)，5. 76 (d, 1H, Jlj2 = 4. l，H_lm)，5. 73-5. 65 (m, 2H, H-31, H-4111), 5. 61 (d, 1H, Jlj2 = 4. 1， H-l11) ,5. 29-5. 20(m，2H，H_2m，H-21)，5. 11-5. 05 (m, 2H, H-211，H-61), 4. 79 (dd, 1H, H-611)， 4. 71 (d, 1H, Jlj2 = 7. 5，H-l1)，4. 68-4. 61 (m, 2H, H-611, H-61)，4. 49-4. 38 (m, 5H, H-5111，H-511, H-41, H-411，H-6111)，4. 23 (dd, 1H, H_6m)，4. 04 (ddd, 1H, H-51)，3. 92 (m, 1H, CH20)，3. 57 (m, 1H, CH20)，3. 27 (m, 1H, CH2N)，3. 13 (m, 1H, CH2N)，2. 11 (t, 2H, CH2C0)，1. 72 (m, 2H, CH2)，1. 56 (m, 2H, CH2)，1. 30-1. 24 (m, 28H, 14xCH2)，0. 88 (t, 3H, CH3).3-硬酯酰胺丙基a -D-吡喃葡萄糖基_(1 — 4) - a _D_吡喃葡萄糖 基-(1 — 4) - 3 -D-吡喃葡萄糖苷(122)将糖苷121(1. 61g，861 iimol)溶解于甲醇/THF 1 1 (40mL)中。力口入 NaOMe (lmL of a 6M溶液)并在室温下搅拌该溶液48小时。在蒸发溶剂前，用酸性树脂中和该混合物， 过滤溶液，从而得到白色固体产物，将其与乙酸乙酯一起进行研磨并轻轻地倒出溶剂(x3)。 在真空下干燥该固体，从而得到651mg的白色固体产物(91% )，将其用于反应而不进行进 一步的纯化或鉴定。3-硬酯酰胺丙基2，3，4，6_四_0_磺基-a-D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4)_2，3， 6-三-0-磺基-a -D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4) -2，3，6-三_0_磺基-3 _D_吡喃葡萄糖苷， 十钠盐(123)将多元醇122(200mg，242iimol)溶解于 DMF(0. 02M，12. lmL)中。加入 S03.批啶 (3当量/0H，7.26mmOl，l. 16g)并在60°C下搅拌该溶液一整夜。将该溶液冷却至0°C并用 5M Na0H(3当量/S03.吡啶，4. 4mL)将其中和。在_20°C下冷却该混合物一小时。轻轻地 倒出上清液并弃去。用水将沉淀物转移到一个大的圆底烧瓶中，蒸发，用水(5L，含有lmL 1.7M NH4HC03)交换透析(200CMWC0盒，Pierce) 72小时。冻干该溶液，从而得到黄色固体 产物(177mg,40% )。NMR(D20,400MHz) 8 5. 69 (d, 1H, Jlj2 = 3.4，H_l)，5. 59 (d，1H，
482 = 2. 7，H-1)，4. 99-4. 92 (m, 2H)，4. 85-4. 08 (m, 17H)，4. 01 (ddd, 1H, CH20)，3. 75 (ddd, 1H, CH20)，3. 32 (t,2H, J = 6. 7，CH2N)，2. 27 (t, 2H, CH2C0)，1. 87 (m, 2H, CH2)，1. 61 (m，2H, CH2)， 1. 37-1. 29 (m, 28H, CH2)，0. 91 (t，3H, CH3)。实施例27.2,3,4,6-四_0_苯甲酰基-a _D_吡喃葡萄糖基-(1 — 4)_2，3， 6-三-0-苯甲酰基-a -D-吡喃葡萄糖基_ (1 — 4) -2，3，6-三-0-苯甲酰基_ a _D_吡喃葡 萄糖基-(1 — 4) -2，3,6-三-0-苯甲酰基-D-吡喃葡萄糖基三氯乙酸亚胺酸酯(124)在0°C下将麦芽四糖全苯甲酸酯66(12. 4g)溶解于吡啶(47mL)中。加入二甲胺 (5. 6M，在乙醇中)(28. 3mL)并在室温下搅拌该溶液2小时。将该溶液倒入0. 5M冰HC1中， 过滤产生的沉淀物，并在干燥前用水洗涤。用柱层析(Si02 : 5-70%乙酸乙酯/己烷)纯化该 粗制品，从而得到6. 7g的纯的半缩醛，将其与分子筛和碳酸钾(6.6g) —起加入到无水DCM 中。在加入三氯乙腈(4.4mL)前，在0°C下搅拌该混合。将该混合物升至室温，并搅拌2小 时。过滤该溶液，蒸发溶剂。将该粗制品(7.2g，57%)用于反应而不进行进一步纯化或鉴 定。3-叠氮基丙基2，3，4，6_四_0_苯甲酰基-a-D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4)_2，3， 6-三-0-苯甲酰基-a -D-吡喃葡萄糖基_ (1 — 4) -2，3，6-三-0-苯甲酰基_ a _D_吡喃葡 萄糖基_ (1 — 4) -2，3，6-三-0-苯甲酰基-3 -D-吡喃葡萄糖苷(125)将三氯乙酸亚胺酸酯124(1. 476g，0. 682mmol)、3_叠氮基丙醇(2当量，137mg)和 分子筛加入到DCM(lOmL)中，并将其冷却至0°C。逐滴地加入TMSOTf (0. 5当量，850 y L DCM 中的62PL)。在用三乙胺(300 yL)将其中和前，在0°C下搅拌该溶液90分钟，过滤，用水 洗涤，干燥(Na2S04)并蒸发掉溶剂，从而得到粗制品。通过柱层析(Si02 甲苯至24 3甲 苯乙酸乙酯，用甲苯载样)纯化该粗制品，从而得到660mg的白色固体产物(46%)。 NMR (400MHz，CDC13) 8 :8. 25-7. 05 (m，35H，Ar)，6. 12 (dd，1H，J3,2 = 9. 9，J3,4 = 9. 9，H_3IV)，
6.00 (dd, 1H, H-3)，5. 87 (dd, 1H, H_3)，5. 76 (d, 1H, Jlj2 = 3. 7，H_1IV)，5. 71-5. 64 (m, 3H, H-1, H-31，H-4IV)，5. 60 (d, 1H, Jlj2 = 3. 7，H-1)，5. 29-5. 23 (m, 2H, H-21，H_2IV)，5. 14-5. 05 (m, 2H, 2xH-2)，5. 01 (dd, 1H, H_6)，4. 85 (dd, 1H, H_6)，4. 76-4. 69 (m, 2H, 2xH_6)，4. 75 (d, 1H, Jlj2 =
7.5，H-11)，4. 59 (m, 2H, 2xH_6)，4. 47-4. 33 (m, 7H, 3xH_4，3xH_5，H_6)，4. 19 (dd, 1H, H_6)， 4. 05 (ddd, 1H, H-51)，3. 91 (m, 1H, CH20)，3. 57 (m, 1H, CH20)，3. 19 (m, 2H, CH2N)，1. 74 (m, 2H, CH2).3-硬酯酰胺丙基2，3，4，6-四-0-苯甲酰基_ a _D_吡喃葡萄糖基_ (1 — 4) _2，3， 6-三-0-苯甲酰基-a -D-吡喃葡萄糖基_ (1 — 4) -2，3，6-三-0-苯甲酰基_ a _D_吡喃葡 萄糖基-(1 — 4)-2，3，6-三-0-苯甲酰基-0-0-吡喃葡萄糖苷(126)将糖苷125(660mg，0. 314mmol)溶解于 ACN(21mL)中。加入三苯膦(3 当量，247mg) 并在室温下，氩气气氛下搅拌该混合物1小时。加入水(30当量，169PL)并在50°C下搅拌 该溶液7小时。蒸发溶剂并将粗制的胺加入到DCM中。加入硬酯酰氯(3当量，317PL)，接 着加入三乙胺(3当量，131 u L)，并在室温下搅拌该溶液3天。蒸发溶剂，通过柱层析(Si02 甲苯至15 3甲苯乙酸乙酯，用甲苯载样)纯化该粗制品，从而得到403mg的澄清的油状 产物(55%，2st印s)。屮 NMR(400MHz, CDC13) 6 :8. 21-7. 05 (m，35H，Ar)，6. 09 (dd，1H，J3,2 = 9. 8，J3,4 = 9. 8，H-3IV)，6. 02 (t, 1H, NH)，5. 97 (dd, 1H, H-3)，5. 90 (dd, 1H, H_6)，5. 86 (dd, 1H, H-3), 5. 75 (d, 1H, Jlj2 = 3. 9，H_1IV)，5. 71-5. 63 (m, 3H, H-1, H-31, H_4IV)，5. 59 (d, 1H, Jlj2 =3. 9，H-l)，5. 27-5. 18 (m, 2H, H-21，H_2IV)，5. 12-5. 04 (m, 3H, H-61，2xH_2)，4. 72-4. 66 (m, 2H, 2xH-6)，4. 70 (d, 1H, Jlj2 = 7. 8, H-I1)，4. 58 (m, 2H, H2xH_6)，4. 45-4. 31 (m, 6H, 3xH_4，3xH_5， H-6)，4. 17 (dd, 1H, H-6)，4. 02 (ddd, 1H, H-51)，3. 91 (m, 1H, CH2O)，3. 56 (m, 1H, CH2O)，3. 28 (m, 1H, CH2N)，3. 13 (m, 1H, CH2N)，2. 13 (m, 2H, CH2CO)，1. 76-1. 58 (m, 4H, CH2)，1. 26-1. 24 (m, 28H, CH2), 0. 88(t，3H，CH3).3-硬酯酰胺丙基α -D-吡喃葡萄糖基_(1 — 4) - α-D-吡喃葡萄糖 基-(1 — 4) - α -D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4) - β -D-吡喃葡萄糖苷(127)将糖苷126(377mg，161ymol)溶解于甲醇 /THF 1 1 (IOmL)中。加入 NaOMe (60 μ L，IlM溶液)并在室温下搅拌该溶液24小时。在蒸发溶剂前，用酸性树脂中和 该混合物，过滤溶液，从而得到白色固体产物，将其与乙酸乙酯一起进行研磨并轻轻地倒出 溶剂(x3)。在真空下干燥该固体，从而得到159mg的白色固体产物(定量的)，将其用于反 应而不进行进一步的纯化或鉴定。3-硬酯酰胺丙基2，3，4，6_四_0_磺基-α-D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4)_2，3， 6-三-0-磺基-α -D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4) -2，3，6-三-0-磺基-α -D-吡喃葡萄糖 基-(1 — 4)-2，3，6-三-0-磺基-β-D-吡喃葡萄糖苷，十三钠盐(128)将多元醇127(159mg，161ymol)溶解于 DMF(0. 02M，8. ImL)中。加入 SO3.卩比啶 (3当量/0H，6. 3mmOl，1.0g)并在60°C下搅拌该溶液一整夜。将该溶液冷却至0°C，用5M NaOH(3当量/SO3.吡啶，3. 8mL)将其中和。将该混合物冷却至_20°C —小时。轻轻地倒出 上清液并弃去。用水将沉淀物转移到一个大的圆底烧瓶中，蒸发，用水(5L，含有ImL 1.7M NH4HCO3)交换透析(2000MWC0盒，Pierce)72小时。冻干该溶液，从而得到黄色固体产物 (227mg，61 % ) 1H NMR(D20,400ΜΗζ) δ 5. 89 (d, 1H, Jlj2 = 3.4，H-l) ,5. 72 (d, 1H, Jlj2 =
2.7，H-l)，5. 67 (d, 1H, H-l)，5. 06-4. 09 (m, 18H)，4. 01 (ddd, 1H, CH2O)，3. 75 (ddd, 1H, CH2O)，
3.33(t，2H，J = 6. 1,CH2N) ,2. 28(t，2H，J = 7. 4，CH2CO)，1. 87 (m, 2H, CH2)，1. 62 (m, 2H, CH2)， 1. 37-1. 29 (m, 28H, CH2)，0. 91 (t，3H, CH3).实施例28.叔-丁基2_(胆甾-3-基氧)醋酸酯(129)将胆甾烷醇(0. 662g，1. 703mmol)溶解于甲苯(13mL)中。在一部分中加入叔丁 醇钾(573mg，5. llmmol)。室温下搅拌该混合物3小时。逐滴地加入叔-丁基溴乙酸乙 酯(503yL，3.406mmol)并在室温搅拌该混合物一整夜。加入甲苯(20mL)，用盐水冲洗 (50mL)该溶液。在合并有机相之前，用甲苯(30mL)萃取水相，干燥(Na2SO4)，蒸发溶剂。用 柱层析(SiO2;己烷乙酸乙酯，200 1至200 20)纯化该粗制品，从而得到白色固体 产物(0. 65g，76%得率)。1H NMR (400MHz，CDCl3) δ :3.98(s，2H，CH2O)，3· 30 (m，1H，CHO)， 1. 97-0. 56(m，31H)，1. 46(s，9H，CH3)，0. 89(d，3H，J = 6. 1，CH3)，0. 85(d，3H，J = 2. 0，CH3)， 0. 84 (d, 3H, J = 1. 4，CH3)，0. 79 (s, 3H, CH3)，0. 64 (s, 3H, CH3).2_(胆甾-3-基氧)醋酸(130)在加入TFA(ImL)前，将叔丁基2_(胆甾-3-基氧)醋酸酯129(634mg，1. 26mmol) 加入到DCM(4mL)中。室温下搅拌该溶液90分钟。蒸发掉溶剂，用一个短的硅胶柱(SiO2: DCM至100 5 DCM 甲醇)纯化残留物，然后从己烷中重结晶，从而得到439mg的白色固体 产物(78% ) ο 1H nmr (400MHz, CDCl3) δ :4. 25 (s，2Η，CH2O)，3. 37 (m，1Η，CHO)，1. 99-0. 58 (m， 31H)，0· 89(d，3H，J = 6. 6，CH3)，0. 85 (d，3H，J = 2. 0，CH3)，0. 84 (d，3H，J= 1.4，CH3),0. 80 (S，3H, CH3)，0. 64 (s, 3H, CH3)。
2,3,4,6-四_0_苯甲酰基-α-D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4) _2，3，6_三_0_苯甲酰 基-α -D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4) -2，3，6-三_0_苯甲酰基-β -D-吡喃葡萄糖基异硫氰酸 酯(131)将溴化物84(1. 8g，1. 12mmol)、KSCN(3 当量，326mg)、分子筛和 Bu4NI (cat.)力口 入到无水乙腈中，并在75°C下搅拌一整夜。蒸发溶剂，将残留物加入到DCM中，在干燥 (Na2SO4)和蒸发溶剂前，用NaHC03(饱和的)对其进行洗涤。用柱层析(SiO2 己烷至35% 乙酸乙酯/己烷，用甲苯载样)纯化该粗制品，从而得到1. 15g的白色固体产物(65% )。1H NMR(400MHz, CDCl3) δ :8· 23-7. 12 (m, 50Η, Ar), 6. 16 (dd, 1H,J3j2 = 9. 6, J3j4 = 9. 6，Η_3ΠΙ)， 5. 96 (dd, 1Η, J3,2 = 9. 6，J3,4 = 8. 2，Η_3Π)，5. 81 (d, 1Η, Jlj2 = 4· 1，Η_1ΠΙ)，5. 75-5. 68 (m, 2Η, Η-β',Η-^,δ. 65(d，lH，Jlj2 = 4. 1，Η_1Π)，5· 40 (dd, 1Η, J2jl = 8. 2, J2j3 = 8. 2,Ε~2τ), 5. 32 (dd, IHjJ2j1 = 4. LJ2j3 = 10. 2，Η_2ΠΙ)，5· 28 (d, IHjJ1j2 = 8. 2, H-I1) ,5. 13 (dd, IHjJ2j1 =4. 1, J2j3 = 10. 2，Η-2Π)，5· 00 (dd，1Η，Η—61)，4· 77 (dd，1Η，Η_6Π)，4· 72-4. 65 (m，2Η，Η—61， Η-6Π)，4. 53-4. 41 (m, 5Η, Η—511，Η_5ΠΙ，Η—41，Η—411，Η_6ΠΙ)，4. 30 (dd, 1Η, Η_6ΠΙ)，4. 13 (ddd, 1Η, Η-51)。2_(胆甾-3-基氧)乙酰胺基2，3，4，6-四-0-苯甲酰基-0-0_卩比喃葡萄糖 基-(1 — 4)-2，3，6-三-0-苯甲酰基-α-D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4) _2，3，6_三_0_苯甲 酰基_ β -D-吡喃葡萄糖苷(132)将异硫氰酸酯131(0. 5g，315 μ mol)和 2_(胆甾(cholestan)_3_ 基氧)醋酸 130(141mg,315ymol)溶解于甲苯(6. 3mL)中。加入三乙胺(20 μ L)，在室温下搅拌该溶 液4天。蒸发溶剂，通过柱层析(SiO2 :甲苯至10 %乙酸乙酯/甲苯)纯化残留物，从而 得到 358mg 的白色固体产物(58% ) ο 1H NMR(400MHz, CDCl3) δ :8· 23-7. 09 (m, 50H, Ar)， 7. 50 (d, 1H, NH)，6. 09 (dd, 1H, J3,2 = 10. 2，J3,4 = 9. 9，Η_3ΠΙ)，5. 91 (dd, 1H, J3,2 = 9. 9，J3,4 =7. 8，Η-3Π) ,5. 82 (dd, 1H, J3,2 = 9. 5，J3,4 = 9. 2，H—31)，5. 74 (d, 1H, Jlj2 = 4. 1，H-Im)， 5. 67 (dd, 1H, J4,3 = 9. 9，J4,5 = 9. 9，Η_4ΠΙ)，5. 60 (d, 1H, Jlj2 = 4. 1，H-I11)，5. 51 (dd, 1H, J1, 2 = 9. 5，J1,冊=8. 5，H-I1)，5. 27(dd，lH，J2jl = 4. 1，J2,3 = 10.6, Η_2ΠΙ)，5. 24(dd，lH，J2jl =9. 5，J2,3 = 9. 5，Η-21)，5· 08 (dd, 1H, J2jl = 4. 1，J2,3 = 10. 2，Η_2Π)，4· 92 (dd, 1H, Η-6)， 4. 70-4. 64 (m, 2H, H2xH_6)，4. 56 (dd, 1H, H-6)，4. 46-4. 31 (m, 5Η, Η_5ΠΙ，H-41，H-411，2xH_6)， 4. 22 (ddd, 1H, Η_5Π)，4. 15 (ddd, 1H, H—51)，3. 95 (dd, 1H, CH2O)，3. 73 (dd, 1H, CH2O) ,3. 11 (m, 1H, CHO)，1. 47-0. 50 (31H)，0. 90 (d, 3H，J = 6· 8，CH3)，0. 86 (d, 3H，J = 6· 8，CH3)，0. 86 (d, 3H, J = 6. 8, CH3)，0. 77 (s, 3H, CH3)，0. 64 (s, 3H, CH3).2-(胆甾-3-基氧)乙酰胺基α-D-吡喃葡萄糖基-(1— 4)-a-D-吡喃葡萄糖 基-(1 — 4) - β -D-吡喃葡萄糖苷(133)将酰胺132(345mg，175ymol)溶解于甲醇 /THF 1 1 (16mL)中。力口入 NaOMe (500 μ L，6M溶液)并在室温下搅拌该溶液24小时。在蒸发溶剂前，用酸性树脂中和 该混合物并过滤该溶液，从而得到白色固体产物，将其与乙酸乙酯一起进行研磨并轻轻地 倒出溶剂(x3)。在真空下干燥该固体从而得到124mg的白色固体产物(76% )，将其用于反 应而不进行进一步的纯化或鉴定。2-(胆甾-3-基氧)乙酰胺基2，3，4，6_四_0_磺基-α -D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4)-2，3，6-三-ο-磺基-α-D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4)_2，3，6_ 三-O-磺 基-β -D-吡喃葡萄糖苷，十钠盐(134)将多元醇133(118mg，127ymol)溶解于 DMF(0.04M，4.4mL)中。加入 SO3.卩比啶 (3当量/0H，5. 3mmol，838mg)并在60°C下搅拌该溶液一整夜。将该溶液冷却至0°C并用5M Na0H(3当量/S03.吡啶)将其中和。在-20°C冷却该混合物1小时。轻轻地倒出上清液并 弃去。用水将沉淀物转移到一个大的圆底烧瓶中，蒸发，用水(5L，含有lmL1.7M NH4HCO3)交 换透析(2000MWC0盒，Pierce) 72小时。冻干该溶液从而得到黄色固体产物(195mg，79% )。 1H 匪R (D20,400MHz) δ 5. 67 (d, 1H, Jlj2 = 2. 9，Η_1)，5· 57 (d, 1Η, Jlj2 = 1. 2，Η_1)，5· 35 (d, 1Η, Jlj2 = 7. 3，H-I1)，5. 06-4. 06 (m, 20Η)，3. 48 (m, 1Η, CH0)，2. 07-0. 68 (m, 46Η).实施例29. 3_(胆甾-3-基氧)丙腈(135) 将胆甾烷醇(1. 554g，3. 998mmol)溶解于DCM(6mL)中。向该溶液中加入KOH(水中 40% w/w, 1. 2mL)和丙烯腈(0. 8mL)，接着加入18-crown-6 (104mg)。室温下搅拌该混合物 一整夜。在蒸发溶剂前，用盐水冲洗有机层并干燥(Na2SO4)15从热甲醇中重结晶。残留物从 而得到纯的无色结晶固体产物(1.428，80%得率)。1H NMR(400MHz,CDCl3) δ :3. 68(t，2H， CH2O)，3. 29 (m, 1H, CHO)，2. 57 (t, 2H, CH2CN)，1. 98-0. 58 (m, 31H)，0. 89 (d, 3H，J = 6. 6，CH3)， 0. 87 (d, 3H，J = 1. 8，CH3)，0. 85 (d, 3H，J = 2. 0，CH3)，0. 79 (s, 3H, CH3)，0. 64 (s, 3H, CH3)。1-氨基_3-(胆甾-3-基氧)_丙烷(136)将3-(胆甾-3-基氧)丙腈 135 (442mg，lmmol)加入到甲苯(ImL)、氯仿(1. 5mL)、 乙醇(ImL)和浓HCl (200 μ L)的混合物中。加入氧化钼水合物(46mg)。在室温，氢气气氛 (SOpsi)下搅拌该混合物48小时。蒸发溶剂并将残留物与DCM(40mL)和NaHCO3 (饱和的) (40mL)混合。分离有机相，并在将其干燥(Na2SO4)前用NaHCO3 (饱和的)(30mL)，接着用， 盐水(20mL)对其进行洗涤，蒸发溶剂，从而得到白色泡沫状产物，将其用于反应而不进行 进一步的纯化或鉴定。1_[(胆甾-3-基氧)丙基]-3_[2，3，4，6-四_0_苯甲酰基-α-D-吡喃葡萄糖 基-(1 — 4)-2，3，6-三-0-苯甲酰基-a-D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4) _2，3，6_三_0_苯甲 酰基_ β -D-吡喃葡萄糖苷]硫脲(137)将3_(胆甾-3-基氧)丙烷-1-胺136(0. 5mmol)加入到甲苯(3mL)中。加入异硫 氰酸酯131(403mg，0.254mmol)。在室温下搅拌该溶液3天。蒸发溶剂，并用柱层析(SiO2 ； 甲苯至180 30甲苯乙酸乙酯)纯化该粗制品，从而得到纯的白色固体产物(355mg， 35% )。1H nmr (400MHz,CDCl3) δ :8· 23-7. 09 (m, 50Η, Ar), 6. 90 (dd, 1Η, J = 4· 9，J = 4· 9， NH) ,6. 09 (dd, 1Η, J3j2 = 10. 2, J3j4 = 9· 8，Η_3ΙΠ)，5· 89 (m，2Η，Η—311，Η—31)，5· 74 (d，1Η， Jlj2 = 3.9, H-I111)，5. 67 (dd, 1Η，J4j3 = 9.8, J4,5 = 9.8, Η_4ΠΙ)，5. 58 (d，1H，Jlj2 = 3.9, H-I11)，5. 28 (dd, 1H, J2jl = 3. 9，J2,3 = 10. 7，Η_2ΠΙ)，5. 19 (dd, 1H, J2a = 9. 3，J2,3 = 9. 3， H-21)，5. 09 (dd, 1H, J2jl = 3. 9, J2,3 = 10. 2，H—211)，4. 92 (dd, 1H, H—6)，4. 70 (dd, 1H, H—6)， 4. 67 (dd, 1H, H-6)，4. 58 (dd, 1H, H-6)，4. 46-4. 34 (m, 5H)，4. 27-4. 18 (m, 2H)，3. 50 (dd, 2H, CH2)，3. 18 (m, 1H, CH0)，1. 98-0. 56 (35H)，0. 90 (d, 3H，J = 6. 8，CH3)，0. 87 (d, 3H，J = 6. 8， CH3)，0. 86 (d, 3H，J = 6. 8，CH3)，0. 80 (s, 3H, CH3)，0. 64 (s, 3H, CH3)。1-[(胆甾-3-基氧)丙基]-3- [ α -D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4) - α _D_吡喃葡萄糖 基-(1 — 4)-β-D-吡喃葡萄糖苷]硫脲(138)
将硫脲137(345mg，171ymol)溶解于甲醇 /THF 1 1 (16mL)中。力口入 NaOMe (500 μ L 6Μ溶液)并在室温下搅拌该溶液24小时。在蒸发掉溶剂前，用酸性树脂中 和该混合物并过滤该溶液，从而得到白色固体产物，将其与乙酸乙酯一起进行研磨并轻轻 地倒出溶剂(x3)。在真空下干燥该固体从而得到169mg的白色固体产物(定量的)，将其 用于反应而不进行进一步的纯化或鉴定。1-[(胆甾-3-基氧)丙基]-3_[2，3，4，6-四_0_磺基-α-D-吡喃葡萄糖 基-(1 — 4)-2, 3,6-三-0-磺基-a-D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4)_2，3，6_ 三-0-磺 基-β -D-吡喃葡萄糖苷]硫脲，十钠盐(139)将多元醇138(169mg，171ymol)溶解于 DMF(0. 04M，4. 4mL)中。加入 SO3.吡啶(3 当量/0H，5. 13mmol，816mg)并在60°C下搅拌该溶液一整夜。将该溶液冷却至0°C并用5M NaOH(3当量/SO3.吡啶)将其中和。将该混合物冷却至_20°C 1小时。轻轻地倒出上清液 并弃去。用水将沉淀物转移到一个大的圆底烧瓶中，蒸发，用水(5L，含有ImLl. 7M NH4HCO3) 交换透析(2000MWC0盒，Pierce) 72小时。在用制备C18 RP-HPLC系统(水中5%M 95% 乙腈大于20分钟)对其进行纯化前，冻干该溶液，将其加入到水中。在HPLC纯化后，用CE 测定收集的每个部分的纯度。合并纯度超过90%的部分，并将其冻干，从而得到白色固体 状产物(7mg,2% ) ο 1H NMR(400MHz, D2O) δ :6. 00-5. 56 (m，3Η，3χΗ_1)，4. 98-3. 14 (m，21Η)， 2. 04-0. 72 (m, 50H).实施例30. 3'-胆甾烷基2，3，4，6_四-0-磺基-(1-0-卩比喃葡萄糖基-(1 — 4)_2， 3，6-三-0-磺基-α -D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4) -2，3，6-三-0-磺基-α -D-吡喃葡萄糖 基-(1 — 4) - ((1-吡啶-1-基)-2，3，5，6-四-0-磺基-D-葡萄糖苷，十三钠盐(140)将多元醇64 (3. 552)溶解于无水DMF (46mL)中，加入刚刚洗涤和干燥过的SO3. 口比 啶复合物(21. 24g)，并在60°C下搅拌该混合物16小时。将反应混合物冷却至0°C 10分钟， 然后在0°C下在一部分中通过加入冰冷的NaOH水溶液(5M，54mL)将其中和(达到pH 12)。 在0°C搅拌该混悬液15分钟，用水(IOmL)将其稀释，并在40°C下真空浓缩。得到一种浅 黄色粉末，将该粉末溶解于水中(IOmL)得到pHll.5的溶液。通过加入NaOH水溶液(5M，5 滴)将该溶液的PH调到12. 5，用4x Slide-A-Lyzer 盒(2000MWC0，4_12mL)，在室温下用
水(4L)交换透析16小时。继续在0°C用水(4L)交换透析3天，其中每24小时候更换水， 和向水中加入NH4HCO3水溶液(3M，0. 6mL)以将pH调到 6. 0-6. 5。然后冷冻干燥已脱盐的 溶液从而得到主要为65和140的混合物，在制备C18 RP-HPLC系统上(水中5%至30%的 乙腈大于20分钟)对其进行纯化。在HPLC纯化后，用CE测定收集的每个部分的纯度。合 并纯度超过90%的部分，并将其冻干，从而得到白色固体状产物(30mg，从约Ig的粗制原料 中纯化得至Ij)。1H NMR(400MHz, D2O) δ :9· 09 (m, 2H, Ar), 8. 39 (m, 1Η, Ar), 7. 93(m，2H，Ar)， 6. 40 (d, 1Η, H-I1)，5. 56 (d, 1H, J1,2 = 3. 4, H-I11)，5. 54 (d, 1H, J1,2 = 2. 3，H-Im)，5. 45 (d, 1H, J1,2 = 3. 3，H-Iiv)，5. 00 (ddd, 1H, H—51)，4. 86 (dd, 1H, H—311)，4. 79 (dd, 1H, Η_3ΙΠ)，4. 77 (dd, 1H, H-21)，4. 77 (dd, 1H, H—41)，4. 64 (dd, 1H, Η_2ΠΙ)，4. 58 (dd, 1H, H_3IV)，4. 49 (dd, 1H, H—31)， 4. 40 (m, 1H, H-61)，4. 32 (m, 1H, H-61)，4. 31 (dd, 1H, H_4IV)，4. 29 (dd, 1H, H-211)，4. 29 (dd, 1H, H-2IV)，4. 20-4. 10 (m, 6H, H6xH_6)，4. 13 (ddd, 1H, H—511)，4. 12 (dd, 1H, H—411)，4. 10 (dd, 1H, H-4111)，4. 07 (ddd, 1H, Η_5ΠΙ)，3. 81 (ddd, 1H, H_5IV)，2. 00-0. 67 (m, 31H)，0. 93 (d, 3H, CH3)， 0. 87 (d, 3H, CH3)，0. 86 (d, 3H, CH3)，0. 83 (s, 3H, CH3)，0. 68 (s, 3H, CH3)。
实施例31. 8-十五烷基(Pentadecanyl) 2，3，4，6_四_0_乙酰基-D-吡喃葡萄糖 苷(141)向D-葡萄糖全醋酸酯(250π^，640μπιΟ1)的DCE(ImL)溶液中加入8_十五烷 醇(220mg，960ymol)。在将混合物倒在短硅胶柱上和用乙酸乙酯洗脱之前，加入BF3. 0 (Et) 2 (134 μ L,l. Immol)并在室温下搅拌该混合物一整夜。蒸发掉溶剂，然后通过柱层析 (SiO2,用DCM载样，用DCM(IOOmL)，然后20%乙酸乙酯/己烷至35%乙酸乙酯/己烷洗脱) 纯化粗制的原料，从而得到白色固体状糖苷141 (179mg，50% )。1H NMR(CDCl3,400MHz) δ 5. 19 (dd, 1H, J2,3 = 9· 5，J3,4 = 0· 0，Η-3)，5. 06 (dd, 1H, J4,5 = 9. 7，H-4)，4. 96 (dd, 1H, Jlj2 =8. 0，J2,3 = 9. 6，H-2), 4. 52 (d，1H，Η_1)，4· 21 (dd, 1H，J5j6b = 5. 2，J6aj6b = 12. 1，H_6b)， 4. 12 (dd, 1H, J5j6a = 2· 6，H_6a)，3. 66 (ddd, 1H, J4,5 = 10. 0, H—5)，3. 53 (m, 1H, CH2CHOCH2)， 2. 07 (s，3H, OCOCH3)，2. 02 (s,6H, OCOCH3)，2. 00 (s, 3H, OCOCH3)，1. 60-1. 20 (m, 24H，CH2)，
0.88 (t，3H，J = 7. 0，CH3)，0. 87 (t，3H，J = 7. 0，CH3) · 8-十五烷基D-吡喃葡萄糖苷(142)按照常规方法将糖苷141(70mg)脱去乙酰基，从而得到白色固体状多元醇 142 (50mg,定量的)，将其进行反应而不进行进一步的纯化或鉴定。8-十五烷基2，3，4，6-四-0-磺基-D-吡喃葡萄糖苷，四钠盐(143)将多元醇142(50mg)溶解于DMF(5mL)中。加入SO3.吡啶(250mg)并在室温下搅 拌该溶液一整夜。将该溶液冷却至0°C，并用2M NaOH将其中和达到PH 10。蒸发溶液至干。 将残留物溶解于4mL的水中，用Bio-Gel P-2柱层析(用0. IM NH4HCO3,以196mL/h速度洗 脱，每次收集6分钟)对其进行纯化。用MBT和CE来鉴定产物级分。冷冻干燥生产得到浅 黄色粉末状产物 143(33mg,32% )。1H NMR(400MHz, D2O) δ 4. 79 (d, 1H, Jlj2 = 5.3，H_l)， 4. 67 (br, 1H)，4. 45 (br, 1H, H-2)，4. 28 (m, 2H)，4. 28 (m, 2H)，3. 68 (s, 1H)，1. 52-1. 38 (m, 4H)，
1.32-1. 10 (m, 24H)，0. 76-0. 71 (m, 6H).化合物的生物试验生长因子结合试验使用基于表面等离激元(SPR)的溶液亲合力试验9来测量化合物对于生长因子 FGF-U FGF-2和VEGF的结合亲合力。通过固定包被着抗生蛋白链菌素的传感器芯片上的 生物素化的BSA-肝素，或通过使用己二酸二酰胼或1，4_ 二氨基丁烷进行醛耦合来制备 用于该试验的包被着肝素的传感器芯片9。就每个Kd的测量而言，溶液被制备为在缓冲液 中含有固定浓度的蛋白和变化浓度的所述配体。在HBS-EP缓冲液(IOmM HEPES, pH 7.4， 150mM NaCl, 3. OmM EDTA和0. 005% (ν/ν)聚山梨醇酯20)中测量结合于FGF-1和VEGF的 配体，而在含有0. 3MNaCl的HBS-EP缓冲液中测量结合于FGF-2的配体。在注射前，将样 品保持在4°C下从而使蛋白的稳定最大化。对于每个试验混合物而言，以5-40 μ L/分钟注 射50-200 μ L溶液并测定相对的结合响应。所有的表面结合试验都在25°C进行。通过以 40 μ L/分钟注射40 μ L的4Μ NaCl，接着以40 μ L/分钟注射40 μ L的缓冲液来使表面再生。使用BIA评价软件(BIAcore)和如前面所述的测定的Kd值来分析传感器克 (Sensorgram)数据9。其中测定一式两份的Kd值，该值表示的是两份测量结果的平均值。 其结果如表1所示。类肝素酶抑制试验
通过测定磺达肝素底物的裂解可以检测类肝素酶的酶活性39’4°。可以通过将其与 单四唑盐WST-I (Ausp印Pty Ltd，墨尔本，澳大利亚)反应从而产生蓝色(可以在584nm用 微板读板器进行测定)来检测新生成的还原二糖。在存在抑制剂的情况下，类肝素酶的催 化活性降低，产生的二糖数量和溶液的光密度都会减少。抑制剂的抑制百分数和IC5tl是通 过在抑制剂浓度范围测定光密度(OD)来测定的。在pH 5.0的40mM醋酸钠缓冲液中，按照下述方法进行该试验。在预先涂上BSA 的96孔板(Costar EIz/RIA, Corning)中混合最终的体积为100 μ L的磺达肝素(100 μ Μ) 和各种浓度的抑制剂以及缓冲液。然后加入纯化的重组人类肝素酶(2.55ηΜ)以启动该试 验。在37°C孵育该板24小时，通过加入WST-I溶液(IOOyL)来终止该试验。在60°C孵育 该板60分钟而产生蓝色。在584nm用微板读板器(Fluostar)测定0D，用作为还原糖标准 的D-半乳糖绘制的标准曲线来定量。评价各个化合物的IC5tl值并用以下表达式将其转换 成Ki (抑制常数) 测定磺达肝素的Km (导致半最大速度的底物浓度)为33士6 μ M。该结果如表1所
示 ο生长因子诱导的内皮细胞增殖试验内皮细胞培养按照基本上如Lonza.所述的标准细胞培养协议养护和传代培养HUVEC细胞。简 单地说，在Lonza内皮生长培养基(EGM)中与推荐的补充物和生长因子(VEGF、FGF2、EFG, IGF、氢化可的松、胎牛血清(FBS)、抗坏血酸、肝素以及庆大霉素)一起养护细胞。当其达到 70-80%汇聚时，通过胰蛋白酶化和在新培养瓶中的新鲜生长培养基中以2500至5000细胞 /cm2容器表面积进行再播来传代培养细胞。用血球计数器进行细胞计数，用锥虫蓝使活细 胞显影。使用仅含2% FBS和庆大霉素的EGM来制备用于增殖研究的培养基。在随后的研究 中，完全EGM被用于VEGF组以试图增加VEGF-刺激组的增殖指数。就管腔生成试验(tube formation assay)而言，使用仅省略了肝素的完全培养基。从粉末原料中称出研究中的化 合物，并在PBS中稀释成为IOmM的原液，并将其储存于-80°C条件下。就试验而言，接着在 EBM-2培养基(用2% FBS和庆大霉素增补)中稀释化合物以达到各种所需的使用浓度。增殖试验使用各种浓度的生长因子VEGF、FGF_1或FGF-2在72小时的时间内诱导HUVEC增 殖。在首个系列试验中，可通过检查细胞密度和由生长因子诱导最大增殖所需的生长因子 浓度来进一步优化该试验。简单地说，以每孔1-3 X IO3的浓度向各个孔中加100 μ L的细 胞。然后以特定的浓度以50 μ L的体积加入生长因子和试验化合物从而得到最终的200 μ L 体积。接着孵育70小时，在490nm读取吸收度以获得OD值之前的2小时，加入20 μ L的 CellTitre 96 Aqueous细胞增殖检测单溶液(Promega)。该数据列在表2中。Matrigel 微管形成试验
基本上按照如Malinda等人所述的方法进行管腔形成试验41，有一些改动。采集第四或第五次以70-80%汇聚传代的HUVEC，并以每mL4X IO5细胞的细胞密度，将其再次悬浮 于含有除肝素外的所有生产商所示补充物的Lonza内皮生长培养基(EGM2)中。每组一式 三份孔板，用等量体积的化合物处理200 μ L的细胞(4X 105/mL)从而获得10、50或100 μ M 的最终浓度(从而保证了每种情况可得IX 300 μ L)。然后将100 μ L等分的细胞植入预先 涂布了生长因子减少的Matrigel 的96-孔板上(50 μ L 30分钟，接着另外30 μ L 1小时) 并将其孵育18-22小时。通过相差显微镜检查检测管腔形成，用Olympus C5050数字式相机 采集图像。通过记录图像中连接3或更多小管的节点总数来人工定量管腔形成抑制作用。 以与对照组相比的抑制百分数来表示该结果，该结果列在表2中。未处理的HUVECs作为对 照用于Matrigel中的正常细胞生长和管腔形成。内皮细胞迁移试验将BD BioCoat血管生成系统用作体外，定量的内皮细胞迁移试验平台。该系统由 一个BD Falcon 24-Multiwell Insert Plate (和一个非-TC处理的24-孔接收器板和盖 子)构成，其含有一种均勻涂布人类纤连蛋白的荧光阻断微孔性(孔径3.0μπι)ΡΕΤ膜(BD FluoroBlok)。该纤连蛋白的浓度和涂布程序进行了最优化处理，从而不会使孔隙被堵塞。 这使得内皮细胞可粘附在该膜上并向该孔板较低隔室中的血管生成刺激物上自由地迁移。 不用进一步处理，用荧光读板仪(fluorescence plate reader)定量迁移细胞。在这种情 况下，在迁移后这些细胞用荧光染料示踪。简单地说，将2. 5 X 105/mL浓度200 μ L的HUVHCs涂在试剂盒的24-孔板的各个 孔的上隔室中。然后仅与作为未处理的对照组的培养基(ΕΒΜ-2) —起以各种浓度(通常为 10禾Π /或50 μ g/mL)加入化合物。由于在我们的实验室中用FGF-2或VEGF刺激HUVEC的 弱迁移表现，因此使用10%胎牛血清(FCS)，因为这同样会使与在不含FCS的培养基中培养 的HUVEC相比，HUVEC迁移的增加超过6倍。因此，向下隔室加入含10% FCS的750 μ L培 养基以发挥迁移刺激物的作用，在37°C /5% CO2条件下过夜孵育该孔板18小时。在孵育 时间之后，将上板转移到一个新的24-孔底板上，并加入500 μ L钙黄绿素AM从而在37°C， 将迁移的在多孔膜下的细胞染色90分钟。用具有分别为485nm和520nm激发和发射滤器 的FLUOstar Optima (BMG实验室)来测定荧光。数据用与FCS-诱导的HUVEC相比的迁移 抑制百分比来表示(表3)。离体血管生成萌芽试验通过用修改的如前文所述的方案来制备大鼠主动脉外植块42_45。在本模型中，大鼠 的主动脉内皮暴露于一种立体的ECM-衍生蛋白(Matrigel )基质中，转变成一种微血管表 型，产生微血管分支网络。通过解剖操作引起的损伤触发血管生成且不需要由外源性生长 因子刺激。简单地说，从2-至4-个月大的Sprague Dawley大鼠上切离胸主动脉并修除其剩 余的脂肪和结缔组织。在每一个阶段都进行非常小心的护理以减少主动脉的物理损伤。将 组织转移到含有2% FCS和除肝素以外的所有singlequots (Cambrex)试剂的完全EBM-2 培养基(Cambrex)中。同时，在冰上使Matrigel (BD Biosciences)冷却，并在成为液体形 式之后，将180 μ L移入到48-孔组织培养皿(Nunc)中。在37°C孵育该培养皿30分钟以使 Matrigel 固化。
切下Imm环形截面来准备主动脉，然后将其平分。小心地将主动脉段置于每个孔 中心Matrigel 的顶部并在按照需要进行定位之后，另外60μ L Matrigel 被加到顶部，并 将该培养皿重新放回到培养箱中20分钟。然后用1. OmL的不存在(对照组)或存在试验 化合物的培养基补充每个孔，化合物浓度通常在1-50 μ M范围内，其取决于特定的化合物/ 试验。每48小时酌情补充培养物并在不同的时间点直到8-10天进行微血管评分。通过使 用0-5的一种评分系统来测定微血管萌芽的范围，其中0 =无微血管至5 =如前所述的弥 漫血管生成45。4Χ物镜与Olympus C-7070相机和对目镜转换接头为萌芽血管照相。
在某些情况下，为了确定本试验化合物的潜在毒性，通过在第6或7天撤消培养物 中的化合物/培养基和加入含VEGF (通常lOng/mL)的完全培养基直到另外7天来评价组 织活力。在没有毒性的情况下，作为对外源性生长因子的响应，有活力的组织应长出微血管 萌芽。使用如上所述的血管生成萌芽/微血管生成(大鼠主动脉)试验来对本发明化合 物对血管生成的抑制作用进行分析。在不存在任何抑制剂的情况下(对照组)将大鼠主动 脉组织埋植在Matrigel 中产生了广泛的血管生成萌芽(如同评分5表示的弥漫血管生 成)，如图1所示。以10和50 μ M加入ΡΙ-88和PG524 ( 一种较低亲脂性类似物)导致了强烈的抑制 反应。然而，本发明化合物表现出了更强的抑制血管生成效力，其以ΙΟμΜ加入则抑制高达 100%。该结果列在下面的表4中。为了测定用上述化合物处理后主动脉组织活力，在第6天或第7天撤消这些化合 物(取决于单个试验)，接着用VEGF进行处理直到另外7天。微血管芽的出现表明本发明 化合物是通过抗血管生成机制而不是诱导组织毒性发挥其抑制作用的(下文图2)。抗凝血作用通过测定各种浓度化合物(在PBS中0-100 μ g/mL)对提高混合正常人血浆的活 化部分凝血激酶时间(APTT)的影响，来测定试验化合物的抗凝血作用。使用生产商技术说 明书所述的标准协议在STAG0STA-紧凑型血凝分析器上测量APTT。用未分级的肝素(UFH) 作为对照。混合正常人血浆的APTT正常范围为26-36秒。结果列于表5中，该结果表明该 新化合物仅具有弱的抗凝血作用，该效力显著小于PI-88。体内小鼠黑色素瘤模型B16黑素瘤是一种诱导同基因C57/BL6小鼠肿瘤的常用细胞系。其为一种非转移 性，快速生长的，对大多数抗癌剂无应答的肿瘤。在含有10 % FCS、青霉素/链霉素、L-谷氨酰胺、丙酮酸钠、2-巯基乙醇 (mercapoethanol)的完全DMEM培养基中培养B16F1细胞。采集细胞用于肿瘤接种，用胰 蛋白酶/EDTA分裂B16F1细胞，用HBSS清洗，并以1500rpm离心5分钟。然后将细胞再悬 浮于PBS中以保证以50 μ L的一个体积注射5X IO5个细胞。将该肿瘤种植在颈正后。肿 瘤接种3天后，各个治疗组每天在不同部位和以50或100μ L的一个注射体积中的不同浓 度进行皮下注射。注射一直持续到第15天其提供了一个12天的治疗期。从开始注射时起 每天对小鼠进行监测，并每目测定可触及的肿瘤。肿瘤的大小由平面尺寸确定，lXw，其中 1 =最长尺寸和W=最短尺寸。使用公式0.5XlX(w2)来估计肿瘤体积。数据以肿瘤生长 的中值和肿瘤生长抑制百分数(％ TGI)来表示。进行％ TGI计算是为了校正试验间差别。
由于本文表明本发明化合物会抑制生成血管的萌芽形成，并且由于肿瘤的发展是 血管生成_依赖性的，因此如上所述对这些化合物对原发肿瘤生长和总存活数的影响进行 分析。图3提供了在B16黑素瘤模型中从本发明各种研究试验化合物观察到的典型的肿瘤 体积中值的图解。对直接比较的数据而言，图4所示结果表明荷瘤小鼠的肿瘤尺寸与相应的对照 组相比相对减小并以称作肿瘤生长抑制百分数(％ TGI)的参数来表示。使用公式TGI = [1-( Δ T/Δ C)] XlOO来计算TGI值，其中Δ T和Δ C代表分别在样品化合物治疗组(T)和载 体对照(C)组中治疗的最后一天与治疗的第一天间平均肿瘤质量的变化。小鼠体内肺转移模型
当将如上所述为Β16实体瘤小鼠黑色素瘤模型培养的B16F1细胞通过尾静脉被注 射到小鼠上时，结果导致形成肺转移性瘤。由于该肿瘤细胞是黑色的，所以转移性结节观察 很容易辨认。图5所示为对照组和化合物治疗的小鼠肺部，在形成肺部菌落(黑斑)方面 有明显的可见差异。在该转移模型中，Β16细胞(2χ105)是通过C57/BL6小鼠的尾静脉以50mL的体积 在第0天被注射的。在第0天用试验化合物治疗开始，并持续12天。在试验的第12天计 数肺转移灶的数量。图6中的结果表明所选化合物保持了由PI-88所显示出的肺转移的有 效抑制作用。该数据是以观察到的肺转移性瘤与盐水对照组相比的百分数来表示的。体内HT29结肠直肠癌异种移植模型在RPMI1640细胞培养介质中培养HT-29人结肠直肠腺癌细胞(从日常储存 VP-Stock 325起第4代)，该培养介质被补充以10 % FBS和青霉素-链霉素(50IU/mL最 终浓度)。通过胰蛋白酶化采集细胞，在HBSS中将其洗涤两次并计数。然后将该细胞悬浮 于HBSS中，并调正最终体积至含有2xl07细胞/mL。在向注射部位接种前，用酒精大面积擦 拭背部右翼，针穿过皮肤进入到动物右肩正下部的皮下间隙，在那里释放出100μ L的细胞 (2χ106个细胞)。治疗小鼠开始平均肿瘤体积为大约155mm3。。以两个维度测定肿瘤(长度 和直径)并使用以下等式计算肿瘤体积V (mm3)=长度 χ 直径 2X π/6.对溶剂对照组给予无菌的PBS，以10mL/kg的给药量，s. c.给药每日一次进行21 天。每天即将给药前测定每只动物的体重。实际给予每只小鼠的给药体积是以体重为基础 来计算和调整的。使用直肠结肠癌鼠类肿瘤模型的图7中的结果表明所选化合物具有抗癌 活性。所有的化合物都显示出比PI-88增强的活性，PI-88在该模型中并不特别有效。抗病毒活性抗病毒试验的结果显示于表6-10中。细胞和病毒在补充以2%小牛血清、0. 05% Primaton RL 物质(Kraft Inc. ,Norwich,USA)禾口 抗生素的Eagle' s最低基础培养基(EMEM)中培养非洲绿猴肾(GMK AHl)细胞46。在补充 以10%胎小牛血清和抗生素的Dulbecco' s修饰EMEM(DMEM)中培养人上皮癌(HEp_2)细 胞。所用的HSV菌株为HSV-I K0S321，野生株KOS病斑纯化的分离物47，HSV-1K0S gC-null 变种gC_3948、以及HSV-2菌株33349的纯化噬斑。使用RSV菌株A_25°51。按照Hallak等人 的描述制备RSV原料51并将其储存于_70°C存在40%蔗糖52的条件下。
病毒纯化和病毒结合细胞试验如前面所述通过三级不连续蔗糖梯度的离心分离将甲基-[3H]胸苷标记的胞外 HSV病毒粒子进行纯化53’54。如前面所述分析试验化合物对4°C下纯化的甲基-[3H]胸苷标 记的病毒与GMK AHl细胞结合的影响17。简单地说，用PBS-A(补充以ImM CaCl2和0. 5mM MgCl2WPBS)清洗该细胞，然后用含有BSA的PBS-A在室温下将其阻断1小时。连续5 倍稀释的PBS-A中的试验化合物与纯化的病毒粒子混合，并在4°C孵育15分钟。用PBS-A 清洗该细胞一次，加入病毒_化合物混合物，在4°C在适当搅拌下与细胞一起孵育2小时。 接着，用PBS-A清洗该细胞3次，用0. 2mL含有5% SDS的PBS-A溶解将其溶解，并最后将其 转移到用于量化放射性的闪烁瓶中。病毒灭活试验
混合HSV-I K0S321或HSV-2 333菌株的大约105个噬斑形成单位和200 μ L无血 清EMEM中特定浓度的试验化合物，并在37°C将其孵育15分钟。将该混合物稀释至试验化 合物的非抑制浓度，然后依照病毒噬斑减少数试验所述的进行感染效价测定。就RSV而言， 该试验以使用补充2%热灭活胎牛血清的DMEM以替代EMEM的类似的方式进行。为了评估 低PH值或宫颈分泌物存在的影响；在低pH缓冲液(4.5)中将该病毒(HSV-2 333)和化合 物进行稀释或在与病毒(HSV-2333)混合前向该化合物稀释液中加入宫颈分泌物。宫颈分 泌物是从产生于3个不同个体的宫颈拭子制备的。用蒸馏水清洗所述拭子并以5000Xg离 心10分钟。在-20°C下保存该上清液。就RSV而言，以类似的方式使用补充以2%热灭活 胎牛血清的DMEM代替EMEM来进行该试验。病毒菌斑试验用前面所述方法进行病毒传染力(斑块数量减少)试验和斑块尺寸减少试验17。 简单地说，就斑块数量减少试验而言，在添加细胞和37°C下病毒感染细胞的1小时期之前， 在室温下孵育该病毒-化合物混合物15分钟。接着，用2mL EMEM清洗该细胞，和用 甲基纤维素的EMEM溶液将其覆盖。在37°C孵化2(HSV-2)或3 (HSV-I)天后，用结晶紫溶 液染色使斑块可见。通过剂量_反应曲线插值得到试验化合物抑制50%病毒斑块数的浓 度(IC50)。当筛选该化合物抗-HSV或抗-RSV活性时，在加入到细胞和在病毒感染细胞和 病毒斑块发展的整个期间之前，在室温下将200PFU的病毒和无血清EMEM中的试验化合物 (100yg/mL)的混合物孵育10分钟。在斑块尺寸减小试验中，在不存在抑制剂的情况下在 病毒感染细胞的2小时时间之后，将该化合物加入到细胞(在甲基纤维素覆盖培养基中) 中。37°C孵化2-3天后，用结晶紫溶液染色使病毒斑块可见。就每个试验化合物而言， 使用Leica DC300数字式相机连接Leitz-Wetzlar Diavert显微镜来捕捉20个相邻噬斑 的图像。使用IM500图像软件(Leica)测定每个噬斑的面积。类似的规程被用于RSV，除了 进行该试验在HEp-2细胞中进行和补充以2%热灭活胎牛血清的DMEM被用来代替EMEM之 外。细胞毒性试验该试验在被播种在96孔组板中的GMK AHl细胞中进行，在培养的第2天达到约 80-90%的汇聚(confluence)。用EMEM洗涤细胞，并在无血清的EMEM中用100 μ L的系列 二倍稀释试验化合物，在37°C将其孵育24小时。该试验化合物对细胞活力的影响通过使用 按照生产商拟定的以四唑盐为基础的CellTiter96分析(Promega，Madison，WI，USA)来测定。表1.如前面章节所述的生长因子结合和类肝素酶抑制试验结果.化合物KdVEGFKdFGF-IKd FGF-2Ki 类肝素酶(nM)(nM)(nM)(nM)412 士 36 士 3480 士 704. 2 士 0. 585.1 士 1.82. 3 士 1.3253 士 253. 5 士 0.4 110.79 士 0.24 0. 19 士 0. 1073 士 234. 8 士 1.81724 士 63. 2 士 0. 5NDND2022 士 60.60 士 0.50160 士 405. 8 士 1.52440 士 170. 44 士 0. 04108 士 116.0 士 2.1271.04 士 0.190. 24 士 0. 1039 士 65. 5 士 2. 6331300 士 300270 士 301570 士 150 22. 3 士 1.639319 士 1918. 5 士 1.8631 士 46. 4 士 2. 5442. 7 士 0.50.17 士 0.0780 士 404. 4 士 1.448460 士 3022. 6 士 1.0480 士 408. 50 士 0. 145690 士 3016 士 7490 士 4010. 5 士 1.760260 士 13014. 3 士 3.0474.0 士 1.4 8. 4 士 2. 66528. 9 士 2. 38 士4390 士 806.1 士 2. 57095 士 89. 7 士 0.8390 士 903. 7 士 0.876790 士 23050 士 8610 士 6016 士 4793000 士 4003600 士 600> 3000111 士 28化合物Kd VEGFKd FGF-IKd FGF-2 Ki 类肝素酶(nM)(nM)(nM)(nM)837. 95 士 0.071.25 士 0.0750 士 420 士 587190 士 6024. 8 士 2. 3547 士 509.1 士 2. 5化合物Kd VEGFKd FGF-IKd FGF-2Ki 类肝素酶(nM)(nM)(nM)(nM)931600 士 300610 士 2101800 士 30030 士 7971930 士 230840 士 1303400 士 300ND1021200 士 400560 士 302200 士 400ND1071350 士 70870 士 602000 士 400ND112430 士 140900 士 1502100 士 300ND1197. 9 士 0.75. 9 士 1.6286 士 25ND123380 士 11032. 2 士 2. 3530 士 5011. 3 士 0.412814 士 44. 94 士 0. 08311 士 259.1 士 0.31341080 士 20013 士 3630 士 30ND139379 士 1372 士 12880 士 110ND14012 士 21.3 士 0.6380 士 40ND表2.生长因子诱导的内皮细胞增殖试验和Matrigel 微管形成试验中所选化合物的数据· a)由FGF-UFGF-2和VEGF诱导的HUVEC增殖抑制的IC50值(μ M) ；b)以10 μ M 相对于对照组的抑制微管形成百分数化合物 FGF-IFGF-2VEGF10 μ M的微管形成抑制％(IC50,μΜ) (IC50, μ Μ) (IC50, μ Μ)ΡΙ-88 42102029%
425106. 54ND810. 18. 15. 427%113317. 019. 5ND174. 293. 445. 7571%201. 290.8471. 1873%241. 540.6650.58090%270.9900.3900.22074%33> 102. 221. 8514%化合物 FGF-IFGF-2VEGF10 μ M的微管形成抑制％(IC50,μ Μ) (IC50, μ Μ) (IC50, μ Μ)394. 442. 270.95174%443. 790.3491. 1895%483. 811. 742. 0864%562. 521. 801. 7267%602. 611. 221. 4449%651.20. 650. 5053%702. 30. 642. 252%762. 11. 21. 822%792. 202. 902. 24±曾力口 3%83> 50. 0> 50. 0 > 50. 0ND872.52.31.620%932. 692. 432. 62ND974. 094. 171. 13ND1023. 95> 105. 17ND1075. 755. 595. 56ND1194. 042. 692. 0132%1231. 691.71.133%1280. 470. 770. 24ND1341. 471. 282. 1463%1392. 161.52. 3136%1400. 560.0051.137%表3 浓度为10和50 μ M的对照组ΡΙ-88、一种较低亲脂性的类似物(PG524)和所 选化合物的抑制百分率表示的HUVEC迁移抑制 表4 :ΡΙ-88、一种亲脂性较低的类似物(PG524)和所选试验化合物对大鼠主动脉
血管生成试验中血管生成萌芽形成的影响. 表5 所选化合物的抗凝血作用。加入0. lmg/mL的试验化合物后，APTT和H印test 试验中正常混合人血浆的凝结时间 表6.筛选试验中发现的化合物抗-HSV和抗-RSV活性.化合物 剩余的传染性(％)aHSV-I HSV-2 RSVPI-885319420. 7 O870. 2 31100020000a药物治疗病毒(100μ g/mL)的病毒斑块数与模拟治疗对照组的病毒斑块数相比 的百分数表7.试验化合物的抗病毒活性和细胞毒性化合物 细胞毒性CC5Qa IC50 (选择指数CC5Q/IC5Q)bGMK AHl HEp-2 HSV-IHSV-2RSVPI-88 > 1000 > 400 7 ( > 143) 1. 1 ( > 909) 9. 9 ( > 40)4> 400 > 400 2. 1 ( > 190) 0. 9 ( > 444) 4. 6 ( > 87)11> 400 NT1.8( > 222) 0.9 ( > 444) 5.720110113 2.1(52) 1.1(100) 1.7(66)a可减少50 % GMK AHl或HEp_2细胞活力的化合物(μ g/mL)的浓度b减少50% GMK AHl细胞中HSV斑块或HEp_2细胞系中RSV斑块数量的试验化合 物浓度。括号中是选择指数的值。
表8.试验化合物的病毒灭活活性a病毒化合物浓度(yg/ml)化合物PI-88 420HSV-I100100.3 83.8 010108.0 79.4 0199.883.9 88.6HSV-2100107.7 68. 1 010102.9 97.5 0.3195.198.6 120.3RSV10094. 047. 3 13. 32095. 082. 2 79. 04105. 8 85. 2 102. 23在1 500或1 1000稀释混合物和病毒噬斑滴定之前，将大约2X IO5PFU的各 自病毒与PI_88(yg/mL)、试验化合物或稀释的培养基(对照)一起在37°C下共-孵育15 分钟。该结果是以化合物-处理病毒所检测到的病毒斑块数与模拟处理的对照组相比的百 分数来表示的。表9.试验化合物的抗-HSV活性化合物HSV-2 IC50(y g/ml)a RSV IC50(y g/ml)a241. 80. 45270. 520. 28330. 71.8391. 10. 61440. 410. 33480.180.25560. 30. 45600. 240. 39650. 450. 35700. 150. 25b0. 23760. 070. 20b0. 37790. 282. 9836. 03. 0870. 530. 77930. 270.4970. 260. 581020. 431. 81070. 431. 91120. 452.41192.10. 621281.0 1.4
a减少GMK AHl细胞中病毒斑块数量50%的试验化合物浓度。b减少GMK AHl细胞中HSV-1 K0S321菌株斑块数量50%的试验化合物浓度。表10.在低pH和存在人宫颈分泌物条件下PI-88和化合物20病毒灭活活性的调
幅3 病毒 化合物浓度化合物(μ g/ml) PI-8820低 pHb CSc低 pHb CScHSV-2 100111.5 90，3 0.0 0,310110.8 98，3 6.8 78，51101.1 88，4 93.7 82，6a在1 500或1 1000稀释和病毒噬斑滴定之前，将大约2 X IO5PFU的各自病 毒与PI-88 ( μ g/mL)、试验化合物或稀释的培养基(对照)一起在37°C下(水浴)共-孵 育15分钟。该结果是以化合物_处理病毒所检测到的病毒斑块数与模拟处理的对照组相 比的百分数来表示的。b病毒-化合物孵化期间的pH值是4. 5。e稀释1 2.2的宫颈分泌物出现在病毒-化合物的15分钟期间。参考文献1. Parish, C. R. ；Freeman, C. ；Brown, K. J. ；Francis, D. J. ；Cowden, W. B. Cancer Res.1999，59，3433.2. Parish, C. R. ；Cowden, W. B. US Patent 6，143，730，2000.3. Iversen, P. 0. ；Sorenson, D. R. ；Benestad, H. B. Leukemia 2002,16, 376.4. Joyce, J. A. ；Freeman, C. ；Meyer-Morse, N. ；Parish, C. R. ；Hanahan, D.Oncogene 2005，24，4037.5. Basche, M. ；Gustafson, D. L. ；Holden, S. N. ；0 ' Bryant, C. L. ；Gore, L.； ffitta, S. ；Schultz, Μ. K. ；Morrow, Μ. ；Levin, Α. ；Creese, B. R. ；Kangas, Μ. ；Roberts, K. ；Nguyen, Τ. ；Davis, K. ；Addison, R. S. ；Moore, J. C. ；Eckhardt, S. G. Clin. Cancer Res. 2006，12,5471.6. Ferro, V. ；Dredge, K. ；Liu, L. ；Hammond, E. ；Bytheway, I. ；Li, C. ；Johnstone, K. ；Karoli, Τ. ；Davis, K. ；Copeman, Ε. ；Gautam, Α. Semin. Thromb. Hemost. 2007, 33, 557.7. Ferro, V. ；Li, C. ；Fewings, K. ；Palermo, Μ. C. ；Linhardt, R. J. ；Toida, Τ. Carbohydr. Res. 2002，337，139.8. Yu, G. ；Gunay, N. S. ；Linhardt, R. J. ；Toida, Τ. ；Fareed, J. ；Hoppensteadt, D. Α. ；Shadid, H. ；Ferro, V. ；Li, C. ；Fewings, K. ；Palermo, Μ. C. ；Podger, D. Eur. J. Med. Chem. 2002，37，783.9. Cochran, S. ；Li, C. ；Fairweather, J. K. ；Kett, W. C. ；Coombe, D. R. ；Ferro, V. J. Med. Chem. 2003，46，4601.10. Vlodavsky, I. ；Friedmann, Y. J. Clin. Invest. 2001,108,341.11. Parish, C. R. ；Freeman, C. ；Hulett, Μ. D. Biochim. Biophys. Acta 2001,1471, M99.
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权利要求
一种通式化合物[X]n-Y-ZR1R2 I其中X和Y各自是单糖单元，其中不参与形成糖苷键的各个羟基独立地被SO3M或H所取代，其中M是任何可药用的阳离子；X和Y是任何D-或L-己糖或戊糖；Y是环状或开环形式；当Y是还原单糖时，Z是O、N、S或C或其更高的氧化态，或是一个键，和与端基碳相连；R1是选自包括烷基、烯基、炔基、芳基、杂烷基、杂芳基、酰基、芳酰基、烷基酰胺基、烷基硫酰胺基、三唑基的组的联结子，或是一个键；R2是选自包括胆甾醇基、胆甾烷基、胆酸、脱氧胆酸、直链烷基、支链烷基、取代烷基、直链酰基、支链酰基、取代酰基的组的一个亲脂部分；n是0-6的整数；每个化合物的硫酸化程度为总羟基的70至100％，其中当R1是一个键时，则R2不为甘草次酸或其衍生物；当R1是一个键，和n＝0或1，和Z是S时，则R2不为C8或C18直链烷基；当n是3-6，和R1是一个键，及X和Y是α(1→4)连接的葡萄糖时，则R2不为C12至C18直链烷基；当n是3-5，和R1是一个键，及X和Y是β(1→3)-连接的葡萄糖时，则R2不为C4至C12直链烷基或胆甾醇基；和当X和Y是核糖，和R1是一个键时，则R2不为C18基团。
2.如权利要求1所述的化合物，其中R2是胆留烷基。
3.如权利要求1所述的化合物，其中R2是丙基硬脂酰胺。
4.如权利要求1-3中任意一项所述的化合物，其中R1是氧甲基[1，2，3]_三唑-1-基联结子。
5.一种选自由30-胆甾烷基2，3，4，6_四-0-磺酸钠-a-D-吡喃葡萄糖 基-(1 — 4)-2，3，6_三-0-磺酸钠-a-D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4)_2，3，6_三_0_磺酸 钠- a -D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4)-2，3，6-三_0_磺酸钠-D-吡喃葡萄糖苷(化合物 65) ；4-(胆甾烷-3-基-氧甲基)[1，2，3]三唑-1-基2，3，4，6_四_0_磺酸钠-a-D-口比 喃葡萄糖基_ (1 — 4) -2，3，6-三-0-磺酸钠-a _D_吡喃葡萄糖基-(1 — 4) 脱氧_2，3， 6-三-0-磺酸钠-3 -D-吡喃葡萄糖苷(化合物70) ;4_ (胆甾烷-3 0 -基-氧甲基)[1，2， 3]三唑-1-基2，3，4，6-四-0-磺酸钠-a _D_吡喃葡萄糖基-(1 — 4) _2，3，6-三-0-磺 酸钠-a -D-吡喃葡萄糖基_ (1 — 4) -1-脱氧-2，3，6-三_0_磺酸钠-3 _D_吡喃葡萄糖苷 (化合物76) ;3 0 -胆甾烷基2，3，4，6-四-0-磺酸钠-a -D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4) -2，3， 6-三-0-磺酸钠-a -D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4) -2，3，6-三-0-磺酸钠-3 _D_吡喃葡萄糖 苷(化合物87) ；3-硬酯酰胺丙基2，3，4，6-四-0-磺基-a -D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4) -2， 3，6-三-0-磺基-a-D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4)-2，3，6-三-0-磺基-0-0_吡喃葡萄 糖苷，十钠盐(化合物123)；和3-硬酯酰胺丙基2，3，4，6_四_0_磺基-a-D-卩比喃葡 萄糖基-(1 — 4)-2，3，6-三-0-磺基-a-D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4) _2，3，6_三_0_磺基-a -D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4) -2，3，6-三_0_磺基-0 _D_吡喃葡萄糖苷，十三钠盐(化 合物128)组成的组中的化合物。
6.一种用于预防或治疗哺乳动物受试者的由血管生成、转移、发炎、凝血/血栓形成、 血液甘油三酯浓度升高、微生物感染和/或心血管疾病引起的病症的药物或兽药组合物， 所述组合物包含至少一种如权利要求1或权利要求5所述的化合物和一种用于至少一种所 述化合物的可药用或兽用的载体或稀释剂。
7.如式II所示的化合物在用于生产预防或治疗哺乳动物受试者的由血管生成、转移、 发炎、凝血/血栓形成、血液甘油三酯浓度升高、微生物感染和/或心血管疾病引起的病症 的药物中的用途[XJ^Y-ZR'R2 II 其中X和Y各为一个单糖单元，其中不参与形成糖苷键的各个羟基独立地被S03M或H所取 代，其中M是任何可药用的阳离子； X和Y是任何D-或L-己糖或戊糖； Y是环状或开环的形式；当Y是还原单糖时，Z是0、N、S或C或其更高的氧化态，或是一个键，和与端基碳相连； R1是选自烷基、烯基、炔基、芳基、杂烷基、杂芳基、酰基、芳酰基、烷基酰胺基、烷基硫酰 胺基、三唑基的联结子，或是一个键；R2是选自胆留醇基、胆留烷基、胆酸、脱氧胆酸、直链烷基、支链烷基、取代烷基、直链酰 基、支链酰基、取代酰基的亲脂部分； n是0-6的整数；和各个化合物的硫酸化程度为总羟基的70至100%。
8.一种预防或治疗哺乳动物受试者的由血管生成、转移、发炎、凝血/血栓形成、血液 甘油三酯浓度升高、微生物感染和/或心血管疾病引起的病症的方法，其中所述方法包含 给予受试者有效量的至少一种如式II的化合物，或包含至少一种所述化合物的组合物[XJ^Y-ZR'R2 II 其中X和Y各为一个单糖单元，其中不参与形成糖苷键的各个羟基独立地被S03M或H所取 代，其中M是任何可药用的阳离子； X和Y是任何D-或L-己糖或戊糖； Y是环状或开环的形式；当Y是还原单糖时，Z是0、N、S或C或其更高的氧化态，或是一个键，和与端基碳相连； R1是选自烷基、烯基、炔基、芳基、杂烷基、杂芳基、酰基、芳酰基、烷基酰胺基、烷基硫酰 胺基、三唑基的联结子，或是一个键；R2是选自胆留醇基、胆留烷基、胆酸、脱氧胆酸、直链烷基、支链烷基、取代烷基、直链酰 基，支链酰基、取代酰基的亲脂部分； n是0-6的整数；和各个化合物的硫酸化程度为总羟基的70至100%。
9.如权利要求7所述的用途或如权利要求8所述的方法，其中所述的化合物选自， 3 3 -胆甾烷基2，3，4，6-四-0-磺酸钠-a _D_吡喃葡萄糖基-(1 — 4) _2，3，6_三_0_磺酸 钠-a -D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4) -2，3，6-三-0-磺酸钠-a _D_吡喃葡萄糖基-(1 — 4) _2， 3，6_三-0-磺酸钠-3-D-卩比喃葡萄糖苷(化合物65) ；4-(胆甾烷-3-基-氧甲基) [1,2,3]三唑-1-基，2，3，4，6_四-0-磺酸钠-a-D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4)_2，3， 6-三-0-磺酸钠-a -D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4) -1-脱氧-2，3，6-三-0-磺酸钠-3 _D_吡 喃葡萄糖苷(化合物70) ；4-(胆甾烷-30-基-氧甲基)[1，2，3]三唑-1-基2，3，4， 6-四-0-磺酸钠-a -D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4) -2，3，6-三-0-磺酸钠-a _D_吡喃葡萄糖 基-(1 —4)-1_脱氧_2，3，6_三-0-磺酸钠-3-D-卩比喃葡萄糖苷(化合物76) ；30-胆甾烷 基2，3，4，6-四-0-磺酸钠-a _D_吡喃葡萄糖基-(1 — 4) _2，3，6_三-0-磺酸钠-a _D_吡 喃葡萄糖基-(1 — 4)-2，3，6-三-0-磺酸钠-3-D-吡喃葡萄糖苷(化合物87) ；3-硬酯酰 胺丙基2，3，4，6-四-0-磺基-a _D_吡喃葡萄糖基_ (1 — 4) _2，3，6_三_0_磺基-a _D_吡 喃葡萄糖基-(1— 4)-2，3，6-三-0-磺基-3-D-吡喃葡萄糖苷，十钠盐(化合物123)；和 3-硬酯酰胺丙基2，3，4，6-四-0-磺基-a-D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4) _2，3，6_三_0_磺 基-a-D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4)-2，3，6-三-0-磺基-a-D-吡喃葡萄糖基_(1 — 4)_2， 3，6-三-0-磺基-0 -D-吡喃葡萄糖苷，十三钠盐(化合物128)。
全文摘要
本发明涉及具有作为硫酸乙酰肝素-结合蛋白的抑制剂作用的新的化合物；包含所述化合物的组合物，和所述化合物及其组合物在用于治疗哺乳动物受试者抗血管生成、防转移、抗炎、抗微生物、抗凝和/或抗血栓形成中的用途。
文档编号A61K31/702GK101874035SQ200880116727
公开日2010年10月27日 申请日期2008年10月16日 优先权日2007年10月16日
发明者E·T·哈蒙德, K·D·约翰斯通, N·韦默, P·N·汉德雷, T·卡洛丽, V·费尔罗, 刘立功 申请人:普罗吉恩制药有限公司