专利名称：紫菜藻胆蛋白在制备用于抗氧化及提高免疫力的药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及生物医药领域，具体地讲，本发明涉及紫菜藻胆蛋白在制备用于抗氧化及提高免疫力的药物中的应用。
背景技术：
活性氧在生物体内发挥着不同的作用，一方面它们与能量供给、细胞生长调节、细胞间信号传递以及重要生物分子的合成有重要关系，另一方面它们的存在对生物分子也会有相当的损害，通过加成、消除、取代以及提取等反应，可以攻击细胞膜脂质，使其中的多不饱和脂肪酸脱去烯丙基，产生脂氧自由基，进而形成过氧化脂质，分解后产生丙二醛(MDA)，与含有游离氨基酸的蛋白质、磷脂肽乙醇胺及核酸等物质形成Schiff碱；Schiff碱攻击蛋白质，会使蛋白质的多肽链断裂，或使蛋白质交联，生成以异常键连接的大分子，致使蛋白质变性，影响其功能；Schiff碱攻击核酸，一方面可直接攻击碱基使其互相结合，或生成过氧化物，造成碱基破坏，另一方面还可以从戊糖部分提取氢，会造成DNA主链断裂。总之，影响生物体功能的各个方面。
在生物体内，存在着多种清除活性氧的体系以维持体内活性氧的产生和清除。首要防御手段是避免氧分子(O2)发生单电子还原反应，通过细胞色素氧化酶的催化作用，使氧分子(O2)直接还原为水。其后是超氧化物歧化酶(SOD)催化·O2或H2O歧化为O2与过氧化氢(H2O2)，过氧化氢酶催化过氧化氢形成水与O2以及谷光甘肽过氧化物酶或谷光甘肽转硫酶催化LOOH成为LOH。除了以上的抗氧化酶以外，生物体内还存在一些小分子抗氧化剂，例如维生素E、维生素C、谷光甘肽、尿酸、胡萝卜素、血浆铜蓝蛋白以及硒、锰、锌等微量元素。在正常情况下，由于体内各个抗氧化体系的存在，体内氧自由基的产生和清除是平衡的。一旦氧自由基产生过多或抗氧化体系出现故障，体内氧自由基代谢出现失衡，或称氧化应激态，此时外加一些抗氧化剂协助体内维持氧代谢的平衡对防止疾病的发生和保持机体的健康是十分有益的。
过去研究的焦点主要集中在一些具有抗氧化性的维生素，如维生素E，维生素C，维生素A和β一胡萝卜素等。近年来随着回归自然的风潮和一些人们逐渐关注一些植物来源的物质，如黄酮类、萜类、多酚类、烯酸、多糖、多肽等。而天然抗氧化剂也以从单纯作为油脂和含脂食品的抗氧化剂，发展到作为具有保护人体细胞组织，保护心脑血管、循环系统，抗癌及延缓衰老等功能的药物和食品添加剂。寻找高效低毒的天然抗氧化剂也是目前抗氧化剂和自由基生物学研究的主要方向和待解决的问题之一。
紫菜属于红藻门(Rhodophyta)、原红藻纲(Protoflorideophyceae)、红毛菜科(Bangiaceae)、紫菜属(Porphyra)，是我国三大经济海藻之一。作为一种营养价值较高的海藻，紫菜富含糖、蛋白质、脂肪、无机盐和维生素，作为食品和用于治病，在我国已有上千年的历史，民间早有用其去火、降血压以及治疗一些淋巴结核病等。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是采用高效低毒的天然抗氧化剂获得用于抗氧化及提高免疫力的药物。
本发明所要解决的技术问题可通过如下技术方案实现 一种用于抗氧化及提高免疫力的药物，所述药物包含紫菜藻胆蛋白和药物学上常用的辅料。
所述药物可为口服液、粉剂、颗粒剂、胶囊、片剂或丸剂。
所述药物可为糖浆剂。
本发明药物中所用的原料紫菜藻胆蛋白粗提液是选取紫菜作为原料，通过2006年7月5日公开的中国发明专利申请2004100990370中的制备方法制备的上清液，具体步骤如下 (1)、进行高速捣碎，高速捣碎以间隙捣碎方式进行，以免温升超过4℃以上，高速捣碎转速为10000～12000转/分，后以5000转/分低速离心15分钟的方法得到紫菜最初提取液； (2)、将上述所提取溶液加硫酸铵至20％饱和度，接着以10000转/分中速离心15分钟后取上清液，继续加硫酸铵至50％饱和度，再以10000转/分中速离心15分钟后取沉淀； (3)、将沉淀用pH 6.8的0.001M的磷酸盐缓冲液溶解，加硫酸铵至10％饱和度，中速离心取上清液，继续加硫酸铵至40％饱和度，中速离心取沉淀，中速离心都取为10000转/分，中速离心时间均是15分钟； (4)、再将沉淀用pH 6.8的0.001M的磷酸盐缓冲液溶解后以15000转/分，高速离心30分钟，得到上清液； 以上步骤都在4℃下进行。
本发明药物可增大主要免疫器官；可显著提高小鼠血清SOD及GSH-PX的活力，显著降低其肝组织MDA的生成。
本发明原料还具有以下优点 1、藻胆蛋白来源丰富，我国是紫菜生产大国，年产量20亿张左右，目前市场上大多是自然凉干的紫菜，销售价格在每千克20-30元，而每吨饲料级螺旋藻干粉6-8万元人民币(60-80元/千克)，曾一度高达每kg 30美元(约240元/千克)，是紫菜的十倍，因此本发明所用原料来源广泛，无需加工，成本相对于螺旋藻便宜的多； 2、藻胆蛋白提取方便，根据之前制备流程(发明专利申请号2004100990370)，目前从紫菜提取高纯度藻胆蛋白工艺简单，成本低廉，得率较高； 3、藻胆蛋白作为天然提取物具有无毒无副作用的特点；
具体实施例方式 为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体例，进一步阐述本发明。
实施例1 按照制剂学糖浆剂的常规工艺制备本发明药物口服剂，所得口服剂命名为口服液1#，其中原料与辅料的配比如下 紫菜藻胆蛋白粗提液10g 蔗糖 600g 苯甲酸1g 蒸馏水加至1000ml 本实施例中所用的原料紫菜藻胆蛋白粗提液是选取紫菜作为原料，通过2006年7月5日公开的中国发明专利申请2004100990370中的制备方法制备的上清液，具体步骤如下 (1)、进行高速捣碎，高速捣碎以间隙捣碎方式进行，以免温升超过4℃以上，高速捣碎转速为10000～12000转/分，后以5000转/分低速离心15分钟的方法得到紫菜最初提取液； (2)、将上述所提取溶液加硫酸铵至20％饱和度，接着以10000转/分中速离心15分钟后取上清液，继续加硫酸铵至50％饱和度，再以10000转/分中速离心15分钟后取沉淀； (3)、将沉淀用pH 6.8的0.001M的磷酸盐缓冲液溶解，加硫酸铵至10％饱和度，中速离心取上清液，继续加硫酸铵至40％饱和度，中速离心取沉淀，中速离心都取为10000转/分，中速离心时间均是15分钟； (4)、再将沉淀用pH 6.8的0.001M的磷酸盐缓冲液溶解后以15000转/分，高速离心30分钟，得到上清液； 以上步骤都在4℃下进行。
实施例2 按照与实施例1相同的方法制备本发明药物口服剂，所得口服剂命名为口服液2#，所不同的是原料与辅料的配比如下 紫菜藻胆蛋白粗提液20g 蔗糖 600g 苯甲酸1g 蒸馏水加至1000ml 实施例3 按照与实施例1相同的方法制备本发明药物口服剂，所得口服剂命名为口服液3#，所不同的是原料与辅料的配比如下 紫菜藻胆蛋白粗提液30g 蔗糖 600g 苯甲酸1g 蒸馏水加至1000ml 为了验证本发明药物口服液的有益效果，采用小鼠进行了如下药效试验 1、本发明药物口服液对体重以及胸腺、肝脏、脾脏组织的影响 将昆明系小鼠随机分为5组。其中4组小鼠每天背部皮下注射D-半乳糖(125mg/kg)制造衰老模型，每天1次，连续40d，另1组注射生理盐水作为空白对照组。每3天称体重1次，根据体重调整D-半乳糖用量；从第11d开始，空白对照组小鼠灌胃生理盐水，模型组各鼠分别灌胃蒸馏水及本发明口服液1#、2#及3#，剂量为10ml/kg·d，1次/日，连续30d；最后一次注射D-半乳糖后2h或最后一次灌药后1h，取小鼠胸腺、肝脏、脾脏组织，测定各项指标，结果如下 表1本发明药物口服液对各组的体重以及胸腺、肝脏、脾脏组织的影响 *表示p＜0.05，**表示p＜0.01 结果显示本发明药物口服液对小鼠体质量没有明显作用，与模型对照组比较，各剂量组的肝脏指数、胸腺指数和脾脏指数都有所增加，其中脾脏指数在口服液2#组差异显著(p＜0.05)。胸腺指数在口服液1#组与口服液2#组差异显著(p＜0.05)。同时，口服液2#和口服液3#也能够使已经由D-半乳糖降低了免疫力的小鼠的肝脏指数得到极其显著的增强(p＜0.01)，但只有采用口服液3#时肝指数才能高于正常水平。因此表明，本发明药物口服液可以在一定程度上刺激小鼠免疫器官的发育，有增强机体免疫力的功能。
2.本发明药物口服液对血清中超氧化歧化酶(SOD)活力的影响 同上，将昆明系小鼠随机分为5组。其中4组小鼠每天背部皮下注射D-半乳糖(125mg/kg)制造衰老模型，每天1次，连续40d，另1组注射生理盐水作为空白对照组。每3天称体重1次，根据体重调整D-半乳糖用量；从第11d开始，空白对照组小鼠灌胃生理盐水，模型组各鼠分别灌胃蒸馏水及本发明口服液1#、2#及3#，剂量为10ml/kg·d，1次/日，连续30d；最后一次注射D-半乳糖后2h或最后一次灌药后1h，挖眼取血，滴入事先备好含100U肝素钠的离心管中，离心取血清。按SOD试剂盒说明书操作；对SOD活力进行测试，结果如下 表2本发明药物口服液对SOD活力的影响 *表示p＜0.05，**表示p＜0.01 结果显示本发明药物口服液1#、2#及3#对应的SOD活力均比模型对照组及空白对照组高，其中采用口服液1#和2#时活力提高显著，采用药物口服液3#时提高极其显著。
3.本发明药物口服液对肝组织丙二醛(MDA)含量的影响 同上，将昆明系小鼠随机分为5组。其中4组小鼠每天背部皮下注射D-半乳糖(125mg/kg)制造衰老模型，每天1次，连续40d，另1组注射生理盐水作为空白对照组。每3天称体重1次，根据体重调整D-半乳糖用量；从第11d开始，空白对照组小鼠灌胃生理盐水，模型组各鼠分别灌胃蒸馏水及本发明口服液1#、2#及3#，剂量为10ml/kg·d)，1次/日，连续30d；最后一次注射D-半乳糖后2h或最后一次灌药后1h，取小鼠肝组织，称重。加生理盐水，冰浴匀浆，离心取上清制成10％的肝组织匀浆液。按照MDA试剂盒说明书操作；对MDA含量进行测试，结果如下 表3本发明药物口服液对MDA生成的影响 *表示p＜0.05，**表示p＜0.01 结果显示与模型对照组相比，采用本发明药物口服液2#和3#时，MDA含量都有极其显著的降低。表明本发明药物口服液2#和3#可有效降低小鼠肝脏组织MDA的生成。
4.本发明药物口服液对血清中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性的影响 同上，将昆明系小鼠随机分为5组。其中4组小鼠每天背部皮下注射D-半乳糖(125mg/kg)制造衰老模型，每天1次，连续40d，另1组注射生理盐水作为空白对照组。每3天称体重1次，根据体重调整D-半乳糖用量；从第11d开始，空白对照组小鼠灌胃生理盐水，模型组各鼠分别灌胃蒸馏水及本发明口服液1#、2#及3#，剂量为10ml/kg·d)，1次/日，连续30d；最后一次注射D-半乳糖后2h或最后一次灌药后1h，挖眼取血，滴入事先备好含100U肝素钠的离心管中，离心取血清。按GSH-PX试剂盒说明书操作；对GSH含量进行测试，结果如下 表4本发明药物口服液对GSH-PX活力的影响 *表示p＜0.05，**表示p＜0.01 结果显示本发明药物口服液1#、2#和3#对应的血清中GSH-PX活性均较模型对照组高，特别是采用口服液3#时，酶活性提高极为显著，由此可知，本发明药物口服液3#可提高小鼠血清中GSH酶的活力。
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等同物界定。
权利要求
1.紫菜藻胆蛋白在制备用于抗氧化及提高免疫力的药物中的应用。
2.一种用于抗氧化及提高免疫力的药物，其特征在于所述药物包含紫菜藻胆蛋白和药物学上常用的辅料。
3.根据权利要求2所述的药物，其特征在于所述药物为口服液、粉剂、颗粒剂、胶囊、片剂或丸剂。
4.根据权利要求2所述的药物，其特征在于所述药物为糖浆剂。
全文摘要
本发明一方面涉及紫菜藻胆蛋白在制备用于抗氧化及提高免疫力的药物中的应用，另一方面涉及包含紫菜藻胆蛋白的药物。本发明药物经药效试验表明可增大主要免疫器官；显著提高血清SOD及GSH-PX的活力；明显降低其肝组织MDA的生成；对DPPH的清除率高；对红细胞溶血和肝匀浆脂质过氧化的抑制率高。本发明药物具有抗氧化活性及提高免疫力的功效。
文档编号A61P39/06GK101711860SQ20091019568
公开日2010年5月26日 申请日期2009年9月15日 优先权日2009年9月15日
发明者何培民, 时旭, 蔡春尔, 王源 申请人:上海海洋大学