专利名称：：一种含有脂肪酶的组合物的制作方法
技术领域：
：本发明涉及脂肪酶，尤其涉及一种含有脂肪酶的组合物。
背景技术：
：脂肪肝是指由于各种原因引起.的肝细胞内脂肪堆积过多的病变。脂肪性肝病正严重威胁人类的健康，成为仅次于病毒性肝炎的第二大肝病，已被公认为隐蔽性肝硬化的常见原因。脂肪肝是一种常见的临床现象，而非一种独立的疾病。其临床表现轻者无症状，重者病情凶猛。一般而言，脂肪肝属可逆性疾病，早期诊断并及时治疗常可恢复正常。正常人的肝内总脂量，约占肝重的5%,内含磷脂、甘油三酯、脂酸、胆固醇及胆固醇脂。而患脂肪肝者，总脂量可达40%-50%,主要是甘油三酯及脂酸，而磷脂、胆固醇及胆固醇脂只少量增加。脂肪肝一般分为两大类，一类是酒精性脂肪肝，这类患者中只有少部分人可能出现血脂增高。另一类是非酒精性脂肪肝，其原因比较复杂，包括肥胖、糖尿病、高血脂、药物及遗传因素等，还有40%左右原因不明的脂肪肝。目前NAFLD药物治疗方法主要有1)去脂药物治疗，如力平脂、易善复、辛伐他汀、洛伐他汀、普伐他汀、氟伐他汀、甘糖酯、银杏叶片、脂必妥、降脂灵等；降脂药容易导致ALT增高。2)保肝药物治疗，保肝药物种类繁多，主要有促进肝细胞再生、协助肝细胞解毒、祛除肝内过多脂肪和改善肝组织代谢等作用。多数药物缺乏严格的双盲试验，难以评估其确切疗效；而且这些药物通过肝脏代谢，加重了肝功能损害。3)中医中药治疗脂肪肝，一般根据主证进行辨证施治，以减轻症状。治疗效果参差不齐，难以评估。
发明内容3本发明的目的在于提供一种含有脂肪酶的组合物，其可用于治疗/预防脂肪肝或高血脂。一种含有脂肪酶的组合物，该组合物包括以下重量份的组分脂肪酶5-9份、山楂提取物1-2份、枸杞子提取物1-2份。所述组合物还包括以下重量份的组分制首乌提取物l-2份、决明子提取物1-2份、大黄提取物1-2份。所述组合物还包括以下重量份的组分肌醇0.1-0.3份。所述脂肪酶来源于微生物。所述脂肪酶来源于黑曲霉菌、根霉菌、镰刀霉菌、地霉菌、假丝酵母菌、扩展青霉菌或圆弧青霉菌。所述脂肪酶的酶活为2000-4000u/g。所述脂肪酶的酶活为3100u/g。山楂其性微温味酸甘。李时珍在《本草纲目》中说"化饮食，消肉积......消滞血胀痛。，，现代药理研究证明，山楂能增强心肌收缩力，增加心输出量，减慢心率，扩张冠状血管，具有降血压、降血脂等作用。且药性平和，久食亦无副作用。枸杞子味甘，性平。具有保肝、护肝作用。中医学认为能补肝阴、养肝血、益精明目。现代药理研究证明枸杞子能降血糖，抑制脂肪在肝细胞内沉积，促进肝细胞新生，并有降压功效。制首乌何首乌经加工制熟称为制首乌。制首乌性温，味甘苦。《开宝本草》说"首乌益气血、黑髭爱、悦颜色，久服壮筋骨、益精髓，延年不老。"历代中医学家都认为制首乌是一味补益强身、延年益寿的良药。现代药理实验证实，首乌具有降血脂、降血糖、软化血管和降压的功效。决明子又名草决明，因其有明目之功，故又有"千里光，，和"还瞳子"的美称。其性微寒，味甘苦。炒熟用。具有清肝明目、养阴清热、润肠通便的功效。现代研究证明，决明子水浸剂和乙醇浸剂有降压、降脂和通便的作用。大黄是一味泻卞通便、清热解毒的良药，一般都用于急性热病木4便秘结。现代药理研究发现，其除有泻下通便作用外，还有降血压、降胆固醇作用。小剂量则有健胃作用。小量常服，对肥胖病、高血压、冠心病、高血脂患者，均有良好的作用。本发明所述一种含有脂肪酶的组合物，其口服或非口服给药均是安全的。用于口服时，可将其制成常规的固体制剂如片剂、粉剂、粒剂、胶嚢剂、丸剂、滴丸、口腔含片等，制成液体制剂如水或油悬浮剂或其他液体制剂如糖浆、酏剂等；用于肠胃外给药时，可将其制成静脉注射或肌肉注射用的溶液、水或油性悬浮剂等。本发明所述一种含有脂肪酶的组合物，与其药学上可接受的载体一起构成用于治疗/预防脂肪肝的药物，该载体可以是药学领域常规的药物载体，例如稀释剂、赋形剂如水等，填充剂如淀粉、庶糖等；黏合剂如纤维素衍生物、藻酸盐、明胶和聚乙烯吡咯烷酮；湿润剂如甘油；崩解剂如琼脂、碳酸钙和碳酸氬钓；吸收促进剂如季铵化合物；表面活性剂如十六烷醇；吸收载体如高岭土和皂黏土；润滑剂如滑石粉、硬脂酸钠和镁、聚乙二醇等。另外还可以在组合物中加入其他辅剂如香味剂、甜味剂等。本发明所述含有脂肪酶的组合物可以有效治疗/预防脂肪肝或者高血脂，尤其是非酒精性脂肪肝。具体实施例方式实施例1一种含有脂肪酶的组合物，包括以下重量份的组分脂肪酶6份、山楂提取物1.5份、枸杞子提取物1.5份。实施例2一种含有脂肪酶的组合物，包括以下重量份的组分脂肪酶9份、山楂提取物2份、枸杞子提取物l份、制首乌提取物l份、决明子提取物1份、大黄提取物l份。实施例3一种含有脂肪酶的组合物，包括以下重量份的组分脂肪酶5份、山楂提取物l份、枸杞子提取物l份、制首乌提取物l份、决明子提取物1份、大黄提取物l份。实施例4一种含有脂肪酶的组合物，包括以下重量份的组分脂肪酶7份、山楂提取物1.5份、枸杞子提取物1.5份、肌醇0.15份。试验例实施例1所述一种含有脂肪酶的组合物对非酒精性脂肪肝的防治作用。一、实验材料1.1高脂饲料自制，配方为2%胆固醇，10%猪油，0.2%胆酸钠，5%蛋黄粉，82.8%基础饲料。胆固醇湖南祁东同信生化厂生产，批号071226猪油市售^1油熬制。蛋黄粉市售鸡蛋自制。胆酸钠湖南祁东同信生化厂生产，批号071109。基础饲料南方医院实验动物中心提供。1.2测定试剂TC测定试剂盒中生北控生物科技股份有限公司生产。批号080171。TG测定试剂盒中生北控生物科技股份有限公司生产，批号080201。HDL-C测定试剂盒浙江东欧生物工程有限公司生产，批号08060579。1.3乙醚天津市天河化学试剂厂生产，批号20070812。1.4实—验动物Wistar大鼠(SPF级)，雄性，体重160-180(g)。南方医科大学6实-睑动物中心4是供，动物合才各证2006A052。1.5实验仪器全自动生化测定仪OlympusAV-640型，日本产。切片机LEICARM2245。二、实3全动物Wistar大鼠55只，雄性，体重160-180g,SPF级，由南方医科大学实验动物中心提供，合格证2006A052。饲养在中央空调的观察室(粤监证字2007C083号，符合屏障级标准)中，温度24.0土1.(TC，照明时间12小时。三、受试药物实施例1所述含有脂肪酶的组合物，其中脂肪酶酶活3100u/g。药物配制电子天平称取适量组合物，用1。/。CMC-Na稀释成0.52g/ml、0.26g/ml、0.13g/ml。给药体积lml/100g体重。四、方法1、试验方法取Wistar雄性大鼠70只，乙醚麻醉，眼眶静脉丛取血，离心分离血清，用OlympusAV-640型全自动生化仪测定TC、TG含量，剔除数值异常的大鼠。选取合格大鼠55只，按TC、TG含量水平，随机分为5组，每组11只，即(1)正常对照组；(2)模型对照组，灌胃给予0.5%CMC-Na;(3)-(5)给药组，脂肪酶剂量分别为8060u/kg(相当于人拟临床等效用量2倍)、4030u/kg(相当于人拟临床等效剂量)、2015u/kg(相当于人拟临床等效剂量的0.5倍)。受试药用前分别用0.5。/。CMC-Na研磨、配成所需浓度，给药体积均为lml/100g体重。给药当天，除正常对照组喂饲普通饲料外，其它各組改为高脂饲料。在试验期间观察动物状态，每周记录体重1次，并于造模给药后12周，将动物禁食不禁水16小时后，用乙醚麻醉，眼眶静脉丛取血约2ml，3000r离心10分钟，取血清，于全自动生化分析仪上测定血清中的TG、TC、HDL-C含量，并计算TC/HDL-C比值。处死所有动物，摘取肝脏并称重。观察大体肝脏外观后，用10%曱醛固定肝组织，进行病理学检查，结果见表l匿3。2、观察指标及评定标准全自动生化分析仪^r测血清TG、TC、HDL-C含量。肝脏病理学检查肝组织进行石蜡包埋、切片、常规HE染色后，脂肪病理组织学诊断参考中华医学会肝脏病学分会脂肪肝非酒精性肝病学组"非酒精性脂肪肝诊断标准"1，同时根据肝小叶内脂肪细胞数对脂肪肝程度进行分级2肝细胞内无脂滴沉积为0分、肝小叶内<30%的肝细胞有脂肪变为l分、肝小叶内30%-50%的肝细胞有脂肪变为2分、肝小叶内50%-75%的肝细胞有脂肪变为3分、肝小叶内75%以上的肝细胞有脂肪变为4分。3、统计方法釆用SPSS14.0软件包进行分析，所有结果均已计算机直接输出。计量资料以(均数±标准差)表示，各组间比较采用单因素方差分析LSD法。所有统计检验均采用双侧检验，P值小于或等于0.05被认为所检验的差别有统计学意义。五、试验结果1、一般观察正常组和模型组大鼠体重增加较大，但脂肪酶高、中剂量组体重比模型组比较明显降低(p<0.05)2、脂肪酶对脂代谢紊乱大鼠体重及肝重指数的影响表1.脂肪酶对脂代谢紊乱大鼠体重及肝重指数的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>2009模型组与对照组比较AApO.01;纟会药组与才莫型iE比4交*p<0.05**p<0.013、含有脂肪酶的组合物对大鼠脂代谢紊乱TG含量、TC含量、HDL-C含量、TC/HDL-C比值的影响表2.含有脂肪酶的组合物对大鼠脂代谢紊乱TG含量、TC含量、HDL-C含量、TC/HDL-C比值的影响分组剂量TGTCHDL-CTC/HDL-C比值正常对照组—0.71±0.151.53±0.200.93±0.101.65±0.08模型组—1.16土0.50"3.28土0.63"0.75±0.06A4.27±0.87"给药组80600.88±0.24*2.57±0.52**0.62±0.07**4.15±0.80给药组40300.77±0.24*2.51±0.54**0.64土0.07"3.98±0.82给药组20150.77±0.36*2.58±0.44**0.66±0.12**3.95±0.50模型组与正常对照组比较ApO.05;△ApO.Ol给药组与模型组比较*p<0.05;**p<0.014、肝脏病理学改变4.1大体观察12周末，正常对照大鼠肝脏颜色鲜红，边缘锐利，质软，表面光滑。模型组大鼠肝脏增大，色黄，边缘变钝，质脆，切面有油腻感。给药组大鼠肝脏体积较正常组明显增大，但比模型組明显减小，色黄，边缘变钝，质脆，切面有油腻感。4.2光镜观察正常对照大鼠肝组织切片HE染色显示肝组织无明显脂肪沉积。模型組大鼠肝组织切片HE染色显示大部分大鼠肝組织50-75%细胞呈明显脂肪变性。给药组大鼠肝组织切片HE染色显示肝组织细胞呈明显脂肪变性的程度与模型组比较明显减少。脂肪变性程度计分见表3.表3含有脂肪酶的组合物对大鼠肝组织HE染色肝细胞脂肪变性的影响分组剂量动物数脂肪变性程度计分正常对照组一12o.oo土o.oo模型组一123.17±0.944A9给药组8060121.92±0.49=^给药组4030121.58±0.51**给药组2015122.42±0.67*模型组与正常对照组比较AApO.Ol给药组与模型组比较*p<0.05;**p<0.01六、试3全结i仑上述结果表明，造模组Wistar大鼠在造模后体重增长緩慢，食量减少，动物状态明显不佳，消瘦、毛松，体重下降明显。给药组动物状态好于模型组，各剂量组能明显降低肝重指数(见表l)。造模12周时，模型组动物血清TC、TG含量和TC/LDL-CH比值均明显高于正常对照组(p<0.05或p<0.01),且病理检查表明，模型组动物肝组织脂肪变性成立，表明血脂紊乱型脂肪肝模型已形成。给药组各剂量組对TG、TC有明显抑制作用(见表2)，但对TC/LDL-CH无影响。脂肪酶对大鼠肝组织HE染色肝细胞脂肪变性程度计分见表3,表明含有脂肪酶的组合物可明显改善由高脂饲料引起的动物肝脏的脂肪变性。综上所述，在本试验条件下，受试物品含有脂肪酶的组合物能明显降低肝重指数，虽对TC/LDL-CH比值无影响，但能抑制动物血清TC、TG含量，还能显著改善肝脏脂肪沉积。说明该组合物不仅对血脂代谢紊乱有明显改善，还具有使肝脏的脂肪沉积明显减少、降低肝脏脂肪变性的作用。用实施例2、3或4所述含有脂肪酶的组合物飼喂大鼠得到与试验例1相似结果，含有脂肪酶的组合物能明显降低肝重指数，虽对TC/LDL-CH比值无影响，但能抑制动物血清TC、TG含量，还能显著改善肝脏脂肪沉积。说明该组合物不仅对血脂代谢紊乱有明显改善，还具有使肝脏的脂肪沉积明显减少、降低肝脏脂肪变性的作用。权利要求1、一种含有脂肪酶的组合物，其特征在于，该组合物包括以下重量份的组分脂肪酶5-9份、山楂提取物1-2份、枸杞子提取物1-2份。2、根据权利要求1所述一种含有脂肪酶的组合物，其特征在于，所述组合物还包括以下重量份的组分制首乌提取物l-2份、决明子提取物1-2份、大黄提取物1-2份。3、根据权利要求1所述一种含有脂肪酶的组合物，其特征在于，所述组合物还包括以下重量份的组分肌醇0.1-0.3份。4、根据权利要求1或2或3所述一种含有脂肪酶的组合物，其特征在于所述脂肪酶来源于微生物。5、根据权利要求4所述的一种含有脂肪酶的组合物，其特征在于所述脂肪酶来源于黑曲霉菌、根霉菌、镰刀霉菌、地霉菌、假丝酵母菌、扩展青霉菌或圓弧青霉菌。6、根据权利要求1或2或3所述一种含有脂肪酶的组合物，其特征在于，所述脂肪酶的酶活为2000-4000u/g。7、根据权利要求1或2或3所述一种含有脂肪酶的组合物，其特征在于，所述脂肪酶的酶活为3100u/g。全文摘要本发明涉及脂肪酶，公开了一种含有脂肪酶的组合物，该组合物包括以下重量份的组分脂肪酶5-9份、山楂提取物1-2份、枸杞子提取物1-2份。其可用于治疗或预防脂肪肝或高血脂，尤其是非酒精性脂肪肝。文档编号A61K31/045GK101518646SQ200910106279公开日2009年9月2日申请日期2009年4月2日优先权日2009年4月2日发明者张清辉,王剑英申请人:深圳市绿微康生物工程有限公司