专利名称：组织闭塞剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种组织闭塞剂，其特征在于，其含有自组装肽水凝胶。
背景技术：
用于防止生物体的组织损伤所产生的体液(血液、组织液等)漏出的组织闭塞在手术等临床方面具有重要的意义。有效抑制损伤部的体液漏出关系到患者手术中的生命维持、手术后的生活质量OiOL)的提高。作为临床上止血被重视的原因，列举如下。1.失血是死亡的重要原因之一，失血的原因包括严重的外伤、动脉瘤、食道或胃中的溃疡、以及食道静脉曲张的破裂等。特别是，在无法紧急接受止血治疗的情况下，死亡的可能性升高。2.手术时的出血是手术中重要的担心之一，出血会导致全身性感染症或器官功能障碍。而且，出血不仅会妨碍手术视野，流出的血液的除去还会引起手术的延迟。3.即使在进行微创手术(腹腔镜手术等)的情况下，出血也是问题，还存在无法充分抑制出血而不得不变更为外科手术(incisive surgery)的情况。作为现有的止血方法，列举如下。1.直接压迫出血部的血管的方法(压迫止血)。该止血法的缺点在于需要消耗时间和劳力，需要预先维持压力，而且可能会使患者产生血肿。2.作为其他基于物理手段的止血方法，包括夹紧、夹住出血部附近的方法；在出血部放置塞子或海绵等物质的方法。这些止血法的缺点在于，在许多微血管均出血时操作非常困难。3.利用热使血液凝固、对出血的血管进行烧灼的方法(电烙)。该方法的缺点在于会使周围组织热损伤，对患者的侵袭(invasion)较大；需要医疗用器具，要专业性(除医疗机构以外不能使用)。作为现有的止血材料，列举如下。1.海藻酸2.明胶海绵3.胶原纤维4.纤维蛋白糊。上述材料中，胶原纤维和纤维蛋白糊作为有效的止血材料经常被用于临床中，但它们的缺点可以列举如下(1)明胶和胶原纤维是动物性胶原，纤维蛋白糊是使用了血液制剂和来自于牛的凝血酶的动物来源的制品，因此存在引发感染的危险性；(2)由于非透明，因而会妨碍手术。有时还有在手术中人为地使患者的血液凝固能力降低的肝素血状态。在使用人工心肺的手术中，为了抑制血液凝固而使用肝素。对于生物体而言人工心肺装置是异物，若使血液直接流入人工心肺装置，则血液会立即凝固，导致回路堵塞，因此要在进行体外循环之前将肝素投与至血液中。胶原纤维、纤维蛋白糊是利用生物体的血液凝固系统进行止血，因此在肝素血状态下，止血效果降低。若止血效果降低，则出血量增多，容易需要输血，而且体外循环终止后的完全止血也需要较长时间。因此，需要一种即使在肝素血状态下性能也不降低的、不利用血液凝固作用的止血材料。血管缝合不仅在心脏、血管系统手术中必要，在一般的腹腔内手术时也是必要的。 由于手术后血管缝合部有少量的血液漏出，因此需要一种能持续抑制血液漏出的止血材料。胆汁瘘、胰液瘘是指由于胆管系统手术、胰腺炎或胰脏手术等而导致胆汁、胰液漏出，从而对其他内脏器官造成不良影响的症状。目前，能够有效抑制胆汁或胰液的漏出、且能够临床使用的物质尚且未知，需要一种安全且有效防止胆汁瘘、胰液瘘的方法。对于肺，已知由于肺泡囊肿破裂的自发性气胸、肋骨骨折或导管穿刺等外伤性气胸等导致空气漏出的病状。根据症状的情况，有时只能等待自然治愈，作为治疗气胸的手段，在患部仅将上层与肺组织粘着从而闭塞囊肿洞的方法被认为是简便且安全性高的方法之一。由于内窥镜技术的发达，逐渐开发出在内窥镜下切除病变部位的技术。特别是已经确立了利用内窥镜切除包括食道、胃或肠在内的消化道的息肉或早期癌症(认为未发生淋巴结转移的浅表型癌症)等的病变部位的手术法。在内镜下粘膜剥离术中，通常向包含病变部的粘膜下层注入高渗盐水等而使病变部隆起，一边抓住待切除部分一边利用电烙等切除包含病变部的组织。在该技术中，为了使病变部与固有肌层分离而向粘膜下层注入高渗盐水等溶液， 但存在盐水等粘性低的溶液在手术中无法维持病变部的隆起的问题，需要一种在手术中能够维持患部的隆起的注入液。另外虽然利用导管投与凝血酶等血管收缩剂从而抑制病变部切除部的出血这种抑制出血的方法已被使用，但尚未确立能够完全阻止出血的有效的处置方法，同时还要求一种能够迅速阻止切除后的出血的方法。由于导管疗法的发展，确立了以下手术方法通过堵塞流入肿瘤或肌瘤等受血流控制的病变部的动脉，从而使肿瘤或肌瘤等死灭。具体地说，可以举出肝动脉闭塞术、子宫动脉闭塞术、脑动脉闭塞术等。在该技术中，为了使动脉闭塞，需要注入从异种动物提取的胶原或乙烯-乙烯醇等液体，但担心感染的危险性或生物毒性。因此，需要开发出一种不存在感染的危险性、且生物毒性低的注入液。另外，还要求注入液中能够添加抗癌剂或造影剂。自组装肽具有以下特性根据其氨基酸序列，形成许多肽分子有规则地排列的自我缔合体。近年来，由于其物理、化学、生物性质，自组装肽作为新型材料受到关注。自组装肽具有带电荷的亲水性氨基酸与电中性的疏水性氨基酸交替排列、正电荷与负电荷交替分布的结构，在生理PH和盐浓度下为β结构。作为亲水性氨基酸，可以使用选自天冬氨酸、谷氨酸中的酸性氨基酸，和选自精氨酸、赖氨酸、组氨酸、鸟氨酸中的碱性氨基酸。作为疏水性氨基酸，可以使用丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、丝氨酸、苏氨酸、甘氨酸。该肽的自组装在以下的条件下产生。(1)肽分子在水溶液中采取β结构，从而带有电荷的亲水性氨基酸和电中性的疏水性氨基酸不均勻分布于肽分子的2面。(2)在采取β结构时，与相邻分子形成互补的电分布。(3)在采取β结构时，与相邻分子形成充分的疏水键。(4)通过1价的无机盐，氨基酸侧链的电荷被屏蔽。(5)在肽的等电点附近，分子变为静电中性。当上述条件齐备时，认为通过以下机制进行自组装。(1)通过肽分子的交替分布的正电荷和负电荷，分子之间相互吸引而接近。( 在相邻分子的中性氨基酸侧链间形成疏水键。(3)通过正负电分布，相邻分子之间的相对的配置被调整，分子间的缔合力增强。(4)分子聚集体缓缓伸长，形成纳米纤维。据报道，纳米纤维是粗IOnm 20nm左右的极细纤维，其以网状聚集，宏观上呈现凝胶状。凝胶的网状结构在纤维尺寸和孔径等方面与天然的细胞外基质(ECM)非常类似， 其作为细胞培养的支撑物(scaffold)的利用正在被研究。该肽水凝胶具有生物降解性，分解产物不会对组织造成不良影响，生物体吸收性高，因此适于细胞的植活、增殖。自组装肽为基于固相合成法的化学合成品，无需担心来自动物的感染症等，近年来由于十分担忧疯牛病等来自动物的病毒或其他未知的感染症，因此其作为胶原等的替代品进一步受到关注。专利文献1示出了自组装肽在止血中的应用，但在实施例中引用的论文的肝脏切开部中的止血录像中，确认到血液从切开部末端持续性漏出，无法进行所报道的完全止血。 止血不完全的理由推测是由于自组装肽凝胶与组织的粘着不充分。因此，为了使自组装肽的止血效果达到能够临床应用的水平，需要进一步的改良。专利文献1 国际公开第2006-116524号小册子
发明内容
发明要解决的问题本发明的目的在于提供一种自组装肽组织闭塞剂及其使用方法，该自组装肽组织闭塞剂能够有效闭塞包括人在内的大型哺乳动物的组织的损伤部，且无需担心病毒等的感染性。用于解决问题的方案本发明人通过将用作细胞培养的支撑物的自组装肽水凝胶适用于组织闭塞中，发现表现出与现有的组织闭塞剂同等或在其之上的组织闭塞效果，从而完成了本发明。另外存在以下课题单纯将肽水溶液适用于体液漏出部，无法获得充分的组织闭塞效果。因此， 深入研究的结果发现，通过从体液漏出部除去多余体液，能够得到充分的组织闭塞效果和生物体安全性，由此完成了本发明。
S卩，本发明涉及一种组织闭塞剂，其为含有肽的组织闭塞剂，该肽为亲水性氨基酸和疏水性氨基酸交替结合的具有8 200个氨基酸残基的两亲性的肽，并且该肽为在生理 PH和/或阳离子的存在下在水溶液中显示为β结构的自组装肽。在所述组织闭塞剂中，所述肽优选具有下述序列的重复序列由精氨酸、丙氨酸、 天冬氨酸和丙氨酸组成的序列，由异亮氨酸、谷氨酸、异亮氨酸、和赖氨酸组成的序列，或由赖氨酸、亮氨酸、天冬氨酸和亮氨酸组成的序列，更优选为由序列号1、序列号2、或序列号3 所述的氨基酸序列组成的自组装肽。为了防止溶血、炎症、感染症，所述组织闭塞剂优选进一步含有低分子药剂。所述低分子药剂优选选自由葡萄糖、白糖、精制白糖、乳糖、麦芽糖、海藻糖、葡聚糖、碘、氯化溶菌酶、愈创蓝油烃(dimethylisopropylazulene)、托可维A酸(tretinoin tocoferil)、聚乙烯吡咯酮碘、前列地尔α -环糊精包合物(alprostadil alfadex)、茴香醇、水杨酸异戊酯、α，α-二甲基苯乙醇、白檀醇(bacdanol)、新洋茉莉醛、磺胺嘧啶银 (sulfazin silver)、双丁酰环磷腺苷钠、前列地尔α -环糊精包合物、硫酸庆大霉素、盐酸四环素、夫西地酸钠、莫匹罗星钙水合物和苯甲酸异戊酯组成的组。本发明还涉及一种添加抗凝固剂从而凝固能力降低的血液的出血止血剂；实质器官的出血创面的止血剂；动脉性出血和静脉性出血的止血剂；防止胆汁从胆囊或胆管漏出的制剂；防止肺部的出血或肺部的空气漏出的制剂；内镜下粘膜剥离术中能够以经导管的方式适用的止血剂和用于注入粘膜组织而使切除部分隆起的注入剂；一种防止切除部分的出血和体液漏出的制剂，所述切除部分为将向粘膜组织注入液体而隆起的粘膜组织部分切除的方法中的切除部分；或者动静脉闭塞术中的动静脉闭塞剂或静脉曲张硬化疗法中的静脉曲张硬化剂，上述物质均含有上述组织闭塞剂。该动静脉闭塞剂或静脉曲张硬化剂中还可以添加抗癌剂和/或造影剂。发明的效果本发明的组织闭塞剂，除了其主要成分即自组装肽发挥作为闭塞剂的作用以外， 还能够成为迁移细胞(migrating cells)的支撑物，与单纯的闭塞相比，能够在手术后带来更高的治愈效果。另外，在从体液漏出部除去多余体液的情况下(例如在已经止血的状态下适用于止血部的情况)，本发明的组织闭塞剂与组织的粘着性提高，能够得到充分的组织闭塞效果和生物体安全性。另外，由于作为本发明的组织闭塞剂的主要成分的自组装肽能够通过合成制造， 因此与现有的来自生物体的材料相比，不存在病毒等的感染的危险，而且其自身为生物体吸收性，也无需担心炎症等。
图1为腹部大动脉注射针穿孔模型中的肽水溶液与3%肽水溶液的止血效果的比较。(a)大动脉穿刺后的出血的确认，在血管周围确认到出血(箭头前端部；肽水溶液处理组)，(b)肽水溶液的涂布(1%肽水溶液处理组)，(c)打开止血钳后，由于再出血产生的血液而难以确认血管(箭头前端部；肽水溶液处理组)，(d)大动脉穿刺后的出血的确认，在血管周围确认到出血(箭头前端部；3%肽水溶液处理组)，(e)肽水溶液的涂布 (3%肽水溶液处理组)，(f)用生理盐水清洗后，能够在照片中央部确认到完全止血的血管(箭头前端部；3%肽水溶液处理组)。图2为肝脏部分切除模型中的肽水溶液与3%肽水溶液的止血效果的比较。 (a)肝脏切除后的出血的确认(1%肽水溶液处理组)，(b)肽水溶液的涂布(1%肽水溶液处理组)，(c)用生理盐水清洗后，没有确认到切断面的出血(箭头前端部；肽水溶液处理组)，(d)肝脏切除后的出血的确认(3%肽水溶液处理组)，(e)肽水溶液的涂布(3%肽水溶液处理组)，(f)用生理盐水清洗后，确认到切断面的出血(箭头前端部；3%肽水溶液处理组)。图3为利用肽水溶液止血的肝脏与对照组(生理盐水)的肝脏的切断面的病理组织学的比较。(a)血管内组织图(肽水溶液处置组)，(b)血管内组织图(生理盐水处置组)，(c)血管内组织图(肽水溶液处置组)，(d)血管内组织图(肽水溶液处置组)，(e)血管内组织图(肽水溶液处置组)，(f)血管内组织图(肽水溶液处置组)。图4为血液凝固能力降低的兔的腹部大动脉注射针穿孔模型中的3%肽水溶液的止血效果。(a)大动脉穿刺前的样子，(b)大动脉穿刺后，在血管周围确认到出血(箭头前端部)，(c)肽水溶液的涂布，(d)打开止血钳后，在血管周围没有确认到(b)那样的出血 (箭头前端部)。图5为腹部大动脉注射针穿孔模型中的含白糖的3%肽水溶液的止血效果。(a) 大动脉穿刺前的样子，(b)大动脉穿刺后，在血管周围确认到出血(箭头前端部)，(c)肽水溶液的涂布，(d)打开止血钳后，在血管周围没有确认到(b)那样的出血(箭头前端部)。图6为肺漏模型(lung leakage model)中的含白糖的3%肽水溶液与生理盐水的止血效果和肺漏闭塞效果的比较。(a)肺的出血确认(箭头前端部；含白糖的3%肽水溶液处理组)，(b)肽水溶液的涂布(箭头前端部；含白糖的3%肽水溶液处理组)，(c)为了确认漏气而将损伤部浸渍于生理盐水中，结果均未确认到空气漏出和出血(箭头前端部；含白糖的3%肽水溶液处理组)，(d)肺的出血的确认(箭头前端部；生理盐水处理组)，(e) 生理盐水的涂布(箭头前端部；生理盐水处理组)，(f)为了确认漏气而浸渍于生理盐水中， 因此没有明显的出血，但确认到持续的出血(箭头前端部；生理盐水处理组)。图7为胆管壁穿孔模型中的3%肽水溶液的胆管壁闭塞效果。(a)胆管穿刺前的样子，(b)胆管穿刺后的胆汁漏出确认(箭头前端部)，(c)肽水溶液的涂布(箭头前端部)， (d)用生理盐水清洗后，没有确认到像(b)那样胆汁漏到胆管周围(箭头前端部)。图8为膀胱内肿瘤中的3%肽水溶液所引起的粘膜隆起形成和止血效果。(a)肽水溶液注入前，(b)肽水溶液注入后的患部的隆起确认，(c)利用电烙切除肿瘤中，在切除部没有确认到出血，(d)利用电烙切除肿瘤后，在切除部没有确认到出血。图9为胃粘膜切开模型中的2%肽水溶液的止血效果。(a)肝脏切开后的出血的确认(箭头前端部)，(b) 2%肽水溶液的涂布(箭头前端部)，(c)用生理盐水清洗后，没有确认到从切开部的出血(箭头前端部)。图10为肝脏横切模型中的肽水溶液的止血效果。(a)肝脏切开后的出血的确认(箭头前端部)，(b) IEIK9肽水溶液的涂布(箭头前端部)，(c)用生理盐水清洗后， 确认到切开部出血(箭头前端部)，(d)肝脏切开后的出血的确认(箭头前端部)，(e)l% IEIK13肽水溶液的涂布(箭头前端部)，(f)用生理盐水清洗后，没有确认到切开部出血 (箭头前端部)，(g)肝脏切开后的出血的确认(箭头前端部)，(h)l%KLD肽水溶液的涂布(箭头前端部)，(i)用生理盐水清洗后，没有确认到切开部出血(箭头前端部)。图11为胆汁引起的1.5%肽水溶液的自组装的确认。(a)自组装前的1.5% PuraMatrix肽水溶液，(b)胆汁涂布后的1. 5% PuraMatrix肽水溶液，(c)除去胆汁，确认自组装，(d)给予物理冲击而破坏自组装凝胶，(e)自组装前的IEIK9肽水溶液，(f)胆汁涂布后的IEIK9肽水溶液，(g)除去胆汁后，基本上无法确认自组装，(h)给予物理冲击而破坏自组装凝胶，(i)自组装前的IEIK13肽水溶液，(j)胆汁涂布后的IEIK13 肽水溶液，(k)除去胆汁，确认自组装，(1)给予物理冲击而破坏自组装凝胶，(m)自组装前的KLD肽水溶液，(η)胆汁涂布后的KLD肽水溶液，(ο)除去胆汁，确认自组装，(ρ) 给予物理冲击而破坏自组装凝胶。图12为3%肽水溶液产生的门静脉栓塞效果的确认。(a)、(b)确认门静脉的栓塞 (箭头前端部)。图13为含碘帕醇的肽水溶液的自组装的确认。(a)自组装前的含碘帕醇的3%肽水溶液，(b)涂布细胞培养用培养基后的含碘帕醇的3%肽水溶液，(c)除去细胞培养用培养基，确认自组装，(d)自组装前的含碘帕醇的0.0468%肽水溶液，(e)涂布细胞培养用培养基后的含碘帕醇的0.0468%肽水溶液，(f)除去细胞培养用培养基，确认自组装。图14为含碘帕醇的3%肽水溶液的通过导管后的自组装的确认(箭头前端部)。
具体实施例方式以下，对本发明的组织闭塞剂进行详细说明。本发明的组织闭塞剂的主要成分是自组装肽，所述自组装肽为亲水性氨基酸和疏水性氨基酸交替结合的具有8 200个氨基酸残基的两亲性的肽，并且该自组装肽在生理 PH和/或阳离子的存在下在水溶液中显示为β结构。本发明中，生理ρΗ为ρΗ6 ρΗ8，优选为ρΗ6. 5 ρΗ7. 5，进一步优选为ρΗ7. 3 ΡΗ7. 5。另外，本发明中，阳离子例如为5mM 5M的钠离子或钾离子。本发明中使用的自组装肽例如能够用以下4个通式表示。((XY)1-(ZY)Jn (I)((YX)1-(YZ)Jn (II)((ZY)1-(XY)Jn (III)((YZ)1-(YX)Jn (IV)(式(I) (IV)中，X表示酸性氨基酸，Y表示疏水性氨基酸，Z表示碱性氨基酸， l、m 和 η 均为整数(ηX (1+m) < 200)。)另外，其N末端可以进行乙酰化，C末端可以进行酰胺化。这里，作为亲水性氨基酸，可以使用选自天冬氨酸、谷氨酸中的酸性氨基酸，和选自精氨酸、赖氨酸、组氨酸、鸟氨酸中的碱性氨基酸。作为疏水性氨基酸，可以使用丙氨酸、 缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、丝氨酸、苏氨酸或甘氨酸。在这些自组装肽中，可以优选使用具有精氨酸、丙氨酸、天冬氨酸和丙氨酸(RADA) 的重复序列的自组装肽，这样的肽的序列用Ac- (RADA) p-C0NH2 (p = 2 50)表示。另外还可以优选使用具有异亮氨酸、谷氨酸、异亮氨酸和赖氨酸(IEIK)的重复序列的自组装肽，这样的肽的序列用Ac-(IEIK)pI-CONH2 (ρ = 2 50)表示。进而还可以优选使用具有赖氨酸、亮氨酸、天冬氨酸和亮氨酸(KLDL)的重复序列的自组装肽，这样的肽的序列用Ac-(KLDL) p-C0NH2 (p = 2 50)表示。这些自组装肽能够由8 200个氨基酸残基数构成，其中优选为8 32个残基的自组装肽，进一步优选残基数为12 16的自组装肽。作为本发明中的自组装肽的优选的具体例子，可以举出具有(Ac-(RADA)4-CONH2) 序列(序列号1)的肽RAD16-I、具有(Ac-(IEIK)3I-C ONH2)序列(序列号2)的肽 IEIK13、具有(Ac-(KLDL)3-CONH2)序列(序列号3)的肽 KLD，关于 RAD16-I，其 1 % 水溶液已经由3D-Matrix Co.，Ltd.以PuraMatrix(注册商标)产品化。除了的具有 (Ac-(RADA)4-CONH2)序列(序列号1)的肽之外，PuraMatrix(注册商标)还含有氢离子、 氯化物离子。PuraMatrix (注册商标)、IEIK13和KLD为12 16个氨基酸残基的长约5nm的寡肽，其溶液在酸性PH条件下显示为液体状态，但通过变化为中性pH而产生肽的自组装， 形成直径约IOnm的纳米纤维，结果肽溶液凝胶化。PuraMatrix(注册商标)为具有作为亲水性氨基酸的带正电荷的精氨酸和带负电荷的天冬氨酸、与作为疏水性氨基酸的丙氨酸残基交替重复的氨基酸序列的两亲性肽， IEIK13为具有作为亲水性氨基酸的带正电荷的赖氨酸和带负电荷的谷氨酸、与作为疏水性氨基酸的异亮氨酸残基交替重复的氨基酸序列的两亲性肽，另外KLD为具有作为亲水性氨基酸的带正电荷的赖氨酸和带负电荷的天冬氨酸、与作为疏水性氨基酸的亮氨酸残基交替重复的氨基酸序列的两亲性肽，肽的自组装起因于构成肽的氨基酸所产生的肽分子间的氢键和疏水键。本发明中使用的自组装肽中，纳米纤维的平均直径为10 20nm，平均孔径为5 200nm。该数值范围与天然的细胞外基质胶原的尺寸大致相同。本发明中使用的自组装肽的自组装条件可以列举生理条件的pH和盐浓度。特别是，1价的碱金属离子的存在非常重要。即，生物体内大量存在的钠离子和钾离子有助于促进凝胶化。一旦产生凝胶化，则即使使用通常的蛋白质的变性条件例如高温、酸、碱、蛋白水解酶、尿素、盐酸胍等变性剂，凝胶也不分解。PuraMatrix(注册商标)等自组装肽为不具有明显的生理活性基序的肽序列，因此无需担心有损细胞的本来功能。生理活性基序与转录等许多细胞内现象的控制有关，若生理活性基序存在，则通过识别该基序的酶，细胞质内或细胞表面的蛋白质被磷酸化。若肽组织闭塞剂中存在生理活性基序，则能够活化或抑制各种功能蛋白的转录活性。不具有生理活性基序的PuraMatrix (注册商标)等自组装肽不存在这样的担心。本发明中使用的自组装肽通过化学合成而制造，因此不含起因于来自动物的细胞外基质的未知成分。该性质表明无需担心以BSE为首的感染，作为医疗用途具有很高的安全性。有报道指出，由天然氨基酸组成的自组装肽由于具有良好的生物体适应性和生物体内分解性，因此例如将PuraMatrix(注册商标)注入小鼠的心肌时，细胞浸润于注入的 PuraMatrix (注册商标)，形成了正常组织。分解时间根据注入场所等条件而异，在注入后约2 8周纤维被分解并排出。本发明的组织闭塞剂中还能够进一步混合低分子药剂。作为这样的低分子药剂， 没有特别限定，可以举出葡萄糖、白糖、精制白糖、乳糖、麦芽糖、海藻糖、葡聚糖、碘、氯化溶菌酶、愈创蓝油烃、托可维A酸、聚乙烯吡咯酮碘、前列地尔α _环糊精包合物、茴香醇、水杨酸异戊酯、α，α-二甲基苯乙醇、白檀醇、新洋茉莉醛、磺胺嘧啶银、双丁酰环磷腺苷钠、前列地尔α-环糊精包合物、硫酸庆大霉素、盐酸四环素、夫西地酸钠、莫匹罗星钙水合物和苯甲酸异戊酯。 本发明的组织闭塞剂，能够通过添加糖而从低渗至等渗来改善溶液的渗透压且组织闭塞效果不会降低，能够进一步提高生物体安全性。作为本发明的组织闭塞剂的形态，可以列举粉末、溶液、凝胶等。由于自组装肽因溶液的PH和盐浓度的变化而产生凝胶化，因此能够作为在应用时使其与生物体接触从而凝胶化的液剂流通。作为临床使用中的形态，包括提前将含有自组装肽等成分的药液填充至带有筒体的注射器或移液器中(预填充式注射器形态等)；或者，利用从注射器或移液器尖的开口部补给成分的装置(抽吸装置或阀)向注射器或移液器尖供给药液并从放出部应用于患部的方法。注射器、移液器有时也由2个以上构成。通过将成分用作支架或导管等器具的涂层，能够抑制体液漏出。另外，也可以在本领域中常用的纱布、绷带等支撑体或衬里上固定成分。另外还可以将海绵浸泡在成分中而使用。除此之外，可以制作填充了成分粉末或溶液的喷雾式喷雾器。利用这种喷雾器喷雾到患部时，通过与生物体的接触，PH和盐浓度上升，产生凝胶化，与以凝胶状态操作相比能够适用于各种各样的部位或状态。以下，通过实施例更详细地说明本发明的组织闭塞剂，但只要本发明不脱离其主旨和适用范围则不限于这些实施例。实施例1兔腹部大动脉和门静脉主干注射针穿孔模型中的肽水溶液和3%肽水溶液的止血效果在止血钳止血下制作兔腹部大动脉、门静脉主干的注射针穿孔模型，对肽水溶液和3%肽水溶液的止血效果进行评价。〈材料〉·肽水溶液1. 肽水溶液(肽序列=Ac-(RADA)4-NH2, CPC Scientific, Inc 公司制造；浓度 重量/体积)2. 3%肽水溶液(肽序列Ac-(RADA)4-NH2, CPC Scientific, Inc 公司制造；浓度 重量/体积)·动物H^S^ (3. 0-4. 0kg, Japan White, ^ffl,由 Funabashi Farm Co. ，Ltd. _入)。 如下饲育在以室温25°C、湿度65%、照明时间12小时(7:00-19:00)进行控制的饲育室内给食饲育用颗粒(JA Higashinihon Kumiai Shiryou)，通过给水瓶自由给水。断食仅为试验当天早上，给水是自由的。〈方法〉 对于兔，以3mg/kg皮下内投与Celactar 2 %注射液(在IOOmL中含有2. Og赛拉嗪，Bayer Ltd.制造)后，以10mg/kg静脉内投与氯胺酮(在ImL中含有50mg氯胺酮， Fuji Chemical Industries, Ltd.制造)，从而使其麻醉。 通过正中切开对兔进行剖腹。露出约IOcm的腹部大动脉、门静脉主干，将各血管从周围组织剥离，利用23G注射针(Terumo Corp.制造)对腹部大动脉进行血管穿刺，利用 26G注射针(Terumo Corp.制造)对门静脉主干进行血管穿刺。·确认出血后，利用止血钳对末梢侧和中枢侧进行止血钳止血，通过生理盐水、纱布除去出血的血液后，立即用肽水溶液进行处置。·处置后1 2分钟后开次打开血流，通过肉眼确认从穿刺部是否有出血。〈结果〉图1中，示出了肽水溶液对于本实施例的血管出血的止血效果的例子。如表1所示，可确认在腹部大动脉穿孔模型中，3%肽水溶液的2例中的2例均为完全止血。但是， 对于肽水溶液，2例中均在解除止血钳止血后确认到喷出性的出血，未能止血。另外，在门静脉主干穿孔模型中，同样地可确认3%肽水溶液的2例中的2例均为完全止血效果，但
肽水溶液确认到持续性的静脉性出血。表权利要求
1.一种组织闭塞剂，其为含有肽的组织闭塞剂，该肽为亲水性氨基酸和疏水性氨基酸交替结合的具有8 200个氨基酸残基的两亲性的肽，并且该肽为在生理pH和/或阳离子的存在下在水溶液中显示为β结构的自组装肽。
2.根据权利要求1所述的组织闭塞剂，其中，所述肽具有下述序列的重复序列由精氨酸、丙氨酸、天冬氨酸和丙氨酸组成的序列，由异亮氨酸、谷氨酸、异亮氨酸、和赖氨酸组成的序列，或由赖氨酸、亮氨酸、天冬氨酸和亮氨酸组成的序列。
3.根据权利要求1或2所述的组织闭塞剂，其中，所述肽由序列号1、序列号2、或序列号3所述的氨基酸序列组成。
4.根据权利要求1 3中任一项所述的组织闭塞剂，其进一步含有低分子药剂。
5.根据权利要求4所述的组织闭塞剂，其中，所述低分子药剂选自由葡萄糖、白糖、精制白糖、乳糖、麦芽糖、海藻糖、葡聚糖、碘、氯化溶菌酶、愈创蓝油烃、托可维A酸、聚乙烯吡咯酮碘、前列地尔α-环糊精包合物、茴香醇、水杨酸异戊酯、α，α-二甲基苯乙醇、白檀醇、新洋茉莉醛、磺胺嘧啶银、双丁酰环磷腺苷钠、前列地尔α -环糊精包合物、硫酸庆大霉素、盐酸四环素、夫西地酸钠、莫匹罗星钙水合物和苯甲酸异戊酯组成的组。
6.一种添加抗凝固剂从而凝固能力降低的血液的出血止血剂，其含有权利要求1 5 中任一项所述的组织闭塞剂。
7.一种实质器官的出血创面的止血剂，其含有权利要求1 5中任一项所述的组织闭塞剂。
8.一种动脉性出血和静脉性出血的止血剂，其含有权利要求1 5中任一项所述的组织闭塞剂。
9.一种防止胆汁从胆囊或胆管漏出的制剂，其含有权利要求1 5中任一项所述的组织闭塞剂。
10.一种防止肺部的出血或肺部的空气漏出的制剂，其含有权利要求1 5中任一项所述的组织闭塞剂。
11.一种内镜下粘膜剥离术中用于注入粘膜组织而使切除部分隆起的注入剂，其含有权利要求1 5中任一项所述的组织闭塞剂。
12.一种防止切除部分的出血和体液漏出的制剂，其含有权利要求1 5中任一项所述的组织闭塞剂，所述切除部分为将向粘膜组织注入液体而隆起的粘膜组织部分切除的方法中的切除部分。
13.—种能够以经导管的方式适用于对内镜下粘膜剥离术中的切除部的出血进行止血的止血剂，其含有权利要求1 5中任一项所述的组织闭塞剂。
14.一种动静脉闭塞术中的动静脉闭塞剂或静脉曲张硬化疗法中的静脉曲张硬化剂， 其含有权利要求1 5中任一项所述的组织闭塞剂。
15.根据权利要求14所述的动静脉闭塞术中的动静脉闭塞剂或静脉曲张硬化疗法中的静脉曲张硬化剂，其进一步含有抗癌剂和/或造影剂。
全文摘要
本发明提供一种人工合成的肽组织闭塞剂，其为能够适用于包括人在内的大型哺乳动物的生物体吸收性的肽组织闭塞剂，无需担心病毒等的感染性。一种组织闭塞剂，其为含有肽的组织闭塞剂，该肽为亲水性氨基酸和疏水性氨基酸交替结合的具有8～200个氨基酸残基的两亲性的肽，并且该肽为在生理pH和/或阳离子的存在下在水溶液中显示为β结构的自组装肽。
文档编号A61K38/00GK102170919SQ20098013968
公开日2011年8月31日 申请日期2009年10月6日 优先权日2008年10月6日
发明者五条理志, 小林智, 高村健太郎 申请人:三维肽胶株式会社