专利名称：：海洋肽在制备促进剖宫产术后康复药物、保健食品中的用途的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种海洋肽产品及其新用途，具体来说是从海洋鱼类(鱼皮、鱼骨、鱼肉中提取的海洋肽在制备促进剖宫产术后康复药物、保健食品中的用途。属医药、食品保健领域。
背景技术：
：剖宫产的根本目的是解决难产和某些高危妊娠，挽救围生儿和孕产妇的生命。随着剖宫产手术方法的改进、麻醉技术的进步、抗生素的发展，以及术后镇痛技术的应用，剖宫产手术的安全性大有提高，产妇术后痛苦减少。因此在妇女分娩时较多使用。此外，初产妇对妊娠分娩没有经验，担心分娩过程中胎儿的安危、难产、惧怕产痛，担心会阴切开等阴道手术操作、阴道分娩后可能出现的阴道松弛，因而对分娩感到紧张、抑郁和恐惧，导致对自然分娩缺乏信心，对分娩时的社会心理承受能力较差。高龄产妇、前置胎盘、瘢痕子宫、巨大儿、妊娠高血压、妊娠期糖尿病等妊娠分娩高危因素发生率增加。社会上较为普遍的错误认识如剖宫产儿聪明、产妇痛苦少，家属方便等等，甚至提出选择吉日吉时分娩的要求，因此选择剖宫产术终止妊娠者也越来越多。近年来，剖宫产率呈日益增高趋势。欧美发达国家这种趋势的高峰出现在20世纪70年代末及80年代初，达25%左右，虽于80年代后期开始努力降低剖宫产率，并在其后的10多年中稳中有降，但在2000年以前，剖宫产率仍维持在20%左右，目前维持在5%20%，并未达到美国妇产科学会提出的剖宫产率目标值15%以内。国内于20世纪90年代初剖宫产率达20%左右，自90年代中期开始快速攀升，90年代末国内大城市医院的剖宫产率即已达到30%40%。目前虽无全国统计数据，但大多数城市医院报道的剖宫产率约在40%60%，高者甚至达60%80%以上，大有取代阴道分娩而成为常规分娩方式之势。剖宫产的应用越来越多。但剖宫产毕竟是一种手术，对母体是一种侵入性创伤，对产妇来讲存在麻醉意外、术后出血、产后感染、肺栓塞等近期并发症甚至死亡的危险，还有再孕后子宫下段剖宫产切口瘢痕处妊娠、子宫破裂等远期并发症等。其中，若伤口愈合不良，将给产妇带来术中术后出血、术后切口感染、切口裂开、产妇患病(慢性盆腔痛、盆腔粘连易位症、继发不育、流产)率高、剖宫产瘢痕妊娠(CSP)等危害。切口感染还可造成子宫下段切口炎出现术后晚期出血，严重者出现败血症危及产妇生命。而剖宫产瘢痕妊娠虽然发病率较低，一旦发生，产妇会有致命性大出血和子宫破裂的风险。因此，产后伤口良好愈合不仅有利于减少术后并发症，促进剖宫产术后恢复，对提高产妇的生活质量尤为重要。而伤口的愈合是一个复杂的生物学过程，皮肤切口的愈合过程一般经过4个时期(1)血管反应期血管收缩减少出血，血小板聚集形成血凝块，凝血酶原激活物将凝血酶原转变为凝血酶，后者使纤维蛋白原转化为纤维蛋白，使伤口边缘对合并形成抗感染屏障。(2)炎症期嗜碱性粒细胞(肥大细胞)释放包括组织胺和5-羟色胺在内的炎性介质，引起血管扩张和细胞通透性的增加，使中性粒细胞、单核细胞和淋巴细胞向创面聚集。血运增加有利于毒素及坏死组织碎屑的清除。毛细血管通透性增加有利于渗出反应，以便营养和清洗组织坏死后感染的创面。单核吞噬细胞转化为巨噬细胞，以吞噬细胞碎屑和细菌，在伤口愈合过程中至关重要。随着血管舒张和血管渗透力的增加、白细胞的浸润，出现白细胞和巨噬细胞的快速聚集。早期伤口的清洁是通过白细胞释放的氧自由基和溶酶体来促进细菌和异体碎屑的移除。这个过程还有大量的生长因子和细胞质分裂，包括转化生长因子(TGF-β)、血小板源性生长因子(PDGF)、表皮生长因子(EGF)、白细胞介素-I(IL-I)、成纤维细胞生长因子(FGF)、前列腺素(PG)、肿瘤坏死因子(TNF)等。巨噬细胞是这些因子的重要来源，它所分泌的生长因子刺激成纤维细胞、上皮细胞和血管内皮细胞移入伤口内。它的缺乏会严重影响伤口愈合。此期一般37d,出现组织坏死或感染时，此期可延长并影响愈合，导致瘢痕形成。(3)增殖期这一过程包括基质产物、血管内皮和上皮的生成，最终白细胞被巨噬细胞和成纤维细胞取代。在FGF、PDGF和TGF-β的作用下，巨噬细胞介导的细胞移动和增殖使伤口愈合基质形成，同时这些细胞还继续调整来对抗微生物的作用。在这一阶段，上皮细胞开始生长，角蛋白从上皮周围移动穿过伤口表面。基膜缓慢延续，直至表皮层完全闭合。主要生长因子包括角蛋白细胞生长因子36-016丄6和？06。(4)塑形期该过程起始于伤口的成纤维细胞在基质中的成熟程度和集中数量的增加。纤维母细胞在生长因子的刺激下生长、分裂并产生胶原蛋白和氨基葡萄糖，构成细胞外框架。伤口塑形的控制可归因于复杂的调节过程，细胞外基质和胶原的翻转，胶原的增加而继续进行，最后达到平衡，形成一个有力稳定的瘢痕，这个过程可持续达2年。由上述可知，除了依赖各种细胞的活动以外，伤口的愈合过程需要各种生长因子和细胞因子的综合调控，才能使伤口在一定时间内得以愈合。其中发挥重要作用的因子有转化生长因子-β(TGF-β)激活的血小板、巨噬细胞和淋巴细胞均可产生TGF-β,TGF-β对细胞分化、增生、炎症过程具有刺激、抑制或双相作用，对细胞外基质的合成、重塑具有独特作用。TGF-β不仅通过促进成纤维细胞趋化，产生胶原纤维和细胞外基质，还可减少胶原酶的合成，增加金属蛋白酶抑制剂的产生，从而减少伤口中的酶解作用，促进伤口愈合。血小板源性生长因子(PDGF)在伤口局部激活的血小板、单核细胞、巨噬细胞和成纤维细胞都可合成PDGF。PDGF不仅对成纤维细胞、单核细胞及中性粒细胞有趋化吸引作用，还可刺激成纤维细胞增殖、生成基质、表达整合素受体、迁移到伤口区，在损伤后期诱导成纤维细胞向肌成纤维细胞转变[1°]。成纤维细胞生长因子(FGF):FGF是一个家族，目前已有19个成员，FGF各成员结构相关、功能相似，调节多种细胞的生长、分泌、迁移和凋亡。研究表明FGF通过旁分泌的方式发挥作用，对早期的生长因子IL-I产生必要刺激，而后者在内皮的修复中起重要作用。其中的碱性FGF(bFGF，FGF2)有促血管生成作用，调节血管壁细胞的生长及其功能；有丝裂原活性和趋化作用，可促进成纤维细胞的生长、增殖，趋化炎性细胞和组织修复细胞向创面聚集。此外，FGF家族成员中FGF7X称角化细胞生长因子(KGF)，对表皮细胞有独特的刺激作用，原位杂交可见损伤皮肤的伤口边缘表皮和真皮KGF高度表达，与表皮再生密切相关。如果某些生长因子缺乏、胶原蛋白的合成与降解平衡紊乱，将会影响愈合过程，弓丨起过度增生和瘢痕的形成；或者减慢甚至终止愈合过程。5%15%的伤口通常在手术后很快出现过度增生和瘢痕。产妇伤口的瘢痕组织宽大及切口瘢痕裂开可导致剖宫产瘢痕妊娠的发病风险增加。此外剖宫产手术时间、手术切口位置、切口类型、子宫切口缝合方式、术后伤口感染、愈合不良、全身情况(年龄、肥胖、营养不良、维生素、微量元素、全身性疾病以及药物)等因素都将影响伤口愈合的过程。胶原蛋白具有独特的纤维状结构和良好的生物相容性、可降解性和低抗原性，已较多应用于制作美容化妆品、生物医学材料、保健品等。胶原蛋白体外应用有改善表皮细胞微循环和促进皮肽组织新陈代谢的作用，从而加速组织再生与修复。动物实验及临床实验均证明，胶原蛋白能促进表皮细胞生长，具有独特的自动修复功能，可以引导上皮细胞迁入缺损区，并在细胞迁移时起到支持和润滑作用。戴耕武等人用胶原蛋白贴膜治疗轻、中度痤疮，研究表明能改善皮肤血液循环，疗效显著。此外，胶原蛋白含有丰富的细胞代谢所需的氨基酸，可改善皮肤细胞的生存环境，促进皮肤组织的新陈代谢。胶原蛋白中蕴藏着多种生物活性肽，具有抑制血管紧张素转化酶活性、抑制血小板凝结活性、抗氧化活性及抗肿瘤活性等。鱼类皮肤和骨或肉中富含胶原蛋白，来源于鱼类皮肤和骨或肉的海洋肽是以相对分子质量在1000以下的小分子肽为主要成分的粉末状低聚肽产品，由26个氨基酸组成，富含羟脯氨酸等胶原合成原料。不仅具有很好的溶解性、低黏度、高浓度、水溶性、热稳定性等特点，而且在体内吸收快、利用率高。胶原肽具有保湿性，因此有一定的美容效果，已经广泛应用于化妆品。美国CTFA化妆品原料手册录用的天然物质和日本《功能性化妆品原料》中选用的天然物质都有胶原蛋白及其水解产物胶原肽。体外实验证实，鱼胶原肽作为天然的美白化妆品原料，具有较强的酪氨酸酶活性抑制能力。除化妆品领域，胶原肽在降压、降血脂、调节血糖、抗氧化、增强免疫力、抗风湿、健骨等方面的活性也逐渐成为人们研发的热点。动物实验表明，海洋低聚肽具有一定的降血脂、调节血糖、抗氧化、增强免疫力、增加骨密度的活性。国内外已有部分研究论证了海洋肽对实验动物具有抗损伤和抗氧化等功效。由此看来，国内外对海洋肽的保健作用研究已取得了令人瞩目的成就，许多海洋肽药品和保健食品已相继问世，经济效益十分显著。但目前对于海洋肽在促进剖宫产术后伤口愈合和康复的研究还很少，如果通过开发药物、保健食品及食品达到促进剖宫产术后康复的功能，改善剖宫产术后患者的生活质量之功效，既经济又实用，将对我国的卫生保健行业带来很大的前景。
发明内容本发明的目的是提供一种海洋肽产品及其在制备促进剖宫产术后康复药物、保健食品中的用途。本发明提供的海洋肽是以海洋鱼类的鱼皮、鱼肉或鱼骨为主要原料，经酶法水解生产的、能被三氯乙酸溶解、相对分子质量在1000以下的一组低分子量的寡肽混合物，包括海洋胶原肽(来源于鱼皮)和海洋骨源肽(来源于鱼骨)或海洋蛋白肽(来源于鱼肉)，具有容易吸收、吸收快、低粘度、水溶性好等特点。其中所述的药物、保健食品为粉剂、颗粒剂、胶囊、片剂、丸剂、口服液。具体实施方案下面结合具体实施方案对本发明作进一步的说明，这些实例应被理解为仅是举例说明，而非以任何方式限制本发明的范围。实施例海洋胶原肽促进大鼠剖宫产术后伤口愈合的作用研究一、材料与方法孕15天SD大鼠96只，由北京大学医学部实验动物中心提供，清洁级动物房饲养，饲养环境温度25°C，湿度60%RH。随机分为4组，即对照组、海洋胶原肽低、中、高剂量组，每组24只。孕鼠适应性喂养3天后，在孕19天时，对照组给予生理盐水灌胃，胶原肽组给予相应剂量(0.13g/kgbw,0.38g/kgbwU.15g/kgbw)的海洋胶原肽灌胃，1%苯巴比妥钠腹腔注射麻醉，在下腹部沿腹中线剪开3cm纵切口，打开腹腔，在两侧子宫背对肠系膜侧的中部各做2.Ocm的纵向切口，挤出大鼠幼崽和胎盘。用5-0可吸收性外科肠线连续缝合，深腹、筋膜、腹膜用4-0丝线缝合，皮肽用4-0丝线缝合。术后涂2%碘酊，注射青霉素0.1ml，放回盒子里，注意保暖，术后禁食1天，正常饮水。海洋胶原肽各剂量组术后继续给予相应剂量的海洋胶原肽灌胃，每日一次，对照组给予等体积生理盐水灌胃。手术后每日用放大镜观察伤口变化情况。各组于术后第3天观察伤口及其周围组织的创伤反应，第7、14、21天观察伤口的愈合情况。术后创伤反应及伤口愈合情况统一按表1、表2中标准进行评分。表1.伤口及其周围组织的创伤反应评分标准<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>表2.伤口愈合情况评分标准<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>在术后7天、14天、21天每组分别处死8只大鼠，分别测定伤口皮肤张力和子宫破裂压力，并进行组织病理学观察，评价皮肤和子宫切口愈合情况。伤口皮肤张力测定方法颈椎脱臼处死大鼠，取长1cm，宽0.5cm的伤口处皮肤组织，固定于仪器(Pclab-UE生物医学信号采集处理系统，北京微信斯达科技发展有限责任公司)两端，拉开皮肤，直至拉断，记录张力最大值为伤口皮肤张力。子宫破裂压力测定方法颈椎脱白处死大鼠，取出子宫，将仪器(Pclab-UE生物医学信号采集处理系统，北京微信斯达科技发展有限责任公司)的导管插入子宫腔，并在合适的部位结扎固定。导管的近端与仪器连接，勻速向子宫腔内注入生理盐水，直至子宫爆裂或者液体渗出，所记录的最高压力为破裂压力。二、结果肉眼观察表现，术后第3天，对照组大鼠伤口多数有血痂附着，伤口及周围组织明显水肿，而海洋胶原肽组大鼠伤口的水肿程度明显减轻，伤口创伤反应评分均高于对照组，其中高剂量组(1.15g/kgbw)得分明显高于对照组(P<0.05)(表3)。术后第7、14、21天伤口愈合肉眼观察结果显示，海洋胶原肽各剂量组大鼠伤口愈合明显情况好于对照组大鼠，其中高剂量组(1.15g/kgbw)在第7、14、21天的伤口愈合得分均明显高于对照组(P<0.05)(表4)。而且，海洋胶原肽组大鼠比对照组大鼠伤口愈合时间平均提前1.7天。表3.各组伤口创伤反应情况比较<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>*与对照组比较，差异有显著性(P<0.05)表4.各组伤口愈合情况比较^<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>*与对照组比较，差异有显著性(P<0.05)伤口皮肤张力测定结果显示海洋胶原肽各剂量组均可提高剖宫产大鼠伤口皮肤抗拉能力，其中海洋胶原肽高剂量组(1.15g/kgbw)术后第7、14、21天时伤口皮肤张力均明显高于对照组(P<0.05)；中剂量组(0.38g/kgbw)术后第14、21天时大鼠伤口皮肤张力明显高于对照组(P<0.05)(表5)。表5.海洋胶原肽对剖宫产大鼠术后伤口皮肤张力的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>*与对照组比较，差异有显著性(P<0.05)子宫破裂压力测定结果显示海洋胶原肽各剂量组均可促进大鼠剖宫产术后子宫恢复情况，表现为子宫破裂压力增高，其中高剂量组在术后7、14、21天时的子宫破裂压力明显高于对照组(P<0.05)，中剂量组大鼠术后14天子宫破裂压力明显高于对照组(P<0.05)(表6)。表6.海洋胶原肽对剖宫产大鼠术后子宫破裂压力的影响Μ||剂量_子宫破裂压力(mmHg)_力(g/kgbw)7天14天21—天一「00441"^iKtMti0371.46土111.55~413.31±177.04560.37±95.90低剂量组0.13452.19士305.35567.21±262.99676.99士184.44中剂量组0.38598.76士261.58677.10±205.47*675.51+346.34高剂量组_1.15689.73±275.98'718.08土185.14*836.79±210.60**与对照组比较，差异有显著性(P<0.05)病理组织学检查结果显示，术后第7天海洋胶原肽组大鼠伤口上皮厚度、新生毛细血管数量均明显大于对照组，胶原纤维较对照组增多、增粗、融合，呈平行于皮肤表面排列，炎性细胞少于对照组。术后第14天组织切片观察显示，海洋胶原肽中剂量组和高剂量组新生表皮层细胞已经覆盖创面，新生纤维组织中毛细血管及成纤维细胞数量已见减少，胶原纤维含量高于对照组且排列整齐，对照组新生表皮层细胞间断覆盖创面。术后第21天，海洋胶原肽组伤口表皮完整，瘢痕组织面积收缩变小，胶原纤维排列较整齐，而对照组伤口组织中仍可见少量胶原纤维聚集成束，呈卷发状，排列紊乱。其中1.15g/kgbw海洋胶原肽组效果最好。上述结果表明海洋胶原肽具有促进剖宫产术后皮肤伤口愈合，增加皮肤伤口抗拉强度，同时可促进剖宫产术后子宫伤口愈合，增加剖宫产术后子宫抗破裂压力的作用。权利要求海洋肽在制备促进剖宫产术后康复药物、保健食品中的用途。2.如权利要求1，其中所述的海洋肽是以海洋鱼类的鱼皮、鱼肉或鱼骨为主要原料，经酶法水解生产的、能被三氯乙酸溶解、相对分子质量在1000以下的一组低分子量的寡肽混合物，具有容易吸收、吸收快、低粘度、水溶性好等特点。3.如权利要求1，其中所述的药物、保健食品为粉剂、颗粒剂、胶囊、片剂、丸剂、口服液。4.如权利要求1，其中所述的剖宫产术后康复是指剖宫产术后手术切口愈合和子宫切口愈合。全文摘要本发明涉及一种海洋肽产品及其在制备促进剖宫产术后康复药物、保健食品或食品中的用途。海洋肽是以海洋鱼类的鱼皮、鱼骨或鱼肉为主要原料，经酶法水解生产的、能被三氯乙酸溶解、相对分子质量在1000以下的一组低分子量的寡肽混合物，包括海洋胶原肽(来源于鱼皮)、海洋骨源肽(来源于鱼骨)和海洋蛋白肽(来源于鱼肉)，具有容易吸收、吸收快、低粘度、水溶性好等特点。经动物实验证实，海洋肽具有促进剖宫产术后皮肽伤口愈合和促进子宫伤口愈合的作用。文档编号A61P17/02GK101797373SQ200910008620公开日2010年8月11日申请日期2009年2月6日优先权日2009年2月6日发明者李勇,王军波申请人:黑龙江省索康营养科技有限公司;李勇