专利名称：利用颗粒体蛋白前体(pgrn)治疗神经变性疾病的制作方法
技术领域：
本发明涉及用于治疗神经变性疾病的方法和组合物。更具体地，本发明涉及使用 颗粒体蛋白前体(progranulin)治疗神经变性疾病的方法，和使用修饰颗粒体蛋白前体表 达的效应物或效应物组合治疗神经变性疾病的方法。背景和概述颗粒体蛋白前体(PGRN)是一种参与多种过程的调节的生长因子样蛋白，所述过 程包括发育、伤口愈合、血管发生、神经元细胞的生长和维持以及炎症。已经将PGRN表达的 增加与肿瘤促进相关联。另外，已经在多种神经变性疾病中证实改变的PGRN表达，包括克 雅氏病、运动神经元病和阿尔茨海默氏病。例如，最近对神经变性疾病的遗传病因学的研究 已经证实，PGRN基因中可遗传的突变可能导致由减少的神经元存活引起的成年发病的神经 变性疾病。选择性的神经元细胞死亡是多种神经变性病症共同标志。已经将散发形式的阿尔 茨海默氏病、帕金森病和Lou Gehrig氏病(肌萎缩侧索硬化(ALS))与通过兴奋性中毒、氧 化应激、电子传递链部分的抑制、细胞和线粒体膜破裂、细胞器的改变、染色质的改变、一般 的和特异性的遗传毒性作用、和细胞表面蛋白受体和效应物的抑制和/或活动过度造成神 经元细胞死亡的环境因素相关联。实验和临床文献支持兴奋性毒素在有些形式的神经变性 (特别地，ALS和阿尔茨海默氏病)中的潜在作用。具体地，已经将谷氨酸盐处理/运输中 的异常与ALS相关联，软骨藻酸是一种红藻氨酸盐受体(即离子型(ionotrophic)谷氨酸 受体)激动剂，已经证实它是有些形式的记忆丧失(很象在阿尔茨海默氏病中报道的那些) 的成因。也已经将氧化应激与相同的疾病状态相关联。存在于环境中的毒素可能在多种神经变性疾病的病理学中起作用。例如，已经将 β-谷甾醇β-D-葡糖苷(BSSG)鉴定为存在于苏铁棕榈(Cycas circinalis)的种子中的 毒素，所述种子在历史上是关岛查摩洛人饮食的原料。已经将苏铁种子消费与ALS-帕金 森综合征痴呆复合病(ALS-PDC)相关联，后者是关岛特有的神经障碍。其中成年雄性小鼠 消费洗过的苏铁种子粉作为它们饮食的一部分的体内研究已经证实，处理的动物具有深远 的且渐进性运动、认知和嗅觉行为缺陷，且在各个神经子集中的每一个中伴有神经元损失。 这些结果的出现，反映了 ALS-PDC中的行为和病理缺陷。使用分离的苏铁级分的体外实验 已经将可能的神经毒素鉴定为在洗过的苏铁粉中含有的变型留醇葡糖苷分子，特别是BSSG 和有关的留醇葡糖苷分子。目前，ALS、阿尔茨海默氏病(AD)或帕金森病没有治愈方法。现有的治疗通常包含 医师的减慢症状进展和使患者更舒适的努力。尽管有许多药物处于开发中，且有限的数目 经FDA批准用于治疗(利鲁唑用于ALS ；左旋多巴用于帕金森病；认知增强剂例如安理申用 于AD)，这些治疗仅仅掩盖神经疾病的进展，可能起很少地延长有些患者的生命的作用。因 而，迫切需要用于治疗神经变性疾病的方法和组合物。在一个例证性的实施方案中，提供了治疗神经变性疾病患者的方法，该方法包含 下述步骤给患者施用包含颗粒体蛋白前体多肽的组合物，并减轻患者中神经变性疾病的症状。在上述的实施方案中，给患者施用的颗粒体蛋白前体多肽的量可以在约lng/kg 患者体重至约lmg/kg患者体重的范围内，给患者施用的颗粒体蛋白前体多肽的量可以在 约lng/kg患者体重至约500ng/kg患者体重的范围内，给患者施用的颗粒体蛋白前体多肽 的量可以在约lng/kg患者体重至约lOOng/kg患者体重的范围内，包含颗粒体蛋白前体多 肽的组合物可以适合肠胃外给药，肠胃外给药途径可以选自真皮内地、皮下地、肌肉内地、 腹膜内地、静脉内地、心室内地、鞘内地、大脑内地和脊索内地(intracordalIy)，神经变性 疾病状态可以由环境对患者的损伤介导，神经变性疾病状态可以由兴奋性毒素介导，所述 兴奋性毒素可以是甾醇糖苷，所述甾醇糖苷可以选自β _谷甾醇-D-葡糖苷和胆固醇 葡糖苷或其类似物或衍生物，所述神经变性疾病可以选自帕金森病、阿尔茨海默氏病和肌 萎缩侧索硬化，所述神经变性疾病可以是帕金森病，所述神经变性疾病可以是阿尔茨海默 氏病，所述神经变性疾病可以是肌萎缩侧索硬化，且所述颗粒体蛋白前体多肽可以与SEQ ID NO 2具有至少95%同源性。在另一个例证性的实施方案中，提供了药物组合物，其包含治疗有效量的颗粒体 蛋白前体多肽和用于其的药学上可接受的载体，其中所述治疗有效量包含减轻或预防患者 中神经变性疾病的症状的量。在上述的实施方案中，所述组合物可以适合肠胃外给药，肠胃外给药途径可以选 自真皮内地、皮下地、肌肉内地、腹膜内地、静脉内地、心室内地、鞘内地、大脑内地和脊索 内地，神经变性疾病状态可以由环境对患者的损伤介导，神经变性疾病状态可以由兴奋性 毒素介导，所述兴奋性毒素可以是留醇糖苷，所述留醇糖苷可以选自β-谷留醇-β-D-葡 糖苷和胆固醇葡糖苷或其类似物或衍生物，所述神经变性疾病可以选自帕金森病、阿尔茨 海默氏病和肌萎缩侧索硬化，所述神经变性疾病可以是帕金森病，所述神经变性疾病可以 是阿尔茨海默氏病，所述神经变性疾病可以是肌萎缩侧索硬化，所述药物组合物可以是肠 胃外剂型，该剂型可以适合选自下述途径的肠胃外给药真皮内的、皮下的、肌肉内的、腹膜 内的、静脉内的、心室内的、鞘内的、大脑内的和脊索内的，且所述颗粒体蛋白前体多肽可以 与SEQ IDNO 2具有至少95%同源性。在另一个例证性的实施方案中，提供了用于减少患者中神经元细胞死亡的方法， 该方法包含下述步骤给患者施用治疗有效量的颗粒体蛋白前体多肽，其中所述肽的量可 以有效地增加神经变性疾病患者中的神经元细胞存活，并减少患者中神经元细胞死亡。在上述的实施方案中，给患者施用的颗粒体蛋白前体多肽的量可以在约lng/kg 患者体重至约lmg/kg患者体重的范围内，给患者施用的颗粒体蛋白前体多肽的量可以在 约lng/kg患者体重至约500ng/kg患者体重的范围内，给患者施用的颗粒体蛋白前体多肽 的量可以在约lng/kg患者体重至约lOOng/kg患者体重的范围内，包含颗粒体蛋白前体多 肽的组合物可以适合肠胃外给药，肠胃外给药途径可以选自真皮内地、皮下地、肌肉内地、 腹膜内地、静脉内地、心室内地、鞘内地、大脑内地和脊索内地，神经变性疾病状态可以由环 境对患者的损伤介导，神经变性疾病状态可以由兴奋性毒素介导，所述兴奋性毒素可以是 甾醇糖苷，所述留醇糖苷可以选自β _谷留醇-D-葡糖苷和胆固醇葡糖苷或其类似物 或衍生物，所述神经变性疾病可以选自帕金森病、阿尔茨海默氏病和肌萎缩侧索硬化，所 述神经变性疾病可以是帕金森病，所述神经变性疾病可以是阿尔茨海默氏病，所述神经变性疾病可以是肌萎缩侧索硬化，且所述颗粒体蛋白前体多肽可以是这样的多肽，其中所述 多肽与SEQ ID NO :2具有至少95%同源性。在另一个例证性的实施方案中，提供了用于治疗神经变性疾病患者的方法，该方 法包含下述步骤给患者施用包含修饰颗粒体蛋白前体表达的效应物的组合物，并减轻患 者中神经变性疾病的症状。在上述的实施方案中，所述包含效应物的组合物可以适合肠胃外给药，肠胃外给 药途径可以选自真皮内地、皮下地、肌肉内地、腹膜内地、静脉内地、心室内地、鞘内地、大 脑内地和脊索内地，神经变性疾病可以由环境对患者的损伤介导，神经变性疾病状态可以 由兴奋性毒素介导，所述兴奋性毒素可以是留醇糖苷，所述留醇糖苷可以选自β_谷甾 醇-β -D-葡糖苷和胆固醇葡糖苷或其类似物或衍生物，所述神经变性疾病可以选自帕金 森病、阿尔茨海默氏病和肌萎缩侧索硬化，所述神经变性疾病可以是帕金森病，所述神经变 性疾病可以是阿尔茨海默氏病，所述神经变性疾病可以是肌萎缩侧索硬化，该方法可以另 外包含增加神经元中颗粒体蛋白前体的表达的步骤，该方法可以另外包含减少非神经元细 胞中颗粒体蛋白前体的表达的步骤，且所述效应物可以是载体，其包含与SEQ ID Ν0:1具有 至少95%同源性的核酸。在另一个例证性的实施方案中，提供了药物组合物，其包含治疗有效量的修饰颗 粒体蛋白前体表达的效应物和用于其的药学上可接受的载体，其中所述治疗有效量包含能 减轻或预防患者中神经变性疾病的症状的量。在上述的实施方案中，所述治疗有效量可以包含能增加神经元中颗粒体蛋白前体 表达的量，所述治疗有效量可以包含能减少非神经元细胞中颗粒体蛋白前体表达的量，所 述药物组合物可以是肠胃外剂型，该剂型可以适合选自下述途径的肠胃外给药真皮内的、 皮下的、肌肉内的、腹膜内的、静脉内的、心室内的、鞘内的、大脑内的和脊索内的，神经变性 疾病状态可以由环境对患者的损伤介导，神经变性疾病状态可以由兴奋性毒素介导，所述 兴奋性毒素可以是留醇糖苷，所述留醇糖苷可以选自β _谷留醇-D-葡糖苷和胆固醇 葡糖苷或其类似物或衍生物，所述神经变性疾病可以选自帕金森病、阿尔茨海默氏病和肌 萎缩侧索硬化，所述神经变性疾病可以是帕金森病，所述神经变性疾病可以是阿尔茨海默 氏病，所述神经变性疾病可以是肌萎缩侧索硬化，所述药物组合物可以是肠胃外剂型，该剂 型可以适合选自下述途径的肠胃外给药真皮内的、皮下的、肌肉内的、腹膜内的、静脉内 的、心室内的、鞘内的、大脑内的和脊索内的，且所述效应物可以是载体，其包含与SEQ ID NO 1具有至少95%同源性的核酸。在另一个例证性的实施方案中，提供了用于减少患者中神经元细胞死亡的方法， 该方法包含下述步骤给患者施用治疗有效量的修饰颗粒体蛋白前体表达的效应物，其中 所述效应物的量可以有效地增加由环境对患者的损伤介导的神经变性疾病的患者中的神 经元细胞存活，并减少患者中神经元细胞死亡。在上述的实施方案中，所述包含效应物的组合物可以适合肠胃外给药，肠胃外给 药途径可以选自真皮内地、皮下地、肌肉内地、腹膜内地、静脉内地、心室内的、鞘内地、大 脑内地和脊索内地，神经变性疾病状态可以由环境对患者的损伤介导，神经变性疾病状态 可以由兴奋性毒素介导，所述兴奋性毒素可以是留醇糖苷，所述留醇糖苷可以选自β_谷 甾醇-β-D-葡糖苷和胆固醇葡糖苷或其类似物或衍生物，所述神经变性疾病可以选自帕金森病、阿尔茨海默氏病和肌萎缩侧索硬化，所述神经变性疾病可以是帕金森病，所述神经 变性疾病可以是阿尔茨海默氏病，所述神经变性疾病可以是肌萎缩侧索硬化，且所述效应 物可以是载体，其包含与SEQ ID NO :1具有至少95%同源性的核酸。附图简述
图1显示的图指示合成的留基葡糖苷(BSSG)暴露后小鼠腿伸反射的渐进性减退。图2显示的图指示合成的留基葡糖苷(BSSG)暴露后小鼠开放场地运动活动的渐 进性减少。图3A-D显示的图指示暴露于合成的留基葡糖苷(BSSG) 10周后小鼠运动神经元的 渐进性丧失。BSSG暴露后，使小鼠存活1个月(图A-C)或5个月(图D)，饲喂正常食物， 然后处死。图A显示了在Nissl染色和胆碱乙酰基转移酶免疫组织化学(ChAT)后，腰索中 运动神经元的定量。图B显示了免疫组织化学(腹角)检测后，腰脊髓中激活的胱天蛋白 酶-3的定量。图C显示了针对CTIP2(在皮质脊髓运动神经元中高度表达)进行免疫组织 化学检测后，运动皮质中的神经元定量。图D显示了 Nissl染色后腰索中运动神经元的定 量。图4显示了用于检测正常小鼠脑干中颗粒体蛋白前体表达的原位杂交(ISH)(起 始放大率10X)。图A 使用反义的、颗粒体蛋白前体特异性的核糖核酸探针(riboprobe)的 ISH0图B 使用有义的核糖核酸探针的ISH。图5显示了在高倍放大(起始放大率40X)下用于检测正常小鼠脑干中颗粒体蛋 白前体表达的原位杂交(ISH)。图A 使用反义的、颗粒体蛋白前体特异性的核糖核酸探针 的ISH。图B 使用有义的核糖核酸探针的ISH。图6显示了用于检测正常小鼠脊髓前角细胞中颗粒体蛋白前体表达的原位杂交 (ISH)(起始放大率40X)。图A 使用反义的、颗粒体蛋白前体特异性的核糖核酸探针的ISH。 图B 使用有义的核糖核酸探针的ISH。图7显示的原位杂交(ISH)指示洗过的苏铁粉饲喂的小鼠的运动皮质中减少的颗 粒体蛋白前体表达(起始放大率10X)。图A 在正常食物饲喂的小鼠的运动皮质上使用反 义的、颗粒体蛋白前体特异性的核糖核酸探针的ISH。图B 在苏铁粉饲喂的小鼠的运动皮 质上使用反义的、颗粒体蛋白前体特异性的核糖核酸探针的ISH。图C 在苏铁粉饲喂的小 鼠的运动皮质上使用有义的核糖核酸探针的ISH。图8显示的原位杂交(ISH)指示洗过的苏铁粉饲喂的小鼠的运动皮质中减少的颗 粒体蛋白前体表达(起始放大率40X)。图A 在正常食物饲喂的小鼠的运动皮质上使用反 义的、颗粒体蛋白前体特异性的核糖核酸探针的ISH。图B 在苏铁粉饲喂的小鼠的运动皮 质上使用反义的、颗粒体蛋白前体特异性的核糖核酸探针的ISH。图C 在苏铁粉饲喂的小 鼠的运动皮质上使用有义的核糖核酸探针的ISH。图9显示的原位杂交(ISH)表明，暴露于合成的BSSG会导致小鼠颈脊髓的前角细 胞中减少的颗粒体蛋白前体表达。图A 在正常食物饲喂的小鼠的颈脊髓上使用反义的、颗 粒体蛋白前体特异性的核糖核酸探针的ISH。图B 在饲喂1000 μ g/天BSSG的小鼠的颈脊 髓上使用反义的、颗粒体蛋白前体特异性的核糖核酸探针的ISH。图C 在正常食物饲喂的 小鼠的颈脊髓上使用有义的核糖核酸探针的ISH(起始放大率10X)。图10显示的原位杂交(ISH)表明，增加小鼠的BSSG暴露会导致更明显的神经病理学和颈脊髓前角细胞中颗粒体蛋白前体表达的丧失。图A、B和C分别显示在饲喂10、100 和1000 μ g/天BSSG的小鼠的颈脊髓上使用反义的、颗粒体蛋白前体特异性的核糖核酸探 针的13!1(起始放大率40幻。图11表明，斑马鱼中颗粒体蛋白前体表达的敲低(knockdown)导致颅面畸形发 生、心包水肿和内脏肠膨胀的形态学现象。图12显示了异源神经元体外表达的颗粒体蛋白前体。初始神经元培养物源自E13 小鼠胚胎脊髓。细胞核的免疫定位(DAPI ；图A)，使用SMI32(图B)和小鼠颗粒体蛋白前体 (图C)的未磷酸化神经丝。基于细胞体大小和SMI32免疫反应性，鉴别表达颗粒体蛋白前 体的初始运动神经元(图B-D)。除了细胞核以外，在运动神经元中到处发现颗粒体蛋白前 体。(图D)来自所有3个荧光团的合并通道。标尺条代表20um。图13显示了小鼠运动神经元体内表达的颗粒体蛋白前体。检查了 8周龄⑶-1小 鼠的腰脊髓内的运动神经元。腰脊髓的背角部分的DAPI免疫荧光(图A)，使用SMI32抗体 (图B)和颗粒体蛋白前体(图C)的未磷酸化神经丝。(图D)来自所有3个荧光团的合并 通道。标尺条代表30um。图14显示了导致无血清培养基中细胞存活的颗粒体蛋白前体过表达。在无 血清的RPMI培养基中培养未转染的NSC34细胞(第一个条)、仅稳定载体的转染子 (NSC34-pcDNA ；中间的条)和稳定的颗粒体蛋白前体过表达细胞(NSC34-pcDNA-Pgrn ；最后 的条)(图A)。每隔3天，通过相差显微镜术测定每个视野(IOx放大率)的平均细胞数，持续 15天。颗粒体蛋白前体过表达细胞表现出与对照相比增加的存活(星号表示P < 0.005)。 (图B)在无血清培养基中培养6天后基于12小时BrdU掺合的细胞增殖试验。血清剥夺期 间颗粒体蛋白前体过表达(第二个条)不会显著增加细胞增殖速率(P > 0. 1)。(图C)在 无血清培养基中培养6天后基于TUNEL标记方法的细胞凋亡试验。血清剥夺期间颗粒体蛋 白前体过表达(第二个条)保护对抗细胞凋亡(星号表示P < 0. 0001，双尾Student’ s T 检验)。图15表明，颗粒体蛋白前体是长期低氧期间细胞存活的关键营养因子。用仅载体 (pcDNA ；第一个条)或人颗粒体蛋白前体(pcDNA-Pgrn ；第二个条)稳定转染NSC34细胞系。 在由氧(80%减少的氧张力)组成的气氛中，在无血清培养基或5%血清中培养细胞72 小时，使用血细胞计数器计数剩余的细胞(星号表示P < 0. 0001)。图16表明，颗粒体蛋白前体过表达导致NSC34细胞中的动态神经元领航 (pathfinding)和细胞存活。(图A-C)用pcDNA3. 1/Pgrn稳定转染的NSC34细胞的相差显 微镜术。(图A和B)在无血清培养基中维持培养物20天后，单个3小时阶段的时间推移相 差显微照片，显示了主动伸展(箭)、收缩(箭头)和神经炎过程的全体重排(星号)。(图 C)在无血清培养基中57天后，持续的存活和神经样形态学的维持。图17表明，颗粒体蛋白前体过表达导致NSC-34细胞中神经元形态学的发育。细 胞核[DAPI](图A，EjP I)、F-肌动蛋白[鬼笔环肽染色](图B，F，和J)、颗粒体蛋白前 体-IHC(图C，GJPH)和合并的[细胞核/肌动蛋白/颗粒体蛋白前体](图D，H，和L) 的免疫荧光图像。描绘了未转染的对照NSC-34细胞(图A-D)、假转染的NSC-34细胞(图 E-H)和颗粒体蛋白前体过表达细胞(图I-H)。注意到颗粒体蛋白前体过表达细胞中具有 伸展过程的更广泛的细胞质(图J-L)。起始放大率43x。
图18显示了急性神经元应激后的颗粒体蛋白前体表达。在轴突切断术后第3天， 在运动神经元内观察到丰富的颗粒体蛋白前体免疫反应性，非神经元染色的证据非常少 (图A)。免疫染色的图像是有斑点的，在胞质中扩散性地分布(图C)。相反，在第7天，现 在在小神经胶质细胞中强烈观察到免疫染色(图B)，同时运动神经元缺乏颗粒体蛋白前体 染色(图D)。图19显示了 PC-12细胞中颗粒体蛋白前体抗神经毒素MPTP的保护作用。图20显示了在老龄Tg2576小鼠大脑内病毒载体递送GFP或PGRN后淀粉状蛋白 负荷的免疫组织化学分析。图A显示的代表性显微照片描绘了慢病毒的-GFP或慢病毒 的-PGRN治疗后穿过针对β-淀粉状蛋白(AB)免疫染色的海马的冠状物切片。图B显示 了 Αβ负荷变化的定量评价。在接受慢病毒的-PGRN动物中，在同侧海马中观察到淀粉状 蛋白负荷的显著下降(F2,47 = 5. 86621,ρ < 0. 0095，治疗主作用)。每个条代表被淀粉状蛋 白免疫标记占据的平均(±S.E.M.)(n = 8)面积(ym2)，在穿过海马的3个切片中测量广 显著不同于慢病毒的-GFP对照，ρ < 0. 001) (+显著不同于对侧半球，ρ < 0. 05)。图21显示了大脑内病毒载体递送慢病毒(LV) -GFP或慢病毒-PGRN后MPTP对TH+ 细胞计数的效应的免疫组织化学分析。图A显示了代表性荧光显微照片，其描绘了 MPTP中 毒后穿过针对TH免疫染色的SNc的冠状物切片。图B显示了 SNc中TH+细胞计数的定量 评价。在接受LV-GFP的动物中，MPTP暴露导致TH+细胞计数的显著减少(Student t检验， P = O. 0041)，同时在接受LV-PGRN的那些动物中没有观察到细胞的显著丧失(ρ = 0. 64)。 每个条代表在穿过SNc的3个切片中测量的TH+细胞的平均(士 S. Ε. Μ.) (η = 4-6)数目广 显著不同于载体治疗的对照组，P < 0. 001)。图22显示了用grn F和grn D温育的永生的运动神经元细胞系(NSC-34)，增殖/ 存活(grn F)或无影响(grn D)。图23显示了大脑内递送表达GFP或PGRN的慢病毒后Tg2576的存活率。图24显示了 PGRN慢病毒治疗的小鼠中的脊髓运动神经元计数和胆碱乙酰转移酶 活性。图(A)显示了通过Nissl染色评判的运动神经元计数。图B显示了与所有其它治疗 组相比，盐水治疗的BSSG暴露的小鼠的前角细胞中胆碱乙酰转移酶(ChAT)活性的免疫组 织化学评判((B)的右上角图)。(B)中的图像是代表性的，取自左和右前角(起始放大率 IOOx)。图C显示了对照(盐水治疗的)和BSSG暴露的小鼠中ChAT阳性的运动神经元。图25显示了为正常的NSC-34细胞和过表达人颗粒体蛋白前体的稳定转染子 (NSC-34 hPGRN)绘制的β-谷甾醇葡糖苷(ng/ml)相对于MTT吸光度的关系图。以8，000 细胞/孔涂布细胞，在有不同浓度的BSSG存在下，在DMEM 5% FCS中维持72小时。作为 细胞增殖/存活的阴性对照，在没有BSSG或血清的情况下培养一系列孔。画出了标准误差 棒，P 值< 0. 05 C)或< 0. 001 O。图26显示了相对于吸光度绘制的hPRRN(100ng/ml)。加入培养的NSC-34细胞中 的人重组颗粒体蛋白前体(PGRN)蛋白导致血清饥饿后细胞存活增加至2. 5倍(第4天)。 误差棒代表平均值的标准偏差。在570nM测量吸光度。图27显示了在27hpf用znpl mAb免疫标记的全固定的胚胎的侧视图(在左侧前 面；背朝上)(图A-F)。图A，B，C:给胚胎注射颗粒体蛋白前体M0。图D，E 给胚胎注射颗 粒体蛋白前体-A-MO+lOOpg颗粒体蛋白前体-A mRNA。图F:野生型。截短的或完全丧失运动轴突神经(图A和B ；黑色箭头，和图C)、分枝的运动轴突/神经(图B ；黑色箭头)、运动 轴突的部分挽救(图D ；白色箭头)和分枝的轴突/神经的增加(图E ；白色箭头)发生。图28显示了在注射以下的胚胎中在27hpf用znpl mAb标记的全固定的胚胎的侧 视图(在左侧前面；背朝上)(图A-F) :smnl MO(图A和B)，smnl M0+100pg颗粒体蛋白前 体-A mRNA共注射(图C)，IOOpg颗粒体蛋白前体-A mRNA (图D和E)或野生型(图F)。截 短的运动轴突神经(图A ；黑色箭头)、分枝的运动轴突/神经(图B ；黑色箭头)、运动轴突 /神经的挽救(图C ；白色箭头)和分枝的轴突/神经的增加(图C ；白色箭头)、分枝的轴 突/神经(图D，E ；白色箭头)和正常的运动轴突(图F;双箭头)发生。标尺条=50 μ m。发明详述提供了用于治疗由环境对患者的损伤介导的神经变性疾病的方法和组合物。在一 个例证性的实施方案中，通过给患者施用包含颗粒体蛋白前体的组合物，可以治疗神经变 性疾病患者，其中用包含颗粒体蛋白前体的组合物治疗患者会减轻患者中神经学疾病的症 状。在上述的例证性的实施方案中，神经变性疾病可以由环境损伤介导。在另一个实施方案中，提供了用于减少患者中神经元细胞死亡的方法。该方法包 含下述步骤给神经变性疾病患者施用治疗有效量的颗粒体蛋白前体，其中颗粒体蛋白前 体的量可以有效地增加患者中的神经元细胞存活或增殖。在上述的例证性的实施方案中，神经变性疾病可以由环境损伤介导。本文使用的“颗粒体蛋白前体”或“颗粒体蛋白前体多肽”是指选自下述的多肽: SEQ ID NO. 2的多肽，与SEQ ID NO. 2具有约95 %同源性、约96 %、约97 %、约98 %、约 99%同源性的多肽；SEQ ID N0. 12的多肽，与SEQ ID N0. 12具有约95%同源性、约96%、 约97%、约98%、约99%同源性的多肽；SEQ ID N0. 3的多肽，与SEQ ID N0. 3具有约95% 同源性、约96%、约97%、约98%、约99%同源性的多肽；SEQ ID N0. 4的多肽，与SEQ ID N0. 4具有约95 %同源性、约96 %、约97 %、约98 %、约99 %同源性的多肽；SEQ ID N0. 5的 多肽，与SEQ ID N0. 5具有约95%同源性、约96%、约97%、约98%、约99%同源性的多肽； SEQ ID N0. 6的多肽，与SEQ ID N0. 6具有约95%同源性、约96%、约97%、约98%、约99% 同源性的多肽；SEQID N0. 7的多肽，与SEQ ID N0. 7具有约95%同源性、约96%、约97%、 约98%、约99%同源性的多肽；SEQ ID N0. 8的多肽，与SEQID N0. 8具有约95%同源性、约 96%、约97%、约98%、约99%同源性的多肽；或SEQ ID N0. 9的多肽，与SEQ ID N0. 9具 有约95 %同源性、约96 %、约97 %、约98 %、约99 %同源性的多肽。人颗粒体蛋白前体SEQ ID NO 2MWTLVSWVALTAGLVAGTRCPDGQFCPVACCLDPGGASYSCCRPLLDKWPTTLSRHLGGPCQVDAHCSAGHSCIFTVSGTSSCCPFPEAVACGDGHHCCPRGFHCSADGRSCFQRSGNNSVGAIQCPDSQFECPDFSTCCVMVDGSWGCCPMPQASCCEDRVHCCPHGAFCDLVHTRCITPTGTHPLAKKLPAQRTNRAVALSSSVMCPDARSRCPDGSTCCELPSGKYGCCPMPNATCCSDHLHCCPQDTVCDLIQSKCLSKENATTDLLTKLPAHTV⑶VKCDMEVSCPDGYTCCRLQSGAWGCCPFTQAVCCEDHIHCCPAGFTCDTQKGTCEQGPHQVPWMEKAPAHLSLPDPQALKRDVPCDNVSSCPSSDTCCQLTSGEWGCCPIPEAVCCSDHQHCCPQGYTCVAEGQCQRGSEIVAGLEKMPARRASLSHPRDIGCDQHTSC
PVGQTCCPSLGGSWACCQLPHAVCCEDRQHCCPAGYTCNVKARSCEKEVVSAQPATFLARSPHVGVKDVECGEGHFCHDNQTCCRDNRQGWACCPYRQGVCCADRRHCCPAGFRCAARGTKCLRREAPRffDAPLRDPALRQLL人颗粒体蛋白前体DNA SEQ ID NO 11ggcgagaggaagcagggaggagagtgatttgagtagaaaagaaacacagcattccaggct
61ggccccacctctatattgataagtagccaatgggagcgggtagccctgatccctggccaa
121tggaaactgaggtaggcgggtcatcgcgctggggtctgtagtctgagcgctacccggttg
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721ggtgccttctgcgacctggttcacacccgctgcatcacacccacgggcacccaccccctg
781gcaaagaagctccctgcccagaggactaacagggcagtggccrtgtccagctcggtcatg
841tgtccggacgcacggtcccggtgccctgatggttctacctgctgtgagctgcccagtggg
901aagtatggctgctgcccaatgcccaacgccacctgctgctccgatcacctgcactgctgc
961ccccaagacactgtgtgtgacctgatccagagtaagtgcctctccaaggagaacgctacc
1021acggacctcctcactaagctgcctgcgcacacagtgggggatgtgaaatgtgacatggag
1081gtgagctgcccagatggctatacctgctgccgtctacagtcgggggcctggggctgctgc
1141ccttttacccaggctgtgtgctgtgaggaccacatacactgctgtcccgcggggtttacg
1201tgtgacacgcagaagggtacctgtgaacaggggccccaccaggtgccctggatggagaag
1261gccccagctcacctcagcctgccagacccacaagccttgaagagagatgtcccctgtgat
1321aatgtcagcagctgtccctcctccgatacctgctgccaactcacgtctggggagtggggc
1381tgctgtccaatcccagaggctgtctgctgctcggaccaccagcactgctgcccccagggc
1441tacacgtgtgtagctgaggggcagtgtcagcgaggaagcgagatcgtggctggactggag
1501aagatgcctgCCCgCCgggCttccttatcccaccccagagacatcggctgtgaccagcac
1561accagctgcccggtggggcagacctgctgcccgagcctgggtgggagctgggcctgctgc
1621cagttgccccatgctgtgtgctgcgaggatcgccagcactgctgcccggctggctacacc
1681tgcaacgtgaaggctcgatcctgcgagaaggaagtggtctctgcccagcctgccaccttc
1741ctggcccgtagccctcacgtgggtgtgaaggacgtggagtgtggggaaggacacttctgc
1801catgataaccagacctgctgccgagacaaccgacagggctgggcctgctgtccctaccgc
1861cagggcgtctgttgtgctgatcggcgccactgctgtcctgctggcttccgctgcgcagcc
1921aggggtaccaagtgtttgcgcagggaggccCCgCgCtgggacgcccctttgagggaccca
1981gccttgagacagctgctgtgagggacagtactgaagactctgcagccctcgggaccccac
2041tcggagggtgccctctgctcaggcctccctagcacctccccctaaccaaattctccctgg0102]2101 accccattct gagctcccca tcaccatggg aggtggggcc tcaatctaag gccttccctg
0103]2161 tcagaagggg gttgtggcaa aagccacatt acaagctgcc atcccctccc cgtttcagtg
0104]2221 gaccctgtgg ccaggtgctt ttccctatcc acaggggtgt ttgtgtgtgt gcgcgtgtgc
0105]2281 gtttcaataa agtttgtaca ctttcaaaaa aaaaaaaaaa aaa
0106]小鼠颗粒体蛋白前体SEQ ID NO 12
0107]MWVLMSWLAFAAGLVAGTQCPDGQFCPVACCLDQGGANYSCCNP
0108]LLDTWPRITSHHLDGSCQTHGHCPAGYSCLLTVSGTSSCCPFSKGVSCGDGYHCCPQG
0109]FHCSADGKSCFQMSDNPLGAVQCPGSQFECPDSATCCIMVDGSWGCCPMPQASCCEDR
0110]VHCCPHGASCDLVHTRCVSPTGTHTLLKKFPAQKTNRAVSLPFSVVCPDAKTQCPDDS
0111]TCCELPTGKYGCCPMPNAICCSDHLHCCPQDTVCDLIQSKCLSKNYTTDLLTKLPGYP
0112]VKEVKCDMEVSCPEGYTCCRLNTGAWGCCPFAKAVCCEDHIHCCPAGFQCHTEKGTCE
0113]MGILQVPWMKKVIAPLRLPDPQILKSDTPCDDFTRCPTNNTCCKLNS⑶WGCCPIPEA
0114]VCCSDNQHCCPQGFTCLAQGYCQKGDTMVAGLEKIPARQTTPLQI⑶IGCDQHTSCPV
0115]GQTCCPSLKGSWACCQLPHAVCCEDRQHCCPAGYTCNVKARTCEKDVDFIQPPVLLTL
0116]GPKVGNVECGEGHFCHDNQTCCKDSAGVWACCPYLKGVCCRDGRHCCPGGFHCSARGT
0117]KCLRKKIPRWDMFLRDPVPRPLL
0118]小鼠颗粒体蛋白前体DNA SEQ ID NO 13
0119]1 gagatgcctc ccagggagcc cggaccccga cgcaggcaga ccatgtgggt cctgatgagc
0120]61 tggctggcct tcgcggcagg gctggtagcc ggaacacagt gtccagatgg gcagttctgc
0121]121 cctgttgcct gctgccttga ccagggagga gccaactaca gctgctgtaa ccctcttctg
0122]181 gacacatggc ctagaataac gagccatcat ctagatggct cctgccagac ccatggccac
0123]241 tgtcctgctg gctattcttg tcttctcact gtgtctggga cttccagctg ctgcccgttc
0124]301 tctaagggtg tgtcttgtgg tgatggctac cactgctgcc cccagggctt ccactgtagt
0125]361 gcagatggga aatcctgctt ccagatgtca gataacccct tgggtgctgt ccagtgtcct
0126]421 gggagccagt ttgaatgtcc tgactctgcc acctgctgca ttatggttga tggttcgtgg
0127]481 ggatgttgtc ccatgcccca ggcctcttgc tgtgaagaca gagtgcattg ctgtccccat
0128]541 ggggcctcct gtgacctggt tcacacacga tgcgtttcac ccacgggcac ccacacccta
0129]601 ctaaagaagt tccctgcaca aaagaccaac agggcagtgt ctttgccttt ttctgtcgtg
0130]661 tgccctgatg ctaagaccca gtgtcccgat gattctacct gctgtgagct acccactggg
0131]721 aagtatggct gctgtccaat gcccaatgcc atctgctgtt ccgaccacct gcactgctgc
0132]781 ccccaggaca ctgtatgtga cctgatccag agtaagtgcc tatccaagaa ctacaccacg
0133]841 gatctcctga ccaagctgcc tggataccca gtgaaggagg tgaagtgcga catggaggtg
0134]901 agctgccctg aaggatatac ctgctgccgc ctcaacactg gggcctgggg ctgctgtcca
0135]961 tttgccaagg ccgtgtgttg tgaggatcac attcattgct gcccggcagg gtttcagtgt
0136]1021 cacacagaga aaggaacctg cgaaatgggt atcctccaag taccctggat gaagaaggtc
0137]1081 atagcccccc tccgcctgcc agacccacag atcttgaaga gtgatacacc ttgtgatgac
0138]1141 ttcactaggt gtcctacaaa caatacctgc tgcaaactca attctgggga ctggggctgc
0139]1201 tgtcccatcc cagaggctgt ctgctgctca gacaaccagc attgctgccc tcagggcttc
0140]1261 acatgtctgg ctcaggggta ctgtcagaag ggagacacaa tggtggctgg cctggagaag
1321atacctgcccgccagacaaccccgctccaaattggagatatcggttgtgaccagcatacc
1381agctgcccagtagggcaaacctgctgcccaagcctcaagggaagttgggcctgctgccag
1441ctgccccatgctgtgtgctgtgaggaccggcagcactgttgcccggccgggtacacctgc
1501aatgtgaaggcgaggacctgtgagaaggatgtcgattttatccagcctcccgtgctcctg
1561accctcggccctaaggttgggaatgtggagtgtggagaagggcatttctgccatgataac
1621cagacctgttgtaaagacagtgcaggagtctgggcctgctgtccctacctaaagggtgtc
1681tgctgtagagatggacgtcaCtgttgCCCCggtggcttccactgttcagccaggggaacc
1741aagtgtttgcgaaagaagattcctcgctgggacatgtttttgagggatccggtcccaaga
1801ccgctactgtaaggaagggctacagacttaaggaactccacagtcctgggaaccctgttc
1861cgagggtacccactactcaggcctccctagcgcctcctcccctaacgtctccccggccta
1921ctcatcctgagtcaccctatcaccatgggaggtggagcctC 3.3.3. C 3.3.3.3.ccttctttta
1981tggaaagaaggctgtggccaaaagccccgtatcaaactgccatttcttccggtttctgtg
2041gaccttgtggccaggtgctcttcccgagccacaggtgttctgtgagcttgCttgtgtgtg
2101tgtgcgcgtgtgcgtgtgttgctccaataaagtttgtacactttc
SEQ [D NO :3hGrnADVKCDMEVS-CPDGYTCCRLQSGAWGCCPFTQAVCCEDHIHCCPAGFTCDTQKGTCEQSEQ ID NO :4hGrnB-VMCPDARSRCPDGSTCCELPSGKYGCCPMPNATCCSDHLHCCPQDTVCDLIQSKCLSSEQ ID NO :5hGrnC-VPCDNVSS-CPSSDTCCQLTSGEWGCCPIPEAVCCSDHQHCCPQGYTCVAEGQ-CQSEQ ID NO: 6hGrnDDIGCDQHTS-CPVGQTCCPSLGGSWACCQLPHAVCCEDRQHCCPAGYTCNVKARSCESEQ ID NO :7hGrnEDVECGEGHF-CHDNQTCCRDNRQGWACCPYRQGVCCADRRHCCPAGFRCAARGTKCLSEQ ID NO :8hGrnFAIQCPDSQFECPDFSTCCVMVDGSWGCCPMPQASCCEDRVHCCPHGAFCDLVHTRCISEQ ID NO: 9hGrnGGGPCQVDAH-CSAGHSCIFTVSGTSSCCPFPEAVAC⑶GHHCCPRGFHCSADGRSCFSEQ ID NO: IOgrn DAMDIGCDQHTS-CPVGQTCCPSLGGSWACCQLPHAVCCEDRQHCCPAGYTCNVKARSCE-KLAAALEHH HHHHSEQ ID NO : llgrn FAMAIQCPDSQFECPDFSTCCVMVDGSWGCCPMPQASCCEDRVHCCPHGAFCDLVHTRCI-KLAAALEHH HHHH本领域技术人员熟知，通过保守置换改变蛋白的任意非关键氨基酸，不会显著改 变蛋白的活性，因为用于替换天然氨基酸的氨基酸的侧链应当能形成与已经被替换的氨基 酸的侧链类似的键和接触。非保守置换是可行的，只要它们不会过度地影响多肽的神经保护或神经再生活性 和/或减少它在治疗神经变性疾病中的有效性。
本领域众所周知，氨基酸的“保守置换”或多肽的“保守置换变体”是指氨基酸置 换，其维持1)多肽主链的结构(例如β折叠或α-螺旋结构)；2)氨基酸的电荷或疏水 性；和3)侧链的庞大性(bulkiness)，或这些特征中的任意一项或更多项。更具体地，众所 周知的术语“亲水的残基”涉及丝氨酸或苏氨酸。“疏水的残基”涉及亮氨酸、异亮氨酸、苯 丙氨酸、缬氨酸或丙氨酸。“带正电荷的残基”涉及赖氨酸、精氨酸或组氨酸。“带负电荷的 残基”涉及天冬氨酸或谷氨酸。具有“大侧链”的残基涉及苯丙氨酸、色氨酸或酪氨酸。术语“保守的氨基酸置换”是本领域众所周知的，它涉及用具有类似特征的氨基酸 (例如，类似的电荷或疏水性，类似的庞大性)置换特定氨基酸。实例包括用天冬氨酸置换 谷氨酸，或用异亮氨酸置换亮氨酸。在表1中给出了例证性的保守氨基酸置换的列表。保守 置换变体1)相对于母本序列仅具有保守的氨基酸置换，2)相对于母本序列具有至少90% 序列同一性，优选至少95 %同一性、96 %同一性、97 %同一性、98 %同一性或99 %或更高的 同一性；和3)保留神经保护或神经恢复活性。在这方面，根据本发明预见到上述多肽序列 的任意保守置换变体。这样的变体被视作“颗粒体蛋白前体”。表权利要求
1.治疗神经变性疾病患者的方法，所述方法包含下述步骤给患者施用包含颗粒体蛋白前体多肽的组合物；和减轻患者中神经变性疾病的症状。
2.权利要求1的方法，其中给患者施用的颗粒体蛋白前体多肽的量是在约lng/kg患者 体重至约lmg/kg患者体重的范围内。
3.权利要求2的方法，其中给患者施用的颗粒体蛋白前体多肽的量是在约lng/kg患者 体重至约500ng/kg患者体重的范围内。
4.权利要求2的方法，其中给患者施用的颗粒体蛋白前体多肽的量是在约lng/kg患者 体重至约lOOng/kg患者体重的范围内。
5.权利要求1-4中任一项的方法，其中包含颗粒体蛋白前体多肽的组合物适合肠胃外 给药。
6.权利要求1-5中任一项的方法，其中肠胃外给药途径选自真皮内地、皮下地、肌肉 内地、腹膜内地、静脉内地、心室内地、鞘内地、大脑内地和脊索内地。
7.权利要求1-6中任一项的方法，其中所述神经变性疾病状态由环境对患者的损伤介导。
8.权利要求1-7中任一项的方法，其中所述神经变性疾病状态由兴奋性毒素介导。
9.权利要求1-8中任一项的方法，其中所述兴奋性毒素是留醇糖苷。
10.权利要求1-9中任一项的方法，其中所述留醇糖苷选自谷留醇-D-葡糖苷 和胆固醇葡糖苷或其类似物或衍生物。
11.权利要求1-10中任一项的方法，其中所述神经变性疾病选自帕金森病、阿尔茨海 默氏病和肌萎缩侧索硬化。
12.权利要求11的方法，其中所述神经变性疾病是帕金森病。
13.权利要求11的方法，其中所述神经变性疾病是阿尔茨海默氏病。
14.权利要求11的方法，其中所述神经变性疾病是肌萎缩侧索硬化。
15.权利要求1-14中任一项的方法，其中所述颗粒体蛋白前体多肽与SEQID NO :2具 有至少95%同源性。
16.药物组合物，其包含治疗有效量的颗粒体蛋白前体多肽和用于其的药学上可接受 的载体，其中所述治疗有效量包含能减轻或预防患者中神经变性疾病的症状的量。
17.权利要求16的药物组合物，其中所述组合物适合肠胃外给药。
18.权利要求16或17的药物组合物，其中肠胃外给药途径选自真皮内地、皮下地、肌 肉内地、腹膜内地、静脉内地、心室内地、鞘内地、大脑内地和脊索内地。
19.权利要求16-18中任一项的药物组合物，其中所述神经变性疾病状态由环境对患 者的损伤介导。
20.权利要求16-19中任一项的药物组合物，其中所述神经变性疾病状态由兴奋性毒 素介导。
21.权利要求16-20中任一项的药物组合物，其中所述兴奋性毒素是留醇糖苷。
22.权利要求16-21中任一项的药物组合物，其中所述留醇糖苷选自β_谷甾 醇- β -D-葡糖苷和胆固醇葡糖苷或其类似物或衍生物。
23.权利要求16-22中任一项的药物组合物，其中所述神经变性疾病选自帕金森病、阿尔茨海默氏病和肌萎缩侧索硬化。
24.权利要求23的药物组合物，其中所述神经变性疾病是帕金森病。
25.权利要求23的药物组合物，其中所述神经变性疾病是阿尔茨海默氏病。
26.权利要求23的药物组合物，其中所述神经变性疾病是肌萎缩侧索硬化。
27.肠胃外剂型的权利要求16-26中任一项的药物组合物。
28.权利要求16-27中任一项的药物组合物，其中所述剂型适合选自下述途径的肠胃 外给药真皮内的、皮下的、肌肉内的、腹膜内的、静脉内的、心室内的、鞘内的、大脑内的和 脊索内的。
29.权利要求16-28中任一项的药物组合物，其中所述颗粒体蛋白前体多肽与SEQID NO: 2具有至少95%同源性。
30.减少患者中神经元细胞死亡的方法，所述方法包含下述步骤给患者施用治疗有效量的颗粒体蛋白前体多肽，其中所述肽的量可以有效地增加神经 变性疾病患者中的神经元细胞存活；和减少患者中的神经元细胞死亡。
31.权利要求30的方法，其中给患者施用的颗粒体蛋白前体多肽的量是在约lng/kg患 者体重至约lmg/kg患者体重的范围内。
32.权利要求30的方法，其中给患者施用的颗粒体蛋白前体多肽的量是在约lng/kg患 者体重至约500ng/kg患者体重的范围内。
33.权利要求30的方法，其中给患者施用的颗粒体蛋白前体多肽的量是在约lng/kg患 者体重至约lOOng/kg患者体重的范围内。
34.权利要求30-33中任一项的方法，其中包含颗粒体蛋白前体多肽的组合物适合肠 胃外给药。
35.权利要求30-34中任一项的方法，其中肠胃外给药途径选自真皮内地、皮下地、肌 肉内地、腹膜内地、静脉内地、心室内地、鞘内地、大脑内地和脊索内地。
36.权利要求30-35中任一项的方法，其中所述神经变性疾病状态由环境对患者的损 伤介导。
37.权利要求30-36中任一项的方法，其中所述神经变性疾病状态由兴奋性毒素介导。
38.权利要求30-37中任一项的方法，其中所述兴奋性毒素是留醇糖苷。
39.权利要求30-38中任一项的方法，其中所述留醇糖苷选自β_谷留醇-β-D-葡糖 苷和胆固醇葡糖苷或其类似物或衍生物。
40.权利要求30-39中任一项的方法，其中所述神经变性疾病选自帕金森病、阿尔茨 海默氏病和肌萎缩侧索硬化。
41.权利要求40的方法，其中所述神经变性疾病是帕金森病。
42.权利要求40的方法，其中所述神经变性疾病是阿尔茨海默氏病。
43.权利要求40的方法，其中所述神经变性疾病是肌萎缩侧索硬化。
44.权利要求30-43中任一项的方法，其中所述颗粒体蛋白前体多肽是这样的多肽，其 中所述多肽与SEQ ID NO :2具有至少95%同源性。
45.治疗神经变性疾病患者的方法，所述方法包含下述步骤给患者施用包含修饰颗粒体蛋白前体表达的效应物的组合物；和减轻患者中神经变性疾病的症状。
46.权利要求45的方法，其中所述包含效应物的组合物适合肠胃外给药。
47.权利要求45或46的方法，其中肠胃外给药途径选自真皮内地、皮下地、肌肉内 地、腹膜内地、静脉内地、心室内地、鞘内地、大脑内地和脊索内地。
48.权利要求45-47中任一项的方法，其中所述神经变性疾病由环境对患者的损伤介导。
49.权利要求45-48中任一项的方法，其中所述神经变性疾病状态由兴奋性毒素介导。
50.权利要求45-49中任一项的方法，其中所述兴奋性毒素是留醇糖苷。
51.权利要求45-50中任一项的方法，其中所述留醇糖苷选自β-谷留醇-β-D-葡糖 苷和胆固醇葡糖苷或其类似物或衍生物。
52.权利要求45-51中任一项的方法，其中所述神经变性疾病选自帕金森病、阿尔茨 海默氏病和肌萎缩侧索硬化。
53.权利要求52的方法，其中所述神经变性疾病是帕金森病。
54.权利要求52的方法，其中所述神经变性疾病是阿尔茨海默氏病。
55.权利要求52的方法，其中所述神经变性疾病是肌萎缩侧索硬化。
56.权利要求45-55中任一项的方法，另外包含增加神经元中颗粒体蛋白前体的表达 的步骤。
57.权利要求45-56中任一项的方法，另外包含减少非神经元细胞中颗粒体蛋白前体 的表达的步骤。
58.权利要求45-57中任一项的方法，其中所述效应物是载体，其包含与SEQID NO=I 具有至少95%同源性的核酸。
59.药物组合物，其包含治疗有效量的修饰颗粒体蛋白前体表达的效应物和用于其的 药学上可接受的载体，其中所述治疗有效量包含能减轻或预防患者中神经变性疾病的症状的量。
60.权利要求59的药物组合物，其中所述治疗有效量包含能增加神经元中颗粒体蛋白 前体表达的量。
61.权利要求59或60的药物组合物，其中所述治疗有效量包含能减少非神经元细胞中 颗粒体蛋白前体表达的量。
62.肠胃外剂型的权利要求59-61中任一项的药物组合物。
63.权利要求59-62中任一项的药物组合物，其中所述剂型适合选自下述途径的肠胃 外给药真皮内的、皮下的、肌肉内的、腹膜内的、静脉内的、心室内的、鞘内的、大脑内的和 脊索内的。
64.权利要求59-63中任一项的药物组合物，其中所述神经变性疾病状态由环境对患 者的损伤介导。
65.权利要求59-64中任一项的药物组合物，其中所述神经变性疾病状态由兴奋性毒 素介导。
66.权利要求59-65中任一项的药物组合物，其中所述兴奋性毒素是留醇糖苷。
67.权利要求59-66中任一项的药物组合物，其中所述留醇糖苷选自β_谷甾 醇- β -D-葡糖苷和胆固醇葡糖苷或其类似物或衍生物。
68.权利要求59-67中任一项的药物组合物，其中所述神经变性疾病选自帕金森病、 阿尔茨海默氏病和肌萎缩侧索硬化。
69.权利要求68的药物组合物，其中所述神经变性疾病是帕金森病。
70.权利要求68的药物组合物，其中所述神经变性疾病是阿尔茨海默氏病。
71.权利要求68的药物组合物，其中所述神经变性疾病是肌萎缩侧索硬化。
72.肠胃外剂型的权利要求59-71中任一项的药物组合物。
73.权利要求59-72中任一项的药物组合物，其中所述剂型适合选自下述途径的肠胃 外给药真皮内的、皮下的、肌肉内的、腹膜内的、静脉内的、心室内的、鞘内的、大脑内的和 脊索内的。
74.权利要求59-73中任一项的药物组合物，其中所述效应物是载体，其包含与SEQID NO 1具有至少95%同源性的核酸。
75.减少患者中神经元细胞死亡的方法，所述方法包含下述步骤给患者施用治疗有效量的修饰颗粒体蛋白前体表达的效应物，其中所述效应物的量可 以有效地增加由环境对患者的损伤介导的神经变性疾病的患者中的神经元细胞存活；和减少患者中的神经元细胞死亡。
76.权利要求75的方法，其中所述包含效应物的组合物适合肠胃外给药。
77.权利要求75或76的方法，其中肠胃外给药途径选自真皮内地、皮下地、肌肉内 地、腹膜内地、静脉内地、心室内的、鞘内地、大脑内地和脊索内地。
78.权利要求75-77中任一项的方法，其中所述神经变性疾病状态由环境对患者的损 伤介导。
79.权利要求75-78中任一项的方法，其中所述神经变性疾病状态由兴奋性毒素介导。
80.权利要求75-79中任一项的方法，其中所述兴奋性毒素是留醇糖苷。
81.权利要求75-80中任一项的方法，其中所述留醇糖苷选自β_谷留醇-β-D-葡糖 苷和胆固醇葡糖苷或其类似物或衍生物。
82.权利要求75-81中任一项的方法，其中所述神经变性疾病选自帕金森病、阿尔茨 海默氏病和肌萎缩侧索硬化。
83.权利要求82的方法，其中所述神经变性疾病是帕金森病。
84.权利要求82的方法，其中所述神经变性疾病是阿尔茨海默氏病。
85.权利要求82的方法，其中所述神经变性疾病是肌萎缩侧索硬化。
86.权利要求75-85中任一项的方法，其中所述效应物是载体，其包含与SEQID NO=I 具有至少95%同源性的核酸。
全文摘要
本发明涉及用于治疗神经变性疾病的方法和组合物。更具体地，本发明涉及使用颗粒体蛋白前体和颗粒体蛋白前体多肽治疗神经变性疾病的方法，和使用修饰颗粒体蛋白前体表达的效应物或效应物组合治疗神经变性疾病的方法。
文档编号A61K45/00GK102006882SQ200980107222
公开日2011年4月6日 申请日期2009年1月16日 优先权日2008年1月16日
发明者D·G·凯 申请人:神经动力公司