单独使用parp抑制剂或与其他抗肿瘤剂组合治疗乳腺癌的制作方法

专利名称：单独使用parp抑制剂或与其他抗肿瘤剂组合治疗乳腺癌的制作方法
单独使用PARP抑制剂或与其他抗肿瘤剂组合治疗乳腺癌交叉参考本申请书要求下列的优先权于2007年11月12日提交的题为“Treatment of Triple Negative Metastatic Breast Cancer with a Combination of an Antimetabolite, a Platinum Complex, and a PARP Inhibitor"白勺 _ Bl Bi _ if 60/987，333 (律师卷宗号 28825-742. 101)；于 2007 年 12 月 7 日提交的题为“Treatment of Cancer with Combination of Topoisomerase Inhibitors and PARPInhibitors，，的美国 临时申请61/012，364 (律师卷宗号28825-747. 101)；以及于2008年6月3日提交的题为 “Treatment of Breast,Ovarian,and UterineCancer with a PARP Inhibitor，，的美国临 时申请61/058，528 (律师卷宗号28825-757. 101)，以上每份申请均在此引入作为参考。
背景技术：
癌症是一类以细胞生长失控为特征的疾病。仅美国而言，癌症的年发病率估计已 超过130万。尽管治疗癌症采用了手术、放疗、化疗和激素，但在美国癌症仍然是导致死亡 的第二大原因。据估计，每年有560，000余名美国人死于癌症。癌细胞同时激活数条通路，它们正向和负向调节细胞生长和细胞死亡。这一特点 表明，细胞死亡和生存信号的调节可为改善目前的化疗疗效提供新战略。乳腺癌一般是以手术和辅助性治疗相结合来治疗的。手术是为了移除癌性病变， 而辅助性治疗(放疗、化疗或两者结合)是为了攻击手术后任何可能残留的癌细胞。乳腺癌 可根据激素受体(HR)是否存在而大致地分类。激素受体阳性(HR+)癌症的特征是雌性激 素受体一雌激素受体(ER)的表达或孕酮受体(PR)的表达，或它们两者的同时表达。ER+乳 腺癌的辅助性治疗通常包括用选择性雌激素受体调节剂(SERM)如他莫昔芬或雷洛昔芬化 疗。不幸的是，虽然大约70%乳腺癌是ER阳性，但其余30%的HR阴性乳腺癌不宜用SERM 治疗。因此，对于ER阴性乳腺癌尝试了其他辅助化疗，例如用蒽环类抗生素(单独或与紫 杉烷结合)治疗。基于对心脏毒性的担心，蒽环类抗生素治疗受到终身剂量极限的限制。对于转移 性乳腺癌患者，无论是首次使用紫杉烷还是曾受过紫杉烷预治疗，用吉西他滨和卡钼的治 疗是惯用的组合化疗。对于基底样局部晚期乳腺癌，钼类药物显示了很有希望的抗肿瘤活 性。对于基底样乳腺癌，由于这类乳腺癌固有的DNA修复途径中的缺陷，DNA损伤剂具有可 观的抗肿瘤疗效。尽管有如吉西他滨的抗代谢药物和如卡钼的钼络合物可供利用，尚没有可接受的 ER阴性乳腺癌护理标准。尤其是，三重阴性转移性乳腺癌(即ER阴性、和/或冊阴性、和 /或人表皮生长因子受体2(HER2)阴性的乳腺癌)是难以用标准治疗方法治疗的，而SERM 化疗则完全不起作用。因此，对于癌症，尤其是三重阴性转移性乳腺癌，需要有有效的治疗 方法。虽然对于癌症存在着一些有限的治疗选择，但癌症的各种变型，包括三重阴性乳 腺癌，是尤其难以治疗的，因为它们是难以用标准的化疗或激素疗法治愈的。因此，对于癌 症，尤其是癌症的各种变型，需要有一种有效的治疗方法。
发明概述在一些实施方案中，本发明提供了治疗患者ER、ra或HER2中至少一种呈阴性的 乳腺癌的方法，包括向患者给药至少一种PARP抑制剂。在一些实施方案中，本发明提供了 在需要治疗的患者中治疗ER、ra或HER2中至少一种呈阴性的乳腺癌的方法，包括(a)从 患者获取样品；(b)测试该样品以确定以下每一项该癌症是ER阳性还是ER阴性；该癌症 是ra阳性还是ra阴性；该癌症是HER2阳性还是HER2阴性；(c)如果测试表明该癌症对 ER、PR或HER2中至少一种呈阴性，则使用至少一种PARP抑制剂治疗患者。在一些实施方 案中，如果满足下列两种或两种以上条件，则该方法进一步包括使用至少一种PARP抑制剂 治疗患者(a)该癌症呈ER阴性，(b)该癌症呈冊阴性，(c)该癌症呈HER2阴性。在一些 实施方案中，本发明提供了治疗患者ER、冊或HER2中至少一种呈阴性的乳腺癌的方法，包 括(a)测试取自患者的样品的PARP表达；以及(b)如果PARP表达超过预定水平，则向患 者给药至少一种PARP抑制剂。在本文所公开的任何一种方法的实施过程中，获得了至少一种治疗效果，所述的 至少一种治疗效果是乳腺肿瘤尺寸缩小、转移减少、完全缓解、部分缓解、病情稳定，或病理 学完全应答。在一些实施方案中，与抗肿瘤剂治疗相比较，用PARP抑制剂的治疗达到了与 之相当的临床受益率(CBR = CR+PR+SD > 6个月)。在一些实施方案中，与单独用抗肿瘤 剂的治疗相比，临床受益率的改善为至少约30%。在一些实施方案中，PARP抑制剂是一种 PARP-I抑制剂。在一些实施方案中，该PARP-I抑制剂是4-碘-3-硝基苯甲酰胺或其代谢 产物。在一些实施方案中，该PARP抑制剂为式(IIa)或其代谢产物
O
Il
C-NH2
R3
(IIa)
式(IIa)
其中，(I)VHR4和R5取代基中至少有一个取代基总是含硫取代基，其余的取 代基RpRyRyR4和R5独立地选自氢、羟基、氨基、硝基、碘、溴、氟、氯、(C1-C6)烷基、(C1-C6) 烷氧基、(C3-C7)环烷基以及苯基，其中RpRyRyR4和R5这5个取代基中至少有两个取代基 总是氢；或者(2)礼、R2, R3、R4和R5取代基中至少有一个取代基不是含硫取代基，且礼、R2、 R3、R4和R5这5个取代基中至少有一个取代基总是碘，且其中所述碘总是与作为硝基、亚硝 基、羟基氨基、羟基或氨基的礼、&、1 3、1 4或1 5基团相邻；及其药学上可接受的盐、溶剂合物、 异构体、互变异构体、代谢产物、类似物、或前药。在一些实施方案中，在(2)的化合物中，碘 基总是与作为亚硝基、羟基氨基、羟基或氨基的礼、R2、R3、R4或R5取代基相邻。在一些实施 方案中，在⑵的化合物中，碘基总是与作为亚硝基、羟基氨基或氨基的队、1 2、1 3、1 4或1 5取 代基相邻。 在一些实施方案中，乳腺癌是转移性乳腺癌。在一些实施方案中，乳腺癌处于I
13期、II期或III期。在一些实施方案中，乳腺癌对于ER、ra或HER2中至少一种呈阴性。在 一些实施方案中，乳腺癌对于ER、冊或HER2中至少一种呈阴性；且其中乳腺癌对于ER、 冊或HER2中至少一种呈阳性。在一些实施方案中，乳腺癌是同源重组DNA修复缺陷型。 在一些实施方案中，乳腺癌具有损伤的BRCAl或BRCA2功能。在一些实施方案中，治疗包 括为期至少11天的治疗周期，其中在该治疗周期的第1、4、8和11天，患者接受约1至约 100mg/kg的4-碘-3-硝基苯甲酰胺或其摩尔含量相当的代谢产物。在一些实施方案中， 4-碘-3-硝基苯甲酰胺是以口服、胃肠外注射或输注、或吸入给药。在一些实施方案中，治 疗周期为约11天至约30天。在一些实施方案中，该方法进一步包括向患者给药PARP抑制 剂与至少一种抗肿瘤剂组合。抗肿瘤剂是抗肿瘤烷化剂、抗肿瘤抗代谢剂、抗肿瘤抗生素、 植物来源的抗肿瘤剂、抗肿瘤钼络合物、抗肿瘤喜树碱衍生物、抗肿瘤酪氨酸激酶抑制剂、 单克隆抗体、干扰素、生物反应调节剂、激素型抗肿瘤剂、抗肿瘤病毒剂、血管生成抑制剂、 分化诱导剂、PI3K/mT0R/AKT抑制剂、细胞周期抑制剂、细胞凋亡抑制剂、hsp 90抑制剂、微 管蛋白抑制剂、DNA修复抑制剂、抗血管生成剂、受体酪氨酸激酶抑制剂、拓扑异构酶抑制 剂、紫杉烷、靶向Her-2的药物、激素拮抗剂、靶向生长因子受体的药物，或其药学上可接受 的盐。在一些实施方案中，抗肿瘤剂是西他滨(citabine)、卡培他滨(capecitabine)、瓦洛 他滨(valopicitabine)或吉西他滨(gemcitabine)。在一些实施方案中，该抗肿瘤剂选自 Avastin (贝伐单抗)、Sutent (舒尼替尼)、Nexavar (索拉非尼)、Recentin (西地尼布)、 ABT-869、Axitinib (阿西替尼)、伊立替康(Irinotecan)、拓扑替康(topotecan)、紫杉醇、 多西紫杉醇、拉帕替尼、曲妥单抗(赫赛汀)、拉帕替尼、他莫昔芬、类固醇芳香酶抑制剂、 非类固醇芳香酶抑制剂、氟维司群、表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂、西妥昔单抗、帕尼单 抗、胰岛素样生长因子1受体(IGFlR)抑制剂，以及CP-751871。在一些实施方案中，该方 法进一步包括向患者给药PARP抑制剂与一种以上抗肿瘤剂组合。在一些实施方案中，抗肿 瘤剂是在给药PARP抑制剂之前、同时或之后给药。在一些实施方案中，该方法进一步包括 手术、放射治疗、化学治疗、基因治疗、DNA治疗、病毒治疗、RNA治疗、DNA治疗、辅助性治疗、 新辅助性治疗、免疫治疗、纳米治疗或其组合。在一些实施方案中，该方法进一步包括向患 者给药PARP抑制剂与γ辐射组合。在一些实施方案中，该样品是组织或体液样品。在一 些实施方案中，该样品是肿瘤样品、血液样品、血浆样品、腹膜液样品、渗出液(exudate)或 积液(effusion)。在一些实施方案中，该方法进一步包括以取自患者的样品测定雌激素受 体、孕酮受体或人表皮生长因子2受体的表达。 在一些实施方案中，本发明提供了治疗患者乳腺癌的方法，包括向患者给药至少 一种PARP抑制剂与至少一种抗肿瘤剂组合。在一些实施方案中，本发明提供了在需要治疗 的患者中治疗乳腺癌的方法，包括(a)从患者获取样品；(b)测试该样品以确定以下每一 项该癌症是ER阳性还是ER阴性；该癌症是冊阳性还是冊阴性；该癌症是HER2阳性还 是HER2阴性；(c)如果测试表明该癌症对ERJR或HER2中至少一种呈阴性，则使用治疗剂 的组合治疗患者，其中治疗剂包括至少一种PARP抑制剂和至少一种抗肿瘤剂。在一些实施 方案中，其中如果满足以下两种或两种以上条件，则该方法进一步包括用治疗剂的组合治 疗患者，治疗剂包括至少一种PARP抑制剂和至少一种抗肿瘤剂(a)该癌症呈ER阴性，(b) 该癌症呈I3R阴性，(c)该癌症呈HER2阴性。在一些实施方案中，本发明提供了治疗患者乳 腺癌的方法，包括(a)测试取自患者的样品的PARP表达；以及(b)如果PARP表达超过预定水平，则向患者给药至少一种PARP抑制剂和至少一种抗肿瘤剂。在本文所公开的任何一种方法的实施过程中，在一些实施方案中获得了至少一种 治疗效果，所述至少一种治疗效果是乳腺肿瘤尺寸缩小、转移减少、完全缓解、部分缓解、病 情稳定，或病理学完全应答。在一些实施方案中，与使用抗肿瘤剂但不用PARP抑制剂进行 治疗相比较，临床受益率(CBR = CR+PR+SD > 6个月)得到改善。在一些实施方案中，临床 受益率的改善为至少约60%。在一些实施方案中，该PARP抑制剂是4-碘-3-硝基苯甲酰 胺或其代谢产物。在一些实施方案中，该PARP抑制剂为式(IIa)或其代谢产物
式(IIa)
其中=(I)VHR4和R5取代基中至少有一个取代基总是含硫取代基，其余的取 代基RpRyRyR4和R5独立地选自氢、羟基、氨基、硝基、碘、溴、氟、氯、(C1-C6)烷基、(C1-C6) 烷氧基、(C3-C7)环烷基以及苯基，其中RpRyRyR4和R5这5个取代基中至少有两个取代基 总是氢；或者(2)礼、R2, R3、R4和R5取代基中至少有一个取代基不是含硫取代基，且礼、R2、 R3、R4和R5这5个取代基中至少有一个取代基总是碘，且其中所述碘总是与作为硝基、亚硝 基、羟基氨基、羟基或氨基的礼、&、1 3、1 4或1 5基团相邻；及其药学上可接受的盐、溶剂合物、 异构体、互变异构体、代谢产物、类似物、或前药。在一些实施方案中，在(2)的化合物中，碘 基总是与作为亚硝基、羟基氨基、羟基或氨基的礼、R2、R3、R4或R5基团相邻。在一些实施方 案中，在(2)的化合物中，碘基总是与作为亚硝基、羟基氨基或氨基的Ri、R2、R3、R4或R5基 团相邻。 在一些实施方案中，抗肿瘤剂是抗肿瘤烷化剂、抗肿瘤抗代谢剂、抗肿瘤抗生素、 植物来源的抗肿瘤剂、抗肿瘤钼络合物、抗肿瘤喜树碱衍生物、抗肿瘤酪氨酸激酶抑制剂、 单克隆抗体、干扰素、生物反应调节剂、激素型抗肿瘤剂、抗肿瘤病毒剂、血管生成抑制剂、 分化诱导剂、PI3K/mT0R/AKT抑制剂、细胞周期抑制剂、细胞凋亡抑制剂、hsp 90抑制剂、微 管蛋白抑制剂、DNA修复抑制剂、抗血管生成剂、受体酪氨酸激酶抑制剂、拓扑异构酶抑制 剂、紫杉烷、靶向Her-2的药物、激素拮抗剂、靶向生长因子受体的药物，或其药学上可接受 的盐。在一些实施方案中，抗肿瘤剂是西他滨、卡培他滨、瓦洛他滨或吉西他滨。在一些实施 方案中，该抗肿瘤剂选自Avastin (贝伐单抗)、Sutent (舒尼替尼)、NeXaVar (索拉非尼)、 Recentin (西地尼布)、ABT-869、Axitinib (阿西替尼)、伊立替康、拓扑替康、紫杉醇、多西 紫杉醇、拉帕替尼、赫赛汀、拉帕替尼、他莫昔芬、类固醇芳香酶抑制剂、非类固醇芳香酶抑 制剂、氟维司群、表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂、西妥昔单抗、帕尼单抗、胰岛素样生长 因子1受体(IGFlR)抑制剂，以及CP-751871。在一些实施方案中，该方法进一步包括手术、 放射治疗、化学治疗、基因治疗、DNA治疗、病毒治疗、DNA治疗、辅助性治疗、新辅助性治疗、RNA治疗、免疫治疗、纳米治疗或其组合。在一些实施方案中，该方法进一步包括向患者给药 PARP抑制剂与γ辐射组合。在一些实施方案中，乳腺癌是转移性乳腺癌。在一些实施方案中，乳腺癌处于I 期、II期或III期。在一些实施方案中，乳腺癌是HR阴性乳腺癌。在一些实施方案中，乳腺 癌对于ER、PR或HER2中至少一种呈阴性。在一些实施方案中，乳腺癌对于ER、PR或HER2 中至少一种呈阴性；且其中乳腺癌对于ER、冊或HER2中至少一种呈阳性。在一些实施方 案中，乳腺癌是同源重组DNA修复缺陷型。在一些实施方案中，乳腺癌具有损伤的BRCAl或 BRCA2功能。在一些实施方案中，治疗包括至少11天的治疗周期，其中(a)在该周期的第1 天和第8天，患者接受约100-5000mg/m2的吉西他滨；(b)在该周期的第1天和第8天，患者 接受约10至约400mg/m2的卡钼；以及(c)在该周期的第1、4、8和11天，患者接受约1至约 100mg/kg的4-碘-3-硝基苯甲酰胺或其摩尔含量相当的代谢产物。在一些实施方案中，治 疗周期为约11天至约30天。在一些实施方案中，在该周期的第1天和第8天，患者接受约 100-2，500mg/m2的吉西他滨和约10至约400mg/m2的卡钼；以及在该周期的第1、4、8和11 天，患者接受约1至约50mg/kg的4-碘-3-硝基苯甲酰胺或其摩尔含量相当的代谢产物。 在一些实施方案中，在该周期的第1天和第8天，患者接受约500-2000mg/m2的吉西他滨和 约50至约400mg/m2的卡钼；以及在该周期的第1、4、8和11天，患者接受约1至约50mg/kg 的4-碘-3-硝基苯甲酰胺或其摩尔含量相当的代谢产物。在一些实施方案中，在该周期的 第1天和第8天，患者接受约lOOOmg/m2的吉西他滨和约AUC 2的卡钼；以及在该周期的第 1、4、8 和 11 天，患者接受约 1、2、3、4、6、8 或 10、12、14、16、18 或 20mg/kg 的 4-碘 _3_ 硝基 苯甲酰胺。在一些实施方案中，抗肿瘤剂是以胃肠外注射或输注的方式给药。在一些实施方 案中，PARP抑制剂是4-碘-3-硝基苯甲酰胺，它是以口服、或胃肠外注射或输注、或吸入给 药。在一些实施方案中，该方法进一步包括以胃肠外注射或输注的方式向患者给药紫杉烷。 在一些实施方案中，该样品是组织或体液样品。在一些实施方案中，该样品是肿瘤样品、血 液样品、血浆样品、腹膜液样品、渗出液或积液。在一些实施方案中，该方法进一步包括以取 自患者的样品测定雌激素受体、孕酮受体或人表皮生长因子2受体的表达。参考文件引用本说明书中提及的所有出版物和专利申请均通过引用而引入本文，就好像每一篇 出版物或专利申请书都被明确地和单独地如此表明一样。附图的简要说明在所附的权利要求书中具体地阐明了本发明的新颖特点。通过参阅以下关于运用 本发明原理的具体实施方案的详细说明以及附图，将能更好地理解本发明的特征和优点

图1显示人类原发性癌症中PARPl基因表达的上调。水平线，中位PARPl表达 ’方 框，四分位区间(interquartile range)；长条，标准差。图2显示4-碘-3-硝基苯甲酰胺加卡钼或吉西他滨对体外TNBC (三重阴性转移 乳腺癌)细胞周期进程的影响。MDA-MB-463 TNBC细胞的存活率用FACS(荧光激活细胞分 选仪)分析定量。图3显示接受4-碘-3-硝基苯甲酰胺治疗的患者的外周单核血细胞(PMBC)中 PARP的抑制。图4显示转移性TNBC 二期试验的人乳腺癌肿瘤样品的PARPl、ER、ra和HER2的表达图谱。数据相对于葡糖醛酸糖苷酶基因表达进行归一化。数据代表了 50个临床乳 腺癌样品和19个正常乳腺样品的分析。垂直线代表中位基因表达，方框代表四分位区间。图5显示了转移性TNBC患者的PFS(无病情进展的存活)Kaplan-Meier曲线，以 4-碘-3-硝基苯甲酰胺加吉西他滨/卡钼治疗与单独用吉西他滨/卡钼治疗相比较。采 用Kaplan-Meier法总结了两个治疗分组的PFS分布。采用双侧对数秩检验法(log-rank)， 5%的显著性水平，比较了两个分组的数据。G/C，吉西他滨/卡钼；G/C+BA，吉西他滨/卡钼 +4-碘-3-硝基苯甲酰胺(BA)。图6显示，在人类三重阴性MDA-MB-468乳腺癌细胞中，4_碘_3_硝基苯甲酰胺 (BA)加强了 S-和G2/M细胞周期停滞，并增强了 γ辐射的抗增殖作用。详细说明在一些实施方案中，本发明提供了治疗患者ERJR或HER2中至少一种呈阴性的乳 腺癌的方法，包括向患者给药至少一种PARP抑制剂。在一些实施方案中，获得了至少一种 治疗效果，所述的至少一种治疗效果是乳腺肿瘤尺寸缩小、转移减少、完全缓解、部分缓解、 病理学完全应答或病情稳定。在一些实施方案中，与抗肿瘤剂治疗相比较，用PARP抑制剂 的治疗达到了与之相当的临床受益率(CBR = CR+PR+SD彡6个月)。在一些实施方案中，临 床受益率的改善为至少约30%。在一些实施方案中，PARP抑制剂是PARP-I抑制剂。在一 些实施方案中，该PARP抑制剂为式(IIa)或其代谢产物
式(IIa)
其中=(I)VHR4和R5取代基中至少有一个取代基总是含硫取代基，其余的取 代基RpRyRyR4和R5独立地选自氢、羟基、氨基、硝基、碘、溴、氟、氯、(C1-C6)烷基、(C1-C6) 烷氧基、(C3-C7)环烷基以及苯基，其中RpRyRyR4和R5这5个取代基中至少有两个取代基 总是氢；或者(2)礼、R2, R3、R4和R5取代基中至少有一个取代基不是含硫取代基，且礼、R2、 R3、R4和R5这5个取代基中至少有一个取代基总是碘，且其中所述碘总是与作为硝基、亚硝 基、羟基氨基、羟基或氨基的Ri、R2、R3、R4或R5取代基相邻；及其药学上可接受的盐、溶剂合 物、异构体、互变异构体、代谢产物、类似物、或前药。在一些实施方案中，在(2)的化合物 中，碘基总是与作为亚硝基、羟基氨基、羟基或氨基的札、R2、R3、R4或R5基团相邻。在一些 实施方案中，在(2)的化合物中，碘基总是与作为亚硝基、羟基氨基或氨基的RpRpRyR4或 R5基团相邻。在一些实施方案中，该PARP-I抑制剂是4-碘-3-硝基苯甲酰胺或其代谢产 物。 在一些实施方案中，乳腺癌是转移性乳腺癌。在一些实施方案中，乳腺癌处于I 期、II期或III期。在一些实施方案中，乳腺癌对于ER、ra或HER2中至少一种呈阴性。在一些实施方案中，乳腺癌对于ER、ra或HER2中至少一种呈阴性；且乳腺癌对于ER、I3R或 HER2中至少一种呈阳性。在一些实施方案中，乳腺癌是ER阴性乳腺癌。在一些实施方案 中，乳腺癌呈ER阴性和HER2阳性。在一些实施方案中，乳腺癌呈ER阴性和冊阳性。在一 些实施方案中，乳腺癌呈ER阴性以及同时呈HER2阳性和冊阳性。在一些实施方案中，乳 腺癌是I3R阴性乳腺癌。在一些实施方案中，乳腺癌呈I3R阴性和ER阳性。在一些实施方案 中，乳腺癌呈I3R阴性和HER2阳性。在一些实施方案中，乳腺癌呈I3R阴性以及同时呈ER阳 性和HER2阳性。在一些实施方案中，乳腺癌是HER2阴性乳腺癌。在一些实施方案中，乳腺 癌呈HER2阴性和ER阳性。在一些实施方案中，乳腺癌呈HER2阴性和冊阳性。在一些实 施方案中，乳腺癌呈HER2阴性以及同时呈ER阳性和冊阳性。在一些实施方案中，乳腺癌 呈ER阴性和I3R阴性。在一些实施方案中，乳腺癌呈ER阴性、PR阴性和HER2阳性。在一 些实施方案中，乳腺癌呈ER阴性和HER2阴性。在一些实施方案中，乳腺癌呈ER阴性、HER2 阴性和I3R阳性。在一些实施方案中，乳腺癌呈I3R阴性和HER2阴性。在一些实施方案中， 乳腺癌呈I3R阴性、HER2阴性和ER阳性。在一些实施方案中，乳腺癌呈ER阴性、PR阴性和 HER2阴性。在一些实施方案中，乳腺癌是同源重组DNA修复缺陷型。在一些实施方案中，治疗包括至少11天的治疗周期，在该治疗周期的第1、4、8和 11天，患者接受约1至约100mg/kg的4-碘-3-硝基苯甲酰胺或其摩尔含量相当的代谢产 物。在一些实施方案中，4-碘-3-硝基苯甲酰胺是以口服、胃肠外注射或输注、或吸入给药。 在一些实施方案中，治疗周期为约11天至约30天。在一些实施方案中，该方法进一步包括向患者给药PARP抑制剂与至少一种抗肿 瘤剂组合。该抗肿瘤剂是抗肿瘤烷化剂、抗肿瘤抗代谢剂、抗肿瘤抗生素、植物来源的抗肿 瘤剂、抗肿瘤有机钼化合物、抗肿瘤喜树碱衍生物、抗肿瘤酪氨酸激酶抑制剂、单克隆抗体、 干扰素、生物反应调节剂、激素型抗肿瘤剂、抗肿瘤病毒剂、血管生成抑制剂、分化诱导剂， 或其他显示抗肿瘤活性的药物，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，抗肿瘤剂是西 他滨、卡培他滨、瓦洛他滨或吉西他滨。在一些实施方案中，该抗肿瘤剂是钼络合物。在一 些实施方案中，该方法进一步包括向患者给药PARP抑制剂与一种以上抗肿瘤剂组合。该抗 肿瘤剂是在给药PARP抑制剂之前、同时或之后给药。在一些实施方案中，该方法进一步包 括向患者给药PARP抑制剂与抗血管生成剂如Avastin(贝伐单抗)组合。在一些实施方 案中，该方法进一步包括向患者给药PARP抑制剂与拓扑异构酶抑制剂如伊立替康或拓扑 替康组合。在一些实施方案中，该方法进一步包括向患者给药PARP抑制剂与紫杉烷如紫杉 醇或多西紫杉醇组合。在一些实施方案中，该方法进一步包括向患者给药PARP抑制剂与靶 向Her-2的药物如曲妥单抗(赫赛汀)组合。在一些实施方案中，该方法进一步包括向患 者给药PARP抑制剂与激素治疗剂如激素拮抗剂他莫昔芬组合。在一些实施方案中，该方法 进一步包括向患者给药PARP抑制剂与靶向生长因子受体的药物，包括表皮生长因子受体 (EGFR)和胰岛素样生长因子I(IGF-I)受体(IGFlR)抑制剂组合。在一些实施方案中，该方 法进一步包括向患者给药PARP抑制剂与γ辐射组合。在一些实施方案中，该方法进一步 包括手术、放射治疗、化学治疗、基因治疗、DNA治疗、辅助性治疗、新辅助性治疗、RNA治疗、 DNA治疗、病毒治疗、免疫治疗、纳米治疗或其组合。本文叙述的一些实施方案提供了治疗患者乳腺癌的方法，包括向患者给药至少一 种PARP抑制剂和至少一种抗肿瘤剂。在一些实施方案中，获得了至少一种治疗效果，所述至少一种治疗效果是乳腺肿瘤尺寸缩小、转移减少、完全缓解、部分缓解、病理学完全应答 或病情稳定。在一些实施方案中，与用抗代谢剂和钼络合物但不用PARP抑制剂进行治疗相 比较，临床受益率(CBR = CR+PR+SD > 6个月)得到改善。在一些实施方案中，临床受益率 的改善为至少约60%。在一些实施方案中，该PARP抑制剂是苯甲酰胺或其代谢产物。在一 些实施方案中，该苯甲酰胺是4-碘-3-硝基苯甲酰胺或其代谢产物。在一些实施方案中，该 钼络合物选自顺钼、卡钼、草酸钼(oxaplatin)和奥沙利钼。在一些实施方案中，该钼络合 物是卡钼。在一些实施方案中，该抗代谢剂是西他滨。在一些实施方案中，该抗代谢剂选自 西他滨、卡培他滨、吉西他滨或瓦洛他滨。在一些实施方案中，该抗代谢剂是吉西他滨。在 一些实施方案中，该方法进一步包括向患者给药紫杉烷。在一些实施方案中，该紫杉烷是紫 杉醇或多西紫杉醇。在一些实施方案中，乳腺癌是转移性乳腺癌。在一些实施方案中，乳腺 癌处于I期、II期或III期。在一些实施方案中，乳腺癌是HR阴性乳腺癌。在一些实施方 案中，乳腺癌对于ER、I3R或HER2中至少一种呈阴性。在一些实施方案中，乳腺癌对于ER、 PR或HER2中至少一种呈阴性；且乳腺癌对于ERJR或HER2中至少一种受体呈阳性。在一 些实施方案中，乳腺癌是HR阴性乳腺癌。在一些实施方案中，乳腺癌是ER阴性乳腺癌。在 一些实施方案中，乳腺癌呈ER阴性和HER2阳性。在一些实施方案中，乳腺癌呈ER阴性和 I3R阳性。在一些实施方案中，乳腺癌呈ER阴性以及同时呈HER2阳性和I3R阳性。在一些实 施方案中，乳腺癌是I3R阴性乳腺癌。在一些实施方案中，乳腺癌呈I3R阴性和ER阳性。在 一些实施方案中，乳腺癌呈I3R阴性和HER2阳性。在一些实施方案中，乳腺癌呈I3R阴性以 及同时呈ER阳性和HER2阳性。在一些实施方案中，乳腺癌是HER2阴性乳腺癌。在一些实 施方案中，乳腺癌呈HER2阴性和ER阳性。在一些实施方案中，乳腺癌呈HER2阴性和冊阳 性。在一些实施方案中，乳腺癌呈HER2阴性以及同时呈ER阳性和冊阳性。在一些实施方 案中，乳腺癌呈ER阴性和I3R阴性。在一些实施方案中，乳腺癌呈ER阴性、PR阴性和HER2 阳性。在一些实施方案中，乳腺癌呈ER阴性和HER2阴性。在一些实施方案中，乳腺癌呈ER 阴性、HER2阴性和I3R阳性。在一些实施方案中，乳腺癌呈TO阴性和HER2阴性。在一些实 施方案中，乳腺癌呈I3R阴性、HER2阴性和ER阳性。在一些实施方案中，乳腺癌呈ER阴性、 I3R阴性和HER2阴性。在一些实施方案中，乳腺癌是同源重组DNA修复缺陷型。
在一些实施方案中，该方法进一步包括给药PARP抑制剂与抗肿瘤剂组合。在一些 实施方案中，该抗肿瘤剂是抗肿瘤烷化剂、抗肿瘤抗代谢剂、抗肿瘤抗生素、植物来源的抗 肿瘤剂、抗肿瘤钼络合物、抗肿瘤喜树碱衍生物、抗肿瘤酪氨酸激酶抑制剂、单克隆抗体、干 扰素、生物反应调节剂、激素型抗肿瘤剂、血管生成抑制剂、分化诱导剂，或其他显示抗肿瘤 活性的药物，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，该钼络合物是顺钼、卡钼、草酸钼 和奥沙利钼。在一些实施方案中，抗肿瘤抗代谢剂是西他滨、卡培他滨、吉西他滨或瓦洛他 滨。在一些实施方案中，该方法进一步包括向患者给药PARP抑制剂与一种以上抗肿瘤剂组 合。在一些实施方案中，抗肿瘤剂是在给药PARP抑制剂之前、同时或之后给药。一些实施方 案中，该抗肿瘤剂是抗血管生成剂，如Avastin (贝伐单抗)。在一些实施方案中，该抗肿瘤 剂是拓扑异构酶抑制剂，包括但不限于伊立替康、拓扑替康或喜树碱。在一些实施方案中， 该抗肿瘤剂是紫杉烷，包括但不限于紫杉醇或多西紫杉醇。在一些实施方案中，该抗肿瘤剂 是靶向Her-2的药物，如曲妥单抗(赫赛汀)。在一些实施方案中，该抗肿瘤剂是激素拮抗 剂，如他莫昔芬。在一些实施方案中，该抗肿瘤剂是靶向生长因子受体的药物。在一些实施方案中，这种药物是表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂或胰岛素样生长因子I(IGF-I)受体 (IGFlR)抑制剂。在其他实施方案中，该方法进一步包括手术、放射治疗、化学治疗、基因治 疗、DNA治疗、辅助性治疗、新辅助性治疗、病毒治疗、RNA治疗、免疫治疗、纳米治疗或其组合ο在一些实施方案中，治疗包括至少11天的治疗周期，在该治疗周期的第1、4、8和 11天，患者接受约10至约100mg/kg的4-碘-3-硝基苯甲酰胺或其摩尔含量相当的代谢产 物。在一些实施方案中，治疗包括至少11天的治疗周期，在该治疗周期的第4、8和11天， 患者接受约1至约50mg/kg的4-碘-3-硝基苯甲酰胺或其摩尔含量相当的代谢产物。在 一些实施方案中，治疗包括至少11天的治疗周期，在该治疗周期的第1、4、8和11天，患者 接受约 1、2、3、4、5、6、8 或 10、12、14、16、18 或 20mg/kg 的 4-碘 _3_ 硝基苯甲酰胺。在一些实施方案中，治疗包括至少11天的治疗周期，其中(a)在该周期的第1天 和第8天，患者接受约100-2000mg/m2的吉西他滨；(b)在该周期的第1天和第8天，患者接 受约10至约400mg/m2的卡钼；以及(c)在该周期的第1、4、8和11天，患者接受约10至约 100mg/kg的4-碘-3-硝基苯甲酰胺或其摩尔含量相当的代谢产物。在一些实施方案中， 在该周期的第1天和第8天，患者接受约100-2，500mg/m2的吉西他滨和约AUC 1-5的卡钼 (约10至约400mg/m2的卡钼)；以及在该周期的第1、4、8和11天，患者接受约1至约50mg/ kg的4-碘-3-硝基苯甲酰胺或其摩尔含量相当的代谢产物。在一些实施方案中，在该周期 的第1天和第8天，患者接受约500-2000mg/m2的吉西他滨和约50至约400mg/m2的卡钼； 以及在该周期的第1、4、8和11天，患者接受约1至约50mg/kg的4-碘-3-硝基苯甲酰胺 或其摩尔含量相当的代谢产物。在一些实施方案中，在该周期的第1天和第8天，患者接受 约lOOOmg/m2的吉西他滨和约AUC 2的卡钼；以及在该周期的第1、4、8和11天，患者接受 约 1、2、3、4、6、8 或 10、12、14、16、18 或 20mg/kg 的 4-碘-3-硝基苯甲酰胺。本文叙述的一些实施方案提供了为三重阴性乳腺癌患者治疗乳腺癌的方法，包括 在21天治疗周期的第1、4、8和11天，向患者给药约10至约100mg/kg的4-碘-3-硝基苯 甲酰胺或其摩尔含量相当的代谢产物。在一些实施方案中，4-碘-3-硝基苯甲酰胺是以口 服或静脉输注给药。一些实施方案提供了为三重阴性乳腺癌患者治疗乳腺癌的方法，包括在21天治 疗周期内(a)在该周期的第1天和第8天，向患者给药约100-2000mg/m2的吉西他滨；(b) 在该周期的第1天和第8天，向患者给药AUC 0. 1-10的卡钼(约10至400mg/m2的卡钼)； 以及(c)在该周期的第1、4、8和11天，向患者给药约10至约100mg/kg的4-碘_3_硝基苯 甲酰胺或其摩尔含量相当的代谢产物。在一些实施方案中，吉西他滨以静脉输注给药。在 一些实施方案中，卡钼以静脉输注给药。在一些实施方案中，4-碘-3-硝基苯甲酰胺以口服 或静脉输注给药。在一些实施方案中，吉西他滨以静脉输注给药。在一些实施方案中，卡钼 以静脉输注给药。在一些实施方案中，4-碘-3-硝基苯甲酰胺以口服或静脉输注给药。本文叙述的一些实施方案提供了为三重阴性乳腺癌患者治疗乳腺癌的方法，其包 括(a)建立约10天至约30天的治疗周期；(b)在该周期的1至10个单独的日子，每天向 患者给药约lmg/kg至约50mg/kg的4-碘-3-硝基苯甲酰胺，或其摩尔含量相当的代谢产 物。在一些实施方案中，4-碘-3-硝基苯甲酰胺以口服或静脉输注给药。本文叙述的一些实施方案提供了为三重阴性乳腺癌患者治疗乳腺癌的方法，其包括(a)建立一个约10天至约30天的治疗周期；(b)在该周期的1至5个单独的日子，以静 脉输注的方式，每天向患者给药约100至约5000mg/m2的吉西他滨；(c)在该周期的1至5 个单独的日子，以静脉输注的方式，每天向患者给药AUC 1至AUC 10的卡钼(例如约10至 约400mg/m2卡钼)；以及(d)在该周期的1至10个单独的日子，每天向患者给药约lmg/kg 至约50mg/kg的4-碘-3-硝基苯甲酰胺，或其摩尔含量相当的代谢产物。在一些实施方案 中，吉西他滨以静脉输注给药。在一些实施方案中，卡钼以静脉输注给药。在一些实施方案 中，4-碘-3-硝基苯甲酰胺以口服或静脉输注给药。一些实施方案提供了为需要治疗的患者治疗乳腺癌的方法，包括(a)从患者获 取样品；(b)测试该样品以确定以下至少一项(i)该癌症是ER阳性还是ER阴性；(ii)该 癌症是PR阳性还是PR阴性；(iii)该癌症是HER2阳性还是HER2阴性；(c)如果测试表明 该癌症是ER阴性、PR阴性或HER2阴性，则使用治疗剂的组合治疗患者，其中该治疗剂包括 至少一种抗代谢剂、至少一种钼络合物以及至少一种PARP抑制剂；以及(d)如果测试结果 未表明该癌症是ER阴性、PR阴性或HER2阴性，则选择不同的治疗方式。一些实施方案包括为需要治疗的患者治疗乳腺癌的方法，包括(a)从患者获取 样品；(b)测试该样品以确定以下至少一项(i)该癌症是ER阳性还是ER阴性；(ii)该癌 症是PR阳性还是PR阴性；(iii)该癌症是HER2阳性还是HER2阴性；(c)如果测试表明该 癌症是ER阴性、PR阴性或HER2阴性，则使用至少一种PARP抑制剂治疗患者；以及(d)如 果测试结果未表明该癌症是ER阴性、PR阴性或HER2阴性，则选择不同的治疗方式。在一些实施方案中，获得了至少一种治疗效果，所述至少一种治疗效果是乳腺肿 瘤尺寸缩小、转移减少、完全缓解、部分缓解、病理学完全应答或病情稳定。在一些实施方案 中，与没用PARP抑制剂的治疗相比较，临床受益率(CBR = CR+PR+SD > 6个月)得到改善。 在一些实施方案中，临床受益率为至少约30 %。在一些实施方案中，与用抗代谢剂和钼络合 物但不用PARP抑制剂进行治疗相比较，临床受益率(CBR = CR+PR+SD>6个月)得到改善。 在一些实施方案中，临床受益率为至少约60 %。在一些实施方案中，PARP抑制剂是PARP-I 抑制剂。在其他实施方案中，该PARP抑制剂是苯甲酰胺或其代谢产物。在一些实施方案中， 该苯甲酰胺是4-碘-3-硝基苯甲酰胺或其代谢产物。在一些实施方案中，该钼络合物选自 顺钼、卡钼、草酸钼和奥沙利钼。在一些实施方案中，该钼络合物是卡钼。在一些实施方案 中，该抗代谢剂是西他滨。在一些实施方案中，该抗代谢剂选自西他滨、卡培他滨、吉西他滨 或瓦洛他滨。在一些实施方案中，该抗代谢剂是吉西他滨。在一些实施方案中，该方法进一 步包括向患者给药紫杉烷。在一些实施方案中，该紫杉烷是紫杉醇或多西紫杉醇。在一些 实施方案中，该样品是组织或体液样品。在一些实施方案中，该样品是肿瘤样品、血液样品、 血浆样品、腹膜液样品、渗出液或积液。在一些实施方案中，乳腺癌是转移性乳腺癌。在一 些实施方案中，乳腺癌是ER阴性转移性乳腺癌。在一些实施方案中，乳腺癌处于I期、II 期或III期。在一些实施方案中，乳腺癌对于ERJR或HER2中至少一种呈阴性。在一些实 施方案中，乳腺癌对于ER、PR或HER2中至少一种呈阴性；且乳腺癌对于ER、PR或HER2中 至少一种呈阳性。在一些实施方案中，乳腺癌呈ER阴性和ra阳性。在一些实施方案中，乳 腺癌呈ER阴性和HER2阳性。在一些实施方案中，乳腺癌呈ER阴性以及同时呈I3R阳性和 HER2阳性。在一些实施方案中，乳腺癌是I3R阴性转移性乳腺癌。在一些实施方案中，乳腺 癌呈I3R阴性和ER阳性。在一些实施方案中，乳腺癌呈I3R阴性和HER2阳性。在一些实施方案中，乳腺癌呈冊阴性以及同时呈ER阳性和HER2阳性。在一些实施方案中，乳腺癌是 HER2阴性转移性乳腺癌。在一些实施方案中，乳腺癌呈HER2阴性和ER阳性。在一些实施 方案中，乳腺癌呈HER2阴性和冊阳性。在一些实施方案中，乳腺癌呈HER2阴性以及同时 呈ER阳性和ra阳性。在一些实施方案中，乳腺癌呈ER阴性和ra阴性。在一些实施方案 中，乳腺癌呈ER阴性、PR阴性和HER2阳性。在一些实施方案中，乳腺癌呈ER阴性和HER2 阴性。在一些实施方案中，乳腺癌呈ER阴性、HER2阴性和冊阳性。在一些实施方案中，乳 腺癌呈I3R阴性和HER2阴性。在一些实施方案中，乳腺癌呈I3R阴性、HER2阴性和I3R阳性。 在一些实施方案中，乳腺癌呈ER阴性、PR阴性和HER2阴性。 本发明的一些实施方案提供了为需要治疗的患者治疗乳腺癌的方法，包括(a) 从患者获取样品；(b)测试该样品以确定以下每一项(i)该癌症是ER阳性还是ER阴性； ( )该癌症是PR阳性还是PR阴性；(iii)该癌症是HER2阳性还是HER2阴性；(c)如果 满足下列两种或两种以上条件，则使用至少一种PARP抑制剂治疗患者(i)该癌症是ER阴 性；(ii)该癌症是I3R阴性；或(iii)该癌症是HER2阴性；以及(d)如果至少两种前述条件 不满足，则选择不同的治疗方式。本发明的一些实施方案提供了为需要治疗的患者治疗乳 腺癌的方法，包括(a)从患者获取样品；(b)测试该样品以确定以下每一项(i)该癌症是 ER阳性还是ER阴性；(ii)该癌症是PR阳性还是PR阴性；(iii)该癌症是HER2阳性还是 HER2阴性；(c)如果满足下列两种或两种以上条件，则使用治疗剂的组合治疗患者，其中该 治疗剂包括至少一种抗代谢剂、至少一种钼络合物以及至少一种PARP抑制剂(i)该癌症 是ER阴性；(ii)该癌症是I3R阴性；或(iii)该癌症是HER2阴性；以及(d)如果至少两种 前述条件不满足，则选择不同治疗方式。在一些实施方案中，获得了至少一种治疗效果，所 述至少一种治疗效果是乳腺肿瘤尺寸缩小、转移减少、完全缓解、部分缓解、病理学完全应 答或病情稳定。在一些实施方案中，与没用PARP抑制剂的治疗相比较，临床受益率(CBR = CR+PR+SD彡6个月)得到改善。在一些实施方案中，临床受益率为至少约30%。在一些实 施方案中，与用抗代谢剂和钼络合物但不用PARP抑制剂进行治疗相比较，临床受益率(CBR =CR+PR+SD彡6个月)得到改善。在一些实施方案中，临床受益率为至少约60%。在一些 实施方案中，该样品是组织或体液样品。在一些实施方案中，该样品是肿瘤样品、血液样品、 血浆样品、腹膜液样品、渗出液或积液。在一些实施方案中，PARP抑制剂是PARP-I抑制剂。 在其他实施方案中，该PARP抑制剂是苯甲酰胺或其代谢产物。在一些实施方案中，该苯甲 酰胺是4-碘-3-硝基苯甲酰胺或其代谢产物。在一些实施方案中，该钼络合物选自顺钼、卡 钼、草酸钼和奥沙利钼。在一些实施方案中，该钼络合物是卡钼。在一些实施方案中，该抗 代谢剂是西他滨。在一些实施方案中，该抗代谢剂是西他滨、卡培他滨、吉西他滨或瓦洛他 滨。在一些实施方案中，该抗代谢剂是吉西他滨。在一些实施方案中，该方法进一步包括向 患者给药紫杉烷。在一些实施方案中，该紫杉烷是紫杉醇或多西紫杉醇。在一些实施方案 中，乳腺癌是转移性乳腺癌。在一些实施方案中，乳腺癌处于I期、II期或III期。在一些 实施方案中，乳腺癌对于ER、冊或HER2中至少一种呈阴性。在一些实施方案中，乳腺癌对 于ERJR或HER2中至少一种呈阴性；且乳腺癌对于ERJR或HER2中至少一种呈阳性。在 一些实施方案中，乳腺癌是ER阴性转移性乳腺癌。在一些实施方案中，乳腺癌是I3R阴性转 移性乳腺癌。在一些实施方案中，乳腺癌是HER2阴性转移性乳腺癌。在一些实施方案中， 乳腺癌呈ER阴性和冊阴性。在一些实施方案中，乳腺癌呈ER阴性和HER2阴性。在一些
22实施方案中，乳腺癌呈冊阴性和HER2阴性。在一些实施方案中，乳腺癌呈ER阴性、PR阴 性和HER2阴性。在一些实施方案中，治疗包括选择至少11天的治疗周期，以及(a)在该 治疗周期的第1、4、8和11天，患者接受约10至约100mg/kg的4-碘-3-硝基苯甲酰胺或 其摩尔含量相当的代谢产物。在一些实施方案中，4-碘-3-硝基苯甲酰胺以口服或静脉输 注给药。在一些实施方案中，治疗包括选择至少11天的治疗周期，以及(a)在该周期的第 1天和第8天，患者接受约100-2000mg/m2的吉西他滨；(b)在该周期的第1天和第8天，患 者接受约10至约400mg/m2的卡钼；以及(c)在该周期的第1、4、8和11天，患者接受约10 至约100mg/kg的4-碘-3-硝基苯甲酰胺或其摩尔含量相当的代谢产物。在一些实施方案 中，吉西他滨以静脉输注给药。在一些实施方案中，卡钼以静脉输注给药。在一些实施方案 中，4-碘-3-硝基苯甲酰胺以口服或静脉输注给药。本文公开的一些实施方案提供了一种为需要治疗的患者治疗乳腺癌的方法，包 括(a)从患者获取样品；(b)测试该样品以确定以下每一项(i)该癌症是ER阳性还是ER 阴性；( )该癌症是PR阳性还是PR阴性；以及(iii)该癌症是HER2阳性还是HER2阴性； (c)如果满足下列两种或两种以上条件，则使用至少一种PARP抑制剂治疗患者(i)该癌症 是ER阴性；(ii)该癌症是I3R阴性；或(iii)该癌症是HER2阴性；以及(d)如果条件(i) 至(iii)中有两种或两种以上条件未满足，则选择不同的治疗方式。本文叙述的一些实施方案提供了一种为需要治疗的患者治疗ER阴性、冊阴性、 HER-2阴性转移性乳腺癌的方法，包括向所述患者给药至少一种PARP抑制剂。在一些实施 方案中，与没用PARP抑制剂的治疗相比较，临床受益率(CBR = CR+PR+SD > 6个月)得到 改善。在一些实施方案中，临床受益率为至少约30%。在一些实施方案中，以单位剂量形 式向患者给药两种或两种以上治疗化合物。在一些实施方案中，PARP抑制剂是PARP-I抑 制剂。在其他实施方案中，该PARP抑制剂是苯甲酰胺或其代谢产物。在一些实施方案中， 该苯甲酰胺是4-碘-3-硝基苯甲酰胺或其代谢产物。在一些实施方案中，乳腺癌是转移性 乳腺癌。在一些实施方案中，乳腺癌是ER阴性转移性乳腺癌。在一些实施方案中，乳腺癌 是I3R阴性转移性乳腺癌。在一些实施方案中，乳腺癌是HER2阴性转移性乳腺癌。在一些 实施方案中，乳腺癌呈ER阴性和冊阴性。在一些实施方案中，乳腺癌呈ER阴性和HER2阴 性。在一些实施方案中，乳腺癌呈I3R阴性和HER2阴性。在一些实施方案中，乳腺癌呈ER 阴性、PR阴性和HER2阴性。在一些实施方案中，治疗包括选择至少11天的治疗周期，在该 治疗周期的第1、4、8和11天，患者接受约10至约100mg/kg的4-碘-3-硝基苯甲酰胺或 其摩尔含量相当的代谢产物。在一些实施方案中，4-碘-3-硝基苯甲酰胺以口服或静脉输 注给药。一些实施方案提供了治疗患者乳腺癌的方法，包括(a)测试取自患者的样品的 PARP表达；以及(b)如果PARP表达超过预定水平，则向患者给药至少一种PARP抑制剂。在 一些实施方案中，获得了至少一种治疗效果，所述至少一种治疗效果是乳腺肿瘤尺寸缩小、 转移减少、完全缓解、部分缓解、病理学完全应答或病情稳定。在一些实施方案中，与没用 PARP抑制剂的治疗相比较，临床受益率(CBR = CR+PR+SD彡6个月)得到改善。在一些实 施方案中，临床受益率的改善为至少约30%。在一些实施方案中，PARP抑制剂是PARP-I抑 制剂。在其他实施方案中，该PARP抑制剂是苯甲酰胺或其代谢产物。在一些实施方案中， 该苯甲酰胺是4-碘-3-硝基苯甲酰胺或其代谢产物。在一些实施方案中，乳腺癌是转移性
23乳腺癌。在一些实施方案中，该方法进一步包括以取自患者的样品测定雌激素受体、孕酮 受体或人表皮生长因子2受体的表达。在一些实施方案中，乳腺癌是HR阴性乳腺癌。在一 些实施方案中，乳腺癌是ER阴性乳腺癌。在一些实施方案中，乳腺癌是ra阴性乳腺癌。在 一些实施方案中，乳腺癌是HER2阴性乳腺癌。在一些实施方案中，乳腺癌呈ER阴性和冊 阴性。在一些实施方案中，乳腺癌呈ER阴性和HER2阴性。在一些实施方案中，乳腺癌呈I3R 阴性和HER2阴性。在一些实施方案中，乳腺癌呈ER阴性、PR阴性和HER2阴性。在一些实 施方案中，治疗包括选择至少11天的治疗周期，在该治疗周期的第1、4、8和11天，患者接 受约10至约100mg/kg的4-碘-3-硝基苯甲酰胺或其摩尔含量相当的代谢产物。在一些 实施方案中，4-碘-3-硝基苯甲酰胺以口服或静脉输注给药。本文公开的一些实施方案提供了为需要治疗的患者治疗乳腺癌的方法，包括(a) 从患者获取样品；(b)测试该样品以确定以下每一项(i)该癌症是ER阳性还是ER阴性； ( )该癌症是I3R阳性还是冊阴性；以及(iii)该癌症是HER2阳性还是HER2阴性；(c)如 果满足下列两种或两种以上条件，则使用治疗剂的组合治疗患者，其中该治疗剂包括至少 一种抗代谢剂、至少一种钼络合物以及至少一种PARP抑制剂(i)该癌症是ER阴性；(ii) 该癌症是I3R阴性；或(iii)该癌症是HER2阴性；以及(d)如果条件⑴至(iii)中有两种 或两种以上条件未满足，则选择不同的治疗方式。在一些实施方案中，吉西他滨以静脉输注 给药。在一些实施方案中，卡钼以静脉输注给药。在一些实施方案中，4-碘-3-硝基苯甲酰 胺以口服或静脉输注给药。本文叙述的一些实施方案提供了为需要治疗的患者治疗ER阴性、PR阴性、HER-2 阴性转移性乳腺癌的方法，包括向所述患者给药至少一种抗代谢剂、至少一种钼络合物以 及至少一种PARP抑制剂。在一些实施方案中，与用抗代谢剂和钼络合物但不用PARP抑制 剂进行治疗相比较，临床受益率(CBR = CR+PR+SD > 6个月)得到改善。在一些实施方案 中，临床受益率为至少约60%。在一些实施方案中，以单位剂量形式向患者给药两种或两 种以上治疗化合物。在一些实施方案中，该PARP抑制剂是苯甲酰胺或其代谢产物。在一些 实施方案中，该苯甲酰胺是4-碘-3-硝基苯甲酰胺或其代谢产物。在一些实施方案中，该 钼络合物选自顺钼、卡钼、草酸钼和奥沙利钼。在一些实施方案中，该钼络合物是卡钼。在 一些实施方案中，该抗代谢剂是西他滨。在一些实施方案中，该抗代谢剂选自西他滨、卡培 他滨、吉西他滨或瓦洛他滨。在一些实施方案中，该抗代谢剂是吉西他滨。在一些实施方案 中，该方法进一步包括向患者给药紫杉烷。在一些实施方案中，该紫杉烷是紫杉醇或多西紫 杉醇。在一些实施方案中，乳腺癌是转移性乳腺癌。在一些实施方案中，乳腺癌处于I期、 II期或III期。在一些实施方案中，乳腺癌对于ER、ra或HER2中至少一种呈阴性。在一 些实施方案中，乳腺癌对于ERJR或HER2中至少一种呈阴性；且乳腺癌对于ERJR或HER2 中至少一种呈阳性。在一些实施方案中，乳腺癌是ER阴性转移性乳腺癌。在一些实施方案 中，乳腺癌是PR阴性转移性乳腺癌。在一些实施方案中，乳腺癌是HER2阴性转移性乳腺癌。 在一些实施方案中，乳腺癌呈ER阴性和冊阴性。在一些实施方案中，乳腺癌呈ER阴性和 HER2阴性。在一些实施方案中，乳腺癌呈I3R阴性和HER2阴性。在一些实施方案中，乳腺癌 呈ER阴性、冊阴性和HER2阴性。在一些实施方案中，治疗包括选择至少11天的治疗周期， 以及(a)在该周期的第1天和第8天， 者接受约100-2000mg/m2的吉西他滨；(b)在该周期的第1天和第8天，患者接受约10至约400mg/m2的卡钼；以及(c)在该周期的第1、4、8 和11天，患者接受约10至约100mg/kg的4-碘-3-硝基苯甲酰胺或其摩尔含量相当的代 谢产物。在一些实施方案中，吉西他滨以静脉输注给药。在一些实施方案中，卡钼以静脉输 注给药。在一些实施方案中，4-碘-3-硝基苯甲酰胺以口服或静脉输注给药。一些实施方案提供了治疗患者乳腺癌的方法，包括(a)测试取自患者的样品的 PARP表达；以及(b)如果PARP表达超过预定水平，则向患者给药至少一种抗代谢剂、至少 一种钼络合物以及至少一种PARP抑制剂。在一些实施方案中，获得了至少一种治疗效果， 所述至少一种治疗效果是乳腺肿瘤尺寸缩小、转移减少、完全缓解、部分缓解、病理学完全 应答或病情稳定。在一些实施方案中，与用抗代谢剂和钼络合物但不用PARP抑制剂进行 治疗相比较，临床受益率(CBR = CR+PR+SD > 6个月)得到改善。在一些实施方案中，临床 受益率的改善为至少约60%。在一些实施方案中，该PARP抑制剂是苯甲酰胺或其代谢产 物。在一些实施方案中，该苯甲酰胺是4-碘-3-硝基苯甲酰胺或其代谢产物。在一些实施 方案中，该钼络合物选自顺钼、卡钼、草酸钼和奥沙利钼。在一些实施方案中，该钼络合物是 卡钼。在一些实施方案中，该抗代谢剂是西他滨。在一些实施方案中，该抗代谢剂选自西他 滨、卡培他滨、吉西他滨或瓦洛他滨。在一些实施方案中，该抗代谢剂是吉西他滨。在一些 实施方案中，该方法进一步包括向患者给药紫杉烷。在一些实施方案中，该紫杉烷是紫杉醇 或多西紫杉醇。在一些实施方案中，乳腺癌是转移性乳腺癌。在一些实施方案中，该方法进 一步包括以取自患者的样品测定雌激素受体、孕酮受体或人表皮生长因子2受体的表达。 在一些实施方案中，乳腺癌对于ER、冊或HER2中至少一种呈阴性。在一些实施方案中，乳 腺癌对于ERJR或HER2中至少一种呈阴性；且乳腺癌对于ERJR或HER2中至少一种呈阳 性。在一些实施方案中，乳腺癌是HR阴性乳腺癌。在一些实施方案中，乳腺癌是ER阴性乳 腺癌。在一些实施方案中，乳腺癌是I3R阴性乳腺癌。在一些实施方案中，乳腺癌是HER2阴 性乳腺癌。在一些实施方案中，乳腺癌呈ER阴性和I^R阴性。在一些实施方案中，乳腺癌呈 ER阴性和HER2阴性。在一些实施方案中，乳腺癌呈I3R阴性和HER2阴性。在一些实施方案 中，乳腺癌呈ER阴性、冊阴性和HER2阴性。在一些实施方案中，治疗包括选择至少11天的 治疗周期，以及(a)在该周期的第1天和第8天，患者接受约100-2000mg/m2的吉西他滨； (b)在该周期的第1天和第8天，患者接受约10至约400mg/m2的卡钼；以及(c)在该周期 的第1、4、8和11天，患者接受约10至约100mg/kg的4-碘-3-硝基苯甲酰胺或其摩尔含 量相当的代谢产物。在一些实施方案中，吉西他滨以静脉输注给药。在一些实施方案中，卡 钼以静脉输注给药。在一些实施方案中，4-碘-3-硝基苯甲酰胺以口服或静脉输注给药。因此，本文所述的实施方案包括用至少三种化学不同的物质治疗患者，其中一种 是抗代谢剂、一种是含钼络合物，还有一种是PARP抑制剂。在一些实施方案中，一种或多种 这样的物质能以各种各样的物理形态存在，例如游离碱、盐(尤其是药学上可接受的盐)、 水合物、多晶型物、溶剂合物、代谢产物等。除非本文另行限定，化学名称的使用旨在包括所 命名化合物的所有物理形态。例如，如果未进一步限定，列举4-碘-3-硝基苯甲酰胺旨在 笼统地包括游离碱以及所有药学上可接受的盐、多晶型物、水合物、代谢产物等。当旨在对 化合物的某种具体物理形态的公开或权利要求进行限制时，这将在提及该化合物的段落或 权利要求中加以明确。在一些实施方案中，本文内容提供了治疗乳腺癌的方法，包括向患者给药至少一种紫杉烷、至少一种钼络合物以及至少一种PARP抑制剂。在一些实施方案中，获得了至少 一种治疗效果，所述至少一种治疗效果是乳腺肿瘤尺寸缩小、转移减少、完全缓解、部分缓 解、病理学完全应答或病情稳定。在一些实施方案中，该PARP抑制剂是苯甲酰胺或其代谢 产物。在一些实施方案中，该苯甲酰胺是4-碘-3-硝基苯甲酰胺或其代谢产物。在一些实 施方案中，该钼络合物选自顺钼、卡钼、草酸钼和奥沙利钼。在一些实施方案中，该钼络合物 是卡钼。在一些实施方案中，该紫杉烷是紫杉醇或多西紫杉醇。在一些实施方案中，该紫杉 烷是紫杉醇。在一些实施方案中，在至少11天的治疗周期中，该方法包括下列内容(a)在 该周期的第1天，向患者给药约10-200mg/m2的紫杉醇；(b)在该周期的第1天，向患者给药 约10-400mg/m2的卡钼；以及(c)在该周期的第1天以及在整个周期中每周两次，向患者给 药约l-100mg/kg的4-碘-3-硝基苯甲酰胺或其摩尔含量相当的代谢产物。在一些实施方案中，本文内容提供了治疗患者乳腺癌的方法，包括(a)从患者获 取样品；(b)测试该样品以确定样品的PARP表达水平；(c)确定PARP表达是否超过预定水 平，如果超过，则向患者给药至少一种紫杉烷、至少一种钼络合物以及至少一种PARP抑制 剂。在一些实施方案中，如果样品的PARP表达未超过预定水平，则该方法进一步包括选择 不同的治疗方案。在一些实施方案中，癌症是对一种或多种激素受体呈阴性的乳腺癌。在 一些实施方案中，乳腺癌是HER2阴性乳腺癌。在一些实施方案中，癌症对雌激素受体(ER)、 孕酮受体(PR)或HER2呈阴性。在一些实施方案中，癌症对至少一种激素受体或HER2呈阳 性。在一些实施方案中，该紫杉烷是顺钼、卡钼、草酸钼或奥沙利钼。在一些实施方案中，该 紫杉烷是紫杉醇。在一些实施方案中，该钼络合物是顺钼或卡钼。在一些实施方案中，该钼 络合物是卡钼。在一些实施方案中，该PARP抑制剂是苯甲酰胺或其代谢产物。在一些实施 方案中，该PARP抑制剂是4-碘-3-硝基苯甲酰胺或其代谢产物。在一些实施方案中，该样 品是肿瘤切片或体液。本文所述的一些实施方案提供了治疗患者乳腺癌的方法，在21天治疗周期内包 括以下内容(a)在该周期的第1天，向患者给药约750mg/m2的紫杉醇；(b)在该周期的第 1天，向患者给药约10-400mg/m2的卡钼；以及(c)在该周期的第1天以及此后每周两次，向 患者给药约l-100mg/kg的4-碘-3-硝基苯甲酰胺。在一些实施方案中，紫杉醇以静脉输 注给药。在一些实施方案中，卡钼以静脉输注给药。在一些实施方案中，4-碘-3-硝基苯甲 酰胺以口服或静脉输注给药。本文所述的一些实施方案提供了治疗患者乳腺癌的方法，包括(a)建立约10天 至约30天的治疗周期；(b)在该周期的1至5个单独的日子，以静脉输注的方式，每天向患 者给药约100至约2000mg/m2的紫杉醇；(c)在该周期的1至5个单独的日子，以静脉输注 的方式，每天经约10至约300分钟，向患者给药约10-400mg/m2的卡钼；以及(d)在该周期 的1至10个单独的日子，每天经约10至约300分钟期间，向患者给药约lmg/kg至约8mg/ kg的4-碘-3-硝基苯甲酰胺。因此，本文所述的实施方案包括用至少三种化学不同的物质治疗患者，其中一种 是紫杉烷(如紫杉醇或多西紫杉醇)，一种是含钼络合物(如顺钼或卡钼或顺钼)，还有一 种是PARP抑制剂(如BA或其代谢产物)。在一些实施方案中，一种或多种这些物质能以各 种各样的物理形态存在，例如游离碱、盐(尤其是药学上可接受的盐)、水合物、多晶型物、 溶剂合物、代谢产物等。除非本文另行限定，化学名称的使用旨在包括所命名化合物的所有物理形态。例如，如果未进一步限定，列举4-碘-3-硝基苯甲酰胺旨在笼统地包括游离碱 以及所有药学上可接受的盐、多晶型物、水合物，及其代谢产物。当旨在对一种化合物的某 种具体物理形态的公开或权利要求进行限制时，这将在提及该化合物的段落或权利要求中 加以明确。“有效量”或“药学有效量”这些术语是指治疗剂的量，其足以产生所需的生物、治 疗和/或预防效果。其结果可以是体征、症状或病因的减少和/或减轻，或生物体系的任何 其他期望的变化。例如，用于治疗的“有效量”是指为使疾病出现有临床意义的减轻而所需 的本文所公开的硝基苯甲酰胺化合物本身的量，或含有该硝基苯甲酰胺化合物的组合物的 量。任何个案的适当有效量可由本领域一般技术人员采用常规的实验来确定。“药学上可接受的，，或“药理学上可接受的，，意为物质不是在生物学方面或在其他 方面不希望有的物质，即该物质可向个体给药而不会导致显著的不希望有的生物学效应， 或不会以有害的方式与组合物所含的任何组分相互作用。本文所用的术语“治疗”及其语法上相当的措词包括达到治疗效益和/或预防效 益。治疗效益意为所治疾病的根治或改善。例如，对于癌症患者而言，治疗效益包括所治癌 症的根治或改善。同样，随着与疾病相关的一种或多种生理症状的根治或改善，达到了某种 治疗效益，从而在患者身上观察到病情改善，尽管实际上患者也可能仍然遭受着疾病的折 磨。为了达到预防效益起见，可给有罹患癌症风险的患者或报告患有这类病情的一种或多 种生理症状的患者实施本发明的方法或给药本发明的组合物，即使病情的诊断也许尚未做 出ο抗肿瘤剂可用于本发明的抗肿瘤剂包括但不限于抗肿瘤烷化剂、抗肿瘤抗代谢剂、抗肿瘤 抗生素、植物来源的抗肿瘤剂、抗肿瘤钼络合物、抗肿瘤喜树碱衍生物、抗肿瘤酪氨酸激酶 抑制剂、单克隆抗体、干扰素、生物反应调节剂，以及其他显示抗肿瘤活性的药物，或其药学 上可接受的盐。在一些实施方案中，该抗肿瘤剂是烷化剂。本文所用的术语“烷化剂”是指在烷基 化反应中给出烷基的试剂，在烷基化反应中有机化合物的氢原子被烷基取代。抗肿瘤烷化 剂的实例包括但不限于氮芥N-氧化物、环磷酰胺、异环磷酰胺、美法仑、白消安、二溴甘露 醇、卡波醌、塞替哌、雷莫司汀、尼莫司汀、替莫唑胺或卡莫司汀。在一些实施方案中，该抗肿瘤剂是抗代谢剂(antimetabolite)。本文所用的术语 “抗代谢剂”在广义上包括扰乱正常新陈代谢的物质和抑制电子转移系统从而防止产生高 能量中间体的物质，因为它们与对活体生物有机体很重要的代谢产物(如维生素、辅酶、氨 基酸以及糖类)在结构和功能方面具有类似性。具有抗肿瘤活性的抗代谢剂的实例包括但 不限于甲氨蝶呤、6-巯嘌呤核苷、巯嘌呤、5-氟尿嘧啶、替加氟、去氧氟尿苷、卡莫氟、阿糖 胞苷、阿糖胞苷酯(cytarabine ocfosfae)、依诺他滨、S-1、吉西他滨、氟达拉滨或培美曲塞 二钠，优选的是5-氟尿嘧啶、S-I、吉西他滨等。在一些实施方案中，该抗肿瘤剂是抗肿瘤抗生素。抗肿瘤抗生素的实例包括但不 限于放线菌素D、多柔比星、柔红霉素、新制癌菌素、博来霉素、培洛霉素、丝裂霉素C、阿克 拉霉素、吡柔比星、表柔比星、净司他丁斯酯、伊达比星、西罗莫司或戊柔比星。在一些实施方案中，该抗肿瘤剂是植物来源的抗肿瘤剂。植物来源的抗肿瘤剂的
27实例包括但不限于长春新碱、长春碱、长春地辛、依托泊苷、索布佐生、多西紫杉醇、紫杉醇 和长春瑞滨，优选的是多西紫杉醇和紫杉醇。在一些实施方案中，该抗肿瘤剂是显示抗肿瘤活性的喜树碱衍生物。抗肿瘤喜树 碱衍生物的实例包括但不限于喜树碱、10-羟基喜树碱、拓扑替康、伊立替康或9-氨基喜树 碱，优选的是喜树碱、拓扑替康和伊立替康。而且，伊立替康在体内代谢并显示如同SN-38 的抗肿瘤效应。据信，喜树碱衍生物的作用机理和活性几乎与喜树碱一样(例如Nitta，等 人，Gan to KagakuRyoho,14,850-857(1987)) 在一些实施方案中，该抗肿瘤剂是具有抗肿瘤活性的有机钼化合物或钼配位化合 物。本文中的有机钼化合物是指能以离子形式提供钼的含钼化合物。优选的有机钼化合物 包括但不限于顺钼；顺双胺二水合钼(II)-离子；氯(二乙基三胺)-钼(II)氯化物；二氯 (乙二胺)-钼(II)；双胺(1，1-环丁二羧酸)钼(II)(卡钼)；顺螺钼；异丙钼；双胺(2-乙 基丙二酸)钼(II)；乙二胺丙二酸钼(II)；水合(1，2-二氨基二环己烷)硫酸钼(II)；水 合(1，2-二氨基二环己烷)丙二酸钼(II) ； (1，2-二氨基环己烷)丙二酸钼(II) ； (4-羧基 邻苯二甲酸)(1，2_ 二氨基环己烷)钼(II) ； (1，2_ 二氨基环己烷)-(异柠檬酸)钼(II)； (1，2_ 二氨基环己烷)草酸钼(II)；奥马钼；四钼；卡钼、奈达钼以及奥沙利钼，优选的是卡 钼或奥沙利钼。此外，本说明书所提及的其他抗肿瘤有机钼化合物是已知的且可经商业途 径购得和/或可由本领域普通技术人员以常规技术制备。在一些实施方案中，该抗肿瘤剂是抗肿瘤酪氨酸激酶抑制剂。本文所用的术语“酪 氨酸激酶抑制剂”是指抑制“酪氨酸激酶”的化学物质，它将ATP的λ-磷酸转化为蛋白中 特异性酪氨酸的羟基。抗肿瘤酪氨酸激酶抑制剂的实例包括但不限于吉非替尼、伊马替尼、
Sutent> Nexavar> Recentin> ABT-869 Axitinib。在一些实施方案中，该抗肿瘤剂是抗体或抗体中显示抗肿瘤活性的结合部分。在 一些实施方案中，该抗肿瘤剂是单克隆抗体。其实例包括但不限于阿昔单抗、阿达木单抗、 阿仑单抗、巴利昔单抗、贝伐单抗、西妥昔单抗、达利珠单抗、艾库组单抗(eculizumab)、依 发单抗(efalizumab)、替伊莫单抗、英夫利昔单抗、莫罗单抗-CD3、那他珠单抗、奥马珠单 抗(omalizumab)、帕利珠单抗、帕尼单抗(panitumumab)、兰尼单抗(ranibizumab)、吉姆单 抗奥佐米星、利妥昔单抗、托西莫单抗、曲妥单抗，或对抗原具有特异性的任何抗体片段。在一些实施方案中，该抗肿瘤剂是干扰素。这样的干扰素具有抗肿瘤活性，它是 由大多数动物细胞在病毒感染后产生和分泌的糖蛋白。它不但具有抑制病毒生长的作用， 还具有各种免疫效应机理，包括抑制细胞(尤其是肿瘤细胞)生长和加强天然杀伤细胞活 性，从而被指定为一种细胞因子。抗肿瘤活性干扰素的实例包括但不限于干扰素α、干扰素 a-2a、干扰素a-2b、干扰素β、干扰素Y-Ia和干扰素Y_nl。在一些实施方案中，该抗肿瘤剂是生物反应调节剂。它通常是这样一些物质或药 物的通称，这些物质或药物调节生命有机体防御机理或生物应答，如组织细胞的存活、生长 及分化，以使它们有助于个体抵抗肿瘤、感染或其他疾病。生物反应调节剂的实例包括但不 限于云芝多糖、香菇多糖、西佐喃、溶血链球菌和乌苯美司。在一些实施方案中，该抗肿瘤剂包括但不限于米托蒽醌、L-天门冬酰胺酶、 丙卡巴胼、达卡巴嗪、羟基脲、喷司他丁、维甲酸、阿法赛特(alefac印t)、α-达贝泊汀 (darbepoetin alfa)、阿那曲唑、依西美坦、比卡鲁胺、亮丙瑞林、氟他胺、氟维司群、哌加他尼钠(pegaptanib octasodium)、地尼白介素(denileukin diftitox)、阿地白介素、促甲状 腺素-α、三氧化二砷、硼替佐米(bortezomib)、卡培他滨和戈舍瑞林。上述术语“抗肿瘤烷化剂”、“抗肿瘤抗代谢剂”、“抗肿瘤抗生素”、“植物来源的抗 肿瘤剂”、“抗肿瘤钼配位化合物”、“抗肿瘤喜树碱衍生物”、“抗肿瘤酪氨酸激酶抑制剂”、“单 克隆抗体”、“干扰素”、“生物反应调节剂”以及“其他抗肿瘤药物”均是已知的，且可经商 业途径购得或可由本领域技术人员以本身所知的、或众所周知的、或常规的方法制备。吉 非替尼的制备过程在例如美国专利5，770，599中有所叙述；西妥昔单抗的制备过程在例 如TO96/40210中有所叙述；贝伐单抗的制备过程在例如WO 94/10202中有所叙述；奥沙利 钼的制备过程在例如美国专利5，420，319和5，959，133中有所叙述；吉西他滨的制备过程 在例如美国专利5，434，254和5，223，608中有所叙述；以及喜树碱的制备过程在美国专利 5，162，532,5, 247，089,5, 191，082,5, 200，524,5, 243，050 和 5，321，140 中有所叙述；伊立 替康的制备过程在例如美国专利4，604，463中有所叙述；拓扑替康的制备过程在例如美国 专利5，734，056中有所叙述；替莫唑胺的制备过程在例如JP-B No. 4-5029中有所叙述；以 及利妥昔单抗的制备过程在例如JP-W No. 2-503143中有所叙述。上述抗肿瘤烷化剂可经商业途径购得，如下列实例所示=MitsubishiPharma Corp.出品的以Nitrorin为商标名称的氮芥N-氧化物；Shionogi&Co.，Ltd.出品的以 Endoxan为商标名称的环磷酰胺；购自Shionogi&Co.，Ltd.的以Ifomide为商标名称的 异环磷酰胺；GlaxoSmithKline Corp.出品的以Alkeran为商标名称的美法仑；Takeda Pharmaceutical Co. ,Ltd.出品的以Mablin为商标名称的白消安；Kyorin Pharmaceutical Co.，Ltd.出品的以Myebrol为商标名称的二溴甘露醇；购自Sankyo Co.，Ltd.的以 Esquinon 为商标名称的卡波酉昆；Sumitomo Pharmaceutical Co. , Ltd.出品的以 Tespamin 为商标名称的塞替哌；Mitsubishi Pharma Corp.出品的以Cymerin为商标名称的雷莫司 汀；Sankyo Co.，Ltd.出品的以Nidran为商标名称的尼莫司汀；ScheringCorp.出品的以 Temodar为商标名称的替莫唑胺；以及GuilfordPharmaceuticals Inc.出品的以Gliadel Wafer为商标名称的卡莫司汀。上述抗肿瘤抗代谢剂可经商业途径购得，如下列实例所示购自 TakedaPharmaceutical Co.，Ltd.的以Methotrexate为商标名称的甲氨蝶呤；购自 Aventis Corp.的以 Thioinosine 为商标名称的 6-巯嘌呤苷；购自 TakedaPharmaceutical Co.，Ltd.的以Leukerin为商标名称的巯嘌呤；购自KyowaHakko Kogyo Co.，Ltd.的以 5-FU为商标名称的5-氟尿嘧啶；购自TaihoPharmaceutical Co.，Ltd.的以Futraful 为商标名称的替加氟；购自NipponRoche Co.，Ltd.的以Furutulon为商标名称的去氧 Μ^ Ρ ； S YamanouchiPharmaceutical Co. ， Ltd.白勺以 Yamafur 力 Itf t示g 禾尔白勺 + 貞 氟；购自NipponShinyaku Co.，Ltd.的以Cylocide为商标名称的阿糖胞苷；购自Nippon KayakuCo. , Ltd.的以Strasid为商标名称的阿糖胞苷酯；购自Asahi Kasei Corp.的以 Sanrabin为商标名称的依诺他滨；购自Taiho Pharmaceutical Co.，Ltd.的以TS-1为 商标名称的S-I ；购自Eli Lilly&Co.的以Gemzar为商标名称的吉西他滨；购自Nippon Schering Co.，Ltd.的以Fludara为商标名称的氟达拉滨；以及购自Eli Lilly&Co.的 以Alimta为商标名称的培美曲塞二钠。上述抗肿瘤抗生素可经商业途径购得，如下列 实例所示购自Banyu PharmaceuticalCo.，Ltd.的以Cosmegen为商标名称的放线菌素D ；购自Kyowa Hakko KogyoCo.，Ltd.的以adriacin为商标名称的多柔比星；购自 Meiji Seika Kaisha Ltd.的以Daunomycin为商标名称的柔红霉素；购自Yamanouchi PharmaceuticalCo. ，Ltd.白勺M Neocarzinostatin ^JlSft示$禾尔白勺胃 ;_自 Nippon KayakuCo.，Ltd.的以Bleo为商标名称的博来霉素；购自Nippon Kayaku Co, Ltd.的以 Pepro为商标名称的培洛霉素；购自Kyowa Hakko Kogyo Co. ,Ltd.的以Mitomycin为商标
C ；^ g Yamanouchi Pharmaceutical Co. ,Ltd. ^U Aclacinon ^J 称的阿克拉霉素；购自Nippon Kayaku Co.，Ltd.的以Pinorubicin为商标名称的吡柔比 星；购自Pharmacia Corp.的以Pharmorubicin为商标名称的表柔比星；购自Yamanouchi Pharmaceutical Co.，Ltd.的以Smancs为商标名称的净司他丁斯酯；购自Pharmacia Corp.的以Idamycin为商标名称的伊达比星；购自Wyeth Corp.的以Rapamune为商标名 称的西罗莫司；以及购自Anthra Pharmaceuticals Inc.的以Valstar为商标名称的戊柔 比星。上述植物来源的抗肿瘤剂可经商业途径购得，如下列实例所示购自 Shionogi&Co.，Ltd.的以 Oncovin 为商标名称的长春新碱；购自 KyorinPharmaceutical Co. ,Ltd.的以Vinblastine为商标名称的长春碱；购自Shionogi&Co. ,Ltd.的以Fildesin 为商标名称的长春地辛；购自Nippon Kayaku Co.，Ltd.的以Lastet为商标名称的依托泊 苷；购自Zenyaku Kogyo Co.，Ltd.的以Perazolin为商标名称的索布佐生；购自Aventis Corp.的以Taxsotere为商标名称的多西紫杉醇；购自Bristol-Myers Squibb Co.的以 Taxol为商标名称的紫杉醇；以及购自Kyowa Hakko Kogyo Co. ,Ltd.的以Navelbine为商 标名称的长春瑞滨。上述抗肿瘤钼配位化合物可经商业途径购得，如下列实例所示购自Nippon Kayaku Co.，Ltd.的以Randa为商标名称的顺钼；购自Bristol-MyersSquibb Co.的以 Paraplatin为商标名称的卡钼；购自Shionogi&Co.，Ltd.的以Aqupla为商标名称的奈达 钼；以及购自Sanofi-Synthelabo Co.的以Eloxatin为商标名称的奥沙利钼。上述抗肿瘤喜树碱衍生物可经商业途径购得，如下列实例所示购自Yakult Honsha Co. ,Ltd.的以Campto为商标名称的伊立替康；购自GlaxoSmithKline Corp.的以 Hycamtin为商标名称的拓扑替康；以及购自美国Aldrich Chemical Co.，Inc.的喜树碱。上述抗肿瘤酪氨酸激酶抑制剂可经商业途径购得，如下列实例所示购自 AstraZeneca Corp.的以Iressa为商标名称的吉非替尼；购自Novartis AG的以Gleevec 为商标名称的伊马替尼；以及购自OSI Pharmaceuticals Inc.的以Tarceva为商标名称的 埃罗替尼。上述单克隆抗体可经商业途径购得，如下列实例所示购自Bristol-MyersSquibb Co.的以Erbitux为商标名称的西妥昔单抗；购自Genentech，Inc.的以Avastin为商标 名称的贝伐单抗；购自Biogen Idec Inc.的以Rituxan为商标名称的利妥昔单抗；购自 Berlex Inc.的以Campath为商标名称的阿仓单抗；以及购自Chugai Pharmaceutical Co.，Ltd.的以Here印tin为商标名称的曲妥单抗。上述干扰素可经商业途径购得，如下列实例所示购自SumitomoPharmaceutical Co. ,Ltd.的以 Sumiferon 为商标名称的干扰素 α ；购自 TakedaPharmaceutical Co. ,Ltd. 的以Canferon-A为商标名称的干扰素α -2a ；购自Schering-Plough Corp.的以Intron
30A 为商标名称的干扰素 α -2b ；购自 MochidaPharmaceutical Co.，Ltd.的以 IFN. beta.为 商标名称的干扰素β ；购自Shionogi &Co.，Ltd.的以Imunomax-γ为商标名称的干扰 素Y-Ia ；以及购自OtsukaPharmaceutical Co.，Ltd.的以Ogamma为商标名称的干扰素
Y -nlo上述生物反应调节剂可经商业途径购得，如下列实例所示购自SankyoCo.，Ltd. 的以krestin为商标名称的云芝多糖；购自Aventis Corp.的以Lentinan为商标名称的香 菇多糖；购自Kaken Seiyaku Co.，Ltd.的以Sonifiran为商标名称的西佐喃；购自Chugai Pharmaceutical Co.，Ltd.的以Picibanil为商标名称的溶血链球菌；以及购自Nippon Kayaku Co.，Ltd.的以Bestatin为商标名称的乌苯美司。上述其他抗肿瘤剂可经商业途径购得，如以下实例所示购自WyethLederle Japan, Ltd.的以 Novantrone 为商标名称的米托蒽醌；购自 KyowaHakko Kogyo Co.，Ltd. 的以Leunase为商标名称的L-天门冬酰胺酶；购自Nippon Roche Co.，Ltd.的以Natulan 为商标名称的丙卡巴胼；购自KyowaHakko Kogyo Co.，Ltd.的以Dacarbazine为商标名 称的达卡巴嗪；购自Bristol-Myers Squibb Co.的以Hydrea为商标名称的羟基脲；购 自KagakuOyobi Kessei Ryoho Kenkyusho的以Coforin为商标名称的喷司他丁 ；购自 Nippon Roche Co.，Ltd.的以Vesanoid为商标名称的维甲酸；购自Biogen IdecInc.的 以Amevive为商标名称的阿法赛特；购自Amgen Inc.的以Aranesp为商标名称的达贝泊汀 α ；购自AstraZeneca Corp.的以Arimidex为商标名称的阿那曲唑；购自Pfizer Inc.的 以Aromasin为商标名称的依西美坦；购自AstraZeneca Corp.的以Casodex为商标名称的 比卡鲁胺；购自TakedaPharmaceutical Co.，Ltd.的以Leuplin为商标名称的亮丙瑞林； 购自Schering-Plough Corp.的以Eulexin为商标名称的氟他胺；购自AstraZenecaCorp. 的以Faslodex为商标名称的氟维司群；购自Gilead Sciences, Inc.的以Macugen为商标 名称的哌加他尼钠；购自Ligand Pharmaceuticals Inc.的以Ontak为商标名称的地尼白 介素-毒素连接物；购自Chiron Corp.的以Proleukin为商标名称的阿地白介素；购自 Genzyme Corp.的以Thyrogen为商标名称的促甲状腺素α ；购自Cell Therapeutics, Inc. 的以Trisenox为商标名称的三氧化二砷；购自Millennium Pharmaceuticals, Inc.的以 Velcade为商标名称的硼替佐米；购自Hoffmann-La Roche, Ltd.的以Xeloda为商标名称 的卡培他滨；以及购自AstraZeneca Corp.的以Zoladex为商标名称的戈舍瑞林。本说明 书所用的术语“抗肿瘤剂”包括上述抗肿瘤烷化剂、抗肿瘤抗代谢剂、抗肿瘤抗生素、植物来 源的抗肿瘤剂、抗肿瘤钼配位化合物、抗肿瘤喜树碱衍生物、抗肿瘤酪氨酸激酶抑制剂、单 克隆抗体、干扰素、生物反应调节剂，以及其他抗肿瘤药物。其他抗肿瘤剂或抗癌剂可与苯并吡喃酮化合物组合使用。这类适宜的抗肿瘤剂或 抗癌剂包括但不限于13-顺维甲酸、2-CdA、2-氯脱氧腺苷、5-阿扎胞苷、5-氟尿嘧啶、5-FU、 6-巯基嘌呤、6-MP、6-TG、6-硫鸟嘌呤、Abraxane、异维甲酸、放线菌素-D、多柔比星、氟尿嘧 啶、阿那格雷、Ala-Cort、阿地白介素、阿仑单抗、ALIMTA、阿利维A酸、Alkaban_AQ、美法兰、 全反式维甲酸、α干扰素、六甲蜜胺、甲氨喋呤、氨磷汀、氨鲁米特、阿那格雷、尼鲁米特、阿 那曲唑、阿糖胞嘧啶(Arabinosylcytosine)、Ara-C、阿法达贝泊汀(Aranesp)、阿可达、阿 那曲唑、依西美坦、阿仑恩(Arranon)、三氧化二砷、天门冬酰胺酶、ATRA, Avastin(贝伐单 抗)、阿扎胞苷、BCG、BCNU、苯达莫司汀、贝伐单抗、贝沙罗汀、BEXXAR、比卡鲁胺、BiCNU、硫酸博来霉素、博莱霉素、硼替佐米(Bortezomib)、白消安、Busulfex、C225、亚叶酸钙、Campath、 Camptosar、喜树碱-11、卡培他滨、Carac、卡钼、卡莫司汀、Carmustine Wafer、比卡鲁胺、 CC-5013、CCI-779、CCNU, CDDP、CeeNU、柔红霉素、西妥昔单抗、苯丁酸氮芥、顺钼、亚叶酸 钙、克拉屈滨、可的松、更生霉素、CPT-11、环磷酰胺、氨鲁米特、阿糖胞苷、阿糖胞苷脂质体、 Cytosar-U、Cytoxan、达卡巴嚷、Dacogen、放线菌素、α-达贝泊汀(DarbepoetinAlfa) > 达沙替尼(Dasatinib)、柔红霉素、红比霉素、盐酸柔红霉素、柔红霉素脂质体、枸橼酸柔 红霉素脂质体、地塞米松、地西他滨、De 1 ta-Cortef,泼尼松、地尼白介素(Deni 1 eukin Diftitox)、D印oCyt 、地塞米松、醋酸地塞米松、地塞米松磷酸钠、地塞米松、右雷佐生、 DHAD, DIC、醋酸地塞米松(Diodex)、多西紫杉醇、盐酸多柔比星脂质体、多柔比星、多柔比 星月旨质体、Droxia 、DTIC、DTIC-Dome> Duralone、Efudex、EligarcU Ellence、Eloxatin、 Elspar、Emcyt> Epirubicin、阿法依伯汀、Erbitux> Erlotinib、欧文氏菌 L-天门冬酰胺 酶、雌莫司汀、氨磷汀、凡毕复、依托泊苷、磷酸依托泊苷、氟他胺、易维特、依西美坦、法乐 通、Faslodex、弗隆、非格司亭、氟尿苷、福达华、氟达拉滨、Fluoroplex、氟尿嘧啶、氟尿嘧啶 (乳膏)、氟甲睾酮、氟他胺、亚叶酸、FUDR、氟维司群、G-CSF、吉非替尼、吉西他滨、吉姆单抗 奥佐米星、健择_化疗药物、格列卫、Gliadel Wafer, GM-CSF、戈舍瑞林、粒细胞-细胞集落 刺激因子、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子、Halotestin、赫赛汀、Hexadrol、克瘤灵、六甲 蜜胺、HMM、和美新、羟基脲、醋酸氢化可的松、氢化可的松、氢化可的松磷酸钠、氢化可的松 琥珀酸钠、磷酸氢化可的松、羟基脲、替伊莫单抗、泽瓦林(Ibritumomab Tiuxetan)、依达比 星、伊达比星、Ifex, IFN-alpha、异环磷酰胺、IL-11、IL-2、甲磺酸伊马替尼、达卡巴嗪、干 扰素α、干扰素α _2b (聚乙二醇轭合物)、白细胞介素-2、白细胞介素-11、(干扰素(干 扰素a-2b)、Iressa、伊立替康、异维A酸(Isotretinoin)、氮杂埃博霉素(Ixab印ilone)、 氮杂埃博霉素(Ixempra)、Kidrolase (t)、氢化可的松、拉帕替尼、L-天门冬酰胺酶、LCR、来 那度胺(Lenalidomide)、来曲唑、亚叶酸(Leucovorin)、留可然、Leukine、醋酸亮丙瑞林、 长春新碱、克拉立平、脂质体Ara-C、Liquid Pred、洛莫司汀、L-PAM、L-沙可来新、Lupron, 醋酸亮丙瑞林储库型缓释注射剂、Matulane, Maxidex、氮芥、盐酸氮芥、甲泼尼松龙、美卓 乐、梅格施、甲地孕酮、醋酸甲地孕酮、美法仑、巯嘌呤、美司钠、Mesnex,甲氨蝶呤、甲氨蝶 呤钠、甲泼尼松龙、Meticorten、丝裂霉素、丝裂霉素-C、米托蒽醌、M-泼尼松龙、MTC、MTX、 氮芥(Mustargen)、氮芥(Mustine)、丝裂霉素、马利兰、Mylocel、Mylotarg、诺维本、奈拉 滨、Neosar> Neulasta、Neumega、优保津、Nexavar> Nilandron> MNipent、氮芥 (Nitrogen Mustard)、Novaldex、i若夕肖胃、胃曲月太、Ugl；^ 曲月太、Oncospar> Oncovin、Ontak> Onxal, Oprevelkin、Orapred、Orasone、奥沙利钼、紫杉醇、蛋白结合紫杉醇、帕米磷酸、帕 尼单抗、Panretin、钼尔定、泼尼松龙、PEG干扰素、培门冬酶、Peg非格司亭、聚乙二醇-干 扰素、PEG-L-天门冬酰胺酶、PEMETREXED、喷托他丁、苯丙氨酸氮芥、顺钼、顺钼-AQ、泼尼松 龙、泼尼松、Prelone、丙卡巴胼、PROCRIT, Proleukin, Prolifeprospan 20 (具有卡莫司汀 植入剂)、巯嘌呤、雷洛昔芬、来那度胺(Revlimid)、Rheumatrex、Rituxan、美罗华、干扰素 α -2a、Rubex、柔红霉素盐酸盐、善得定、善得定LAR、沙格司亭、Solu-Cortef、Solu_Medrol、 索拉非尼、SPRYCEL, STI-571、链脲霉素、SU11248、Sunitinib, Sutent、他莫昔芬、它塞瓦 (Tarceva)、Targretin、Taxol、泰索帝(Taxotere)、Temodar、替莫唑胺、Temsirolimus、 替尼泊苷、TESPA、沙利度胺、Thalomid, TheraCys、硫鸟嘌呤、硫鸟嘌呤片剂、硫代磷酰胺
32(Thiophosphoamide)、Thioplex、塞替哌、TICE、拓扑杀、拓扑替康、托瑞米芬、Torisel、托西
Velban、Velcade、VePesid、维 A 酸、Viadur、Vidaza、长春碱、硫酸长春碱、Vincasar Pfs、长 春新碱、长春瑞滨、酒石酸长春瑞滨、VLB、VM-26、V0rin0Stat、VP-16、威猛(Vumon)、希罗达、 链脲霉素、泽瓦林(Zevalin)、右雷佐生、诺雷德、唑来膦酸、Zolinza、Zometa。抗代谢剂抗代谢剂是干扰细胞正常代谢过程的药物。由于癌细胞复制迅速，所以干扰细胞 代谢对癌细胞的影响将大于对宿主细胞的影响。吉西他滨(即4-氨基-l-[3，3-二氟-4-羟 基-5-(羟基甲基)四羟基呋喃-2-基]-IH-嘧啶-2-酮；EliLi Ily公司以GEMZAR 的商标 名称销售)是一种核苷类似物，它通过阻断DNA合成而干扰细胞分裂，从而显然是通过细胞 凋亡机理而导致细胞死亡。吉西他滨的剂量可根据具体的患者而调整。在成人中，当与含 钼药物和PARP抑制剂组合使用时，吉西他滨的剂量将在约lOOmg/m2至约5000mg/m2的范围 内，约100mg/m2至约2000mg/m2的范围内，约750mg/m2至约1500mg/m2的范围内，约900mg/ m2至约1400mg/m2的范围内，或为1250mg/m2。量纲mg/m2是指按照患者单位表面积(平方 米，m2)所用吉西他滨的剂量(毫克，mg)。吉西他滨可以静脉(IV)输注的方式给药，例如在 约10至约300分钟的时间内，约15至约180分钟的时间内，约20至约60分钟的时间内， 或约10分钟的时间内给药。在此上下文中，术语“约”表示近似的正常用量；在一些实施方 案中表示士 10%或士5%的容忍限。牵白会各合夺勿(platinum complexes)钼络合物是用于治疗癌症的药物组合物，含有与至少一个有机基团络合的至少一 个钼中心。卡钼((SP-4-2)-二胺[1，1_环丁二羧酸根(2-)-0，0’]钼)与顺钼和奥沙利钼 一样，是DNA烷化剂。卡钼的剂量以癌症化疗领域技术人员已知的方法，并考虑患者的肌酐 清除率，通过计算血浆浓度曲线下的面积(AUC)而确定。在一些实施方案中，计算与抗代谢 剂(如吉西他滨)和PARP抑制剂(如4-碘-3-硝基苯甲酰胺)组合治疗时所用的卡钼剂 量，使得 AUC 为约 0. l-6mg/ml ·π η，约 l_3mg/ml ·π η，约 1. 5 至约 2. 5mg/ml ·π η，约 1. 75 至约 2. 25mg/ml · min 或约 2mg/ml · min。(例如，AUC 2 是 2mg/ml · min 的简写。)在一些 实施方案中，计算与紫杉烷(如紫杉醇或多西紫杉醇)和PARP抑制剂(如4-碘-3-硝基苯 甲酰胺)组合治疗时所用的卡钼剂量，使得AUC为约0. l-6mg/ml .min，约l_3mg/ml - min, 约 1. 5 至约 2. 5mg/ml · min,约 1. 75 至约 2. 25mg/ml · min 或约 2mg/ml · min。(例如，AUC 2是2mg/ml -min的简写。)在一些实施方案中，适宜的卡钼剂量是约10至约400mg/m2，如 约360mg/m2。钼络合物如卡钼通常是在约10至约300分钟、约30至约180分钟、约45至 约120分钟或约60分钟的时间内以静脉(IV)给药。在此上下文中，术语“约”的通常意思 是“近似地”。在一些实施方案中，“约”表示士 10%或士5%。拓扑异构酶抑制剂在一些实施方案中，本发明的方法可包括向乳腺癌患者给药有效量的PARP抑制 剂与拓扑异构酶抑制剂(如伊立替康或拓扑替康)组合。拓扑异构酶抑制剂设计为干扰拓扑异构酶(拓扑异构酶I和II)作用的药物，所 述拓扑异构酶为在正常细胞周期中通过催化DNA链的磷酸二酯骨架的断裂和再连接来控 制 DNA 结构改变的酶(http://en. wikipedia. org/wiki/Topoisomerase_inhibitor_cite_
33note-urIDorlands_Medical_Dicitionary :topoisomerase_inhibitor_l#cite_ note-urlDorlands_Medical_dDictionary :topoisomerase_inhibitor-l)。对于癌症化学 疗法治疗拓扑异构酶已经成为了流行的靶点。认为拓扑异构酶抑制剂阻断细胞周期的连接 步骤，产生单链和双链的断裂，其破坏基因组的完整性。这些断裂的引入随后导致细胞凋亡 和细胞死亡。拓扑异构酶抑制剂通常根据其抑制的酶的类型分类。拓扑异构酶I，在真核生 物中最常见的拓扑异构酶类型，是托泊替康、伊立替康、勒托替康和依沙替康的靶点，这些 药物都是市售可得的。托泊替康购自GlaxoSmithKline，商品名为Hycamtim 。伊立替康购 自Pfizer，商品名为Ccamptosar_ 。勒托替康可从Gilead Sciences Inc.以脂质体制剂
获得。拓扑异构酶抑制剂可以以有效剂量给药。在一些实施方案中，用于人治疗的有效剂 量为约0.01至约10mg/m2/天。该治疗可以每天重复、每两周重复、每半周重复、每周重复或 每月重复。在一些实施方案中，治疗周期后可以有1天到几天，或1周到几周的休息期。与 PARP-I抑制剂组合，PARP-I抑制剂和拓扑异构酶抑制剂可在同一天给药或在不同天给药。靶向II型拓扑异构酶的化合物分为2大类拓扑异构酶毒剂，其靶向拓扑异 构酶-DNA复合物，和拓扑异构酶抑制剂，其破坏催化转化(catalyticturnover)。拓扑 IKtopo II)毒剂包括但不限于真核II型拓扑异构酶抑制剂(拓扑II)安吖啶、依托泊 苷、磷酸依托泊苷、替尼泊苷和多柔比星。这些药物为抗癌治疗。拓扑异构酶抑制剂的实例 包括ICRF-193。这些抑制剂靶向拓扑II的N-末端ATP酶结构域，且防止拓扑II转化。该化 合物与ATP酶结构域结合的结构已经由Classen (Proceedings of the National Academy ofScience,2004)阐明，表明药物以非竞争性方式结合，并锁定(locks doWn)ATP酶结构域 的二聚作用。抗血管牛成剂在一些实施方案中，本发明的方法可包括向乳腺癌患者给药有效量PARP抑制剂 与抗血管生成剂组合。血管生成抑制剂是抑制血管生成(新血管的生长)的物质。每种实体瘤(与白血 病相反)一旦达到一定的大小都需要产生血管以维持其存活。肿瘤只有当它们形成新血管 时才能生长。通常，在成人体中，血管并非在到处都会形成除非正在进行积极的组织修复。 血管生成抑制剂内皮细胞抑制素以及相关的化学物质能够抑制血管的形成，从而防止癌症 无限地发展。在患者试验中，肿瘤失去活力并保持那种状态，即使在内皮细胞抑制素治疗结 束之后也是如此。该治疗的副作用很少，但似乎选择性很有限。其他血管生成抑制剂如沙 利度胺以及天然的基于植物的物质也正在积极的研究之中。已知的抑制剂包括药物贝伐单抗(Avastin)，它与血管内皮生长因子(VEGF)结 合，从而抑制其与促进血管生成的受体结合。其他抗血管生成剂包括但不限于羧基酰胺三 唑、TNF-470、CM101、干扰素-a、IL_12、血小板因子4、苏拉明、SU5416、血小板反应蛋白、血 管生成抑制类固醇(angiostaticsteroids) +肝素、软骨衍生的血管生成抑制因子、基质金 属蛋白酶抑制剂、血管它丁(angiostatin)、内皮它丁(endostatin)、2_甲氧基雌二醇、替 可加兰、血小板反应蛋白、催乳素、α νβ3抑制剂以及利诺胺。靶向Her-2治疗在一些实施方案中，本发明的方法可包括向HER2阳性乳腺癌患者给药有效量的 PARP抑制剂与曲妥单抗(赫赛汀)组合。
赫赛汀(Here印tin)(曲妥单抗(trastuzumab))是用于早期HER-2阳性乳腺癌的 靶向治疗剂。赫赛汀被批准用于HER-2过表达、淋巴结阳性或淋巴结阴性(ER/PR-阴性或 带有一种高风险特点)乳腺癌的辅助性治疗。赫赛汀可以几种不同的方式使用作为包括 多柔比星、环磷酰胺以及紫杉醇或多西紫杉醇的治疗方案的一部分使用；与多西紫杉醇和 卡钼一起使用；或在基于多模态蒽环类抗生素的治疗之后作为单一药物使用。赫赛汀已被 批准与紫杉醇结合用于HER-2过表达转移性乳腺癌的第一线治疗。赫赛汀已被批准作为单 一药物用于HER-2过表达乳腺癌的治疗，为接受一种或多种转移性疾病化疗方案的患者治 疗。拉帕替尼或二甲苯磺酸拉帕替尼是口服活性化疗药物，用于实体瘤如乳腺癌的治 疗。在开发期间它被称为小分子GW572016。可给符合特定指征标准的患者处方拉帕替尼作 为乳腺癌结合治疗的一部分。从药理学上讲，拉帕替尼是一种打断引起癌症的细胞信号的 双重酪氨酸激酶抑制剂。拉帕替尼用于为患有HER-2阳性晚期乳腺癌且在先用其他化疗药 物如蒽环类抗生素、紫杉烷衍生药物或曲妥单抗(赫赛汀，Genentech公司产品)后病情进 展的妇女治疗乳腺癌。激素治疗在一些实施方案中，本发明的方法可包括向乳腺癌患者给药有效量的PARP抑制 剂与激素治疗组合。存在一些能附在癌细胞上并影响其增殖能力的激素。激素治疗的目的是添加、阻 断或去除激素。在乳腺癌方面，雌性激素雌激素和孕酮能促进一些乳腺癌细胞的生长。因 此，对这些患者而言，进行激素治疗是为了阻断人体内天然产生的雌激素并抵抗癌症的增 长。对于乳腺癌有两种类型的激素治疗抑制雌激素和孕酮以免其促进乳腺癌细胞生长的 药物，以及阻止卵巢产生激素的药物或手术。常见的用于治疗乳腺癌的激素治疗药物包括但不限于他莫昔芬、托瑞米芬、阿那 曲唑、阿诺新、弗隆(Femara)以及诺雷德。他莫昔芬-激素拮抗剂他莫昔芬(商品名为Nolvadex)减少了一些早期乳腺癌复发的机会，并可防止癌 症在未患病乳房的发展。他莫昔芬也减慢或停止了体内癌细胞的增长。此外，他莫昔芬可 为罹患乳腺癌风险高的妇女提供一种选择，以替代观望等待或接受预防性乳房切除术。他 莫昔芬是一种被称为选择性雌激素受体调节剂(SERM)的药物。在乳房里，它作为抗雌激素 起作用。雌激素促进乳腺癌细胞的增长，而他莫昔芬则阻止雌激素附着于这些细胞上的雌 激素受体。这样一来，据信乳腺癌细胞的生长将会停止。他莫昔芬经常与化疗和其他乳腺 癌治疗方法一起使用。它被认为是下列情况下的一种选项与乳房保留术或乳房切除术结 合的原位导管性癌(DCIS)的治疗；为降低乳腺癌进一步发展的风险而进行的原位乳腺小 叶癌(LCIS)辅助性治疗；为罹患雌激素受体阳性癌症的男性和女性进行转移性乳腺癌的 辅助性治疗；复发性乳腺癌的治疗；预防罹患乳腺癌风险高的妇女罹患乳腺癌。类固醇和非类固醇芳香酶抑制剂芳香酶抑制剂(Al)是一类阻断芳香酶的药物，用于为绝经后妇女治疗乳腺癌和 卵巢癌。芳香酶抑制剂降低了患激素受体阳性乳腺癌的绝经后妇女体内的雌激素量。随着 体内雌激素的减少，激素受体接收较少的生长信号，癌症的发展能够减缓或停止。
芳香酶抑制剂药物包括瑞宁得(化学名称阿那曲唑)、阿诺新(化学名称依西 美坦)，以及弗隆(化学名称来曲唑)。每种药物以丸剂形式服用，每日一次，最多服用5 年。但对于患晚期(转移性)疾病的妇女，只要此药物作用良好就应继续使用。芳香酶抑制剂(Al)分为两种类型不可逆转的类固醇抑制剂，例如与芳香酶复合 物形成永久性结合的依西美坦；以及以可逆性竞争方式抑制酶的非类固醇抑制剂(如阿那 曲唑、来曲唑)。氟维司群，又称为ICI 182，780和1狀10(1^”，是为在抗雌激素治疗后疾病进展 的绝经后妇女治疗激素受体阳性转移性乳腺癌的药物。它是一种无激动剂效应的雌激素受 体拮抗剂，通过同时下调和降解雌激素受体而起作用。它以每月注射一次给药。靶向治疗在一些实施方案中，本发明的方法可包括向乳腺癌患者给药有效量的PARP抑 制剂与靶向生长因子受体抑制剂组合，该生长因子受体包括但不限于表皮生长因子受体 (EGFR)和胰岛素样生长因子I受体(IGFlR)。EGFR在人的一些类型的癌(包括但不限于肺癌和乳腺癌)细胞中过表达。高度 增殖、侵入性乳腺癌细胞往往表达异常高水平的EGFR，已知这种现象会控制细胞分化和迁 移。特异性EGFR酪氨酸激酶抑制剂如吉非替尼的可用性和FDA的批准，进一步提高了人们 对EGFR的兴趣。抑制EGFR是重要的抗癌治疗。EGFR抑制剂的实例包括但不限于西妥昔单 抗。这是静脉注射的嵌合单克隆抗体，用于治疗癌症，包括但不限于转移性结肠直肠癌和头 颈癌。帕尼单抗是EGFR抑制剂的另一个实例。这是抗EGFR的人源化单克隆抗体。当单独 用于晚期结肠癌患者时，帕尼单抗已被证明是有益的且比支持性护理效果更好，而且美国 FDA已批准这种用途。1型胰岛素样生长因子受体(IGFlR)的激活促进细胞增殖并抑制各种细胞的凋 亡。表达组成性激活IGFlR或IGF-I的转基因小鼠罹患乳腺肿瘤，且在原发性乳腺癌中测 出IGFlR水平上升(Yanochko等人.Breast CancerResearch 2006)。业已显示，乳腺癌中 胰岛素样生长因子1受体(IGFlR)和HER2展示了重要的信号相互作用。这些受体中一种 受体的特异性抑制剂可交叉抑制其他受体的活性。靶向这两种受体对其下游的细胞外信 号调节激酶和AKT信号通路产生了最大的抑制作用。因此，这样的药物组合可在临床 上应用，甚至对单一药物治疗无效的肿瘤也有益，其具体实例为HER2/IGF1R抑制剂组合在 无 HER2 过表达的 MCF7 细胞中的作用(Chakraborty AK，等人，Cancer Res. 2008 Mar 1 ； 68(5) 1538-45) IGFlR抑制剂的一个实例是CP-751871。CP-751871是人单克隆抗体，它 与IGFlR选择性地结合，从而防止IGFl与受体结合以及随后的受体自身磷酸化。对IGFlR 自身磷酸化的抑制可导致表达IGFlR的肿瘤细胞上受体表达的下降、IGF抗凋亡作用的下 降，以及对肿瘤生长的抑制。IGFlR是在大多数肿瘤细胞上表达的受体酪氨酸激酶，并参与 细胞分裂、血管生成以及肿瘤细胞存活。PI3K/mT0R 通路磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)通路失调是人类癌症中常见的现象，这种失调可以是 由于肿瘤抑制因子(染色体10上缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物)的失活，也可以是由于 PllO-α的激活突变。这些热点突变导致酶的致癌活性，并造成抗HER2抗体曲妥单抗的治 疗抗药性。因此，该ΡΙ3Κ通路是癌症治疗的有吸引力的目标。业已证明，ΡΙ3Κ的双重抑制剂NVP-BEZ235和下游的哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)能抑制乳腺癌细胞中下游效应子 Akt、S6核糖体蛋白和4EBP1的激活。NVP-BEZ235抑制PI3K/mT0R轴并在含有野生型和突变 型PllO-α的癌细胞中导致抗增殖和抗肿瘤活性(Violeta Serra，等人.Cancer Research 68，8022-8030，2008 年 10 月 1 日)。Hsp90 抑制剂这些药物靶向热休克蛋白90(hsp90)。Hsp90是一种伴侣蛋白，其正常的作用是帮 助其他蛋白质形成和维持它们起作用时所需的形状。伴侣蛋白通过与其他蛋白的实际接触 而起作用。尽管有通常会造成癌细胞死亡的遗传缺陷，Hsp90也可使癌细胞存活，甚至茁壮 成长。因此，阻断HSP90和相关伴侣蛋白的功能可能会导致癌细胞死亡，尤其是如果将阻断 伴侣功能与阻断癌细胞存活的其他策略相结合。微管蛋白抑制剂微管蛋白是形成微管的蛋白，它们是细胞骨架(结构网)的关键组成部分。微管 是细胞分裂(有丝分裂)、细胞结构、运输、信号传导和活动所必需的。鉴于它们在有丝分裂 中的主要作用，微管已成为抗癌药物的重要目标-通常被称为抗有丝分裂药物、微管蛋白 抑制剂和微管靶向药物。这些化合物与微管中的微管蛋白结合，并通过干扰细胞分裂所需 的微管形成而防止癌细胞的增殖。这种干扰阻断了细胞周期顺序，从而导致细胞凋亡。细胞凋亡抑制剂细胞凋亡抑制剂(IAP)是功能相关和结构相关的蛋白家族，最初表征于杆状病毒 中，起着细胞凋亡内源性抑制剂的作用。人IAP家族至少有6个成员，已在许多生物体内发 现了 IAP同源物。10058-F4是诱导细胞周期停滞和细胞凋亡的c-Myc抑制剂。它是细胞渗 透性噻唑烷酮，能特异性地抑制c-Myc-Max的相互作用并防止c-Myc靶基因表达的反式激 活。10058-F4在体外和体内均能抑制肿瘤细胞以c-Myc-依赖的方式增长。BI-6C9是tBid 抑制剂和抗凋亡剂。GNF-2属于新的一类Bcr-abl抑制剂。GNF-2似乎与远离活性位点的变 构位点肉豆蔻酰结合袋结合，从而稳定激酶的失活形式。它以267nM的IC5tl值抑制Bcr-abl 的磷酸化，但并不抑制63种其他激酶，包括天然的c-Abl，并显示对不表达Bcr-Abl的细胞 完全没有毒性。在研究Bcr-abl活性和治疗由Bcr-Abl癌蛋白引起的治疗抵抗的慢性粒细 胞白血病(CML)方面，GNF-2显示了新一类抑制剂的巨大潜力。Pifithrin-α是p53介导 的细胞凋亡和P53依赖的基因转录(如细胞周期蛋白G、p21/Wafl和mdm2表达)的可逆性 抑制剂。Pifithrin-α提高了基因毒性应激如UV辐射和用细胞毒性化合物治疗后的细胞 存活率，所述细胞毒性化合物包括多柔比星、依托泊苷、紫杉醇和胞嘧啶-β-D-呋喃阿拉 伯糖苷。Pifithrin-α可保护小鼠免受致命的全身Y射线辐射的伤害，癌症发病率也未上 升。PARP 抑制制在一些实施方案中，通过向需要治疗的患者给药至少一种PARP抑制剂，本发明提 供了治疗对ER、ra或HER2中至少一种呈阴性的乳腺癌的方法。在另一些实施方案中，通过 向需要治疗的患者给药本文所述的至少一种PARP抑制剂与至少一种抗肿瘤剂组合，本发 明提供了治疗乳腺癌的方法。并非意图受任何特定作用机理的限制，据信由于聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)活 性的调节，本文所述的化合物具有抗癌特性。这一作用机理与PARP抑制剂结合PARP并降低
37其活性的能力有关。PARP催化β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)向烟酰胺和聚-ADP-核糖 (PAR)的转化。聚(ADP-核糖)和PARP两者都与转录、细胞增值、基因稳定性以及致癌作用 相关(Bouchard V. J.等人· Experimental Hematology, Volume 31, Number 6, 2003年6 月， pp.446-454 (9) ；Herceg Ζ. ；Wang Ζ.-Q. Mutation Research/Fundamentaland Molecular Mechanisms of Mutagenesis,Volume 477,Number 1，2001年 6 月 2 日，pp.97-110(14))。聚 (ADP-核糖)聚合酶I(PARPl)是DNA单链断裂(SSBs)修复过程中的关键分子(de Murcia J，等人· 1997，Proc Natl Acad SciUSA 94 7303-7307 ；Schreiber V, Dantzer F, Ame JC, de Murcia G(2006)NatRev Mol Cell Biol 7 517-528 ；Wang ZQ，等人.(1997)Genes Devll 2347-2358)。由于PARPl功能受抑制而导致SSB敲除修复，引起了 DNA双链断裂(DSBs)， 后者可引起同源定向DSB修复有缺陷的癌细胞的合成致死(Bryant HE，等人(2005)Nature 434 913-917 ；Farmer H，等人(2005) Nature 434 :917_921)。BRCAl和BRCA2作为同源重组机理(HR)不可分割的组成部分而起作用(Narod SA,Foulkes WD(2004)Nat Rev Cancer 4:665-676 ；Gudmundsdottir K,Ashworth A (2006) Oncogene 25 :5864_5874)。在以基于基因转换的同源重组(HR)为机理的双链断裂(DSB)修复过程中，BRCAl 或 BRCA2 有缺陷的细胞具有缺陷(Farmer H，等人(2005) Nature 434:917-921 ；Narod SA, Foulkes WD(2004)Nat Rev Cancer 4665-676 ；Gudmundsdottir K, Ashworth A (2006) Oncogene 25 5864-5874 ；Helleday T，等人(2008)Nat Rev Cancer 8:193-204)。乳腺癌 易感蛋白BRCAl或BRCA2的缺陷诱导了细胞对抑制聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)活性的敏 感性，从而导致细胞周期的停滞和凋亡。据报道，在以同源重组(HR)为机理的双链断裂修 复过程中，BRCAl和BRCA2的关键作用是这种敏感性的根本原因，而且RAD51、RAD54、DSS1、 RPAl、NBS1、ATR、ATM、CHKl、CHK2、FANCD2、FANCA 或 FANCC 的缺乏诱导 了这种敏感性(McCabe N. ^A · Deficiency in the repair of DNA damage by homologous recombinationand sensitivity to poly(ADP-ribose)polymerase inhibition, Cancerresearch 2006, vol. 66,8109-8115)。有人建议，对于BRCA1/2或其他HR通路组件有缺陷的癌症，PARPl的 抑制可作为特殊的治疗方法(Helleday T，等人.(2008) Nat Rev Cancer 8:193-204)。三 重阴性肿瘤占所有乳腺癌的15%，并经常掩盖以同源重组(HR)为机理的DNA双链断裂修 复过程中的缺陷，如 BRCAl 功能障碍(Rottenberg S，等人.Proc Natl Acad Sci USA. 2008 Nov4 ； 105 (44) 17079-84)。抑制PARP分子的活性包括降低这些分子的活性。术语“抑制”及其语法上的变体 如“抑制的”，并非旨在要求PARP活性的完全下降。在一些实施方案中，与抑制作用不存在 的情况相比，例如与本发明的硝基苯甲酰胺抑制剂不存在的情况相比，分子活性的下降为 至少约50 %、至少约75 %、至少约90 %，或至少约95 %。在一些实施方案中，抑制是指可观 察到的或可测量的活性下降。在治疗的一些情况下，所述抑制足以在所治疗的状况中产生 治疗和/或预防效益。短语“不抑制”及其语法上的变体并不要求对活性完全没有作用。例 如，它指的是这样的情况，其中在抑制剂如本发明的硝基苯甲酰胺存在的情况下，PARP活性 的下降少于约20%、少于约10%，最好是少于约5%。聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)是DNA修复过程中很重要的酶，因此在化疗耐药性 方面有着潜在的作用。靶向PARP被认为是打断DNA的修复过程，从而在肿瘤细胞中加强紫
38杉烷介导的、抗代谢剂介导的、拓扑异构酶抑制剂介导的、和生长因子受体抑制剂如IGFlR 抑制剂介导的，和/或钼络合物介导的DNA复制和/或修复。对于BRCAl和BRCA2功能受 损的乳腺癌或其他DNA修复途径有缺陷的那些患者，PARP抑制剂也可具有高度活性。ER、 冊和HER2阴性的原发性乳腺癌显示出PARP的上调。此乳腺癌亚型具有9倍的发生BRCA-I 突变的风险，并可能在范可尼贫血DNA修复途径中具有进一步的缺陷。4-碘-3-硝基苯甲酰胺(BA)是一种小分子，它作用于肿瘤细胞但对正常细胞却 无毒性作用。据信，BA通过抑制PARP而实现其抗肿瘤作用。BA是非常亲脂性的，它分布 迅速并广泛地进入各种组织，包括大脑和脑脊液(CSF)。它在体外能积极地抵抗范围广泛 的癌细胞，包括耐药性细胞系。本领域的技术人员将会认识到，BA可以药学上可接受的任 何形式给药，如以药学上可接受的盐、溶剂合物，或络合物的形式给药。此外，由于BA能在 溶液中实现互变异构化，BA的互变异构形式与盐、溶剂合物或络合物一起都包括在BA(或 相应的4-碘-3-硝基苯甲酰胺)这一术语中。在一些实施方案中，BA可与环糊精如羟丙 基- β _环糊精组合给药。不过，本领域技术人员将会认识到，其他活性和非活性药物也可 与BA组合使用；除非另有说明，关于BA的叙述将包括其药学上可接受的所有形式。基底样乳腺癌有转移到大脑的较高倾向；已知BA能穿越血脑障碍。虽然不想受任 何特定理论的约束，但据信BA是通过抑制PARP的功能而实现其抗肿瘤作用的。在一些实施 方案中，BA可用于治疗三重阴性转移性乳腺肿瘤。在一些实施方案中，BA可用于治疗ER、 I3R和Her2中至少有一个是阴性的乳腺肿瘤。在一些实施方案中，BA可用于治疗ER、I3R和 HER2中至少有两个是阴性的乳腺肿瘤，例如，ER阴性、PR阴性及Her_2阳性；或ER阳性、PR 阴性及Her-2阴性；或ER阴性、PR阳性及Her-2阴性。在一些实施方案中，BA可与抗肿瘤药组合使用以治疗乳腺肿瘤。在一些实施方案 中，该抗肿瘤剂是抗肿瘤烷化剂、抗肿瘤抗代谢剂、抗肿瘤抗生素、植物来源的抗肿瘤剂、抗 肿瘤钼络合物、抗肿瘤喜树碱衍生物、抗肿瘤酪氨酸激酶抑制剂、单克隆抗体、干扰素、生物 反应调节剂、激素型抗肿瘤剂、抗肿瘤病毒剂、血管生成抑制剂、分化诱导剂，或其他显示抗 肿瘤活性的药物，或其药学上可接受的盐。在另一些实施方案中，BA可与抗代谢剂如吉西他 滨和钼络合物如卡钼组合使用，以治疗乳腺肿瘤。在另一些实施方案中，BA可与紫杉烷如紫 杉醇和钼络合物如卡钼组合使用，以治疗转移性乳腺肿瘤。在另一些实施方案中，BA可与 抗代谢剂如吉西他滨和钼络合物如卡钼组合使用，以治疗乳腺肿瘤。在另一些实施方案中， BA可与紫杉烷如紫杉醇和钼络合物如卡钼组合使用，以治疗转移性乳腺肿瘤。在另一些实 施方案中，BA可与抗血管生成剂结合使用以治疗乳腺肿瘤。在另一些实施方案中，BA可与 拓扑异构酶抑制剂如伊立替康或拓扑替康组合使用，以治疗乳腺肿瘤。在另一些实施方案 中，BA可与激素治疗组合使用以治疗乳腺肿瘤。在另一些实施方案中，BA可与生长因子受 体抑制剂(包括但不限于EGFR和IGFlR抑制剂)组合使用，以治疗乳腺肿瘤。在一些实施 方案中，乳腺癌是三重阴性转移性乳腺癌。在一些实施方案中，乳腺肿瘤对ER、冊或HER2 中至少一种呈阴性。在一些实施方案中，乳腺肿瘤对ERJR或HER2中至少两种呈阴性。在 一些实施方案中，乳腺肿瘤对ERJR或HER2中至少一种呈阴性，对ERJR或HER2中至少一 种呈阳性。在一些实施方案中，乳腺肿瘤对ER、I3R和HER2中至少两种呈阴性，例如，ER阴 性、PR阴性及Her-2阳性；或ER阳性、PR阴性及Her-2阴性；或ER阴性、PR阳性及Her-2 阴性。
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取决于患者的年龄、身高、体重、总的健康状况等，PARP抑制剂的剂量可以改变。 在一些实施方案中，BA的剂量范围为约lmg/kg至约100mg/kg、约2mg/kg至约50mg/kg、 约 2mg/kg、约 4mg/kg、约 6mg/kg、约 8mg/kg、约 10mg/kg、约 12mg/kg、约 15mg/kg、约 20mg/ kg、约 25mg/kg、约 30mg/kg、约 35mg/kg、约 40mg/kg、约 50mg/kg、约 60mg/kg、约 75mg/kg、约 90mg/kg、约 1 至约 25mg/kg、约 2 至约 70mg/kg、约 4 至约 lOOmg、约 4 至约 25mg/kg、约 4 至 约20mg/kg、约50至约100mg/kg或约25至约75mg/kg。BA可以静脉的方式给药，例如在约 10至约300分钟、约30至约180分钟、约45至约120分钟或约60分钟(即约1小时)的 时间内采取静脉(IV)输注。在一些实施方案中，BA也可以口服的方式给药。在此上下文 中，术语“约”的通常意思是“近似地”。在一些实施方案中，“约”表示士 10%或士5%。美国专利5，464，871叙述了 BA (4_碘_3_硝基苯甲酰胺)的合成，该专利通过引 证以其整体引入本文。BA可以lOmg/mL的浓度制备并可以方便的形式如IOmL小瓶包装。BA 代谢产物(BA Metabolites)本文所用的“BA”意为4-碘-3-硝基苯甲酰胺；“ΒΝ0”意为4_碘_3_亚硝基苯甲 酰胺；“ΒΝΗ0Η”意为4-碘-3-羟基氨基苯甲酰胺。本发明中有用的前体化合物结构式为(Ia) 其中R1、R2, R3, R4和R5独立地选自氢、羟基、氨基、硝基、碘、(CrC6)烷基、(C1-C6) 烷氧基、(C3-C7)环烷基以及苯基，其中礼、R2、R3、R4和R5这5个取代基中至少两个总是氢， 这5个取代基中至少一个总是硝基，且邻近硝基的至少一个取代基总是碘，及其药学上可 接受的盐、溶剂合物、异构体、互变异构体、代谢产物、类似物或前药。Ri、R2、R3、R4和R5也可 以是卤素，如氯、氟或溴取代基。式Ia的优选前体化合物是 4-碘-3-硝基苯甲酰胺
(BA)可用于本发明的一些代谢产物是式(IIa)化合物 其中(1)礼、R2, R3,礼和R5取代基中至少有一个取代基总是含硫取代基，且其余 的取代基队、R2> R3> R4和R5独立地选自氢、羟基、氨基、硝基、碘、溴、氟、氯、(C1-C6)烷基、 (C「C6)烷氧基、(C3-C7)环烷基以及苯基，其中礼、R2> R3> R4和R5这5个取代基中至少有两 个取代基总是氢；或者(2)礼、R2, R3、R4和R5取代基中至少有一个取代基不是含硫取代基， 且R1,R2,R3^R4和R5这5个取代基中至少有一个取代基总是碘，且其中所述碘总是与作为硝 基、亚硝基、羟基氨基、羟基或氨基的礼、R2> R3、R4或R5基团相邻；及其药学上可接受的盐、 溶剂合物、异构体、互变异构体、代谢产物、类似物、或前药。在一些实施方案中，在(2)的化 合物中，碘基总是与作为亚硝基、羟基氨基、羟基或氨基的礼、R2> R3、R4或R5基团相邻。在 一些实施方案中，在(2)的化合物中，碘基总是与作为亚硝基、羟基氨基或氨基的Ri、R2、R3、 R4或R5基团相邻。以下组分是优选的代谢化合物，分别由下列化学结构式代表 R6选自氢、(C「C8)烷基、(C「C8)烷氧基、异喹啉酮、喷哚、噻唑、噁唑、噁二唑、噻盼 或苯基 尽管不限于任何特定的机理，以下提供了 MS292通过硝基还原酶或谷胱甘肽缀合 机理发生代谢的实例硝基还原酶机理 BA谷胱甘肽缀合和代谢 本发明提供了前述硝基苯甲酰代谢化合物的用途，其用于治疗乳腺癌，包括对ER、 I3R和/或HER2中一种或多种呈阴性的乳腺癌。已有报道，硝基苯甲酰代谢化合物对恶性癌细胞具有选择性细胞毒性，但对非恶 性癌细胞则无毒性。参阅 Rice 等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA89 7703-7707 (1992)，该文 以其整体弓I入本文。在一个实施方案中，相对于非肿瘤细胞，本发明的方法所用的硝基苯甲 酰代谢化合物对于肿瘤细胞可显示更有选择性的毒性。在一些实施方案中，通过向需要治疗的受试者给药至少一种PARP抑制剂，本发 明提供了治疗对ER、ra或HER2中至少一种呈阴性的乳腺癌的方法。在另一些实施方案 中，通过向需要治疗的受试者给药至少一种PARP抑制剂和至少一种抗肿瘤剂，本发明提 供了治疗乳腺癌的方法。在一些实施方案中，结合化疗向需要这种治疗的患者给药本发 明的代谢产物，所述化疗使用至少一种代谢产物(例如一种西他滨，如吉西他滨)和至 少一种钼络合物(例如卡钼、顺钼等)。在另一些实施方案中，结合化疗向需要这种治疗 的患者给药本发明的代谢产物，所述化疗除了使用至少一种钼络合物(如卡钼、顺钼等) 外，还使用至少一种紫杉烷(如紫杉醇或多西紫杉醇)。这类代谢产物的剂量范围可在约 0. 0004至约0. 5mmol/kg (毫摩尔代谢产物/千克患者体重)，以摩尔计的该剂量对应于约 0. 1至约100mg/kg BA的范围。代谢产物的其他有效剂量范围为0. 0024-0. 5mmol/kg和 0. 0048-0. 25mmol/kg。这样的剂量可以每天一次、每隔一天一次、每周两次、每周一次、每两 周一次、每月一次或其他适宜的方案给药。对于代谢产物可采用与BA基本上一样的给药方 式，如口服、静脉注射、腹腔内注射等。紫杉烷
紫杉烷是从太平洋紫杉树(Taxus brevifolia)的树枝、针叶和树皮获得的药物。 尤其是，通过已知的合成方法从10-脱乙酰基浆果赤霉素衍生的紫杉醇。紫杉烷如紫杉醇 及其衍生物多西紫杉醇对各种类型的肿瘤显示了抗肿瘤活性。紫杉烷通过使微管结构超稳 定化而干扰正常的微管生长功能，从而破坏细胞以正常方式利用其细胞骨架的能力。尤其 是，紫杉烷与作为微管结构单元的微管蛋白的β亚单元结合。生成的紫杉烷/微管复合 物不能分解，从而导致异常的细胞功能和最终的细胞死亡。通过与名为Bcl-2(B细胞白血 病-2)的凋亡抑制蛋白的结合，紫杉醇诱导癌细胞中的程序化细胞死亡(凋亡)，从而防止 Bcl-2抑制细胞凋亡。因此已证明，通过在细胞分裂过程中打断正常的细胞骨架排列来下调 细胞分裂，并通过抗Bcl-2机理来诱导凋亡，紫杉醇可有效地治疗各种各样的癌症。取决于患者的身高、体重、健康状况、肿瘤大小和发展状态等，紫杉醇的剂量可以 改变。在一些实施方案中，紫杉醇的剂量范围为约100至约1500mg/m2、约200至约1250mg/ m2、约500至约1000mg/m2、约700至800mg/m2或约750mg/m2紫杉醇，在最多约10小时、最 多约8小时或最多约6小时的一段时间内给药。在此上下文中，术语“约”表示近似的正常 用量；在一些实施方案中表示士 10%或士5%的容忍限。紫杉烷的实例包括但不限于多西紫杉醇、紫杉醇以及白蛋白结合紫杉醇 (Abraxane)。&[^iifr (combination therapy)在本发明的一些实施方案中，本发明的方法进一步包括通过向受试者给药PARP 抑制剂(有或没有至少一种抗肿瘤剂)以及与下述其它抗癌治疗组合来治疗乳腺癌，所述 其它抗癌治疗包括，但不限于手术、放射疗法(如X射线)、基因疗法、免疫疗法、DNA疗法、 辅助性疗法、新辅助性疗法、病毒疗法、RNA疗法或纳米疗法。当组合治疗进一步包括非药物治疗时，所述非药物治疗可在任何时间进行，只 要治疗药物与非药物治疗的组合的共同作用获得有益效果。例如，在适合的病例中，当 非药物治疗暂时从给药治疗药物中移除明显的一段时间时，仍然获得有益效果。缀合物 (conjugate)和其它药理学活性药物可以同时地、顺序地或组合向患者给药。应理解，当使 用本发明的组合时，本发明的化合物和其它药理学活性药物可以在相同的药学可接受的载 体中，且因此同时给药。它们可以在同时服用的分开的药学载体(如常规口服剂型)中。术 语"组合"还涉及下述情况，其中以分开的剂型提供所述化合物，且顺序给药。放射治疗放射疗法(或放射治疗)为电离辐射作为癌症治疗的一部分以控制恶性细胞的医 学用途。放射治疗可用于治愈性或辅助性癌症治疗。其用作姑息疗法(其中不可能治愈， 且目标是局部疾病控制或症状缓解)或作为治疗性治疗(其中治疗具有存活益处，且其可 被治愈)。放射治疗用于治疗恶性肿瘤，且可以用作初始治疗(primary therapy)。还通常 将放射治疗与手术、化学疗法、激素疗法或其一些混合形式组合。大多数常见的癌症类型能 够用放射治疗以一些方式治疗。精确的治疗目的(治愈、辅助性、新辅助性、治疗或姑息) 将取决于肿瘤的类型、位置和阶段，以及患者的总体健康。放射疗法通常用于癌性肿瘤。放射区域也可包括引流淋巴结，如果它们临床上或 放射学上与肿瘤相关，或如果认为有亚临床恶性扩散的风险。需要包括围绕肿瘤的正常组 织的边缘以考虑每天情况的变化和内部肿瘤的动向。
放射疗法通过破坏细胞的DNA起作用。该破坏通过光子、电子、质子、中子或离子 束直接或间接离子化组成DNA链的原子而产生。由于水的离子化发生直接离子化，形成自 由基，特别是羟基自由基，然后其破坏DNA。在最常见的放射疗法形式中，大多数放射效果是 通过自由基。由于细胞具有修复DNA损伤的机制，在两条链上都破坏DNA证实是改变细胞 特性的最有效的技术。由于癌细胞通常是未分化的和干细胞样的，所以它们复制的更多，且 与大多数健康分化的细胞相比对于修复亚致死性损伤的能力降低。DNA损伤是通过细胞分 裂传递的，将损伤蓄积到癌细胞中，使它们死亡或复制更慢。质子放射治疗通过发出改变动 能的质子以精确地停止在肿瘤处。γ射线也用于治疗一些类型的癌症，包括乳腺癌。在称作Y刀手术的方法中，多 个浓集的Y射线束直接作用于生长以杀死癌细胞。来自不同角度的光束使辐射集中作用 于生长，同时使周围组织的损伤最小化。在一些实施方案中，Y射线被用于治疗三重阴性乳癌，在实施例9中举例说明。基因疗法药物基因疗法药物将基因拷贝插入到患者细胞的特定位点，且能够靶向癌细胞和非癌 细胞。基因疗法的目标是用功能性基因替换改变的基因，以激发患者对于癌症的免疫应答， 使癌细胞对于化学疗法更敏感，以将“自杀”基因置于癌细胞中，或抑制血管发生。基因可 以使用病毒、脂质体、或其它载体或携带体递送到靶细胞。这可以通过将基因-载体组合物 直接注射到患者中，或用体外感染的细胞回输至患者中来进行。这样的组合物适于用于本 发明中。辅助性治疗(adjuvant therapy)辅助性治疗是在主要治疗措施后给予的治疗，以提高治愈机会。辅助性治疗可包 括化疗、放射治疗、激素治疗或生物治疗。由于辅助性治疗的主要目的是杀死任何可能已扩散的癌细胞，所以治疗通常是全 身性的(使用通过血液传送的物质，达到和影响全身的癌细胞)。乳腺癌的辅助性治疗涉及 化疗或激素治疗，可以单独或组合的方式辅助性化疗是利用药物来杀死癌细胞。研究表明，使用化疗作为早期乳腺癌的辅 助性治疗有助于防止原来的癌症复发。辅助化疗通常是抗癌药物的组合，业已证明比单一 抗癌药物更有效。辅助性激素治疗去除了癌细胞中的女性激素雌激素，雌激素是一些乳腺癌细胞繁 殖时所需要的。在最经常的情况下，辅助性激素治疗是用他莫昔芬药物治疗。研究表明，当 他莫昔芬用于早期乳腺癌的辅助性治疗时，它有助于防止原来的癌症复发，也有助于防止 新的癌症在另一个乳腺发展。卵巢是更年期前雌激素的主要来源。对于患有乳腺癌的绝经前妇女，辅助性激素 治疗可能涉及用他莫昔芬来去除肿瘤细胞的雌激素。抑制卵巢产生雌激素的药物正在研究 之中。作为一种选择，可进行手术以摘除卵巢。放射治疗有时作为局部的辅助性治疗使用。当放射治疗在乳房切除术之前或之后 进行时，它被认为是辅助性治疗。这种治疗的目的是破坏已扩散到身体邻近部位如胸壁或 淋巴结的乳腺癌细胞。当在乳房保留手术后进行放射治疗时，它是主要治疗的组成部分，而 不是辅助性治疗。
f _|i]t生治# (neoadjuvant therapy)新辅助性治疗是指在主要治疗之前提供的治疗。新辅助性治疗的实例包括化疗、 放射治疗和激素治疗。在治疗乳腺癌过程中，新辅助性治疗使得大面积乳腺癌患者可采取 乳房保留手术。溶瘤病毒疗法(oncolytic viral therapy)对于癌症的病毒疗法使用一类称为溶瘤病毒的病毒。溶瘤病毒为能够感染和裂解 癌细胞的病毒，同时对正常细胞无害，使得它们在癌症治疗中是潜在有用的。溶瘤病毒的复 制促进肿瘤细胞的破坏，而且还在肿瘤位点产生剂量放大。它们还可作为抗癌基因的载体， 将抗癌基因特异地递送到肿瘤位点。产生肿瘤选择性的2种主要的方法为转导靶向和非转导靶向。转导靶向涉及改 变病毒壳蛋白的特异性，因此增加靶细胞进入同时降低非靶细胞进入。非转导靶向涉及改 变病毒的基因组，使其仅能够在癌细胞中复制。这能够通过转录靶向(其中，将对于病毒复 制必需的基因置于肿瘤特异性启动子的控制下)，或通过衰减(attenuation)(其涉及将缺 失引入到病毒基因组，以消除在癌细胞中非必需的而在正常细胞中必需的功能)实现。还 有其它较不著名的方法。Chen等人(2001)在小鼠中前列腺癌上使用CV706 (前列腺-特异性腺病毒)与放 射治疗组合。组合治疗导致细胞死亡发生协同性增加，以及病毒释放规模(从每次细胞裂 解中释放的病毒颗粒的数量)明显增加。0NYX-015已经进行了与化学疗法组合的实验。组合治疗与每个单独治疗相比提供 了更好的响应，但结果还尚未完全定论。0NYX-015已经显示出有希望与放射治疗组合。静脉给药病毒剂能够尤其有效地抵抗对于常规治疗尤其困难的转移的癌症。然 而，血液传播病毒可能被抗体灭活，并通过如库弗细胞(肝中活性很高的吞噬细胞，其负责 腺病毒清除)迅速从血流中清除。逃避免疫系统直到肿瘤被破坏可能是溶瘤病毒治疗成功 的最大障碍。至今，用于逃避免疫系统的技术都不能完全满意。正是与常规癌症治疗结合， 溶瘤病毒方表现出最有希望，因为组合治疗协同进行而没有明显不良作用。溶瘤病毒的特异性和适应性是指它们具有治疗广泛的癌症(包括乳腺癌)而具有 最小的副作用的潜力。溶瘤病毒具有解决选择性杀死癌细胞的问题的潜力。纳米治疗纳米-大小的颗粒具有新颖的光学、电子、和结构特性，这些特性在单个分子或 大块固体中是不可用的。当与肿瘤靶向部分如肿瘤特异性配体或单克隆抗体连接时， 这些纳米颗粒能够用于以高亲和性和精确性靶向癌症特异性受体、肿瘤抗原(生物标 记)和肿瘤脉管系统。用于癌症纳米治疗的制剂和制备方法描述于美国专利7179484， 禾口文章 M. N. Khalid, P. Simard, D. Hoarau, A. Dragomir, J. Leroux, Long Circuiting Poly (Ethylene Glycol)Decorated LipidNanocapsules Deliver Docetaxel to Solid Tumors, Pharmaceutical Research, 23 (4), 2006 中，所有在此完整引入作为参考。RNA 治疗包括但不限于siRNA、shRNA或微小RNA的RNA可用于调节基因表达和治疗癌症。 双链寡核苷酸通过将2个不同的寡核苷酸序列组装而形成，其中一条链的寡核苷酸序列 与第二条链的寡核苷酸序列互补；该双链寡核苷酸通常由2个分别的寡核苷酸组装(如，siRNA)，或由自身折叠形成双链结构的单一分子组装(如，shRNA或小发夹RNA)。本领域中 已知的这些双链寡核苷酸均具有共同的特征，即双链每条链具有不同的核苷酸序列，其中 仅有一个核苷酸序列区域(指导序列或反义序列)与靶核酸序列具有互补性，且另一条链 (有义序列)包含与靶核酸序列同源的核苷酸序列。微小RNAs(miRNA)为长度为约21_23个核苷酸的单链RNA分子，其调节基因表 达。miRNAs由从DNA转录的但没有翻译为蛋白质的基因编码(非编码RNA)；而它们从称为 pri-miRNA的初级转录物加工成称为前-miRNA的短的茎-环结构，并最终成为功能miRNA。 成熟的miRNA分子与一个或多个信使RNA(mRNA)分子部分互补，且它们的主要功能是下调
基因表达。一些RNA抑制剂可用于抑制与癌症表型相关的信使RNA (“mRNA”)的表达或翻译。 适合本文使用的这些试剂的实例包括，但不限于，短干扰性RNA( “siRNA”)、核酶和反义寡 核苷酸。适合用于本文的RNA抑制剂的具体实例包括，但不限于Cand5、Sima-027、福米韦 生禾口 angiozyme。小分子酶抑制剂一些小分子治疗药物能够靶向酪氨酸激酶活性或一些细胞受体(如表皮生长因 子受体(“EGFR”)或血管内皮生长因子受体(“VEGFR”))的下游信号转导信号。通过小分 子治疗的该靶向能够产生抗癌效果。适合用于本文的这些药物的实例包括，但不限于，伊马 替尼、吉非替尼、厄洛替尼、拉帕替尼、卡奈替尼、ZD6474、索拉非尼(BAY 43-9006)、ERB_569 及它们的类似物和衍生物。抗转移剂癌细胞从原始肿瘤的位置扩散到身体的其他位置的过程称为癌转移。一些药物具 有抗转移特性，设计为用于抑制癌细胞扩散。适合用于本文的这些药物的实例包括，但不 限于，马立马司他、贝伐单抗、曲妥单抗、利妥昔单抗、厄洛替尼、匪1-166、GRN163L、猎杀肽 (hunter-killer peptides)、金属蛋白酶类的组织抑制剂(TIMPs)、它们的类似物、衍生物 和变体。化学预防药物一些药物可用于预防癌症的原始发生，或预防复发或转移。给予这些化学预防药 与本发明的依洛尼塞-NSAID缀合物的组合能够用作治疗和预防癌症的复发。适合用于本 文的化学预防药物的实例包括，但不限于，它莫西芬、雷洛昔芬、替勃龙、二膦酸盐类、伊班 膦酸盐、雌激素受体调节剂、芳香酶抑制剂(来曲唑、阿那曲唑)、促黄体生成激素_释放 激素激动剂、戈舍瑞林、维生素A、视黄醛、视黄酸、芬维A胺、9-顺-类视黄酸(retinoid acid)、13-顺-类视黄酸、全-反-视黄酸、异维A酸、维甲酸、维生素B6、维生素B12、维生 素C、维生素D、维生素E、环氧合酶抑制剂、非留抗炎药(NSAIDs)、阿司匹林、布洛芬、塞来 考昔、多酚、多酚E、绿茶提取物、叶酸、葡萄糖二酸、干扰素-α、茴香脑二硫杂环戊二烯硫 酮(anethole dithiolethione)、锌、吡哆醇、非那雄胺、多沙唑嗪、硒、吲哚_3_甲醛、α-二 氟甲基鸟氨酸、类胡萝卜素、胡萝卜素、番茄红素、抗氧化剂、辅酶Q10、黄酮类、槲皮素、 姜黄、儿茶素、表没食子儿茶素没食子酸酯、N-乙酰基半胱氨酸、吲哚-3-甲醇、六磷酸肌醇 酯、异黄酮、葡萄糖酸、迷迭香、大豆、沙巴棕和钙。适合用于本发明的化学预防药物的其它 实例为癌症疫苗。这些可以通过使用经疫苗铺种过程而靶向的全部或部分癌细胞类型免疫患者而制备。临床疗效乳腺癌分期0期是用于描述非浸润性乳腺癌，如DCIS和LCIS。在0期，没有证据显示癌细胞 或非癌异常细胞突破它们起源的那部分乳房，或扩散至或侵入邻近的正常组织。I期描述浸润性乳腺癌(癌细胞突破或侵入邻近的正常组织)，其中肿瘤尺寸达2 厘米，且不涉及淋巴结。II期又分为IIA和IIB两个亚类。IIA期描述这样一种浸润性乳腺癌，其中在乳 房内未能发现肿瘤，但在腋淋巴结(腋下淋巴结)发现癌细胞，或者肿瘤尺寸为2厘米或以 下，且已扩散到腋淋巴结，或者肿瘤大于2厘米，但不大于5厘米，且没有扩散到腋淋巴结。 IIB期描述这样一种浸润性乳腺癌，其中肿瘤大于2厘米，但不大于5厘米，且已扩散到腋淋 巴结，或肿瘤大于5厘米，但尚未扩散到腋淋巴结。III期又分为IIIA、IIIB和IIIC三个亚类。IIIA期描述这样一种浸润性乳腺癌， 其中在乳房内未发现肿瘤。在腋淋巴结发现癌，淋巴结粘连成块或粘在其他结构上，或癌症 可能已经扩散到胸骨附近的淋巴结，或肿瘤为5厘米或小于5厘米，且已扩散到腋淋巴结， 淋巴结粘连成块或粘在其他结构上，或肿瘤大于5厘米，且已扩散到腋淋巴结，淋巴结粘连 成块或粘在其他结构上。IIIB期描述浸润性乳腺癌，其中的肿瘤可能是任何尺寸，且已扩散 至胸壁和/或乳房表皮，且可能已扩散到腋淋巴结，淋巴结粘连成块或粘在其他结构上，或 癌症可能已扩散到胸骨附近的淋巴结。IIIC期描述这样一种浸润性乳腺癌，其中在乳房可 能没有患癌症的迹象，或如果有肿瘤，它可以是任何尺寸，且可能已扩散至胸壁和/或乳房 表皮，或癌细胞已经扩散到锁骨上方或下方的淋巴结，以及癌症可能已经扩散到腋淋巴结 或胸骨附近的淋巴结。临床疗效可以本领域已知的任何方法衡量。在一些实施方案中，本文所述的临床 治疗疗效可通过测量临床受益率(CBR)来确定。临床受益率是在治疗结束后至少6个月的 某个时间，通过确定完全缓解(CR)患者的百分比，部分缓解(PR)患者的百分比和病情稳定 (SD)患者的百分比的总和来衡量的。此公式的简写是CBR = CR+PR+SD彡6个月。用吉西 他滨和卡钼组合治疗的CBR是45%。因此，用抗代谢剂、钼络合物和PARP抑制剂的三重组 合治疗(如吉西他滨、卡钼和BA5CBRra)可与用吉西他滨和卡钼(CBRre)的双重组合治疗相 比较。在一些实施方案中，CBR ；至少约60%。在一些实施方案中，CBR为至少约30%、 至少约40%、或至少约50%。用紫杉醇和卡钼组合治疗的CBR是45%。因此，用紫杉烷、钼 络合物和PARP抑制剂三重组合治疗的CBR(如紫杉醇、卡钼和BA ；CBRgcb)可与用紫杉醇和 卡钼双重组合治疗的CBR(CBRec)相比较。在一些实施方案中，CBRra*至少约60%。在一些实施方案中，CBR为至少约30%、至少约40%、或至少约50%。在一些实施 方案中，治疗效果包括乳房肿瘤尺寸的缩小、转移的减少、完全缓解、部分缓解、病情稳定， 或病理学完全应答。新辅助化疗目前广泛用于治疗局部的或有可能进行手术的大面积乳腺癌。随机试 验已显示新辅助化疗降低了乳房切除术的需要(Powles等人，1995 ；Fisher等人，1998)，与 辅助化疗具有相似的整体存活率(Fisher等人，1998)。在手术时进行的化疗之后达到无 残余肿瘤组织学证据(即病理学完全应答(pathologic complete response) (pCR))的妇女存活率显著提高(Bonadonna等人，1998 ；Fisher等人，1998 ；Kuerer等人，1999)，且pCR 往往用来作为治疗效果的早期替代指标。但是，乳腺肿瘤对新辅助化疗的病理学应答尚无 标准的分级方法，业已提出许多不同的分级系统(Chevallier等人，1993 ；Sataloff等人， 1995 ；Fisher 等人，1997 ；Honkoop 等人，1998 ；Kuerer 等人，1998 ；Ogston 等人，2003)。大 多数但并非所有这些分级制度在PCR的定义中既包括了无任何形式的残留疾病，又包括了 残留原位导管性癌(DCIS)但无浸润性疾病。在本文公开的一些实施方案中，该方法包括预先确定可用PARP调节剂治疗癌症。 一些这样的方法包括鉴定患者的乳腺癌样品中的PARP水平，确定该样品中PARP的表达水 平是否高于预定值，如果PARP的表达高于预定值，则用紫杉烷(如紫杉醇)、钼络合物(如 卡钼)和PARP抑制剂如BA组合治疗患者。在另一些实施方案中，这些方法包括鉴定患者的 乳腺癌样品中的PARP水平，确定该样品中PARP的表达水平是否高于预定值，如果PARP的 表达高于预定值，则用PARP抑制剂如BA治疗患者。在另一些实施方案中，该方法包括预先 确定可用PARP调节剂治疗癌症。一些这样的方法包括鉴定患者的乳腺癌样品中的PARP水 平，确定该样品中PARP的表达水平是否高于预定值，且如果PARP的表达高于所述预定值， 则用抗代谢剂(如吉西他滨)、钼络合物(如卡钼)和PARP抑制剂如BA组合治疗患者。乳腺肿瘤在继承了 BRCAl或BRCA2基因缺陷的妇女身上发生，因为肿瘤细胞丧失 了特定的修复受损DNA的机制。BRCAl和BRCA2对于通过同源重组而进行DNA双链断裂的修 复是重要的，而这些基因突变使得易患乳腺癌和其他癌症。PARP参与碱基切除修复，DNA单 链断裂的修复途径。BRCAl或BRCA2功能不全使得细胞对PARP酶活性的抑制敏感，造成染色 体不稳定、细胞周期停滞以及随后的细胞凋亡(Jones C,Plummer ER. PARPinhibitors and cancer therapy-early results and potential applications. Br JRadiol. 2008 Oct ； 81 Spec No 1:S2_5 ；Drew Y,Calvert H. The potential of PARPinhibitors in genetic breast and ovarian cancers. Ann N Y Acad Sci.2008 Sep ；1138 136-45 ；Farmer H 等人.Targeting the DNA repair defect in BRCA mutantcells as a therapeutic strategy. Nature. 2005 Apr 14；434 (7035) :917_21)。BRCA基因有缺陷的患者其PARP水平可能上调。PARP的上调可作为有缺陷的DNA 修复途径及未识别的BRCA样遗传缺陷的指标。对于PARP基因表达和受损的DNA修复尤其 是有缺陷的同源重组DNA修复的评估可作为肿瘤对PARP抑制剂的敏感性指标。因此，在一 些实施方案中，不仅可以通过确定癌症的HR和/或HER2状况，还可以通过测量PARP水平 而鉴定BRCA和同源重组DNA修复有缺陷的患者中癌症的早期发作来加强乳腺癌治疗。如 果PARP水平上调，就可以识别可用PARP抑制剂治疗的BRCA和同源重组DNA修复有缺陷的 患者。此外，这些同源重组DNA修复有缺陷的患者是可以用PARP抑制剂治疗的。在一些实施方案中，从具有疑为癌变的乳房病变或增生的患者采集样品。虽然这 种样品可以是任何生物组织，但在大多数情况下，样品将是疑为乳房病变的一部分，无论是 通过微创活检或治疗手术的方式采集(如乳房肿瘤切除术，乳房切除术，部分或改良的乳 房切除术或根治性乳房切除术，子宫切除术，或卵巢切除术)。这种样品也可能包括在治疗 手术期间提取的一个或多个淋巴结的全部或一部分。然后就可分析PARP的表达。在一些 实施方案中，如果PARP的表达高于预定水平(例如相对于正常组织上调)，那么患者就可 以用PARP抑制剂组合抗代谢剂和钼剂治疗。在另一些实施方案中，如果PARP的表达高于预定水平(例如相对于正常组织上调)，那么患者就可能用PARP抑制剂治疗，包括如BA的 PARP抑制剂。因此，应该理解，虽然本文所述的实施方案是针对三重阴性转移性乳腺癌的治 疗，但在一些实施方案中，乳腺癌并非必须具有这些特点，只要达到PARP上调阈值即可。在一些实施方案中，同源重组缺陷型肿瘤是通过评估PARP的表达水平而鉴定的。 如果观察到PARP的上调，那么这种肿瘤就可以用PARP抑制剂治疗。另一个实施方案是治 疗同源重组缺陷型癌症的方法，包括评估PARP的表达水平，如果观察到过表达，那么此癌 症就可用PARP抑制剂治疗。样品采集、制备和分离生物学样品可从患者的多种来源收集，包括体液样品或组织样品。收集的样品可 以为人正常样品和肿瘤样品，乳头抽吸物(nipple aspirants) 0样品可以经一段时间从个 体中重复收集(如，约一天1次，一周1次，一月1次，半年1次或一年1次)。经一段时间 从个体获得的多种样品可以用于验证早期检测的结果和/或鉴定生物学模型由于例如疾 病进展、药物治疗等产生的改变。样品制备和分离可涉及任何方法，这取决于所收集的样品的类型和/或PARP的分 析。这些方法包括(仅为示例)浓缩、稀释、调节PH、移除高丰度的多肽(如，白蛋白、Y-球 蛋白和转铁蛋白等)、加入防腐剂和校准物、加入蛋白酶抑制剂、加入变性剂、使样品脱盐、 浓缩样品蛋白、提取和纯化脂质。样品制备也可以分离以非共价键与其它蛋白(如，载体蛋白)复合的分子。该方 法可分离那些与特定载体蛋白(如，白蛋白)结合的分子，或使用更一般性的方法，如通过 蛋白质变性(例如使用酸)从所有载体蛋白上释放结合的分子，然后移除载体蛋白。从样品中移除不需要的蛋白质(如，高丰度的、无益的或不可检测的蛋白)可使用 高亲和试剂、高分子量滤膜、超速离心和/或电渗析进行。高亲和试剂包括抗体或其它试剂 (如，适体)，其选择性结合高丰度的蛋白质。样品制备也可以包括离子交换色谱、金属离子 亲和色谱、凝胶过滤、疏水性色谱、色谱聚焦、吸附色谱、等电聚焦和相关的技术。分子量滤 膜包括根据大小和分子量分离分子的膜。该滤膜还可使用反渗透、纳米过滤、超滤和微孔过 滤ο超速离心为从样品中移除不需要的多肽的方法。超速离心以约15，000-60, OOOrpm 离心样品，同时用光学系统监测颗粒沉积(或没有沉积)。电渗析为使用电性膜或半透膜的 方法，在该过程中在电势梯度的影响下离子通过半透膜从一种溶液转移到另一种溶液。由 于电渗析中使用的膜可具有选择性传递带有正电或负电荷的离子的能力，排斥相反电荷的 离子，使得物质根据大小和电荷通过半透膜，因此电渗析对于浓缩、移除或分离电解质是有 用的。本发明中的分离和纯化可包括本领域中已知的任何方法，如毛细管电泳(如，在 毛细管中或芯片上)或色谱法(如，在毛细管中、柱子中或芯片上)。电泳为可用于在电场 的影响下分离离子分子的方法。电泳可在凝胶中、毛细管中、或芯片的微通道中进行。用于 电泳的凝胶的实例包括淀粉、丙烯酰胺、聚氧化乙烯、琼脂糖或其组合。凝胶可通过下述方 法改性自交联、加入清洁剂或变性剂、酶或抗体的固定(亲和电泳)或底物的固定(酶谱 法)和引入PH梯度。用于电泳的毛细管的实例包括与电喷雾接口的毛细管。毛细管电泳(CE)优选用于分离复合的亲水性分子和高带电的溶质。CE技术也可应用到微流芯片上。根据所用的毛细管和缓冲液的类型，CE可进一步分为各种分离技术， 如毛细管区域电泳(CZE)、毛细管等电聚焦(CIEF)、毛细管等速电泳(cITP)和毛细管电色 谱法(CEC)。偶联CE技术与电喷雾离子化的实施方案包括使用挥发性溶液，例如，包含挥发 性酸和/或碱和有机物(如醇或乙腈)的水性混合物。毛细管等速电泳(cITP)为其中被分析物以恒定的速度移动通过毛细管但由于它 们各自的移动性不同而被分离的技术。毛细管区域电泳(CZE)，也称为自由溶液CE (FSCE)， 基于物质的电泳移动性的差异(由分子上的电荷确定)和移动过程中分子遇到的摩擦力 (其通常与分子的大小成正比)。毛细管等电聚焦(CIEF)使得可较弱电离的两性分子通过 电泳在PH梯度中分离。CEC为传统高效液相色谱法(HPLC)和CE之间的杂合技术。本发明中所用的分离和纯化技术包括本领域中已知的任何色谱法。色谱法可基于 一些被分析物的吸附和洗脱的差异，或被分析物在流动相和固定相之间的分配。色谱法的 不同实例包括，但不限于，液相色谱法(LC)、气相色谱法(GC)、高效液相色谱法(HPLC)等。鉴定PARP水平聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)(poly (ADP-ribose) polymerase))又称为聚 (ADP-核糖)合成酶和多聚ADP-核糖转移酶。PARP催化单和聚(ADP-核糖)聚合物 的形成，它们可附着于细胞蛋白(以及其本身)从而改变这些蛋白的活性。这种酶在 转录调节、细胞增殖以及染色质重塑等方面都起作用(关于综述，参阅D.D’ amours等 人· "Poly(ADP-ribosylation reactions in theregulation of nuclear functions", Biochem. J. 342 249-268(1999))。PARP包含N端DNA结合域、自身修饰域和C端催化域且多种细胞蛋白与PARP相 互作用。N端DNA结合域包含两个锌指基序。转录增强因子-I(TEF-I)、类视黄醇X受体 α、DNA聚合酶α、Χ_射线修复交叉互补因子_1 (XRCCl)和PARP本身在此结合域内与PARP 相互作用。自身修饰域包含BRCT基序、一种蛋白-蛋白相互作用模块。此基序最初是在 BRCAl (乳腺癌易感蛋白1)的C端发现的，并存在于与DNA修复、重组和细胞周期检查点控 制相关的各种蛋白中。含有POU同源结构域的八聚体转录因子-I(Oct-I)，Yin Yang(YY)I 和遍在蛋白9 (ubc9)能够与PARP中的BRCT基序相互作用。PARP基因家族的超过15个成员存在于哺乳动物基因组中。PARP家族蛋白和聚 (ADP-核糖)糖水解酶(PARG)(其将聚(ADP-核糖)降解为ADP-核糖)，可参与到多种细 胞调节功能中，包括DNA损伤响应和转录调节，且与致癌作用和癌症的生物学在许多方面 中相关。已经鉴定了一些PARP家族蛋白。已经发现端锚聚合酶为端粒调节因子1 (TRF-I) 的相互作用蛋白，且参与端粒调节中。穹窿体PARP (Vault PARP) (VPARP)为穹窿体复合物 (vault complex)(其作为核_细胞质运载体)中的成分。已经鉴定了 PARP-2、PARP-3和 2,3,7,8-四氯二苯并-对-二噁英可诱导的PARP (TiPARP)。因此，聚(ADP-核糖)代谢可 与多种细胞调节功能相关。该基因家族中的一员为PARP-I。PARP-I基因产物在细胞核中以高水平表达，且依 赖于DNA损伤而活化。不受任何理论限制，认为PARP-I通过氨基末端DNA结合域结合至 DNA单链或双链断链。该结合活化了羧基末端催化域，且导致形成ADP-核糖在靶分子上的 聚合物。由于位于中间的自身修饰域，PARP-I自身为聚ADP-核糖基化的靶点。PARP-I的核糖基化导致PARP-I分子从DNA上分离。结合、核糖基化和分离的整个过程发生得非常迅 速。已经有人提出PARP-I与DNA损伤位点的瞬时结合导致DNA修复系统(machinery)的 募集，或可作用于抑制重组足够长的时间以募集修复系统。PARP反应的ADP-核糖源为烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)。NAD在细胞中从细胞 ATP库合成，且因此PARP活性的高水平活化可迅速导致细胞能量库的耗竭。已经证明PARP 活性的诱导能够导致细胞死亡，其与细胞NAD和ATP库耗竭相关。在许多氧化应激的实例 中或炎症过程中PARP活性被诱导。例如，缺血组织再灌注过程中，产生反应性一氧化氮，且 一氧化氮导致其它反应性氧物质包括过氧化氢、过氧化硝酸盐和羟基自由基的产生。后述 的这些物质可直接损伤DNA，且产生的损伤诱导PARP活性的活化。通常，似乎发生PARP活 性的充分活化，使得细胞能量库耗竭且细胞死亡。认为在炎症过程中发生相似的机理，这时 内皮细胞和促炎细胞合成一氧化氮，其在周围细胞中产生氧化性的DNA损伤，且随后活化 PARP活性。由PARP活化导致的细胞死亡据信是对组织损伤(由于缺血-再灌注或炎症导 致的)程度的起主要贡献的因素。在一些实施方案中，PARP在来自患者的样品中的水平与预先确定的标准样品进行 比较。来自患者的样品通常来自疾病组织，如癌细胞或组织。标准样品可来自相同患者或 来自不同的受试者。标准样品通常为正常的、无病变样品。然而，在一些实施方案中，如为 了将疾病分期或为了评估治疗效果，标准样品来自疾病组织。标准样品可以是来自几个不 同受试者的样品的组合。在一些实施方案中，来自患者的PARP的水平与预定的水平相比。 该预定的水平通常来自正常样品。如本文所述的，“预定的PARP水平”可以为用于下述用 途的PARP水平，例如，评估可被选择用于治疗的患者，评估对PARP抑制剂治疗的响应，评估 对PARP抑制剂和第二种治疗剂组合治疗的响应，和/或诊断患者的癌症、炎症、疼痛和/或 相关病症。预定的PARP水平可在患有或没有癌症的患者人群中测定。预定的PARP水平可 以为单个数值，相等地可用于每个患者，或预定的PARP水平可根据患者的具体的亚群而改 变。例如，男性可能具有与女性不同的预定的PARP水平；不吸烟者可能具有与吸烟者不同 的预定的PARP水平。患者的年龄、体重和身高可能影响个体的预定的PARP水平。而且，预 定的PARP水平可以是对于每个患者个别测定的水平。预定的PARP水平可以为任何适合的 标准。例如，预定的PARP水平可以来自与正在进行患者选择评估后的人相同或不同的人。 在一个实施方案中，预定的PARP水平可以来自同一患者的以前的评估。以此方式，可以随 时间监测患者选择的进程。而且，标准可以来自其他一个或多个人(例如，被选择的人群) 的评估。在该方案中，对于选择性正在被评估的人的选择程度，可以与适合的其他人进行比 较，所述其他人是与所关注的人具有相似情况的人，如患有相似或相同病症的那些人。在本发明的一些实施方案中，PARP从预定水平发生的变化为约0. 5倍、约1. 0倍、 约1. 5倍、约2. 0倍、2. 5倍、约3. 0倍、3. 5倍、约4. 0倍、约4. 5倍、约5. 0倍。在一些实施 方案中，倍数变化为约小于1、约小于5、约小于10、约小于20、约小于30、约小于40或约小 于50。在另一些实施方案中，PARP水平相对于预定水平的变化为约大于1、约大于5、约大 于10、约大于20、约大于30、约大于40，或约大于50。优选的相对于预定水平的倍数变化为 约0. 5、约1. 0、约1. 5、约2. 0、约2. 5以及约3. 0。患者中PARP水平的分析是尤其有价值的和有信息的，因为其使得医师根据PARP 的上调或下调的水平更有效的选择最好的治疗，以及使用更有力的治疗和治疗方案。更有力的治疗，或治疗和治疗方案的组合能够抵消患者的较差预后和总体存活时间。具有这些 信息，医药从业者能够选择提供一些类型的治疗，如用PARP抑制剂和/或更有力的疗法的 治疗。在检测患者的PARP水平中，随时间(其可以为几天、几周、几个月，且在一些情况 中几年，或其多种间隔)，患者的体液样品(如血清或血浆)可间隔收集(时间间隔由从业 者(如医师或临床医生)确定)，以测定PARP的水平，并与治疗过程中的正常个体的水平 比较。例如，根据本发明，患者样品可每月、每2个月或1、2或3个月间隔的组合进行采集 和监测。而且，在监测期间，随时间获得的患者的PARP水平可方便地彼此之间进行比较，以 及与正常对照的PARP值比较，由此提供患者自身的PARP值，作为内部的或个人的用于长期 PARP监测的对照。PARP的分析技术 PARP的分析可包括PARP基因表达的分析，包括DNA、RNA的分析，PARP水平的分析 和/或PARP活性的分析，包括单和多聚ADP核糖基化水平的分析。不限制本发明的范围， 本领域内已知的任何技术均可用于PARP的分析，且它们都属于本发明的范围。下面举出这 类检测技术的一些实例，但这些实例决不限制可用于本发明的各种各样的检测技术。基因表达谱基因表达分析方法包括基于多核苷酸杂交分析的方法、基于多核 苷酸测序的多核糖核苷酸方法，以及基于多核糖核苷酸和蛋白质组学的方法。本领域内 已知的最常用的样品中mRNA表达的定量方法包括RNA印迹法和原位杂交法(Parker & Barnes, Methods in Molecular Biologyl06 :247_283 (1999)) ;RNA 酶保护分析法(Hod， Biotechniques 13:852-854(1992))以及基于PCR的方法，如逆转录聚合酶链式反应 (RT-PCR)技术(Weis et al.，Trends in Genetics 8 :263_264 (1992))。或者，也可使用能 识别特定双链包括DNA双链，RNA双链以及DNA-RNA杂交双链或DNA-蛋白质双链的各种抗 体。代表性的基于测序的基因表达分析方法包括基因表达系列分析(SAGE)、基于大规模平 行信号测序(MPSS)的基因表达分析、比较基因组杂交技术(CGH)、染色质免疫沉淀(ChIP)、 单核苷酸多态性(SNP)和SNP阵列、荧光原位杂交(FISH)、蛋白结合阵列和DNA微阵列(通 常也称为基因或基因组芯片、DNA芯片，或基因微阵列)，以及RNA微阵列。逆转录酶PCR(RT-PCR)—种最灵敏、最灵活的基于定量PCR技术的基因表达分析 方法是RT-PCR，它可用于比较不同样品群、正常组织和肿瘤组织(经药物治疗或无药物治 疗)中的mRNA水平，以描述基因表达模式的特征，区别密切相关的mRNA，并分析RNA结构。第一步是从目标样品分离mRNA。例如，初始原料通常可以是从人类肿瘤或肿瘤细 胞系分离的总RNA，以及分别相应的正常组织或细胞系。因此，可以从各种各样的正常和病 变细胞和组织例如肿瘤分离RNA，包括乳房、肺、结肠、前列腺、脑、肝、肾、胰、脾、胸腺、睾丸、 卵巢、子宫等，或肿瘤细胞系。如果mRNA来源是原发性肿瘤，则可从冷冻或封存的固定组织 如石蜡包埋和固定(如福尔马林固定)的组织样品提取mRNA。提取mRNA的一般方法是本 领域内众所周知的，并已公开于标准的分子生物学教科书，包括Ausubel et al. , Current Protocols of Molecular Biology, John Wiley andSons(1997)。尤其是，可使用制造商提供的纯化试剂盒、配套缓冲液和蛋白酶，根据制造商的说 明进行RNA分离。例如，可以氯化铯密度梯度离心法分离从肿瘤制备的RNA。由于RNA不能 作为PCR的模板，用RT-PCR进行基因表达分析的第一步是将RNA模板逆转录成cDNA，然后在PCR反应中进行其指数扩增。两种最常用的逆转录酶是avilo成髓细胞白血病病毒逆转 录酶(AMV-RT)和莫洛尼氏鼠白血病病毒逆转录酶(MMLV-RT)。逆转录步骤通常是用特异性 引物、随机六聚体，或寡聚dT引物引发，这取决于表达分析的情况和目标。然后，在随后的 PCR反应中可使用衍生的cDNA作为模板。为了尽量减少误差和不同样品之间变化的影响，通常使用内标进行RT-PCR。理想 的内标是在不同组织之间以恒定的水平表达，且并不受实验处理的影响。最常用于基因表 达模式归一化的RNA是管家基因甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)和β-肌动蛋白的mRNA。RT-PCR技术最新的变化是实时定量PCR，它通过双标记荧光探针测量PCR产物积 累。实时定量PCR技术与定量竞争PCR和定量比较PCR都相容。在定量竞争PCR中，将每 个靶序列的内部竞争者用于归一化。定量比较PCR则使用样品内所含的归一化基因，或 RT-PCR的管家基因。荧光显微术本发明的一些实施方案包括用于分析PARP的荧光显微术。荧光显微 术使得所观察的结构分子组成能够用高度化学特异性的荧光标记探针如抗体加以鉴定。这 可通过使荧光团与蛋白直接缀合并引回细胞而实现。荧光类似物可以像天然蛋白一样起作 用，因此可用来揭示此蛋白在细胞内的分布和表现。与NMR、红外光谱、圆二色谱及其他技术 一起，蛋白质固有的荧光衰减及其相关的荧光各向异性观察，碰撞猝灭和共振能量转移都 是蛋白检测的技术。天然荧光蛋白可作为荧光探针使用。水母荧光蛋白产生一种被称为绿 色荧光蛋白(GFP)的天然荧光蛋白。这些荧光探针与靶蛋白的融合使得能通过荧光显微镜 实现可视化和通过流式细胞仪实现量化。仅作为举例而已，一些探针是标记物，如荧光素及其衍生物、羧基荧光素、罗丹明 及其衍生物、阿托标签、荧光红、荧光橙cy3/cy5替代品、长寿命镧系络合物、长波长(最多 800nm)标记、DY花青素标记和藻胆蛋白。仅作为举例而已，一些探针是辍合物，如异硫氰酸 酯辍合物、生物素蛋白辍合物以及生物素辍合物。仅作为举例而已，一些探针是酶底物，如 荧光和显色底物。仅作为举例而已，一些探针是荧光染料，如FITC(绿色荧光，激发/发射 波长=506/529nm)，罗丹明B (橙色荧光，激发/发射波长=560/584nm)，以及尼罗蓝A (红 色荧光，激发/发射= 636/686nm)。荧光纳米粒子可用于各种类型的免疫分析。荧光纳米 粒子是以不同的材料如聚丙烯腈、聚苯乙烯等为基础的。荧光分子转子是微环境限制的传 感器，当它们的旋转受限制时会发出荧光。分子限制的几个实例包括增加染料(聚集)、与 抗体结合，或受肌动蛋白聚合的限制。IEF(等电聚焦)是一种用于两性电解质(主要是蛋 白质)分离的分析工具。使用荧光IEF-标记的IEF-凝胶电泳的优点是有可能直接观察梯 度的形成。荧光IEF-标记也可以UV吸收法于280nm(20°C )监测到。可在固体载体上合成肽库，并通过使用着色受体，逐一选择随后染色的固体载体。 如果受体不能显示任何颜色，它们的结合抗体可被染色。该方法不仅可用于蛋白质受体，还 可用于筛选合成人工受体的结合配体和筛选新的金属结合配体。也可采用HTS和FACS (荧 光激活细胞分选仪)的自动化方法。FACS机器先让细胞通过毛细管，并通过检测细胞的荧 光强度来分离细胞。免疫分析本发明的一些实施方案包括分析PARP的免疫分析。在免疫印迹如电 泳分离蛋白的蛋白质印迹试验中，单个蛋白可通过其抗体来鉴定。免疫分析可以是竞争 性结合免疫分析，其中分析物与标记抗原竞争一些有限的抗体分子(如放射免疫分析法，EMIT)。免疫分析也可以是非竞争性的，其中抗体过量存在并带标记。随着分析物抗原复 合物的增加，标记抗体-抗原复合物的量也可能增加(如ELISA)。如果它们是通过给实验 动物注射抗原的方式产生的，或是单克隆抗体，如果它们是通过细胞融合和细胞培养技术 产生的，抗体可以是多克隆抗体。在免疫分析中，抗体可作为对分析物抗原具有特异性的试 剂。不限制本发明的范围和内容，一些类型的免疫分析是，仅作为举例而已，RIA(放射 免疫分析)、酶免疫分析如ELISA (酶联免疫吸附分析)、EMIT (酶增强免疫分析)、微粒子酶 免疫分析(MEIA)、LIA (发光免疫分析)以及FIA (荧光免疫分析)。这些技术可用于检测 鼻腔样品中的生物物质。该抗体既可作为一抗也可作为二抗。它们可用放射性同位素(如 1251)、荧光染料(如FITC)或可催化荧光反应或发光反应的酶(如HRP或AP)来标记。生物素或维生素H是一种辅酶，它继承了对于抗生物素蛋白和链霉抗生物素蛋白 的特异性亲和力。这种相互作用使得生物素化肽成为各种生物技术分析中定性和定量测试 的有用工具。为了通过最大限度地减小立体位阻而改善生物素/链霉抗生物素蛋白识别， 可能有必要扩大生物素和肽本身之间的距离。这可以通过在生物素和肽之间耦合间隔分子 (如6-硝基己酸)来实现。生物素化蛋白的生物素定量分析提供了灵敏的荧光分析，以准确地确定蛋白上生 物素标记的数目。生物素化肽广泛地用于各种各样的生物医学筛选系统，这些系统要求将 相互作用的物质中至少一种固定在链霉抗生物素蛋白涂覆的珠、膜、玻片或微粒滴定板上。 这项分析是基于用猝灭染料标记的配体从某种试剂的生物素结合位点的位移。为了暴露多 标记蛋白中空间受限制和无法接触该试剂的任何生物素基团，该蛋白质可用蛋白酶处理以 消化该蛋白质。EMIT是竞争性结合免疫分析，避免了通常的分离步骤。这是一种其中的蛋白是酶 标记的免疫分析，且酶-蛋白-抗体复合物是酶失活的，使得能够实现无标记蛋白的定量。 本发明的一些实施方案包括分析PARP的ELISA。ELISA是基于附在固体载体上的选择性抗 体，并与酶反应组合以产生能够检测低水平蛋白质的系统。它又被称为酶免疫分析或EIA。 蛋白是由抗该蛋白的抗体检测的，换言之，它是该抗体的抗原。单克隆抗体是经常使用的。这种测试可能需要将抗体固定在固体表面如试管的内表面上，并需要制备与酶偶 联的同样抗体。这种酶可以是一种能从无色底物产生有色产品的酶(例如半乳糖苷 酶)。这种测试，例如，可通过用待检测的抗原溶液(如蛋白质)充填试管而实现。任何存 在的抗原分子均可与固定的抗体分子结合。可将抗体-酶辍合物加入反应混合物。辍合物 的抗体部分与先前结合的任何抗原分子结合，产生抗体-抗原-抗体“三明治”。洗去任何 未结合的辍合物后，可加入底物溶液。经过一定的时间，终止反应(例如通过加入IN NaOH) 并用分光光度计测量所形成的有色产物的浓度。颜色的强度与所结合抗原的浓度成正比。ELISA法也可用来测量抗体浓度，在这种情况下，培养孔要用相应的抗原涂覆。可 加入含有抗体的溶液(如血清)。在它有足够时间与固定的抗原结合之后，可加入由所测试 抗体的抗体组成的酶-辍合的抗免疫球蛋白。洗去未反应的试剂之后，可加入底物。所产 生的颜色强度与结合的酶标记抗体的数量(从而与所检测抗体的浓度)成正比。本发明的一些实施方案包括放射性免疫分析以分析PARP。放射性同位素可以用 来研究小量化合物的体内代谢、分布以及结合。使用体内放射性同位素1H、12C、31P、32S以及1271，如3H、14C、32P、35S以及125L在96孔板上的受体固定方法中，用抗体或化学方法将受体 固定在每个孔中，并在每孔中加入放射性标记的配体以诱导结合。可洗去未结合的配体，然 后可通过结合配体或洗出配体的放射性定量分析来确定标准。然后，加入筛选目标化合物 可诱导与受体的竞争性结合反应。如果与标准放射性配体相比，该化合物显示出与受体的 较高亲和力，那么大多数放射性配体都不会与受体结合并可以留在溶液中。因此，通过分析 所结合放射性配体(或洗去的配体)的量，即可显示受试化合物与受体的亲和力。当受体无法固定在96孔板上或当配体结合需要在溶液相中进行时，可能需要采 用滤膜法。换言之，在溶液中发生配体_受体结合反应之后，如果反应溶液是通过硝酸纤维 素滤纸过滤的，那么小分子包括配体可能会通过它，只有蛋白受体可能会留在纸上。只有与 受体牢固结合的配体可能留在滤纸上，所添加化合物的相对亲和力可由标准放射性配体的 定量分析确定。本发明的一些实施方案包括用于分析PARP的荧光免疫分析。基于荧光的免疫学 方法是以高度特异性受体结合位点上的标记配体与未标记配体之间的竞争性结合为基础 的。荧光技术可用于以荧光寿命随分析物浓度变化的变化为基础的免疫分析。这种技术可 与短寿命染料如异硫氰酸荧光素(FITC)(供体)配合，其荧光可被转移至曙红(受体)的 能量猝灭。很多光致发光化合物都可使用，如花菁、噁嗪、噻嗪、吓啉、酞菁、荧光红外发光多 核芳烃、藻胆蛋白、方酸类化合物和有机金属络合物、烃类以及偶氮染料。基于荧光的免疫学方法是，例如，异相的或均相的。异相免疫分析包括结合的与游 离的标记待分析物之间的物理分离。待分析物或抗体可附在固体表面上。这项技术可以是 竞争性的(为了更高的选择性)或非竞争性的(为了更高的灵敏度)。检测可以是直接的 (只用一种抗体)或间接的(使用第二种抗体)。均相免疫分析不包括物理分离。双抗体 荧光团标记的抗原参加与同时指向抗原和荧光团的抗体的平衡反应。标记抗原和未标记抗 原可与有限的抗_抗原抗体竞争。—些荧光免疫分析方法包括简单的荧光标记法、荧光共振能量转移(FRET)、时间 分辨荧光(TRF)以及扫描探针显微镜(SPM)。通过使用相关的荧光以及作为各种体内生理 变化如PH值、离子浓度和电压的荧光指示剂，简单的荧光标记法可用于测定受体_配体结 合和酶活性。TRF是一种在其他荧光分子的发射结束之后选择性测量镧系荧光的方法。TRF 可与FRET —起使用，镧系可成为供体或受体。在扫描探针显微镜中，例如在捕获阶段，至少 有一种单克隆抗体附在固相表面，且扫描探针显微镜是用于检测可能存在于固相表面的抗 原/抗体复合物。扫描隧道显微镜的使用消除了对通常用于许多免疫分析系统检测抗原/ 抗体复合物的标记的需要。蛋白质鉴定方法仅作为举例而已，蛋白质鉴定方法包括通过Edman降解的低通 量测序、质谱技术、肽质量指纹图谱、重新测序，以及基于抗体的分析。该蛋白定量分析方法 包括荧光染料凝胶染色、标记或化学修饰方法(即同位素编码亲和标签(ICATS)、结合分数 对角线色谱(C0FRADIC))。纯化蛋白也可用于三维晶体结构的确定，此法可用于模拟分子间 的相互作用。确定三维晶体结构的常用方法包括χ-射线晶体学和核磁共振波谱学的方法。 蛋白质的三维结构的特征性象征可以用质谱探测。通过用化学交联法来偶联蛋白质中空间 上接近但序列上相距遥远的那些部分，可以推断出关于整体结构的信息。通过追踪酰胺质 子与溶剂中氘的交换，有可能探测溶剂接近蛋白质各个部分的可能性。
在一个实施方案中，荧光激活细胞分选(FACS)是用来鉴定PARP表达细胞。FACS 是一种特殊类型的流式细胞仪。基于每个细胞特定的光散射和荧光特性，它提供了将生物 细胞异相混合物分选进两个或多个容器的方法，每次分选一个细胞。它提供了定量记录发 自单个细胞的荧光信号以及物理分离特别感兴趣细胞的方法。在另一个实施方案中，使用 基于微流体的设备来评估PARP的表达。质谱也可以用来表征患者样品的PARP。全蛋白离子化的两种方法是电喷雾离子化 (ESI)和基质辅助激光解吸/离子化(MALDI)。首先，以上述两种方法中任一种方法将完整 的蛋白离子化，然后引入质量分析仪。其次，用试剂如胰蛋白酶或胃蛋白酶将蛋白酶消化为 较小的肽。其他蛋白分解消化剂也可使用。然后，将收集的肽产物引入质量分析器。这种 方法通常称为“自下而上”的蛋白分析方式。全蛋白质谱分析是用飞行时间(TOF)质谱或傅立叶变换离子回旋共振(FT-ICR) 质谱进行的。用于肽质谱分析的仪器是四极杆离子阱质谱。多级四极杆-飞行时间和MALDI 飞行时间仪器也可用于这种应用。有两种方法用于分离蛋白质或其酶消化的肽产物。第一种方法分离全蛋白，被称 为双向凝胶电泳。第二种方法高效液相色谱用于分离酶消化后的肽产物。在一些情况下， 可能有必要将这两种技术结合。质谱仪可以两种方式用于鉴别蛋白。肽质谱使用蛋白水解肽的质量作为输入以搜 索预测质量数据库，该水解肽是因一系列已知蛋白质的消化而产生的。如果该参考系列中 某个蛋白序列能使相当多的预测质量与实验值匹配，则有一些证据表明这种蛋白质存在于 原始样品中。串联质谱也是一种鉴定蛋白质的方法。碰撞诱导解离在大部分应用中用于从特定 的肽离子产生一组片段。该分裂过程主要产生沿肽键断裂的裂解产品。业已叙述了许多鉴定肽和蛋白质的不同算法，用于串联质谱(MS/MS)、肽从新测序 和基于序列标签的搜索。一个综合了全面数据分析特点的选项是PEAKS。现有的其他质谱 分析软件包括肽片段指纹SEQUEST、Mascot、OMSSA和X ！ Tandem)。蛋白质也可用质谱来定量分析。通常，将稳定的(如非放射性)较重的碳(C13) 或氮(N15)同位素加入一个样品，而另一个样品则用较轻的同位素(如C12和W4)标记。 在分析前混合这两个样品。由于其质量差异，可以区分从不同样品衍生的肽。其峰值强度 比对应于肽(和蛋白质)的相对丰度比。同位素标记的方法是SILAC(在细胞培养过程中 利用氨基酸进行稳定同位素标记)、胰蛋白酶催化018标记、ICAT(同位素编码亲和标记)、 ITRAQ(用于相对和绝对定量的同位素标记)。“半定量”质谱可以在样品未标记的情况下进 行。通常，这是用MALDI分析(用线性模式)进行的。各个分子(通常是蛋白质)的峰强 度，或峰面积，与样品中蛋白质的量相关。但是，各个信号取决于蛋白质的主要结构、样品的 复杂性，以及仪器的设置。N-端测序有助于未知蛋白的鉴别，确认重组蛋白的同一性和保真性(阅读框、翻 译出发点等)，有助于NMR和晶体结构数据的解释，显示蛋白之间的同一性程度，或为产生 抗体的合成肽的设计提供数据，等等。N-端测序利用埃德曼降解化学，从蛋白质的N-端依 次去除氨基酸残基，并通过反相HPLC鉴定它们。灵敏度可达几百飞摩尔的水平，经常可从 几十皮摩尔的初始原料获得长序列读长(20-40残基)。纯蛋白(> 90% )可产生很容易解释的数据，但不够纯的蛋白混合物也可提供有用的数据，这取决于严格的数据解释。N端 修饰(特别是乙酰化)的蛋白不能直接测序，因为游离伯氨基的缺乏妨碍了埃德曼化学方 法。然而，封闭蛋白的有限水解(例如用溴化氰水解)可能会让氨基酸混合物在每个仪器 周期内产生，对这种情况可进行数据库分析以解释有意义的序列信息。C-端测序是翻译后 修饰，影响蛋白质的结构和活性。各种各样的病情可与受损的蛋白加工相联系，C-端测序 提供了研究蛋白质结构和加工机理的另一种手段。
实施例实施例1 JDC乳腺癌中的PARPl表汰先前研究已经显示，与正常的健康对照组织相比，在卵巢癌、肝细胞癌和直肠肿瘤 中以及来自白血病患者的人外周血淋巴细胞中PARP活性提高(Yalcintepe L，等人Braz J Med Biol Res 2005 ；38 361-5. Singh N. ^A Cancer Lett 1991 ；58 131-5 ；Nomura F, et al.J Gastroenterol Hepatol 2000;15:529-35)。本发明使用基因表达数据库来检验 2000多种原发恶性组织和正常人组织中的PARPl基因调节作用。尽管PARPl的表达和活性 在大部分正常人组织和器官中极低且均一，然而它在所选择的肿瘤细胞和原发人恶性肿瘤 中上调，在乳腺癌、卵巢癌、肺癌和子宫癌中存在最明显的差异(图1)。组织样品将样品作为正常手术操作的一部分收获并在切除后30分钟内速冻。对进行分析 的样品进行内部病理学审查和确认。以相邻组织制备的苏木精和伊红(H&E)染色的载玻 片用来确认和划分诊断类别并用来评价肿瘤细胞构成。使用免疫组化和荧光原位杂交确 定ER、冊和HER2的表达。这些结果以及附属病理学和临床数据用样品清单和管理数据库 (Ascenta，BioExpressdatabases ；GeneLogic, Inc.，Gaithersburg, MD)注释。RNA提取和表达情况RNA提取和杂交如Hansel等人所述进行。使用阵列高通量应用(Ascenta， Bioexpress Gene Logic，Gaithersburg MD and Affymetrix, Santa Clara，CA)评价阵列 数据质量，其中所述的阵列高通量应用将数据针对包括5’ /3’ GAPDH比、信/噪比及背景以 及其他额外量度的多种客观标准进行评估。用Affymetrix微阵列分析软件包5. O版、Data Mining Tool 2. O 和微阵列数据库软件(Affymetrix, Santa Clara, CA)进行 GeneChip 分 析。将GeneChip上所代表的所有基因全部归一化并按信号强度100换算。微阵列数据分析使用病理学正常组织样品来确定PARPl mRNA的基线表达。计算每个预测值的平 均值和90%、95%、99%和99.9%置信上限(UCL)。因为我们评估了一组正常的样品之外 的各个样品处在基线分布范围内的可能性，故而选择平均值的预测区间而非置信区间来估 计未来各个量值的期望范围。预测区间由公式定义，其中歹是正常乳腺样品 的平均值；S是标准差，η是样品数，并且A是具有η-1个自由度的Student’ s t_分布的第 100(1-(ρ/2))个百分位数。使用病理学正常组织样品来确定PARPl的基线表达。样品根据特征划分成多个亚 类，所述特征包括肿瘤阶段、吸烟状况、CA125状况或年龄。根据90%、95%、99%或99.9% UCL分析评价每份肿瘤样品。使用针对Windows的SAS v8. 2 (www. sas. com)进行分析。
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与PARPl相比，计算11个探针集合(probe sets)的Pearson相关性。相关性以 194份样品的完整集合为基础。Pearson积差相关性由下式定义 = Σ - g) (yt - i/) 其中ι是PARPl探针集合的平均值并且？是PARPl与之相关的探针集合的平均值。
统计学显著性由公式(二 — 2IZl确定，其中r是相关性且η是样品数。认为所得值具有η-2 丨(1 -rz)‘
个自由度的t分布。 多重逆转录酶-聚合酶链式反应(RT-PCR)使用每份样品25ng总RNA如前所述(Khan等人，2007)进行多重RT-PCR。用于本 研究的多重测定法设计用于检测来自福尔马林固定石蜡包埋(FFPE)样品或来自冷冻组织 的 RNA。使用 RiboGreen RNA 定量试剂盒(Invitrogen)以 Wallac Victo r2 1420 多标记 物计数器(multilable counter)确定RNA的浓度。在Agilent Bioanalyzer生物分析仪 上按照Agilent 2100BioanalyZer的说明书分析来自每份样品的RNA样品。逆转录(RT) 反应如前所述用 Applied Biosystems 9700 实施。用 Applied Biosystems 9700 对每种 cDNA实施PCR反应。RT反应以卡那霉素RNA掺合以监测RT和PCR反应的效率。所用对照 包括阳性对照RNA、无模板对照和无逆转录酶对照。PCR反应通过毛细管电泳分析。将荧光 标记的PCR反应产物稀释、与GenomeLab规格标准物-400 (Beckman-Coulter)合并、变性并 用CEQ 8800基因分析系统分析。将每种靶基因的表达相对于同一反应内的葡糖醛酸 糖苷酶(⑶SB)的表达报道为对每种样品3次独立评估的平均值和标准差。与正常乳腺组织相比，患有浸润性导管癌(IDC)的乳腺癌患者平均PARPl表达增 加1. 8倍(P < . 00001)。重要的是，PARPl过表达最频繁地出现于ERJR或HER2阴性的乳 腺癌组织中(表1)。表1 IDC乳腺组织中的PARPl过表达 PARPl过表达定义为超过正常乳腺组织分布中95%置信上限的样品实施例2 :4-it -3-硝某苯甲酰胺(BA)与化学疗法的鉬合细胞培养从ATCC获得乳腺癌细胞并在含有10%胎牛血清的Dulbecco改良Eagle培养基中 培养。细胞以每个PlOO细胞培养皿IO5个细胞或以每个P60细胞培养皿IO4个细胞在不同 浓度的化合物或DMSO对照存在条件下铺种。在处理后，使用Coulter计数器并通过用
亚甲蓝染色测量贴壁细胞数。亚甲蓝溶于甲醇和水的50%-50%混合物。将细胞铺种于 24孔或96孔板中并如计划那样处理，抽吸培养基，细胞用PBS洗涤，在甲醇中固定5-10分 钟，抽吸甲醇并使板完全干燥。添加亚甲蓝溶液至孔中并孵育板5分钟。移除染色液并用 dH20洗涤板直至洗液不再呈蓝色。在板完全干燥后，将少量IN HCl添加至每个孔以提取亚 甲蓝。使用在600nm的OD读数和校准曲线来确定细胞数。化合物化合物直接由干粉溶解成DMSO中的IOmM储备液用于每个独立实验。用溶媒 (DMSO)的匹配体积/浓度实施对照实验；在这些对照中，细胞的生长或细胞周期分布未显
示变化。PI排斥、细胞周期和TUNEL实验在添加药物和孵育后，细胞经胰酶消化并取等份试样的样品用于计数和PI (碘化 丙啶)排斥实验。将一部分细胞离心并重悬于含有5 μ g/ml PI的0. 5ml冰冷PBS中。将 其余部分的细胞固定于冰冷70%乙醇中并在冰箱中贮存过夜。对于细胞周期分析，细胞以 碘化丙啶(PI)通过标准方法染色。通过使用BD LSRII FACS的流式细胞仪确定细胞DNA 含量并且使用ModFit软件确定处在Gl、S或G2/M的细胞百分数。用“荧光素原位细胞死亡检测试剂盒”(Roche Diagnostics Corporation, Roche Applied Science, Indianapolis, IN)针对凋亡标记细胞。简言之，将固定的细胞离心并在 含有牛血清白蛋白(BSA)的磷酸盐缓冲盐水(PBS)中洗涤一次，随后在室温重悬于2ml 透化缓冲液(0. 1% Triton X-100和0. 1 %柠檬酸钠的PBS溶液)中持续25分钟并在0. 2ml PBS/1% BSA中洗涤两次。将细胞重悬于50 μ 1 TUNEL反应混合物(TdT酶和标记溶液)并 在37°C于湿化黑暗环境下在培养箱内孵育60分钟。标记的细胞在PBS/1% BSA中洗涤一 次，随后重悬于含有1 μ g/ml 4' ,6- 二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)的0. 5ml冰冷PBS中持 续至少30分钟。所有细胞样品均用BD LSR II分析(BDBiosciences，San Jose，CA)。溴脱氧尿苷(BrdU)标记分析添力卩50 μ 1 BrdU (Sigma Chemical Co. ,St. Louis, M0)储备液(ImM)以产生 10 μ M BrdU终浓度。将细胞于37°C孵育30分钟并在冰冷70%乙醇中固定，然后在冷室(4°C )中贮存过夜。将固定的细胞离心并在2ml PBS中洗涤一次，随后在37°C重悬于0. 7ml变性液 (0. 2mg/ml胃蛋白酶的2NHC1)在黑暗中持续15分钟，用1. 04ml IM Tris缓冲液(Trizma 碱，SigmaChemical Co.)悬浮并在2ml PBS中洗涤。随后，将细胞重悬于TBFP渗透性缓 冲液(0. 5% Tween-20、1%牛血清白蛋白和胎牛血清的PBS)中稀释度为1 100的 100 μ 1抗BrdU抗体(DakoCytomation，Carpinteria，CA)中，并于室温在黑暗中孵育25分 钟并在2ml PBS中洗涤。将一抗标记的细胞重悬于TBFP渗透性缓冲液中稀释度1 200的 100 μ 1 山羊抗小鼠 IgG(H+L)的Alexa Fluor F(ab' )2片段(2mg/mL) (Molecular Probes, Eugene, OR)，并于室温在黑暗中孵育25分钟并在2ml PBS中洗涤，随后重悬于含有1 μ g/ ml 4'，6- 二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)的0. 5ml冰冷PBS中持续至少30分钟。用BD LSR II (BD Biosciences, San Jose，CA)分析全部细胞样品。已经在体外和体内癌症模型中检验过4-碘-3-硝基苯甲酰胺(BA)与各种化疗药 物的组合。在从具有三重阴性转移腺癌的患者来源的MDA-MB-468乳腺癌细胞系中评价与 吉西他滨或卡钼组合的BA，结果表明BA加强S-和G2/M细胞周期停滞并增强由卡钼或吉西 他滨诱导的细胞毒效应(图2)。在nu/nu裸小鼠中的人三重阴性转移乳腺癌MDA-MB-231异种移植模型上评价与 吉西他滨和卡钼组合的BA活性。BA增加吉西他滨和卡钼组合的活性并且在药物施用35日 后产生4个部分缓解(PR)和2个完全缓解(CR)以及1名无肿瘤幸存者(TFS)(表2)。BA 与吉西他滨和卡钼的组合耐受良好。表2 与吉西他滨/卡钼组合的BA在三重阴性乳腺癌的MDA-MB-231异种移植模 型中的体内活性
治疗部分 缓解兀生 缓解无肿瘤 幸存者对照000吉西他滨(15mg/kg ；腹膜内； 每3天1次X4腹膜内)+卡铂 (10mg/kg ；腹膜内；每周1次 X 3)400BSl-201(50mg/kg ；腹膜内； 每两周1次)+吉西他滨 (15mg/kg;腹膜内；每3天1 次X 4腹膜内)+卡铂(10mg/kg ； 腹膜内海周1次X3)421因而，4-碘-3-硝基苯甲酰胺(BA)可以加强包括卡钼和吉西他滨在内的多种细胞 毒化疗药的活性。
3 :4-it -3-硝某苯甲酰胺(BA)与彳尹立替康的鉬合从ATCC获得乳腺癌细胞并在含有10%胎牛血清的Dulbecco改良Eagle培养基中 培养。细胞以每只PlOO细胞培养皿IO5个细胞或以每只P60细胞培养皿IO4个细胞在不同 浓度的化合物或DMSO对照存在条件下铺种。在处理后，使用Coulter计数器并通过用
亚甲蓝染色测量贴壁细胞数。亚甲蓝是溶于甲醇和水的50%-50%混合物。将细胞铺种于 24孔或96孔板中并如计划那样处理，抽吸培养基，细胞用PBS洗涤，在甲醇中固定5-10分 钟，抽吸甲醇并使板完全干燥。添加亚甲蓝溶液至孔中并孵育板5分钟。移除染色液并用 dH20洗涤板直至洗液不再呈蓝色。在板完全干燥后，将少量IN HCl添加至每个孔以提取亚 甲蓝。使用在600nm的OD读数和校准曲线来确定细胞数。化合物直接由干粉溶解成DMSO中的IOmM储备液用于每个独立实验。用溶媒 (DMSO)的匹配体积/浓度实施对照实验；在这些对照中，细胞的生长或细胞周期分布未显
示变化。PI排斥测定、细胞周期测定、TUNEL测定和BrdU标记测定如上文实施例2中所述 进行。在体外癌症模型中检验多种浓度的4-碘-3-硝基苯甲酰胺(BA)与依立替康的组 合。在患有三重阴性转移腺癌的患者衍生的MDA-MB-468三重阴性乳腺癌细胞系中评价BA 与依立替康的组合，结果表明BA加强S-和G2/M细胞周期停滞并增强由依立替康诱导的细 胞毒效应(表3)。表3:用与依立替康组合的4-碘-3-硝基苯甲酰胺(BA)治疗的三重阴性 MDA-MB-468乳腺癌的细胞周期调节 因此，4-碘-3-硝基苯甲酰胺(BA)可以加强包括卡钼、吉西他滨和依立替康在内 的多种细胞毒化疗药的活性。实施例4 :4_碘-3-硝某苯甲酰胺(BA) M IGFlR抑制剂鬼,臼苦素(PPP)的鉬合从ATCC获得乳腺癌细胞并在含有10%胎牛血清的Dulbecco改良Eagle培养基中 培养。细胞以每只PlOO细胞培养皿IO5个细胞或以每只P60细胞培养皿IO4个细胞在不同 浓度的化合物或DMSO对照存在条件下铺种。在处理后，使用Coulter计数器并通过用
亚甲蓝染色测量贴壁细胞数。亚甲蓝溶于甲醇和水的50%-50%混合物中。将细胞铺种于 24孔或96孔板中并如计划那样处理，抽吸培养基，细胞用PBS洗涤，在甲醇中固定5-10分 钟，抽吸甲醇并使板完全干燥。添加亚甲蓝溶液至孔中并孵育板5分钟。移除染色液并用 dH20洗涤板直至洗液不再呈蓝色。在板完全干燥后，将少量IN HCl添加至各孔以提取亚甲 蓝。使用在600nm的OD读数和校准曲线来确定细胞数。化合物直接由干粉溶解成DMSO中的IOmM储备液用于每个独立实验。用溶媒 (DMSO)的匹配体积/浓度实施对照实验；在这些对照中，细胞的生长或细胞周期分布未显
示变化。PI排斥测定、细胞周期测定、TUNEL测定和BrdU标记测定如上文实施例2中所述 进行。在体外癌症模型中检验多种浓度的4-碘-3-硝基苯甲酰胺(BA)与胰岛素样生长 因子1受体(IGFlR)抑制剂鬼臼苦素(PPP)的组合。从患有三重阴性转移腺癌的患者获得 的MDA-MB-468三重阴性乳腺癌细胞系中评价BA与PPP的组合，结果表明BA加强S-和G2/ M细胞周期停滞并增强由PPP诱导的细胞毒效应(表4)。表4:用与IGFlR抑制剂鬼臼苦素(PPP)组合的4_碘_3_硝基苯甲酰胺(BA)治 疗的三重阴性MDA-MB-468乳腺癌的细胞周期调节 因此，4-碘-3-硝基苯甲酰胺(BA)可以加强包括鬼臼苦素(PPP)的生长因子受体 靶向抑制剂的活性。实施例5 用BA治疗三重阴件乳腺癌实施多中心、开放标记、随机研究以证实用4-碘-3-硝基苯甲酰胺(BA)治疗三重 阴性转移乳腺癌的治疗效能。研究目的本研究的主要目的如下临床受益率(clinicalbenefit rate) (CBR = CR+PR+SD 彡 6 个月)确定与用吉 西他滨和卡钼治疗相关的45% CBR相比，BA将产生30%或更高的CBR。进一步研究BA的安全性和耐受性本研究的次要目的如下总体应答率(overall response) (ORR)无病情进展的存活(Progression-free survial, PFS)评价与每个分组相关的毒性本研究的探索性目的(exploratory objectives)如下表征BA对PARP活性的抑制作用表征历史性(historic)肿瘤组织样品中的PARP活性研究三重阴性乳腺癌中BRCA的状况与不带已知BRCA突变的受试者相比，研究患有癌症和这些突变的受试者中的应 答将乳腺癌组织分类为基底型或管腔型(luminal)研究设计开放标记、2分组随机的安全性和疗效研究，其中多达90位患者(每分 组45位)将随机分配至研究分组1 在21日周期的第1日和第8日，吉西他滨(1000mg/m2 ；30分钟静脉 输注)及卡钼(AUC 2 ；60分钟静脉输注)；或研究分组2 在每个21日周期的第1、4、8日和11日，4_碘_3_硝基苯甲酰胺(4mg/ kg, 1小时静脉输注)随机分配至研究分组2的患者将在疾病进展时退出该研究交叉组随机分配至研究分组1的患者可以交换，以在疾病进展时接受用与 4-碘-3-硝基苯甲酰胺组合的吉西他滨/卡钼继续治疗样品量多达90位受试者，每个分组多达45位受试者参与研究。受试者将随机分 配，分组1或分组2中每组多达45位受试者。
受试者群体纳入标准至少18岁具有按RECIST标准为可测量疾病的转移性乳腺癌(IV期)在转移情况下0-2个先期化疗疗程。允许先期辅助/新辅助治疗。组织学记录(原发或转移部位)乳腺癌，所述乳腺癌由免疫组化(0，1)证实呈 ER-阴性、PR-阴性和无HER-2过表达，或通过对原发肿瘤或转移性病变所进行的FISH证实 无基因扩增。在参于研究前至少3周结束先期化学疗法。患者可在辅助或转移情况下接受疗法，然而，若服用双膦酸盐类，不能使用骨病变 评估病情进展或缓解。放射疗法必须在参于研究前至少2周结束且辐射病变可不作为可测量疾病计。若在局部治疗后稳定(无病情进展证据)达至少3个月，患者可能有CNS转移。ECOG 表现状况 0-1如下定义的足够器官功能ANC大于或等于l，5000/mm3，血小板大于或等于 100，000/mm3，肌酐清除率大于50mL/分钟，ALT和AST低于2. 5倍正常值上限(ULN)(或在 肝转移的情况下低于5倍ULN)；总胆红素低于1. 5mg/dL。推荐可用于PARP研究的组织块，尽管没有组织块也不会排除患者参与。将排除妊娠或哺乳期妇女。育龄妇女必须在参与研究2周内获得有记录的阴性怀 孕检验并同意在研究疗法持续时间期间采取可接受的避孕措施。签字的由IRB批准的书面知情同意书。排除标准仅由PET可鉴定的病变2个以上先期化疗疗程(包括辅助疗法)。序贯(sequential)治疗方案如AC-紫 杉醇治疗将视为一种方案。已经接受了用吉西他滨、卡钼、顺钼或4-碘-3-硝基苯甲酰胺的先期治疗。可能影响参与研究的重大医学病症(不可控的肺部、肾脏或肝脏功能紊乱，不可 控的感染)。明显不可控的心脏病病史；即，不可控的高血压、不稳定性心绞痛、新近心肌梗死 (在先前6个月内)、不可控的充血性心力衰竭和有症状或无症状但射血分数下降至低于 45%的心肌病。研究人员感觉可能有损于有效和安全参与研究的其他明显共存性病症。已登记参加另一项研究性药物设备试验或正在接受其他研究性药物的受试者。共存或先期(在研究第1日的7日范围内)抗凝疗法(允许用于维持导管的低剂 量)指定的伴随药物治疗在整个研究期间不允许同时进行的放射疗法不能遵守研究要求仅从每位受试者获得伦理委员会(IRB)批准的签字的书面知情同意书后，才会进行筛选试验和评价。除非另行说明，手续将在给药(第1日)14日内办理。临床评价完整历史、身体检查、ECOG状况、身高、体重、生命体征和伴随药物治疗记录。实验室研究血液学(具有差异性、网状细胞计数和血小板)；凝血酶原时间(PT) 和局部凝血活酶时间(PTT)；综合化学项目(钠、钾、氯化物、CO2、肌酐、钙、磷、镁、BUN、尿 酸、白蛋白、AST、ALT、碱性磷酸酶、总胆红素和胆固醇、HDL和LDL)、伴以显微镜检验的尿分 析、PBMC中的PARP抑制、育龄妇女的妊娠血清或尿检验。如果签署单独的知情同意书，将 获得BRCA谱。该信息也可以从受试者的病历中抽出。临床期通过计算机层析X射线照相 术(CT)或磁共振成像(MRI)对可测量的疾病成像。治疗将接受合格患者参加本研究并随机分配至分组1或分组2。研究分组1 在21日周期的第1日和第8日，吉西他滨(1000mg/m2 ；30分钟静脉 输注)及卡钼(AUC 2 ；60分钟静脉输注)；或研究分组2 在每个21日周期的第1、4、8日和11日，4_碘_3_硝基苯甲酰胺(4mg/ kg, 1小时静脉输注)交叉组随机分配至研究分组1的患者可以交换，以在疾病进展时接受用与 4-碘-3-硝基苯甲酰胺组合的吉西他滨/卡钼继续治疗给药前和给药后试验将如研究方案中所概述的步骤进行。对两个治疗分组的给药将以21日周期重复。受试者可以参与本研究直至他们体验到药物不耐受或疾病进展或撤回同意书。达 到CR的受试者将接受额外4个周期。在PD前中断治疗的受试者应当经历每个方案的常规 阶段评价直至PD时间。一旦受试者中断治疗，对无病情进展的存活和总体应答率的评价将 以3个月区间继续直至疾病进展或死亡。除了在基线处所做的初始分类之外，对可测量疾病的第一计划肿瘤应答测量将在 第2周期后进行并且随后每隔一个治疗周期(大约每隔6-8周)进行一次。将使用根据实 体瘤改良应答评价标准(RECIST)的肿瘤应答通过CT或MRI (必须使用在筛查期间使用的 相同技术)来确定疾病进展。治疗结束全部受试者应当按方案所述于最后一剂4-碘-3-硝基苯甲酰胺之后不 超过30日结束治疗过程。另外，如果在最后一剂4-碘-3-硝基苯甲酰胺之前30日范围内 未被评估，受试者将借助临床成像获得整体的肿瘤应答评估。安全性评估安全性将由标准临床检验及实验室检验(血液学、血液化学和尿分 析)评估。毒性等级由国家癌症研究所(National Cancer Institute) 3. 0版CTCAE定义。药物代谢动力学/药效学用于PK和药效学分析的血样将仅从登记参加研究分组2的受试者获得，这包括交 叉组受试者。PK样品将在第1周期内、给药前和在第1日及第11日输注结束后立即收集。药效学或PARP样品将在第1周期内、给药前第1、4、8和11日收集。给药后仅在 第1日采样。将允许不能如规定那样进行PK或药效学样品收集的位点参与本研究，并且那些 位点的方案将相应地进行修正。
疗效肿瘤将通过标准方法(例如CT)在基线处评估并随后在缺少临床明显疾病 进展时大约每隔6-8周评估一次。统计方法本研究的主要目的是估计BA分组中的临床受益率(CBR)。在两个分组的每一分组 中，将评估主要疗效终点(primary efficacy endpoint) (CBR)，并计算精确二项的90%置 信区间。将使用单侧Fisher精确检验以5%显著性水平比较两个分组中的CBR。将估计无 病情进展的存活和总体存活的次要和探索性疗效终点，并将使用Kaplan-Meier方法计算 95%置信区间。将使用时序检验(log-rank test)比较两个分组中无病情进展的存活和总 体存活的分布。对PARP抑制数据的分析本质上将是探索性和描述性的。对于主要安全性 终点，AE和严重不利事件(SAE)将按研究分组、系统器官类别和优选条款列表。第一周期 后的实验室检验结果将按照偏离基线值进行总结。随访在第90日并在最后一剂研究药物后每隔90日(士20日)获得随访信息。实验室评估-将使用标准步骤制备用于血液学、血清化学和尿分析的血样和尿 样。实验项目定义如下血液学差异性WBC计数、RBC计数、血红蛋白、血细胞比容和血小板计数血清化学白蛋白、ALP、ALT、AST、BUN、钙、二氧化碳、氯化物、肌酐、、-谷氨酰基 转移酶、葡萄糖、乳酸脱氢酶、磷、钾、钠、总胆红素和总蛋白。尿分析外观、颜色、pH、比重、酮类、蛋白质、葡萄糖、胆红素、亚硝酸盐、尿胆素原 和潜血(沉积物显微镜检验将仅在尿分析验片评价的结果测为阳性时进行)药物代谢动力学血样将仅从登记参加研究分组2或交叉分配到研究分组2的受试 者获得。样品将在给药前立即收集并在第1周期第1日及第11日每次输注结束后立即收集。生物标记是正常生物学过程、病理学过程或对治疗性介入的药理学应答的客观测 量与评价的指示物。在肿瘤学中，对于构成肿瘤过程发生基础的分子改变特别感兴趣，其中 所述分子改变可以鉴定癌症亚型、对疾病分期、评估肿瘤生长的量或预测疾病进展、转移和 对BA的反应。将使用PARP活性测定法在外周血单核细胞(PBMC)中确定PARP在BA治疗之前和 之后的功能活性。PBMC将根据研究手册中详述的步骤从5mL血样制备，并将测量PARP活性 /抑制作用。关于全部PARP样品的详细收集、处理和运输步骤，参考将提供至每个地点的研究 手册。乳腺癌(BRCA)基因检测是在帮助控制正常细胞生长的基因(BRCA1和BRCA2)中 检查特定改变(突变)的血液检验。带有BRCA突变的妇女显示乳腺癌发生几率为36%至 85%，卵巢癌发生几率为16%至60%。向带有BRCA突变的妇女给药PARP抑制剂可以证明 是有益的。本研究是确定BRCA状况和BA治疗应答之间任何关联的初步尝试。为实现该目的，应当确定全部受试者的BRCA状况(如果仍未知)。受试者需要签 署独立的知情同意书。由于这不是本研究的纳入标准，故不同意接受这项检验的潜在受试 者将不会光因这个理由而被排除参与本研究。在两个分组的每一分组中，将估计主要疗效终点(CBR)，并计算精确二项的90%置信区间。将使用单侧Fisher精确检验以5%显著性水平比较两个分组中的CBR。将使用 时序检验比较两个分组中无病情进展的存活和总体存活的次要和探索性疗效终点。肿瘤应答数据将针对安全性群体中的全部受试者以描述性列表的形式报告，目的 在于确定BA治疗是否已经具有可测量的临床效果(例如时间对病情进展)并是否应当在 第一个8周后继续进行。应答数据将使用改良RECIST分类。PARP抑制分析将根据情况是探索性的并在本质上是描述性的。将考虑PARP抑制 差异的统计分组比较结果和来自BA治疗之前、期间和之后所取的样品中任何药物基因组 学结果(例如BRCA)。将对接受至少1个剂量BA的全部受试者完成安全性分析。本研究中所用的BA将以lOmg/mL浓度在含有25%羟丙基β -环糊精的IOmM磷酸 盐缓冲液(ρΗ 7.4)中配制。实体月中瘤应答评价标准(response evaluation criteria in solid tumors) (RECIST)资格在客观肿瘤应答是主要终点的方案中应当仅包括在基线处具有可测量疾病的患
者ο可测量的疾病_存在至少一种可测量病变。如果该可测量疾病限于孤立病变，则 其肿瘤特征应当通过细胞学/组织学证实。可测量的病变-可以在至少一个维度上精确测量的病变，使用常规技术时所述病 变的最大直径> 20mm，或使用螺旋CT扫描时最大直径> 10mm。不可测量的病变_所有其他病变，包括微小病变(使用常规技术时最大直径 < 20mm或使用螺旋CT扫描时最大直径< 10mm)，即骨病变、软脑脊膜疾病、腹水、胸膜/心 包膜渗出、炎性乳腺疾病、皮肤/肺淋巴管炎、囊性病变并且还包括未证实并随后由成像技 术证实的腹部肿块；并且所有量值应当使用尺子或测径器取得并以公制符号记录。全部基线评价应当尽可 能接近于治疗开始时并且决不能超过治疗开始前4周进行。应当在基线处和随访期间使用相同的评估方法和相同技术来表征所发现和报告 的每一种病变。仅当临床病变在浅表时(例如，皮肤小结和可触及的淋巴结)才将它们视为可测 量的。对于皮肤病变的情况，推荐用彩色照相记录，包括评估病变大小的尺子。测量方法为进行应答评估在测量所选择的靶病变时，CT和MRI是目前所具备的最好和具有 再现性的方法。常规的CT和MRI应使连续切面厚度为IOmm或以下。螺旋CT应当使用5mm 连续重建算法进行。以上适用于胸部、腹部和骨盆的肿瘤。头颈部肿瘤和肢端肿瘤通常需 要特殊方法。如果X射线胸片上病变显示清楚，且被充气的肺组织包绕，此病变也可认为是可 测量的。然而，CT是优选的。当研究的主要目的是客观的应答评价时，不应当使用超声术(US)来测量肿瘤病 变。然而，它可作为临床测量可触及性浅表淋巴结、皮下病变和甲状腺结节的备用方法。超声术也可用来证实通常由临床检验评估的浅表性病变是否彻底消失。
仍没有对于客观肿瘤评价可用的充分和广泛地确认内窥镜检查和腹腔镜检查。它 们在这种特定环境下的用途要求复杂的设备和高水平专家，但只有一些中心才具备这样的 条件。因此，以这类技术评价客观肿瘤应答的应用应局限于特定中心的确认目的。然而，当 获得活组织检查样品时，这些技术可以用于证实完全病理学应答。肿瘤标记不能单独地用来评估应答。如果初始标记水平高于正常上限，必须将它 们降至正常水平，才能在所有病变消失时，认为患者是完全临床应答。在一些罕见情况下，细胞学和组织学可用于区分I3R和CR (例如在一些肿瘤如生殖 细胞肿瘤的治疗之后区分残余良性病变和残余恶性病变)。“靶”和“非靶”病变的基线记录应将代表所涉及全部器官的所有可测量病变，按每个器官计最多5处病变、总计 10处病变，鉴定为靶病变，并在基线处予以记录和测量。靶病变的选择应根据它们的大小(具有最大直径的病变)以及是否适合用可重复 的测量手段(成像技术或临床测量)精确测量。将计算所有靶病变的最大直径(LD)的总和并作为基线LD总和报告。该基线LD 总和将用作表征客观肿瘤的参考。全部其他病变(或疾病部位)应当被鉴定为非靶病变并也应当在基线处予以记 录。不要求进行这些病变的测量，不过在整个随访过程中应当指出这些病变中每一种病变 是否存在。应答标准(response criteria)靶病变的评估完全缓解(complete response) (CR)所有靶病变均消失部分缓解(partial response) (PR)以基线LD总和为参考，靶病变的LD总和至 少下降30%病情进展(progressive disease) (PD):以治疗开始或一种或多种新病变出现以 来所记录的最小LD总和为参考，靶病变的LD总和至少增加20%病情稳定(SD)以治疗开始以来的最小LD总和为参考，即没有充分缩小到可定性 为PR，也没有充分增加到可定性为PD对非靶病变的评价完全缓解(CR):全部非靶病变消失和肿瘤标记水平正常化非完全缓解/病情稳定(SD)—种或多种非靶病变持续存在或/和肿瘤标记水平 持续高于正常限。病情进展(PD)出现一种或多种新病变和/或现有非靶病变(1)明显地发展尽管“非靶”病变的明显发展仅是例外，然而在这种环境下，应以治疗医师的意见 为主，且发展状况应在稍后由评审专家组(或研究主持人)证实。最佳总体应答(overall response)的评价最佳总体应答是从治疗开始直至疾病进展/复发的最佳应答记录(以治疗开始以 来记录的最小量值作为PD的参考)。通常，患者最佳应答的结论将取决于是否完成测量和 达到确证标准。
靶病变非靶病变新病变总体应答(overall
response)
CRCR无CR
CR非完全缓解(incomplete无PR
response)/SD
PR非-PD无PR
SD非-PD无SD
PD任何有或无PD
任何PD有或无PD
任何任何有PD
应当将健康状况全面恶化的要求中断治疗而当时没有疾病进展客观证据的患者
划分为具有“明显症状的恶化(symptomatic deterioration) 应作出一切努力记录客观 的病情进展，即使在中断治疗之后也是如此。在一些情况下，可能难以将疾病与正常组织区分开。当完全缓解的评价取决于这 种决定因素时，推荐应当研究残余病变(细针头抽吸/活组织检查)以证实完全缓解状况。证实证实客观应答的主要目的是避免过高估计所观察到的应答率(responserate)。在 应答的证实不可行的情况下，应当在报告此类研究的结果时澄清所述应答未经证实。为了将某种状况定性为I3R或CR，肿瘤量值的改变必须通过重复评估证实，其中所 述的重复评估应当在首次满足应答标准不少于4周后进行。研究方案所确定的较长间隔期 也可认为是适宜的。在SD的情况下，在以研究方案所定义的最小间隔(通常不少于6-8周)参与研究 后，后续测量至少有一次必须符合SD标准。总体缓解的持续期(duration of overall response)总体应答持续期是从测量标准符合CR或无论哪种状况记录在先)的时间起 直至客观记录到复发或PD的首日，以治疗开始以来记录的最小量值作为PD的参考。病情稳定的持续期以治疗开始以来记录的最小量值作为参考，从治疗开始直至达到疾病进展的标 准，测量SD。SD持续期的临床关联性随不同肿瘤类型和等级而变化。因此，高度推荐在方案中 详细说明为了确定SD在两次测量之间所要求的最小时间间隔。这个时间间隔应考虑到这 种状况可能给研究群体带来的预期临床益处。应答审核(response review)对于应答率是主要目的的试验，强烈推荐应当在研究完成时由独立于该项研究的 专家审核全部应答。同时审阅患者的档案和放射学图像是最好的方法。结果的报告必须评估本研究中包括的全部患者对治疗的响应，即便在治疗方案中存在重大偏 离或他们不符合资格。每位患者将被划入以下类别之一 1)完全缓解，2)部分缓解，3)病情稳定，4)病情进展，5)因恶性疾病早期死亡，6)因毒性早期死亡，7)因其他原因早期死亡， 或9)未知(未评估，数据不充分)。应当将符合资格标准的全部患者都包括在应答率的主要分析结果中。属于应答分 类4-9的患者应当视为对治疗无响应(疾病进展)。因而，不恰当的治疗规划或药物施用不 会导致从应答率分析结果中排除。分类4-9的精确定义将因方案而异。全部结论应当基于所有符合资格的患者。随后，排除已经鉴定在方案中存在重大偏离(例如因其他原因所致的早期死亡、 早期治疗中断、重大方案违规等)的那些患者，可以患者亚组为基础进行次级分析。然而， 可不以这些次级分析作为就治疗疗效得出结论的基础，并且应当清晰地报告将患者从分析 中排除的原因。应当规定95%置信区间。实施例6 用BA治疗乳腺癌Ib期、开放标签、剂量递增研究评价了与化疗方案(拓扑替康、吉西他滨、替莫唑 胺和卡钼+紫杉醇)组合的BA(2. 0,2. 8,4. 0,5. 6,8. 0和11. 2mg/kg)在患有晚期乳腺肿瘤 的受试者中的安全性。对来自患者的PBMC的评价显示，多次用2.8mg/kg或更高BA剂量给 药后PARP抑制作用明显且延长(图3)。鉴定了 BA与每种细胞毒素治疗方案的良好耐受组合。观察到的任何毒性与每种 化疗方案的已知且预期的副作用相一致。没有证据显示，在任何已试验过的细胞毒方案中 添加BA治疗会加强已知毒性或增加其预期毒性频率。鉴定到以有效临床前血液浓度激发 明显和持久的PARP抑制作用的生物学相关剂量(2.8mg/kg)。证据显示，大约80%受试者 病情稳定达2个治疗周期或更长，从而显示潜在的临床效益。实施例7 单独用BA或用BA与吉西他滨/卡钼组合治疗三重阴性转移乳腺癌 (TNBC)的2期研究2期、开放标签、2分组随机安全性和疗效试验，调查在转移性TNBC乳腺癌患者中， 与仅采用标准化疗相比，通过BA与吉西他滨/卡钼的组合治疗来抑制PARP活性是否能改 善临床受益率(CBR = CR+PR+SD > 6个月)。所检验的结论是，TNBC受试者的CBR，与单独 使用吉西他滨/卡钼时所达到的45%相比，在吉西他滨/卡钼中添加BA后达到60%。主要终点·临床受益率(CBR = CR+PR+SD≥6个月)· BA的安全性和耐受性次要终点·总体应答率(ORR)·无病情进展的存活(PFS)探索性终点·获得的肿瘤样品的PARP基因表达和药物基因组学的鉴定· BRCA 状况·与不带已知BRCA突变的受试者相比，患有癌症和这些突变的受试者的应答·将乳腺癌组织分为基底型或管腔型
剂量L时间表以1 1比例将受试者随机分配至试验分组1 在21日周期的第1日和第8日，吉西他滨(1000mg/m2 ；30分钟静脉 输注)+卡钼(AUC 2 ；60分钟静脉输注)试验分组2:在21日周期的第1和第8日，吉西他滨(1000mg/m2 ;30分钟静脉输 注)+卡钼(AUC 2;60分钟静脉输注)；在该周期的第1、4、8和第11日，再加BA (5. 6mg/kg ； 1小时静脉输注)每21天重复所有的给药周期。一旦病情进展，随机分配至分组2的受试者即终止试验。一旦病情进展，即让随机 分配至分组1的受试者交叉接受BA与吉西他滨/卡钼的组合治疗。主要资格标准·具有按RECIST标准为可测量疾病的转移性乳腺癌(IV期)·在转移情况下，0-2个先期化疗疗程；允许先期辅助/新辅助疗法 组织学记录的(原发或转移部位)乳腺癌，所述乳腺癌由免疫组化(0，1)证实呈 ER-阴性、PR-阴性和无HER-2过表达，或经FISH证实无基因扩增。· ECOG 0-1研究群体迄今为止，已有85名患者在23个研究地点登记参加(表5)。表5 :11期研究的患者统计特征 *基于可用的数据ER、PR和HER2表汰情况研究内容基于在研究位点的传统组织学测试。原始活检组织的石蜡包埋切片获 自参加临床试验的患者，并鉴定作为TNBC标志(包括ER、PR和HER2)以及PARP1、Top2A 和Ki-67的基因状态。该方法基于优化的多重定量RT-PCR，用于福尔马林固定和石蜡包埋 (FFPE)组织中基因表达的定量评估。对临床试验的样品进行了比较，以独立地获得代表 FFPE正常和肿瘤组织的对照样品。此外，从被记录为HER2基因过表达的患者获得一系列样
P
ΡΠ O组织样品将样品作为正常手术操作的一部分收获并在切除后30分钟内速冻。对受分析的 样品进行内部病理学审查和证实。从相邻组织得到的苏木精和伊红(H&E)染色的玻片用来 证实和划分诊断类别并用来评价肿瘤细胞性。使用免疫组化和荧光原位杂交确定ERjR和 HER2的表达。这些结果以及附属病理学和临床数据用样品清单和管理数据库(Ascenta， BioExpress databases ；GeneLogic，Inc.，Gaithersburg，MD)注释。RNA提取和表达情况RNA提取和杂交如Hansel等人所述进行。使用阵列高通量应用(Ascenta， Bioexpress Gene Logic，Gaithersburg MD and Affymetrix, Santa Clara，CA)评价阵列 数据质量，其中所述的阵列高通量应用将数据针对包括5’ /3’ GAPDH比、信/噪比及背景以 及其他额外量度的多种客观标准进行评估。用Affymetrix微阵列分析软件包5. O版、Data Mining Tool 2. O 和微阵列数据库软件(Affymetrix, Santa Clara, CA)进行 GeneChip 分 析。将GeneChip上所代表的所有基因全部按信号强度100归一化并换算。微阵列数据分析使用病理学正常组织样品来确定PARPl mRNA的基线表达。计算每个预测值的平均值和90%、95%、99%和99.9%置信上限(UCL)。因为我们评估了一组正常的样品之外 的单个样品处在基线分布范围内的可能性，故而选择平均值的预测区间而非置信区间来估 计未来各个量值的期望范围。预测区间由公式定义，其中7是正常乳腺样品 的平均值；S是标准差，η是样品数，并且A是具有η-1个自由度的Student’ s t_分布的第 100(1-(ρ/2))个百分位数。使用病理学正常组织样品来确定PARPl的基线表达。样品根据特征划分成多个亚 类，所述特征包括肿瘤阶段、吸烟状况、CA125状况或年龄。根据90%、95%、99%或99.9% UCL分析评价每份肿瘤样品。使用针对Windows的SAS v8. 2 (www. sas. com)进行分析。与PARPl相比，计算11个探针集合的Pearson相关性。相关性以194份样品的完 整集合为基础。Pearson积差相关性定义为下式 其中7是PARP探针集合的平均值并且7是PARPl与之相关的探针集合的平均值。 统计学显著性由公式(n-2)1/2r/(1－r2)1/2确定，其中r是相关性且η是样品数。所得值假定具有η-2 个自由度的t分布。多重逆转录酶-聚合酶链式反应(RT-PCR)使用每份样品25ng总RNA如前所述(Khan等人，2007)进行多重RT-PCR。用于 本研究的多重测定法设计用于检测来自福尔马林固定石蜡包埋(FFPE)样品或来自冷冻组 织的 RNA。使用 RiboGreen RNA 定量试剂盒(Invitrogen)以 Wallac Victo r2 1420 多标 记物计数器确定RNA的浓度。在Agilent Bioanalyzer生物分析仪上按照Agilent 2100 Bioanalyzer的说明书分析来自每份样品的RNA样品。逆转录(RT)反应如前所述用Applied Biosystems9700 实施。用 Applied Biosystems 9700 对每种 cDNA 实施 PCR 反应。RT 反应 以卡那霉素RNA掺合以监测RT反应和PCR反应的效率。所用对照包括阳性对照RNA、无模 板对照和无逆转录酶对照。PCR反应物由毛细管电泳分析。将荧光标记的PCR反应产物稀 释、与Genome Lab规格标准物-400 (Beckman-Coulter)合并、变性并用CEQ 8800基因分析 系统分析。将每种靶基因的表达相对于同一反应内的葡糖醛酸糖苷酶(GUSB)表达报 道为对每种样品3次独立评估的平均值和标准差。图4显示了参加这项试验的第一批50名患者的结果。虽然患者的“三重阴性”分 类是基于用常规临床方法取得的ER、ra和HER2的结果，这些结果显示，ER和I5R的基因表 达均比正常组织低。HER2表达与正常的相当，但与过表达PARPl的患者明显不同，基因表达 显著上升，从而证实了我们先前的观察。初步结果安全性无论以剂量减少的患者百分比还是剂量减少的总人数而论，两组剂量减少的情况 相似(表6)。表6 剂量减少 如方案中的算法所定义的吉西他滨/卡钼剂量减少在只进行化疗的分组中，39名受试者中有15名(38.9% )剂量减少，在BA+化疗 分组，39名受试者中有11名(28.2%)剂量减少。总的说来，吉西他滨/卡钼组有20例剂 量减少，BA+吉西他滨/卡钼组有19例剂量减少。考虑到分组B中所给的剂量大约是分组 A的三倍，在吉西他滨/卡钼中添加BA的安全性被进一步证实。对不良反应(AE)的评价显示，这两个研究分组情况相当(风险比=1. 0，未根据研 究的总时间校正；表7)。表7不良反应
1. 0疗效试验分组A (仅用吉西他滨/卡钼)的患者远早于随机分配至试验分组B (吉西他 滨/卡钼+BA)的患者显示出病情进展的迹象。分组A约有50%的受试者在第2周期末显 示病情进展，而在同一时间内分组B只有15%受试者显示病情进展。利用可用的初步数据，进行了正式的统计分析。这一分析显示，与仅接受吉西他滨 /卡钼的患者相比，接受BA加吉西他滨/卡钼的患者具有明显较长的中位数PFS (211天相 对于 67 天；P < 0. 0001 ；图 5)。对于参加研究120天和180天的患者分别进行了临床受益率(CBR)的初步评估 (分别为CBR-120和CBR-180)，并显示在表8中。表8 临床效果的初步评估 a参加的第一批40位患者，SD (180天)+PR+CR ;b参加的第一批40位患者，SD (120 天)+PR+CRPR的确定包括证实和未证实的应答。结果显示，吉西他滨/卡钼+BA的分组具有较高的CBR趋势。初步研究结论基于上述结果，对2期转移性TNBC研究可以作出以下结论 接受了适当的患者参加试验。使用传统的免疫组化(IHC)和基因表达概括分析， 最初参加试验的50名患者的基因组表达概括分析结果表明，这些患者确实都是ER阴性和 PR阴性而且不过表达HER2。·两个研究分组的患者情况相当。ο统计资料显示，每组的年龄中位数和表现状况相似。
ο两组在转移情况下的先期化疗程度类似。最初69名患者的数据显示，无论那个 分组的预治疗情况均无显著差异。BA分组有较多患者接受了 2个疗程的先期化疗，这说明 与仅接受吉西他滨/卡钼治疗的受试者相比，这些受试者对化疗可能更有抗性。ο无论以剂量降低的患者百分比还是剂量降低的总人数而论，两组剂量降低的情 况相似。在只进行化疗的分组中，39名受试者中有15名(38.9%)剂量减少，在BA+化疗 分组中，39名受试者中有11名(28.2%)剂量减少。总的说来，吉西他滨/卡钼组有20例 剂量减少，BA+吉西他滨/卡钼组有19例剂量减少。ο两组的AE比率相似，从而支持这样的结论在吉西他滨/卡钼中添加BA不会 增强已知的毒性或引起任何新的毒性。·基于对无病情进展存活状况(211天相对于67天；P < 0. 0001)的中位数分析， 与那些仅接受吉西他滨/卡钼治疗的患者相比，接受了 BA加吉西他滨/卡钼的患者显示出 显著的临床效益。与其他转移性TNBC研究相比，这些结果代表了 PFS状况的显著改善。 对参加试验的最初40名患者临床受益率的分析显示了在吉西他滨/卡钼中添加 BA后有改善趋势。随着研究的成熟，认为这种效果将变得更为明显。实施例8 用紫杉醇、卡钼和BA组合治疗乳腺癌患者患有三重阴性转移性乳腺癌并有病情进展的记录。要求具备关于原发性肿瘤 的组织学确认。所有患者均患有可测量的疾病。可测量的疾病是指至少有一个可在至少一个方向 (将要记录的最长尺寸)准确测量的病变。用常规技术包括触诊、X射线平片、CT和MRI测 量时，每个病变必须> 20mm,或用螺旋CT测量时，每个病变必须> 10mm。患者将有至少一个用于评估对本试验方案应答的“靶病变”，所述应答的定义如 RECIST(8. 1节)。先前辐射区域内的肿瘤将被称为“非靶”病变，除非有病情进展的记录或 经过活检证实放射治疗结束后病变持续达至少90天。此外，患者必须已经从最近的手术、 放射治疗或其他治疗得到康复，并应没有需要使用抗生素的活动期感染。任何针对恶性肿瘤的激素疗法必须在注册前至少一个星期就中止。允许继续进行 激素替代治疗。患者必须有足够的骨髓功能血小板计数大于或等于100，000/微升，ANC计数大于或等于1，500/微 升，相当于CTCAE 3.0版第1级。肾功能肌酐小于或等于1. 5X正常值上限(ULN)，CTCAE 3. 0版第1级。肝功能胆红素小于或等于1. 5xULN(CTCAE 3. 0版第1级)。SGOT和碱性磷酸酶 小于或等于2. 5xULN(CTCAE 3. 0版第1级)。神经功能神经病变(感觉和运动)小于或等于CTCAE 3. 0版第1级。可能怀孕的患者在参加研究前必须有阴性血清妊娠试验结果，并采取有效的避孕 措施。不符合资格的患者为控制乳腺癌而接受先期细胞毒素化疗的患者。如果有任何证据证明在过去五年内患有其他恶性肿瘤，那么有其他浸润性恶性肿 瘤病史的患者将被排除，但非黑素瘤皮肤癌和第3. 23和3. 24节注明的其他特定恶性肿瘤则例外。如果患者以前的癌症治疗与本试验方案的治疗发生冲突，那么这些患者也要排除 在外。在过去5年内并非为乳腺癌治疗而在腹腔或骨盆的任何部分接受先期放疗的患 者将被排除在外。局部的乳房、头颈或皮肤的癌症的先期辐射是允许的，只要治疗已于注册 前三年以上结束，而且患者的病一直没有复发或转移。患者可能已经接受了局部乳腺癌的先期辅助化疗，只要治疗已于注册前三年以上 结束，而且患者的病一直没有复发或转移。有症状或未治疗的脑转移性瘤需要同时进行治疗，包括但不限于手术、放疗和皮 质类固醇治疗。在研究第1天的6个月内的心肌梗死(MI)、不稳定心绞痛、纽约心脏协会(NYHA) 标准II类以上的充血性心力衰竭(CHF)，或不可控的高血压。有癫痫病史或目前正在服用抗癫痫药物。研究方式卡钼(Paraplatin丨 ，NSC#241240)配方卡钼是以无菌冻干粉末的形式提供，装在含50mg、150mg和450mg卡钼的单 剂量小瓶内供静脉输注。每个小瓶含有相等重量份数的卡钼和甘露醇。溶液制备在即将使用前，每个小瓶的内容物必须用美国药典注射级无菌水、5% 葡萄糖水溶液，或美国药典0. 9%氯化钠注射液按照下表配成溶液小瓶含量稀释体积_50mg5ml150mg15ml450mg45ml这些稀释过程都将形成10mg/ml的卡钼浓度。注铝能与卡钼反应从而导致沉淀的形成和失效。因此，可能与药物接触的含有铝 质零件的针头或静脉给药装置不得用于卡钼的制备或给药。储存当在受控的室温和避光条件下储存时，未开封的卡钼小瓶是稳定的，其寿命 见包装所示。稳定性当按照指示制备时，卡钼溶液在室温下能保持稳定8小时。由于配方中不 含抗菌防腐剂，因此建议在稀释后8小时丢弃卡钼溶液。/A Bristol-Myers Squibb Comp￡iriy_i|。紫杉醇(Taxol ，NSC#673089)配方紫杉醇是从Taxus baccata提取的难溶植物产品。改善溶解度要求进一步 用0. 9%氯化钠或5%葡萄糖水溶液稀释的混合溶剂体系。紫杉醇以无菌浓缩溶液的形式提供，浓度为6mg/ml，盛于5ml小瓶(30mg/瓶)内， 溶剂为50%聚氧乙基化蓖麻油(Cremophor EL)和美国药典级50%无水乙醇。瓶内药物必 须在临床即将使用前稀释。它也可以IOOmg和300mg小瓶的形式提供。溶液制备紫杉醇将以适当剂量稀释于500_1000ml美国药典级0. 9%氯化钠注 射液，或美国药典级(D5W)5%葡萄糖注射液(如果紫杉醇是单一药物，则500ml即足够)。由于溶解紫杉醇的Cremophor溶剂会将邻苯二甲酸二乙基己酯(DEHP)增塑剂从聚氯乙烯 (PVC)袋和静脉输液管中浸出，紫杉醇必须在玻璃或聚烯烃容器内制备。注在紫杉醇制备完毕后，在溶液中观察到少量纤维的形成(在美国药典小容量 注射液微粒试验规定的可接受限度内)。因此，在紫杉醇溶液给药时有必要进行在线过滤。 应在静脉输液通路上远离输液泵处设置一个孔径不大于0. 22微米的亲水性微孔过滤器 (例如IVEX-II、IVEX-HP或类似装置)，以实现在线过滤。虽然微粒的形成并不表示药物失 效，但不应使用有过多微粒形成的溶液。储存完好无损的小瓶可在原包装内于20-25°C (36-77 T )的温度范围储存。冷 冻或冷藏不会给产品稳定性造成不良反应。稳定性尽管当按照上述步骤制备时，紫杉醇溶液(0. 3-1. 2mg/ml)在环境温度 (约25°C )和室内照明条件下在物理和化学上可保持稳定27小时，但所有紫杉醇溶液都略 带混浊，其程度与药物浓度和制备后的时间长短成正比。供应商可从 Bristol-Myers Squibb Company 购得。给药在适当的剂量和稀释条件下，紫杉醇将以3小时连续静脉输注的形式给药。 紫杉醇将通过使用非聚氯乙烯管材和接头的输液控制装置(泵)如静脉输注硝酸甘油用的 静脉注射装置(聚乙烯或聚烯烃)给药。不应通过正在进行紫杉醇给药的管线输注任何其 他药物。见5. 2节。BA (4-碘-3-硝基苯甲酰胺)将以BiPar科学公司的名义生产和包装BA并用经BiPar批准的临床试验药物 经销程序经销。BA将以IOml瓶装单次输入的液体无菌产品形式提供。BA在25%羟丙 基-β-环糊精/IOmM磷酸盐缓冲溶液中配制，ρΗ值为7. 4，活性成分浓度为10mg/ml。每 瓶含有不少于9. Oml的可提取量。研究药物标签上的信息将遵照美国食品与药物管理局 (FDA)的ICH要求。BA散装瓶将以每箱10瓶的硬纸箱运输，且用单张标签标识。该标签 将包含以下信息美国关于研究性药物的告诫用语、研究编号、产品名称、浓度、储存注意事 项、再次测试日期，以及研究赞助商名称。溶液制备BA将按照如下所述步骤制备并以静脉方式给药，为时一小时用受试者的基线体重乘以剂量水平以计算给药所需的BA量(4mg/kg)。例如受试者基线体重=70kg剂量=4mg/kg所需剂量=(4mg/kgx70kg)= 280mg BA用所需的BA剂量除以小瓶内BA浓度(10mg/ml)，以确定给药所需的BA药品的毫 升数。例如280mg+ 10mg/mL = 28mL按每瓶IOml计算BA小瓶的数量，以获得所需的体积。(在此例中，将需要3瓶。) 为了得到所需体积的BA，必要时可使用更多小瓶。按照如下所述，用注射器从小瓶吸取适当体积BA药品并在准备静脉输注袋时搁
置一旁。推荐在静脉输注袋内总共装入250ml溶液，给药时间为一小时。使用0. 9%生理盐 水或D5W为静脉输注溶液。如果用含有250ml以上溶液的静脉输注袋开始输注，则移去并丢弃过量的溶液，再将全部药品加入到该溶液。将计算量的BA药品注入静脉输注袋，并确 保充分混合。接上静脉输注管并用该溶液置换一下。注也可使用一个空的静脉输注袋，注 入算出的BA量，然后添加0. 9%生理盐水或5DW直至达到250ml总体积。对于BA体积大于 50ml的情况，这种做法可能很有用。储存BA药瓶必须在2-8°C的温度下避光保存。将药瓶保存在原纸箱内并置入一 个2-8°C温控装置内。根据需要，BA可于25°C温度下储存24小时。如果确定以前BA未在 这些储存条件下处理，请马上与BiPar公司联系。未经BiPar公司授权，不要使用未在推荐 储存条件下储存的药品。稳定性BA应在制备后8小时内给药。在给受试者给药前，该输注溶液应保存在 环境温度(室温)下。供应商BiPar Sciences Inc.治疗计划每21天于第1天在输注卡钼30分钟(AUC = 6. 0)之后，输注175mg/m2紫杉醇， 为时3小时，从第1天起每周两次按4mg/ml/kg剂量加注BA，为时1小时(BA给药必须至少 相隔2天)，直至病情进展或不良反应限制进一步治疗。这段三星期的时间被认为是一个治 疗周期。达到完全临床应答以后的周期数将由治疗医生决定。不符合病情进展标准(局部 应答或病情稳定)的患者，应继续接受研究治疗，直至受到毒性的限制。卡钼的给药剂量使用根据杰利夫(JellifTe)公式评估的肾小球滤过率(GFR)， 以浓度曲线下的目标面积(AUC)乘以时间，按照卡尔弗特(Calvert)公式计算剂量。初始 剂量将为经30分钟输注AUC = 6。卡钼的初始剂量必须用GFR计算。在没有新的肾功能障碍或其他高于或等于 CTCAE 3. 0版第2级(血清肌酐> 1. 5 XULN)肾毒性情况下，对随后的周期不会重新计算卡 钼的剂量，但将根据说明进行调整。对于血清肌酐异常低(低于或等于0. 6mg/dl)的患者，由于蛋白质摄入量减少和 /或肌肉质量降低，应使用0. 6mg/dl最低值来估计肌酐清除率。如果在4星期的治疗期间 有更合适的基线肌酐值，也可用它来进行GFR的初步评估。卡尔弗特公式卡钼剂量(mg)=目标AUCX (GFR+25)。出于本试验方案的目的，GFR被认为是等同于肌酐清除率。肌酐清除率(Ccr)是根 据杰利夫方法使用下面的公式估计的{98-
}Ccr = 0.9XScr，其中Ccr =估计的肌酐清除率(ml/min)；年龄=患者年龄(年)(20-80) ；Scr =血清肌酐(mg/dl)。 在没有新的肾功能障碍或血清肌酐高于1.5XULN(CTCAE 3. 0版第2级)的情况下，对随后 的周期不会重新计算卡钼的剂量，但将根据说明的血液学标准或其他情况进行调整。建议的化疗管理方法可以在门诊实施该方案。将输注紫杉醇3小时，随后是30 分钟的卡钼，然后是1小时的BA。BA将以静脉输注方式给药(输注1小时)，研究期间每周 两次。BA的给药必须间隔至少2天(例如可于星期一 /星期四、星期一 /星期五，或星期二 /星期五给药)。对于第1天的紫杉醇和卡钼治疗，建议制订止吐方案。所用的止吐方案应 基于同行评审的共识准则。对于仅用BA的治疗，不需要使用预防性止吐药。紫杉醇的预备疗程在本研究中，紫杉醇将以输注3小时的方式给药。对于所有施 用紫杉醇的周期，建议采用紫杉醇预备疗程，以降低与过敏反应相关的风险。此疗程应包括地塞米松(静脉输注或口服)、抗组胺Hl (如苯海拉明)以及抗组胺H2(如西咪替丁、雷尼 替丁，或法莫替丁)。用于剂量计算的最大身体表面积将为2. Om2。如果副作用不严重，患者可无限期地使用研究药物，由研究主持人决定。达到完全 临床应答的患者可根据治疗医生的决定再继续更多的周期。评价标准缓解参数(Parametersof Response)-RECIST 标准可测量的疾病是指至少有一个可在至少一个方向(将要记录的最长尺寸)准确测 量的病变。用常规技术包括触诊、X射线平片、CT和MRI测量时，每个病变必须> 20mm,或 用螺旋CT测量时，每个病变必须> 10mm。“靶”和“非靶”病变的基线记录应将代表所涉及全部器官的所有可测量病变，按每个器官计最多5处病变、总计 10处病变，鉴定为靶病变，并在基线处予以记录和测量。靶病变的选择应根据它们的大小 (具有最大尺寸的病变)以及是否适合用可重复的测量手段(成像技术或临床测量)精确 测量。将计算所有靶病变的最大尺寸(LD)的总和并作为基线LD总和报告。该基线LD总 和将作为进一步表征可测量疾病的客观肿瘤应答的参考。全部其他病变(或疾病部位)应当被鉴定为非靶病变并也应当在基线处予以记 录。不需要进行测量，但应跟踪这些病变并记录为“存在”或“不存在”。所有疾病状况的基线评价应当尽可能接近于治疗开始时的评价且决不能早于治 疗开始前4周进行。最佳应答(best response)需要测量每个病变的最长尺寸以便跟踪病情。根据这些尺寸总和的变化可以估计 肿瘤大小的变化以及治疗疗效。所有疾病都必须用同样的技术作为基准来评估。某一病例 的上述变化，应以该患者参加此研究后所达到的最佳应答来报告。完全缓解(CR)是指所有靶病变和非靶病变均消失，而且在相隔至少4周的两次病 情评估中没有新病变的证据。部分缓解(PR)是指以基线LD总和为参考，所有可测量的靶病变的最长尺寸(LD) 总和至少下降30%。不能有非靶病变的明确进展，也不能有新的病变。要求两次病情评估 至少相隔4周。在唯一的靶病变是经体检测量的孤立盆腔肿块(不能用放射成像测量)的 情况下，要求LD下降50%。“加剧的疾病”是指以最小LD总和为参考，靶病变的LD总和增加至少20%，或在 参加研究8周内出现新病变。根据治疗医生的意见，在参加研究8周内出现非靶病变的明 确进展(而不是无肿瘤起源细胞学证据的胸腔积液)，也被视为加剧的疾病(在这种情况下 必须提供解释)。在唯一的靶病变是经体检测量的孤立盆腔肿块(不能用放射成像测量) 的情况下，要求LD上升50%。症状恶化的定义是由于疾病引起健康状况的全面恶化，需要改变疗法但无客观的 疾病进展证据。病情稳定是指不符合上述标准的任何情况。无法评估缓解状况的定义是由于与疾病的症状或迹象无关的原因在研究治疗开始后未进行重复肿瘤评估。进展(可测量疾病的研究)的定义为下列任何一种以参加研究以来所记录的最小LD总和为参考，靶病变的LD总和至少增加20%。以参加研究以来所记录的最小LD总和为参考，在唯一的靶病变是经体检测量的 孤立盆腔肿块(不能用放射成像测量)的情况下，要求LD上升50%。出现一个或多个新病变。因病死亡但无先前的病情进展客观记录。由于疾病引起健康状况的全面恶化，需要改变疗法但无客观的疾病进展证据。根据治疗医生的意见，现有非靶病变的明确进展，而不是无肿瘤起源细胞学证据 的胸腔积液(在这种情况下必须提供解释)。复发(非可测量疾病的研究)是指自参加临床研究以来增加的临床、放射学或组 织学疾病证据。存活是指从参加研究起至死亡或最后一次接触为止所观察到的寿命长度。“无病情进展的存活(Progression-Free Survival)，，(可测量疾病的研究)是指 从参加研究起直至疾病进展、死亡或最后一次接触的阶段。“无病情复发的存活(Recurrence-Free Survival) ”(不可测量疾病的研究)是指 从参加研究起直至疾病复发、死亡或最后一次接触的阶段。主观参数包括表现状况、具体症状以及副作用根据CTCAE 3. 0版分级。研究持续时间患者将接受治疗直至疾病进展或无法忍受的毒性介入。患者可在任何时候拒绝研 究治疗。治疗后出现完全临床应答的患者将根据治疗医生的决定继续接受更多周期的治 疗。局部应答或病情稳定的患者应继续接受治疗，除非无法忍受的毒性妨碍进一步治疗。所有患者将接受治疗(并填写所有要求的病例报告表)直至病情进展或研究撤 消。然后，患者在头两年将每隔3个月接受一次随访(包括体检和病史)，在随后的3年内 每隔6个月接受一次随访。在这5年期间，将监测延迟毒性并了解患者的存活情况。患者 须向GOG统计和数据中心提交问答卷，除非撤回同意书。实施例9 4-碘-3-硝基苯甲酰胺(BA)与、辐射的组合从ATCC获得三重阴性乳腺癌细胞MDA-MB-468并在含有10 %胎牛血清的 Dulbecco改良Eagle培养基中培养。细胞以每只PlOO细胞培养皿IO5个细胞或以每只 P60细胞培养皿IO4个细胞在不同浓度的化合物或DMSO对照存在条件下铺种。在处理后， 使用Coulter计数器并通过用1 %亚甲蓝染色测量贴壁细胞数。亚甲蓝溶于甲醇和水的 50% -50%混合物中。将细胞铺种于24孔或96孔板中并如计划那样处理，抽吸培养基，细 胞用PBS洗涤，在甲醇中固定5-10分钟，抽吸甲醇并使板完全干燥。添加亚甲蓝溶液至孔 中并孵育板5分钟。移除染色液并用dH20洗涤板直至洗液不再呈蓝色。在板完全干燥后， 将少量IN HCl添加至每个孔以提取亚甲蓝。使用在600nm的OD读数和校准曲线来确定细 胞数。BA化合物直接从干粉溶解成DMSO中的IOmM储备液用于每个独立实验。用溶媒 (DMSO)的匹配体积/浓度实施对照实验；在这些对照中，细胞的生长或细胞周期分布未显
示变化。
PI排斥测定、细胞周期测定、TUNEL测定和BrdU标记测定如上文实施例2中所述 进行。在使用或不使用100 μ M BA的情况下，用3戈瑞γ辐射处理MDA_MB_468癌细胞。 如图6所示，在人类三重阴性MDA-MB-468乳腺癌细胞中，BA加强了 S-和G2/M细胞周期停 滞，并增强了 Y辐射的抗增殖作用。虽然本文出示和说明了本发明优选的一些实施方案，但对本领域技术人员很明显 的是，这些实施方案仅是以举例的方式提供。在不背离本发明的情况下，本领域技术人员将 可想出许多变化、修改和替代的方案。应该理解，本文所述的本发明实施方案的各种替代方 案，均可在实践本发明的过程中应用。下列权利要求旨在限定本发明的范围。这些权利要 求范围内的方法和结构及与其相当的方法和结构也被包含在此范围内。
权利要求
治疗患者中ER、PR或HER2中至少一种受体呈阴性的乳腺癌的方法，包括向患者给药至少一种PARP抑制剂。
2.权利要求1所述的方法，其中获得了至少一种治疗效果，所述的至少一种治疗效果 是乳腺肿瘤尺寸缩小、转移减少、完全缓解、部分缓解、病情稳定，或病理学完全应答。
3.权利要求1所述的方法，其中与抗肿瘤剂治疗相比较，用PARP抑制剂的治疗达到了 相当的临床受益率(CBR = CR+PR+SD彡6个月)。
4.权利要求3所述的方法，其中与单独用抗肿瘤剂的治疗相比，临床受益率的改善为 至少约30%。
5.权利要求1所述的方法，其中PARP抑制剂是PARP-I抑制剂。
6.权利要求5所述的方法，其中该PARP-I抑制剂是4-碘-3-硝基苯甲酰胺或其代谢产物。
7.权利要求1所述的方法，其中该PARP抑制剂为式(IIa)或其代谢产物；及其药学上 可接受的盐、溶剂合物、异构体、互变异构体、代谢产物、类似物、或前药O 其中，(1) RpRyRyR4和R5取代基中至少有一个取代基总是含硫取代基，其余的取代基 队、1 2、1 3、1 4和R5独立地选自氢、羟基、氨基、硝基、碘、溴、氟、氯、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧 基、(C3-C7)环烷基以及苯基，其中礼、R2> R3、R4和R5这5个取代基中至少有两个取代基总 是氢；或者(2)礼、R2、R3> R4和R5取代基中至少有一个取代基不是含硫取代基，且礼、R2> R3、 R4和R5这5个取代基中至少有一个取代基总是碘，且所述的碘总是与作为硝基、亚硝基、羟 基氨基、羟基或氨基的礼、&、1 3、1 4或1 5取代基相邻。在一些实施方案中，在(2)的化合物 中，碘基总是与作为亚硝基、羟基氨基、羟基或氨基的礼、R2、R3、R4或R5基团相邻。在一些 实施方案中，在(2)的化合物中，碘基总是与作为亚硝基、羟基氨基或氨基的RpRpRyR4或 R5基团相邻。
8.权利要求1所述的方法，其中所述乳腺癌是转移性乳腺癌。
9.权利要求1所述的方法，其中所述乳腺癌处于I期、II期或III期。
10.权利要求1所述的方法，其中所述乳腺癌的ER、冊或HER2中至少一种呈阴性；且 其中所述乳腺癌的ER、PR或HER2中至少一种呈阳性。
11.权利要求1所述的方法，其中所述乳腺癌是同源重组DNA修复缺陷型。
12.权利要求1所述的方法，其中所述乳腺癌具有损伤的BRCAl或BRCA2功能。
13.权利要求1所述的方法，其中治疗包括至少11天的治疗周期，其中在该治疗周期的 第1、4、8和11天，患者接受约1至约100mg/kg的4-碘-3-硝基苯甲酰胺或其摩尔含量相当的代谢产物。
14.权利要求13所述的方法，其中4-碘-3-硝基苯甲酰胺是以口服、或胃肠外注射或 输注，或吸入给药。
15.权利要求13所述的方法，其中治疗周期为约11天至约30天。
16.权利要求1所述的方法，该方法进一步包括向患者给药PARP抑制剂与至少一种抗 肿瘤剂组合。
17.权利要求16所述的方法，其中该抗肿瘤剂是抗肿瘤烷化剂、抗肿瘤抗代谢剂、抗肿 瘤抗生素、植物来源的抗肿瘤剂、抗肿瘤钼络合物、抗肿瘤喜树碱衍生物、抗肿瘤酪氨酸激 酶抑制剂、单克隆抗体、干扰素、生物反应调节剂、激素型抗肿瘤剂、抗肿瘤病毒剂、血管生 成抑制剂、分化诱导剂、PI3K/mT0R/AKT抑制剂、细胞周期抑制剂、细胞凋亡抑制剂、hsp 90 抑制剂、微管蛋白抑制剂、DNA修复抑制剂、抗血管生成剂、受体酪氨酸激酶抑制剂、拓扑异 构酶抑制剂、紫杉烷、靶向Her-2的药物、激素拮抗剂、靶向生长因子受体的药物，或其药学 上可接受的盐。
18.权利要求16所述的方法，其中抗肿瘤剂是西他滨、卡培他滨、瓦洛他滨或吉西他滨。
19.权利要求16所述的方法，其中抗肿瘤剂选自贝伐单抗、舒尼替尼、索拉非尼、西地 尼布、ABT-869、阿西替尼、伊立替康、拓扑替康、紫杉醇、多西紫杉醇、拉帕替尼、曲妥单抗、 拉帕替尼、他莫昔芬、类固醇芳香酶抑制剂、非类固醇芳香酶抑制剂、氟维司群、表皮生长因 子受体(EGFR)抑制剂、西妥昔单抗、帕尼单抗、胰岛素样生长因子1受体(IGFlR)抑制剂， 以及 CP-751871。
20.权利要求16所述的方法，该方法进一步包括向患者给药PARP抑制剂与至少一种抗 肿瘤剂组合。
21.权利要求16所述的方法，其中在给药PARP抑制剂之前、同时或之后给药抗肿瘤剂。
22.权利要求1所述的方法，该方法进一步包括手术、放射治疗、化学治疗、基因治疗、 DNA治疗、病毒治疗、RNA治疗、DNA治疗、辅助性治疗、新辅助性治疗、免疫治疗、纳米治疗或 其组合。
23.权利要求1所述的方法，该方法进一步包括向患者给药PARP抑制剂与γ辐射组I=I O
24.在需要治疗的患者中治疗ER、冊或HER2中至少一种呈阴性的乳腺癌的方法，包括(a)从患者获取样品；(b)测试该样品以确定以下每一项 ⑴该癌症是ER阳性还是ER阴性； (iii)该癌症是PR阳性还是PR阴性； (iii)该癌症是HER2阳性还是HER2阴性；(c)如果测试表明该癌症的ERJR或HER2中至少一种呈阴性，则使用至少一种PARP抑 制剂治疗患者。
25.权利要求24所述的方法，如果满足下列两种或更多种条件，则该方法进一步包括 使用至少一种PARP抑制剂治疗患者(a)该癌症呈ER阴性，(b)该癌症呈ra阴性，(c)该癌症呈HER2阴性。
26.权利要求24所述的方法，其中获得了至少一种治疗效果，所述的至少一种治疗效 果是乳腺肿瘤尺寸缩小、转移减少、完全缓解、部分缓解、病情稳定，或病理学完全应答。
27.权利要求24所述的方法，其中该PARP抑制剂是4-碘-3-硝基苯甲酰胺或其代谢产物。
28.权利要求24所述的方法，其中该PARP抑制剂为式(IIa)或其代谢产物；及其药学上可接受的盐、溶剂合物、异构体、互变异构体、代谢产物、类似物、或前药 式(IIa)其中(1) RpRyRyR4和R5取代基中至少有一个取代基总是含硫取代基，其余的取代基 队、1 2、1 3、1 4和R5独立地选自氢、羟基、氨基、硝基、碘、溴、氟、氯、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧 基、(C3-C7)环烷基以及苯基，其中RpRyRyR4和R5这5个取代基中至少有两个取代基总是 氢；或者(2)礼、R2、R3、RjPR5取代基中至少有一个取代基不是含硫取代基，且礼、R2、R3、R4 和&这5个取代基中至少有一个取代基总是碘，且其中所述的碘总是与作为硝基、亚硝基、 羟基氨基、羟基或氨基的队、&、1 3、1 4或1 5基团相邻。在一些实施方案中，在⑵的化合物 中，碘基总是与作为亚硝基、羟基氨基、羟基或氨基的Ri、R2、R3、R4或R5基团相邻；在一些实 施方案中，在(2)的化合物中，碘基总是与作为亚硝基、羟基氨基或氨基的RpRpRyR4或R5 基团相邻。
29.权利要求24所述的方法，其中所述样品是组织或体液样品。
30.权利要求29所述的方法，其中所述样品是肿瘤样品、血液样品、血浆样品、腹膜液 样品、渗出液或积液。
31.权利要求24所述的方法，其中所述乳腺癌是转移性乳腺癌。
32.权利要求24所述的方法，其中所述乳腺癌处于I期、II期或III期。
33.权利要求24所述的方法，其中所述乳腺癌的ERJR或HER2中至少一种呈阴性；且 其中所述乳腺癌的ER、PR或HER2中至少一种呈阳性。
34.权利要求24所述的方法，其中所述乳腺癌是同源重组DNA修复缺陷型。
35.权利要求24所述的方法，其中所述乳腺癌具有损伤的BRCAl或BRCA2功能。
36.权利要求24所述的方法，其中治疗包括选择至少11天的治疗周期，且在该治疗周 期的第1、4、8和11天，患者接受约10至约100mg/kg的4-碘-3-硝基苯甲酰胺或其摩尔 含量相当的代谢产物。
37.权利要求24所述的方法，其中4-碘-3-硝基苯甲酰胺是以口服、或胃肠外注射或输注，或吸入给药。
38.治疗患者中ERJR或HER2中至少一种呈阴性的乳腺癌的方法，包括(a)测试取自患者的样品的PARP表达；以及(b)如果PARP表达超过预定水平，则向患者给药至少一种PARP抑制剂。
39.权利要求38所述的方法，其中获得了至少一种治疗效果，所述的至少一种治疗效 果是肿瘤尺寸缩小、转移减少、完全缓解、部分缓解、病情稳定，或病理学完全应答。
40.权利要求38所述的方法，其中该PARP抑制剂是4-碘-3-硝基苯甲酰胺或其代谢产物。
41.权利要求38所述的方法，其中该PARP抑制剂为式(IIa)或其代谢产物；及其药学上可接受的盐、溶剂合物、异构体、互变异构体、代谢产物、类似物、或前药 其中(1) RpRyRyR4和R5取代基中至少有一个取代基总是含硫取代基，其余的取代基 队、1 2、1 3、1 4和R5独立地选自氢、羟基、氨基、硝基、碘、溴、氟、氯、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧 基、(C3-C7)环烷基以及苯基，其中礼、R2> R3、R4和R5这5个取代基中至少有两个取代基总 是氢；或者(2)礼、R2、R3> R4和R5取代基中至少有一个取代基不是含硫取代基，且礼、R2> R3、 R4和R5这5个取代基中至少有一个取代基总是碘，且其中所述碘总是与作为硝基、亚硝基、 羟基氨基、羟基或氨基的队、&、1 3、1 4或1 5基团相邻。在一些实施方案中，在⑵的化合物 中，碘基总是与作为亚硝基、羟基氨基、羟基或氨基的礼、R2、R3、R4或R5基团相邻。在一些 实施方案中，在(2)的化合物中，碘基总是与作为亚硝基、羟基氨基或氨基的RpRpRyR4或 R5基团相邻。
42.权利要求38所述的方法，其中所述乳腺癌是转移性乳腺癌。
43.权利要求38所述的方法，其中所述乳腺癌处于I期、II期或III期。
44.权利要求38所述的方法，该方法进一步包括测定取自患者的样品的雌激素受体、 孕酮受体或人表皮生长因子2受体的表达。
45.权利要求38所述的方法，其中所述乳腺癌的ERJR或HER2中至少一种呈阴性；且 其中所述乳腺癌的ER、PR或HER2中至少一种呈阳性。
46.权利要求38所述的方法，其中所述乳腺癌是同源重组DNA修复缺陷型。
47.权利要求38所述的方法，其中所述乳腺癌具有损伤的BRCAl或BRCA2功能。
48.权利要求38所述的方法，其中该样品是组织或体液样品。
49.权利要求38所述的方法，其中治疗包括选择至少11天的治疗周期，且在该治疗周 期的第1、4、8和11天，患者接受约10至约100mg/kg的4-碘-3-硝基苯甲酰胺或其摩尔 含量相当的代谢产物。
50.权利要求49所述的方法，其中4-碘-3-硝基苯甲酰胺是以口服、或胃肠外注射或 输注，或吸入给药。
51.治疗患者乳腺癌的方法，包括向患者给药至少一种PARP抑制剂与至少一种抗肿瘤 剂组合。
52.权利要求51所述的方法，其中获得了至少一种治疗效果，所述至少一种治疗效果 是乳腺肿瘤尺寸缩小、转移减少、完全缓解、部分缓解、病情稳定，或病理学完全应答。
53.权利要求51所述的方法，其中与用抗肿瘤剂但不用PARP抑制剂进行治疗相比较， 临床受益率(CBR = CR+PR+SD彡6个月)得到改善。
54.权利要求53所述的方法，其中临床受益率的改善为至少约60%。
55.权利要求51所述的方法，其中该PARP抑制剂是4-碘-3-硝基苯甲酰胺或其代谢 产物。
56.权利要求51所述的方法，其中该PARP抑制剂为式(IIa)或其代谢产物；及其药学上可接受的盐、溶剂合物、异构体、互变异构体、代谢产物、类似物、或前药 式(IIa)其中(1) R1,R2,R3^R4和R5取代基中至少有一个取代基总是含硫取代基，且其余取代基 队、1 2、1 3、1 4和R5独立地选自氢、羟基、氨基、硝基、碘、溴、氟、氯、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧 基、(C3-C7)环烷基以及苯基，其中礼、R2> R3、R4和R5这5个取代基中至少有两个取代基总 是氢；或者(2)礼、R2、R3> R4和R5取代基中至少有一个取代基不是含硫取代基，且礼、R2> R3、 R4和R5这5个取代基中至少有一个取代基总是碘，且其中所述碘总是与作为硝基、亚硝基、 羟基氨基、羟基或氨基的队、&、1 3、1 4或1 5基团相邻。在一些实施方案中，在⑵的化合物 中，碘基总是与作为亚硝基、羟基氨基、羟基或氨基的礼、R2、R3、R4或R5取代基相邻。在一 些实施方案中，在(2)的化合物中，碘基总是与作为亚硝基、羟基氨基或氨基的RpRpRyR4 或R5基团相邻。
57.权利要求51所述的方法，其中该抗肿瘤剂是抗肿瘤烷化剂、抗肿瘤抗代谢剂、抗肿 瘤抗生素、植物来源的抗肿瘤剂、抗肿瘤钼络合物、抗肿瘤喜树碱衍生物、抗肿瘤酪氨酸激 酶抑制剂、单克隆抗体、干扰素、生物反应调节剂、激素型抗肿瘤剂、抗肿瘤病毒剂、血管生 成抑制剂、分化诱导剂、PI3K/mT0R/AKT抑制剂、细胞周期抑制剂、细胞凋亡抑制剂、hsp 90 抑制剂、微管蛋白抑制剂、DNA修复抑制剂、抗血管生成剂、受体酪氨酸激酶抑制剂、拓扑异 构酶抑制剂、紫杉烷、靶向Her-2的药物、激素拮抗剂、靶向生长因子受体的药物，或其药学 上可接受的盐。
58.权利要求51所述的方法，其中的抗肿瘤剂是西他滨、卡培他滨、瓦洛他滨或吉西他滨。
59.权利要求51所述的方法，其中该抗肿瘤剂选自贝伐单抗、舒尼替尼、索拉非尼、西 地尼布、ABT-869、阿西替尼、伊立替康、拓扑替康、紫杉醇、多西紫杉醇、拉帕替尼、曲妥单 抗、拉帕替尼、他莫昔芬、类固醇芳香酶抑制剂、非类固醇芳香酶抑制剂、氟维司群、表皮生 长因子受体(EGFR)抑制剂、西妥昔单抗、帕尼单抗、胰岛素样生长因子1受体(IGFlR)抑制 剂，以及 CP-751871。
60.权利要求51所述的方法，该方法进一步包括手术、放射治疗、化学治疗、基因治疗、 DNA治疗、病毒治疗、DNA治疗、辅助性治疗、新辅助性治疗、RNA治疗、免疫治疗、纳米治疗或 其组合。
61.权利要求51所述的方法，该方法进一步包括向患者给药PARP抑制剂与γ辐射组I=I O
62.权利要求51所述的方法，其中所述乳腺癌是转移性乳腺癌。
63.权利要求51所述的方法，其中所述乳腺癌处于I期、II期或III期。
64.权利要求51所述的方法，其中所述乳腺癌是HR阴性乳腺癌。
65.权利要求51所述的方法，其中所述乳腺癌的ERJR或HER2中至少一种呈阴性。
66.权利要求51所述的方法，其中所述乳腺癌的ERJR或HER2中至少一种呈阴性；且 其中所述乳腺癌的ER、PR或HER2中至少一种呈阳性。
67.权利要求51所述的方法，其中所述乳腺癌是同源重组DNA修复缺陷型。
68.权利要求51所述的方法，其中所述乳腺癌具有损伤的BRCAl或BRCA2功能。
69.权利要求51所述的方法，其中治疗包括至少11天的治疗周期，其中(a)在该周期的第1天和第8天，患者接受约100-5000mg/m2的吉西他滨；(b)在该周期的第1天和第8天，患者接受约10至约400mg/m2的卡钼；以及(c)在该治疗周期的第1、4、8和11天，患者接受约1至约100mg/kg的4-碘-3-硝基 苯甲酰胺或其摩尔含量相当的代谢产物。
70.权利要求69所述的方法，其中治疗周期为约11天至约30天。
71.权利要求69所述的方法，其中在该周期的第1天和第8天，患者接受约 100-2500mg/m2的吉西他滨和约10至约400mg/m2的卡钼；以及在该周期的第1、4、8和11 天，患者接受约1至约50mg/kg的4-碘-3-硝基苯甲酰胺或其摩尔含量相当的代谢产物。
72.权利要求69所述的方法，其中在该周期的第1天和第8天，患者接受约 500-2000mg/m2的吉西他滨和约50至约400mg/m2的卡钼；以及在该周期的第1、4、8和11 天，患者接受约1至约50mg/kg的4-碘-3-硝基苯甲酰胺或其摩尔含量相当的代谢产物。
73.权利要求69所述的方法，其中在该周期的第1天和第8天，患者接受约lOOOmg/m2 的吉西他滨和约AUC 2的卡钼；以及在该周期的第1、4、8和11天，患者接受约1、2、3、4、6、 8或10、12、14、16、18或20mg/kg的4-碘-3-硝基苯甲酰胺。
74.权利要求51所述的方法，其中抗肿瘤剂以胃肠外注射或输注给药。
75.权利要求51所述的方法，其中PARP抑制剂是4-碘-3-硝基苯甲酰胺，其以口服、 或胃肠外注射或输注，或吸入给药。
76.权利要求51所述的方法，进一步包括以胃肠外注射或输注的方式向患者给药紫杉焼。
77.在需要治疗的患者中治疗乳腺癌的方法，包括7(a)从患者获取样品；(b)测试该样品以确定以下每一项 (i)该癌症是ER阳性还是ER阴性； ( )该癌症是PR阳性还是PR阴性； (iii)该癌症是HER2阳性还是HER2阴性；(c)如果测试表明该癌症的ERJR或HER2中至少一种呈阴性，则使用治疗剂的组合治 疗患者，其中治疗剂包括至少一种PARP抑制剂和至少一种抗肿瘤剂。
78.权利要求77所述的方法，如果满足以下两种或更多种条件，则进一步包括用治疗 剂的组合治疗患者，其中的治疗剂包括至少一种PARP抑制剂和至少一种抗肿瘤剂(a)该癌症呈ER阴性，(b)该癌症呈ra阴性，(c)该癌症呈HER2阴性。
79.权利要求77所述的方法，其中获得了至少一种治疗效果，所述至少一种治疗效果 是乳腺肿瘤尺寸缩小、转移减少、完全缓解、部分缓解、病情稳定，或病理学完全应答。
80.权利要求77所述的方法，其中与用抗肿瘤剂但不用PARP抑制剂进行治疗相比较， 临床受益率(CBR = CR+PR+SD彡6个月)得到改善。
81.权利要求80所述的方法，其中临床受益率为至少约60%。
82.权利要求77所述的方法，其中该PARP抑制剂是4-碘-3-硝基苯甲酰胺或其代谢 产物。
83.权利要求77所述的方法，其中该PARP抑制剂为式(IIa)或其代谢产物；及其药学上可接受的盐、溶剂合物、异构体、互变异构体、代谢产物、类似物、或前药 式(IIa)其中(1) R1,R2,R3^R4和R5取代基中至少有一个取代基总是含硫取代基，且其余取代基 队、1 2、1 3、1 4和R5独立地选自氢、羟基、氨基、硝基、碘、溴、氟、氯、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧 基、(C3-C7)环烷基以及苯基，其中礼、R2> R3、R4和R5这5个取代基中至少有两个取代基总 是氢；或者(2)礼、R2、R3> R4和R5取代基中至少有一个取代基不是含硫取代基，且礼、R2> R3、 R4和R5这5个取代基中至少有一个取代基总是碘，且其中所述碘总是与作为硝基、亚硝基、 羟基氨基、羟基或氨基的队、&、1 3、1 4或1 5基团相邻。在一些实施方案中，在⑵的化合物 中，碘基总是与作为亚硝基、羟基氨基、羟基或氨基的礼、R2、R3、R4或R5基团相邻。在一些 实施方案中，在(2)的化合物中，碘基总是与作为亚硝基、羟基氨基或氨基的RpRpRyR4或 R5取代基相邻。
84.权利要求77所述的方法，其中该抗肿瘤剂是抗肿瘤烷化剂、抗肿瘤抗代谢剂、抗肿瘤抗生素、植物来源的抗肿瘤剂、抗肿瘤钼络合物、抗肿瘤喜树碱衍生物、抗肿瘤酪氨酸激 酶抑制剂、单克隆抗体、干扰素、生物反应调节剂、激素型抗肿瘤剂、抗肿瘤病毒剂、血管生 成抑制剂、分化诱导剂、PI3K/mT0R/AKT抑制剂、细胞周期抑制剂、细胞凋亡抑制剂、hsp 90 抑制剂、微管蛋白抑制剂、DNA修复抑制剂、抗血管生成剂、受体酪氨酸激酶抑制剂、拓扑异 构酶抑制剂、紫杉烷、靶向Her-2的药物、激素拮抗剂、靶向生长因子受体的药物，或其药学 上可接受的盐。
85.权利要求77所述的方法，其中所述抗肿瘤剂是西他滨、卡培他滨、瓦洛他滨或吉西 他滨。
86.权利要求77所述的方法，其中该抗肿瘤剂选自贝伐单抗、舒尼替尼、索拉非尼、西 地尼布、ABT-869、阿西替尼、伊立替康、拓扑替康、紫杉醇、多西紫杉醇、拉帕替尼、曲妥单 抗、拉帕替尼、他莫昔芬、类固醇芳香酶抑制剂、非类固醇芳香酶抑制剂、氟维司群、表皮生 长因子受体(EGFR)抑制剂、西妥昔单抗、帕尼单抗、胰岛素样生长因子1受体(IGFlR)抑制 剂，以及 CP-751871。
87.权利要求77所述的方法，进一步包括手术、放射治疗、化学治疗、基因治疗、DNA治 疗、辅助性治疗、新辅助性治疗、病毒治疗、RNA治疗、免疫治疗、纳米治疗或其组合。
88.权利要求77所述的方法，该方法进一步包括向患者给药PARP抑制剂与γ辐射组合。
89.权利要求77所述的方法，其中该样品是组织或体液样品。
90.权利要求77所述的方法，其中所述样品是肿瘤样品、血液样品、血浆样品、腹膜液 样品、渗出液或积液。
91.权利要求77所述的方法，其中所述乳腺癌是转移性乳腺癌。
92.权利要求77所述的方法，其中所述乳腺癌处于I期、II期或III期。
93.权利要求77所述的方法，其中所述乳腺癌的ERJR或HER2中至少一种呈阴性。
94.权利要求77所述的方法，其中所述乳腺癌的ERJR或HER2中至少一种呈阴性；且 其中所述乳腺癌的ER、PR或HER2中至少一种呈阳性。
95.权利要求77所述的方法，其中所述乳腺癌是同源重组DNA修复缺陷型。
96.权利要求77所述的方法，其中所述乳腺癌具有损伤的BRCAl或BRCA2功能。
97.权利要求77所述的方法，其中抗肿瘤剂以胃肠外注射或输注给药。
98.权利要求77所述的方法，其中4-碘-3-硝基苯甲酰胺是以口服、或胃肠外注射或 输注，或吸入给药。
99.治疗患者乳腺癌的方法，包括(a)测试取自患者的样品的PARP表达；以及(b)如果PARP表达超过预定水平，则向患者给药至少一种PARP抑制剂和至少一种抗肿 瘤剂。
100.权利要求99所述的方法，其中获得了至少一种治疗效果，所述的至少一种治疗效 果是乳腺肿瘤尺寸缩小、转移减少、完全缓解、部分缓解、病情稳定，或病理学完全应答。
101.权利要求99所述的方法，其中与用抗肿瘤剂但不用PARP抑制剂进行治疗相比较， 临床受益率(CBR = CR+PR+SD彡6个月)得到改善。
102.权利要求101所述的方法，其中临床受益率的改善为至少约60%。
103.权利要求99所述的方法，其中该PARP抑制剂是4-碘-3-硝基苯甲酰胺或其代谢产物。
104.权利要求99所述的方法，其中该PARP抑制剂为式(IIa)或其代谢产物；及其药学上可接受的盐、溶剂合物、异构体、互变异构体、代谢产物、类似物、或前药 C——NH2 R3式(IIa)其中(1) R1,R2,R3^R4和R5取代基中至少有一个取代基总是含硫取代基，且其余取代基 队、1 2、1 3、1 4和R5独立地选自氢、羟基、氨基、硝基、碘、溴、氟、氯、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧 基、(C3-C7)环烷基以及苯基，其中礼、R2> R3、R4和R5这5个取代基中至少有两个取代基总 是氢；或者(2)礼、R2、R3> R4和R5取代基中至少有一个取代基不是含硫取代基，且礼、R2> R3、 R4和R5这5个取代基中至少有一个取代基总是碘，且其中所述碘总是与作为硝基、亚硝基、 羟基氨基、羟基或氨基的礼、&、1 3、1 4或1 5取代基相邻。在一些实施方案中，在(2)的化合 物中，碘基总是与作为亚硝基、羟基氨基、羟基或氨基的礼、R2> R3、R4或R5基团相邻。在一 些实施方案中，在(2)的化合物中，碘基总是与作为亚硝基、羟基氨基或氨基的RpRpRyR4 或R5基团相邻。
105.权利要求99所述的方法，其中该抗肿瘤剂是抗肿瘤烷化剂、抗肿瘤抗代谢剂、抗 肿瘤抗生素、植物来源的抗肿瘤剂、抗肿瘤钼络合物、抗肿瘤喜树碱衍生物、抗肿瘤酪氨酸 激酶抑制剂、单克隆抗体、干扰素、生物反应调节剂、激素型抗肿瘤剂、抗肿瘤病毒剂、血管 生成抑制剂、分化诱导剂、PI3K/mT0R/AKT抑制剂、细胞周期抑制剂、细胞凋亡抑制剂、hsp 90抑制剂、微管蛋白抑制剂、DNA修复抑制剂、抗血管生成剂、受体酪氨酸激酶抑制剂、拓扑 异构酶抑制剂、紫杉烷、靶向Her-2的药物、激素拮抗剂、靶向生长因子受体的药物，或其药 学上可接受的盐。
106.权利要求99所述的方法，其中抗肿瘤剂是西他滨、卡培他滨、瓦洛他滨或吉西他滨。
107.权利要求99所述的方法，其中该抗肿瘤剂选自贝伐单抗、舒尼替尼、索拉非尼、 西地尼布、ABT-869、阿西替尼、伊立替康、拓扑替康、紫杉醇、多西紫杉醇、拉帕替尼、曲妥单 抗、拉帕替尼、他莫昔芬、类固醇芳香酶抑制剂、非类固醇芳香酶抑制剂、氟维司群、表皮生 长因子受体(EGFR)抑制剂、西妥昔单抗、帕尼单抗、胰岛素样生长因子1受体(IGFlR)抑制 剂，以及 CP-751871。
108.权利要求99所述的方法，进一步包括手术、放射治疗、化学治疗、基因治疗、DNA治 疗、辅助性治疗、新辅助性治疗、病毒治疗、RNA治疗、免疫治疗、纳米治疗或其组合。
109.权利要求99所述的方法，该方法进一步包括向患者给药PARP抑制剂与γ辐射组I=I O
110.权利要求99所述的方法，其中该样品是组织或体液样品。
111.权利要求99所述的方法，其中所述样品是肿瘤样品、血液样品、血浆样品、腹膜液 样品、渗出液或积液。
112.权利要求99所述的方法，其中所述乳腺癌是转移性乳腺癌。
113.权利要求99所述的方法，其中所述乳腺癌处于I期、II期或III期。
114.权利要求99所述的方法，该方法进一步包括测定取自患者的样品的雌激素受体、 孕酮受体或人表皮生长因子2受体的表达。
115.权利要求99所述的方法，其中所述乳腺癌的ERJR或HER2中至少一种呈阴性。
116.权利要求99所述的方法，其中所述乳腺癌的ER、冊或HER2中至少一种呈阴性； 且其中所述乳腺癌的ER、PR或HER2中至少一种呈阳性。
117.权利要求99所述的方法，其中所述乳腺癌是同源重组DNA修复缺陷型。
118.权利要求99所述的方法，其中所述乳腺癌具有损伤的BRCAl或BRCA2功能。
119.权利要求99所述的方法，其中治疗包括至少11天的治疗周期，且(a)在该周期的第1天和第8天，患者接受约100-2000mg/m2的吉西他滨；(b)在该周期的第1天和第8天，患者接受约10至约400mg/m2的卡钼；以及(c)在该治疗周期的第1、4、8和11天，患者接受约10至约100mg/kg的4-碘-3-硝基 苯甲酰胺或其摩尔含量相当的代谢产物。
120.权利要求99所述的方法，其中抗肿瘤剂以胃肠外注射或输注给药。
121.权利要求99所述的方法，其中4-碘-3-硝基苯甲酰胺以口服、或胃肠外注射或输 注，或吸入给药。
全文摘要
在一个方面中，本发明提供了治疗ER、PR或HER2中至少一项呈阴性的乳腺癌的方法，包括向受试者给药至少一种PARP抑制剂。在另一方面中，本发明提供了治疗乳腺癌的方法，包括向受试者给药至少一种PARP抑制剂与至少一种抗癌药物组合。
文档编号A61K31/166GK101917982SQ200880124571
公开日2010年12月15日 申请日期2008年11月11日 优先权日2007年11月12日
发明者巴里·M·舍曼, 查尔斯·布拉德利, 瓦莱里娅·S·奥索夫斯卡亚 申请人:彼帕科学公司