使用固相血小板结合剂产生血管闭塞的组合物和方法

专利名称：使用固相血小板结合剂产生血管闭塞的组合物和方法
技术领域：
本发明涉及通过使用血小板激活作为起始事件产生血管闭塞来产生治疗益处的 组合物和方法。本发明的组合物和方法涉及将固相血小板-结合剂递送到靶部位，使血小 板结合和激活从而形成局部血栓。在本发明的一些实施方案中，血栓可进一步被结缔组织 替代。通过局部血栓闭塞靶组织的脉管系统典型地导致必需的氧和营养的丧失，再导致组 织退化和最终组织死亡。相关技术描述血小板在体内起在血管损伤事件中限制失血的作用。通常，血小板与血液的其它 细胞组分一起遍及身体内循环，浸浴在各种血浆蛋白质的混合物中，所述血浆蛋白质中许 多在凝固过程中起关键作用。在血管内皮下膜暴露以后，发生一系列复杂事件来限制血液 从损伤的脉管丧失。与暴露的内皮下膜的组分接触的循环的血小板1)结合和粘附，2)扩 散越过暴露的表面，幻激活，如由颗粒状内容物的释放证明，4)聚集并从血流中募集其它 循环血小板，和幻形成有效的栓塞，凝块，和/或血栓，其堵塞来自血管的血流。与凝固级联形成对比，凝固级联为一个部分由血纤蛋白原至血纤蛋白转化所定义 的过程，血小板在损伤区域周围聚结并由与血小板表面特异受体结合的桥连分子结合在一 起。血小板和内皮下膜之间的起始桥连依赖于血小板表面的糖蛋白Ib(GPIb)受体和内皮 下膜中的冯威勒布兰特因子(VWF)(即固定的VWF)之间的相互作用。该相互作用本身是独 特的，因为在血液中循环的正常血小板经常与可溶性VWF接触，但不被激活，它们也不与可 溶性VWF结合。体外实验已经证实将可溶性VWF固定到表面促进血小板的结合和激活。经 激活血小板后，另一个受体，糖蛋白nb/IIIa(GPIIb/IIIa)被改变，使其能够结合几种血 浆蛋白质，由此促进血小板/血小板结合。除血纤蛋白原以外，可溶性VWF与活化的GPIIb/ IIIa受体结合，再通过GPHd和GPIIb/IIIa变得被固定和能够结合其它血小板。在不合适的时间活动过强的血小板可以诱导血栓形成，导致对各种器官和组织的 血液供给减少。主要的实例是由血液流经供应心脏的狭窄(窄)脉管诱导的血栓形成。向 心肌血流的减少导致梗塞和最终心脏病发作(心脏细胞死亡)。当栓子或血栓堵塞供给脑 的血管时发生脑局部缺血(短暂性缺血发作(TIA)；中风)。存在由血小板激活导致的其它病变，所述血小板激活是不适当的抗体介导的过程 的结果。肝素诱导的血小板减少症(HIT)特征是血小板数量的显著减少和在预先存在的病 理部位形成血栓。接受未级分的、作为促进血流的抗凝剂的肝素的所有患者中的-5% 产生与肝素结合的抗体，所述肝素与血小板颗粒蛋白复合。抗体与血小板表面上的肝素/ 蛋白质复合体的结合诱导血小板迅速激活和局部血栓形成。这又导致被影响区域的梗塞。
血栓是被充分描述的癌的后果。关于高可凝固状态是否是癌的预示存在争论。已 经进行许多研究，证明与大部分瘤形成或肿瘤一起的促血栓趋势。已经提示血栓是明显恶 性病患者最频繁的并发症。开发成功的抗肿瘤剂的关键是设计将选择性杀死肿瘤细胞，而对正常组织施加相 对很小的，若有的话，副作用的制剂的能力。该目标已经是难以捉摸的因为在肿瘤和正常组 织之间存在很少的定性差异。因此，这些年来许多研究已经集中在鉴定可以作为化学疗法 和诊断的免疫目标的肿瘤特异“标志物抗原”。已经鉴定许多肿瘤特异或准肿瘤特异(肿瘤 相关)的标志物，其是可以被特异性抗体识别的肿瘤细胞抗原。不幸地，通常情形是肿瘤特异抗体本身和自动将不发挥足以使它们在癌症治疗中 有效的抗肿瘤作用。与它们在淋巴瘤中的功效形成对比，免疫毒素已经证明在实体瘤如癌 的治疗中相对无效。关于这的主要原因是实体瘤对于抗体大小的分子通常是不渗透的每 克肿瘤小于注射剂量的0. 001%的比吸收值在人的研究中是常见的。另外，由于几个原因进 入肿瘤块的抗体分布不均勻。首先，肿瘤细胞和纤维状肿瘤基质的紧密堆积产生对于大分 子递送难以克服的物理屏障，与淋巴引流的缺少结合在肿瘤中心产生升高的间隙压力，其 减少外渗和流体对流。第二，大部分肿瘤中的血管分布是无组织的和不均勻的。结果一些 肿瘤细胞与毛细管大距离分开以致外渗的抗体必须在大体积范围内扩散以便到达和与遥 远的肿瘤细胞结合。第三，所有进入肿瘤的抗体可能变得被最先遇到的肿瘤细胞吸收在血 管周围区域，没留下任何一个到达在更远部位的肿瘤细胞。使用抗体克服靶肿瘤的缺点的一种方法是将诱导血栓的试剂靶向肿瘤的脉管系 统而不是肿瘤。本发明人提出该方法将提供几个优于直接靶向肿瘤细胞的优势。首先，靶细胞能 够直接接近脉管施用的治疗剂，允许高百分率的注射剂量的迅速局部化。第二，因为每个毛 细管为在它周围肿瘤带中的数千细胞提供氧和营养，即使对肿瘤脉管系统有限的损伤也产 生大量肿瘤细胞死亡。本发明还涉及治疗异常组织生长，异常出血(在外科手术期间或之后，产后)，异 βιΜ.^ IifBIlnii (placenta previa), ^ : (placenta accreta)禾口〒胃矶； (uterine fibroids)的组合物和方法。在某些临床情形下，理想的是通过闭塞它相关的脉管系统抑制向组织的血流。实 例包括出血性中风，在隐静脉旁路移植外科手术中隐静脉侧支的存在，主动脉瘤的治疗，血 管畸形的矫正，和实体瘤的治疗。已经使用包括栓塞治疗(embolotherapy)的多种技术和材料进行血管闭塞。栓 塞治疗的实例包括由多种材料组成的颗粒，由胶原蛋白组成的物理栓塞(Conston等， US 5，456，693)和线圈(coil) (Mariant, US 5,639, 277)的应用，所述材料包括聚乙烯醇 (Boschetti, PCT W00023054)，丙烯酰胺(Boschetti 等，US 5, 635, 215 ；Boschetti 等，US 5，648，100)，聚甲基丙烯酸甲酯(Lemperle, US 5，344，452)。栓塞治疗包括通过导管将这 些材料递送到靶脉管系统。因为在任何给定区域的脉管系统从较大的动脉开始至小动脉至 后小动脉至毛细管，每个具有渐小的脉管直径，递送的材料(栓塞)继续在流动的血液中行 进直至它固定在较小的血管中，从而阻碍血液流向依附的组织。本发明是新颖的和通过使用包被哺乳动物来源的冯威勒布兰特因子(VWF)的固相材料，如微粒或线圈或支架(stent)致力于未满足的医疗需要。这样通过将固相血小 板-结合试剂递送到靶部位和引发有效的导致相关脉管系统闭塞的血栓形成来取得治疗 益处。发明概述本发明涉及使用通过局部血小板激活诱导血栓形成的固相剂用于靶向组织和/ 或器官，和相关脉管系统的治疗方法和组合物，所述组织和/或器官，和相关脉管系统实质 上是增生性的或致瘤性的，或具有动静脉畸形，或正在出血。组合物包含将血小板俘获在固 相剂如线圈或支架或颗粒上的试剂。在本发明的一些实施方案中，固相剂不但俘获而且激 活血小板。该方法利用在固相颗粒上局部化血小板集合和激活血小板来产生随后的血栓形 成，由此限制向靶区域的血液供应，而未诱导全身性的或系统的前血栓形成状态。本发明提供通过将血小板俘获在微球上诱导血栓形成，诱导血小板激活，和使血 栓形成的方法。靶脉管系统的血栓形成减少对下游组织的血液供应。通过将血小板俘获在 包含胶原蛋白的微球(例如包被的颗粒)上，本发明的方法可以用于治疗癌，增生，子宫肌 瘤(uterinefibroids),盆腔游血(pelvic congestion),月经过多(menorrhagia), AV-畸 形，神经检塞(neuro-embolism)，精索静脉曲张(varicoceles)，口各血(hemoptysis),内 脏动脉动脉瘤(visceral artery aneurysms),动脉动脉瘤(arterial aneurysms),内漏 (endoleak)等。有目的地在患者中诱导血栓形成初看起来似乎是反直觉的，因为众所周知血栓形 成显著有助于患者的发病率和死亡率。本发明固相血小板介导的闭塞是基于利用身体响应 固定的冯威勒布兰特因子(VWF)或其它局部作用的血小板激活剂产生血栓的天然能力而 部位特异性诱导血栓形成。尽管VWF以可溶性形式在血流中循环，直至该分子作为内皮下 膜的一部分被暴露或与暴露的来自内皮下膜的胶原蛋白结合它才能够俘获血小板和诱导 血小板激活。固相血小板-结合剂与来自患者的血液(先体外后体内)或血流中的血液(体 内)接触诱导血小板结合和局部激活，导致固相剂周围的血小板增加，其导致血栓形成和 向由闭塞的血管供应的组织的血流的中断。细胞，包括肿瘤细胞或增生组织，由于局部血流 的丧失而减小或死亡。该方法避免全身的血小板激活和血栓形成；依赖于固定的VWF(但不 是可溶性VWF)与循环的血小板结合并将其激活的事实。因此，本发明的方法和组合物是间 接的治疗病理疾病如癌，增生性细胞，大出血或动静脉(AV)畸形的方式。本发明在现有的用于治疗实体瘤，增生组织，大出血和AV-畸形和其中血小板(静 止的和/或活化的)可能起治疗作用的其它任何疾病或病症的方法上改善。以类似于现有病理状况(即肝素诱导的血小板减少症[HIT])的方式，通过将人Fc 片段包括或结合到固相剂上的Fc-介导的方法，或通过将选择抗体导向靶区域可以增强局 部的血小板激活。在HIT综合症中的血小板激活导致局部的血栓形成和向受侵袭区域的血 流的中断。这导致受累组织的死亡。部位特异性的血栓形成的范围或程度可以以各种方法控制。通过使用抗血小板试 剂(例如GPIIb/IIIa抑制剂，阿斯匹林，潘生丁等)抑制血小板激活以确定的、可滴定的方 式减小了诱导血栓的趋势。改变局部血流，血压和组织温度还可以作为控制对刺激物的局 部血小板激活的方法。
典型的血管化肿瘤是实体瘤，特别是癌，其需要丰富的脉管血液供应。本发明涉 及的典型实体瘤包括，但不限于肺、乳腺、卵巢、胃、胰、喉、食管、睾丸、肝、腮腺、胆道、结肠、 直肠、子宫颈、子宫、子宫内膜、肾、膀胱、前列腺、甲状腺、头颈部的原发恶性肿瘤，黑素瘤 (melanomas)，神经胶质瘤(gliomas)，成神经细胞瘤(neuroblastomas)，神经内分泌肿瘤 (neuroendocrine tumors)等。本发明涉及的其它病症包括但不限于上述肿瘤类型的继 发性(转移)瘤，癌性疼痛，AV-畸形，子宫肌瘤，盆腔淤血，月经过多，精索静脉曲张，咯血 (hemoptysis),动脉瘤(aneurysms),内脏动脉动脉瘤(visceral artery aneurysms),假动 脉瘤(pseudoaneurysms)禾口内漏(endoleaks)。本发明优选方法包括制备包被重组或哺乳动物来源的VWF的线圈或支架和将 VffF-包被的试剂导入动物如人类患者，动物患者，或试验动物的血流中；然后将VWF递送或 汇集在期望的靶部位。线圈或支架可以由任何适当的材料构造，该材料能够将VWF保持在 线圈或支架内部或在线圈或支架的表面上不定的或变化长度的时间。针对实体瘤无限制生长的问题的解决方案是攻击肿瘤中的血管。该方法提供几个 优于直接靶向肿瘤细胞的方法的优势。首先，肿瘤脉管能够直接接近脉管施用的治疗剂，因 此允许高百分率的注射剂量的迅速局部化。第二，因为每个毛细管为在它周围肿瘤带中的 数千细胞提供氧和营养，即使对肿瘤脉管系统有限的损伤也可产生大量肿瘤细胞死亡。最 后，血管在不同肿瘤中是类似的，使开发治疗多种类型的癌的单一试剂是可行的。本发明的方法高度有效地抑制靶脉管系统中的血流。为患者提供最终的益处，该 方法和组合物还可与其他治疗方案，例如，化学疗法联合使用。发明详述本发明提供用于将血小板俘获在预定部位，激活血小板，和利用血小板的天然功 能来取得有益的治疗结果的组合物和方法。按照本发明，血小板可以是循环的血小板或 者可以是从外源获得的血小板。按照本发明，可以将血小板浓集特异性部位处或之上，然 后可以利用血小板诱导血栓形成的天然能力来阻止，中断，或减少该部位的血流。减少 的血流伴随着减少对疾病或病症体(condition agent)如肿瘤的营养供应，因此疾病体 (diseaseagent)的尺寸减小。减小肿瘤大小是明显的治疗益处，这一点是清楚的。在一些 情形中减少对靶区域的血液供应减轻疼痛。本发明提供了施用具有血小板结合剂的生物可降解微球，使得微球诱导血栓形 成，并使得血栓被永久的结缔组织替代的方法。本发明还包括使用能够结合和激活血小板的固相剂将血小板靶向能够被选择性 靶向的预定组织，例如增生组织。在本发明的这些实施方案中，靶向是指包含与预定部位或 组织特异性结合的靶向部分例如配体等的固相。在本发明的其它实施方案中，靶向可以包 括例如通过导管，支架，或线圈将本发明的组合物递送到或接近肿瘤部位。在预选的部位激 活血小板通过减少对组织或部位的营养供应导致治疗益处。本发明提供通过将血小板俘获在固相剂上诱导血栓形成，诱导血小板激活，和使 血栓形成的组合物和方法。靶脉管系统的血栓形成减少对下游组织的血液供应。通过将血 小板俘获在包含VWF的固相(例如包被的颗粒)上，本发明的组合物和方法可以用于治疗 癌，增生，子宫肌瘤，盆腔淤血，月经过多，AV-畸形，神经栓塞，精索静脉曲张，咯血，内脏动 脉动脉瘤，动脉动脉瘤，内漏等。此外，本发明的组合物和方法为组合物的受者提供治疗益处。在本发明的优选实施方案中，VWF是哺乳动物来源。在本发明最优选实施方案中， VffF是人源的。在本发明另一最优选实施方案中，VWF是猪源的。VffF可以是天然的，合成的，重组的，或符合VWF生物活性部分的肽序列。在本发明 的另一最优选实施方案中，VWF是重组来源的。本发明还提供将血小板结合剂(例如VWF)与固相直接或通过间隔物间接结合的 组合物，只要血小板结合剂结合血小板的能力不受损害。间隔物在本文中是指在物理上将 血小板结合剂从固相剂的表面分开的一组惰性或活性分子。例举的间隔物在下面描述。直 接结合可以共价或非共价地发生。间接结合可以通过间隔物发生，所述间隔物包括但不限 于肽间隔臂，抗体间隔物，抗体片段间隔物，融合蛋白间隔物或糖间隔物。这些间隔物通常 只作为颗粒和VWF之间的桥；然而，间隔物还可以用于改变血小板激活的程度。例如，Fc组 分可以用作间隔物，由此在固相剂上和周围实现增强的血小板激活。使用本领域技术人员 已知的方法可以发生VWF与固相剂的偶联。偶联剂的实例包括但不限于戊二醛和碳二亚 胺。在本发明的实施方案中，血小板结合剂可包括胶原蛋白。在本发明进一步的实施方案中，胶原蛋白是哺乳动物来源的。在本发明最优选的 实施方案中，胶原蛋白是人来源的。在本发明进一步最优选的实施方案中，胶原蛋白是牛、 羊、或猪来源的。在本发明进一步最优选的实施方案中，胶原蛋白是重组来源的。在本发明的优选实施方案中，不含活性靶向试剂的组合物在哺乳动物脉管系统中 的定位将通过在经高度选择性微导管递送后定向引导的血流选择。按照本发明的组合物还可以包括能够与靶抗原或在脉管内皮或靶组织上的部位 结合的靶向试剂或部分，由此使固相剂能够定位在所选部位。例举的靶向试剂或部分对于 本领域的技术人员是众所周知的，包括但不限于抗体，配体，受体，激素，植物血凝素，和钙 粘着蛋白，或其部分或片段。在本发明的优选实施方案中，靶向试剂将包括具有生物素，生物素模拟物 (mimetic)和/或肽组分的抗体或抗体样分子。在本发明另一优选实施方案中，抗体或抗体 样分子将指向生长因子/受体复合体。按照本发明的组合物还可以包括下列的一种或多种一种或多种血小板结合调节 剂(例如抑制剂或增强剂)，一种或多种血栓形成控制剂或调节剂或一种或多种补体级联 组分。按照本发明的方法还可以包括施用能够在预定部位结合血小板的固相剂；还可包 括诱导俘获的血小板的激活；施用具有抗原决定簇和血小板结合位点的双功能性结合剂； 通过改变本发明一种或多种组合物的温度，或通过改变预选部位处的温度控制血栓生成。按照本发明的方法可以另外包括以下的一项或多项施用一种或多种血小板结合 调节剂，施用一种或多种血栓形成调节剂；施用一种或多种补体级联组分；施用一种或多 种配体和/或抗-配体，其用于将固相结合到预定部位，和/或用于将血小板结合部分或组 分与固相结合。本发明还包括试剂盒，其可以包含但不限于任何或所有的以下组分，组分包括用 于将血小板靶向内皮膜元件的固相剂用于结合血小板的结合剂；用于结合内皮膜元件的配体；配体偶联物；用于结合配体或配体偶联物的抗配体；血小板结合调节剂(增强剂和/ 或抑制剂)；血栓形成调节剂；补体级联组分；补体级联组分诱导物；和包括抗配体的用于 结合血小板的结合剂。试剂盒可以包括双功能结合剂，和/或结合剂-配体偶联物，和/或 血小板结合剂-抗配体偶联物。本发明的组合物和方法包括将组合物递送到预选部位的任何机理，所述递送包括 但不限于全身地，局部地(locally)，口服地，或表面地(topically)。按照本发明的一些实施方案，将结合剂用于在预定部位俘获血小板。定义在本文中，固相剂是指适合用于结合，包含，或保留血小板结合剂的任何固体材 料。血小板结合剂可以被附着到固相剂以使血小板结合活性被保留，例如在靶部位或在靶 部位内部。固相剂可以是线圈，支架，或颗粒，例如珠或类似物，所有这些对于本领域技术人 员是众所周知的。在本文中，颗粒是指能够包含或保留血小板结合剂的固相材料的分离部分或一部 分。本发明的优选方法包括制备包被重组或哺乳动物来源的VWF的颗粒和将包被VWF的颗 粒导入动物如人类患者，动物患者，或试验动物的血流中。在本文中，术语“颗粒”是指能够 直接或间接(例如通过配体)结合血小板的任何固相材料。关于尺寸，颗粒可以是均勻或不 均勻的。具体地，颗粒可以是球形(包括椭圆形)或不规则形。可以用任何适当的材料构 建颗粒，该材料能够将VWF保留在颗粒内部或颗粒表面上不确定的或变化长度的时间。例 举的材料包括聚乙烯醇(PVA)，聚苯乙烯，聚碳酸酯，聚丙交酯，聚乙交酯，丙交酯-乙交酯 共聚物，聚己酸内酯，丙交酯-己内酯共聚物，聚羟基丁酸酯，聚烷基氰基丙烯酸酯，聚酐， 聚原酸酯，白蛋白，胶原蛋白，明胶，多糖，葡聚糖，淀粉，甲基丙烯酸甲酯，甲基丙烯酸，丙烯 酸羟烷基酯，甲基丙烯酸羟烷基酯，亚甲基二醇二甲基丙烯酸酯，丙烯酰胺，双丙烯酰胺，基 于纤维素的聚合物，乙二醇聚合物和共聚物，氧化乙烯和氧化丙烯聚合物，聚乙酸乙烯酯， 聚乙烯吡咯烷酮和聚乙烯吡啶，磁性颗粒，荧光颗粒，动物细胞，植物细胞，大颗粒聚集白蛋 白和小颗粒聚集白蛋白(micro-aggregated albumin)，变性蛋白聚集体和脂质体，单独或 结合使用。适用于本发明的固相材料对于本领域技术人员是众所周知的，应当不限于上述 列举的那些例证性材料。在优选的实施方案中，聚合物颗粒可包括非生物聚合物。在一些实施方案中，聚 合物颗粒选自聚丙交酯，聚乙交酯，和聚乳酸乙醇酸共聚物(polydactic-co-glycolic acid)(PLGA)。在本发明的实施方案中，血小板结合剂可包括胶原蛋白。在本发明进一步的实施方案中，胶原蛋白是哺乳动物来源的。在本发明最优选的 实施方案中，胶原蛋白是人来源的。在本发明进一步最优选的实施方案中，胶原蛋白是牛来 源的或猪来源的。在本发明进一步最优选的实施方案中，胶原蛋白是重组来源的。形成支架或线圈的例举材料包括但不限于聚乙烯醇(PVA)，聚苯乙烯，聚碳酸 酯，聚丙交酯，聚乙交酯，丙交酯-乙交酯共聚物，聚己酸内酯，丙交酯-己内酯共聚物，聚羟 基丁酸酯，聚烷基氰基丙烯酸酯，聚酐，聚原酸酯，多糖，葡聚糖，淀粉，甲基丙烯酸甲酯，甲 基丙烯酸，丙烯酸羟烷基酯，甲基丙烯酸羟烷基酯，亚甲基二醇二甲基丙烯酸酯，丙烯酰胺， 双丙烯酰胺，基于纤维素的聚合物，乙二醇聚合物和共聚物，氧化乙烯和氧化丙烯聚合物，聚乙酸乙烯酯，聚乙烯吡咯烷酮和聚乙烯吡啶；磁性材料，荧光材料；金，钼，钯，铼，铑，钌， 不锈钢，钨，钛，镍及其合金；单独或结合使用。固相材料的优选尺寸取决于所用材料的类型。例如，本领域技术人员将认识到如 果固相是支架或线圈，大小优选为在血管如动脉范围内的直径。典型地直径可达约15mm或 更大。如果固相是颗粒，如珠，直径可达约7mm，优选约1 μ m至约5mm，甚至更优选约20 μ m 至约300 μ m。适用于本发明的固相材料的尺寸对于本领域的技术人员是众所周知的，并应 当不限于以上列举的例证性大小。在本文中，结合剂或靶向部分是指用于将一种物质与另一种结合的一种或多种固 相化学或生物分子或构件。具体地，结合剂，或固相剂与在限定细胞群体，典型地增生组织 和/或相关脉管系统，或癌细胞和/或相关脉管系统上的配体，受体或配体/受体复合体结 合。分子作为结合剂的功能不应当受限于附着的结构机理。例如，结合剂可以结合受体， 抗原决定簇或表位，酶底物，或将结合剂与靶细胞或细胞群体连接的其它生物构件。结合 剂可以是偶联物，包括但不限于免疫偶联物，化学偶联物(共价或非共价)，融合蛋白等。 示例性的靶向剂或靶向部分是本领域技术人员所熟知的，并且包括但不限于抗体、配体、受 体、激素、凝集素和钙粘附蛋白，或其部分或其片段；和USP 6，960，532 ；6, 887，474 ；和USSN 11/205，047(于2005年8月17日申请)，每一个均通过引用合并于此。在本文中，配体结合剂是指显示彼此特异性结合的互补的一组分子。配体/抗配 体对通常以相对高的亲和力结合，为此，对于本发明的应用可能是高度理想的。非常著名的 配体/抗配体对是生物素和抗生物素蛋白。在本文中，抗生物素蛋白是指抗生物素蛋白，链 霉抗生物素蛋白，中性抗生物素蛋白(neutravidin)，其衍生物和类似物，及其功能等价物。 抗生物素蛋白可以以多价或单价方式与生物素结合。其它例举的配体/抗配体对包括但不 限于同源肽，异源肽，“亮氨酸拉链”，锌指蛋白/双链DNA片段，酶/酶抑制剂，半抗原/抗 体，配体/配体受体，和生长因子/生长因子受体。在本文中，所选部位，预定部位，靶向，和预先靶向全都指其中在固相剂周围的血 小板累积将提供治疗有益的结果的部位。典型地，这涉及靶向部分的靶部位定位。该部位 包括但不限于实体瘤的脉管系统，良性瘤的脉管系统，增生组织的脉管系统，AV畸形，脉管 动脉瘤和内漏。在本文中，使用导管，微导管或通过针和注射器可以发生包含血小板结合剂的固 相剂的递送。最经常通过动脉循环进入来实现通过导管或微导管的递送，然而通过静脉循 环递送固相剂也是理想的。例如，利用动脉或静脉循环通过对靶部位的导管可以递送颗粒， 线圈或支架形式的固相剂。利用动脉循环的固相剂的递送是有利的，因为在靶组织中施用 试剂下游的毛细血管床作为俘获试剂的工具，由此防止试剂进入体循环。还可以使用与固 相剂有关的靶向试剂将固相剂定位在动脉循环内部。利用静脉系统的固相剂的递送也是理 想的。可以通过使用与固相剂有关的靶向试剂将固相剂与靶部位结合来完成固相剂在静脉 系统中的定位递送。还可以在外科手术过程中将固相剂递送到靶部位。例如，通过注射器 和针可以将颗粒形式的固相剂递送到靶部位。作为另一实施例，在外科手术过程中可以手 工地将线圈或支架形式的固相剂放置在靶部位。在本文中，血栓是指陷于血纤蛋白中的血细胞的任何半固体聚集体和来源于血小 板与固相剂活性结合的血小板的凝块。按照本发明，作为活化的血小板在预定位置累积的直接结果形成血栓。血栓形成是指血栓的形成，典型地在血管中。形成血栓的是指易于导 致血塞形成，或血栓形成的物质。在本文中，栓塞物是指血管内的团块，其通过血流，和通过大小约束最终固定在血 管或毛细管中，远离血管内团块的起始部位。栓塞形成不意味着主动过程，而是指被动过 程，由此通过血管内团块穿过血流，在那它们固定在小血管和毛细管中而发生血管闭塞。相反，本发明涉及固相材料至靶脉管系统的递送，因此通过使用血小板结合剂将 血小板活性募集在固相表面。与包括在此作为参考的引用的专利中所述的栓塞材料形成对 比，由于血小板在固相材料周围的迅速累积，必须将本发明的试剂递送到接近靶脉管系统。例如，由Draximage (Kirkland, Quebec, Canada)提供的大分子聚集白蛋白 (macro-aggregated albumin) (MAA)，例如被用作检塞显象剂。MAA 由大小为 10 μ m_70 μ m, 最大尺寸为150 μ m的颗粒组成，所述颗粒用高锝酸钠Tc 99m放射性标记以使闪烁照相术 成像。将MAA颗粒静脉内注射，并作为栓塞穿过血流，其中它们被俘获在肺的肺泡毛细血管 床中。使用本发明的方法，将VWF固定在MAA上，随后将颗粒注射到血管系统中导致血小板 与颗粒立即结合和接近注射位置的脉管系统的闭塞。本发明在现有的产生血管闭合的方法上改善，通过使用血小板结合剂将血小板固 定在固相材料的表面，由此增加固相材料的有效尺寸。例如，被注射到血流中的包被或含有 VWF的颗粒将在它的表面上迅速累积血小板，在接近注射位置有效产生分层的，活化的血小 板的“洋葱-效应”。因此本发明能够将最少量的小颗粒递送到血流中，因此颗粒由与颗粒 上或内部的血小板结合剂活性结合的血小板的增加而在尺寸上迅速增加。此外，颗粒结合 的血小板将彼此相互作用，由此形成增加尺寸的聚集体，其产生紧密的基质和引起靶脉管 系统的闭塞。本发明另外在现有的产生血管闭塞的方法上改善，通过血小板结合剂将血小板固 定在固相材料的表面。本发明的试剂因此将具有下列体内效应a)模塑它滞留的血管或毛 细管的轮廓，b)产生固体、不通透的三维基质；这又在脉管中产生紧密的，不通透的密封， 由此最大地抑制血液向下游血管和组织的递送。例如，将血小板结合颗粒导入血流将进行经过下列顺序的事件a)在颗粒表面上 将形成单层血小板，由此形成(i)增加直径的颗粒和(ii)包被活化血小板的颗粒，其有 结合和激活悬浮液中附近的血小板的倾向，此处定义为‘单层的表面活化的血小板’颗粒 (S-SAP颗粒)，(b)在血流中流动的血小板将与结合形成‘洋葱样’层的S-SAP颗粒的血小 板相互作用，此处定义为‘多层的表面活化的血小板颗粒(M-SAP颗粒)，c)M-SAP将通过形 成较大聚集体的血小板/血小板相互作用而彼此相互作用，此处定义为‘M-SAP基质’。作为另一个实例，通过下述顺序的事件进行将包含或具有表面结合的血小板结合 剂(如VWF)的无定形血小板结合颗粒(如MAA)引入到血流中；a)单一的(single)血小 板将结合到颗粒的基质上或内部，从而形成(i)具有增加的直径和刚性的颗粒，(ii)包被 以并包含活化的血小板的颗粒，所述血小板具有结合和活化悬浮液中附近血小板的倾向； b)在血流中流动的血小板将与结合到和/或结合入颗粒的血小板相互作用，从而在颗粒内 部和/或颗粒上形成聚集体，c)包含和/或具有表面结合的血小板的颗粒将彼此相互作用 以形成大的颗粒聚集体。在本文中，提供治疗益处等等的治疗有益的是指受体动物的生理的理想变化。在本发明优选实施方案中，变化是可以检测的。按照本发明，可以使用或利用涉及活化血小板 或血小板调节的任何生物机理来取得有益的治疗结果。按照本发明产生的例举的治疗益处 包括但不限于形成血栓，形成血小板介导的闭塞，消除增生组织或细胞，消除肿瘤和/或肿 瘤细胞，减小增生组织的尺寸，减小肿瘤的尺寸，使增生组织或肿瘤变得对另外的治疗如化 学疗法和/或放射疗法等等敏感，缺乏或减少对增生组织或癌的营养供应，修复AV-畸形， 减少或防止血液从内漏中损失和修复脉管动脉瘤。在本文中，“施用”是指导致包含固相剂的组合物递送到预定细胞，多种细胞，或组 织，典型地哺乳动物的任何行为。施用可以体内，体外，或先体外后体内进行。例如，可以通 过注射或通过内镜或导管施用组合物。施用还可以包括直接将按照本发明的组合物施用到 细胞。例如，在外科手术期间，肿瘤或增生组织的脉管系统可能被暴露。按照本发明的实施 方案，例如通过洗涤或冲洗外科手术部位，脉管系统，和/或细胞可以将暴露的细胞或脉管 系统直接暴露于本发明的组合物。使用结合或靶向试剂可以将固相血小板结合剂定位在特定的靶部位。例举的结合 或靶向试剂包括但不限于单克隆抗体；多克隆抗体；嵌合单克隆抗体；人源化抗体；遗传工 程抗体；抗体片段，其选自 F(ab)2，F(ab，)2, Fab, F(ab，)，Dab，Fv, sFv, scFv, Fe，和最小 识别单位组成的组；表示单克隆抗体活性部分的单链(SC-Mab)；肿瘤结合肽；蛋白质，包括 受体蛋白质；肽；多肽；糖蛋白；脂蛋白等等，例如生长因子；淋巴因子和细胞因子；酶，免 疫调节剂；激素，例如促生长素抑制素；配体(与它的互补抗配体配对)；寡核苷酸；与介导 效应子功能的分子结合的上述任何一种；和上述任何一种的模拟物或片段。保持与确定靶 细胞群体结合能力的以上所列靶向部分的类似物也可以用于所要求的本发明中。另外，可 以设计合成的靶向部分。用于本发明的实施中的单克隆抗体包括完整的抗体及其片段。该单克隆抗体和片 段可以按照常规技术，如杂交瘤合成，重组DNA技术和蛋白质合成来生产。有效的单克隆 抗体和片段可以衍生于任何物种(包括人类)或可以作为利用来自多于1种物种的序列 的嵌合蛋白形成。通常参见 Kohler 和 Milstein，Nature (自然)，256 :495_97，1975 ;Eur. J. Immunol.(欧洲免疫学杂志)，6 =511-19,1976。优选的能够将固相剂定位在靶部位的结 合和/或靶向试剂是抗体或抗体样分子，优选单克隆抗体。更优选的结合剂是结合配体/受 体复合体的抗体，所述配体/受体复合体在增生组织或细胞(例如肿瘤)或与增生组织或 细胞有关的脉管系统上。最优选的结合剂是抗体或抗体样分子，其与肿瘤块如肿瘤脉管系 统上或附近的生长因子/生长因子受体复合体结合。在本发明的优选实施方案中，结合剂 (即抗体或抗体样分子)将与VEGF/VEGF受体复合体结合。在本发明另一优选实施方案中， 抗体或抗体样分子结合将识别由于配体/受体(即生长因子/生长因子受体)相互作用形 成的新表位(隐蔽的或先前不可用的表位)。在本发明另一优选实施方案中，抗体或抗体样 分子与生长因子/生长因子受体复合体的结合将不影响生长因子或生长因子受体的功能。在本发明的实施中寡核苷酸，例如与靶细胞核酸(DNA或RNA)的部分互补的反义 寡核苷酸也有效用作靶向部分。与细胞表面结合的寡核苷酸也有效。上述分子的功能等价物也有效用作本发明的靶向部分。一种靶向部分功能等价物 是“模拟”化合物，一种设计来模拟用于靶向部分-靶细胞结合的适当构象和/或定向的有 机化学构建体。另一靶向部分功能等价物是称为“最小”多肽，使用计算机辅助分子模型和具有改变的结合亲和力的突变体构建的短多肽，该最小多肽显示靶向部分的结合亲和力。免疫球蛋白的Fv片段对于定向肿瘤治疗来说具有许多优于完整免疫球蛋白的显 著的优势，包括在实体瘤组织上更好的损伤穿透和更迅速的血液清除，以及可能更低的Fc 介导的免疫原性。典型的单链Fv(SCFV)结合剂可以从分离自识别配体/受体复合体的抗 体的可变区的基因来设计。本发明的实施方案涉及与正常非肿瘤相关脉管系统相比，具有对标志物的结合亲 和力的靶向试剂，该标志物被发现，表达，易于结合，或另外定位在肿瘤相关脉管内皮细胞 的细胞表面上。另外，靶向试剂具有结合亲和力的某些标志物可以与肿瘤相关脉管系统的 组分有关而不是在肿瘤相关内皮细胞本身上。例如，该标志物可以位于基底膜或肿瘤相关 结缔组织上。可能需要制备和使用如通过组织切片的免疫染色评估具有对肿瘤脉管系统相对 高程度的选择性，和与正常内皮细胞的细胞表面的很小或无反应性的抗体或其它结合剂或 部分。还可能需要制备和使用能够结合所有脉管系统共有的表位的抗体或其它结合剂或部 分。可以使用按照本发明的含有或不含靶向试剂的包括固相血小板-结合剂的任何 组合物来引发体内治疗益处，血栓形成，和/或细胞致死或退化。组合物可以包括一种或多 种佐剂，一种或多种载体，一种或多种赋形剂，一种或多种稳定剂，一种或多种渗透剂(例 如，调节穿过细胞膜运动的试剂)，一种或多种显像剂，一种或多种效应物；和/或生理可接 受的盐水和缓冲剂。通常，佐剂是与免疫原混合以便引发更显著免疫应答的物质。组合物 还可以包括药用载体。药用载体包括但不限于盐水，无菌水，磷酸盐缓冲盐水等。在本发明 的组合物中可以包括适于递送给患者的其它缓冲剂，分散剂，和惰性非毒性物质。组合物可 以是适于给药的溶液，典型地是无菌的，非热源性的和不含不希望有的颗粒物质。通过常规 灭菌技术可以将组合物灭菌。在本发明的优选实施方案中，适当的组合物包括与配体/受体复合体结合的结合 剂或靶向试剂。按照本发明用作靶子的示例性抗原包括但不限于癌相关抗原，所述癌包括 肺，结肠，直肠，乳腺，卵巢，前列腺，头，颈，骨，免疫系统，血液，或其它任何解剖位置。示例 性抗原和/或预定部位包括但不限于VEGF/VEGF受体复合体，FGF/FGF受体复合体，或TGF. β/TGF. β受体复合体，ρ-选择素，唾液酸-路易斯X(Sialyl-leWiS X)，内皮缩血管肽，内 皮缩血管肽受体，内皮缩血管肽/内皮缩血管肽受体复合体，甲胎蛋白，血小板-内皮细胞 粘附分子(PECAM)，CD31,CD34, CD36，糖蛋白Ib(GPIb)，endoglin，凝血调节蛋白，内皮白细 胞粘附分子(ELAM)，胞间粘附分子I(ICAM-I)，MHC-I，和MHC-II。受试者可以是人或动物 受试者。如上所述，本发明的组合物或方法包括血小板结合剂或组分。示例性血小板结合 剂或组分包括但不限于冯威勒布兰特因子(VWF)，骨桥蛋白，血纤蛋白原，血纤蛋白，纤连蛋 白，玻连蛋白，胶原蛋白，血小板反应蛋白，层粘连蛋白，肝素，硫酸乙酰肝素，硫酸软骨素， 磷脂酶A2(PLA2)，基质金属蛋白酶(MMPs)，凝血酶，玻璃，唾液酸-路易斯X，fibulin-1, 血小板-内皮细胞粘附分子(PECAM)，胞间粘附分子1 (ICAM-I)，胞间粘附分子2 (ICAM-2)， CD lib/CD 18 (MAC-I)，CDlla/CD18 (LFA-1)，ρ-选择蛋白糖蛋白配体 1 (PSGL-1)，单独地或组
口 O
如上所述，本发明的组合物或方法可以包括血小板介导的闭塞增强剂。血小板介 导的闭塞增强剂可以是形成以上所述双功能分子一部分的部分，可以是按照本发明的组合 物中的成分，和/或可以与按照本发明的组合物分开施用。示例性的血小板-介导的闭塞增强剂包括但不限于瑞斯托菌素(ristocetin)， 凝血酶，肝素诱导的血小板减少症(HIT)抗体或其部分，抗磷脂抗体(APA)或其部分，通 过Fc-介导机理的全抗体分子，抗LIBS抗体，抗CD9抗体，肾上腺素，凝血酶受体激活肽 (TRAP)，蛋白酶(proteinase)活化的受体(也称为蛋白酶(protease)活化的受体，PAR)拮 抗剂，组织蛋白酶G，弹性蛋白酶，花生四烯酸酯，血小板活化因子(PAF)，血栓烷A2 (TxA2)， TxA2模拟物，磷脂酶A2(PU^)，蛋白激酶CO5KC)的激活剂，腺苷二磷酸(ADP)，环加氧酶 1 (C0X-1)的诱导物，环加氧酶2(C0X-2)的诱导物，胶原蛋白，冯威勒布兰特因子(VWF)，基 质金属蛋白酶(MMPs)，肝素，硫酸乙酰肝素，硫酸软骨素，离子载体，补体级联组分(例如 C5b-9)血小板微粒，血小板膜级分。如上所述，本发明的组合物或方法可以包括血小板介导的闭塞阻滞剂等。血小板 介导的闭塞阻滞剂可以是形成如上所述的双功能分子一部分的部分，可以是按照本发明的 组合物中的成分，和/或可以与按照本发明的组合物分开施用。示例性的血小板介导的闭塞阻滞剂包括但不限于阿斯匹林(aspirin)，布 洛芬(ibuprofen)，对乙酰氨基酚(acetaminophen)，酮洛芬(ketoprofen)，噻氯匹 定(ticlopidine)，氯吡格雷(clopidogrel)，吲哚美辛(indomethacin)，双嘧达莫 (dipyridamole), ω-3 月旨肪酸(omega-3 fatty acids),前列环素(prostacyclin)，氧 化氮(nitric oxide)，氧化氮的诱导物，氧化氮合成酶的诱导物，基质金属蛋白酶抑制剂 (MMPIs，TIMPs)，抗 GPIIb/IIIa 试剂，抗 α ν β 3 试剂，抗 α 2 β 1 试剂，抗 CD36 试剂，抗 GPVI 试剂，金精三羧酸(aurintricarboxylicacid)，凝血酶受体拮抗物，血栓烷受体拮抗物，链 激酶，尿激酶，组织纤溶酶原激活物(tPA)。另外，已知已经被冷却至低于它们膜相变温度(即< 15°C )的血小板变得不可逆 地活化。尽管如果灌输到患者中的血小板正常起作用，血小板也被迅速清除出身体(即，在 约24小时内，和7-10天的正常循环血小板的寿命形成对比)。尽管这些血小板被迅速清 除，它们以高亲力合与固定的VWF结合。因此，冷却的血小板的灌输提供另外的增强在靶部 位血栓形成的方法。因此，本发明的一个实施方案包括通过施用如上所述冷却的血小板控 制血小板介导的闭塞。如上所述，靶向部分可以是，或可以结合至结合对的一个成员。按照本发明的方法 可能要求足够的时期来在固定部位累积靶向部分，对非目标累积的最佳靶向，累积和结合 结合对的第二个成员，和/或清除未结合的物质。按照本发明，可能使用两步，三步或更多靶向或定位步骤。这些方案中许多在本领 域是众所周知的(参见，例如，使用生物素/抗生物素蛋白方案的美国专利5，578，观7)。示 例性的多步方案包括但不限于施用结合剂-配体，施用抗-配体以清除未结合的结合剂和 局部化结合的结合剂-配体，和施用活化剂-配体。在本文中，活化剂是指任何活性或变成 活性和导致治疗益处的治疗剂。按照本发明的方法，结合剂必须能够结合配体/受体复合体，并可以通过任何在 免疫学上适当的路线施用于患者。例如，可以通过静脉内，动脉内，皮下，腹膜内，鞘内，膀胱内，真皮内，肌内，或淋巴管内(intralymphatic)途径将结合剂导入患者。组合物可以是固 体，溶液，片剂，气溶胶，或多相制剂形式。脂质体，长期循环脂质体，免疫脂质体，生物可降 解微球体，微团等也可以用作载体，赋形剂，或递送系统。另外，使用本领域众所周知的先体 外后体内方法，可以将血液，血浆或血清从患者中取出；任选地，纯化患者血液中的抗原可 能是理想的；血液或血清然后可以与组合物混合，所述组合物包括按照本发明的结合剂或 固相剂；将处理过的血液或血清返回至患者。临床医师可以比较与这些不同的途径相关应 答来确定最有效的给药途径。本发明不应当限制于任何具体的将结合剂导入患者的方法。施用可以是一次，多次，或持续延长的时期。因为本发明的组合物可以用于处 于严重疾病状态，即生命危险或可能生命危险的患者，如果需要可以施用过量的固相剂。 用于施用药物组合物的实际方法和方案，包括注射本发明组合物的稀释技术，是众所周 知的或对本领域的技术人员将是明显的。这些方法和方案中的一些在雷明顿制药科学 (Remington，sPharmaceutical Science)，马克出版公司(Mack Publishing Co.) (1982)中 描述。固相剂可以与其它结合剂结合给药，或可以结合其它治疗方案或试剂，例如化学 治疗剂，栓塞剂如明胶海绵(Gelfoam)或聚乙烯醇(PVA)颗粒等给药。如在本领域众所周知，与体内施用治疗剂或治疗剂偶联物相关的缺点包括非目标 或不希望有的目标结合。因此最小化非目标结合，最小化非目标暴露于治疗剂或活性剂，和 /或最大化清除未结合的结合剂，配体，或活化剂是任何施用的组合物的理想属性。此外，最 优化这些属性典型地允许施用更高剂量的活性剂，治疗剂，或激活先前未激活试剂的方法 的成分。本领域的技术人员精通于选择施用最高可能的剂量而安全地保持在毒性阈值以下 的最佳参数。因此，按照本发明的优选实施方案，未活化的血小板通过与固相剂结合累积或被 诱导累积在预定部位，然后适当固定的血小板被选择性地激活。按照本发明的优选实施方案，激活的血小板通过与固相剂结合或通过与固相剂结 合的血小板累积或被诱导累积在预定部位。本发明的有效性可以通过测定血栓形成，血栓形成的形态测量研究，肿瘤坏死，肿 瘤大小，肿瘤形态学，和/或导致肿瘤坏死的血栓形成，血流研究(例如血管造影术，多普勒 超声，放射显影，CT扫描，MRI)，或疼痛症状的减轻的常规试验来监测。本领域的技术人员 将认识到可以进行其它试验来评估或监测治疗益处。本领域的技术人员将认识到对于某些先天性和病理学状况，其中一些所列如下， 理想的是改进本发明的组合物或方法来补偿患者过度出血或形成血栓的体质。在这些情形 下，可以利用增强或抑制本发明的方法或组合物的改良剂的应用。这些改良剂的应用预计 使出血或凝血事件最小化。此外，改良剂的应用能够在正常情形(即正常止血)下控制给 药按照本发明的组合物。可以许可使用控制剂(controller)，阻滞剂，或减弱本发明的方法或组合物的 试剂的示例性的促血栓形成或促凝结症状包括但不限于，因子A^idm缺乏，抗磷脂综合 症(APS)，蛋白C和/或蛋白S和/或抗凝血酶III缺乏，深静脉血栓形成(DVT)，假von Willebrands病，IIb类von Willebrands病，周围性血管疾病(PVD)，和高血压，这只是其 中之一。示例性的包括出血风险、可以许可使用增强剂或增加本发明方法或组合物的试剂的症状包括但不限于任何包括出血风险的症状，其包括但不限于凝固因子缺乏，血友病 (hemophilia)，血小板减少症(thrombocytopenia)，和抗凝治疗，这只是其中之一。控制血 栓产生包括改变预定部位温度，改变预定部位血流速率，和改变预定部位血压中的至少一 种。作为前述的实例，本领域的技术人员将认识到在血管闭塞过程开始后，相关促血 栓形成症状的逆转或抑制可能是必需的。在该情形中，降低血小板反应性的试剂的给药将 又减小对血管闭塞引发剂的应答。该试剂容易被本领域技术人员知道和包括但不限于阿 斯匹林或类阿斯匹林化合物，布洛芬，对乙酰氨基酚，酮洛芬，噻氯匹定，氯吡格雷，吲哚美 辛，ω-3脂肪酸，前列环素，氧化氮，氧化氮的诱导物，氧化氮合成酶的诱导物，基质金属蛋 白酶抑制剂(MMPIs, TIMPs)，抗GPIb试剂，抗GPIIb/IIIa试剂，抗α νβ 3试剂，抗α 2β 1 试剂，抗CD36试剂，金精三羧酸，凝血酶受体拮抗物，血栓烷受体拮抗物，链激酶，尿激酶， 组织纤溶酶原激活物(tPA)。其中增强或增加血小板闭塞过程是理想的示例性过程包括血小板减少(低血小 板量)患者。这些个体将受益于伴随或预先给药(灌输)血小板产品以提供足够来源的血 小板来实现血小板闭塞。本领域的技术人员将认识到在该情形下可以使用所有可灌输的模 拟或近似正常血小板功能的产品。该试剂包括但不限于随机供体血小板，单采血液成分术 血小板，自身血小板，洗涤的血小板，血小板膜级分，冷却的血小板，冷冻血小板，包含或表 达血小板膜组分的颗粒，血小板代用品和全血。作为另外的实例，一旦靶向治疗部位可以使用特定的血小板功能增强剂来提高或 增强初始的血小板反应性。已经证明本领域的技术人员已知的试剂增强现有的血小板反应 性和/或降低限制充分血小板反应性的阈值以促进在现有血栓周围的不可逆血小板附着 和/或血小板脱粒和/或血小板/血小板结合和/或血小板增加。这些试剂包括但不限于 瑞斯托菌素(restocetin)，凝血酶，肝素诱导的血小板减少症(HIT)抗体或其部分，抗磷脂 抗体(APA)或其部分，通过Fc-介导机理的全抗体分子，抗配体诱导的结合部位(抗-LIBS) 抗体或其部分，抗CD9抗体或其部分，肾上腺素，凝血酶受体激活肽(TRAP)，PAR拮抗剂，组 织蛋白酶G，弹性蛋白酶，花生四烯酸酯，血栓烷A2(TxM)模拟物，TxA2，磷脂酶A2(PLA2)， 蛋白激酶C(H(C)的激活剂，腺苷二磷酸(ADP)，胶原蛋白，冯威勒布兰特因子(VWF)，基质金 属蛋白酶(MMPs)，肝素，硫酸乙酰肝素，硫酸软骨素，离子载体，血小板微粒，血小板膜级分。一旦导入患有肿瘤，增生组织，AV-畸形，动脉瘤或内漏的动物的血流中，固相剂将 定位在靶脉管系统中；结合或固定血小板，由此固定激活血小板；激活的血小板又结合和 激活其它血小板直至形成闭塞。血小板激活和结合促进白细胞与活化的血小板结合，进一 步增强靶脉管系统的闭塞。实施例实施例1-颗粒固定的VWF在猪模型中的急性作用本研究是设计来评估包被人VWF的颗粒在猪肾的脉管系统中诱导血栓形成的有 效性。在该过程中，使用20-22规格的血管导管将导管插入肾动脉。通过外科手术暴露肾 脉管并将多普勒流量探针(Doppler flow probe)附着于肾脉管以监测血液流进和流出靶 器官。在从肾动脉和静脉采取的流量读数之间未发现显著的差异；因此，从肾静脉进一步 采取所有的读数以显示通过靶肾的血流量。通过与戊二醛过夜温育将人VWF与人MAA共价结合。改变基于每重量蛋白质基础上的、与MAA结合的VWF的量的先前滴定研究已经确定 1:5-1: 80 (MAA VffF)的比率提供足够的固定的VWF以诱导血小板结合和激活。在这 个基础上，选择1 20(MAA VffF)的比率用于体内研究。通过相差显微镜术的颗粒分析 证明最终制剂中的颗粒大小为30 μ m-250 μ m(如通过使用测微计/血细胞计数器通过光学 显微镜估计)。注射MAA/VWF (500 μ 1 或 lml)接着人 PRP (500 μ 1，包含约 200_400χ106 个血小板) 于猪的肾动脉导致血流量的显著减少。在检验试剂后将人血小板注射至人体内尽可能接近 病症附近。另外，注意到猪血小板与人VWF的结合非常弱。在注射检验试剂的10分钟内， 血流量已经降低至小于基线水平的一半。在注射检验试剂的15分钟内，血流量已经降低至 小于基线值的20%。在90分钟的监视期内向器官的血流量未增加。相反，注射于对侧肾的肾动脉之中的对照试剂(仅MAA ；相同蛋白质浓度)显示血 流量瞬时减小。血流量开始减小50%，但迅速恢复至接近基线水平，即在15分钟内> 80% 的最初血流量和在30分钟内> 90%的最初血流量。靶脉管系统的组织学检查显示在检验器官的肾动脉的最接近的分支中的大血栓， 和在对照肾中的肾脉管系统的较小血栓形成。在对照或检验动物的肝脏，肺，脾，脑，心脏和 眼中未发现血栓。实施例2-颗粒固定的VWF在猪模型中的慢性作用以类似于在实施例1中概述的方法的方式，使用20-22规格的血管导管将导管插 入2头检验和2头对照猪的肾动脉。将多普勒流量探针通过外科手术放置在每只动物的肾 静脉上，在闭合最初的切口后将导线暴露在动物的外皮上。在建立流过受侵袭的肾的血液 的基线后，将lml MAA VWF颗粒(Ilmg总蛋白)接着ImL富含人血小板的血浆(约460χ106 个血小板(血小板量458x107升)注射到检验动物的肾动脉中，将等量的MAA注射到对照 动物中。将动物转移至代谢板条箱(crate)并在7天期间在不同时间间隔监视。下表表示 来自这些研究的血流量结果。猪多普勒血流量(毫升每分钟)
权利要求
1.一种用于在预定部位处产生永久性闭塞的方法，包括施用包含血小板结合剂的生物 可降解材料，使所述材料诱导血栓形成，以及使所述血栓被结缔组织替代。
2.如权利要求1所述的方法，其中所述材料包括PLGA。
3.如权利要求1所述的方法，其中所述血小板结合剂包括胶原蛋白。
4.如权利要求3所述的方法，其中所述胶原蛋白选自由牛、人和羊胶原蛋白组成的组。
5.如权利要求1所述的方法，其中所述材料是颗粒物并具有均一的尺寸。
6.如权利要求1所述的方法，其中所述材料是颗粒物并具有均一的形状。
7.如权利要求1所述的方法，其中所述材料具有均一的尺寸和形状。
8.一种用于在体内诱导血栓形成的组合物，其包括包含血小板特异性组分的固相剂； 其中在递送至靶脉管系统时，所述血小板结合组分将血小板结合在所述固相剂上，诱导血 小板激活，并使血栓形成。
9.一种用于在预定部位处产生暂时闭塞的方法，包括施用包含血小板结合剂的生物可 降解材料，使所述材料诱导血栓形成。
10.包含血小板结合剂的生物可降解材料在治疗纤维瘤中的应用，其中用所述生物可 降解材料暂时阻断含纤维瘤的血管中的血流，并且当所述材料降解时所述血管变为未阻断 的。
11.包含血小板结合剂的生物可降解材料在因具有暂时性植入体而产生有益效果的任 何病症或疾病中的应用。
12.—种治疗疾病或病症的方法，包括施用包含血小板结合剂的生物可降解材料，使所 述材料诱导血栓形成，使所述材料降解，并且施用所述材料至少一次以上。
13.如权利要求1所述的方法，其中所述施用包括将所述固相剂定位在哺乳动物的脉 管系统内。
14.一种治疗疾病或病症的方法，包括对哺乳动物施用包含包被以胶原蛋白的PLGA的 固相剂，并且随后在体内诱导血栓，其包含通过血小板与固定在所述固相剂上或内部的结合剂的结合来俘获血小板，诱导血小板的激活，以及使血栓形成。
全文摘要
本发明主要涉及用于靶向和递送固相血小板依赖性血管闭塞剂的方法和组合物。特别是，将包被血小板结合剂的颗粒或线圈或支架导引至靶脉管系统，如实体瘤块或AV-畸形或动脉瘤或内漏的脉管系统；固相剂然后结合和激活血小板，其又结合和激活其它血小板。该过程导致在固相剂周围迅速形成血小板介导的血栓，致使血管闭塞。
文档编号A61K38/39GK102089006SQ200880125273
公开日2011年6月8日 申请日期2008年11月26日 优先权日2007年11月26日
发明者保罗·B·堤格, 安托万·努杰姆(死亡), 欧文·J·格里菲思, 罗兰·H·珀森, 迈克尔·W·斯图尔特 申请人:Im生物技术有限公司