专利名称：：一类熊果酸皂苷及其制法与抗高致病h5n1流感病毒的应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一类新的熊果酸皂苷，制备这类熊果酸皂苷的方法，含有这类熊果酸皂苷的药物组合物，以及这类熊果酸皂苷在制备抗流感病毒药物，尤其是抗高致病H5m流感病毒的药物中的应用；属于化学药物
技术领域：
。
背景技术：
：甲型流感病毒属于正粘病毒科，基因组由8个单链节段式的负链RNA组成，编码至少10种蛋白血凝素蛋白(Hemagglutinin,HA)、神经氨酸酶(Neuraminidase,ΝΑ)、聚合Sl(Polymerasebasicprotein1，PBl；Polymerasebasicprotein1，PB2；Polymeraseacidicprotein,PA)、核蛋白(Nucleoprotein,NP)、基质蛋白(Matrixprotein1，Ml；Matrixprotein2,M2)^nI^JSS(Non-structuralproteinl,NSl；Non-structuralprotein2，NS2)。野生水禽是甲型流感病毒的原生宿主，当经过变异，甲型流感病毒会感染其它物种(包括人类)。H5m高致病流感病毒即是如此，1997年在中国香港首次证实了H5W高致病流感病毒感染人类的病例，说明该病毒已具备以人为宿主的跨种属传播的能力。WHO的数据显示，截止至2008年2月22日，全世界共有368人感染H5W高致病流感病毒，其中的234人死亡(死亡率63.6%)(http://www.who.int/csr/disease/avian_influenza/country/cases_table_2008_02_26/en/index,html,2008.),并且传播速度和范围未见下降趋势。目前，临床上针对甲型流感病毒的药物主要有两个靶点M2离子通道抑制剂和神经氨酸酶抑制剂。前者包括有Amantadine和Rimantadine，后者包括Oseltamivir和Zanamivir等(J.Clin.Virol.30,(2004):115_133)。但由于流感病毒的高变异性，目前已经对所有M2离子通道抑制剂产生耐药性(自2007年起，美国FDA已经禁止这类药物用作病毒性流感治疗药物)；因而神经氨酸酶抑制剂几乎是唯一一类临床用药，但自2006年起，在泰国和越南出现了对该类药物耐药的H5W高致病流感病毒株(NipponRinsho.64,(2006)1845-1852；AntiviralRes.73(2007):228_231)。同时，还是由于流感病毒的高变异性，目前尚无一劳永逸的针对流感病毒的疫苗。血凝素蛋白(HA)是流感病毒表面的糖蛋白，其主要功能是与宿主细胞表面的受体(唾液酸)相互识别、结合，并介导病毒进入宿主细胞，即病毒感染的第一步。因此，若能在这个环节上阻断流感病毒的入侵，则可以有效地进行预防和治疗流感病毒。熊果酸(ursolicacid)又名乌苏酸、乌索酸，属于五环三萜类化合物。它在自然界中广泛分布，具有多种生物学效应，对多种致癌、促癌物有抵抗作用，对多种肿瘤细胞有抑制生长的作用；体外对G+和G-菌及酵母菌有抗菌活性；具有降血脂、抗动脉粥样硬化作用；还有保肝、抗肝炎的作用。本发明要解决的技术问题是提供一类新的熊果酸皂苷化合物；本发明要解决的另一个技术问题是提供这类熊果酸皂苷化合物的制备方法；本发明要解决的又一个技术问题是提供含有这类熊果酸皂苷化合物的药物组合物；本发明要解决的再一个技术问题是提供这类熊果酸皂苷化合物在制备抗流感病毒药物，尤其是抗高致病H5m流感病毒药物中的应用。具体而言，为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案本发明涉及的熊果酸皂苷化合物如通式(I)所示权利要求如通式(I)所示的熊果酸皂苷，其中，R1、R2独立的选自氢、葡萄糖基、阿拉伯糖基、鼠李糖基、半乳糖基、木糖基、核糖基、甘露糖基、2氨基葡萄糖基、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、山梨糖基、阿洛糖基、阿洛酮糖基，或由这些单糖23个组成的直链或支链寡糖基；R3选自C1C18直链或支链的烷基。F2009100842460C00011.tif2.制备权利要求1所述的熊果酸皂苷的方法，其特征在于，包括如下步骤3.根据权利要求2的制备方法，其特征在于，步骤(a)中在熊果酸的C-28位引入酯基的方法是将熊果酸与重氮甲烷反应，或与其他醇进行酯化反应。4.根据权利要求2的制备方法，其特征在于，所述的糖基供体上的保护基选自乙酰基、苯甲酰基、叔戊酰基；所述的糖基供体的活化基团选自三氯乙酰亚胺酯、乙硫苷、苯硫苷或对-甲苯硫苷；糖苷化反应的在路易斯酸催化剂存在的条件下进行；所述糖苷化反应中的有机溶剂选自C1-C4的氯代烷烃、甲苯或乙醚；糖苷化反应在3A-5A型硅铝酸盐分子筛存在的条件下进行；糖苷化反应的淬灭剂选自硫代硫酸钠、有机胺。5.根据权利要求4的制备方法，其特征在于，所述的糖基供体上的保护基选自乙酰基、苯甲酰基；所述的糖基供体的活化基团选自三氯乙酰亚胺酯；所述的路易斯酸催化剂选自C3-C9的卤代酰胺、C1-C6的氟代烃基磺酸、C2-C8的硅基氟代烃基磺酸酯W1-C6的氟代烃基磺酸银、三氟化硼-乙醚络合物或三氟化硼-乙醚混合物；所述糖苷化反应中的有机溶剂选自C1-C4的氯代烷烃、甲苯或乙醚；糖苷化反应在4A型硅铝酸盐分子筛存在的条件下进行；糖苷化反应的淬灭剂选自三甲胺、三乙胺。6.根据权利要求2的制备方法，其特征在于，脱除糖基上的保护基使用CH3ONa；脱保护基反应的溶剂选自四氢呋喃、甲醇、乙醇、二氯甲烷、水中的一种或多种的混合物；脱保护基反应完成后使用阳离子树脂(H+)中和反应液至中性。7.根据权利要求2的制备方法，其特征在于，步骤(d)选择性的保护葡萄糖上3，6-0Hs使用位阻试剂1-(苯甲酰基)苯并三唑；有机溶剂优选为C1-C4的氯代烷烃、甲苯或乙醚；反应在有机胺存在的条件下进行；8.根据权利要求2的制备方法，其特征在于，各步骤的产物可以通过重结晶或硅胶柱纯化。9.根据权利要求的制备方法，其特征在于，所述的硅胶柱纯化时使用的洗脱剂是选自石油醚、正己烷、环己烷、二氯甲烷、三氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇中一种或多种的混合物；所述重结晶纯化中的溶剂优选为三氯甲烷、(^-(；的烷基醇、乙酸乙酯、丙酮、正己烷、石油醚、环己烷、二氯甲烷、水中一种或多种的混合物。10.一种药物组合物，其特征在于，含有作为有效成分的通式(I)所示的熊果酸皂苷和药效学上可接受的载体。11.根据权利要求10的药物组合物，其特征在于，还含有其它的抗病毒药。12.权利要求1所述的熊果酸皂苷在制备预防或治疗抗流感病毒的药物中的应用。13.根据权利要求12的应用，其特征在于，所述的流感病毒为H5N1、H5N2。全文摘要本发明公开了一类熊果酸皂苷及其制法与抗高致病H5N1流感病毒的应用。具体涉及如通式(I)所述的熊果酸皂苷累化合物，以天然产物熊果酸为原料，通过结构修饰首先在C-28位引入酯基，然后在C-3位引入β-葡萄糖基，利用BBTZ选择性的保护葡萄糖的3，6-OHs，再在葡萄糖的2，4-OHs引入糖基得到系列熊果酸皂苷。药理实验表明，它们对H5N1高致病流感病毒的侵入宿主细胞过程有明显的抑制作用，可以用作预防或治疗抗流感病毒的药物。本发明还包含它们的药物组合物以及本发明化合物与其它抗病毒药的联合用药。文档编号A61P31/16GK101941996SQ20091008424公开日2011年1月12日申请日期2009年5月18日优先权日2009年5月18日发明者曹颖莉,李英霞,郭颖申请人:中国医学科学院药物研究所;中国海洋大学