专利名称：：一种治疗胃溃疡的药物的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种治疗胃溃疡的药物，特别是涉及一种用白櫃木为主要有效成分制备的药物。
背景技术：
：白櫃木又称白花櫃木，其提取物主要成份为没食子酸、鞣质、黄酮类，中药学归属于愈合体内外伤口及收敛止血药类，临床用于外伤出血及体内脏器官出血和水火烫伤。但未见有人用白櫃木或其提取物用于治疗胃溃疡。
发明内容本发明的目的是开发一种用白櫃木为原料制备的药物。本发明发现了白櫃木或白櫃木的提取物具有治疗胃溃疡的作用，可用于制备治疗胃溃疡的药物。所述白櫃木包括白櫃木植物的花、茎、叶、枝。所述白櫃木的提取物，是用药物可接受的溶剂对白櫃木进行浸提所得的粗提物。所述药物可接受的溶剂选自水、有机溶剂或水与有机溶剂的混合物，所述有机溶剂选自醇、醚或酯。提取白櫃木所用的浸提方法，可采用本领域常用的浸提方法，如渗漉法、水蒸汽蒸馏法、回流法、浸渍法、超临界流体提取法、超声波提取法，也可采用柱分离、离子交换等植物有效成分分离的常规方法。在确保不破坏活性物质成分的前提下，力求采用节能减排、生态环保式的清洁生产工艺。优选的提取方法是本发明人探索出的一套生物酶解法提取技术制备白花櫃木提取物(其中含有较高含量的黄酮类物质)的工艺流程。见中国专利200710149826.4。生物酶解法提取技术制备白花櫃木提取物的具体流程为生产线前的原料抽样分析检测一原料验收一深度清洗一组合菌酶解一灭活一动态温浸提取一低温浓縮一瞬间冷冻一高速离心沉降分离一喷雾干燥一包装检测一白花櫃木粗提物。将上述生物破壁法获得的白花櫃木生物破壁产物，采用动态温浸法提取，提取浸膏先用醇提水沉法去除叶绿素等脂溶性杂质，再用水提醇沉法去除糖类等水溶性杂质，对白花櫃木的粗提物初步分离纯化，得到含生物活性物质的白花櫃木化学部位。进行了生物酶解法提取技术制备白花櫃木提取物与常规的水提法制备白花櫃木提取物的比较观察，结果显示生物酶解法有效的破壁效果使白花櫃木提取物中上述三类成分的含量提高，其生化作用较强。本发明用白櫃木粗提物进行了如下动物实验和体外实验，证实1)白櫃木粗提物以200mg/kg剂量连续灌胃给药13天可明显縮小醋酸所致大鼠胃溃疡面积。2)白櫃木粗提物单次小鼠灌胃给药量10g/kg，未见明显毒性反应，属于无毒性物质。3)体外实验结果表明，白櫃木粗提物在500g/mL浓度下未见有促进血小板聚集的作用。因此，白櫃木提取物不仅具有治疗胃溃疡的作用，而且安全性好，不影响动物血小板聚集功能。将上述治疗有效量的白櫃木提取物和药物可接受的任何载体、赋形剂、辅剂结合，可制成治疗胃溃疡的药物。也可以根据不同情况，将白櫃木提取物与其它药物活性成分制成治疗胃溃疡的复方药物。为了保证药物更好的疗效和更优的理化性状，还可在药物中加入制剂常用的辅剂，如防腐剂、助渗剂、增溶剂、表面活性剂、ra调节物质，本领域技术人员可根据不同剂型和使用的需要添加。图1是白櫃木提取物在大鼠胃溃疡药效学实验中，连续给药13天，对胃溃疡大鼠体重的影响。图2是白櫃木提取物在大鼠胃溃疡药效学实验中，连续给药13天，对胃溃疡大鼠溃疡指数的影响。图3是白花櫃木提取物紫外检测色谱图。图4是白花櫃木提取物离子色谱图。具体实施例方式下面通过实施例对白櫃木提取物的提取过程、药效、安全性等实验做进一步详述。但本发明并不限于此粗种方法所获得的粗提物。实际上，用其他方法所得的白櫃木提取物治疗胃溃疡，也在本发明的范围之内。实施例l白櫃木粗提物的提取用生物酶解法提取白花櫃木粗物。具体流程为生产线前的原料抽样分析检测一原料验收一深度清洗一组合菌酶解一灭活一动态温浸提取一低温浓縮一瞬间冷冻一高速离心沉降分离一喷雾干燥一包装检测一白花櫃木粗提物。具体提取方法是，将白花櫃木鲜材料破碎。采用组合菌酶解方法获得白花櫃木生物破壁产物，采用动态温浸法提取(温度85°C，时间120m，ra值6.5±0.2)，温浸提取时间为16小时，得到提取浸膏。先用醇提水沉法去除叶绿素等脂溶性杂质，再用水提醇沉法去除糖类等水溶性杂质，对白花櫃木的粗提物初步分离纯化，得到粗提物，重量为原料重量的5.5-6%。所述组合菌酶解所用菌种是荷兰株芽孢，来源于景德板鸡发酵粉，由江西景德板鸡实业公司生产。原菌种荷兰株芽孢是唯一不产生肠毒素的菌种，经培养，在二次代谢中分离出D429，过程是肉汤斜面培养。石腊封存2个月后再次分离菌体，并组扩大培养，然后再分离，最后经扩群，提取其浮生藻，冻干成活性菌体粉。菌种培养基为肉汤琼脂等。本发明进行了生物酶解法提取技术制备白花櫃木提取物与常规的水提法制备白花櫃木提取物的比较观察，结果显示生物酶解法有效的破壁效果使白花櫃木提取物中上述三类成分的含量提高，其生化作用较强。实施例2白花櫃木化学成分初步分析报告—、样品制备精称粗提粉末1.06mg，lmL50%甲醇溶解，过0.45ym微孔滤膜，即得。二、色谱条件高效液相色谱仪Agilent1200系列高效液相色谱仪(美国AgilentTechnologies公司)，包括二极管阵列检测器，四元梯度泵，在线脱气机，自动进样器。色谱柱YMC-PackProC18(150mmX3.0mmID，5iim);流动相A(甲醇)，B(O.1%甲酸1120)梯度洗脱(0—35min，A:10%—98%;35min-40min，A:98%—98%;);流速0.3mL/min;柱温40。C紫外扫描范围200-400nm;检测波长200-400nm。三、质谱条件1、质谱仪QTRApTM型四极杆-线性离子阱串联质谱仪(A卯liedBiosystems/MDSSCIEX，USA)，离子源采用负离子检测模式的ESI源。2、LC-MS测定条件ScanTypeEnhancedMS(EMS)PolarityNegativeScanModeProfileIonSourceTurbosprayScanRate:4000Da/sLITfilltime80.00msecQ3EntryBarrier8.00VCurtainGas(CUR)25.00CADHighIonsprayVoltage(IS)_4.5kVTEM350.00NebulizerGas(GSl)70SourceGas2(GS2)60ihe:ONDeclusteringPotential(DP)-80VEntrancePotential(EP)-10VCollisionEnergy(Experiment1)-10VCollisionEnergy(Experiment2)-40eV表l白花櫃木主要化学成分<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>图3是紫外检测色谱图，其中红色254nm，蓝色285nm，绿色360nm。图4是离子色谱图，其中黑色m/z191(奎尼酸母核)，蓝色m/z285(山奈酚/木犀草素母核)，红色m/z301(槲皮素母核)，绿色m/z316(杨梅素母核)。实施例3白櫃木粗提物对醋酸所致大鼠慢性胃溃疡的影响1、实验材料受试品白櫃木粗提物，褐色粉末状固体，由江西德宇集团提供①称取10g+蒸馏水混悬后定容至250ml，②取①80ml加蒸馏水至160ml。阳性对照药泮托拉唑钠肠溶片，沈阳东宇药业有限公司，批号080903，取4片(160mg)加蒸馏水溶解后定容至160ml。动物Wistar大鼠，雄性，体重180_220g，中国医学科学院实验动物研究所提供，合格证号，SCXK(京)2008-0004。2、实验方法Wistar大鼠24只，试验前禁食24h。在乙醚麻醉下打开腹腔，暴露全胃，将内径5mm长30mm的塑料管垂直放置于胃体部浆膜面上，向管腔内加入原浓度冰醋酸0.lml，1.5分钟后用棉签蘸出冰醋酸，缝合手术切口。术后正常饮食，第二天将动物随机分为4组，分别为药高组白花櫃木粗提物给药400mg/kg;药低组白花櫃木粗提物给药200mg/kg;阳性对照组泮托拉唑给药10mg/kg;空白对照组，不给药。各组连续灌胃给药13天，上述药物按10ml/kg体积灌胃给药，空白对照组给予同体积(10ml/kg)蒸馏水。末次给药后30min，解剖取出胃，用10%甲醛固定10min后沿胃大弯剖开胃，平展在玻璃上，测量溃疡部位最长直径，和最短直径，以最长直径和最短直径平均值作为溃疡指数，3、实验结果体重、溃疡指数结果见表2和图1、图2。数据分析方法为数据以平均值±标准差表示，数据分析采取组间t检验。表2白花櫃木粗提物连续给药13天对醋酸所致大鼠胃溃疡指数的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>注溃疡指数为溃疡面的最长径与最短径的均值，各组同空白组比较。4、实验结论白櫃木粗提物以200mg/kg剂量连续灌胃给药13天可明显縮小醋酸所致大鼠胃溃疡面积，但作用强度弱于10mg/kg泮托拉唑。实施例4白櫃木粗提物对大鼠血小板聚集功能的影响体外研究—、材料1、受试品白櫃木粗提物，褐色粉末状固体，由江西德宇集团提供。2、试剂戊巴比妥钠，购自鼎国生物技术有限公司，规格258，批号76110203;枸橼酸钠，北京化工厂产品，批号20000809，蒸馏水配制成3.8%的溶液；牛凝血酶，规格1000U，Sigma公司产品进口分装产品，固体粉末状，用生理盐水配制100U/ml，分装后_20°C保存；医用生理盐水，购自石家庄四药有限公司产品，批号080904110。3、仪器飞鸽牌TDL-40B型低速台式大容量离心机，北京科学器材有限公司出品；LBY-NJ4型血小板聚集仪，北京利普生公司出品；秒表等。二、方法1、麻醉取雄性SD大鼠，280-300g，1.5%戊巴比妥钠麻醉(剂量为0.4ml/100g)。2、取血腹主动脉取血，3.8%枸橼酸钠按体积比9:l抗凝。2、血小板的制备全血1200r/min离心10min后取上层米黄色混悬液，为富血小板血浆(PRP)，剩余血浆3000r/min离心10min后取上层清夜，为贫血小板血浆(PPP)。用PPP将PRP中血小板数量调整至仪器显示吸光度值300-400之间。3、血小板最大聚集率的测定(1)白櫃木粗提物对血小板的直接促聚作用在比色杯中加入300iUPPP调整仪器零点，另取比色杯依次加入搅拌子和300ii1PRP，预温5min，分别加入受试品(体系终浓度为500iig/mL)、凝血酶(体系终浓度为6.4U/mL)或生理盐水20y1后，立即记录5min内血小板最大聚集率。(2)白櫃木粗提物与凝血酶联合应用对血小板促聚作用在比色杯中加入300ii1PPP调整仪器零点，另取比色杯依次加入搅拌子、300iUPRP、以及生理盐水或受试品15iil(体系终浓度为500iig/mL)，温育5min后加入10y1凝血酶(体系终浓度为3.2U/ml)，记录5min内血小板最大聚集率。4、数据分析数据以平均值±标准差表示，数据分析采取组间t检验。三、结果1、受试品对血小板的直接促聚作用研究表3白櫃木粗提物单用对大鼠体外血小板聚集的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>*与凝血酶组比较，P<0.001。与生理盐水组比较，白櫃木粗提物组对血小板最大聚集率无统计学差异。此外，白櫃木与生理盐水组的血小板最大聚集率均显著低于凝血酶组。说明500g/mL白櫃木和生理盐水都不能直接引起显著的血小板聚集，不具有促血小板聚集的作用。2、受试品与凝血酶对血小板联合促聚作用研究表4白櫃木粗提物与凝血酶联合应用对大鼠体外血小板聚集的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>与生理盐水组比较，白櫃木粗提物组与凝血酶联合应用用对血小板的最大聚集率无统计学差异。说明500g/mL白櫃木粗提物与凝血酶联合作用不能显著促进血小板聚集。四、结论本实验证明白櫃木粗提物在1，10，100iig/mL浓度下均具有显著收縮血管作用。本实验研究了白櫃木粗提物对血小板聚集的影响，实验结果表明，白櫃木粗提物在500g/mL浓度下未见有促进血小板聚集的作用。据此推测，白櫃木收敛止血的功效可能不通过促进血小板聚集发挥作用。实施例5白櫃木粗提物小鼠单次给药急性毒性初步试验目的此次试验采用最大给药剂量法，通过小鼠单次灌胃白櫃木，观察小鼠出现的中毒症状、中毒程度、性质、恢复情况及死亡等。材料与方法受试品白櫃木粗提物，棕色粉末，易溶于水；由江西德宇集团提供。临用前用双蒸水配制成所需浓度的溶液备用。动物昆明种小鼠，体重1820g，雌雄各半，购自中国医学科学院实验动物研究所，许可证号SCXK(京)-2007-0001。方法根据最大给药量法，使用40只小鼠，雌雄各半，空白对照组与给药组各20只。给药组以最大给药体积(0.4ml/10g体重)给予合适的给药浓度(浓度为0.25g/ml)，给药剂量为10g/kg，对照组给予同体积的蒸馏水。详细记录给药当日动物表现，对死亡动物剖检，存活药后观察14天，第15天进行剖检。结果白櫃木给药后无小鼠死亡；给药后未见小鼠有异常表现，小鼠均活动正常、毛色光滑、摄食量正常、粪便正常、体重增加、肉眼尸检未见异常。给药后每日记录小鼠体重，结果见表5。表5白櫃木单次给药毒性试验动物体重记录(g)(n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>结论在本次试验条件下，单次灌胃给药白櫃木的LD50大于10g/kg，未见死亡及异常变化，属于无毒性物质。权利要求一种治疗胃溃疡的药物，其活性成分是白檵木或白檵木的提取物。2.用白櫃木为原料制备治疗胃溃疡的药物的用途。3.权利要求2所述的用途，所述白櫃木包括白櫃木的花、茎、叶、枝。4.权利要求2所述的用途，所述原料是采用生物酶解方法制备的白櫃木提取物。全文摘要本发明涉及一种用白檵木为主要有效成分制备的药物。本发明用白檵木粗提物进行了动物实验和体外实验，证实白檵木粗提物可明显缩小大鼠胃溃疡面积，而且安全性好，不影响动物血小板聚集功能。文档编号A61P1/04GK101708201SQ200910242020公开日2010年5月19日申请日期2009年12月2日优先权日2009年12月2日发明者刘浩元,曲淑娟,李晓滨申请人:江西德宇集团