专利名称：一种蛇莓果实红色素的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种蛇莓果实红色素的制备方法，是一种从天然植物蛇莓果实中提取
的中药有效成分红色素方法，使用固相萃取柱从蛇莓果实中提取分离并纯化的方法，以及 该红色素的用途。
背景技术：
蛇莓(Duchesnea indica Focke)是蔷薇科蛇莓属多年生草本植物，别名蛇泡草、 三匹风、龙吐珠、地莓等。蛇莓是我国一种传统中药材，在民间主要用于清热解毒、散瘀消 肿、感冒发热、咳嗽、咽喉肿痛、白喉、黄疸型肝炎。有研究表明蛇莓具有较强的抗肿瘤活性， 但所报道的均为蛇莓全草的水提、醇提或石油醚粗提物，并未得到单一有效的生物活性成 分。 蛇莓果实含有丰富的糖类、蛋白质、维生素和丰富的色素。该色素为红色，色泽鲜 艳，安全无毒，可作为红色素添加剂应用于食品、药品、化妆品等众多领域，用处广泛。随着 经济的发展，生活水平的提高，人们注重健康安全的意识也在增强，广泛用于食品、药品、化 妆品中的色素，在由人工合成色素逐渐向安全无毒的天然色素转变，天然色素的用量逐年 增加，经济效益随之增长，前景广阔。 目前，对蛇莓果实红色素提取纯化方法研究很少，现有方法也仅限于用有机溶剂 提取得到蛇莓果实红色素粗品，含有较多杂质，对研究该红色素产生各种影响。因此，得到 蛇莓果实红色素纯品，对研究蛇莓果实红色素有着重要的意义。
发明内容
要解决的技术问题 为了避免现有技术的不足之处，本发明提出一种蛇莓果实红色素的制备方法，使
用固相萃取柱从蛇莓果实中提取分离并纯化的方法，以及该红色素的用途。 技术方案 —种蛇莓果实红色素的制备方法，其特征在于步骤如下 步骤1 :将蛇莓果实洗净后加入提取溶剂中，在1 l(TC下浸提12 48小时，重 复提取1 3次；所述的蛇莓果实与提取溶剂的体积比为1 : 1 10 ;所述的提取溶剂为
70% 100%的甲醇或者乙醇，并采用pH调节剂调节pH为1 5 ; 步骤2 :将上述液体过滤，除去残渣，将滤液减压浓縮后，得到浓縮液； 步骤3 :采用C18固相萃取柱将浓縮液进行吸附后，先用0.01%盐酸水溶液冲洗
C18固相萃取柱，再用乙酸乙脂溶液冲洗C18固相萃取柱；所述的0.01%盐酸水溶液或乙酸
乙脂溶液的体积为C18固相萃取柱体积的3 10倍； 步骤4 :再用有机溶剂对C18固相萃取柱进行洗脱，将洗脱下的色素溶液干燥后即 得蛇莓果实红色素；所述的有机溶剂的体积为C18固相萃取柱体积的3 6倍；所述的有机 溶剂为0. 01%盐酸甲醇溶液或者0. 01%盐酸乙醇溶液。
所述的pH调节剂为盐酸或者硫酸。 用上述方法制备的蛇莓果实红色素，其特征在于所述的蛇莓果实红色素在制备 治疗肿瘤药物中的应用。 用上述方法制备的蛇莓果实红色素，其特征在于所述的蛇莓果实红色素在制作 清除自由基或抗衰老药物中的应用。
用上述方法制备的蛇莓果实红色素，其特征在于所述的蛇莓果实红色素在制作 食品、药品或化妆品中的应用。
有益效果 本发明提出的一种蛇莓果实红色素的制备方法，不仅得到了蛇莓果实红色素粗 品，还进一步纯化得到蛇莓果实红色素纯品，去除了大量杂质。排除杂质的干扰，对研究和 分析蛇莓果实红色素的性质、药理及其他作用，具有重要的意义，也为开发利用我国丰富的 蛇莓资源提供了 一条重要的途径。 利用本发明方法制备的蛇莓果实红色素具有抑制肿瘤细胞增殖的作用，可用于癌 症的治疗；此外，本发明提供的蛇莓果实红色素能够清除自由基、抗衰老。因此，本发明提供 的蛇莓果实红色素可用于制备治疗肿瘤、清除自由基、抗衰老的药物。
具体实施例方式
现结合实施例对本发明作进一步描述
实施例1 : 将蛇莓果实洗净，按蛇莓果实与无水乙醇溶液体积比l : 2加入无水乙醇溶液，用 盐酸调节pH为1，置于4t:下浸提12小时。将提取液用滤纸过滤，除去残渣，减压浓縮后用 2g C18固相萃取柱进行吸附，并依次用0. 01%盐酸水溶液10ml、乙酸乙酯溶液10ml冲洗 C18固相萃取柱，再用0. 01X盐酸甲醇溶液对C18固相萃取柱进行洗脱，将洗脱下的色素溶
液干燥，即得蛇莓果实红色素。
实施例2 : 将蛇莓果实洗净，按蛇莓果实与95%乙醇溶液体积比1 : 3加入95%乙醇溶液， 用硫酸调节PH为3，置于4t:下浸提24小时，重复2次。将提取液用滤纸过滤，除去残渣， 减压浓縮后用2g C18固相萃取柱进行吸附，并依次用0. 01%盐酸水溶液10ml、乙酸乙酯溶 液10ml冲洗C18固相萃取柱，再用0.01X盐酸甲醇溶液对C18固相萃取柱进行洗脱，将洗 脱下的色素溶液干燥，即得蛇莓果实红色素。
实施例3 : 将蛇莓果实洗净，按蛇莓果实与甲醇溶液体积比l : 2加入甲醇溶液，用盐酸调节 pH为3，置于4t:下浸提24小时，重复2次。将提取液用滤纸过滤，除去残渣，减压浓縮后 用2g C18固相萃取柱进行吸附，依次用0. 01%盐酸水溶液15ml、乙酸乙酯溶液15ml冲洗 C18固相萃取柱，再用0. 01X盐酸甲醇溶液对C18固相萃取柱进行洗脱，将洗脱下的色素溶
液干燥，即得蛇莓果实红色素。
实施例4 : 将蛇莓果实洗净，按蛇莓果实与70%甲醇溶液体积比1 : 5加入甲醇溶液，用硫酸 调节pH为1，置于4t:下浸提48小时。将提取液用滤纸过滤，除去残渣，减压浓縮后用2g
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C18固相萃取柱进行吸附，依次用0. 01%盐酸水溶液15ml、乙酸乙酯溶液15ml冲洗C18固 相萃取柱，再用0.01X盐酸甲醇溶液对C18固相萃取柱进行洗脱，将洗脱下的色素溶液干 燥，即得蛇莓果实红色素。
实施例5 : 取1克蛇莓果实红色素，加入99克蒸馏水配成1%色素溶液，按照饮料或面制品中 含0. 05%天然色素的重量，在制作过程的最后一道加工工序中加入此天然色素溶液。最终 制成的产品呈现鲜艳的红色。
试验例1 : 蛇莓果实红色素对人骨肉瘤MG-63细胞增殖的抑制作用 用MEM培养基配制蛇莓果实红色素溶液10mg/ml ，并2倍稀释成6个不同浓度。收 集对数生长期的细胞(购于中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库)，以1X105个/ml 细胞浓度接种于96孔板中，每孔加入100ia，在细胞培养箱37t:，5X C02条件下培养过 夜。给药组加入100 iU试样，对照组加100 ii 1 MEM培养基，每组均做4个复孔。作用24 小时后，采用MTT法，在570nm处测量各孔的吸光度值A。抑制率用下式计算抑制率％ = (对照组A-给药组A) /对照组AX 100 % 。试验结果表明蛇莓果实红色素能够显著抑制人 骨肉瘤MG-63细胞的增殖，其IC50为2. 639mg/ml。
试验例2 : 蛇莓果实红色素对DPra自由基的清除 用pH3缓冲溶液配制蛇莓果实红色素0. 6mg/ml，并2倍稀释成6个不同浓度，另 配制浓度为2. 5X 10-5mol/L的DPPH 95%乙醇溶液，低温避光保存。取0. lml试样溶液和 0. 2ml DPra乙醇溶液混合加入96孔板，在室温下避光反应20min，然后经多功能酶标仪在 517nm下测定吸光值A。对照组加0. lml试样溶剂，每个组均做3个复孔。清除率用下式计 算清除率(％)=(对照组A-试样组A)/对照组AX100X。试验结果表明蛇莓果实红色 素能够有效清除DPra自由基，且随着试样浓度的增大，清除能力增强，其IC50为0. 017mg/ ml。
权利要求
一种蛇莓果实红色素的制备方法，其特征在于步骤如下步骤1将蛇莓果实洗净后加入提取溶剂中，在1～10℃下浸提12～48小时，重复提取1～3次；所述的蛇莓果实与提取溶剂的体积比为1∶1～10；所述的提取溶剂为70％～100％的甲醇或者乙醇，并采用pH调节剂调节pH为1～5；步骤2将上述液体过滤，除去残渣，将滤液减压浓缩后，得到浓缩液；步骤3采用C18固相萃取柱将浓缩液进行吸附后，先用0.01％盐酸水溶液冲洗C18固相萃取柱，再用乙酸乙脂溶液冲洗C18固相萃取柱；所述的0.01％盐酸水溶液或乙酸乙脂溶液的体积为C18固相萃取柱体积的3～10倍；步骤4再用有机溶剂对C18固相萃取柱进行洗脱，将洗脱下的色素溶液干燥后即得蛇莓果实红色素；所述的有机溶剂的体积为C18固相萃取柱体积的3～6倍；所述的有机溶剂为0.01％盐酸甲醇溶液或者0.01％盐酸乙醇溶液。
2. 根据权利要求1所述的蛇莓果实红色素的制备方法，其特征在于所述的pH调节剂 为盐酸或者硫酸。
3. 用权利要求1 4所述的任一种方法制备的蛇莓果实红色素，其特征在于所述的蛇莓果实红色素在制备治疗肿瘤药物中的应用。
4. 用权利要求1 4所述的任一种方法制备的蛇莓果实红色素，其特征在于所述的蛇莓果实红色素在制作清除自由基或抗衰老药物中的应用。
5. 用权利要求1 4所述的任一种方法制备的蛇莓果实红色素，其特征在于所述的蛇莓果实红色素在制作食品、药品或化妆品中的应用。
全文摘要
本发明涉及一种蛇莓果实红色素的制备方法，技术特征在于制备方法如下将蛇莓果实洗净后加入提取溶剂，在1～10℃下浸提12～48小时，重复1～3次；蛇莓果实与提取溶剂的体积比为1∶1～10；溶剂pH为1～5；将上述提取液过滤、减压浓缩后用C18固相萃取柱对其进行吸附，并依次用0.01％盐酸的水溶液和乙酸乙酯洗去杂质；采用体积为C18固相萃取柱体积3～6倍的有机溶剂洗脱，将洗脱下的溶液干燥后即得蛇莓果实红色素。本发明不仅提取出蛇莓果实红色素粗品，并进一步分离纯化得到纯品。该红色素能够作为天然色素应用于食品、药品、化妆品中；并能够抑制多种肿瘤细胞增殖，可用于多种癌症的治疗；该红色素还具有清除自由基、抗衰老的活性。
文档编号A61P39/06GK101701107SQ20091021867
公开日2010年5月5日 申请日期2009年10月29日 优先权日2009年10月29日
发明者丁焰, 尚晓娅, 张瑞洁, 李洋, 牛卫宁, 钦传光 申请人:西北工业大学