氯喹类化合物或其盐类在制备治疗急性白血病药物中的应用的制作方法

专利名称：：氯喹类化合物或其盐类在制备治疗急性白血病药物中的应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及生物医学领域，尤其涉及治疗急性白血病药物的药物，特别是一种氯喹类化合物或其盐类在制备治疗急性白血病药物中的应用。
背景技术：
：申请人:在公开号为CN101333530A的《一种凋亡相关基因及以其为靶点用于治疗白血病的药物》的专利申请文件中，描述到“由于CHMP5/PNAS-2参与多泡体(MVB)的组成，而MVB是局限分布于细胞浆的，由此可见PNAS-2蛋白的应该是较局限定位于细胞浆而非弥漫性分布于细胞浆中的。因此，PNAS-2蛋白在U937细胞中的亚细胞定位很可能存在异常。PNAS-2蛋白在急性白血病细胞株中存在的亚细胞定位异常参与了白血病的发生。”申请人考虑到PNAS-2的亚细胞定位异常很可能是由于多泡体膜稳定性下降导致PNAS-2蛋白从中渗出进入细胞浆所致，如果能稳定多泡体膜，很可能对白血病有治疗作用。根据文献报道，氯喹、羟基氯喹或其盐类具有稳定生物膜的作用(KorandaF.C.Antimalarials.JAmAcadDermatol,1981.4(6):p.650-655.)。因此氯喹、羟基氯喹或其盐类很可能对白血病有治疗作用。氯喹、羟基氯喹或其盐类目前在临床上主要用于治疗恶性疟、间日疟及三日疟。并可用于疟疾症状的抑制性预防。也可用于治疗肠外阿米巴病、结缔组织病、光敏感性疾病等，但未用于临床治疗白血病。白血病是造血系统的恶性肿瘤，由于骨髓、脾、肝等造血器官中白血病细胞过度增生、凋亡减少所致。目前白血病的治疗方法有化疗、中西医结合治疗、骨髓移植、生物调节剂治疗等方面。骨髓移植的效果较佳，但需要找到合适的供者，把握好移植的时机，花费大；中西医结合、生物调节剂等疗效欠佳，只能作为辅助性治疗。化疗是目前治疗白血病的主要手段，但传统意义上的化疗毒副反应大，常见耐药现象，总体疗效不佳，因此需要寻找新的药物。但是新药开发周期长，需要投入大量的人力、财力，我国的血液病研究者根据我国的国情，在老药新用上作出了重要的贡献应用原先治疗皮肤病的全反式维甲酸及传统中药三氧化二砷联合治疗急性早幼粒细胞白血病，取得了五年生存率高达95%左右的良好效果，使急性早幼粒细胞白血病成为第一个可认为已被攻克的白血病。原先用于治疗妊娠反应的药物沙利度胺应用于多发性骨髓瘤的治疗，也取得了良好的疗效，提示老药新用具有很好的应用前景。
发明内容本发明的目的在于提供一种氯喹类化合物或其盐类在制备治疗急性白血病药物中的应用，所述的这种药物要解决现有技术中没有有效药物治疗急性白血病的技术问题。本发明提供了一种氯喹类化合物或其盐类在制备治疗急性白血病药物中的应用。进一步的，所述的氯喹类化合物或盐类选自氯喹、磷酸氯喹、羟基氯喹、盐酸氯喹、硫酸氯喹、矽酸氯喹或氨基氯喹中的任意一种。进一步的，所述的治疗急性白血病药物的剂型为粉剂、或者注射液、或者胶囊、或者片剂、或者口服液。氯喹类化合物及盐类治疗白血病的机理为1，稳定MVB膜，阻止PNAS-2蛋白由MVB渗出，减少异常定位的PNAS-2蛋白，从而促白血病细胞凋亡。2，稳定白血病细胞膜，使细胞内钙离子浓度上升，线粒体膜电位崩塌，从而激活CaSpaSe3，导致细胞凋亡的发生。本发明采用对细胞膜及细胞内膜结构有稳定作用的氯喹类药物处理白血病细胞株、原代细胞，发现处理后可使白血病细胞生长阻滞、显著增加白血病细胞的凋亡率，表明氯喹类化合物及盐类可用于白血病的治疗。图1显示了MTT测得磷酸氯喹作用于U937细胞的抑制率曲线(η=3)。横坐标为磷酸氯喹对白血病细胞株U937的抑制率；纵坐标为取IoglOC的磷酸氯喹浓度，C的单位为μg/ml0图2显示了磷酸氯喹作用24h后U937细胞的凋亡情况流式细胞仪检测得到对照组的凋亡百分率为(2.71士1.35)%，加药组的凋亡百分率为(39.86士13.59)%，P<0.05。图3显示了激光共聚焦显微镜检测得到的U937细胞凋亡图象限I为检测PI得到的图像，红色为阳性细胞；象限II为光镜；象限III为检测ArmexinV-AlexaFluor488得到的图像，绿色为阳性细胞；象限IV为各象限信号重叠图像。我们可以从图中看到A是未染色状态良好的未凋亡细胞；B是ArmexinV-AlexaFluor488单阳性的早期凋亡细胞；D是PI单阳性的死亡细胞；C是同时染有红绿二色的细胞，在重叠图像上显示为黄色，可以看到核碎裂及凋亡小体形成，此类细胞为中晚期凋亡细胞。图4显示了激光共聚焦显微镜检测得到未加磷酸氯喹的对照组中，PNAS-2的亚细胞定位图像。左上象限为检测PNAS-2蛋白得到的图像；右上象限为光镜像；左下象限为检测核染料DAPI得到的图像；右下象限为三者融合像。可见PNAS-2蛋白除了在核周存在小颗粒状的正常分布外(即在多泡体中)，还存在游离在多泡体外、弥散分布于整个细胞中PNAS-2蛋白。图5显示了激光共聚焦显微镜检测得到加磷酸氯喹的实验组中，PNAS-2的亚细胞定位图像。可见PNAS-2蛋白恢复了在核周的小颗粒状正常分布外，未见弥散分布于整个细胞中的游离PNAS-2蛋白。图6显示了加/不加磷酸氯喹对白血病细胞内钙离子浓度的影响。荧光值越大，说明细胞内钙离子的浓度越高。未加磷酸氯喹时细胞内绿色荧光的平均值为28.99，加药后71.31，ρ<0.0001，表明加药后U937细胞内钙离子浓度明显上升。图7显示了加/不加磷酸氯喹对线粒体膜电位的影响。未加磷酸氯喹时U937细胞中线粒体膜电位崩塌细胞的比例为2.92%，加药后64.73%，ρ=0.0001，表明加药后线粒体膜电位崩塌的U937细胞比例明显上升。图8显示了加/不加磷酸氯喹对白血病细胞内CaSpaSe3活性的影响。流式细胞仪检测后发现未加磷酸氯喹时U937细胞中的CaSpaSe3的活性24.68%，加药后53.11%，P<0.05，表明加药后U937细胞中的CaSpaSe3的活性明显上升。图9显示了肽段KC14免疫小鼠所得血清行WesternBlot的检测结果。图10显示了S-31-7杂交瘤诱生腹水行WesternBlot检测结果图，图中，shl为PNAS-2基因的RNA干扰组，shcon为PNAS-2的RNA干扰对照组。在可见干扰组未见条带，但对照组可见一条约28KD的蛋白质条带，表明成功得到了PNAS-2单抗。具体实施例方式以白血病细胞株U937为例，以氯喹类药物中的磷酸氯喹为例，说明氯喹类药物在稳定细胞膜及细胞内膜结构中的作用，以及对白血病细胞的治疗作用。实施例1细胞培养白血病细胞株U937由上海血液研究所提供。在含10%的胎牛血清及青霉素、链霉素各100u/ml的RPMI1640培养基中，于37°C，含5%C02的细胞培养箱中进行培养，每2天传代1次。实验均在细胞对数生长期内进行。实施例2=MTT实验磷酸氯喹购于sigma公司，用生理盐水溶解，0.22μm无菌滤器过滤除菌后，配成各浓度，避光冻存。四甲基偶氮唑蓝(methylthiazolyltetrazolium,MTT)干粉购自Sigma公司。细胞调整至2X105个/ml，分设对照组和用药组，磷酸氯喹的终浓度分别为0，2，10，50，250，1000μg/ml；每组设3复孔。培养24h后各孔加5%MTT液20μ1，37度培养箱孵育4h，离心弃去上清后，各孔加二甲亚砜(DMSO)200μ1，充分摇勻溶解，酶标仪上检测570nm的光密度值(D)，3个复孔取平均值，实验重复三次。细胞增殖抑制率％=[(对照组A57tl-用药组A5J/对照组A57JX100%。药物对于白血病细胞株如U937细胞的增殖抑制率为浓度依赖性随浓度上升，抑制率也相应增大(R=0.982,P<0.01)(图1)；磷酸氯喹的IC50为46μg/ml即89.2μπιο1/L。各剂量组与对照组相比，细胞增殖率的差异均有统计学意义(P<0.05)。实施例3磷酸氯喹对白血病细胞凋亡作用的研究AnnexinV-AlexaFluor488/PI凋亡检测试剂盒，购于Invitrogen公司。U937细胞加入50μg/ml磷酸氯喹后培养24h，分别取2XIO5细胞，IXPBS洗涤一次，IXbindingbuffer200μ1重悬细胞。加AnnexinV-AlexaFluor4885μ1，PI2μ1避光孵育15min后，应用流式细胞仪及激光共聚焦显微镜检测细胞凋亡。重复实验三次。U937细胞加入50μg/ml磷酸氯喹后培养24h后流式细胞仪检测得到对照组的凋亡百分率为(2.71+1.35)%，加药组的凋亡百分率为(39.86士13.59)%,P<0.05，有统计学意义(图2)。在激光共聚焦显微镜图像上可见(图3)，象限I为检测PI得到的图像，红色为阳性细胞；象限II为光镜；象限III为检测ArmexinV-AlexaFluor488得到的图像，绿色为阳性细胞；象限IV为各象限信号重叠图像。我们可以从图中看到A是未染色状态良好的未凋亡细胞；B是AnnexinV-AlexaFluor488单阳性的早期凋亡细胞；D是PI单阳性的死亡细胞；C是同时染有红绿二色的细胞，在重叠图像上显示为黄色，可以看到核碎裂及凋亡小体形成，此类细胞为中晚期凋亡细胞。就图上计数总细胞数，以绿色或者红色荧光或者黄色重叠荧光标记细胞为凋亡细胞。激光共聚焦显微镜下检测对照组细胞405个，其中凋亡细胞共16个，凋亡率为3.95%；计数加药组细胞358个，其中106个细胞为凋亡细胞，得到的凋亡率为29.6%。上述结果表明磷酸氯喹对U937细胞有促细胞凋亡作用。实施例4:PNAS-2抗体的制备4.1PNAS-2抗原肽合成PNAS-2为一约28KD的亲水性蛋白质，使用蛋白序列分析软件ANTHEPR0T4.3等对该蛋白的亲水曲线、疏水曲线、易溶性曲线、抗原性曲线、跨膜区域曲线及结合抗原性曲线等进行分析后选取抗原性较好的亲水α螺旋片段合成多肽。由上海吉尔生化有限公司化学合成PNAS-2多肽，序列为KAKPKAPPPSLTDC，此肽段简称KC14。多肽的纯度>70%，与BSA偶联。4.2动物免疫先选5只BABL/c小鼠，250ug合成肽加0.5mlPBS稀释，加0.5ml弗氏完全佐剂(购自北京鼎国生物技术责任有限公司)，在小鼠颈背部皮下多点注射；二周后，再次免疫。将与初次等量的抗原肽原样稀释，加Iml弗氏不完全佐剂(购自北京鼎国生物技术责任有限公司)，腹腔注射。三周后再免疫小鼠，具体方法同第二次免疫。最后一次免疫二周后，尾静脉取血，取多克隆血清行WESTERNBLOT检测特异性，发现KC14肽段能够作为抗原决定簇，其所免疫小鼠能够产生特异性PNAS-2抗体(图9)。用ELISA法检测KC14肽段免疫后的小鼠血清效价(表1)。最后选择效价最高的4#小鼠再次腹腔加强免疫，抗原尾静脉注射，不加佐剂；三天后，取脾脏细胞进行融合。图9中，shl为PNAS-2基因的RNA干扰组，shcon为PNAS-2的RNA干扰对照组。根据一级结构计算得PNAS-2蛋白的分子量大概为28kd左右。所得到WesternBlot的结果显示KC14肽段免疫小鼠所获得多克隆血清能够识别shcon泳道30kd左右的蛋白，并且，同时shl组泳道为阴性。证实KC14肽段能够作为抗原决定簇，其所免疫小鼠能够产生特异性PNAS-2抗体。表1肽段KC14免疫小鼠后，血清抗体效价的测定_Antibodytiter_Mouse_KC14-BSA_BSA_64,00016000Normal_<1000_<1000_4.3PNAS-2单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立将免疫后4#小鼠的脾脏细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合，融合剂为PEG(聚乙二醇，购于Sigma公司)。细胞融合及选择性培养均按常规方法进行(徐志凯.实用单克隆抗体技术.西安陕西科技出版社，1992(31-41).)，我们得到的融合率为91.23%。以IOug/ul合成肽包被ELISA板，ELISA法检测杂交瘤细胞培养上清。以BSA为阴性对照，免疫后BALB/c小鼠血清为阳性对照。采用有限稀释法对检测阳性孔细胞进行3次克隆化，直到克隆生长孔单抗阳性率达100%，最终获得稳定的杂交瘤细胞株S-31-7，S-289-2，S-176-12，建立了单克隆细胞株。将阳性杂交瘤细胞株扩增培养后，液氮冻存。4.4单克隆抗体的鉴定44.1单抗腹水制备及效价测定BALB/c小鼠腹腔注射石蜡油，每只0.5ml。1到2周后，再经腹腔接种阳性杂交瘤细胞，每一只BALB/c小鼠接种5XIO6个细胞。两周后收集腹水，常规ELISA方法检测腹水效价(表2)。表2以ELISA法对获得腹水行检测<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>4.4.2Ig类和亚类的鉴定采用小鼠Ig类检测试剂盒(购自Sigma公司)对所获得的单抗进行鉴定，具体方法参照试剂盒中说明书进行。检测发现S-31-7为IgGl；S-289-2为IgG2α；S-176-12为IgGl。4.4.3WesternBlot检测抗体的特异性分别将RNA干扰PNAS-2表达的U937细胞和RNA无意义干扰的U937细胞抽提蛋白。2个泳道均加量60ug量蛋白进行SDS-PAGE电泳；电泳后转于NC膜，分别将三株杂交瘤诱导所生腹水用TBS稀释后孵育，然后行二抗孵育，洗涤，上机观察。只有S-31-7杂交瘤诱生腹水检测得shcon泳道28kd的蛋白，shl泳道为阴性表现，其他二株杂交瘤诱生腹水未能检测出shcon泳道PNAS-2蛋白。故此，唯S-31-7杂交瘤诱生腹水能够用于WesternBlot检测(图10)。4.4.4PNAS-2单抗的基因信息对于各种单抗来说，区分彼此的重要特征就是产生该单抗的杂交瘤细胞的重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)基因序列的不同。为了明确PNAS-2单抗重链及轻链可变区的基因序列，常规抽提了可产生PNAS-2特异性单抗的S-31-7杂交瘤的总RNA，常规逆转录后应用TAKARA公司的rTaq酶行PCR，引物为VL上游引物5-GACATTGTGATGACCCAGTCTCC-3，VL下游引物5-TTTTATTTCCAGCTTGGTGCCTC-3。重链可变区的引物VH上游引物5-GCTACAAACGCGTACGCTCAGGTGAAGCTG_3，VH下游引物5-GACCGATGGGCCCTTGGTGGAGGCTGAGGAGACGGT-3。PCR反应条件均为为94°C2min；94°C30s,60°C130s,72°CImin循环5次；94°C30s,58°C130s,72°CImin循环5次；94°C30s,56°C130s,72°CImin循环5次；94°C30s，54°C30s,72°C2min，循环19次；72°C20min，4°C20min结束反应。PCR产物于1.5%琼脂糖凝胶电泳后割胶纯化回收，使用北京鼎国生物公司的DNA快速纯化/回收试剂盒，操作的大致步骤如下(1).紫外灯下切取含DNA片段的琼脂糖(100mg-300mg)并移入1.5mlEP管中，用移液器吸头捣碎后按切取重量溶液A的体积比为13的比例加入溶液A。(2).65°C水浴5-lOmin，振荡2次，待胶完全融化后置室温，加入15μ1溶液B，充分混勻后转入离心柱中，静置2min，IOOOOrpm30s，弃下清。(3).加500μ1溶液C于离心柱中，IOOOOrpm30s，弃下清。重复此步骤一次。(4).12000rpm再次离心lmin，弃下清。将离心柱装入新的离心管中，敞开离心管管口室温静置lOmin。(5).加入20μ150°C水浴预热的溶液D，静置2min，13000rpm离心lmin，管底液体即为回收的DNA。之后进行TOPOTA克隆，试剂盒(TOPOTACloningKitforSequencing)购自Invitrogen公司。取回收的PCR产物4μl，SaltSolution1μl，pCR4_T0P0质粒载体1μ1，室温孵育5min后置于冰上。取新鲜T0P010化学感受态菌200μ1，加2μ1连接产物，小心混勻，冰上放置lOmin。42°C热休克30秒，冰上放置2min后加入250μ1S.0.C培养基，置于细菌摇床37°C200rpm振摇2h。取40μ1菌液涂于含50μg/μ1氨苄青霉素的LB琼脂平板上，37°C孵育过夜后挑选典型的单个菌落入3ml含100μg/μ1氨苄青霉素的LB培养液中，37°C200rpm振摇培养过夜后取2ml菌液，送上海生工生物工程公司测序。测序得到的PNAS-2单克隆抗体轻链可变区(VL)基因序列为5-GACATTGTGATGACCCAGTCTCCTGCTTCCTTAGCTGTATCTCTGGGGCAGAGGGCCACCATCTCATACAGGGCCAGCAAAAGTGTCAGTACATCTGGCTATAGTTATATGCACTGGAACCAACAGAAACCAGGACAGCCACCCAGACTCCTCATCTATCTTGTATCCAACCTAGAATCTGGGGTCCCTGCCAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACCCTCAACATCCATCCTGTGGAGGAGGAGGATGCTGCAACCTATTACTGTCAGCACATTAGGGAGCTTACACGTTCGGAGGAGGCACCAAGCTGGAAATAAAA-3。测序得到的PNAS-2单克隆抗体重链可变区(VH)基因序列为5-GGGAATTCATGGAGGTGAAGCTGCTGGAGTCTGGAGGTGGCCTGGTGCAGCCTGGAGGATCCCTGAAACTCTCCTGTGCAGCCTCAGAATTCGATTTTAGTAGATACTGGATGAGTTGGGTCCGGCAGGCTCCAGGGAAAGGGCTAGAATGGATTGGAGAAATTAATCCAGAGAGCACTACGATAAGCTATACGCCATCTCTAAAGGATAAATTCATCATCTCCAGAGACAACGCCAAAAATACGCTGTACCTGCAAATGAGCAAAGTGAGATCTGAGGACACAGCCCTTTATTTCTGTGCAAGGTATTACTACGATTATATCTACTGGTACTTCGATGTCTGGGGCGCAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCAGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTC-3。实施例5磷酸氯喹处理后PNAS-2亚细胞定位的变化抗鼠TRITC二抗购于KPL公司；DAPI购于碧云天公司。以50μg/ml的磷酸氯喹处理U937细胞6h后取2XIO5个细胞；IXPBS洗涤二次，涂片，干燥后用4%多聚甲醛固定20min，IXPBS洗片3次；0.2%tritonlOO透膜2min，IXPBS洗片3次；5%BSA封闭IOmin后入加11000的PNAS-2单克隆抗体50μ1，4°C孵育过夜。次日用IXPBS洗涤3次；加入抗鼠TRITC二抗及DAPI于37°C孵育30min，IXPBS洗涤3次，激光共聚焦显微镜观察蛋白亚细胞定位。如图4所示，未加磷酸氯喹时U937细胞中的PNAS-2蛋白弥漫分布于细胞浆中，在细胞核周略有浓集，与本实验室之前用PNAS-2-GFP融合蛋白表达质粒得到的PNAS-2亚细胞定位基本一致；图5所示的为加磷酸氯喹后U937细胞中PNAS-2蛋白的亚细胞定位，可以看见在胞浆内弥漫分布的PNAS-2蛋白基本消失，并聚集于核周，与文献报道及本实验室得到的PNAS-2蛋白在正常细胞中定位于核周的结论基本一致(WardDM,VaughnMB,ShiflettSL,etal.TheroleofLIP5andCHMP5inmultivesicularbodyformationandHIV-Ibuddinginmammaliancells.JBiolChem，2005.280(11):10548-55.)。证实磷酸氯喹能通过稳定多泡体膜结构，减少PNAS-2蛋白的渗出。说明磷酸氯喹治疗白血病的机理之一为通过稳定MVB膜，阻止PNAS-2蛋白由MVB渗出，减少异常定位的PNAS-2蛋白，从而促白血病细胞凋亡。实施例6磷酸氯喹处理后细胞内钙离子浓度的变化Fluo3-AM细胞钙离子浓度检测试剂盒购自碧云天公司，操作步骤如下每组细胞取5X106，加入含10%胎牛血清的RPMI1640培养液10ml，37°C5%C02的细胞培养箱中孵育；加入Fluo3-AMIOul后继续于37°C5%C02的细胞培养箱中孵育30min;1500rpm离心后弃上清，重新悬浮于0.5mLIXPBS缓冲液中后应用流式细胞仪进行检测。每组至少检测20个细胞的荧光值，荧光值越大，说明细胞内钙离子的浓度越高。未加磷酸氯喹时细胞内绿色荧光的平均值为28.99，加药后71.31(图6)，两组之间的ρ<0.0001，表明加药后U937细胞内钙离子浓度明显上升，而细胞内钙离子的上升可致内源性凋亡通路的激活；同时也说明了磷酸氯喹对细胞膜的确有稳定作用。实施例7磷酸氯喹处理后细胞内线粒体膜电位的变化线粒体膜电位检测试剂盒MitoProbe.JC-IAssayKit购自MolecularProbes公司，操作步骤如下每组细胞取lX106，1500rpm离心后弃上清，重新悬浮于ImL37°C预热的IXPBS缓冲液中。加入10μL200μΜ的JC-1，37°C，5%C02孵育30min。1500rpm离心后弃上清，重新悬浮于0.5ml37°C预热的IXPBS缓冲液中后应用流式细胞仪进行检测。流式细胞仪检测后发现未加磷酸氯喹时线粒体膜电位崩塌细胞的比例为2.92%,加药后64.73%(图7)，两组之间的p=0.0001，表明加药后线粒体膜电位崩塌的U937细胞比例明显上升，说明磷酸氯喹可进一步通过致白血病细胞线粒体膜电位崩塌而促此类细胞发生内源性细胞凋亡。实施例8磷酸氯喹处理后细胞内caSpaSe3活性的变化细胞内caspase3活性检测试剂盒NucView488Caspase-3AssayKitforLiveCells购自Biotium公司，操作步骤如下每组细胞取1X106，1500rpm离心后弃上清，重新悬浮于ImLIXPBS缓冲液中；各取200μL细胞悬液加入流式检测管中，加入5uL0.2mMNucView488Caspase-3底物储存液，混勻；室温孵育30min；加入0.3mlIXPBS缓冲液中后应用流式细胞仪进行检测。流式细胞仪检测后发现未加磷酸氯喹时U937细胞中的CaSpaSe3的活性24.68%,加药后53.11%(图7)，两组之间的ρ=0.0161，<0.05，表明加药后U937细胞中的caspase3的活性明显上升。结合上述结果，说明磷酸氯喹白血病细胞凋亡的另一机理为磷酸氯喹通过稳定白血病细胞膜，使细胞内钙离子浓度上升，线粒体膜电位崩塌，从而激活Caspase3,导致细胞凋亡的发生。综上所述，本发明应用对细胞膜及细胞内膜结构有稳定作用的药物如氯喹类药物或其盐类处理白血病细胞株、原代细胞，发现此类药物处理后可使白血病细胞生长阻滞、显著增加白血病细胞的凋亡率，表明氯喹、羟基氯喹或其盐类可用于白血病的治疗。本发明还显示了氯喹、羟基氯喹或其盐类治疗白血病的机理1，稳定MVB膜，阻止PNAS-2蛋白由MVB渗出，减少异常定位的PNAS-2蛋白，从而促白血病细胞凋亡。2，稳定白血病细胞膜，使细胞内钙离子浓度上升，线粒体膜电位崩塌，从而激活CaSpaSe3，导致细胞凋亡的发生。权利要求氯喹类化合物或其盐类在制备治疗急性白血病药物中的应用。2.如权利要求1所述的氯喹类化合物或其盐类在制备治疗急性白血病药物中的应用，其特征在于所述的氯喹类化合物或盐类选自氯喹、磷酸氯喹、羟基氯喹、盐酸氯喹、硫酸氯喹、矽酸氯喹或氨基氯喹中的任意一种。3.如权利要求1所述的氯喹类化合物或其盐类在制备治疗急性白血病药物中的应用，其特征在于所述的治疗急性白血病药物的剂型为粉剂、或者注射液、或者胶囊、或者片剂、或者口服液。全文摘要本发明提供了一种氯喹类化合物或其盐类在制备治疗急性白血病药物中的应用，所述的氯喹类化合物或盐类选自氯喹、磷酸氯喹、羟基氯喹、盐酸氯喹、硫酸氯喹、矽酸氯喹或氨基氯喹中的任意一种。本发明采用对细胞膜及细胞内膜结构有稳定作用的氯喹类药物处理白血病细胞株、原代细胞，发现处理后可使白血病细胞生长阻滞、显著增加白血病细胞的凋亡率，表明氯喹类化合物及盐类可用于白血病的治疗。文档编号A61P35/02GK101829115SQ20091015972公开日2010年9月15日申请日期2009年7月10日优先权日2009年7月10日发明者刘佳,王海嵘,陈芳源申请人:上海交通大学医学院附属仁济医院