一种二萜内酯类化合物的用途的制作方法

专利名称：：一种二萜内酯类化合物的用途的制作方法
技术领域：
：本发明涉及医药
技术领域：
，尤其涉及一种二萜内酯类化合物的用途。
背景技术：
：Janus激酶(JAK)属于酪氨酸激酶家族，由JAK1、JAK2、JAK3和TYK2组成。JAK在细胞因子信号传导中起着重要的作用，激酶JAK家族的下游底物包括转录蛋白的信号转导剂和激活剂(STAT)。JAK-STAT信号通路是与细胞生长、增殖和分化关系十分密切的一条细胞信号通路，其基本过程可概括为①细胞因子与其相应配体结合；②受体和JAKs发生聚集，邻近的JAKs相互磷酸化而被活化；③JAKs的JH1结构域催化STATs上相应部位的酪氨酸残基磷酸化，同时STATs的SH2功能区与受体中磷酸化的酪氨酸残基作用而使STATs活化；④STATs进入核内同其它一些转录因子相互作用从而调控基因转录。其中STAT3是STATs家族的重要成员。STAT3信号转导通路被细胞外细胞因子、生长因子等配体激活后作用于细胞核内特异的DNA片段，调控靶基因的转录，在促进肿瘤细胞增殖、抑制肿瘤细胞凋亡、促进侵袭转移及免疫逃逸等方面发挥着重要作用。很多疾病都与通过上述信号通路介导的事件所引发的异常细胞反应有关。这些疾病包括，但不限于，自身免疫病、炎性病、骨病、代谢病、神经和神经变性病、癌症、心血管病、变态反应和哮喘、阿尔茨海默氏病、和与激素有关的病。因此，药用化学方面的巨大努力已经找到了可有效作为治疗剂的蛋白激酶抑制剂。JAK/STAT途径的药物干预已被评论过[Frank.Mol.Med.5.，432-456(1999)和Seidel等人，Oncogene,19，2654-2656(2000)]。狼毒为瑞香科植物瑞香狼毒或大戟科植物狼毒大戟的根。狼毒大戟(EuphorbiafischerianaSteud)，系多年生草本植物，产于辽宁、吉林、河北、黑龙江、内蒙古等地。狼毒大戟始载于《神农本草经》，味苦、辛，性平，有毒，具有逐水祛痰、破积杀虫之功效，主治水肿腹胀，痰、食、虫积，心腹疼痛，慢性气管炎，咳嗽，气喘，淋巴结、皮肤、骨等结核，疥癣，痔瘘等症。民间主要用来治疗肿瘤、结核等病。狼毒大戟含有多种化学成分，主要为二萜和三萜类化合物，还有鞣质、留体、蒽醌、黄酮等。现代药理学研究表明，JolkinolideB对人前列腺癌LNCaP细胞具有显著的抗增殖活性，该活性可能是通过下调溴脱氧嘧啶的摄入从而抑制DNA的合成而发挥作用的(LiuffK.BiochemPharmacol.2002,63(5):951)。杨洪武等人研究表明，大戟狼毒的活性成分对U937细胞、Hela细胞和QRH-7701细胞均呈现不同程度的抑制增殖作用(杨洪武，王峥，郑学民.狼毒大戟活性成分体外抗肿瘤研究.辽宁中医杂志，2002，29(1):53-54)。赵奎君等人研究表明，大戟狼毒在1/100稀释度下呈现较强的抑菌作用，MIC为1/3200。还研究了大戟狼毒根部的5种溶剂提取物对结核杆菌的体外抑菌作用。结果表明，在1/400稀释度下均有抑菌作用，其中抑菌作用最强的是石油醚提取物，MIC为1/3200。因此，到目前为止，未有文献报道狼毒大戟提取物具有抑制JAK-STAT信号通路的作用。本发明为首创性的研究成果。
发明内容本发明旨在提供二萜内酯类化合物在抑制JAK-STAT信号转导通路方面的用途。本发明的第一方面，提供了一种如结构通式I所示的二萜内酯类化合物或其药学上可接受的盐或前药或其异构体或含有其的植物提取物作为JAK-STAT信号通路抑制剂的用途，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>其中，R1可为H、硝基、氨基、烷基、链烯基、杂烷基、烷氧烷基、烯氧基、炔氧基、氨基、烷基氨基、氨基烷基、羟烷基、烷基氨基羰基、磺酰基、烷基磺酰基、烷基亚磺酰基、氨基磺酰基、酰基、芳基、芳基烷基，环烷基芳基、杂芳基、杂环基或R6OC(O)R7;R2和R2’可独立为烷基、链烯基、杂烷基、烷氧烷基、烯氧基、炔氧基、氨基、烷基氨基、氨基烷基、烷基氨基羰基、磺酰基、烷基磺酰基、烷基亚磺酰基、氨基磺酰基、酰基、H或-0H;R3、R4、R4，和R5可独立为H、烷基、链烯基、杂烷基、烷氧基、烷氧烷基、烯氧基、炔氧基、氨基、烷基氨基、氨基烷基、烷氧羰基、烷基氨基羰基、磺酰基、烷基磺酰基、烷基亚磺酰基、氨基磺酰基、酰基或羟基；R6可为烷基、杂环烷基、氨基；R7可为烷基、链烯基、杂烷基、烷基氨基、氨基烷基、烷基氨基羰基、烷基磺酰基、烷基亚磺酰基、氨基磺酰基、芳基烷基，环烷基芳基、杂芳基或杂环基；在以上基团中，各自可不被取代或被一个或多个取代基取代，这些取代基包括卤素、=0、=S、-CN、-NO2,-CF3>-OCF3、烷基、链烯基、链炔基、卤代烷基、卤代烯基、卤代炔基、羟基、羟烷基、烷氧基、烷氧烷基、烯氧基、炔氧基、氨基、烷基氨基、磺酰基、烷基磺酰基、氨基磺酰基、烷氧基烷基、-C00H、-SH和酰基。在优选例中，所述R2和R2’独立为H或-OH且不同时为H时，所述二萜内酯类化合物的结构通式可为式II或III<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>在优选例中，所述R1可为烷基、羟烷基或R6OC(O)R7；R6为烷基，R7为烷基或芳基。在优选例中，所述烷基为C1C6烷基，其中优选甲基；在另一优选例中，所述羟烷基为-CH2OH；在优选例中，所述R3为C1C6烷基，其中优选甲基；；在优选例中，所述R4和R4’可独立为C1C6烷基，其中优选甲基；在优选例中，所述R5可为H或-0H。在另一优选例中，所述二萜内酯类化合物可为下列化合物dolkinolideB、17_hydroxy_jolkinolideB、17_hydroxyjolkinolideBaceticacidesterΛ17-hydroxyjolkinoIideBbenzoicacidester。其中优选为17-hydroxy-jolkinolideB。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>宫/子宫内膜癌、阴部癌、妊娠滋养细胞肿瘤、输卵管癌、子宫肉瘤；头和颈部肿瘤类，包括口腔癌、唇癌、唾腺癌、喉头癌、下咽癌、正咽癌、鼻癌、鼻窦癌、鼻咽癌；血癌类，包括儿童白血病、急性淋巴性白血病、急性骨髓性白血病、慢性淋巴性白血病、慢性骨髓性白血病、发状细胞性白血病、急性早幼粒细胞白血病、血浆细胞性白血病；骨髓癌血液病症，包括骨髓分化不良症候群、骨髓增生性病症、再生障碍性贫血、范禾尼贫血、特发性巨球蛋白血症；肺癌类，包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌；淋巴癌类，包括霍奇金病、非霍奇金氏淋巴瘤、皮肤型τ-细胞淋巴瘤、周围T-细胞林巴瘤、AIDS相关性淋巴瘤；眼癌类，包括视网膜母细胞瘤、葡萄膜黑色素瘤；皮肤癌类，包括黑色素瘤、非黑色素瘤皮肤癌、梅克尔细胞癌、软组织肉瘤类，例如儿童软组织肉瘤、成人软组织肉瘤、卡波希肉瘤、泌尿系统癌症，包括肾癌维尔姆斯肿瘤、膀肤癌、尿道癌和转移性细胞癌。其中优选神经胶质细胞瘤、肾癌、肝癌、肺癌、胃癌、肠癌、乳腺癌、骨癌、皮肤癌、淋巴癌、白血病、宫颈癌、或卵巢癌。图1所示，17-hydroxy-jolkinolideB处理后JAKUJAK2和TYK2的Westernblotting图。图2所示，17-hydroxy-jolkinolideB不同剂量时间处理后JAK2的Westernblotting图。具体实施例方式发明人经过广泛而深入的研究，发现二萜内酯类化合物或其药学上可接受的盐或前药或其异构体或含有其的植物提取物具有抑制JAK-STAT信号转导通路的作用，并且可以通过这些途径治疗肿瘤。在此基础上，完成本发明。本发明所使用的部分术语定义如下“癌症”一般是指广泛的以细胞的失控性异常生长为特征的病症。“卤素”是指氟、氯、溴和碘。“烷基”当作一基团或一基团的部分时是指直链或者带有支链的脂肪烃基团。优先选择烷基为C1-C14的烷基；更优先选择为=C1-Cltl烷基；最优先选择为C1-C6,除非另有指明。直链或和带有支链的C1-C6烷基的实例包括，但不限于甲基、乙基、正丙基、2-丙基、正丁基、异丁基、特丁基、己基等。“烷基氨基”包括单烷基氨基和二烷基氨基两种，除非另有指明。“单烷基氨基”是指(烷基-NH)-的基团；“二烷基氨基”是指((烷基)2N)-的基团。其中，烷基见本文有关定义。该烷基基团优先选择C1-C6的烷基基团。实例包括，但不限于N-甲胺基、N-乙胺基、N-异丙胺基、N，N-(二乙基)胺基等。“氨基烷基”是指(氨基-烷基)_的基团。其中，烷基见本文有关定义。实例包括，但不限于氨基乙基、1-氨基丙基、1-氨基丙基等。“芳基氨基”包括单_芳基氨基和二_芳基氨基两种，除非另有说明。单_芳基氨基是指(芳基-)NH-的基团；二-芳基氨基是指式(芳基)2N-的基团；芳基的定义见本文相关部分。“酰基“包括(烷基-CO)-的基团和(芳基-CO)-的基团，除非另有说明。其中烷基或芳基均见本文中的有关定义。酰基的实例包括，但不限于乙酰基、丙酰基、异丁酰基、苯甲酰基等。“酰胺基”包括(烷基-C0NH)-的基团和(芳基-C0NH)-的基团，除非另有说明。其中，烷基或芳基均见本文中的有关定义。酰胺基的实例包括，但不限于乙酰胺基、丙酰胺基、丁酰胺基、异丁酰胺基、苯甲酰胺基等。“烯基”作为一基团或一基团的一部分时是指至少含有一个碳-碳双键的脂肪烃基团，可为直链也可以带有支链。优先选择具有c2-c14m烯基。C2_C12则更好；最为优先选择的是c2-c6m烯基。该基团可在其主链中含有多个双键且其构象可各自为E或Z。烯基基团的例子包括，但不限于乙烯基、丙烯基等。“烷氧基”是指(烷基-0)-的基团。其中，烷基见本文有关定义。Q-C；的烷氧基为优先选择。其实例包括，但不限于甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基等。“烯氧基”是指(烯基-0)-的基团。其中，的烯基见本文有关定义。(「(；的烯氧基为优先选择。“炔氧基”是指(炔基-0)-的基团。其中，的炔基见本文有关定义。(「(；的炔氧基为优先选择。“烷氧羰基”是指(烷基-0-C(0))-的基团。其中，烷基见本文有关定义。优先选择的烷基基团为(^-(6烷基。其实例包括，但不限于甲氧羰基、乙氧羰基等。“烷基亚磺酰基”是指(烷基-S(0))_的基团。其中，的烷基见本文有关定义。优先选择的烷基为(^_(6烷基基团。烷基亚磺酰基基团包括，但不限于甲基亚磺酰基、乙基亚磺酰基等。“烷基磺酰基”是指(烷基-S(0)2-0)_的基团。其中，的烷基见本文有关定义。该优先选择的烷基为Ci-C；烷基基团。其实例包括，但不限于甲磺酰基、乙磺酰基等。“烷基氨基芳基”是指烷基氨基-芳基基团。其中，烷基氨基见本文有关定义。“环烷基”是指饱和或部分饱和的单环、稠环或螺环之碳环。以3-9个碳原子组成的环为优先选择。实例包括，但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基等。“环烷基烷基”是指环烷基-烷基基团。其中，环烷基和烷基部分见本文有关定义。单环烷基烷基基团包括，但不限于环丙基甲基，环戊基甲基，环己基甲基、环庚基甲基等。“杂环烷基”是指至少含有一个选自N，S，0的杂原子的环烷基。优选含有1-3个杂原子。优选的环为3-14员环，更优先选择的环为4-7员环。杂环烷基包括，但不限于吡咯烷基、二氢吡咯基、四氢吡咯基、二氢吡唑基、哌啶基、吗啉四氢呋喃基、四氢硫代呋喃基、四氢吡喃基等。“杂环烯基”是指至少含有一个双键的杂环烷基。杂环烷基见本文有关定义。“杂环烷基烷基”是指(杂环烷基_烷基)_的基团。其中，杂环烷基和烷基部分见本文有关定义。杂环烷基烷基基团包括，但不限于(2-四氢呋喃基)甲基、(2-四氢硫代呋喃基)甲基等。“杂烷基”是指直链或含有支链烷基的基团，并且在主链中，至少含有一个或多个选自S，0和N的杂原子。优先选择含有2-14个原子链。杂烷基包括，但不限于醚类、硫醚类、烷基酯类，第二或第三烷基胺类、烷基亚磺酸类等。“芳基”作为一基团或一基团的部分是指(1)芳香性的单环或稠环；优先选择具有5-12个碳原子的芳香性碳环(环原子均为碳的环状构造)。芳基的实例包括，但不限于苯基，萘基；(2)可以连接部分饱和的碳环，例如苯基和C5_7环烷基或C5_7环烯基基团系互相稠合而形成一环状结构。实例包括，但不限于四氢萘基，茚基或氢茚基等。芳基基团可被一个或多个取代基取代。“芳基烯基”是指(芳基-烯基)_的基团。其中，的芳基和烯基见本文有关定义。示例性的芳基烯基基团包括，但不限于苯基丙烯基等。“芳烷基”是指(芳基-烷基)_的基团。其中，芳基和烷基部分见本文有关定义。示例性的芳烷基基团包括，但不限于苯甲基，苯乙基、1-萘甲基等。“环烯基”是指非芳香性单环或多环环系。其至少含有一个碳_碳双键且每环优选具有5-10个碳原子。示例性的单环状环烯基环包括，但不限于环戊烯，环己烯或环庚烯。环烯基集团可被一个或多个取代基取代。“杂芳基”是指单环性或稠合的多环芳香杂环。优先选择含有一个或多个选自N，0或/和S的杂原子的5-7员芳香环。典型的杂芳基取代基包括实例，但不限于呋喃基，噻吩基，吡咯，吡唑，三唑，噻唑，吡啶，嘧啶，吡嗪，吲哚，苯并咪唑等。“杂芳烷基”是指(杂芳基-烷基)_的基团。其中，杂芳基和烷基部分见本文有关定义。示例性的杂芳烷基基团包括，但不限于2_呋喃甲基、3-呋喃甲基、2-吡啶甲基等。本发明的化合物优选为17-hydroxy-jolkinolideB它是从大戟科植物狼毒大戟(EuphorbiafischerianaSteud)中提取得到的，尤其是狼毒大戟的根部。术语“药学上可接受的盐”是指上述化合物能保持原有生物活性并且适合于医药用途的某些盐类。通式(I)所表示的化合物的药学上可接受的盐有两种形成形式一是与酸形成的盐；另一是与碱或者碱金属形成的盐。与通式(I)所表示的化合物形成药学上可接受的盐的酸包括无机酸和有机酸。合适的无机酸包括盐酸，硫酸和磷酸。合适的有机酸可选自脂肪族、环脂肪族、芳香性、杂环羧酸和磺酸类有机酸；其实例包括但不限于甲酸、乙酸、丙酸、琥珀酸、甘醇酸、葡萄糖酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、甘氨酸、精氨酸、柠檬酸、反丁烯二酸、烷基磺酸等。与通式(I)所表示的化合物形成药学上可接受的盐的碱金属包括锂、钠、钾、镁、钙、铝或锌等。本发明包括通式(I)所表示的化合物及其可能的各种异构型式。包括非镜像异构体、镜像异构体、互变异构体和“E”或“Z”构型异构体的几何异构体等。本发明包括通式(I)所表示的化合物及其可能的消旋体或/和镜像异构物/或/和非镜像异构物的混合物。此外，通式(I)所表示的化合物在应用上也涵盖该化合物的溶剂化及非溶剂化型式。因此，各式均包括具有所指明构造的化合物，包括其水合及无水合型式。除了通式(I)所表示的化合物外，不同具体实施方案包括药学上可接受的盐，前药和该等化合物的活性代谢物。和该等代谢物的药学上可接受的盐。“前药”是一种通式(I)所表示的衍生物，借助于在体内代谢的方式将其于活体内转化(例如藉由水解，还原或氧化)成通式(I)所表示的化合物。例如，可以将通式(I)所表示的、含有羟基基团的化合物与酸反应制备成相应的酯。相应的酯即为前药，可以在活体内水解为母体药物。适合来制备“前药”的酸包括但不限于乙酸、柠檬酸、乳酸、酒石酸、丙二酸、草酸、水杨酸、琥珀酸、反丁烯二酸、顺丁烯二酸、亚甲基-双_羟基萘酸、龙胆酸、羟乙基磺酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸等。可将含有式I化合物的植物提取物直接给药。通常，在提取物中式I化合物的纯度按重量计应在0.01-99.9%，更佳地为20-98%。也可以制成纯净形式的式I化合物、或各种形式的式I化合物的制剂后，用于给药。用途本发明式I所示的化合物或其药学上可接受的盐或前药或其异构体或含有其的植物提取物可用于JAK抑制剂，可抑制JAK-STAT信号转导通路，尤其是可用于STAT3信号转导通路的抑制，所述的抑制剂可用于治疗肿瘤。所用的活性成分的有效剂量可随给药模式和待治疗疾病的严重程度而变化。对大部分大型哺乳动物而言，每天施以有效成分的总剂量约为0.01-1000mg。通常，成人临床给药量的范围为0.01-200mg/日，优选为0.05-100mg/日。通常，当本发明组合物用于上述用途时，它们可与一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂混合制成不同给药途径的药物剂型，如片剂、胶囊、散剂、颗粒剂、糖浆剂、溶液剂、口服液、醑剂、酊剂、气雾剂、粉雾剂、注射剂、注射用无菌粉末、栓剂等。“药学上可接受的”成分是适用于人和/或动物而无过度不良副反应(如毒性、刺激和变态反应)即有合理的效益/风险比的物质。“药学上可接受的载体”是用于将本发明的二萜内酯类化合物或其生理上可接受的盐传送给动物或人的药学上或食品上可接受的溶剂、悬浮剂或赋形剂。载体可以是液体或固体。本发明的化合物可经过口服、静脉内、肌内或皮下途径给药。上述剂型中可经口服给药的剂型为片剂、胶囊、散剂、颗粒剂、糖浆剂、溶液剂、醑剂。固态载体包括淀粉、乳糖、磷酸氢钙、微晶纤维素、蔗糖、白陶土、微粉硅胶、滑石粉、低取代羟丙基纤维素、羧甲基淀粉钠、聚乙烯吡咯烷酮。而液态载体包括无菌水、乙醇、聚乙二醇、非离子型表面活性剂和食用油(如玉米油、花生油和芝麻油)。在制备药物组合物的过程中通常使用的佐剂包括调味剂、着色剂、防腐剂(如羟苯烷基丁酯、苯甲酸钠、山梨酸)和抗氧化剂(如维生素E、维生素C、焦亚硫酸钠和二丁基羟基甲苯)。上述剂型中可用于注射途径给药的剂型包括注射剂、注射用无菌粉末，它们是将药物与一种或多种药学上可接受的赋形剂混合制成以供注射给药的形式。溶剂包括无菌水、乙醇、甘油、丙二醇、聚乙二醇。此外，还需加入抑菌剂(如苯甲醇、羟苯丁酯、硫柳汞)、等渗调节剂(如氯化钠、葡萄糖)、助悬剂(如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素)、增溶剂(吐温-80、卵磷酯)、抗氧化剂(如维生素E、维生素C、焦亚硫酸钠)和填充剂(如乳糖、甘露醇)。从易于制备和给药的立场看，优选的药物组合物是固态组合物，尤其是片剂和固体填充或液体填充的胶囊。优选口服给药。本发明提到的上述特征，或实施例提到的特征可以任意组合。本案说明书所揭示的所有特征可与任何组合物形式并用，说明书中所揭示的各个特征，可以任何可提供相同、均等或相似目的的替代性特征取代。因此除有特别说明，所揭示的特征仅为均等或相似特征的一般性例子。本发明的主要优点在于本发明式I所示的化合物或其药学上可接受的盐或前药或其异构体或含有其的植物提取物作为JAK抑制剂具有较高的特异性，能有效地抑制JAK-STAT信号转导，同时与环磷酰胺组相比，本发明所述化合物毒性低。以下结合具体实施例，进一步阐述本发明。这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则所有的百分比和份数均按重量计。实施例1化合物制备狼毒大戟的提取和分离对购买自上海徐家汇中药饮片厂的狼毒大戟(EuphorbiafishcerianaSteud.)根10Kg，以95%工业酒精室温萃取三次(50LX3)，合并萃取液，减压浓缩除去溶剂后得乙醇浸膏。将乙醇浸膏分散于热水，分别用石油醚(5LX3)、氯仿萃取(5LX3)，得石油醚浸膏300g，氯仿浸膏883g。氯仿部位以正相硅胶柱[洗脱系统为石油醚_丙酮，石油醚_乙酸乙酯，环己烷-丙酮]，凝胶柱LH-20[洗脱系统氯仿-甲醇=51]和反相硅胶柱(Rp-18)[洗脱系统为甲醇-水]进行分离，粗晶用结晶方法纯化，从中获得jolkinolideB(3.6g)，17-hydroxyjolkinoIideB(1.3g)禾口17_hydroxyjolkinolideBaceticacidester(15mg).衍生物的制备方法取17-hydroxy-jolkinolideB20mg溶于1毫升无水吡啶中，在搅拌下滴加苯甲酰氯0.5毫升，室温放置过夜，倒入冰水中，滤出析出物，水洗，干燥，以乙醇重结晶，经MS和NMR测定确定其为17-hydroxyjolkinolideBbenzoicacidester结构如下。P实施例217-hydroxy-jolkinolideB抑制STAT3信号通路实验材料1)细胞株稳定转染了STAT3-luciferaSe报告基因质粒的IfepG2细胞。2)IL-6(购自P印rotechAsia)3)待测药物17-hydroxy-jolkinolideB，实施例1制备得到；4)荧光素酶检测试剂盒(购自Promega)实验方法1)生长状态良好的HepG2细胞，胰酶消化，以αMEM培养基重悬细胞并调整细胞浓度至2xl05/ml，取100μ1细胞悬液接种于96孔板内，在37°C、5%C02培养箱中培养48小时，直至细胞完全贴壁；2)当细胞生长至密度为60-70%时，将其随机分为以下3组a.阴性对照组，不加IL-6和待测药物；b.IL-6组，加入IL-6至终浓度为10ng/ml，孵育6小时；c.用药组，加入待测药物至终浓度分别为20、10、5、1iiM，孵育1小时，再加入终浓度为lOng/ml的IL-6，孵育6小时。3)取出96孔板，小心吸弃培养基，用PBS(磷酸盐缓冲液)洗涤3次；4)每孔加入30iUlx荧光素酶裂解液(CCLR)，轻轻摇动10_15分钟，待细胞完全裂解后将其吸入1.5ml的印pendorf管中，漩涡震荡1分钟，13200rpm离心2分钟，将上清吸入另一离心管中；5)在96孔检测板中加入20u1细胞裂解液和30u1荧光素酶底物，轻轻混勻，于luminometer(TECANGENion)中检测。6)使用Westernblotting的方法，探究17-hydroxy-jolkinolideB影响STAT3信号转导通路的机理。实验结果表117-hydroxy-jolkinolideB抑制STAT3信号通路的活力<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>如表1所示，17-hydroxy-jolkinolideB能抑制由IL-6诱导的JAK-STAT信号传导通路的活化，实验组(20、10、5iiM)抑制率分别为85%、71%,59%,提示17-hydroxy-jolkinolideB可能通过抑制JAK-STAT信号传导通路，调控某些相关基因的表达，从而发挥抗肿瘤作用。Westernblotting结果表明，如图1所示，在H印G2细胞中，观察到17-hydroxy-jolkinolideB可促使JAK1、JAK2和TYK2的二聚化。如图2所示，17-hydroxy-jolkinolideB对JAK2二聚化的促进作用呈现剂量和时间依赖性。实施例3体外试验中对多种肿瘤细胞生长的抑制作用体外培养人胚肾癌293细胞、人肝癌IfepG2细胞、人乳腺癌MDA-MB-468、MDA-MB-231、MDA-MB-453、MCF-7细胞、人胃癌HGC细胞、人淋巴瘤U937细胞、人宫颈癌Hela细胞。细胞生长至对数生长期后，用胰酶消化细胞，lOOOrpm离心5分钟，弃上清，适量培养基悬浮，调整细胞浓度至3.5104/ml。将细胞悬液接种到96孔细胞培养板中，每孔100iU，放置细胞培养箱(37°C，5%)中培养24h后，各用药组分别加入细胞培养基稀释的17-hydroxy-jolkinolideB>17-hydroxyjolkinolideB>17-hydroxyjolkinolideBaceticacidester、17-hydroxyjolkinolideBbenzoicacidester100^1，终浓度为20uM，阴性对照组0.5%DMS0,各组均设3个复孔。培养箱中培养72h后，每孔加入5mg/ml的MTT20u1，37°C放置4h。每孔加入200u1DMS0,37°C摇床振摇30分钟，492nm/620nm测吸光度(OD)。对OD值进行t检验，并计算药物对各肿瘤细胞生长的抑制率抑制率=(对照组OD值-给药组OD值)/对照组OD值X100%。体外培养小鼠肉瘤S180细胞、人白血病Jurkat细胞。细胞生长至对数生长期后，收集细胞，IOOOrpm离心5分钟，弃上清，适量培养基悬浮，调整细胞浓度至1.1105/ml。将细胞悬液接种到96孔细胞培养板中，每孔90μ1，用药组每孔加入细胞培养基稀释的17-hydroxy-jolkinolideB(式II)10μ1，终浓度为20μΜ，空白对照组加入等量的细胞培养基，各组均设6个复孔，3个孔加药，3个孔为空白对照。阴性对照组0.5%DMS0。培养箱中培养66h后，每孔加入5mg/ml的MTT10μ1，37°C放置4h。每孔加入三联液(5%SDS，10mMHCl，5%异丙醇)100μ1，37°C过夜。492nm/620nm测吸光度(OD)。对OD值进行t检验，并计算药物对各肿瘤细胞生长的抑制率抑制率=(对照组OD值-给药组OD值)/对照组OD值X100%。表217-hydroxy-jolkinolideB对多种肿瘤细胞生长的抑制作用<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>用途本发明式I所示的化合物或其药学上可接受的盐或前药或其异构体或含有其的植物提取物可用于JAK抑制剂，可抑制JAK-STAT信号转导通路，尤其是可用于STAT3信号转导通路的抑制，所述的抑制剂可用于治疗肿瘤。所用的活性成分的有效剂量可随给药模式和待治疗疾病的严重程度而变化。对大部分大型哺乳动物而言，每天施以有效成分的总剂量约为0.Ol-IOOOmgo通常，成人临床给药量的范围为0.01-200mg/日，优选为0.05-100mg/日。通常，当本发明组合物用于上述用途时，它们可与一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂混合制成不同给药途径的药物剂型，如片剂、胶囊、散剂、颗粒剂、糖浆剂、溶液齐、口服液、醑剂、酊剂、气雾剂、粉雾剂、注射剂、注射用无菌粉末、栓剂等。“药学上可接受的”成分是适用于人和/或动物而无过度不良副反应(如毒性、刺激和变态反应)即有合理的效益/风险比的物质。“药学上可接受的载体”是用于将本发明的二萜内酯类化合物或其生理上可接受的盐传送给动物或人的药学上或食品上可接受的溶剂、悬浮剂或赋形剂。载体可以是液体或固体。本发明的化合物可经过口服、静脉内、肌内或皮下途径给药。上述剂型中可经口服给药的剂型为片剂、胶囊、散剂、颗粒剂、糖浆剂、溶液剂、醑剂。固态载体包括淀粉、乳糖、磷酸氢钙、微晶纤维素、蔗糖、白陶土、微粉硅胶、滑石粉、低取代羟丙基纤维素、羧甲基淀粉钠、聚乙烯吡咯烷酮。而液态载体包括无菌水、乙醇、聚乙二醇、非离子型表面活性剂和食用油(如玉米油、花生油和芝麻油)。在制备药物组合物的过程中通常使用的佐剂包括调味剂、着色剂、防腐剂(如羟苯烷基丁酯、苯甲酸钠、山梨酸)和抗氧化剂(如维生素E、维生素C、焦亚硫酸钠和二丁基羟基甲苯)。上述剂型中可用于注射途径给药的剂型包括注射剂、注射用无菌粉末，它们是将药物与一种或多种药学上可接受的赋形剂混合制成以供注射给药的形式。溶剂包括无菌水、乙醇、甘油、丙二醇、聚乙二醇。此外，还需加入抑菌剂(如苯甲醇、羟苯丁酯、硫柳汞)、等渗调节剂(如氯化钠、葡萄糖)、助悬剂(如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素)、增溶剂(吐温-80、卵磷酯)、抗氧化剂(如维生素E、维生素C、焦亚硫酸钠)和填充剂(如乳糖、甘露醇)。表417-hydroxyjolkinolideBaceticacidester对多种肿瘤细胞生长的抑制作用<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>表517-hydroxyjolkinolideBbenzoicacidester对多种肿瘤细胞生长的抑制作用细胞名称用药组OD值对照组OD值抑制率(％)S1800.165±0.020.909±0.0181.852930.243±0.050.957士0.0374.61HepG20.176±0.020.948±0.0181.43MDA-MB-4680.289±0.000.888±0.0367.45MDA-MB-2310.312±0.010.935±0.0166.63MDA-MB-4530.110±0.011.102土0.0390.02HGC0.201±0.030.952±0.0578.89MCF-70.305士0.020.950士0.0167.89Jurkat0.199士0.000.981±0.0379.71U9370.206±0.011.132±0.0281.80Hela0.279±0.001.145±0.0175.63实验结果如表2、3、4、5所示，在各种肿瘤细胞培养液中加入受试药物后，用药组的OD值均低于空白对照组，对S180、293、H印G2、MDA-MB-468、MDA-MB-231、MDA-MB-453、HGC、MCF-7、Jurkat,U937、Hela细胞的生长具有显著的抑制作用。说明以上四种受试药物在体外对小鼠肉瘤细胞、人胚肾癌细胞、肝癌细胞、人乳腺癌细胞、胃癌细胞、人白血病细胞、宫颈癌细胞均有很强的抑制作用，抗瘤谱广。实施例417-hydroxy-jolkinolideB对S180荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用实验动物雌性SPF级KM小鼠，由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供，体重为18-22g，SPF级动物房饲养，12h光照/12h黑暗，自由摄取饲料和水。实验药品化合物17-hydroxy-jolkinolideB(如式II所示)由本实验室提取，环磷酰胺购自常州新力医药化工有限公司。实验方法取接种7天的S180腹水小鼠，无菌条件下抽取腹水，用生理盐水调整细胞浓度至5106/ml。将S180细胞悬液以0.2ml/只的量接种在小鼠右前肢腋部皮下。接种24h后，将小鼠分别随机分为3组(每组10只)用药组，用蒸馏水溶解17-hydroxy-jolkinolideB(式II)，给药剂量是100mg/kg；环磷酰胺组，给药剂量为20mg/kg；对照组给予蒸馏水，给药体积为0.lml/10g,以上各组均每天灌胃给药1次，连续7天。停药次日处死小鼠，剥取瘤块称重，计算每组平均值，进行t检验。计算抑瘤率，抑瘤率=(对照组瘤重_给药组瘤重)/对照组瘤重X100%。表317-hydroxy-jolkinolideB对S180荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>*表示ρ<0.01，与对照组相比，具有显著性差异。实验结果表3的数据显示，17-hydroxy-jolkinolideB连续给药10天后，用药组小鼠肿瘤的重量低于对照组，差异有显著性(P<0.01)，药物的抑瘤率分别达到71.43%,说明17-hydroxy-jolkinolideB在100mg/kg剂量时能够明显抑制S180荷瘤小鼠肿瘤的生长。同时，与环磷酰胺组相比，用药组的体重没有下降，说明该药物毒性低。实施例5片剂的制备利用常规技术，混合以下组分，然后直接压片，制备片剂形式的药物组合物，其配方如下<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>羧甲基淀粉钠3硬脂酸镁1总量200实施例6注射剂的制备<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>①将亚硫酸氢钠加于500ml注射用水中，加入羧甲基纤维素钠，混勻，浸泡过夜(24小时)，全溶后，用210目尼龙布过滤；②将溶液①水浴加热，加入吐温-80，混勻；③至水浴沸腾，加入17-hydroxy-jolkinolideB，混勻，继续加热30分钟，取出冷却至室温，G3垂熔玻璃漏斗过滤；④加注射用水至1000ml，混勻，灌封，用100°C30分钟灭菌。本发明的范围不受所述具体实施方案的限制,所述实施方案只欲作为阐明本发明各个方面的单个例子，本发明范围内还包括功能等同的方法和组分。实际上，除了本文所述的内容外，本领域技术人员参照上文的描述和附图可以容易地掌握对本发明的多种改进。所述改进也落入所附权利要求书的范围之内。上文提及的每篇参考文献皆全文列入本文作为参考。权利要求一种如结构通式I所示的二萜内酯类化合物或其药学上可接受的盐或前药或其异构体或含有其的植物提取物作为JAK-STAT信号转导通路抑制剂的用途，其中，R1可为H、硝基、氨基、烷基、链烯基、杂烷基、烷氧烷基、烯氧基、炔氧基、氨基、烷基氨基、氨基烷基、羟烷基、烷基氨基羰基、磺酰基、烷基磺酰基、烷基亚磺酰基、氨基磺酰基、酰基、芳基、芳基烷基，环烷基芳基、杂芳基、杂环基或R6OC(O)R7；R2和R2’可独立为烷基、链烯基、杂烷基、烷氧烷基、烯氧基、炔氧基、氨基、烷基氨基、氨基烷基、烷基氨基羰基、磺酰基、烷基磺酰基、烷基亚磺酰基、氨基磺酰基、酰基、H或-OH；R3、R4、R4’和R5可独立为H、烷基、链烯基、杂烷基、烷氧基、烷氧烷基、烯氧基、炔氧基、氨基、烷基氨基、氨基烷基、烷氧羰基、烷基氨基羰基、磺酰基、烷基磺酰基、烷基亚磺酰基、氨基磺酰基、酰基或羟基；R6可为烷基、杂环烷基、氨基；R7可为烷基、链烯基、杂烷基、烷基氨基、氨基烷基、烷基氨基羰基、烷基磺酰基、烷基亚磺酰基、氨基磺酰基、芳基烷基，环烷基芳基、杂芳基或杂环基；在以上基团中，各自可不被取代或被一个或多个取代基取代，这些取代基包括卤素、＝O、＝S、-CN、-NO2、-CF3、-OCF3、烷基、链烯基、链炔基、卤代烷基、卤代烯基、卤代炔基、羟基、羟烷基、烷氧基、烷氧烷基、烯氧基、炔氧基、氨基、烷基氨基、磺酰基、烷基磺酰基、氨基磺酰基、烷氧基烷基、-COOH、-SH和酰基。F2009100569416C0000011.tif2.如权利要求1所述的用途，其特征在于所述R2和R2’独立为H或-0H且不同时为H时，所述二萜内酯类化合物的结构通式可为式II或III<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>IIIII.3.如权利要求1所述的用途，其特征在于所述R1可为烷基、羟烷基或R60C(0)R7；R6为烷基，R7为烷基或芳基。4.如权利要求3所述的用途，其特征在于所述烷基为QC6烷基。5.如权利要求3所述的用途，其特征在于所述羟烷基为_CH20H。6.如权利要求1所述的用途，其特征在于所述R3为QC6烷基。7如权利要求1所述的用途，其特征在于所述R4和R4’可独立为QC6烷基.8.如权利要求1所述的用途，其特征在于所述R5可为H或-0H。9.如权利要求1所述的用途，其特征在于所述二萜内酯类化合物可为jolkinolideB、17-hydroxyjolkinolideB、17-hydroxyjolkinolideBaceticacidester、或17-hydroxyjolkinolideBbenzoicacidester。10.如权利要求1所述的用途，其特征在于所述含如式I所示的二萜内酯类化合物的植物提取物为大戟科植物提取物。11.如权利要求10所述的用途，其特征在于所述大戟科植物为狼毒大戟。12.如权利要求1所述的用途，其特征在于所述的用途是指用于STAT3信号转导通路的抑制剂。13.如权利要求1所述的用途，其特征在于所述用途是指二萜内酯类化合物或其前药或其药学上可接受的盐在制备治疗自身免疫病、炎症、骨病、代谢病、神经和神经变性病、癌症、心血管病、变态反应和哮喘药物中应用。14.如权利要求13所述的用途，其特征在于所述自身免疫病为移植排斥、移植物抗宿主疾病、类风湿性关节炎、肌萎缩性侧索硬化、或多发性硬化。15.如权利要求13所述的用途，其特征在于所述癌症可为骨癌；脑和CNS肿瘤；内分泌癌’胃肠癌；泌尿生殖器癌；头和颈部肿瘤；血癌；骨髓癌血液病症；肺癌类；淋巴癌；眼癌或皮肤癌。16.如权利要求13所述的用途，其特征在于所述癌症为神经胶质细胞瘤、肾癌、肝癌、肺癌、胃癌、肠癌、乳腺癌、骨癌、皮肤癌、淋巴癌、白血病、宫颈癌、或卵巢癌。全文摘要本发明涉及医药
技术领域：
，尤其涉及一种二萜内酯类化合物的用途。本发明公开了一种如结构通式I所示的二萜内酯类化合物或其药学上可接受的盐或前药或其异构体或含有其的植物提取物作为JAK-STAT信号转导通路抑制剂的用途。本发明式I所示的化合物或其药学上可接受的盐或前药或其异构体或含有其的植物提取物作为JAK-STAT信号转导通路抑制剂具有较高的特异性，能有效地抑制JAK-STAT信号转导通路，同时与环磷酰胺组相比，本发明所述化合物毒性低。文档编号A61P3/00GK101829108SQ20091005694公开日2010年9月15日申请日期2009年3月10日优先权日2009年3月10日发明者俞强,王玉波,王颖,秦国伟申请人:湘北威尔曼制药有限公司;中国科学院上海药物研究所