专利名称：：一种具有免疫调节作用的药物组合物及其制备方法
技术领域：
：本发明涉及一种具有免疫调节作用的药物组合物，具体地，是以海蛇为原料提取制备的药物组合物，属药物领域。
背景技术：
：从古至今海蛇被民间所习用，被誉为"祛风燥湿、通络活血、攻毒和滋补强壮等功效的良药"，常用于风湿痹症、四肢麻木、关节疼痛、疥癣恶疮、体虚和小儿营养不良等症。首载于唐代陈藏器的《本草拾遗》，"主赤白毒痢，五野鸡病，恶疮。灸食，亦烧末服一、二钱匕"。现代研究表明其在治疗心脑血管疾病、抗风湿、免疫调节等方面，也有着其他药材无法比拟的疗效。目前世界上己知海蛇约90种，而我国沿海分布有扁尾海蛇亚科和海蛇亚科的海蛇多达15种，主要生活在南海、北部湾及海南、台湾、广西、广东和福建等省沿海。尤其是我国的北部湾热带海域，最适于海蛇生长繁殖，年产量约75吨，福建沿海也可达10吨。海蛇主要含有脂肪酸类，甾类，蛋白质，肽类，游离氨基酸以及丰富的微量元素等，其中脂肪酸、氨基酸总量、人体必需氨基酸含量、微量元素种类和含量均比陆地蛇高；约有30多种，占总量的1.5%左右；其中软脂酸、十六碳烯酸、十八碳烯酸、二十碳烯酸的含量较高，廿二碳六烯酸(DHA)、廿碳五烯酸(EPA)、硬脂酸、豆蔻酸等也很丰富；脂肪含量比陆地蛇平均高0.53%。海蛇的主要药理作用有免疫调节作用、抗菌抗炎作用、对神经系统的影响、祛痰镇咳作用、抗疲劳作用、改善记忆作用、抗肿瘤等。根据海蛇的作用开发了多种产品，如海王酒(海南椰岛海口酒厂)复方海蛇胶囊(上海世康特制药有限公司，华东医院)、海蛇祛风胜湿胶囊(泉州制药厂)、海蛇风湿灵胶囊(福建省泉州中侨有限公司药业公司)、复方海蛇注射液(广西北海人民医院)、复方海蛇酊(湛江中药厂)、海蛇天麻酒(福建省药材公司中药研究所)、海蛇脂质软胶囊剂(保健品)、抗青环海蛇毒血清(广西医科大学与日本蛇学研究所合作)、油针疗法(日本)以海蛇脂质为主要原料制成注射剂，在身体压痛点和硬结部位注射，治疗腰痛和颌，肩等部位疼痛。虽然目前蛇资源的利用前景良好，但对于海蛇的基础研究却一直停滞不前，尤其是对具体化学成分的探讨并不多，在质量控制方面也存在着很大的空缺，这将会在一定程度上阻碍对海蛇的进一步开发和利用。即使是目前己经上市的海蛇产品，并没有对有效成分或者指标成分的具体说明。
发明内容本发明的技术方案是提供了一种具有免疫调节的药物组合物，本发明的另一技术方案是提供了该药物组合物的制备方法和用途。本发明提供了一种具有免疫调节的药物组合物，它是由海蛇乙酸乙酯提取物、水提取物中的一种或两种混合为活性成分，加入药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的药剂。其中，所述的海蛇乙酸乙酯提取物、水提取物的重量配比为海蛇乙酸乙酯提取物7—9份、水提取物0—3份。进一步优选地，所述的海蛇乙酸乙酯提取物、水提取物的重量配比为海蛇乙酸乙酯提取物8—9份、水提取物1一2份。更进一步优选地，所述的海蛇乙酸乙酯提取物、水提取物的重量配比为海蛇乙酸乙酯提取物8份、水提取物2份。其中，所述的乙酸乙酯提取物和水提取物是由下述方法制备海蛇用30%70%乙醇提取、过滤、减压浓縮后，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，分别得到石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和水部位，其中乙酸乙酯部位为海蛇乙酸乙酯提取物、水部位为海蛇水提取物。所述的海蛇用50%乙醇提取。其中，所述的海蛇来源于青环海蛇坊^ro/力"cya/7oci/7c^/s和平颏海蛇Z邻e迈/s力aroVich7的干燥体。本发明使用的是海蛇的去掉头部的干体。其中，所述的药剂是口服制剂。本发明还提供了一种药物组合物的制备方法，它包括如下步骤a、海蛇用30%70%乙醇提取、过滤、减压浓縮后，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，分别得到石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和水部位，其中乙酸乙酯部位为海蛇乙酸乙酯提取物、水部位为海蛇水提取物；b、将海蛇乙酸乙酯提取物、水提取物中的一种或两种混合为活性成分，加入药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的药剂。其中，所述的a步骤海蛇用50X乙醇提取。本发明药物组合物具有抗疲劳，调节免疫，祛风除湿、舒筋活络；活血通络，滋补健身的功效，可用于制备成药品或保健食品；将其中的有效部位乙酸乙酯部分、水溶性部分配伍使用，具有协同增效作用，制备的药品或保健食品安全、质量稳定、可控、疗效可靠、携带方便、服用方便。显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明的上述基本技术思想前提下，还可以作出其它多种形式的修改、替换和变更。以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应该将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。图1海蛇有效部位提取流程图具体实施例方式实施例1本发明药物的制备取去除头部的海蛇干体5kg，粉碎。加入8倍量50%的乙醇回流提取2次，每次2h。合并提取液，减压回收溶剂得到乙醇提取浸膏。将浸膏混悬于1000ml水中，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取3次，减压回收溶剂，得到石油醚部分SS-P(105g)、乙酸乙酯部分SS-A(33g)、正丁醇部分SS-B(28g)和水溶性部分SS-W(127g)。取乙酸乙酯部分32g、水溶性部分8g混合，加上药学上常用的辅料或辅助性成分，制备成药学上常用的制剂。实施例2本发明药物液体制剂的制备酒剂将乙酸乙酯部分8g、水溶性部位2g，加入适量的白酒溶解，再加入100g蔗糖，搅拌溶解后，滤过，制成1000ml即得。实施例3本发明药物液体制剂的制备酒剂将乙酸乙酯部分9g、水溶性部位lg，加入适量的白酒溶解，再加入100g蔗糖，搅拌溶解后，滤过，制成1000ml即得。实施例4本发明药物固体制剂的制备①片剂将60g淀粉与50g糊精混匀，过筛，再与乙酸乙酯部位80g、水溶性部位20g用适量乙醇稀释的浸膏混匀，制成颗粒，低温千燥，加入3%滑石粉，混匀，整粒，压制成1000片，即得。②胶囊剂将60g淀粉与50g糊精混匀，过筛，再与乙酸乙酯部位80g、水溶性部位20g用适量乙醇稀释的浸膏混匀，过七号筛，于6(TC烘干，装胶囊，共制成1000粒。以下通过药效学试验进一步说明本发明的有益效果。试验例l本发明海蛇活性部位的筛选1、实验材料1.1药材海蛇药材由海南椰岛集团海口酒厂提供(产地广西北海)，经成都中医药大学李敏教授鉴定为眼镜蛇科海蛇亚科青环海蛇场^rO/7力/sC7S/70C//7"W^D平颏海蛇/:a/7e迈^5力arok/ch'i去除内脏后的干燥体。1.2样品制备取去除头部的海蛇干体5kg，粉碎。加入8倍量50%的乙醇回流提取2次，每次2h。合并提取液，减压回收溶剂得到乙醇提取浸膏。将浸膏混悬于1000ml水中，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取3次，减压回收溶剂，得到石油醚部分SS-P(105g)、乙酸乙酯部分SS-A(33g)、正丁醇部分SS-B(28g)和水溶性部分SS-W(127g)。1.3药物与试剂1.3.1试剂生理盐水(四川科伦药业股份有限公司)中华墨汁(北京一德阁功贸公司)CMC-Na(中国医药集团上海化学试剂公司)肝素(齐鲁制药厂)1.3.2药物人参皂苷，配置浓度为lmg/ml。石油醚提取部分、乙酸乙酯提取部分、正丁醇提取部分、水溶性部分1.4实验动物昆明种健康小白鼠(18-22g)150只，雄性2007年4月由成都中医药大学实验动物中心提供。1.5实验仪器UV-VIS分光光度仪(Perkin-ElmerLambda35)DT500电子小鼠称(常熟市衡器厂)BP211S型(Max220g，d=0.1mg)Sartorius电子分析天平(瑞士)Finnpipette25ul移液器等2、预实验与给予剂量的确定2.1预实验剂量选择根据成人日剂量换算为小鼠给予剂量低剂量组1.5g生药/Kg小鼠体重/d，中剂量组3.0g生药/Kg小鼠体重/d，高剂量组4.5g生药/Kg小鼠体重/d，以此三剂量进行预实验。2.2药液的配制取50%乙醇总提取物，用0.5。/。CMC-Na水溶液分散，所配制浓度如下低剂量组溶液4.395mg/ml(87.9mg/Kg小鼠)，相当于1.5g生药/Kg小鼠体重。中剂量组溶液8.790mg/ml(175.8mg/Kg小鼠)，相当于3.0g生药/Kg小鼠体重。高剂量组溶液13.185mg/ml(263.7mg/Kg小鼠)，相当于4.5g生药/Kg小鼠体重。2.3预实验取小鼠30只，随机分为5组对照组、阳性药组(人参皂苷lmg/ml)、低剂量组、中剂量组、高剂量组。每日灌胃给药l次(0.2ml/10g小鼠重量)，连续给药7天，末次给药后禁食12小时，按碳廓清率试验法测定不同剂量组对小鼠单核-巨噬细胞功能的影响。结果如下表l:海蛇50%乙醇总提取物提取物不同剂量对小鼠单核-巨噬细胞功能的影响(x士s)组别动物数(n)齐懂(mg/kg)校正廓清指数a(x土s)对照组65.851±1.037阳性药组6208.288±0.956**低剂量组687.96.231±1.495中剂量组6175.88.023±1.426**高剂量组6263.78.798±0.984**注与生理盐水组比较**P<0.01*P<0.052.4结论经方差分析实验数据，多重比较表明与生理盐水组相比，50%乙醇提取物中、高剂量组(PO.01)，均显示显著性差异，小鼠单核一巨噬细胞吞噬活性增强。3、活性部位的筛选3.1药液的配制取石油醚部分SS-P、乙酸乙酯部分SS-A、正丁醇部分SS-B和水溶性部分SS-W，分别用0.5。/。CMC-Na水溶液分散，所配制浓度如下SS-P溶液3.15mg/ml(63.Omg/Kg小鼠)，相当于3.0g生药/Kg小鼠体重。SS-A溶液0.99mg/ml(19.8mg/Kg小鼠)，相当于3.0g生药/Kg小鼠体重。SS-B溶液0.84mg/ml(16.8mg/Kg小鼠)，相当于3.0g生药/Kg小鼠体重。SS-W溶液3.81mg/ml(76.2mg/Kg小鼠)，相当于3.0g生药/Kg小鼠体重。3.2对小鼠免疫器官重量的影响取小鼠60只，随机分为6组对照组、阳性药组、石油醚部分组、乙酸乙酯部分组、正丁醇部分组、水溶性部分组。每日灌胃给药l次(0.2ml/10g小鼠重量)，对照组给予含O.5。/。CMC-Na的生理盐水，阳性药组给人参皂苷。连续给药7d，称体重后，处死，取其胸腺和脾脏称重，计算胸腺指数、脾脏指、K-数。胸腺指数(mg/g)=胸腺重量/体重脾脏指数(mg/g)=脾脏重量/体重3.3对小鼠单核一巨噬细胞功能的影响取小鼠60只，随机分为6组对照组、阳性药组、石油醚部分组、乙酸乙酯部分组、正丁醇部分组、水溶性部分组。每日灌胃给药l次(0.2ml/10g小鼠重量)，对照组给予含O.5%CMC-Na的生理盐水，阳性药组给人参皂苷。连续给药7d,末次给药后禁食12小时，于次日给药1个小时后由尾静脉注射10%墨汁O.lml/10g(体重)，于注射后1分钟和6分钟分别用吸管(预先用肝素溶液湿润)从小鼠眼眶后静脉丛取血O.025ml,立刻吹入到盛有2mi0.1%船20)3溶液的试管中，吸管于该液中吸入、吹出数次以充分洗出吸管壁附着之血液，取血完毕以O.025ml空白组正常小鼠血溶于2m10.1%胞20)3液校零，于分光光度计(680nm)测定吸光度。并计算吞噬指数K及吞噬系数(校正廓清指数)a:K卄1gC，一lgCg-1、/y^WLS4/K其中C为血中碳粒浓度，T为时间，W为体重，WLS为肝脾合重(于第二次取血后迅速剖取肝、脾并于天平称重)3.4结果与讨论表2:海蛇提取物对小鼠免疫器官重量的影响(X士S)组别动物数(n)剂量(mg/kg)胸腺指数(mg/g)脾脏指数(mg/g)对照组103.07土1.135.11±0.86阳性药组1020.05.08±0.32**6.90±0.47**SS-P1063.03.39±1.055.69±1.34*SS-A1019.84.14±1.50**5.78±1.21*SS-B1016.83.18±0.725.15±0.99ss-w1076.23.54±1,45*6.37±1.28**注与生理盐水组比较**P<0.01*P<0.05表3:海蛇提取物对小鼠单核一巨噬细胞功能的影响(X土S)组别动物数(n)齐!J量(mg/kg)校正廓清指数a(x土s)对照组106.289±1.113阳性药组1020.07.614±1.083*SS-P1063.06.977±1.005SS-A1019.88.635±1.504**SS-B1016.87.244±0.663SS-W1076.27.906±1.005*注与生理盐水组比较*冲<0.01*P<0.05由表2、表3分析，乙酸乙酯部分组、水溶性部分组的脾指数和胸腺指数与对照组比均有升高，经统计检验有显著性差异(p〈0.05或PO.01)，石油醚部分组能使小鼠脾指数升高(P<0.05)，但胸腺指数无显著性差异。与对照组相比，乙酸乙酯部分组的校正廓清指数升高(PO.Ol)，水溶性部分组也有升高(P〈0.05)。综上可知，乙酸乙酯部分和水溶性部分为海蛇免疫调节主要活性部位。4、乙酸乙酯部分不同剂量对小鼠免疫功能的影响4.1药液的配制取乙酸乙酯部分提取物SS-A，用0.5。/。CMC-Na水溶液分散，所配制浓度如下低剂量溶液0.495mg/ml(9.9mg/Kg小鼠)，相当于1.5g生药/Kg小鼠体重。中剂量溶液0.990mg/ml(19.8mg/Kg小鼠)，相当于3.0g生药/Kg小鼠体重。高剂量溶液1.485mg/ml(29.7mg/Kg小鼠)，相当于4.5g生药/Kg小鼠体重。4.2实验方法4.2.1乙酸乙酯部分不同剂量对小鼠免疫器官重量的影响取小鼠50只，随机分为5组对照组、阳性药组、SS-A低剂量组、SS-A中剂量组、SS-A高剂量组。每日灌胃给药1次(0.2ml/10g小鼠重量)，连续给药7天，称体重后，处死，取其胸腺和脾脏称重，计算胸腺指数、脾脏指数。4.2.2乙酸乙酯部分不同剂量对小鼠单核一巨噬细胞功能的影响取小鼠50只，随机分为5组对照组、阳性药组、SS-A低剂量组、SS-A中剂量组、SS-A高剂量组。每日灌胃给药1次(0.2ml/10g小鼠重量)，连续给药7天，末次给药后禁食12小时，按碳廓清率试验法测定不同剂量组对小鼠单核-巨噬细胞功能的影响。4.3结果与结论表4:海蛇乙酸乙酯部分对小鼠免疫器官重量的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>注与生理盐水组比较**P<0.01*P<0.05表5:海蛇乙酸乙酯部分对小鼠单核一巨噬细胞功能的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>注与生理盐水组比较**P<0.01*P<0.05由表4、5可知与生理盐水组相比，乙酸乙酯部分高、中、低剂量均能显著提高小鼠的胸腺指数、脾脏指数(PO.01或P〈0.05)。高、中剂量组显示小鼠单核一巨噬细胞吞噬功能显著增强(P<0.01)，而低剂量组无显著性差异。5、结论a.结合中医传统的用药方法和现代医学理论以及本实验室的研究基础，对其石油醚提取部分、乙酸乙酯提取部分、正丁醇提取部分、水溶性部分采用碳廓清率试验法和免疫器官重量测定法进行了小鼠免疫活性筛选。b.乙酸乙酯提取部分、水溶性部分脾指数、胸腺指数以及校正廓清指数相对对照组均升高，初步确定为主要活性部位。c.对乙酸乙酯部位不同剂量考察，低、中、高剂量均能显著增加小鼠免疫器官重量。中、高剂量能显著增强小鼠单核一巨噬细胞吞噬功能，而低剂量无显著影响。试验例2本发明药物组合物的药效学试验将实施例1制备乙酸乙酯提取部分、水溶性部分按重量配比为7:3、8:2、9:1的不同配比，按试验例1的方法进行试验，具体试验结果如下表6:不同组成对小鼠免疫器官重量的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>注与生理盐水组比较**P<0.01*P<0.05表7:不同组成对小鼠单核一巨噬细胞功能的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>注与生理盐水组比较**P<0.01*P<0.05该试验证明，乙酸乙酯提取部分、水溶性部分分别以7:3、8:2、9:1不同配伍，均能发挥协同作用，其中以8-9:2-l配伍时，效果较优，其中又以8:2的重量配比的药效最佳。综上所述，本发明药物是将乙酸乙酯部分、水溶性部分配伍使用，具有协同增效作用，制备的药品或保健食品安全、质量稳定、可控、疗效可靠、携带方便、服用方便。权利要求1、一种具有免疫调节的药物组合物，其特征在于它是由海蛇乙酸乙酯提取物、水提取物中的一种或两种混合为活性成分，加入药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的药剂。2、根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于所述的海蛇乙酸乙酯提取物、水提取物的重量配比为海蛇乙酸乙酯提取物7—9份、水提取物0—3份。3、根据权利要求2所述的药物组合物，其特征在于所述的海蛇乙酸乙酯提取物、水提取物的重量配比为海蛇乙酸乙酯提取物8—9份、水提取物1一2份。4、根据权利要求3所述的药物组合物，其特征在于所述的海蛇乙酸乙酯提取物、水提取物的重量配比为海蛇乙酸乙酯提取物8份、水提取物2份。5、根据权利要求l-4任意一项所述的药物组合物，其特征在于所述的乙酸乙酯提取物和水提取物是由下述方法制备海蛇采用30%70%乙醇提取、过滤、减压浓縮后，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，分别得到石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和水部位，其中乙酸乙酯部位为海蛇乙酸乙酯提取物、水部位为海蛇水提取物。6、根据权得要求5所述的药物组合物，其特征在于所述的海蛇采用50%乙醇提取。7、根据权利要求l-6任意一项所述的药物组合物，其特征在于所述的海蛇来源于青环海蛇办fl(ro/7力isCy朋0"./2Cto或平颏海蛇Z砂柳/S/ajY3Vj.ch7的干燥体。8、根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于所述的药剂是口服制剂。9、一种制备权利要求l-8任意一项所述的药物组合物的方法，它包括如下步骤a、海蛇用30%70%乙醇提取、过滤、减压浓縮后，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，分别得到石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和水部位，其中乙酸乙酯部位为海蛇乙酸乙酯提取物、水部位为海蛇水提取物；b、将海蛇乙酸乙酯提取物、水提取物中的一种或两种混合为活性成分，加入药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的药剂。10、根据权利要求9所述的药物组合物的制备方法，其特征在于所述的a步骤海蛇用50%乙醇提取。全文摘要本发明提供了一种具有免疫调节的药物组合物，它是由海蛇乙酸乙酯提取物、水提取物中的一种或两种混合为活性成分，加入药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的药剂。本发明还提供了该药物组合物的制备方法。本发明药物具有抗疲劳，调节免疫，祛风除湿、舒筋活络；活血通络，滋补健身的功效，可用于制备成药品或保健食品，将其中的有效部位乙酸乙酯部分、水溶性部分配伍使用，具有协同增效作用，制备的药品或保健食品安全、质量稳定、可控、疗效可靠、携带方便、服用方便。文档编号A61K35/56GK101628012SQ20091005905公开日2010年1月20日申请日期2009年4月24日优先权日2009年4月24日发明者亮熊,霞王,羽雷申请人:海口椰岛酒厂有限公司