专利名称：新型人用狂犬病疫苗及其制备方法
新型人用狂犬病疫苗及其制备方法 二.所属领域 本发明涉及人用狂犬病疫苗及其的制备方法 [OOO3] 三.背景技术(早期文献或参考文献) 狂犬病(rabies)又名恐水症(hydrophobia)，是由狂犬病毒感染引起的一种急性 传染病。主要狂犬病病毒宿主为狼、狐、犬等动物。狂犬病尚无有效药物可以治疗，一旦发 病100%死亡。但可以通过接种狂犬病疫苗或者注射抗血清来预防吣 狂犬病在世界范围内均有发生和流行，据WHO资料(Bogel1986)统计156个国家 中有87个国家(不含我国)存在狂犬病，如印度、泰国、突尼斯、巴西、埃塞俄比亚、萨尔瓦 多等都是高发地区，印度每年死于狂犬病的病例约10000 20000例。20世纪80年代，我 国仅次于印度居世界第二位气新中国成立以来，积极开展了对狂犬病的防治工作，目前已 基本控制了人间流行。 狂犬病疫苗是目前预防狂犬病发生唯一有效的药品，现在各国所用疫苗多是细胞
疫苗，包括纯化地鼠肾细胞狂犬病疫苗、纯化Vero细胞狂犬病疫苗、人二倍体细胞狂犬病
疫苗、纯化鸡胚细胞狂犬病疫苗等。很长一段时间我国所用疫苗是以氢氧化铝为佐剂的疫
苗，但是由于氢氧化铝佐剂存在缓释的作用，不能在短期内(14天 21天)产生有效保护
抗体，现在的人用狂犬病疫苗均为无佐剂的疫苗，但是没有氢氧化铝吸附的无佐剂狂犬病
病毒很不稳定，在保存过程中需要加入人血白蛋白作为保护剂，增加了疫苗成本。 另外无佐剂人用狂犬病疫苗需要达到有效抗体所需的抗原量高，稳定性差，产生
的有效抗体强度不理想，目前对狂犬病疫苗的质量控制方面日益加强，DNA残留量及总蛋白
含量的严格控制，势必要求将来所制备的人用狂犬病疫苗具有低抗原量，高效价，能快速产
生有效抗体，所以研制新型疫苗成为研究的重点。 四.发明内容(项目内容) 本发明的一个目的是提供一种新型的人用狂犬病疫苗，它含有常规方法制备的人 用狂犬病纯化原液及破伤风类毒素，破伤风类毒素对灭活的狂犬病毒具有快速增强免疫的 作用，研制的新型人用狂犬病疫苗可以在7天内快速产生有效高滴度的中和抗体，达到短 期内获得高中和抗体的作用，而且中和抗体维持时间较长，为狂犬重度咬伤及潜伏期短的 患者，提供一种更安全有效的人用狂犬病疫苗。 本发明的另一个目的是减少人用狂犬病纯化原液抗原量，就是用很少的抗原量达 到好的免疫效果。人用狂犬病纯化原液抗原的产量低，制备成本高，本发明提供一种新型人 用狂犬病疫苗的生产方法，包括以下步骤。 1、用常规方法分别制备人用狂犬病纯化原液及破伤风类毒素。
2、将这两种成分按一定比例进行混合； 3、将混合后的疫苗按液体剂型疫苗和冻干剂型疫苗进行分装或冻干；
4、将分装后的产品经成品检定后进行包装，即得到所需的新型人用狂犬病疫苗。
所说的两种成分按抗原含量的混合比例为人用狂犬病纯化原液常量的1/3 2/3 :破伤风类毒素的用量为3Lf/剂 10Lf/剂。
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本发明的生产方法，前期利用现有的狂犬病纯化原液生产工艺及破伤风类毒素的 生产工艺，后期按所含抗原量一定比例进行混合配伍，得到新型人用狂犬病疫苗，从而达到 减少狂犬病纯化原液抗原量，减少稳定剂如人血白蛋白的使用，提高产品质量，提高疫苗效 价，增强免疫的效果。 本发明的第三个目的就是提供一种新型人用狂犬病疫苗，不仅具有预防狂犬病毒
的作用，而且还能预防破伤风梭状芽孢杆菌感染的作用，在狂犬重度咬伤后通常需要另注
射大量的破伤风抗毒素，具有较大的不良反应；使用新型人用狂犬病疫苗可以直接预防狂
犬病毒及破伤风梭状芽孢杆菌，达到联合疫苗的效果。 五.
(如果有附图的话) 图1使用不同伍配的本发明疫苗的中和抗体。
图2表明本发明疫苗的效价与传统疫苗的比较结果。 图3表明使用本发明的疫苗的免疫效果 六.具体实施方案(或方法) 实施例1 : 各取人用狂犬病纯化原液(地鼠肾细胞)(福尔生物制药股份有限公司生产)、破 伤风类毒素原液(福尔生物制药股份有限公司生产)，根据抗原量稀释为l剂量、1/2剂量 的疫苗，分别组合制成液体疫苗。实验过程中，设单独人用狂犬病疫苗为对照组，按照中国 药典三部的方法分别测定四种组合疫苗的效价。实验结果如图2-l。由图2-l中可见，添 加7Lf单位破伤风类毒素的狂犬病疫苗的效价(6.32IU/mL)比对照组的效价(3. 74IU/mL) 增加2. 5IU/mL ;7Lf单位破伤风类毒素与1/2剂量狂犬病纯化原液抗原组成的疫苗的效价 (3. 77IU/mL)大于对照组效价(3. 74IU/mL) ，3. 5Lf单位破伤风类毒素与1/2剂量狂犬病纯 化原液抗原组成的疫苗的效价(3. 15IU/mL)略低于对照组效价(3. 74IU/mL)。因此本实验 说明破伤风类毒素能明显增加狂犬病疫苗的效价作用，起到增强免疫的效果；在疫苗的制 备中可以大大减少人用狂犬病纯化原液抗原量。
实施例2 : 各取人用狂犬病纯化原液(VER0细胞)(福尔生物制药股份有限公司生产)、破 伤风类毒素原液(福尔生物制药股份有限公司生产)，根据抗原量稀释为1剂量、1/2剂量 的疫苗，分别组合制成液体疫苗。实验过程中，设人用狂犬病疫苗为对照组，按照中国药 典三部的方法分别测定四种组合疫苗的效价。实验结果如图2-2。由图2-2中可见，添加 7Lf单位破伤风类毒素的狂犬病疫苗的效价(6.48IU/mL)比对照组的效价(3. 85IU/mL)增 加2. 63IU/mL ;7Lf单位破伤风类毒素与1/2剂量狂犬病纯化原液抗原组成的疫苗的效价 (3.90IU/mL)大于对照组效价(3.85IU/mL)，3Lf单位破伤风类毒素与1/2剂量狂犬病纯化 原液抗原组成的疫苗的效价(3.80IU/mL)相当于对照组效价(3.85IU/mL)。因此本实验说 明破伤风类毒素能明显增加狂犬病疫苗的效价作用，起到增强免疫的效果；在疫苗的制备 中可以大大减少人用狂犬病纯化原液抗原量。
实施例3 : 各取人用狂犬病纯化原液(二倍体细胞)(福尔生物制药股份有限公司生产)、 破伤风类毒素原液(福尔生物制药股份有限公司生产)，根据抗原量稀释为1剂量、1/2剂 量的疫苗，分别组合制成液体疫苗。实验过程中，设人用狂犬病疫苗为对照组，按照中国药典三部的方法分别测定四种组合疫苗的效价。实验结果如图2-3。由图2-3中可见，添加 7Lf单位破伤风类毒素的狂犬病疫苗的效价(6.80IU/mL)比对照组的效价(4. 25IU/mL)增 加2. 55IU/mL ;7Lf单位破伤风类毒素与1/2剂量狂犬病纯化原液抗原组成的疫苗的效价 (4. 45IU/mL)大于对照组效价(4. 25IU/mL) ，3. 5Lf单位破伤风类毒素与1/2剂量狂犬病纯 化原液抗原组成的疫苗的效价(4.05IU/mL)相当于对照组效价(4.25IU/mL)。因此本实验 说明破伤风类毒素能明显增加狂犬病疫苗的效价作用，起到增强免疫的效果；在疫苗的制 备中可以大大减少人用狂犬病纯化原液抗原量。
实施例4 : 各取人用狂犬病纯化原液(地鼠肾细胞)(福尔生物制药股份有限公司生产)、破 伤风类毒素原液(福尔生物制药股份有限公司生产)，根据抗原量稀释为l剂量、1/2剂量 的疫苗，分别组合制成液体疫苗。实验过程中，设人用狂犬病疫苗为对照组，其中只在对照 组中加入1%人血白蛋白为保护剂，在37°〇放置14天后，按照中国药典三部的方法分别测 定四种组合疫苗的热稳。实验证明添加7Lf单位破伤风类毒素的狂犬病疫苗的热稳效价 (4. 80IU/mL)比对照组的热稳效价(2. 75IU/mL)增加2. 05IU/mL ;7Lf单位破伤风类毒素 与1/2剂量狂犬病纯化原液抗原组成的疫苗的热稳效价(2. 95IU/mL)大于对照组热稳效价 (2. 75IU/mL) ， 3. 5Lf单位破伤风类毒素与1/2剂量狂犬病纯化原液抗原组成的疫苗的热稳 效价(2.65IU/mL)相当于对照组热稳效价(2. 75IU/ml)。因此本实验说明破伤风类毒素不 仅能明显增加狂犬病疫苗的效价作用，起到增强免疫的作用；而且可以取代人血白蛋白起 到保护抗原的作用，减少成本。
实施例5: 各取人用狂犬病纯化原液(地鼠肾细胞)(福尔生物制药股份有限公司生产)、破 伤风类毒素原液(福尔生物制药股份有限公司生产)，根据抗原量稀释为l剂量、1/2剂量 的疫苗，分别组合制成液体疫苗。实验过程中，设人用狂犬病疫苗为对照组，其中只在对照 组中加入1%人血白蛋白为保护剂，按照中国药典三部的方法分别进行四种组合疫苗的特 异性异常实验。实验结果均合格。说明加入破伤风类毒素的新型狂犬病疫苗是安全的，有 效的。
实施例6 : 用上述案例组合的4种组合的疫苗分别免疫小鼠，每次免疫0. 5ml，0天、7天分别 免疫2次，分别在7、14、21、28天采血，检测血清中和抗体和效价。实验结果如图1、图3。由 图1中可见，所有添加不同量的破伤风类毒素的新型狂犬病疫苗均在7天时产生了高滴度 的中和抗体，添加7Lf单位破伤风类毒素的狂犬病疫苗的中和抗体为30. 23IU/ml，远远大 于对照组(人用狂犬病疫苗)O. 83IU/ml，血清中和抗体提高36倍左右；在免疫后的14天， 所有添加不同量的破伤风类毒素的新型狂犬病疫苗产生的血清中和抗体滴度维持在高水 平，尤其是3. 5Lf单位破伤风类毒素与1/2剂量狂犬病纯化原液抗原组成的疫苗的抗体滴 度快速增加为21. 4IU/ml，而对照组的中和抗体只有0. 96IU/ml ;在免疫后的21天，所有添 加不同量的破伤风类毒素的新型狂犬病疫苗产生的血清中和抗体滴度依旧维持在高水平， 中和抗体效价为5 15IU/ml，而对照组的中和抗体下降为0. 13IU/ml左右，远远低于有效 保护抗体0. 5IU/ml ;血清中和抗体平均提高50 150倍左右；在免疫后的28天，所有添加 不同量的破伤风类毒素的新型狂犬病疫苗产生的血清中和抗体虽然有所下降，但是血清中和抗体仍然远远大于有效中和抗体O. 5IU/ml的要求，中和抗体效价为4 10IU/ml，而对照 组的中和抗体效价下降为0. 09IU/ml。因此本实验充分说明研制的新型人用狂犬病疫苗可 以在7天内快速产生有效高滴度的中和抗体，达到短期内获得高中和抗体的作用，而且中 和抗体的持续时间较长，为狂犬重度咬伤及潜伏期短的患者，提供一种更安全有效的人用 狂犬病疫苗。研制的新型人用狂犬病疫苗的效果是显著的，将在狂犬病的防治中起到重要 的作用。
权利要求
一种新型人用狂犬病疫苗，其特征是由人用狂犬病纯化原液与破伤风类毒素组成。
2. 根据权利要求1所述的人用狂犬病纯化原液是指由地鼠肾细胞组织培养或二倍体 细胞培养或Vero细胞培养或鸡胚细胞培养纯化制备的人用狂犬病纯化原液。
3. 根据权利要求1所述的破伤风类毒素是指由传统方法或基因工程方法制备的破伤 风类毒素。
4. 根据权利要求1、2所述的人用狂犬病纯化原液的用量为常量的1/3 2/3。
5. 根据权利要求1、3所述的破伤风类毒素的用量为3Lf/剂 10Lf/剂。
6. 根据权利要求1、4、5所述的人用狂犬病纯化原液与破伤风类毒素的最佳选择人用狂犬病纯化原液1/3量破伤风类毒素3LF ;人用狂犬病纯化原液1/2量破伤风类毒素4LF。
7. 根据权利要求1所述的人用狂犬病疫苗可以是不加人血白蛋白等保护剂的。
全文摘要
本发明涉及人用狂犬病疫苗及其制备方法，主要解决目前人用狂犬病疫苗需要达到有效抗体所需的抗原量高，稳定性差，产生的有效抗体强度不理想的缺点。本发明的产品含有常规方法制备的人用狂犬病纯化原液及破伤风类毒素，其中破伤风类毒素对灭活的狂犬病毒具有快速增强免疫的效果。实现用很少的抗原量达到好的免疫效果的目的。本发明疫苗的制备方法，前期利用现有的狂犬病纯化原液生产工艺及破伤风类毒素的生产工艺，后期按所含抗原量一定比例进行混合配伍，得到新型人用狂犬病疫苗。新型人用狂犬病疫苗可以直接预防狂犬病毒及破伤风梭状芽孢杆菌，达到联合疫苗的效果。
文档编号A61K39/205GK101708331SQ20091017742
公开日2010年5月19日 申请日期2009年9月29日 优先权日2009年9月29日
发明者孙雪南, 张灵敏, 王琪, 贾宝山 申请人:福尔生物制药股份有限公司