专利名称：人zhx2转录因子核心片段及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种人ZHX2转录因子核心功能片段及其应用，属于基因工程技术领域。
(二)
背景技术：
肝细胞癌(H印atocellular carcinoma, HCC)是指自肝细胞或肝内胆管细胞发生的肿瘤， 在世界范围内HCC发病率位于所有肿瘤的第五位，病死率居第三位。乙型肝炎病毒 (H印atitis B virus, HBV)感染是肝癌发生的重要危险因素，临床研究发现63. 2%的肝癌 患者乙肝表面抗原阳性。我国是HBV高发区，约1.7亿人受朋V感染，因而也是肝癌高发区， 肝癌死亡率居世界之首，死亡数占全球40%左右。HCC病程短、进展快、死亡率高，因此， 早期发现、及时治疗是提高治愈率的主要手段。
肝癌切除术是目前HCC最有效的治疗手段。但受手术适应症的限制，手术切除率不足 20%，且术后复发率在70%以上。多数失去手术机会的肝癌病人，特别是肝癌细胞对化学治 疗和放射治疗不敏感，主要采用各种非手术介入性疗法。目前已有很多介入治疗方案应用于 治疗肝癌，包括肝动脉介入治疗、酒精注射疗法(PEIT)、门静脉介入治疗、生物治疗(免 疫治疗，基因治疗)，热疗(激光治疗，微波治疗，射频治疗)、冷冻治疗等。但由于目前介 入疗法注入的药物缺乏特异性，且多伴有并发症，如菌血症、败血症、出血、导管脱落、动 静脉瘘、胆瘘、气胸等。因而，研究更有效的新的治疗手段成为目前肝癌治疗的重点。分子 耙向治疗以肿瘤细胞在分子遗传学水平的特征性改变为作用靶点，具有特异性强、疗效显著、 不良反应小等优点，使得分子靶向药物应用于治疗原发性肝癌具有光明的前景。深入探索 HCC致癌的分子机制，明确治疗的有效靶点是分子靶向治疗药物研发的关键。
肿瘤发生是一个多步骤逐渐演变涉及多组基因结构和表达水平变化的复杂过程。目前发 现一些肿瘤标记物如AFP， GPC3等，不仅在肝癌诊断中具有重要意义，在HCC发生中同样发 挥重要作用，是潜在治疗靶标。
甲胎蛋白(AFP， alpha-fetoprotein)是诊断肝细胞肝癌的重要肿瘤标志物。我国在上世
纪70年代便开始进行研究和应用。其肝癌诊断阳性率为60% 70% (参见贾户亮；刑戌健；
叶青海；钦伦秀等，甲胎蛋白在原发性肝癌临床诊断中的应用，中国医学科学院学报，2008; 30(4): 440-443)。磷脂酰肌醇蛋白聚糖(Glypican-3， GPC3)是近期发现的新的肝癌肿瘤标 记物。临床数据显示，GPC3联合AFP检测可将诊断肝癌的敏感性从单一 AFP的58. 8%%提高 至廿70% 80% (参见Capurro M， Wanless IR， Sherman M, Deboer G， Shi W， Miyoshi E, Filmus J.Glypican-3: a novel serum and histochemical marker for hepatocellular carcinoma. Gastroenterology. 2003 Jul; 125(1) :89-97. )。 AFP与GPC3蛋白的表达在哺
乳动物中都受到精确的调控胚胎期开始合成，胎儿中晚期达到峰值，出生后快速下降。到 成人时，体内几乎检测不到其表达，而肝细胞再生或恶变时被再次激活(参见1， Nakatsura
T, Yoshitake Y， Senju S， et al. Glypican-3, overexpressed specifically in human hepatocellular carcinoma, is a novel tumor marker. Biochem Biophys Res Commun 2003;306:16-25 ; 2 ， DING Guanghui Expression of the Glypican-3 Gene in a-fetoprotein-negative Human Hepatocellular Carcinoma .The Chinese-German Journal of Clinical Oncology Oct. 2005, Vol. 4， No. 5)。更有文献研究将AFP和GPC3作为耙 基因，报道它们参与肿瘤细胞生长调节，促进肿瘤细胞增殖，在肿瘤细胞逃避免疫监视等方 面发挥的重要作用(参阅Wang XW, Xu B. Several new targets of antitumor agents.Zhongguo Yao Li Xue Bao. 1997 Jul;18 (4):289-92; Ishiguro T， Sugimoto M， KinoshitaY， Miyazaki Y， Nakano K, Tsunoda H， Sugo I， 0hizumi I， Aburatani H， Hamakubo T， Kodatna T, Tsuchiya M, Yamada-0kabe H. Anti—glypican 3 antibody as a potential antitumor agent for human liver cancer.Cancer Res. 2008 Dec 1;68 (23):9832-8.)。 上述研究提示在肝癌发生过程中AFP和GPC3起到重要作用，对发现新的治疗靶标具有重要 思o
Zinc fingers and horaeoboxes2 (ZHX2)是一种广泛存在于脊椎动物体内、具有多个特 殊结构域的核内转录因子，是AFP和GPC3的负向调控因子。2005年以来，Spear利用转基 因鼠模型，先后发现鼠ZHX2可以调控鼠源AFP及GPC3基因的表达(参阅Morford LA， Davis C， Jin L， Dobierzewska A， Peterson ML, Spear BT. The oncofetal gene glypican 3 is regulated in the postnatal liver by zinc fingers and homeoboxes 2 and in the regenerating liver by alpha-fetoprotein regulator 2. Hepatology. 2007 Nov;46(5) :1541-7)。我们前期通过ZHX2基因过表达与siRNA沉默技术发现人ZHX2可以负 向调控HCC中AFP表达，并利用双荧光素酶报告基因检测系统探讨了 ZHX2对AFP启动子抑 制作用机制(参阅Shen H， Luan F， Liu H， Gao L, Liang X, Zhang L， Sun W, Ma C. ZHX2 is a repressor of alpha-fetoprotein expression in human hepatoma cell lines. J Cell Mol Med. 2008 Dec; 12(6B) :2772-80. Epub 2008 Jan 11;)，我们的最新研究证明ZHX2同 样可以调控HCC中GPC3表达。2009年，Yamada发现ZHX2可以抑制肝细胞内其他肿瘤标记 物的转录(参阅Kazuya Yamada, Hiroko Ogata-Kawata， Kaoru Matsuura, Norio Kagawa， Katsuhiro Takagi, Kosuke Asano， Ayumi Haneishi, Kaoru Miyamoto, ZHX2 and ZHX3 repress cancer markers in normal hepatocytes ， Frontiers in Bioscience 14， 3724-3732， January 1， 2009)。上述结果显示，ZHX2可以调控多种肿瘤标记物。然而，ZHX2是否参与 HCC发生，其表达是否可以抑制肿瘤细胞生长，迄今尚无报道。我们的研究发现ZHX2可以 抑制肝癌细胞生长，调控其凋亡，在HCC基因治疗中有良好应用前景。
ZHX2含有两个Cys2-His2型的锌指(Znf)模序和五个homeodomains(HDs)，其编码蛋白包 含837个氨基酸，它能够定位于细胞核内发挥转录因子的特性。ZHX2不仅自身可以形成同源 二聚体，也可以相互之间以及与NF — YA的AD区形成异源二聚体。共转染实验显示ZHX2可以抑 制293细胞中cdc25启动子的活性，且发挥抑制作用的最小功能区域在其氨基酸序列的263至 446范围内，在这个区域内包含了整个HD1区和脯氨酸富含区(参见Kawata H , Yamada K ， Shou Z ， MizutaniT ， Yazawa T ， Yoshino M , Sekiguchi T ， Kajitani ， MiyamotoK . Zinc-f ingersan dh omeoboxes (ZHX) 2 ， a novel member of the ZHX family as a transcriptional repressor. Biochem J. 2 003 ; 373 (Pt3) :747-57.)本实验室前期工作已经证明人ZHX2可以通过AFP核心 启动子来抑制肝癌细胞中AFP表达，但全长的ZHX2 (1AA-837AA)分子量大，体内应用受到一 定限制。因此，我们在ZHX2基因中找到了一个可以实现类似功能的核心片段——ZHX2mini， 且其对下游基因(AFP， GPC3等)的抑制作用效果要优于全长。目前，利用ZHX2基因的真核表达载体作为HCC治疗药物，通过ZHX2核心片段的表达来 调控AFP、 GPC3等下游基因，抑制肝癌细胞生长，国内外尚未见报道。
(三)
发明内容
本发明针对现有技术的不足，提供人ZHX2基因表达的核心序列及其针对该核心序列 (ZXH2 mini)的真核表达载体pcDNA3-ZHX2 mini,并且进一步提供了 ZXH2 mini基因的真 核表达载体作为肝癌治疗药物的应用。
人ZHX2转录因子核心片段，它具有如SEQ ID No. 1所示核苷酸序列。 具有人ZHX2转录因子功能的蛋白质，它具有如SEQ ID No. 2所示氨基酸序列。 一种含有SEQ ID No. 1所示核苷酸序列的表达载体。
一种含有SEQ ID No. 1所示核苷酸序列的表达载体的构建方法，具体步骤如下 以人ZHX2基因序列(GenBank号:GI:63079684)中724bp至1503bp核苷酸序列作为革巴 序列，设计引物，进行PCR反应扩增目的基因；用限制性内切酶分别酶切PCR产物和pcDNA3 质粒，混合后，再经过T4连接酶连接，获得含目的基因的表达载体。
上述引物正义链序列为SEQ ID NO. 3和SEQ ID NO. 5，反义链序列为SEQ ID NO. 4和SEQ ID NO. 6。
上述的载体pcDNA3购自Progema公司。目的基因导入方法参见该产品说明书。 将上述制得的含目的基因的表达载体转化入大肠杆菌DH5a，抗性基因筛选后，重组子
经DNA测序(见附图l)鉴定阳性重组质粒，命名为pcDNA3-ZHX2 mini (见附图2)。其中，
目的基因(780bp)由pcDNA3-ZHX2-HA重组子PCR扩增获得。
上述人ZHX2转录因子核心片段在抑制人类肝癌细胞生长的应用。 上述具有人ZHX2转录因子功能的蛋白质在抑制人类肝癌细胞生长的应用。 含有上述人ZHX2转录因子核心片段的表达载体在抑制人类肝癌细胞生长的应用。 本发明的有益效果如下
本发明所述人ZHX2转录因子核心片段作为ZHX2基因的核心片段，其表达产物可以特异 性、高效地抑制人类肝癌细胞中AFP和GPC3的表达，可以特异、高效地抑制人类肝癌细胞 的生长和细胞集落形成能力。该表达产物还可以显著增强TRAIL诱导的肝癌细胞凋亡。肝癌 荷瘤鼠模型证明，该核心片段可以抑制瘤体生长。
另外，由于ZHX2为体内细胞广泛表达的基因，不会因为外源ZHX2的表达，影响到正常 细胞的功能，使得利用该基因进行肿瘤靶向基因治疗时，不会损害正常体细胞。
(四)
图1人ZHX2 mini表达载体pcDNA3-ZHX2 mini的测序图谱；
图2人ZHX2 mini表达载体pcDNA3-ZHX2 mini的物理图谱；
图3不同截断片段ZHX2表达对AFP表达抑制作用的比较图4不同肝癌细胞系中GPC3表达与ZHX2表达负相关比较图5 ZHX2的过表达有效抑制GPC3的表达的电泳图6 ZHX2抑制H印G2细胞生长的柱状示意图7 ZHX2抑制H印G2集落形成能力的柱状示意图8 ZHX2可显著增强TRAIL诱导的肝癌细胞凋亡的流式示意图9 ZHX2显著抑制荷瘤裸鼠体内肿瘤生长的折线图。
具体实施例方式
为了更好地理解本发明的实质和验证本发明所述ZHX2 mini基因及其真核表达载体 重组子的作用效果，下面以药理实验及结果来进一步阐明。 实施例
实施例中未特殊描述的操作步骤均参考本领域常用操作规范。 參构建ZHX2不同截断片段
1目的基因片断的获得
1.1以pcDNA-ZHX2-HA的cDNA为模板，根据设计的ZHX2不同截短片段的引物进行PCR扩 增。取O. 2mlPCR反应管，以pcDNA-ZHX2-HA的cDNA为模板，分别以F1/R1， F2/R2和F2/R1为引 物，扩增ZHX2 (l-501AA) -HA， ZHX2(242-338AA)-HA， ZHX2(242-501AA)-HA基因。Fl的序列如 SEQ ID NO. 3所示，R1的序列如SEQ ID NO. 4所示，F2的序列如SEQ ID NO. 5所示，R2的序列 如SEQ ID NO. 3所示。
反应体系按下述加样 ZHX2-HA (1-501AA):
反应溶液(2XPlatinum Taq12. 5y 1
PCR Master Mix)
上游引物Fl0. 5y 1
下游引物Rl0. 1
DNA模板(cDNA)1 P 1
双蒸馏水(DDW)10. 5y 1
25 u 1
2-338AA):
反应溶液(2XPlatinum Taq12. 5ul
PCR Master Mix)
上游引物F20. 5y 1
下游引物R20. 5y 1
DNA模板(cDNA)1 y 1
双菡馏水(丽)10. 5 u 1
25 u 1ZHX2-HA (242-501AA):
反应溶液(2XPlatinum Taq PCR Master Mix) 上游引物F2 下游引物Rl DNA模板(cDNA) _双蒸馏水(DDW)_
12. 5y 1
0. 5u 1 0. 5u 1 1 Hi 化-5 u 1
25ul
在旋涡混旋器上振荡混匀5s， 12，000r/m离心10s，放入PCR仪，以下述条件进行PCR扩
6增95。C预变性5min后；进行下述循环95'C变性45s， 58。C退火45s, 72。C延伸50s, 30个循 环；72°C再延伸5min。
1.2 PC財广增产物的琼脂凝胶电泳
制备1%的普通琼脂糖凝胶，含EB 0.5yg/ml。取上述PCR扩增产物5iil加入凝胶加样 孔内，70v电压电泳lh，同时电泳分子量标准DL2000,紫外线检测仪上观察并摄影记录。
1.3 PCR产物的大量扩增及目的片段的回收与纯化
按上述反应体系的4倍容积进行PCR扩增，取全部扩增产物，进行琼脂糖凝胶电泳(70v, lh)，分子量参照为DL2000。目的DNA充分分离；然后用UNIQ-10柱式DNA胶回收试剂盒回 收目的片断，回收产物终体积为10yL。
2真核表达载体的构建
2.1 目的片段双酶切取以上PCR产物进行双酶切，反应体系如下
10 xM缓冲液 20 y 1
PCR扩增产物 20 y 1
双蒸水 144ul EcoRI 8ul Kpnl 8 y 1
混匀，短暂离心， 2.2 载体的线性化 双酶切体系
200 y 1
置37'C水浴3h，终止反应。
pcDNA3经EcoRI、 Kpnl双酶切(37。C， 3h)。反应体系如下:
10 xM缓冲液 PCR扩增产物
双蒸水
EcoRI
Kpnl
20 u 1 20 u 1 144 ii 1 8p 1 8ii 1
200 y 1
混匀，10s离心，置37。C水浴3h，终止反应。
以上酶切产物均进行琼脂糖凝胶电泳(75V， lh)，并以试剂盒回收目的片段和线性 化载体片段。回收产物终体积为lOyL。
2.3目的片段与载体的连接利用上述经双酶切目的基因片段和双酶切载体片段， 建立如下连接反应体系
10" 2y L
载体片段 目的基因片段 10XLigation缓冲液 T4 DNA连接酶
总体积 20 yL
连接反应在12。C下进行，16 20h后，7(TC水浴10min灭活连接酶，终止连接反应。 2.4连接产物的转化以大肠杆菌DH5a为宿主菌，利用CaCl2法并将上述灭活连接 酶的连接产物转化入处于感受态的宿主菌内，200iiL感受态菌液涂板于37'C孵箱内培养12 16h。
2. 5阳性重组载体的鉴定
DNA测序鉴定将阳性菌种送至上海博亚公司进行DNA自动测序，测序结果(见附 图1)通过Blast软件与设计序列相比对，阳性重组子测序结果与所设计序列完全同源， 分别命名为 pcDNA3-ZHX2 ( 1-501AA ) -HA，pcDNA3-ZHX2(242-338AA)-HA， pcDNA3-ZHX2(242-501AA)-HA (图2)。
參本发明所述ZHX2 mini表达载体可以特异、高效地抑制人类肝癌细胞中AFP的表 达；明确ZHX2 mini表达载体作为ZHX2基因的核心功能片段。
用lnvitrogen公司脂质体LipofectamineTM2000进行转染，转染方法参照试剂说明书。将 ZHX2不同片段大小的pcDNA3-ZHX2 (1-501AA) -HA， pcDNA3-ZHX2 (242-338AA)-HA， pcDNA3-ZHX2(242-501AA)-HA转染到肝癌细胞系H印G2。 ELISA检测AFP的表达水平，比较转染 48h后上述重组质粒对AFP的抑制强度。结果显示转染pcDNA-ZHX2 (242-501AA)-HA重组质粒， H印G2细胞AFP的表达量降低最为明显(图3)。在另一种肝癌细胞系H印G2. 2. 15中也得到了同 样的结果。结合现有文献报道，我们将对pcDNA-ZHX2 (242-501AA)-HA命名为ZHX2 mini人作 为ZHX2转录因子核心片段。
參本发明所述ZHX2 mini表达载体作为特异性、高效地抑制人类肝癌细胞中GPC3 的表达。
本课题组之前通过RT-PCR检测不同细胞系中ZHX2mRNA的表达水平，发现4种肝 癌细胞系中ZHX2 mRNA水平规律H印G2. 2. 15、 H印G2及H印3B为ZHX2低表达细胞系， SMMC7721为ZHX2高表达细胞系。
收集对数生长期不同肝癌细胞系，抽提总RNA，经半定量RT-PCR，检测ZHX2及GPC3 表达(图4)。结果显示ZHX2低表达细胞系GPC3表达较高，而在ZHX2高表达细胞中几 乎检测不到GPC3表达。
表达质粒ZHX2 mini瞬时转染高水平表达GPC3的肝癌细胞系(H印G2. 2. 15、 H印G2 及H印3B)， 48h后，收集细胞，RT-PCR检测GPC3的表达，western blot检测HA表达(图 5)。结果提示ZHX2的过表达有效抑制GPC3的表达。
參本发明所述ZHX2 mini表达载体可以特异、高效地抑制人类肝癌细胞的生长和细 胞集落的形成。
H印G2细胞以4X 107孔的浓度接种于96孔板，20小时后分别转染0. 25 y g的ZHX2 mini或pcDNA3，并设未转染组对照，48小时后进行CCK-8检测。每次实验设3个复孔， 重复至少3次。附图6结果提示ZHX2抑制H印G2细胞生长
又将H印G2细胞以2X107孔的浓度接种于24孔板，20小时后分别转染1 u g的ZHX2 mini或pcDNA3，并设未转染组对照，24小时后加入含有380y g/ml G418培养基继续培 养，3天后消化细胞，按1X107孔的浓度接种于6孔板，2周后计数形成的集落数，并 计算集落形成率。图7提示ZHX2抑制H印G2集落形成能力。
參本发明所述ZHX2 mini表达载体可显著增强TRAIL诱导的肝癌细胞凋亡。
H印G2细胞以2X 107孔的浓度接种于24孔板，20小时后分别转染1 y g ZHX2 mini 或pcDNA3，并设未转染组对照，24小时后加入TRAIL，终浓度为100ng/ml，并设PBS 组对照，37°C、 5%0)2培养48小时后镜下观察细胞形态学变化。收集各组细胞(包括悬浮细胞)，采用TUNEL末端标记法结合流式细胞术检测细胞凋亡率。
图8显示TRAIL和ZHX2两个因素对肝癌细胞诱导凋亡。ZHX2 mini+TRAIL转染组细
胞活细胞数为45. 7%,显著低于PBS+TRAIL对照组细胞的13. 8%，也小于pcDNA3+TRAIL
组和空细胞+TRAIL组。
提示ZHX2可显著增强TRAIL诱导的肝癌细胞凋亡
拳构建荷瘤裸鼠模型，本发明所述ZHX2 mini表达载体作为有效抑制荷瘤裸鼠体内 肿瘤生长。
选用ZHX2缺陷型细胞系H印G2.2.15,按照细胞数1X107个/只接种4 6周龄雄性裸 鼠,于裸鼠旗股沟皮下注射细胞，建立典型的人肝细胞癌荷瘤裸鼠模型。将荷瘤裸鼠随机分
为治疗组和对照组，每组各6只裸鼠。动态检测瘤体长短径,并计算瘤体体积。公式:V-"^"
(V，瘤体体积；X,瘤体长径；Y，瘤体短径)。
肝癌-裸鼠移植模型成功建立后，治疗组裸鼠瘤体内注射真核表达重组子ZHX2 mini, 对照组(mock)注射空载体pcDNA3，注射计量30wg/只，每3天一次，共计3次。跟踪测量 肿瘤长短径，并计算各组肿瘤的体积，比较后发现治疗组瘤体生长明显受到抑制(图9)。
通过上述实验及其结果，可以得出如下结论
针对ZHX2基因的核心片段表达载体ZHX2 mini有效抑制癌基因表达及肿瘤生长， 为改善肿瘤预后，提供了一条应用前景诱人的治疗肝细胞肝癌的途径，为新型药物的开 发提供了依据。
9SEQUENCE LISTING
〈110〉 山东大学
<120〉人ZHX2转录因子核心片段及其应用
〈160〉 4
〈170> Patentln version 3. 5
<210〉 1
〈211〉 780
〈212〉 DNA <213〉人工合成
<400〉 1
gtcatgccttctgtacagctgccaccAAatatcAAccttgtgcccAAggtccctgtccca60
ctAAatactaccAAatacAActctgccctggatacAAatgccacgatgatcAActctttc120
AAcAAgtttccttacccgacttgtcctggctg3C3gCtgCctccAAacac180
cc卿ggsgcacatcagAAtctggtUgccacccagcgcttAAagcatggCEltCSgCtgg240
tccccagAAgaggtggaggaggcccggAAgAAgatgttcaacggcaccatccagtcagta300
CCCCCg3CC3tcactgtgctgcccgcccagttggcccccacAAaggtgacgcagcccatc360
ctccagacggctctaccgtgccagatcctcggccagactagcctggtgctgactxaggtg420
accagcgggtcAAcAAccgtctcttgctccCCC8tC3C3CUgccgtggc■
AAccatggcc3gAAg3gacccttggtgactccccAAgctgcccccgAAcccAAgcgtcca540
cacatcgctcaggtgcc卿gcccccacccAAggtggccaaccccccgctcacaccagcc600
agtgaccgcaagAAgacAAaggsgc卿tagcacatctcaaggccagctttctccagagc660
cagttccctgacgatgccgaggtttaccggctcatcgaggtgsctggccttgccaggagc720
gagatcAAga站tggttcagtgaccaccgatatcggtgtcAAaggggcatcgtccacatc780
〈210〉 2 <211> 260 〈212〉 PRT 〈213>人工合成 〈400〉 2
Val Met Pro Ser Val Gin Leu Pro Pro Asn lie Asn Leu Val Pro Lys<image>image see original document page 11</image>〈210〉 3 〈211〉 25 〈212〉 DNA 〈213〉人工合成 〈400〉 3
ccggtacccc ctccaaaaat aagcc 25
<210〉 4 〈211> 57 <212〉 腿 〈213〉 人工合成 〈400〉 4
gcgaattccc taagcgtagt ctggtacgtc gtaagggtag atgtggacga tgcccct 57
〈210> 5 〈211〉 30 〈212〉 DNA 〈213> 人工合成 〈400〉 5
ccggtaccat ggtcatgcct tctgtacagc 30
<210〉 6 〈211〉 55 〈212> DNA <213〉人工合成 <400〉 6
gcgaattccc taagcgtagt ctggtacgtc gtaagggtag atggtgccgt tgaac 55
1权利要求
1、人ZHX2转录因子核心片段，它具有如SEQ ID No.1所示核苷酸序列。
2、 具有人ZHX2转录因子功能的蛋白质，它具有如SEQ ID No. 2所示氨基酸序列。
3、 一种含有SEQ ID No. 1所示核苷酸序列的表达载体。
4、 一种如权利要求3所述的含有SEQ ID No. l所示核苷酸序列的表达载体的构建方法， 具体步骤如下以人ZHX2基因序列中724bp至1503bp核苷酸序列作为靶序列，设计引物，进行PCR反 应扩增目的基因；用限制性内切酶分别酶切PCR产物和pcDNA3质粒，混合后，再经过T4连 接酶连接，获得含目的基因的表达载体。
5、 如权利要求4所述的表达载体的构建方法，其特征在于，上述引物正义链序列为SEQ ID NO. 5，反义链序列为SEQ ID NO. 4。
6、 如权利要求1所述的人ZHX2转录因子核心片段在抑制人类肝癌细胞生长的应用。
7、 如权利要求2所述的具有人ZHX2转录因子功能的蛋白质在抑制人类肝癌细胞生长的 应用。
8、 如权利要求3所述的含有上述人ZHX2转录因子核心片段的表达载体在抑制人类肝癌 生长的应用。
全文摘要
本发明涉及一种人ZHX2转录因子功能片段及其应用，属于基因工程技术领域。人ZHX2转录因子核心片段，它具有如SEQ ID No.1所示核苷酸序列；该核心片段编码的蛋白质具有如SEQ ID No.2所示氨基酸序列；包含有该核心片段的表达载体及其构建方法，以及上述产品在抑制人类肝癌细胞生长的应用。本发明提供了一条应用前景诱人的治疗肝细胞肝癌的途径，为新型药物的开发提供了依据。
文档编号A61K38/17GK101532019SQ20091002005
公开日2009年9月16日 申请日期2009年3月27日 优先权日2009年3月27日
发明者伟 史, 芳 栾, 王金金, 申红玉, 马春红 申请人:山东大学