专利名称：疫苗的制作方法
技术领域：
本发明涉及改良的疫苗和免疫原性组合物以及它们在医学中的应用。本发明特别 涉及包含水包油乳剂佐剂和金黄色葡萄球菌糖和/或蛋白的疫苗或免疫原性制剂以及它 们在医学中的应用，特别是在增强免疫应答方面的应用及其制备方法，其中水包油乳剂包 含母育酚、可代谢的油和乳化剂。
背景技术：
一直以来都需要具有改良的免疫原性的新的组合物或疫苗。作为一种策略，佐剂 已被用于试验及改善针对任何给定抗原的免疫应答和/或降低宿主体内的反应原性/毒 性。水包油乳剂本身已为本领域所熟知并建议用作佐剂组合物(EP 399843 ；WO 95/17210)。W095/17210公开了水包油乳剂，其含有2-10%角鲨烯、2-10% α生育酚和 0. 3-3% tween 80以及其单独或与QS21和/或3D-MPL结合的应用。W099/12565公开了水包油乳剂组合物，其含有可代谢的油、皂苷和留醇。所述水包 油乳剂进一步包含3D-MPL。W099/11241公开了水包油乳剂，其含有可代谢的油和皂苷，其中油和皂苷以1 1 和200 1之间的比例存在。仍然需要提供适当免疫应答并在宿主中具有较少反应原性的改良疫苗和免疫原 性组合物。发明陈述本发明已发现可使用包含较低量的水包油乳剂每一组分的疫苗或免疫原性组合 物，同时所述疫苗或免疫原性组合物还维持对所述组合物内的抗原或抗原组合物的可比较 的免疫应答。这具有保持对抗原的免疫原性水平同时宿主受体内的反应原性减弱并适用于 包含葡萄球菌(例如金黄色葡萄球菌(Maphyococcusaureus))糖或蛋白的成分的优势。因此，在本发明的第一个方面，提供免疫原性组合物，其包含葡萄球菌糖和/或蛋 白以及包含水包油乳剂的佐剂组合物，其中所述水包油乳剂包含每人剂0. 5-10mg可代谢 的油、0. 5-1 Img母育酚和0. 4-4mg乳化剂。在本发明的另一个方面，提供疫苗组合物，其包含葡萄球菌糖或蛋白，以及包含水 包油乳剂的佐剂组合物，其中所述水包油乳剂包含每人剂0. 5-10mg可代谢的油、0. 5-1 Img 母育酚和0. 4-4mg乳化剂。在本发明的另一方面，提供包含葡萄球菌糖或蛋白以及包含水包油乳剂的佐剂组 合物的疫苗或免疫原性组合物在制备预防感染和/或疾病的免疫原性组合物中的应用，其 中所述水包油乳剂包含0. 5-10mg可代谢的油、0. 5-1 Img母育酚和0. 4-4mg乳化剂。在另一方面，提供上文所定义的预防病原体所引起的感染或疾病的方法或应用， 所述病原体是从其中获得免疫原性组合物中抗原的病原体变体。在另一个实施方式中，提供上文所定义的一种预防病原体所引起的感染或疾病的方法或应用，所述病原体所含抗原 是免疫原性组合物中抗原的变种。图形简述
图1 临床试验抗-HA抗体在不同时间点的几何平均效价(GMTs)(免疫原性ATP 同龄组)。图2 临床试验在0和21天具有95%置信区间的HI抗体效价的血清保护率 (SPR)(免疫原性ATP同龄组)。图3 临床试验在21天具有95%置信区间的HI抗体效价的血清转变率(SCR) (免疫原性ATP同龄组)。图4 临床试验在21天具有95%置信区间的HI抗体效价的血清转变因子(SCF) (免疫原性ATP同龄组)。图5:小鼠研究用异源亚型株(剂量范围AS03)致敏的BALB/c小鼠的血凝 抑制试验(GMT+/-IC95)。图 5A 抗-A/New Caledonia/20/99HI 效价；图 5B 抗-A/ Panama/2007/99HI 效价；图 5C 抗-B/Shandong/7/97HI 效价。图6 小鼠研究用异源亚型株(剂量范围AS03)致敏的C57B1/6小鼠的血凝抑制 试验(GMT+/-IC95)。图7 小鼠研究用异源亚型株(剂量范围AS03)致敏的C57B1/6小鼠PBMC中的 细胞免疫反应(⑶4+T细胞)。图8 小鼠研究用异源亚型株致敏的C57B1/6小鼠和用剂量范围AS03为佐剂的 低剂量抗原(0. 5 μ g)免疫的C57B1/6小鼠的PBMC中的细胞免疫反应(⑶4+T细胞)。图9 小鼠研究免疫后14天(GMT+/-IC95)两个不同抗原剂量1. 5 μ g (A、C禾口 E) 或0. 38yg(B、D和F)的H5N1-特异性血清Ig ELISA效价(A和B)和抗_H5NlIgGl (C和D) 和IgG2b (Ε和F)同种型反应。图10 小鼠研究免疫后21天(GMT+/-IC95)两个不同抗原剂量1. 5μ g(A)或 0. 38 μ g(B)的血凝抑制试验(GMT+/-IC95)。图11 小鼠研究在用不同剂量H5W疫苗(1. 5或0.38 μ g)免疫的未接触抗原 C57B1/6小鼠中的细胞免疫应答(⑶4+T细胞)，所述疫苗辅以剂量范围AS03 ㈧1. 5 μ g HA Ag (抗原)或(B)O. 38 yg HA Ag (抗原)。图12:猪研究用同源株(剂量范围AS03)致敏的猪的血凝抑制试验 (GMT+/-IC95)发明详述在每种情况下，发明者意指本文术语“包含”和“包括”可分别任选取代术语“含有” 和“由......组成”。本文中涉及本发明“疫苗组合物”的实施方式同样适用于涉及本发明“免疫原性组 合物”的实施方式，反之亦然。在本发明一个实施方式中，提供一种包含抗原或抗原组合物以及包含水包油乳剂 的佐剂组合物的疫苗或免疫原性组合物，其中所述水包油乳剂包含每人剂0. 5-10mg可代 谢的油、0. 5-1 Img母育酚和0. 4-4mg乳化剂。在本发明进一步的实施方式中，提供了一种包含抗原或抗原组合物以及包含水包油乳剂的佐剂组合物的疫苗或免疫原性组合物，其中所述水包油乳剂包含每人剂0. 5-10mg 可代谢的油(如角鲨烯)、0· 5-1 Img母育酚(如α -生育酚)和0. 4_4mg乳化剂(如聚氧 乙烯山梨糖醇酐单油酸酯)。水包油乳剂组分本发明的佐剂组合物包括水包油乳剂佐剂，优选所述乳剂包含0. 5-10mg的量的 可代谢的油、0. 5-1 Img的量的母育酚和0. 4-4mg的量的乳化剂并且具有油滴，至少70% (强度)的所述油滴直径小于1 μ m。为了使任何水包油组合物适合于人类给药，乳化剂体系的油相须包含可代谢的 油。术语可代谢的油的意思已为本领域所熟知。“可代谢的”可被定义为“能够通过代谢作 用转变”(Dorland的医学词典解释，W. B. Sanders公司，第25版本(1974))。所述油可以 是任何对受体无毒并可通过代谢作用转化的植物油、鱼油、动物油或合成油。坚果、种子和 谷物是常见的植物油来源。合成油也是本发明的一部分，可包括市售的油如ΝΕ0ΒΕΕ0和其 它。特别合适的可代谢的油是角鲨烯。角鲨烯(2，6，10，15，19，23-六甲基-2，6，10，14，18， 22-二十四碳己烯)是一种在鲨鱼肝油中大量发现的未饱和的油，在橄榄油、小麦胚芽油、 米糠油和酵母中含量较低，是本发明所使用的特别优选的油。角鲨烯是一种可代谢的油，因 为它是胆固醇的生物合成的中间产物(Merck索引，第10版本，登记号8619)。在佐剂组合物中可代谢的油合适地以0. 5-10mg的量存在，优选1_10、2-10、3_9、 4-8,5-7或5-6mg(例如2-3,5-6或9-IOmg)，特别是5. 35mg或2. 14mg。在本发明进一步的 实施方式中，可代谢的油在疫苗(或免疫原性)组合物中以0. 5-10mg的量存在，优选1-10、 2-10、3-9、4-8、5-7 或 5_6mg (例如 2-3,5-6 或 9-lOmg)，特别是 5. 35mg 或 2. 14mg。可代谢的油在疫苗或免疫原性组合物中的量可以用总组合物的百分比来表示。在 疫苗组合物中的可代谢的油适合地以组合物总体积的油的0. 5% -2%存在，优选0. 25-2或 0. 25-1. 75 或 0. 5-1. 65 或 0. 6-1. 5 或 0. 8-1. 4 或 1-1. 25% (ν/ν)。在另一个具体实施方式
中，可代谢的油的最终量大约占疫苗(或免疫原性)组合 物总体积的1.25%。在另一个具体实施方式
中，可代谢的油的最终量为组合物总体积的 0. 25% (ν/ν)。以澄清的方式，应用以下转换因子可将ν/ν表示的浓度转换为w/v表示的浓度 5% (ν/ν)角鲨烯浓度相当于4. % (w/v)角鲨烯浓度。水包油乳剂包含母育酚。母育酚为本领域所熟知并在EP0382271中描述。合适的 母育酚是α-生育酚或其衍生物如α-生育酚琥珀酸酯(也称作维生素E琥珀酸酯)。所述 母育酚合适地以0. 5-1 Img的量佐剂组合物中存在，优选1-11、2-10、3-9、4-8、5-7、5-6(例 如10-11,5-6,2. 5-3. 5或l-3mg)。在一个具体实施方式
中，母育酚存在的量为5. 94mg或 2. 38mg。在进一步的实施方式中，所述母育酚合适地以0. 5-llmg的量在疫苗(或免疫原性) 组合物中存在，优选 1-11、2-10、3-9、4-8、5-7、5-6(例如 10_11、5_6、2. 5-3. 5 或 Umg)。在 一个具体实施方式
中，所述母育酚存在的量为5. 94mg或2. 38mg。母育酚的量可表示为疫苗或免疫原性组合物总体积的百分比。母育酚在疫苗 组合物中合适以免疫原性组合物总体积的0. 25% -2% (ν/ν)存在，优选为0. 25-2，包括 0. 25-2、或 0. 25-1. 75、或 0. 5-1. 65、或 0. 6-1. 5、或 0. 8-1. 4 或 1-1. 25% (ν/ν)总体积的母 育酚。
优选母育酚的量在疫苗(或免疫原性)组合物总体积的0. 2%和2% (ν/ν)之间， 更优选为占0. 5ml剂量的1. 25% (ν/ν)的量。在一个具体实施方式
中，所述母育酚最终量为疫苗或免疫原性组合物总体积的约 1.25%。在另一个具体实施方式
中，所述母育酚最终量为总体积的0.25% (ν/ν)或0.5ml 剂量的 1. 25% (ν/ν)或 0. 7ml 剂量的 0. 9% (ν/ν)，或 0. 5ml 剂量的 0. 5% (ν/ν)或 0. 7ml 疫苗或免疫剂量的0. 35-0. 37 %，优选0. 36 %。以澄清的方式，可利用以下转换因子将给定的ν/ν浓度转化为w/v浓度5% (ν/ ν) α-生育酚浓度相当于4. 8% (w/v) α -生育酚浓度。水包油乳剂进一步包含乳化剂。乳化剂合适地是聚氧乙烯山梨糖醇酐单油酸酯。 在一个具体实施方式
中，乳化剂可选自聚山梨酸酯 80或Tween 80。所述乳化剂合适地以0. 1-5,0. 2-5,0. 3-4,0. 4-3 或 2_;3mg(例如 0. 4-1. 2,2-3 或4-5mg)乳化剂的量存在于佐剂组合物中。在一个具体实施方式
中，乳化剂存在的量为 0. 97mg 或 2. 425mg。此外，所述乳化剂合适地以0. 1-5,0. 2-5,0. 3-4,0. 4-3 或 2_;3mg(例如 0. 4-1. 2、 2-3或4-5mg)乳化剂的量存在于疫苗或免疫原性组合物中。在一个具体实施方式
中，乳化 剂存在的量为0. 97mg或2. 425mg。乳化剂的量可表示为疫苗或免疫原性组合物总体积的百分比。乳化剂合适地 以组合物总体积的0.125-0. 8% (ν/ν)存在于疫苗(或免疫)组合物中，优选总体积的 0. 08- 05、或 0. 1-0. 7、或 0. 2-0. 6、或 0. 25-0. 55、或 0. 3-0. 52 或 0. 4-0. 5% (ν/ν)。在一个具体实施方式
中，乳化剂存在的量为疫苗或免疫原性组合物总体积的1%、0.5%或0.2% (ν/ν)。以澄清的方式，利用以下转换因子可将给定的ν/ν浓度转换成w/v浓度1.8% (ν/ν)聚山梨酸酯80浓度相当于1.91% (w/v))聚山梨酸酯80浓度。在一个具体实施方式
中，0. 5ml的疫苗或免疫原性剂量含有0. 45% (ν/ν)的Tween 80，0.7ml剂量含有0.315% (v/v)Tween 80。在另一个具体实施方式
中，0. 5ml剂量含有 0. 18% (ν/ν)乳化剂，0. 7ml疫苗或免疫原性组合物剂量含有0. 126% (ν/ν)乳化剂。术语“人剂”是指适合于人使用的量的剂量。通常在0. 25和1. 5ml之间。在一个 实施方式中，人剂量为0. 5ml。在进一步的实施方式中，人剂量高于0. 5ml，例如0. 6,0. 7、 0.8、0.9或lml。在进一步的实施方式中，人剂量在Iml和1.5ml之间。在另一个实施方式 中，特别是当免疫原性组合物是针对小儿群体时，人剂量可小于0. 5ml如在0. 25和0. 5ml 之间。本发明特征在于免疫原性组合物中佐剂的每一或所有个体成分的水平低于如上所述 的以前认为有用且为通常使用的水平。特别合适的组合物包含在人剂量最终量为0. 5ml中 的以下量的下列佐剂组合物的表 权利要求
1.免疫原性组合物，其包含葡萄球菌糖和/或蛋白和包含水包油乳剂的佐剂组合物， 其中所述水包油乳剂包含每人剂0. 5-10mg可代谢的油、0. 5-1 Img母育酚和0. l-4mg乳化 剂。
2.免疫原性组合物，其包含葡萄球菌糖和/或蛋白组分和由水包油乳剂组成的佐剂组 合物，其中所述水包油乳剂包含每人剂0. 5-10mg可代谢的油、0. 5-1 Img母育酚和0. l-4mg 乳化剂。
3.免疫原性组合物，其包含葡萄球菌糖和/或蛋白和包含水包油乳剂的佐剂组合 物，所述水包油乳剂含有一种或多种另外的免疫刺激剂，其中所述水包油乳剂包含每人剂 0. 5-10mg可代谢的油、0. 5-1 Img母育酚和0. l-4mg乳化剂。
4.疫苗组合物，其包含葡萄球菌糖和/或蛋白和包含水包油乳剂的佐剂组合物，其中 所述水包油乳剂包含每人剂0. 5-10mg可代谢的油、0. 5-1 Img母育酚和0. l-4mg乳化剂。
5.权利要求1-4的免疫原性组合物，其中水包油乳剂包含每人剂1-10、2-10、3-9、4-8、 5-7或5-6mg (例如2-3、5-6或9-IOmg)可代谢的油。
6.权利要求1-5的免疫原性组合物，其中水包油乳剂包含每人剂0.5-11、1-11、2-10、 3-9、4-8、5-7、5-6(例如 10-11、5-6、2. 5-3. 5 或 l_3mg)母育酚。
7.权利要求1-6的免疫原性组合物，其中水包油乳剂包含每人剂0.1-5,0. 2-5,0. 3_4、 0. 4-3 或 2-;3mg(例如 0. 4-1. 2,2-3 或 4_5mg)乳化剂。
8.权利要求1-7的免疫原性组合物，其中可代谢的油的量是每人剂5.35mg。
9.权利要求1-8的免疫原性组合物，其中可代谢的油的量是每人剂2.14mgo
10.权利要求1-9的免疫原性组合物，其中母育酚的量是每人剂5.94mgo
11.权利要求1-10的免疫原性组合物，其中母育酚的量是每人剂2.38mg。
12.权利要求1-11的免疫原性组合物，其中乳化剂的量是每人剂2.425mg。
13.权利要求1-12的免疫原性组合物，其中乳化剂的量是每人剂0.97mg。
14.权利要求1-13的免疫原性组合物，其中可代谢的油是角鲨烯。
15.权利要求1-14中任一项所述的免疫原性组合物，其中母育酚是α-生育酚。
16.权利要求1-15中任一项所述的免疫原性组合物，其中乳化剂是聚氧乙烯山梨糖醇 酐单油酸酯。
17.权利要求16所述的免疫原性组合物，其中聚氧乙烯山梨糖醇酐单油酸酯选自聚山 梨酸酯 80或Tween 80。
18.上述权利要求任一项所述免疫原性组合物，其中疫苗组合物体积在0.4和1. 5ml之间。
19.权利要求18所述的免疫原性组合物，其中所述剂量体积是0.5ml。
20.权利要求18所述的免疫原性组合物，其中所述剂量体积是0.7ml。
21.权利要求18所述的免疫原性组合物，其中所述剂量体积是1.Oml0
22.上述权利要求任一项所述免疫原性组合物包含葡萄球菌PNAG糖。
23.任何上述权利要求所述的免疫原性组合物包含金黄色葡萄球菌5型和/或8型糖。
24.权利要求22或23的免疫原性组合物，其中糖与载体蛋白缀合。
25.权利要求对的免疫原性组合物，其中载体蛋白选自破伤风类毒素、白喉类毒素、 CRM197、绿脓假单胞菌胞外蛋白A、肺炎球菌溶血素、流感嗜血杆菌蛋白D、葡萄球菌蛋白、α类毒素、ClfA和SdrG。
26.权利要求1-25中任一项的免疫原性组合物进一步包含葡萄球菌蛋白、其免疫功能 等价物或其片段。
27.权利要求沈的免疫原性组合物，其中葡萄球菌蛋白或其片段是一种胞外组分结合 蛋白，其选自层粘连蛋白受体、SitC/MntC/唾液结合蛋白、ΚΛΑ、ΕΙΛΒ、弹性蛋白结合蛋白 (EbpS)、EFB (FIB)、SBI、自溶素、ClfA、SdrC, SdrG, SdrH、脂肪酶 GehD, SasA、FnbA、FnbB, Cna、ClfB、FbpA、Npase、IsaA/PisA、kaA、EPB、SSP-l、SSP-2、HBP、玻连蛋白结合蛋白、纤维 蛋白原结合蛋白、凝固酶、Fig和MAP。
28.权利要求沈的免疫原性组合物，其中葡萄球菌蛋白或其片段是选自优势免疫ABC 转运蛋白、IsdA、IsdB、Mg2+转运蛋白、SitC和Ni ABC转运蛋白的转运蛋白。
29.权利要求沈的免疫原性组合物，其中葡萄球菌蛋白或其片段是一种毒素或选自α 毒素(Hla)、α毒素H35R突变体、RNA III活化蛋白(RAP)的毒力调节剂。
30.权利要求沈-29中任一项的免疫原性组合物包含2种或更多种选自至少2个不同 组的葡萄球菌蛋白；a)至少一种葡萄球菌胞外组分结合蛋白或其片段，其选自层粘连蛋白受体、SitC/ MntC/唾液结合蛋白、EbhA、EWiB、弹性蛋白结合蛋白(EbpS)、EFB (FIB)、SBI、自溶素、ClfA、 SdrC、SdrG、SdrH、脂肪酶 GehD、SasA、FnbA、FnbB、Cna、ClfB、FbpA、Npase、IsaA/PisA、SsaA、 EPB、SSP-l、SSP-2、玻连蛋白结合蛋白、纤维蛋白原结合蛋白、凝固酶、Fig和MAP;b)至少一种葡萄球菌转运蛋白或其片段，其选自优势免疫ABC转运蛋白、IsdA、IsdB, Mg2+转运蛋白、SitC和Ni ABC转运蛋白；c)至少一种葡萄球菌毒力调节剂、毒素或其片段，其选自α毒素(Hla)、α毒素H35R 突变体、RNA III活化蛋白(RAP)。
31.一种治疗或预防葡萄球菌感染或疾病的方法，所述方法包括将权利要求1-30中任 一项的免疫原性组合物给药给患有或易感疾病的患者。
32.权利要求1-30中任一项的免疫原性组合物用于葡萄球菌感染或疾病预防性治疗 或治疗。
33.权利要求1-30中任一项的免疫原性组合物在制备用于葡萄球菌感染或疾病的预 防性治疗或治疗的药物中的应用。
全文摘要
本发明提供一种免疫原性组合物，其包含抗原或抗原组合物和包含水包油乳剂的佐剂组合物，其中所述水包油乳剂包含每剂0.5-10mg可代谢的油、0.5-11mg母育酚和0.1-4mg乳化剂。
文档编号A61K39/085GK102065889SQ200980123420
公开日2011年5月18日 申请日期2009年4月16日 优先权日2008年4月16日
发明者E·J·哈农, W·R·小巴罗 申请人:葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司