专利名称：蓬莪术环二烯在制备抗肿瘤转移的药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及蓬莪术环二烯在制备抗肿瘤转移的药物中的应用。
背景技术：
侵袭、转移行为是恶性肿瘤的本质特征。癌转移使局部病变扩散成全身多灶性疾 病。在临床诊断出原发肿瘤时，约50%的患者已经发生了远离部位的癌转移，现有的手术、 放疗和化疗手段在治疗转移癌时常遭失败，导致患者病情恶化或死亡。侵袭、转移是恶性肿 瘤致命性的症结所在，防治肿瘤的侵袭、转移是降低肿瘤病死率的重要途径之一。肿瘤侵袭是指恶性肿瘤细胞脱离原发部位，突破基底膜和细胞外基质构成的屏 障，侵袭毗邻的正常组织，最终被侵袭的组织发生病变及坏死。转移是指恶性肿瘤细胞借助 血管、淋巴管等途径，在远离的器官内形成继发瘤的过程。肿瘤的侵袭与转移是一个连续多 步骤的过程。首先是原发肿瘤快速增殖，原发病灶新生血管生成；肿瘤细胞侵润基底膜、基 质，穿入血管或淋巴管进入循环系统；肿瘤细胞栓塞并停留在远处位点的微血管中；肿瘤 细胞穿出血管或淋巴管，最终在靶器官中形成转移灶。蓬莪术环二烯(furanodiene，C15H20O)是存在于姜科植物蓬莪术 (Curcumazedoaria(Berg)Rose)中的一种天然成分。Yu Xiao等人报道蓬莪术环二烯能够 诱导人肝癌ifepG2细胞阻滞在G2ZM期，并通过MAPK信号通路及粒体-Caspase通路发生 凋亡(CancerBiology & Therapy 6 =7,1044-1050 ；2007)；此外，亦有文献报道蓬莪术环二 烯诱导人白血病HL-60细胞凋亡是通过激活TNFRl信号通路完成(Cancer Letters 271 158-166 ；2008)；目前尚未见有关于蓬莪术环二烯在抗肿瘤转移方面的报道。
发明内容
本发明提供了蓬莪术环二烯在制备抗肿瘤转移的药物中的应用。本发明进一步提供了蓬莪术环二烯在制备抗肝癌、胃癌、膀胱癌、乳腺癌、结肠癌、 肾癌、食道癌、胆囊癌、卵巢癌、胰腺癌、子宫颈癌、甲状腺癌、前列腺癌、口腔癌及肺癌转移 的药物中的应用。有益效果1.蓬莪术环二烯对肝、胃、膀胱、乳房、结肠、肾、食道、胆囊、卵巢、胰腺、子宫颈、甲 状腺、前列腺、口腔及肺癌细胞体外侵袭具有明显的抑制作用。2.蓬莪术环二烯可抑制肝癌、胃癌及肺癌细胞转移相关蛋白的表达。3.蓬莪术环二烯可抑制人肝癌瘤株裸小鼠原位移植模型的肿瘤转移。
具体实施例方式以下通过实施例对本发明作进一步的阐述，但不对本发明作任何限制。蓬莪术环二烯为莪术中提取分离经结构鉴定并且纯度达到99. 7%的纯品。制备例1蓬莪术环二烯的制备
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取蓬莪术干燥的根茎1kg，通过水蒸汽蒸馏装置进行蒸馏，共得到385g油水混合 物，用乙醚及石油醚进行萃取，分离油层，弃取水层，并浓缩，得到莪术挥发油46. 5g，用硅 胶柱进行分离，石油醚洗脱，每瓶IOOml收集，合并沈 42组分，抽去溶剂，得到黄色晶 体15. 6g，再上硅胶柱分离，石油醚洗脱，每瓶30ml，合并16 观组分，抽去溶剂，得到白 色结晶10. 7g，HPLC分析该样品的纯度达到99.7%，高分辨质谱分析正离子检测表明样 品的准分子离子峰[M+H]+为217. 1583，推断其分子量为216. 1505，检元素匹配，其元素 组成为C15H2tlO,误差小于5ppm，即表明该样品的分子式为C15H2(i0。核磁共振检测显示，在 δ 7. 228ppm, δ 4. 996ppm, δ 4. 691ppm, δ 3. 378ppm, δ 3. 107ppm, δ 2. 211ppm, δ 2. 104ppm, δ 1. 874ppm, δ 1. 760ppm, δ 1. 559ppm, δ 1. 200ppm处有吸收组峰，通过详细归属解析，证明 该分离物为蓬莪术环二烯。制备例2蓬莪术环二烯软胶囊的制备2. 4g蓬莪术环二烯0.2%ig大豆磷脂0. 24mg对羟基苯甲酸甲酯加入注射用大豆油溶解上述组分并定容至2細1制备取注射用大豆油1000ml，在150°C干热灭菌1小时，放冷至25°C，取出部分 油液加入上述主药和辅料，搅拌使其完全溶解，最后定容至2細1，用干燥的6号垂溶漏斗过 滤，灌封于软胶囊中，紫外灭菌60分钟，制成每粒中含蓬莪术环二烯200mg的软胶囊。实验例1蓬莪术环二烯对肿瘤细胞体外侵袭的抑制作用实验材料Bel-7402肝癌细胞株、BGC-823胃癌细胞株、A549肺癌细胞株、5637膀 胱癌细胞株、MCF-7乳腺癌细胞株、Caco-2结肠癌细胞株、0S-RC-2肾癌细胞株、Eca-109食 道癌细胞株、GBC-SD胆囊癌细胞株、H08910卵巢癌细胞株、PANC-I胰腺癌细胞株、Hela宫 颈癌细胞株、SW579甲状腺癌细胞株、PC-3前列腺癌细胞株、KB 口腔癌细胞株中科院上海 细胞库提供，本公司临床药理研究室常规培养传代；Cell Invasion Assay KIT(ECM550)， Chemicon公司；DMEM、RPMI-1640培养基，Gbico公司；胎牛血清(FBS)，杭州四季青生物工 程材料公司；DMSO，Sigma公司。实验方法蓬莪术环二烯(按照制备例1所得)以DMSO配制成200mg/L的储存 液，-20°C储存备用。临用前以培养液稀释至所需终浓度。收集对数生长期的肿瘤细胞，分 别用含有空白溶剂和蓬莪术环二烯(终浓度为0. 2,0. 4,0. 8mg/L，预试验表明该系列浓度 对肿瘤细胞增殖无影响)的RPMI-1640培养液将细胞悬浮，制成1 X 106/ml的单细胞悬液， 按照Cell InvasionAssay Kit说明书操作。细胞在小室内部培养4 后，染色，醋酸溶解 小室下方已穿透的细胞，溶解液转移入96孔板中，酶标仪检测560nm处吸光度(A56tl)值，以 A560值代表侵袭的细胞数，每组设3个平行孔；统计方法t-test。实验结果蓬莪术环二烯分别处理不同来源癌细胞4 后，0. ang/L组的细胞侵袭 能力低于对照组细胞，但差异无统计学意义(P > 0. 05) ；0. 4mg/L和0. 8mg/L组的细胞侵袭 能力明显低于对照组(P < 0. 05或P < 0. 01)，见表1。表1蓬莪术环二烯对不同来源肿瘤细胞侵袭能力的影响(0D值)G士s)
4瘤株对照组0-2mg/L_0.4mg/L_0.8mg/L
Bel-74020. 880±0.0590.711±0.0430.566±0.057s0.193±0.055"BGC-8230. 725±0.0600.658±0.0560.601 ±0.072a0.312±0.105"A5490. 780±0.0690.611±0.0530.521 ±0.087s0.201±0.075h56370.753 ±0.0810.7M±0.0750.573±0.107a0.185 + 0.092"MCF-70.699±0.0720.601 ±0.0750.569 ±0.Illa0.327±0.115hCaco-20.825±0.0710.701 ±0.1120.571 ±0.098b0.435±0.123hOS-RC-20.833±0.0760.755±0.1090.603±0.12580.368 ±0.136hEca-1090.915±0.0580.866 + 0.0690.551±0·097b0.237±0.112bGBC-SD0.756±0.0590.688 ±0.0970.616±0.077"0.469 土 0.126bH089100.901+0.0720.845 + 0.0970.718 士 0.065b0.221 ±0.109bPANC-I0.932±0.0770.801±0.1050.725 土 0.126a0.537±0.127"Hela0.964 ±0.0920.886±0.1280.777 士 0.083b0.砧1 土 0.IOlbSW5790.776 ±0.0580.711±0.0910.561±0.056b0.381±0.IlObPC-30.758 士 0.0730.693 ±0.0590.609±0.099a0.322±0.089bKB0.822±0.0650.801±0.1080.634±0.085a0.499 ±0.079b与对照组相比，aP < 0. 05，b P < 0. 01实验结论蓬莪术环二烯可抑制不同来源肿瘤细胞的体外侵袭能力。实验例2蓬莪术环二烯对肿瘤转移相关蛋白VEGF表达的影响实验材料Bel_7402肝癌细胞株、BGC-823胃癌细胞株、A549肺癌细胞株中 科院上海细胞库提供，本公司临床药理研究室常规培养传代；VEGF Enzyine Linked Immunosorbent Assay，南京建成生物工程研究所；RPMI-1640培养基，Gbico公司；胎牛血 清(FBS)，杭州四季青生物工程材料公司；DMSO，Sigma公司。实验方法蓬莪术环二烯(按照制备例1所得)以DMSO配制成200mg/L的储存 液，-20°C储存备用。临用前以培养液稀释至所需终浓度。取处于对数生长期的肿瘤细胞， 以每瓶5 X IO6个接种于细胞培养瓶中，37°C、5 % CO2培养24h后，更换以培养液稀释的空白 对照溶液和蓬莪术环二烯样品溶液，终浓度分别为0. 2,0. 4,0. 8mg/L,继续培养4 后，吸 取细胞培养上清，离心去细胞碎片和杂质后，上清液中VEGF蛋白浓度测定按照检测试剂盒 说明书方法进行，于酶标仪450nm处测A值，根据标准品的A值求出标准曲线方程，并计算 出细胞上清中VEGF浓度；统计方法t-test。实验结果蓬莪术环二烯对不同来源肿瘤细胞分泌VEGF的影响ELISA结果显示， 蓬莪术环二烯作用于以上三种肿瘤细胞4 后，能够明显降低细胞培养液上清中VEGF的 量，0. 4mg/L、0. 8mg/L组与对照组相比，存在显著性差异(P < 0. 05或P < 0. 01)，见表2。表2蓬莪术环二烯对不同来源肿瘤细胞VEGF表达的影响(I士s) (pg/ml)
权利要求
1.蓬莪术环二烯在制备抗肿瘤转移的药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其中所述的肿瘤选自肝癌、胃癌、膀胱癌、乳腺癌、结肠 癌、肾癌、食道癌、胆囊癌、卵巢癌、胰腺癌、子宫颈癌、甲状腺癌、前列腺癌、口腔癌及肺癌。
全文摘要
本发明属于制药领域，提供了蓬莪术环二烯在制备抗肿瘤转移的药物中的应用，特别是在制备抗肝癌、胃癌、膀胱癌、乳腺癌、结肠癌、肾癌、食道癌、胆囊癌、卵巢癌、胰腺癌、子宫颈癌、甲状腺癌、前列腺癌、口腔癌及肺癌等肿瘤转移的药物中的应用。蓬莪术环二烯通过抑制肿瘤细胞转移相关蛋白的表达发挥抗肿瘤转移作用。
文档编号A61P35/04GK102100688SQ200910155080
公开日2011年6月22日 申请日期2009年12月17日 优先权日2009年12月17日
发明者冯飞玉, 吴耀东, 孟昭珂, 杨岚, 郭殿武, 黄滨南 申请人:杭州民生药业有限公司