用胎盘细胞群治疗骨缺损的方法和组合物的制作方法

专利名称：用胎盘细胞群治疗骨缺损的方法和组合物的制作方法
技术领域：
本发明提供了成骨贴壁胎盘细胞(OPAC)的分离群的使用方法，和在例如多发性骨髓瘤的治疗中和在降低、停止或反转与多发性骨髓瘤相关或由其引起的骨量损失的治疗中使用OPAC的方法。2.
背景技术：
多发性骨髓瘤(也称作匪、骨髓瘤、浆细胞骨髓瘤、或Kahler' s疾病)是一类浆细胞癌症，浆细胞是产生抗体的免疫系统细胞。多发性骨髓瘤的症状包括骨痛、感染、 肾衰竭、贫血和骨损伤。该疾病被认为是不可治愈的，而且仅有几种治疗例如来那度胺 (REVLIMID )可供使用且显示希望。因而，对多发性骨髓瘤的新治疗存在需求。3.发明概述本发明提供了分离的成骨胎盘贴壁细胞(OPAC)、OPAC群和包含OPAC的细胞群，其中OPAC存在于绒毛膜中并从中分离。在某些实施方案中，OPAC不是从绒毛膜裙分离的(无绒毛的)。OPAC显示一种或多种干细胞或多能细胞特征(例如，显示干细胞或多能细胞的相关标记，在培养中在未分化状态复制至少10-20次，分化成代表三个胚层至少之一的成体细胞等)，而且可以附着到组织培养底物上(例如，组织培养塑料制品例如组织培养皿或多孔板表面)。本发明进一步提供了在骨缺损的治疗和骨相关癌症例如多发性骨髓瘤的治疗中使用OPAC的方法，以及使用OPAC来降低、停止或反转与多发性骨髓瘤相关或由其引起的骨量损失的方法。在一方面，本发明提供了分离的0PAC，即分离的成骨胎盘贴壁细胞，其附着在组织培养塑料制品上，是成骨的，而且是从不具有绒毛膜裙的绒毛膜分离的(无绒毛的)。OPAC 不是本领域已知和了解的滋养层、细胞滋养层、胚胎干细胞、或胚胎生殖细胞。在一个实施方案中，OPAC是分离的⑶200_或⑶200dim细胞，例如从绒毛膜但不是从绒毛膜裙分离的那些(无绒毛的)。在一个具体的实施方案中，OPAC是成骨的。在一个具体的实施方案中，OPAC是骨保护素(OPG)分泌阳性的，这通过例如流式细胞术检测。骨保护素是成骨细胞分泌的诱饵受体，其与破骨细胞分化因子(ODF)特异性结合并抑制破骨细胞成熟。因此，OPAC促进骨形成并降低破骨细胞介导的骨量损失。在另一个具体的实施方案中，OPAC不表达RANKL(核因子κ B配体的受体活化剂；参见例如，GenBank登录号 ΑΑΒ86811. 1)，这通过例如定量RT-PCR检测。RANKL是激活破骨细胞的蛋白，破骨细胞参与骨吸收。因此，OPAC不促进骨吸收。在另一个具体的实施方案中，OPAC是⑶200_或⑶200dim， 且⑶105+的。在另一个具体的实施方案中，OPAC是α-平滑肌肌动蛋白(参见例如，GenBank 登录号ΝΡ_001604)表达阴性、RANKL阴性、或NG2 (神经/神经胶质细胞2硫酸软骨素蛋白聚糖)表达阳性的，这通过例如抗体染色确定。在某些实施方案中，与CD200+(非dim)组织培养塑料制品贴壁胎盘干细胞(NG2在其中的染色是集中的)相比，所述NG2在OPAC中的染色是弥漫的。在另一个具体的实施方案中，OPAC是α-平滑肌肌动蛋白的表达阴性、RANKL 阴性、NG2的表达阳性且骨保护素分泌阳性的。在另一个具体的实施方案中，OPAC显示可诱导的碱性磷酸酶活性，这通过例如比色测定确定。在一个更加具体的实施方案中，OPAC是 ⑶200_或⑶200dim，⑶105+的，这通过流式细胞术检测，而且α-平滑肌肌动蛋白的表达阴性、RANKL阴性、NG2的表达阳性、骨保护素的表达阳性或显示可诱导的碱性磷酸酶活性。在另一个更加具体的实施方案中，OPAC是⑶200_或⑶200dim，⑶105+的，而且α -平滑肌肌动蛋白的表达阴性、NG2的表达阳性、骨保护素的表达阳性，并显示可诱导的碱性磷酸酶活性。在另一个具体的实施方案中，OPAC是SSEA3+或SSEA4+的。在一个更加具体的实施方案中，OPAC是SSEA3+且SSEA4+的。在另一个更加具体的实施方案中，OPAC是⑶200_、 ⑶105+、SSEA3+的，而且同时α -平滑肌肌动蛋白的表达阴性、RANKL的表达阴性、NG2的表达阳性、骨保护素的表达阳性或显示可诱导的碱性磷酸酶活性。在另一个更加具体的实施方案中，OPAC是⑶200_、⑶105+、SSEA4+的，而且同时α -平滑肌肌动蛋白的表达阴性、RANKL 阴性、NG2的表达阳性、骨保护素的表达阳性或显示可诱导的碱性磷酸酶活性。在一个更加具体的实施方案中，OPAC是⑶200_、⑶105+、SSEA3+、SSEA4+的，而且同时α -平滑肌肌动蛋白的表达阴性、RANKL阴性、NG2的表达阳性、骨保护素的表达阳性或显示可诱导的碱性磷酸酶活性。在某些实施方案中，当胎盘细胞群在允许矿化基质形成的条件下培养时，0PAC、 OPAC群或包含OPAC的细胞群在所述群中促进矿化基质的形成。本发明也提供了包含OPAC的细胞群，其中该细胞群是⑶200_或⑶200dim的。因此，在一个实施方案中，本发明提供了包含OPAC的分离的细胞群，其中所述细胞群不是从绒毛膜裙分离的(无绒毛的)，而且其中所述细胞群是⑶200_或⑶200-的。在一个具体的实施方案中，该细胞群基本由OPAC组成。在一个具体的实施方案中，所述细胞群是成骨的。在另一个具体的实施方案中，所述细胞群是⑶200_且⑶105+的，这通过流式细胞术检测。在另一个具体的实施方案中，所述细胞群是⑶200dim且⑶105+的，这通过流式细胞术检测。在另一个具体的实施方案中，所述细胞群是α-平滑肌肌动蛋白的表达阴性、NG2的表达阳性、或骨保护素分泌阳性的。在某些实施方案中，与⑶200+(非dim)组织培养塑料制品贴壁胎盘干细胞(NG2在其中的染色是集中的)相比，所述NG2在OPAC中的染色是弥漫的。在另一个实施方案中，所述细胞群是RANKL表达阴性的，这通过例如定量RT-PCR检测。 在另一个实施方案中，所述细胞群是α-平滑肌肌动蛋白的表达阴性、NG2的表达阳性且骨保护素分泌阳性的。在另一个具体的实施方案中，所述细胞群显示可诱导的碱性磷酸酶活性。在一个更加具体的实施方案中，所述群是⑶200—、⑶105+或⑶200dim、⑶105+的，而且满足α -平滑肌肌动蛋白的表达阴性、RANKL的表达阴性、NG2的表达阳性、骨保护素的表达阳性或显示可诱导的碱性磷酸酶活性中的一项或多项。在一个更加具体的实施方案中，所述细胞群是⑶200_、⑶105+或⑶200dim、⑶105+的；是α -平滑肌肌动蛋白的表达阴性、RANKL 阴性、NG2的表达阳性、骨保护素的表达阳性的；并显示可诱导的碱性磷酸酶活性。在另一个具体的实施方案中，所述细胞群是SSEA3+或SSEA4+的。在又一个实施方案中，所述群细胞是SSEA3+且SSEA4+的。在又一个实施方案中，所述细胞群是⑶200_、 ⑶105+或⑶200dim、⑶105+的、SSEA3+的，而且同时α -平滑肌肌动蛋白的表达阴性、RANKL的表达阴性、NG2的表达阳性、骨保护素的表达阳性或显示可诱导的碱性磷酸酶活性。在另一个更加具体的实施方案中，所述细胞群是⑶200—或⑶200dim的，是⑶105+且SSEA4+的，而且同时α-平滑肌肌动蛋白的表达阴性、RANKL的表达阴性、NG2的表达阳性、骨保护素的表达阳性或显示可诱导的碱性磷酸酶活性。在另一个更加具体的实施方案中，所述细胞群是 CD20(T或0)200^的；是CD105+、SSEA3+、SSEA4+的，α -平滑肌肌动蛋白的表达阴性、RANKL 的表达阴性、NG2的表达阳性、骨保护素的表达阳性和/或显示可诱导的碱性磷酸酶活性。在另一个具体的实施方案中，包含OPAC的细胞群在成骨培养基中与相等数目的 ⑶200+非dim贴壁胎盘干细胞相比，以可检测的较高水平表达基质金属肽酶9 (MMP9)，这通过来自实时定量PCR的Ct值来评估。在其他具体的实施方案中，当OPAC和所述CD200+胎盘干细胞在生长培养基中培养时，包含OPAC的细胞群与相等数目的CD200+非dim贴壁胎盘干细胞相比以可检测的较高水平表达一个或多个基因，其中所述一个或多个基因包括BMP3(骨形态发生蛋白 3)、0)!111(钙粘蛋白11型)、0^1(^1(胶原1型，α 1)、C0L14A1 (胶原，XIV 型，α )、 C0L15A1 (胶原，XV型，al)、DMPl (牙本质基质酸性磷蛋白1)、DSPP (牙本质涎磷蛋白)、 ENAM(釉蛋白)、FGFR2(成纤维细胞生长因子受体2、、MMPlO (基质金属蛋白酶10 (基质分解素2))、TGFB3(转化生长因子，β 3)、和/或TGFBR1(转化生长因子β，受体1)中的一个或多个，或全部，这通过来自实时定量PCR的Ct值来评估。在另一个具体的实施方案中，当OPAC和所述胎盘干细胞在成骨培养基中培养时， 包含OPAC的细胞群与相等数目的CD200+非dim贴壁胎盘干细胞相比以可检测的较高水平表达一个或多个基因，其中所述一个或多个基因包括AMBN(成釉蛋白(釉基质蛋白))、 BMP2(骨形态发生蛋白2)、CALCR(降钙素受体)、CDH11、C0L11A1(胶原，XI型，α )、 C0L14A1、C0L15A1、C0L2A1(胶原，II型，α 1)、CSF2 (集落刺激因子2 (粒细胞-巨噬细胞))、CSF3(集落刺激因子3(粒细胞))、DMP1、DSPP, ENAM、FGF3 (成纤维细胞生长因子 3)、⑶FlO (生长分化因子10)、IGFl (胰岛素样生长因子1)、ITGAl (整联蛋白，α 1 (⑶49))、 ITGA2 (整联蛋白，α 2 (⑶49Β))、ΜΜΡ8 (基质金属蛋白酶8 (中性粒细胞胶原酶))、ΜΜΡ9 (基质金属肽酶9 (明胶酶B，92kDa明胶酶，92kDa IV型胶原酶))、MMP10、PDGFA(血小板源生长因子A) ,SMADl (SMAD家族成员1)、TGFB3、TGFBR1和/或TGFBR2 (转化生长因子β，受体 2)中的一个或多个，或全部，这通过来自实时定量PCR的Ct值来评估。在另一个具体的实施方案中，不管OPAC和所述胎盘干细胞是在生长培养基中还是在成骨培养基中培养，包含OPAC的细胞群与相等数目的贴壁CD200+非dim胎盘干细胞相比以可检测的较高水平表达一个或多个基因，其中所述一个或多个基因包括CDH11、 C0L14A1、C0L15A1、DMP1、DSPP、ENAM、MMP10、TGFB3 和 / 或 TGFBRl 中的一个或多个，或全部， 这通过来自实时定量PCR的Ct值来评估。在另一个具体的实施方案中，当所述OPAC和所述胎盘干细胞在生长培养基中培养时，包含OPAC的细胞群与相等数目的贴壁CD200+非dim胎盘干细胞相比以可检测的较低水平表达一个或多个基因，其中所述一个或多个基因包括AHSG(a-2-HS-糖蛋白)、 ALPL (碱性磷酸酶，肝脏/骨/肾脏)、EGF (表皮生长因子)、FLTl (fms相关的酪氨酸激酶 1 (血管内皮生长因子/血管通透性因子受体))、IGF2、ITGA2、ITGAM(整联蛋白，α M(补体成分3受体3亚基)),SCARBl (清道夫受体B类，成员1)、S0X9 (SRY (性别决定区Y)-盒9)、TNF(肿瘤坏死因子)、TWIST1 (扭曲同系物1 ；以前称作睑裂狭小、倒转型内眦赘皮和上睑下垂3、尖头并指趾畸形3)、VCAMl (血管细胞粘附分子1)和/或VDR(维生素D(l，25- 二羟基维生素受体)中的一个或多个，或全部，这通过来自实时定量PCR的Ct值来评估在另一个具体的实施方案中，当所述OPAC和所述胎盘干细胞在成骨培养基中培养时，包含OPAC的细胞群与相等数目的贴壁CD200+非dim胎盘干细胞相比以可检测的较低水平表达一个或多个基因，其中所述一个或多个基因包括BGN(双糖链蛋白多糖)、 COLlIAl、COMP (软骨寡聚基质蛋白)、FGFl和/或VCAMl中的一个或多个，或全部，这通过来自实时定量PCR的Ct值来评估。在另一个具体的实施方案中，不管所述OPAC和所述胎盘干细胞是在生长培养基中还是在成骨培养基中培养，包含OPAC的细胞群与相等数目的贴壁CD200+非dim胎盘干细胞相比以可检测的较低水平表达VCAMl，这通过来自实时定量PCR的Ct值来评估在另一个具体的实施方案中，当OPAC和间充质干细胞在生长培养基中培养时，包含OPAC的细胞群与相等数目的骨髓源间充质干细胞相比以可检测的较高水平表达一个或多个基因，其中所述一个或多个基因包括BMP4、CALCR、CD36、CDHlU C0L12A1、C0L14A1、 C0L15A1、C0L3A1、C0L5A1、DMPl、DSPP、FLTl、MSXl、PDGFA、TGFB3、TGFBRl 和 / 或 TUFTl (釉丛蛋白1)中的一个或多个，或全部，这通过来自实时定量PCR的Ct值来评估；在另一个具体的实施方案中，当OPAC和间充质干细胞在成骨培养基中培养时，包含OPAC的细胞群与相等数目的骨髓源间充质干细胞相比以可检测的较高水平表达一个或多个基因，其中所述一个或多个基因包括AMBN、CALCR、COL14A1、COL15A1、CSF3、DMP1、DSPP、 ITGAl、ITGA2、MMP10、MMP9、MSX1、PDGFA、TGFB1、TGFB3、TGFBRl 和 / 或 TGFBR2 中的一个或多个，或全部，这通过来自实时定量PCR的Ct值来评估。在另一个具体的实施方案中，不管所述OPAC和所述间充质干细胞是在生长培养基中还是在成骨培养基中培养，包含OPAC的细胞群与相等数目的骨髓源间充质干细胞相比以可检测的较高水平表达一个或多个基因，其中所述一个或多个基因包括CALCR、 COL14A1、COL15A1、DMP1、DSPP、MSX1、PDGFA、TGFB3 和 / 或 TGFBRl 中的一个或多个，或全部， 这通过来自实时定量PCR的Ct值来评估；在另一个具体的实施方案中，当OPAC和间充质干细胞在生长培养基中培养时，包含OPAC的细胞群与相等数目的骨髓源间充质干细胞相比以可检测的较低水平表达一个或多个基因，其中所述一个或多个基因包括ALPL、BGLAP(骨Y -羧基谷氨酸(gla)蛋白)、 IGF2、ITGA2、ITGAM、SCARB1和/或SOXl中的一个或多个，或全部，这通过来自实时定量PCR 的Ct值来评估。在另一个具体的实施方案中，当OPAC和间充质干细胞在成骨培养基中培养时， 包含OPAC的细胞群与相等数目的骨髓源间充质干细胞相比以可检测的较低水平表达一个或多个基因，其中所述一个或多个基因包括AHSG、ALPL, BGLAP, BGN、BMP3、BMP5、CD36、 COL1OA1、COL1IA1、COL12A1、C0L2A1、C0L4A3、COMP、EGF、FGF1、FGFR2、IGF2、MMP8、PHEX (磷酸盐调节的肽链内切酶同系物，X连锁)、RUNX2 (runt-相关转录因子2)、SCARBl、SOXl、VCAMl 和/或VEGFB中的一个或多个，或全部，这通过来自实时定量PCR的Ct值来评估。在另一个具体的实施方案中，不管所述OPAC和所述间充质干细胞是在生长培养基中还是在成骨培养基中培养，包含OPAC的细胞群与相等数目的骨髓源间充质干细胞相比以可检测的较低水平表达一个或多个基因，其中所述一个或多个基因包括ALPL、BGLAP, IGF2,SCARBl和/或S0X9中的一个或多个，或全部，这通过来自实时定量PCR的Ct值来评估。在以上各个实施方案的一个更加具体的实施方案中，OPAC和所述CD200+胎盘干细胞或间充质干细胞经历了相等数目的传代或细胞倍增。在另一个实施方案中，本发明提供了包含OPAC的细胞群，例如OPAC群，其中编码基质金属肽酶9 (MMP9)的基因在所述OPAC中在成骨培养基中被诱导时与MMP9在生长培养基中的表达的比值，和所述MMP9在胎盘干细胞(例如⑶34_、OT10+、⑶105+组织培养贴壁多能胎盘细胞)中在所述成骨培养基中被诱导时与MMP9在所述生长培养基中表达的比值相比，至少大2、3、4或5个数量级，这通过例如来自实时定量PCR的Ct值来评估。在另一个实施方案中，本发明提供了包含OPAC的细胞群，例如OPAC群，其中编码基质金属肽酶9 (MMP9) 的基因在所述OPAC中在成骨培养基中被诱导时与MMP9在生长培养基中的表达的比值，和所述MMP9在骨髓源间充质干细胞(MSC)中在所述成骨培养基中被诱导时与MMP9在所述生长培养基中表达的比值相比，至少大2、3、4或5个数量级，这通过例如来自实时定量PCR的 Ct值来评估。在另一个实施方案中，本发明提供了包含OPAC的细胞群，例如OPAC群，其中编码基质金属肽酶9 (MMP9)的基因在所述OPAC中在成骨培养基中被诱导时与MMP9在生长培养基中的表达的比值，和所述MMP9在成纤维细胞中在所述成骨培养基中被诱导时与MMP9 在所述生长培养基中表达的比值相比，至少大2、3、4或5个数量级，这通过例如来自实时定量PCR的Ct值来评估。在具体的实施方案中，包含OPAC的细胞群中至少20%、30%、40%、50%、60%、 70 %、80 %、90 %或95 %的细胞是⑶200—和/或⑶200^的。在其他具体的实施方案中，包含 OPAC 的细胞群中至少 20 %、30 %、40 %、50 %、60 %、70 %、80 %、90 % 或 95 % 的 OPAC 是 CD20(T 和 / 或 CD200dim 的。本发明进一步提供了分离的OPAC群，其中，通过如下步骤获得所述群从胎盘中分离绒毛膜组织，其中所述绒毛膜组织不是绒毛膜裙组织(无绒毛的)；用组织破裂酶消化分离的绒毛膜组织，以获得包含OPAC的绒毛膜细胞群；和从所述绒毛膜细胞中分离所述 OPAC0在一个具体的实施方案中，组织破裂酶是胰蛋白酶、分散酶或胶原酶。在各种实施方案中，消化绒毛膜组织获得的细胞群内包含的OPAC占所述绒毛膜细胞群的至少约10%、 20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、99%或至少 99. 5%0本发明提供的OPAC和包含OPAC的细胞群包括已被培养例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、 10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20 或更多代，或 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、 15、16、17、18、19、20次群倍增的OPAC和包含OPAC的细胞群。OPAC群也包括例如培养中的两种或多种OPAC的群，以及在容器(例如袋子)中的群。另一方面，本发明提供了生产具有矿化基质能力的成骨细胞的方法，包括在所述 OPAC分化成成骨细胞的条件下，培养大量本发明提供的OPAC或本发明提供的分离的OPAC 群，所述培养持续的时间足以让所述成骨细胞产生可检测量的包含钙和/或磷酸盐的矿化基质，或促进该基质的产生。在某些实施方案中，OPAC产生骨或促进骨的产生。在另一方面，本发明提供了包含OPAC的组合物，例如可植入的组合物。在一个具体的实施方案中，可植入的组合物包含基质。在一个更加具体的实施方案中，所述基质是三维支架。在另一个更加具体的实施方案中，所述基质包含胶原、明胶、层粘连蛋白、纤连蛋白、果胶、鸟氨酸或玻连蛋白。在另一个更加具体的实施方案中，基质是羊膜或羊膜源生物材料。在另一个更加具体的实施方案中，所述基质包含细胞外膜蛋白。在另一个更加具体的实施方案中，所述基质包含合成的化合物。在另一个更加具体的实施方案中，所述基质包含生物活性化合物。在另一个更加具体的实施方案中，所述生物活性化合物是生长因子、细胞因子、抗体、或小于5，000道尔顿的有机分子。在某些实施方案中，基质是合成的可降解的聚合物，例如聚乳酸或聚乙醇酸。在某些实施方案中，可植入的支架底物是β-磷酸三钙底物、β -磷酸三钙-胶原底物、胶原底物、磷酸钙底物、矿化的人胎盘胶原底物、透明质酸底物、或陶瓷底物。在某些实施方案中，可植入的支架底物是β-磷酸三钙底物。在某些实施方案中，可植入的支架底物是β-磷酸三钙-胶原底物。在某些实施方案中，可植入的支架底物是胶原底物。在某些实施方案中，可植入的支架底物是磷酸钙底物。在某些实施方案中，可植入的支架底物是矿化的人胎盘胶原底物。在另一方面，本发明提供了在个体中治疗骨缺损的方法，包括向有此需要的个体施用包含本发明提供的OPAC群的可植入或可注射的组合物，从而在该个体中治疗骨缺损。 在某些实施方案中，骨缺损是与癌症、骨折或脊柱例如需要融合的脊柱相关的溶骨性损害。 在某些实施方案中，溶骨性损害与多发性骨髓瘤、骨癌、或转移性癌相关。在某些实施方案中，骨折是骨不连骨折。在某些实施方案中，可植入的组合物是手术植入的，例如在骨缺损位点手术植入。在某些实施方案中，对骨缺损区域手术施用可注射的组合物。在某些实施方案中，可注射的组合物是全身施用的。在另一方面，本发明提供了生产成骨细胞的方法，包括在所述OPAC分化成成骨细胞的条件下培养大量OPAC或分离的OPAC群，所述培养持续的时间足以让所述OPAC生产可检测量的矿化的钙、骨组织、或骨，或促进该生产。在某些实施方案中，本发明提供了配制可注射的组合物的方法，包括将OPAC群与可注射的透明质酸或胶原组合。在某些实施方案中，组合物包含可注射的透明质酸。在某些实施方案中，组合物包含可注射的胶原。本发明也提供了包含OPAC群和可注射的透明质酸或胶原的组合物。在另一方面，本发明提供了治疗患有骨相关癌症的个体的方法，例如，多发性骨髓瘤、骨癌、乳腺癌、肺癌、神经母细胞瘤、骨肉瘤、Ewing' s肉瘤、软骨肉瘤、脊索瘤、骨的恶性纤维组织细胞瘤、骨的纤维肉瘤、转移性癌、多发性骨髓瘤、以及特征是骨转移的任何形式的转移性癌。在一个实施方案中，本发明提供了治疗患有骨相关癌症的个体的方法，包含对所述个体施用分离的0PAC，例如包含OPAC的分离的细胞群，其中所述OPAC从绒毛膜获得，并附着到组织培养塑料制品上，而且其中所述OPAC是⑶200阴性的或是⑶200dim的，且 CD105阳性，而且其中所述施用可检测地降低所述多发性骨髓瘤的一种或多种症状的进展， 停止其进展或使其改善。在一个具体的实施方案中，所述OPAC是SSEA3+或SSEA4+的。在另一个具体的实施方案中，所述OPAC是SSEA3+且SSEA4+的。在另一个具体的实施方案中， OPAC是⑶200_、⑶105+、SSEA3+的，而且同时α -平滑肌肌动蛋白的表达阴性、RANKL的表达阴性、NG2的表达阳性、骨保护素的表达阳性或显示可诱导的碱性磷酸酶活性。在另一个更加具体的实施方案中，OPAC是⑶200—和/或⑶200dim、⑶105+、SSEA4+的，而且同时α -平滑肌肌动蛋白的表达阴性、RANKL阴性、NG2的表达阳性、骨保护素的表达阳性或显示可诱导的碱性磷酸酶活性。在一个更加具体的实施方案中，OPAC是⑶200—和/或⑶200dim、⑶105+、SSEA3+、SSEA4+的，而且同时α -平滑肌肌动蛋白的表达阴性、RANKL阴性、NG2的表达阳性、 骨保护素的表达阳性或显示可诱导的碱性磷酸酶活性。在其他具体的实施方案中，OPAC包含下面5. 1部分中列举的任意特征或特征组合。在治疗方法的另一个具体实施方案中，当所述OPAC和所述CD200+胎盘干细胞在生长培养基中培养时，所述OPAC与相等数目的CD200+非dim贴壁胎盘干细胞相比以可检测的较高水平表达一个或多个基因，其中所述一个或多个基因包括BMP3、⑶Hll、C0L10A1、 C0L14A1、C0L15A1、DMP1、DSPP、ENAM、FGFR2、MMP10、TGFB3、和 / 或 TGFBRl 中的一个或多个， 或全部，这通过来自实时定量PCR的Ct值来评估。在治疗方法的另一个具体实施方案中，当所述OPAC和所述胎盘干细胞在成骨培养基中培养时，所述OPAC与相等数目的贴壁CD200+非dim胎盘干细胞相比以可检测的较高水平表达一个或多个基因，其中所述一个或多个基因包括AMBN、BMP2、CALCR、⑶H11、 COLlIAl、C0L14A1、C0L15A1、C0L2A1、CSF2、CSF3、DMPl、DSPP, ENAM、FGF3、GDF10、IGFl、 ITGAl、ITGA2、MMP10、MMP8、MMP9、PDGFA、SMAD1、TGFB3、TGFBRl 和 / 或 TGFBR2 中的一个或多个，或全部，这通过来自实时定量PCR的Ct值来评估。在治疗方法的另一个具体实施方案中，不管所述OPAC和所述胎盘干细胞是在生长培养基中还是在成骨培养基中培养，所述OPAC与相等数目的贴壁CD200+非dim胎盘干细胞相比以可检测的较高水平表达一个或多个基因，其中所述一个或多个基因包括CDH11、 C0L14A1、C0L15A1、DMP1、DSPP、ENAM、MMP10、TGFB3 和 / 或 TGFBRl 中的一个或多个，或全部， 这通过来自实时定量PCR的Ct值来评估。在治疗方法的另一个具体实施方案中，当所述OPAC和所述胎盘干细胞在生长培养基中培养时，所述OPAC与相等数目的贴壁CD200+非dim胎盘干细胞相比以可检测的较低水平表达一个或多个基因，其中所述一个或多个基因包括AHSG、ALPL, EGF、FLTl、IGF2、 ITGA2、ITGAM、SCARB1、S0X9、TNF、TWISTl、VCAMl 或 VDR 中的一个或多个，或全部,这通过来自实时定量PCR的Ct值来评估。在治疗方法的另一个具体实施方案中，当所述OPAC和所述胎盘干细胞在成骨培养基中培养时，所述OPAC与相等数目的贴壁CD200+非dim胎盘干细胞相比以可检测的较低水平表达一个或多个基因，其中所述一个或多个基因包括BGN、COLlIAl、COMP, FGFl和/ 或VCAMl中的一个或多个，或全部，这通过来自实时定量PCR的Ct值来评估。在治疗方法的另一个具体实施方案中，不管所述OPAC和所述胎盘干细胞是在生长培养基中还是在成骨培养基中培养，所述OPAC与相等数目的贴壁CD200+非dim胎盘干细胞相比以可检测的较低水平表达VCAMl，这通过来自实时定量PCR的Ct值来评估。在治疗方法的另一个具体实施方案中，当OPAC和间充质干细胞在生长培养基中培养时，所述OPAC与相等数目的骨髓源间充质干细胞相比以可检测的较高水平表达一个或多个基因，其中所述一个或多个基因包括BMP4、CALCR、CD36、CDHlU C0L12A1、C0L14A1、 C0L15A1、C0L3A1、C0L5A1、DMPU DSPP, FLT1、MSXl、PDGFA、TGFB3、TGFBRl 和 / 或 TUFTl 中的一个或多个，或全部，这通过来自实时定量PCR的Ct值来评估。在治疗方法的另一个具体实施方案中，当OPAC和间充质干细胞在成骨培养基中培养时，所述OPAC与相等数目的骨髓源间充质干细胞相比以可检测的较高水平表达一个或多个基因，其中所述一个或多个基因包括AMBN、CALCR、C0L14A1、C0L15A1、CSF3、DMPUDSPP, ITGAl、ITGA2、MMP10、MMP9、MSXl、PDGFA, TGFBl、TGFB3、TGFBRl 禾口 / 或 TGFBR2 中的一个或多个，或全部，这通过来自实时定量PCR的Ct值来评估。在治疗方法的另一个具体实施方案中，不管所述OPAC和所述间充质干细胞是在生长培养基中还是在成骨培养基中培养，所述OPAC与相等数目的骨髓源间充质干细胞相比以可检测的较高水平表达一个或多个基因，其中所述一个或多个基因包括CALCR、 COL14A1、COL15A1、DMP1、DSPP、MSX1、PDGFA、TGFB3 和 / 或 TGFBRl 中的一个或多个，或全部， 这通过来自实时定量PCR的Ct值来评估。在治疗方法的另一个具体实施方案中，当OPAC和间充质干细胞在生长培养基中培养时，所述OPAC与相等数目的骨髓源间充质干细胞相比以可检测的较低水平表达一个或多个基因，其中所述一个或多个基因包括ALPL、BGLAP(骨Y -羧基谷氨酸(gla)蛋白)、 IGF2、ITGA2、ITGAM、SCARB1和/或SOXl中的一个或多个，或全部，这通过来自实时定量PCR 的Ct值来评估。在治疗方法的另一个具体实施方案中，当OPAC和间充质干细胞在成骨培养基中培养时，所述OPAC与相等数目的骨髓源间充质干细胞相比以可检测的较低水平表达一个或多个基因，其中所述一个或多个基因包括AHSG、ALPL, BGLAP, BGN、BMP3、BMP5、CD36、 C0L10A1、COLl IAl、C0L12A1、C0L2A1、C0L4A3、COMP、EGF、FGFl、FGFR2、IGF2、MMP8、PHEX、 RUNX2、SCARBl、SOXl、VCAMl和/或VEGFB中的一个或多个，或全部，这通过来自实时定量 PCR的Ct值来评估。在治疗方法的另一个具体实施方案中，不管所述OPAC和所述间充质干细胞是在生长培养基中还是在成骨培养基中培养，所述OPAC与相等数目的骨髓源间充质干细胞相比以可检测的较低水平表达一个或多个基因，其中所述一个或多个基因包括ALPL、BGLAP, IGF2,SCARBl和/或S0X9中的一个或多个，或全部，这通过来自实时定量PCR的Ct值来评估。在治疗多发性骨髓瘤的方法的另一个具体实施方案中，所述OPAC与相等数目的骨髓源间充质干细胞相比以可检测的较高水平表达一个或多个基因，其中所述一个或多个基因包括 BMP4、BMP6、CD36、CDHl 1、COL14A1、COL15A1、COL1A1、C0L3A1、C0L5A1、CSF2、CTSK、 FGF2、FGFR1、FLT1、ITGA1、MINPP1、MMP9、MSX1、PDGFA、SERPINH1、TGFB3 和 TGFBRl 中的一个或多个，其中所述OPAC和所述间充质干细胞经历了相等数目的传代或细胞倍增；或与相等数目的成纤维细胞相比以可检测的较高水平表达一个或多个基因，其中所述一个或多个基因包括 BMP4、BMP6、CDHl 1、C0L14A1、C0L15A1、COLlAl、C0L3A1、C0L5A1、FLTl、IGF1R、ITGAl、 MINPPl、PDGFA,SERPINH1、SMAD3、TGFBl、TGFB2、TGFB3、TGFBRl、TNF、TUFTl、VCAMl和 VEGFA 中的一个或多个，而且其中所述成纤维细胞经历了相等数目的传代或细胞倍增。在治疗患有多发性骨髓瘤的个体的方法的另一个具体实施方案中，所述OPAC 分泌一种或多种如下蛋白核心蛋白聚糖、表皮调节素、IGFBP-3、IGFBP-6、IL-2 Ra、 IL-17RC、IL-27、潜在的 TGF-β 结合蛋白 1 (LTBP)、NCAM-U Smad4、TFPI、TGF-β R1/ALK5 或TIMP-2。在一个更加具体的实施方案中，所述OPAC分泌如下蛋白核心蛋白聚糖、表皮调节素、IGFBP-3、IGFBP-6、IL-2 Ra、IL-17RC、IL-27、潜在的 TGF-β 结合蛋白 1 (LTBP)、 NCAM—l、Smad4、TFPI, TGF- β R1/ALK5 禾口 ΤΙΜΡ—2。在治疗方法的另一个具体实施方案中，所述多发性骨髓瘤的一种或多种症状是骨痛、骨细胞损害(例如，通过X射线或磁共振成像(MRI)可见)、骨质疏松症、贫血、高钙血症或由高钙血症引起的症状、或肾衰竭。在另一个具体的实施方案中，所述施用在所述个体中引起骨矿物质密度或骨矿物质含量的可检测增加，或减轻其降低。在另一个具体的实施方案中，所述施用包含对所述个体施用至少IX IO8个OPAC/kg。在其他具体的实施方案中，所述个体从未被治疗过多发性骨髓瘤；所述个体已被治疗过多发性骨髓瘤而且对非OPAC治疗应答；所述个体已被治疗过多发性骨髓瘤而且对非OPAC治疗无应答，但所述个体中多发性骨髓瘤的进程无进展；或所述个体患有进行性多发性骨髓瘤。在又一方面，本发明提供了在个体中治疗骨缺损的方法，包括向有此需要的个体施用包含OPAC群的可植入或可注射的组合物，从而在该个体中治疗骨缺损。在某些实施方案中，骨缺损是(a)与癌症相关的溶骨性损害、(b)骨折、(c)需要融合的脊柱、(d)骨不连骨折、或(e)骨质疏松症。在某些实施方案中，溶骨性损害与多发性骨髓瘤、骨癌、或转移性癌相关。在某些实施方案中，骨折是骨不连骨折。在某些实施方案中，对个体施用包含OPAC 群的可植入的组合物。在某些实施方案中，可植入的组合物被手术植入。在某些实施方案中，对个体施用包含OPAC群的可注射的组合物。在某些实施方案中，对骨缺损区域手术施用可注射的组合物。在某些实施方案中，可注射的组合物是全身施用的。在又一方面，本发明提供了在个体中治疗骨缺损的方法，包括向有此需要的个体施用包含OPAC群的可植入或可注射的组合物，其中所述OPAC在该个体中引起或促进骨或骨组织的形成，从而在该个体中治疗骨缺损。在某些实施方案中，骨缺损是(a)与癌症相关的溶骨性损害、(b)骨折、(c)需要融合的脊柱、(d)骨不连骨折、或(e)骨质疏松症。在某些实施方案中，溶骨性损害与多发性骨髓瘤、骨癌、或转移性癌相关。在某些实施方案中，骨折是骨不连骨折。在某些实施方案中，对个体施用包含OPAC群的可植入的组合物。在某些实施方案中，可植入的组合物被手术植入。在某些实施方案中，对个体施用包含OPAC群的可注射的组合物。在某些实施方案中，对骨缺损区域手术施用可注射的组合物。在某些实施方案中，可注射的组合物是全身施用的。3. 1 定义在包含OPAC的细胞群的上下文中，本发明使用的“基本由...组成”指该细胞群含例如至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少95%或至少95. 5%的0PAC。本发明使用的术语“0PAC”指下面5. 1部分中描述的细胞。当提及细胞时，本发明使用的“⑶200dim”，指该细胞在流式细胞术中对⑶200显示高于同种型对照不超过20-30%的荧光强度。如果群中的至少60%的细胞不表达⑶200或者是CD200dim的，而且细胞群作为一个整体在流式细胞计数测试中显示高于同种型对照不超过40-60%的⑶200荧光强度，那么本发明使用的细胞群是⑶200dim的。应注意⑶200dim 群可以包含CD200+(非dim)细胞。本发明使用的术语“SH2”指与标记⑶105上的表位结合的抗体。因此，被称作SH2+ 的细胞是⑶105+的。本发明使用的术语“SH3”和“SH4”指与标记⑶73上存在的表位结合的抗体。因此，被称作SH3+和/或SH4+的细胞是⑶73+的。本发明使用的术语“分离的0PAC”指基本与OPAC源自的组织例如绒毛膜中的其它非OPAC分离的0PAC。如果在例如OPAC的收集和/或培养期间，至少约50%、60%、70%、
1680%、90%、95%、或至少99%的与OPAC天然有联系的非OPAC从OPAC中被去除，那么该 OPAC是“分离的”。本发明使用的术语“分离的细胞群”指基本与细胞群源自的组织例如胎盘中的其它细胞分离的细胞群。如果在例如收集和/或培养期间，至少约50^^60^^70^^80%. 90%,95%或至少99%的与OPAC群或OPAC群源自的细胞天然有联系的细胞从OPAC群中被去除，那么该OPAC群是“分离的”。本发明使用的术语“胎盘干细胞”指源自哺乳动物胎盘的干细胞或前体细胞，无论其形态学、细胞表面标记、或原代培养后传代数目如何。但是，本发明使用的术语“胎盘干细胞”并不指滋养层。如果细胞保持干细胞的至少一种特性，例如，与一种或多种类型的干细胞相关的标记或基因表达谱；在培养中复制至少10-40次的能力，分化成全部三个胚层的细胞的能力；缺乏成体(即分化的)细胞特征等，那么细胞被认为是“干细胞”。术语“胎盘干细胞”和“胎盘源干细胞”可以交换使用。当特定标记可检测到时，本发明使用的细胞对该标记是“阳性的”。例如，OPAC对例如CD105是阳性的，因为对胎盘干细胞，CD105是可检测到的，其量可检测地高于背景(与例如同种型对照比较)。当某个标记可以用来将细胞与至少一种其它细胞类型区分开来时， 或当它存在或被细胞表达时可以用来筛选或分离该细胞时，细胞对该标记也是阳性的。类似的，当例如群中的至少50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%或95%的细胞表达某个标记时，细胞群对该标记是阳性的。本发明使用的“成骨细胞”是能够沉积羟磷灰石(骨的主要成分)或分化成能够沉积羟磷灰石的细胞的细胞。“成骨细胞”被特异性预期为包含通常称作成骨细胞或骨细胞的细胞。成骨胎盘贴壁细胞可以分化成可以沉积羟磷灰石的细胞的示范条件，参见下面 5. 1. 6部分。本发明使用的“基质”指特征是分散遍布在物质中的孔的三维物质。孔适合例如基质内的细胞生长，例如干细胞、0PAC、和/或成骨细胞。示范的基质包括但不限于β-磷酸三钙底物、β -磷酸三钙-胶原底物、胶原底物、磷酸钙底物、矿化的人胎盘胶原底物、透明质酸底物、和陶瓷底物。优选地，基质可以被基质的孔中存在的成骨细胞矿化。4.附图简要描述

图1 通过选择性附着获得的OPAC的基因表达。X轴=Iogltl相对定量碱性磷酸酶基因表达。X轴实验条件。图2 通过针对⑶34、⑶105和⑶200的选择性附着，获得的OPAC的免疫表型。LN 层粘连蛋白。VN:玻连蛋白。FN:纤连蛋白。C0L:胶原。10:10%胎牛血清。20 20%胎牛血清。Ctrl =OPAC在指明的表面涂层上培养6天。图3 通过选择性附着获得的OPAC的成骨标记的免疫表型。LN 层粘连蛋白。VN 玻连蛋白。FN:纤连蛋白。C0L:胶原。10:10%胎牛血清。20:20%胎牛血清。Ctrl =OPAC 在指明的表面涂层上培养6天。星号与⑶10+、⑶34_、⑶105+胎盘干细胞对照(水平线) 相比的显著差异。图4 通过选择性附着获得的OPAC的胚胎干细胞标记的免疫表型。LN 层粘连蛋白。VN 玻连蛋白。FN 纤连蛋白。COL 胶原。10 胎牛血清。20 :20%胎牛血清。Ctrl OPAC在指明的表面涂层上培养6天。上水平线SSEA-3的⑶10+、⑶34_、⑶105+胎盘干细胞表达；下水平线SSEA-4的⑶10+、⑶;34-、⑶105+胎盘干细胞表达。图5 通过选择性附着获得的OPAC的碱性磷酸酶(AP)活性。图6 培养扩增的OPAC的免疫表型。图7 培养扩增的OPAC的碱性磷酸酶活性。基本生长培养基。OS 成骨培养基。 ml 培养基 1-20% FBS (Hyclone)/a -MEM，包含 100 单位 /mL 青霉素、100 μ g/mL 链霉素、 2mM L-谷氨酰胺。m2 培养基2-间充质干细胞生长培养基(MSCGM ；Lonza)。m3 培养基 3-10% FBS (间充质干细胞限定 FBS，Stem Cell ^Technologies) / α-MEM，包含 100 单位 / mL、100 μ g/mL链霉素和2mM L-谷氨酰胺。图8 磁激活细胞分选后OPAC的免疫表型(⑶200，⑶105)。LN 层粘连蛋白。VN 玻连蛋白。FN:纤连蛋白。ml 培养基1-20% FBS (Hyclone)/a-MEM，包含100单位/mL青霉素、100 μ g/mL链霉素、2mM L-谷氨酰胺。m3 培养基3-10% FBS (间充质干细胞限定FBS， Stem Cell Technologies) / α-MEM，包含 100 单位/mL、100 μ g/mL 链霉素和 2mM L-谷氨酰胺。图9 磁激活细胞分选后⑶200+群和流过部分(包含⑶200_细胞)的碱性磷酸酶活性。LN:层粘连蛋白。VN:玻连蛋白。FN:纤连蛋白。ml 培养基1-20% FBS(Hyclone)/
0-|^11，包含100单位/1^青霉素、10(^8/1^链霉素、21111L-谷氨酰胺。m3 培养基3-10% FBS (间充质干细胞限定 FBS，StemCell Technologies) / α -MEM,包含 100 单位 /mL、100 μ g/ mL链霉素和2mM L-谷氨酰胺。基本在生长培养基中的AP表达。诱导的在成骨培养基中的AP表达。图10:集落形成单位-磁激活细胞分选后绒毛膜源的干细胞群的碱性磷酸酶(CFU-AP)活性。LN:层粘连蛋白。VN:玻连蛋白。FN:纤连蛋白。ml:培养基1-20% FBS (Hyclone)/a-MEM，包含 100 单位/mL 青霉素、100 μ g/mL 链霉素、2mM L-谷氨酰胺。m3 培养基 3-10% FBS (间充质干细胞限定 FBS，Stem Cell ^Technologies) / α -MEM，包含 100 单位/mL、100 μ g/mL链霉素和2mM L-谷氨酰胺。⑶200+情况是AP表达基本为零。图11 磁激活细胞分选后OPAC部分的总克隆形成。FN 纤连蛋白。ml 培养基
1-20%FBS (Hyclone) / α -MEM,包含 100 单位 /mL 青霉素、100 μ g/mL 链霉素、2mM L-谷氨酰胺。m3 培养基 3-10% FBS (间充质干细胞限定 FBS，Stem Cell ^Technologies) / α-MEM，包含 100 单位 /mLUOO μ g/mL 链霉素和 2mM L-谷氨酰胺。PDAC :CD10+、CD34\CD105+、CD200+ 的组织培养塑料制品贴壁胎盘多能细胞。图12 成骨刺激后，OPAC的可诱导的骨保护素分泌。图13 使用RayBiotech 507蛋白RayBio 生物素标记基抗体阵列在0PAC、 PDAC 、MSC和成纤维细胞中鉴定出的分泌的蛋白的列表。蛋白表达相对于内部阳性对照被分类为+(低)、++(中)、+++(高)。显示了骨形成蛋白标记(丨)或骨吸收蛋白标记 (“。图14 治疗组的骨组织形成的平均量，计分为0-4，4为最大量。图15 治疗组的头盖骨缺陷位点的骨矿物质密度。图16 在处死时通过用X-射线测量剩余缺陷得到的具有> 50%缺陷封闭的动物分布。图17 =OPAC和MSC对破骨细胞分化的影响。OC 破骨细胞。对照没有OPAC或MSC的 OPAC 禾口 MSC0图18 =OPAC和MSC对多发性骨髓瘤细胞的增殖的影响。OB 由MSC或PDAC在成骨条件下获得的成骨细胞或成骨细胞样细胞。MTT OD :MTT测试中的光学密度；较高的值表明多发性骨髓瘤细胞存活的程度较高。Con MM 来自27位人多发性骨髓瘤患者的多发性骨髓瘤细胞。图19 :0PAC在原代骨髓瘤SCID_rab小鼠中对骨矿物质密度的影响。对照仅PBS。 Pre-Rx =OPAC施用前的骨矿物质密度(BMD)。最终注射后8_16星期后的骨矿物质密度。 使用 PIXImus DEXA(GE Medical Systems LUNAR, Madison, WI)，测定植入的骨的骨矿物质密度(BMD)变化。图20 :0PAC在原代骨髓瘤小鼠中对人免疫球蛋白(hlg)水平的影响。Ig 小鼠血清中的人免疫球蛋白。图21 =OPAC在原代骨髓瘤SCID_rab小鼠中对骨量的影响。BMD 骨矿物质密度。 BMC 骨矿物质含量。5.详细描述5. 1成骨胎盘贴壁细胞(OPAC)5. 1. 1 特征5. 1. 1. 1物理和形态学特征本发明提供的成骨胎盘贴壁细胞(OPAC)，当在原代培养或细胞培养中培养时，附着到组织培养底物上，例如组织培养容器表面(例如组织培养塑料制品)。培养中的OPAC 一般呈现成纤维样星形外观，伴有许多胞质突起从中央细胞体延伸出来。但是，OPAC从形态学上可以与相同条件下培养的成纤维细胞区分开来，因为OPAC —般比成纤维细胞显示更多数量的这样的突起。形态学上，OPAC也可以与造血干细胞区分开来，造血干细胞在培养中一般呈现更圆的或鹅卵石的形态。5. 1. 1. 2细胞表面、分子和遗传标记在一个实施方案中，本发明提供了分离的OPAC(成骨胎盘贴壁细胞)，即分离的细胞，其是贴壁的、成骨的、和从绒毛膜分离的。在一个实施方案中，OPAC不是从绒毛膜裙分离的(无绒毛的)。本发明提供的OPAC和OPAC群表达了大量细胞和遗传标记，它们可以被用来识别和/或分离OPAC或包含OPAC的细胞群。本发明提供的OPAC和包含OPAC的细胞群包括直接从绒毛膜获得的OPAC和含OPAC的细胞群，例如原代培养物。OPAC群也包括例如培养中的两种或多种OPAC的群、在单细胞悬浮液中的OPAC群、和容器例如袋子中的群。 在一个具体的实施方案中，OPAC群是细胞培养中的大量OPAC。OPAC不是本领域已知和了解的滋养层、细胞滋养层、胚胎干细胞、或胚胎生殖细胞。本发明提供了分离的0PAC，其中OPAC是⑶200_或⑶200dim的。在一个具体的实施方案中，OPAC是成骨的。在一个具体的实施方案中，OPAC是骨保护素(0PG ；参见例如， GenBank登录号AAB53709)分泌阳性的。骨保护素是成骨细胞分泌的诱饵受体，其与破骨细胞分化因子特异性结合并抑制破骨细胞成熟。因此，OPAC促进骨形成并降低破骨细胞介导的骨量损失。在另一个具体的实施方案中，OPAC是RANKL(核因子κ B的受体活化剂) 表达阴性的。RANKL是激活破骨细胞的蛋白，破骨细胞参与了骨吸收。因此，OPAC不促进骨吸收。在另一个具体的实施方案中，OPAC是⑶200—或⑶200dim、且⑶105+的。在另一个具体的实施方案中，OPAC是α-平滑肌肌动蛋白表达阴性的，这通过例如免疫荧光染色确定。注意到来自胎盘的其它细胞群，例如，在美国专利申请公开号2005/0058631中描述的细胞，是α-平滑肌肌动蛋白阳性的。在另一个具体的实施方案中，OPAC满足α-平滑肌肌动蛋白的表达阴性、RANKL的表达阴性、或NG2 (神经/神经胶质细胞2硫酸软骨素蛋白聚糖)的表达阳性中的一项或多项。在另一个具体的实施方案中，OPAC是α-平滑肌肌动蛋白的表达阴性、RANKL的表达阴性、NG2的表达阳性、且骨保护素分泌阳性的。在另一个具体的实施方案中，OPAC显示可诱导的碱性磷酸酶活性。在一个更加具体的实施方案中， OPAC是⑶200_或⑶200dim、且⑶105+的，而且满足α -平滑肌肌动蛋白的表达阴性、RANKL 的表达阴性、NG2的表达阳性、骨保护素的表达阳性、或显示可诱导的碱性磷酸酶活性中的一项或多项。在另一个更加具体的实施方案中，OPAC是⑶200_或⑶200dim、且⑶105+的，而且同时α-平滑肌肌动蛋白的表达阴性、RANKL的表达阴性、NG2的表达阳性、骨保护素的表达阳性、并显示可诱导的碱性磷酸酶活性。OPAC的⑶200表达缺乏或低表达，把OPAC从其它组织培养塑料制品贴壁的胎盘源多能细胞中区分开来，例如PDAC ，例如，在Edinger等， 美国专利申请公开号2007/0275362中描述的胎盘多能细胞。在另一个具体的实施方案中，OPAC是SSEA3+或SSEA4+的。在一个更加具体的实施方案中，OPAC是SSEA3+且SSEA4+的。在另一个更加具体的实施方案中，OPAC是⑶200—或 ⑶200dim，且⑶105+、SSEA3+的，而且同时α -平滑肌肌动蛋白的表达阴性、RANKL的表达阴性、NG2的表达阳性、骨保护素的表达阳性，和/或显示可诱导的碱性磷酸酶活性。在另一个更加具体的实施方案中，OPAC是⑶200—或⑶200dim、且⑶105+、SSEA4+的，而且同时α-平滑肌肌动蛋白的表达阴性、RANKL的表达阴性、NG2的表达阳性、骨保护素的表达阳性或显示可诱导的碱性磷酸酶活性。在一个更加具体的实施方案中，OPAC是⑶200—或⑶200dim、 ⑶105+、SSEA3+、SSEA4+的，而且同时α -平滑肌肌动蛋白的表达阴性、RANKL的表达阴性、 NG2的表达阳性、骨保护素的表达阳性或显示可诱导的碱性磷酸酶活性。OPAC的SSEA3和 SSEA4表达提供了 OPAC与其它胎盘源细胞的区别，例如，在Hariri，美国专利号7，468，276 中描述的组织培养塑料制品贴壁胎盘干细胞。在某些实施方案中，当胎盘细胞群在允许矿化基质形成的条件下培养时，OPAC在所述群中促进矿化基质的形成。本发明也提供了包含OPAC的细胞群，其中该细胞群是⑶200_或⑶200dim的。因此，在一个实施方案中，本发明提供了包含OPAC的分离的细胞群，其中所述细胞群不是从绒毛膜裙分离的(无绒毛的)，而且其中所述细胞群是⑶200_或⑶200-的。在一个具体的实施方案中，细胞群基本由OPAC组成。在一个具体的实施方案中，所述细胞群是成骨的。 在另一个具体的实施方案中，所述细胞群是⑶200_且⑶105+的，这通过流式细胞术检测。 在另一个具体的实施方案中，所述细胞群是⑶200dim且⑶105+的，这通过流式细胞术检测。 在另一个具体的实施方案中，所述细胞群是α -平滑肌肌动蛋白的表达阴性、RANKL的表达阴性、NG2的表达阳性、和/或骨保护素分泌阳性的。在另一个实施方案中，所述细胞群是 α -平滑肌肌动蛋白的表达阴性、RANKL的表达阴性、NG2的表达阳性、且骨保护素分泌阳性的。在另一个具体的实施方案中，所述细胞群显示可诱导的碱性磷酸酶活性。在一个更加具体的实施方案中，所述群是⑶200_、⑶105+的或⑶200dim、⑶105+的，而且满足α -平滑肌肌动蛋白的表达阴性、RANKL的表达阴性、NG2的表达阳性、骨保护素的表达阳性或显示可诱导的碱性磷酸酶活性中的一项或多项。在一个更加具体的实施方案中，所述细胞群是 ⑶200_、⑶105+的或⑶200dim、⑶105+的；是α -平滑肌肌动蛋白的表达阴性、RANKL的表达阴性、NG2的表达阳性、骨保护素的表达阳性的；并显示可诱导的碱性磷酸酶活性。在另一个具体的实施方案中，所述细胞群是SSEA3+或SSEA4+的。在又一个实施方案中，所述群细胞是SSEA3+且SSEA4+的。在又一个实施方案中，所述细胞群是⑶200_和/ 或⑶200dim、⑶105+、⑶105+、SSEA3+的，而且同时α -平滑肌肌动蛋白的表达阴性、RANKL的表达阴性、NG2的表达阳性、骨保护素的表达阳性或显示可诱导的碱性磷酸酶活性。在另一个更加具体的实施方案中，所述细胞群是⑶200—或⑶200dim的，是⑶105+且SSEA4+的，而且同时α -平滑肌肌动蛋白的表达阴性、RANKL的表达阴性、NG2的表达阳性、骨保护素的表达阳性或显示可诱导的碱性磷酸酶活性。在另一个更加具体的实施方案中，所述细胞群是 CD20(T或0)200^的；是CD105+、SSEA3+、SSEA4+的，α -平滑肌肌动蛋白的表达阴性、RANKL 的表达阴性、NG2的表达阳性、骨保护素的表达阳性，和/或显示可诱导的碱性磷酸酶活性。在具体的实施方案中，所述群中的至少20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、 90%或95%的细胞是CD20(T的。本发明进一步提供了分离的OPAC群，其中通过如下步骤来生产所述群从胎盘中分离绒毛膜组织，其中所述绒毛膜组织不是绒毛膜裙组织(无绒毛的)；用组织破裂酶消化分离的绒毛膜组织，以获得包含OPAC的绒毛膜细胞群；和从所述绒毛膜细胞中分离所述 OPAC0在一个具体的实施方案中，组织破裂酶是胰蛋白酶、分散酶或胶原酶。在各种实施方案中，消化绒毛膜组织获得的细胞群内包含的绒毛膜干细胞占所述绒毛膜细胞群的至少约 10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、99%或至少 99. 5%0 包含OPAC的分离的细胞群，例如OPAC群，可以与其它细胞区分开来，例如，⑶200+ 非dim胎盘源贴壁细胞(本发明称作PDAC )，如在例如美国专利号7，468，276和7，255，879 以及美国专利公开号2007/02753621中描述的，其公开内容全文在此通过引用并入本发明，这通过例如基因谱显示。PDAC 被识别为例如来自胎盘或脐带的⑶10+、⑶34_、⑶105+、 ⑶200+非dim细胞，其附着到组织培养表面上，例如组织培养塑料制品上。PDAC 可以进一步表征为来自胎盘或脐带的⑶10+、⑶34_、⑶45_、⑶90+、⑶105+且⑶200+的细胞，其附着到组织培养表面上，例如组织培养塑料制品上。在一个具体的实施方案中，细胞群基本由OPAC 组成。 本发明描述的OPAC可以基于一个或多个基因的表达与PDAC 区分开来，这些基因的表达或表达程度相对于PDAC 对OPAC是特异性的。在一个实施方案中，例如，本发明提供了包含OPAC的细胞群，其中当OPAC和所述胎盘干细胞在相等条件下生长时，所述细胞群与不是滋养层或细胞滋养层的相等数目的贴壁CD200+非dim胎盘干细胞(PDAC )相比以可检测的较高水平(例如至少高两倍的水平)表达一个或多个基因，其中所述一个或多个基因包括BMP6(骨形态发生蛋白6 ；参见例如，GenBank登录号NM_001718)、⑶Hll (钙粘蛋白11，2型，成骨细胞钙粘蛋白；参见例如，GenBank登录号NM_001797)、C0L10A1 (胶原，X型，α 1 ；参见例如，GenBank登录号NM_000493)、C0L14A1 (胶原，XIV型，α 1 ；参见例如，GenBank登录号NM_021110)、C0L15A1 (胶原，XV型，α ；参见例如，GenBank登录号 NM_001855)、COLlAl (胶原，I 型，α 1 ；参见例如，GenBank 登录号 NM_000088)、C0L1A2 (胶原，I型，α2 ；参见例如，GenBank登录号NM_000089)、C0L3A1(胶原，III型，α 1 ；参见例如，GenBank登录号NM_000090)、C0L4A3 (胶原，IV型，α 3 ；参见例如，GenBank登录号 NM_000091)、C0L5A1 (胶原，V 型，α 1 ；参见例如，GenBank 登录号 NM_000093)、CSF3 (集落刺激因子3 (粒细胞)；参见例如，GenBank登录号NM_000759)、CTSK(组织蛋白酶K ；参见例如，GenBank登录号NM_000396)、IGFlR(胰岛素样生长因子1受体；参见例如，GenBank 登录号匪_00087幻、MINPPl (多重肌醇多磷酸组氨酸磷酸酶1 ；参见例如，GenBank登录号 NM_004897)、MMP2 (基质金属蛋白酶2 (也称作明胶酶A，72kDa明胶酶，72kDaIV型胶原酶)； 参见例如，GenBank登录号NM_004530)、MMP9 (基质金属肽酶9 (也称作明胶酶B，92kDa明胶酶，92kDa IV型胶原酶)；参见例如，GenBank登录号NM_004994) ,MSXl (msh同源框1 ；参见例如，GenBank登录号NM_002448)、SMADl (SMAD家族成员1 ；参见例如，GenBank登录号 ΝΜ_001003688)、SMAD3 (SMAD 家族成员 3 ；参见例如，GenBank 登录号 NM_005902)、TGFB3 (转化生长因子，β 3 ；参见例如，GenBank登录号NM_003239)、TGFBRl (转化生长因子，β受体1;参见例如，GenBank登录号ΝΜ_004612)和VEGFB (血管内皮生长因子B ；参见例如， GenBank登录号ΧΜ_001128909)中的一个或多个，或全部，这通过例如来自实时定量PCR的 Ct值来评估。在一个具体的实施方案中，细胞群基本由OPAC组成。在一个具体的实施方案中，细胞群基本由OPAC组成。在另一个实施方案中，本发明提供了包含OPAC的细胞群，其中当所述OPAC和所述胎盘干细胞在生长培养基中培养时，所述细胞群与不是滋养层或细胞滋养层的相等数目的贴壁⑶200+非dim胎盘干细胞相比以可检测的较高水平(例如至少高两倍的水平)表达一个或多个基因，其中所述一个或多个基因包括BMP3(骨形态发生蛋白3 ；参见例如，GenBank 登录号 NM_001201)、CDHl 1、C0L10A1、C0L14A1、C0L15A1、DMPl (牙本质基质酸性磷蛋白 1 ； 参见例如，GenBank登录号NG_008988)、DSPP (牙本质涎磷蛋白；参见例如，GenBank登录号 ΝΜ_014208)、ENAM (釉蛋白；参见例如，GenBank登录号NM_031889)、FGFR2 (成纤维细胞生长因子受体2 ；参见例如，GenBank登录号NM_000141) ,MMPlO (基质金属蛋白酶10 (基质分解素2)；参见例如，GenBank登录号NM_002425)、TGFB3、和/或TGFBRl中的一个或多个，或全部，这通过例如来自实时定量PCR的Ct值来评估。在一个具体的实施方案中，所述生长培养基是α MEM/20%胎牛血清，包含100单位/mL青霉素、100 μ g/mL链霉素和2mM L-谷氨酰胺。在一个具体的实施方案中，细胞群基本由OPAC组成。在另一个实施方案中，本发明提供了包含OPAC的细胞群，其中当所述OPAC和所述胎盘干细胞在成骨培养基中培养时，所述细胞群例如OPAC与不是滋养层或细胞滋养层的相等数目的贴壁CD200+非dim胎盘干细胞相比以可检测的较高水平(例如至少高两倍的水平)表达一个或多个基因，其中所述一个或多个基因包括AMBN(成釉蛋白(釉基质蛋白)；参见例如，GenBank登录号NM_031889)、BMP2 (骨形态发生蛋白2 ；参见例如，GenBank 登录号NM_001200)、CALCR(降钙素受体；参见例如，GenBank登录号NM_001742)、CDH11、 COLl IAl (胶原 XI 型，α ； NM_001854)、C0L14A1、C0L15A1、C0L2A1 (胶原 II 型，α 1 ；参见例如，GenBank 登录号 NM_001844)、CSF2 (集落刺激因子 2 ；NM_000758)、CSF3、DMPU DSPP, ENAM、FGF3、GDFlO (生长分化因子10 ；参见例如，GenBank登录号NM_004962)、IGFl (胰岛素样生长因子1 ；参见例如，GenBank登录号NM_000618)、ITGAl (整联蛋白，α 1 (CD49)；参见例如，GenBank 登录号 NM_181501)、ITGA2(整联蛋白，α 2 (CD49B)；参见例如，GenBank 登录号ΝΜ_002203)、ΜΜΡ10、ΜΜΡ8 (基质金属蛋白酶8 (中性粒细胞胶原酶)；参见例如，GenBank登录号NM_002424)、MMP9、PDGFA(血小板源生长因子A ；参见例如，GenBank登录号 XM_001126441)、SMAD1、TGFB3、TGFBR1 和 / 或 TGFBR2 (转化生长因子 β，受体 2 ；参见例如，GenBank登录号ΝΜ_0010Μ847)中的一个或多个，或全部，这通过例如来自实时定量PCR 的Ct值来评估。在一个具体的实施方案中，所述成骨培养基是α MEM/20%胎牛血清，包含 100单位/mL青霉素、100μ g/mL链霉素、2mM L-谷氨酰胺、50 μ g/mL抗坏血酸、和IOOnM地塞米松。在一个具体的实施方案中，细胞群基本由OPAC组成。在另一个实施方案中，本发明提供了包含OPAC的细胞群，其中不管所述OPAC和所述胎盘干细胞是在生长培养基中还是在成骨培养基中培养，所述细胞群例如OPAC与不是滋养层或细胞滋养层的相等数目的贴壁CD200+非dim胎盘干细胞相比以可检测的较高水平(例如至少高两倍的水平)表达一个或多个基因，其中所述一个或多个基因包括CDH11、 C0L14A1、C0L15A1、DMPl、DSPP, ENAM、MMP10、TGFB3 和 / 或 TGFBRl 中的一个或多个，或全部，这通过例如来自实时定量PCR的Ct值来评估。在一个具体的实施方案中，细胞群基本由OPAC组成。在另一个实施方案中，本发明提供了包含OPAC的细胞群，其中当所述OPAC和所述胎盘干细胞在生长培养基中培养时，所述细胞群例如OPAC与不是滋养层或细胞滋养层的相等数目的贴壁CD200+非dim胎盘干细胞相比以可检测的较低水平(例如至少低两倍的水平)表达一个或多个基因，其中所述一个或多个基因包括AHSG(a-2-HS-糖蛋白；参见例如，GenBank登录号匪_00162幻、ALPL (碱性磷酸酶，肝脏/骨/肾脏；参见例如，GenBank 登录号NM_000478)、EGF(表皮生长因子；参见例如，GenBank登录号NM_001963) ,FLTl (fms 相关的酪氨酸激酶1 (血管内皮生长因子/血管通透性因子受体)；参见例如，GenBank登录号NM_002019)、IGF2、ITGA2、ITGAM(整联蛋白，α M(补体成分3受体3亚基)；参见例如， GenBank登录号匪_00063幻、SCARBl (清道夫受体B类，成员1 ；参见例如，GenBank登录号 NM_005505)、S0X9(SRY(性别决定区 Y)-盒 9 ；参见例如，GenBank 登录号匪_000；346)、TNF、 TWISTl (扭曲同系物1 ；以前称作睑裂狭小、倒转型内眦赘皮和上睑下垂3，尖头并指趾畸形 3 ；参见例如，GenBank登录号NM_000474) ,VCAMl (血管细胞粘附分子1 ；参见例如，GenBank 登录号NM_001078)和/或VDR中的一个或多个，或全部，这通过例如来自实时定量PCR的 Ct值来评估。在一个具体的实施方案中，所述生长培养基是成骨培养基，是αΜΕΜ/20%胎牛血清，包含100单位/mL青霉素、100 μ g/mL链霉素和2mM L-谷氨酰胺。在一个具体的实施方案中，细胞群基本由OPAC组成。在另一个实施方案中，本发明提供了包含OPAC的细胞群，其中当所述OPAC和所述胎盘干细胞在成骨培养基中培养时，所述细胞群例如OPAC与不是滋养层或细胞滋养层的相等数目的贴壁CD200+非dim胎盘干细胞相比以可检测的较低水平(例如至少低两倍的水平)表达一个或多个基因，其中所述一个或多个基因包括BGN、COLl IAl、COMP (软骨寡聚基质蛋白)、FGF1和/或VCAMl中的一个或多个，或全部，这通过例如来自实时定量PCR的Ct 值来评估。在一个具体的实施方案中，所述成骨培养基是成骨培养基，是α MEM/20%胎牛血清，包含100单位/mL青霉素、100 μ g/mL链霉素、2mM L-谷氨酰胺、50 μ g/mL抗坏血酸、和 IOOnM地塞米松。在一个具体的实施方案中，细胞群基本由OPAC组成。在另一个实施方案中，本发明提供了包含OPAC的细胞群，其中不管所述OPAC和所述胎盘干细胞是在生长培养基中还是在成骨培养基中培养，所述细胞群例如OPAC与不是滋养层或细胞滋养层的相等数目的贴壁CD200+非dim胎盘干细胞相比以可检测的较低水平(例如至少低两倍的水平)表达VCAM1，这通过例如来自实时定量PCR的Ct值来评估。 在一个具体的实施方案中，细胞群基本由OPAC组成。基因谱也显示，包含OPAC的分离细胞群例如OPAC群，可以与间充质干细胞例如骨髓源间充质干细胞区分开来。在一个实施方案中，例如，本发明提供了包含OPAC的细胞群，其中当OPAC和所述干细胞在相等条件下生长时，所述细胞群例如OPAC与相等数目的骨髓源间充质干细胞相比以可检测的较高水平(例如至少高两倍的水平)表达一个或多个基因，其中所述一个或多个基因包括BMP4、BMP6、CD36、CDHlU C0L14A1、C0L15A1、 COLlAl、C0L3A1、C0L5A1、CSF2、CTSK、FGF2、FGFRl、FLTl、ITGAl、MINPPl、MMP9、MSXl、PDGFA、 SERPINH1、TGFB3和TGFBRl中的一个或多个，或全部，这通过例如来自实时定量PCR的Ct值来评估。在一个具体的实施方案中，细胞群基本由OPAC组成。在另一个实施方案中，本发明提供了包含OPAC的细胞群，其中当OPAC和所述间充质干细胞在生长培养基中培养时，所述细胞群例如OPAC与相等数目的骨髓源间充质干细胞相比以可检测的较高水平(例如至少高两倍的水平)表达一个或多个基因，其中所述一个或多个基因包括 BMP4、CALCR、CD36、CDHl 1、C0L12A1、C0L14A1、C0L15A1、C0L3A1、C0L5A1、 DMPl、DSPP, FLTl、MSXl、PDGFA, TGFB3、TGFBRl 和 / 或 TUFTl 中的一个或多个，或全部，这通过例如来自实时定量PCR的Ct值来评估。在一个具体的实施方案中，所述生长培养基是成骨培养基，是α MEM/20%胎牛血清，包含100单位/mL青霉素、100 μ g/mL链霉素和2mM L-谷氨酰胺。在一个具体的实施方案中，细胞群基本由OPAC组成。在另一个实施方案中，本发明提供了包含OPAC的细胞群，其中当OPAC和所述间充质干细胞在成骨培养基中培养时，所述细胞群例如OPAC与相等数目的骨髓源间充质干细胞相比以可检测的较高水平(例如至少高两倍的水平)表达一个或多个基因，其中所述一个或多个基因包括 AMBN、CALCR、COL14A1、COL15A1、CSF3、DMP1、DSPP、ITGA1、ITGA2、MMP10、 MMP9、MSXl、PDGFA, TGFBl、TGFB3、TGFBRl 和 / 或 TGFBR2 中的一个或多个，或全部，这通过例如来自实时定量PCR的Ct值来评估。在一个具体的实施方案中，所述成骨培养基是成骨培养基，是α MEM/20%胎牛血清，包含100单位/mL青霉素、100 μ g/mL链霉素、2mM L-谷氨酰胺、50 μ g/mL抗坏血酸、和IOOnM地塞米松。在一个具体的实施方案中，细胞群基本由 OPAC组成。在一个具体的实施方案中，细胞群基本由OPAC组成。在另一个实施方案中，本发明提供了包含OPAC的细胞群，其中不管所述OPAC和所述间充质干细胞是在生长培养基中还是在成骨培养基中培养，所述细胞群例如OPAC与相等数目的骨髓源间充质干细胞相比以可检测的较高水平(例如至少高两倍的水平)表达一个或多个基因，其中所述一个或多个基因包括CALCR、C0L14A1、C0L15A1、DMPl、DSPP、MSXl、 PDGFA, TGFB3和/或TGFBRl中的一个或多个，或全部，这通过例如来自实时定量PCR的Ct 值来评估。在另一个具体的实施方案中，细胞群基本由OPAC组成。在另一个实施方案中，本发明提供了包含OPAC的细胞群，其中当OPAC和所述间充质干细胞在生长培养基中培养时，所述细胞群例如OPAC与相等数目的骨髓源间充质干细胞相比以可检测的较低水平(例如至少低两倍的水平)表达一个或多个基因，其中所述一个或多个基因包括ALPL、BGLAP、IGF2、ITGA2、ITGAM、SCARBl和/或SOXl中的一个或多个， 或全部，这通过例如来自实时定量PCR的Ct值来评估。在一个具体的实施方案中，所述生
24长培养基是成骨培养基，是α MEM/20%胎牛血清，包含100单位/mL青霉素、100 μ g/mL链霉素和2mM L-谷氨酰胺。在另一个实施方案中，本发明提供了包含OPAC的细胞群，其中当OPAC和所述间充质干细胞在成骨培养基中培养时，所述细胞群与相等数目的骨髓源间充质干细胞相比以可检测的较低水平(例如至少低两倍的水平)表达一个或多个基因，其中所述一个或多个基因包括 AHSG、ALPL, BGLAP, BGN、BMP3、BMP5、CD36、C0L10A1、COLl IAl、 C0L12A1、C0L2A1、C0L4A3、COMP, EGF、FGF1、FGFR2、IGF2、MMP8、PHEX, RUNX2 (runt-相关转录因子 2 ；参见例如，GenBank 登录号 NM_001015051)、SCARBl、SOXl、VCAMl 和 / 或 VEGFB 中的一个或多个，或全部，这通过例如来自实时定量PCR的Ct值来评估。在一个具体的实施方案中，所述成骨培养基是成骨培养基，是α MEM/20%胎牛血清，包含100单位/mL青霉素、 100 μ g/mL链霉素、2mM L-谷氨酰胺、50 μ g/mL抗坏血酸、和IOOnM地塞米松。在一个具体的实施方案中，细胞群基本由OPAC组成。在另一个实施方案中，本发明提供了包含OPAC的细胞群，其中不管所述OPAC和所述间充质干细胞是在生长培养基中还是在成骨培养基中培养，所述细胞群例如OPAC与相等数目的骨髓源间充质干细胞相比以可检测的较低水平(例如至少低两倍的水平)表达一个或多个基因，其中所述一个或多个基因包括ALPL、BGLAP、IGF2、SCARBl和/或S0X9中的一个或多个，或全部，这通过例如来自实时定量PCR的Ct值来评估。在另一个具体的实施方案中，细胞群基本由OPAC组成。在另一个实施方案中，本发明提供了包含OPAC的细胞群，其中不管所述0PAC、所述胎盘干细胞、和所述骨髓源间充质干细胞是在生长培养基中还是在成骨培养基中培养， 所述细胞群例如OPAC与相等数目的贴壁CD200+非dim胎盘干细胞和相等数目的骨髓源间充质干细胞相比以可检测的较高水平(例如至少高两倍的水平)表达一个或多个基因，其中所述一个或多个基因包括C0L14A1、C0L14A2、DMP、DSPP, TGFB3和/或TGFBRl中的一个或多个，或全部，这通过例如来自实时定量PCR的Ct值来评估。在另一个具体的实施方案中，细胞群基本由OPAC组成。基因谱也确认，包含OPAC的分离的细胞群例如OPAC群可以与人真皮成纤维细胞区分开来。在一个实施方案中，例如，本发明提供了包含OPAC的细胞群，其中当OPAC和所述成纤维细胞在相等条件下生长时，所述细胞群与相等数目的真皮成纤维细胞相比以可检测的较高水平(例如至少高两倍的水平)表达一个或多个基因，其中所述一个或多个基因包括 BMP4、BMP6、CDHl 1、C0L14A1、C0L15A1、COLlAl、C0L3A1、C0L5A1、FLT1、IGF1R、ITGAl、 MINPPl、PDGFA,SERPINH1、SMAD3、TGFBl、TGFB2、TGFB3、TGFBRl、TNF、TUFTl、VCAMl 和 VEGFA 中的一个或多个，或全部，其中这些基因在OPAC中的表达比在成纤维细胞中要高，这通过例如来自实时定量PCR的Ct值来评估。在一个具体的实施方案中，细胞群基本由OPAC组成。在另一个实施方案中，本发明提供了包含OPAC的细胞群，其中在所述细胞群中， 例如在OPAC中，一个或多个基因在成骨培养基中的表达相对于在生长培养基的表达的增加，比在相等数目的贴壁CD200+非dim胎盘干细胞中所述一个或多个所述基因在成骨培养基中的表达相对于在生长培养基中的表达的增加，至少高十倍，其中所述贴壁CD200+胎盘干细胞不是滋养层或细胞滋养层，而且其中所述一个或多个基因包括BMP2、CSF3、ITGA2、 MMP9、MMP10、和/或TGFB2中的一个或多个，或全部。在一个具体的实施方案中，细胞群基本由OPAC组成。在另一个实施方案中，本发明提供了包含OPAC的细胞群，其中在所述细胞群中， 例如在OPAC中，一个或多个基因在成骨培养基中的表达相对于在生长培养基中的表达的增加，比在相等数目的贴壁CD200+非dim胎盘干细胞中所述一个或多个所述基因在成骨培养基中的表达相对于在生长培养基中的表达的增加，至少低十倍，其中所述贴壁 ⑶200+非dim胎盘干细胞不是滋养层或细胞滋养层，而且其中所述一个或多个基因包括 COLlAU COLlIAU C0L4A3、C0L5A1、COMP(软骨寡聚基质蛋白；参见例如，GenBank登录号 NM_000095)、CTSK、FGFl (成纤维细胞生长因子1 ；参见例如，GenBank登录号NM_000800)、 和/或FGFR2中的一个或多个，或全部。在一个具体的实施方案中，细胞群基本由OPAC组成。在另一个实施方案中，本发明提供了包含OPAC的细胞群，其中在所述细胞群中， 例如在OPAC中，一个或多个基因在成骨培养基中的表达相对于在生长培养基中的表达的增加，比在相等数目的骨髓源间充质干细胞中所述一个或多个所述基因在成骨培养基中的表达相对于在生长培养基中的表达的增加，至少高十倍，而且其中所述一个或多个基因包括〇5 3、16 2、叮642、叮6々3、匪 9、匪 10、和/或16 82中的一个或多个，或全部。在一个具体的实施方案中，细胞群基本由OPAC组成。在另一个实施方案中，本发明提供了包含OPAC的细胞群，其中在所述细胞群中， 例如在OPAC中，一个或多个基因在成骨培养基中的表达相对于在生长培养基中的表达的增加，比在相等数目的骨髓源间充质干细胞中所述一个或多个所述基因在成骨培养基中的表达相对于在生长培养基中的表达的增加，至少低十倍，而且其中所述一个或多个基因包括ALPL(碱性磷酸酶，肝脏/骨 / 肾脏)、CD36、C0L10A1、C0L11A1、C0L12A1、C0L1A1、C0L4A3、 0)10\0^106 1、和/或？6 1 2中的一个或多个，或全部。在一个具体的实施方案中，细胞群基本由OPAC组成。在另一个实施方案中，本发明提供了包含OPAC的细胞群，其中在所述细胞群中， 例如在OPAC中，一个或多个基因在成骨培养基中的表达相对于在生长培养基中的表达的增加，比在相等数目的成纤维细胞中所述一个或多个所述基因在成骨培养基中的表达相对于在生长培养基中的表达的增加，至少高十倍，而且其中所述一个或多个基因包括BMP2、 CSF2、CSF3、IGFU ITGA2、MMP9和/或MMPlO中的一个或多个，或全部。在一个具体的实施方案中，细胞群基本由OPAC组成。在另一个实施方案中，本发明提供了包含OPAC的细胞群，其中在所述细胞群中， 例如在OPAC中，一个或多个基因在成骨培养基中的表达相对于在生长培养基中的表达的增加，比在相等数目的成纤维细胞中所述一个或多个所述基因在成骨培养基中的表达相对于在生长培养基中的表达的增加，至少低十倍，而且其中所述一个或多个基因包括BMP4、 0^12々1、0)1^、？6 1、和/或匪 8中的一个或多个，或全部。在一个具体的实施方案中，细胞群基本由OPAC组成。在另一个实施方案中，本发明提供了包含OPAC的细胞群，例如OPAC群，其中编码基质金属肽酶9 (MMP9)的基因在所述OPAC中在成骨培养基中被诱导时与MMP9在生长培养基中的表达的比值，和所述MMP9在所述成骨培养基中被诱导时与MMP9在所述生长培养基中的表达的比值相比，至少大2、3、4或5个数量级，这通过例如来自实时定量PCR的Ct值来评估。在另一个实施方案中，本发明提供了包含OPAC的细胞群，例如OPAC群，其中所述群与相等数目的贴壁CD200+非dim胎盘干细胞相比至少高十倍地表达一个或多个基因，其中所述一个或多个基因是CHRD (腱蛋白；参见例如，GenBank登录号NM_003741)、⑶F7 (生长分化因子7 ；参见例如，GenBank登录号NM_182828)、IGFBP3 (胰岛素样生长因子结合蛋白 3 ；参见例如，GenBank登录号NM_000598)、和/或INHA(抑制素α ；参见例如，GenBank登录号ΝΜ_002191)。在另一个实施方案中，本发明提供了包含OPAC的细胞群，例如OPAC群， 其中所述群与相等数目的贴壁CD200+(非dim)胎盘干细胞相比以至少低十倍的水平表达 TGFB2。在其他实施方案中，本发明提供了包含OPAC的细胞群，例如OPAC群，其中OPAC表达α -平滑肌肌动蛋白，这通过免疫荧光染色可检测到，而且其中所述细胞与相等数目的骨髓源间充质干细胞相比以大约相同水平或增加的水平表达纤连蛋白-1基因(FNl)和/ 或 TGF- β 2 基因(TGFB2)。这些基因的表达水平可以用来确认OPAC群的身份，以识别包含至少大量OPAC的细胞群等。OPAC群可以是无性系的，例如由单一 OPAC扩增的OPAC群，或混合的OPAC群，例如仅包含由多个OPAC扩增的OPAC的细胞群，或包含OPAC和至少一种其它细胞类型的细胞群。这些基因的表达水平可以用来筛选OPAC的群。例如，如果在来自细胞群的样本中这些基因中的一个或多个的表达比在相等间充质干细胞群中的表达显著升高，那么可以筛选细胞例如克隆扩增的细胞的群。这样的筛选可以对来自大量胎盘干细胞或绒毛膜干细胞群的群，来自大量其身份未知的细胞群的群等。OPAC和包含OPAC的细胞群，可以根据一个或多个这样的基因的表达水平与所述一个或多个基因在间充质干细胞对照中的表达水平相比较来筛选。在一个实施方案中，所述一个或多个基因在包含相等数目间充质干细胞的样本中的表达水平被用作对照。在另一个实施方案中，对在某些条件下测试的0PAC，对照是代表所述条件下所述一个或多个基因在间充质干细胞中的表达水平的数值。OPAC和包含OPAC的细胞群也可以根据一种或多种分泌的蛋白的表达与对照(例如胎盘干细胞、间充质干细胞或成纤维细胞)中的表达水平相比较来筛选。在一个实施方案中，根据核心蛋白聚糖、表皮调节素、IGFBP-3、IGFBP-6、IL-2 Ra、IL-17RC、IL-27、潜在的 TGF-β 结合蛋白 1 (LTBP)、NCAM-I、Smad4、TFPI、TGF-β R1/ALK5 和 ΤΙΜΡ-2 中的一种或多种的分泌，OPAC可以与胎盘干细胞、间充质干细胞或成纤维细胞区分开来，与贴壁 CD200+(非dim)胎盘干细胞、间充质干细胞或成纤维细胞相比，它们是OPAC所独有的。在另一个实施方案中，由OPAC但不由PDAC 分泌的蛋白包括一种或多种组织因子、卵泡抑素样 1、IGF-IIR,sFRP-4 和 TSG-6。上面描述的OPAC的分离的群和OPAC群一般可以包含大约、至少、或不超过 IX IO5,5 X IO5UX IO6,5 X IO6UX IO7,5 X IO7UX IO8,5 X IO8UX 10\5 X 10\1X IO10, 5 X ΙΟ10、IX IO11 或更多的 OPAC05. 1. 1.3在培养中生长OPAC的生长，和任意哺乳动物细胞一样，部分取决于选择供生长的特定培养基。在
27最适条件下，OPAC典型地在1-3天中数目倍增。在培养期间，本发明提供的OPAC在培养中附着到底物上，例如组织培养容器表面(例如，组织培养皿塑料制品、纤连蛋白涂层的塑料制品等)上，并形成单层。5. 1. 2获得OPAC的方法5. 1. 2. 1细胞收集组合物本发明进一步提供了收集和分离OPAC的方法。一般地，OPAC是使用生理学可接受的溶液例如细胞收集组合物从绒毛膜获得的。细胞收集组合物在美国申请公开号 2007-0190042中详细描述，其公开内容全文通过引用并入本发明。细胞收集组合物可以包含任何适合收集和/或培养细胞例如OPAC的生理学可接受的溶液，例如盐水溶液(例如，磷酸盐缓冲盐水、Kreb' s溶液、改良的Kreb' s溶液、 Eagle' s 溶液、0. 9% NaCl 等)、培养基(例如 DMEM、H. DMEM 等)等。细胞收集组合物可以包含一种或多种成分，其有利于贮存0PAC，即从收集的时间到培养的时间防止OPAC死亡、或延迟OPAC的死亡、降低细胞群中死亡的OPAC数目等。这样的成分可以是例如凋亡抑制剂(例如，半胱天冬酶抑制剂或JNK抑制剂)；血管扩张剂(例如，硫酸镁、抗高血压药物、心房钠尿肽(ANP)、促肾上腺皮质激素、促肾上腺皮质激素释放激素、硝普钠、胼苯哒嗪、三磷酸腺苷、腺苷、吲哚美辛或硫酸镁、磷酸二酯酶抑制剂等)；坏死抑制剂(例如，2-(1Η-吲哚-3-基)-3-戊基氨基-马来酰亚胺、吡咯烷二硫代氨基甲酸酯、或氯硝西泮)；TNF-α抑制剂；和/或载氧全氟化碳(例如，全氟辛基溴、全氟癸基溴
寸J ο细胞收集组合物可以包含一种或多种组织降解酶，例如，金属蛋白酶、丝氨酸蛋白酶、中性蛋白酶、核糖核酸酶、或脱氧核糖核酸酶等。这样的酶包括但不限于胶原酶(例如， 胶原酶I、II、III或IV，来自溶组织梭菌(Clostridium histolyticum)的胶原酶等)；分散酶、嗜热菌蛋白酶、弹性蛋白酶、胰蛋白酶、LIBERASE、透明质酸酶等。细胞收集组合物可以包含杀菌或抑菌有效量的抗生素。在某些非限制性实施方案中，抗生素是大环内酯类(例如妥布霉素)、头孢菌素(例如，头孢氨苄、头孢拉定、头孢呋辛、头孢丙烯、头孢克洛、头孢克肟或头孢羟氨苄)、克拉霉素、红霉素、青霉素(例如青霉素 V)或喹诺酮(例如，氧氟沙星、环丙沙星或诺氟沙星)、四环素、链霉素等。在一个特定的实施方案中，抗生素对革兰氏⑴和/或革兰氏㈠细菌，例如，铜绿假单胞菌O^eudomonas aeruginosa) ^^^^ ! (Staphylococcus aureus)生。细胞收集组合物也可以包含一种或多种以下化合物腺苷(约ImM到约50mM)； D-葡萄糖(约20mM到约IOOmM)；镁离子(约ImM到约50mM)；分子量大于20，000道尔顿的大分子，在一个实施方案中，以足以保持内皮完整和细胞生存能力的量存在(例如，合成的或天然存在的胶体，多糖例如葡聚糖或聚乙二醇，以约25g/l到约100g/l、或约40g/l到约60g/l存在)；抗氧化剂(例如，丁基羟基苯甲醚、丁基羟基甲苯、谷胱甘肽、维生素C或维生素E，以约25 μ M到约100 μ M存在)；还原剂(例如，N-乙酰半胱氨酸，以约0. ImM到约5mM存在)；防止钙进入细胞的药剂(例如，异搏定，以约2μΜ到约25μΜ存在)；硝酸甘油(例如，约0.05g/L到约0.2g/L)；抗凝剂，在一个实施方案中，以足以帮助防止残留血凝结的量存在(例如，肝素或水蛭素，以浓度约1000单位/1到约100，000单位/1存在)；或包含氨氯吡咪的化合物(例如，氨氯吡咪、乙基异丙基氨氯吡咪、六亚甲基氨氯吡咪、二甲基氨氯吡咪或异丁基氨氯吡咪，以约1. 0 μ M到约5 μ M存在)。5. 1. 2. 2胎盘的收集和处理一般地，人类胎盘在产后排出不久后回收。在一个优选的实施方案中，胎盘在患者知情同意后，且在取得患者的完整病史并与胎盘相关联后，从患者处回收。优选地，病史延续到分娩以后。这样的病史可以用来协调由其分离的绒毛膜或OPAC的后续应用。例如， 根据病史，OPAC可以作为个体化药物，用于与获得绒毛膜的胎盘相关联的婴儿，或婴儿的双亲、兄弟姐妹或其它亲属。在某些实施方案中，在回收OPAC前，从将要去除绒毛膜的胎盘中去除脐带血和胎盘血。在某些实施方案中，分娩后，回收胎盘中的脐带血。胎盘可以提交给常规脐带血回收程序。典型地使用针或插管，在重力的帮助下将胎盘放血(参见例如，Anderson，美国专利号5，372，581 ；Hessel等，美国专利号5，415，665)。针或插管通常放置在脐静脉中，而且胎盘可以被轻揉以帮助从胎盘中排出脐带血。这样的脐带血回收可以被商业执行，例如， LifeBank USA，Cedar Knolls, N. J. , ViaCord, Cord Blood Registry and Cryocell。优选地，胎盘被重力排空，不需要进一步操作，使得脐带血回收期间，组织破坏最小化。典型地，将胎盘从分娩或生育室运输到另一场所，例如实验室，以回收脐带血和收集细胞。胎盘优选在无菌隔热的运输设备中运输(将胎盘温度保持在20-28°C之间)，例如，将夹紧了近端脐带的胎盘放置在无菌的带拉链锁的塑料袋中，然后将其放置在隔热容器中。在另一个实施方案中，在脐带血收集试剂盒中运输胎盘，基本如2005年9月19日提交的未决的美国专利申请号11/230,760中所述。优选地，在分娩四到二十四小时后，将胎盘送达实验室。在某些实施方案中，在脐带血回收前将近端脐带夹紧，优选地，将插入到胎盘面内4-5cm(厘米)处夹紧。在其它实施方案中，在脐带血回收后、胎盘的进一步处理前， 夹紧近端脐带。在OPAC收集前，胎盘可以在室温或5°C到25°C (摄氏度)温度下，在无菌条件下贮存。在灌注胎盘以去除任何残留的脐带血前，胎盘可以贮存比四十八小时更长的时间，而且优选地贮存四到二十四小时的时间。胎盘优选地在抗凝溶液中贮存，温度5°C到25°C (摄氏度)。适合的抗凝溶液是本领域熟知的。例如，肝素或华法林钠溶液可以被使用。在一个优选的实施方案中，抗凝溶液包含肝素溶液(例如，w/V，l 1000溶液中)。放过血的胎盘优选地在OPAC收集前贮存不超过36小时。5. 1. 2. 3绒毛膜组织的物理破坏和酶消化在一个实施方案中，通过器官的物理破坏，例如酶消化，从哺乳动物胎盘收集 OPAC0例如，当与本发明提供的细胞收集组合物接触时，绒毛膜或其一部分可以被例如压碎、剪切、剁碎、切丁、切块、浸渍等，并将得到的组织随后用一种或多种酶消化。绒毛膜或其一部分也可以被物理破坏并用一种或多种酶消化，并然后将得到的材料浸入细胞收集组合物中，或与其混合。可以使用任何物理破坏方法，只要该破坏方法让所述器官中留下大量、更加优选地大多数、而且更加优选地至少约60%、70%、80%、90%、95%、98%、或99% 的存活细胞，这通过例如台盼蓝排除法确定。典型地，OPAC可以通过破坏小块绒毛膜获得， 例如，体积约 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、200、300、400、500、 600、700、800、900或约1000立方毫米的胎盘组织块。优选的细胞收集组合物包含一种或多种组织破裂酶。绒毛膜的酶消化优选地使用酶的组合，例如基质金属蛋白酶和中性蛋白酶的组合，例如胶原酶和分散酶的组合。在其他实施方案中，绒毛膜组织的酶消化使用基质金属蛋白酶、中性蛋白酶和供消化透明质酸的粘液分解酶的组合，例如胶原酶、分散酶、和透明质酸酶的组合，或LIBERASE (Boehringer Mannheim Corp. , Indianapolis, Ind.)和透明质酸酶的组合。可以用来破坏绒毛膜组织的其它酶包括木瓜蛋白酶、脱氧核糖核酸酶、丝氨酸蛋白酶，例如胰蛋白酶、糜蛋白酶、或弹性蛋白酶。丝氨酸蛋白酶可以被血清中的α 2微球蛋白抑制，因此消化使用的介质通常不含血清。EDTA和脱氧核糖核酸酶一般在酶消化程序中被使用，以增加细胞回收的效率。消化物(由酶消化得到的组织和细胞)优选地被稀释，以避免OPAC被捕获在粘性消化内。组织消化酶的典型浓度包括例如，胶原酶I和胶原酶IV :50-200U/mL,分散酶 1-lOU/mL，弹性蛋白酶10-100U/mL。蛋白酶可以组合使用，即两种或多种蛋白酶在同一个消化反应中使用，或者可以相继使用，以释放0PAC。例如，在一个实施方案中，绒毛膜组织首先用适量的2mg/ml胶原酶I消化30分钟，接着用0. 25%胰蛋白酶消化，37°C，10分钟。丝氨酸蛋白酶优选地在其它酶使用后连续地使用。在一个具体的实施方案中，OPAC如下获得从绒毛膜组织中分离羊膜；剁碎绒毛膜组织，例如剁碎成大约Imm3的块；在分散酶II中，例如约1、2、3、4或5U/mL，例如2. 4U/ mL，消化组织足够时间，例如约1小时；用约100、200、300、400或500U/mL胶原酶II，例如约270U/ml，消化足够时间，例如约1小时，接着是酶中和，收集单一细胞，并在合适的培养基中培养绒毛膜细胞，例如20% FBS/ α MEM。在另一个实施方案中，在用细胞收集组合物分离干细胞之前，可以通过向包含干细胞的细胞收集组合物中、或向破坏和/或消化组织的溶液中添加螯合剂，例如，乙二醇双 (2-氨基乙基醚)-N，N，N' N'-四乙酸(EGTA)或乙二胺四乙酸(EDTA)进一步破坏组织。应该理解，当完整绒毛膜或绒毛膜的一部分包含胎儿和母体双方的细胞时，收集到的OPAC可以包含源自胎儿和母体双方来源的OPAC的混合。当绒毛膜的一部分不包含或包含可以忽略数目的母体细胞(例如羊膜)时，收集到的OPAC将包含几乎专属于胎儿的胎盘细胞。在一个实施方案中，OPAC如下从绒毛膜组织分离。获得并剁碎绒毛膜组织，例如剁碎成大约l_2mm3的块。剁碎的组织用分散酶II消化，浓度例如约lU/mL到约10U/mL，例如 2. 4U/mL，直到消化完成，例如，在37°C消化1小时。消化的组织然后用胶原酶II消化，例如约100U/mL到约1000U/mL，例如约27U/mL，直到消化完成，例如，在37°C消化约1小时。通过离心收集细胞，洗涤，在玻连蛋白涂层或层粘连蛋白涂层的组织培养容器上培养，在10% FBS/DMEM或20% FBS/ α MEM中培养大约6天。在6天的培养中，去除未贴壁的细胞，让贴壁细胞增殖。当细胞达到约80%到90%的融合时，使用例如胰蛋白酶，移走细胞并转移到玻连蛋白涂层或层粘连蛋白涂层的组织培养容器中。当细胞在层粘连蛋白涂层的容器上初代培养时，转移到层粘连蛋白涂层的培养容器中是优选的；类似地，当细胞在玻连蛋白涂层的容器上初代培养时，转移到玻连蛋白涂层的培养容器中是优选的。细胞在转移到第二块板前任选地冷冻贮存。细胞通过例如流式细胞术分析，并确定为例如⑶34_、OT105+、⑶200_和 /或⑶200-的，碱性磷酸酶(AP)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和骨保护素(OP)阳性的。因此，一方面，本发明提供了分离成骨胎盘贴壁细胞(OPAC)的方法，包括连续地用分散酶II然后用胶原酶II消化绒毛膜组织，以产生细胞群；在第一个玻连蛋白涂层的表
30面或层粘连蛋白涂层的表面培养所述细胞群约六天，其中所述细胞群包含贴壁细胞和未贴壁细胞；和去除未贴壁细胞；将贴壁细胞转移到第二个玻连蛋白涂层的表面或层粘连蛋白涂层的表面，其中所述贴壁细胞是0PAC。在具体的实施方案中，所述OPAC是CD34_、CD105+、 ⑶200dim、AP+、α -SMA+和OP+中的一项或多项的。在其他实施方案中，OPAC具有任意本发明别处描述的细胞或遗传特征。5. 1.3 OPAC 的培养5.1.3.1 培养基分离的OPAC或OPAC群可以用来起始或接种细胞培养。细胞一般被转移到无菌组织培养容器中。容器优选地用玻连蛋白、纤连蛋白或两者同时涂层。在某些其它的实施方案中，组织培养容器是未涂层的，或涂层了细胞外基质或配体例如层粘连蛋白、胶原(例如天然的或变性的)、明胶、鸟氨酸、和/或细胞外膜蛋白(例如，MATRIGEL(BD Discovery Labware, Bedford，Mass. )) 0优选地，OPAC如下获得。通过消化绒毛膜组织，例如用分散酶II和胶原酶II如上文所述消化，获得的包含OPAC的绒毛膜细胞在用胶原、玻连蛋白、或层粘连蛋白涂层的组织培养表面上初代培养，例如在20% FBS/ α MEM中约1_6天，接着或同时去除未贴壁的细胞；未贴壁的细胞可以去除数次，例如培养3小时、1天和6天后，或去除一次，例如培养6 天后。选择性附着后，筛选0PAC，通过例如使用对⑶200的抗体去除⑶200+(非dim)细胞， 留下CD200di7CD200_细胞的群。OPAC可以在本领域公认的干细胞培养可接受的任何培养基中和任何条件下培养。优选地，培养基包含血清。OPAC可以在例如DMEM-LG(Dulbecco' s改良的必需培养基，低葡萄糖)/MCDB 201 (鸡成纤维细胞基本培养基)，包含ITS (胰岛素-铁传递蛋白-硒)、LA+BSA(亚油酸-牛血清白蛋白)、右旋糖、L-抗坏血酸、PDGF, EGF、IGF-I、和青霉素/链霉素；DMEM-HG (高葡萄糖)，包含10%胎牛血清(FBS) ；DMEM-HG，包含15% FBS ； IMDM(Iscove' s改良的Dulbecco ‘ s培养基)，包含10% FBS、10%马血清、和氢化可的松； M199，包含10% FBS、EGF、和肝素；α -MEM (最低必需培养基)，包含10% FBS、GLUTAMAX 和庆大霉素；DMEM，包含10% FBS、GLUTAMAX 和庆大霉素；等培养基中培养。优选的培养基是 DMEM-LG/MCDB-201，包含 2% FBS、ITS、LA+BSA、右旋糖、L-抗坏血酸、PDGF、EGF、和青霉素 / 链霄素。可以用来培养OPAC的其它培养基包括DMEM (高或低葡萄糖)、fegle' s基本培养基、Ham' s FlO 培养基(FlO)、Ham' s F-12 培养基(F12)、Iscove ‘ s 改良的 Dulbecco ‘ s 培养基、间充质干细胞生长培养基(MSCGM)、Liebovitz ‘ s L-15培养基、MCDB, DMEM/F12、 RPMI 1640、高级 DMEM(Gibco)、DMEM/MCDB201 (Sigma)、和 CELL-GRO FREE。培养基可以补充一种或多种成分，包括例如血清(例如，胎牛血清(FBS)，优选地约2-15% (ν/ν)；马(马)血清(ES)；人血清(HS)) ； β-巯基乙醇(BME)，优选地约0.001% (ν/ν)；一种或多种生长因子，例如血小板源生长因子(PDGF)、表皮生长因子(EGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、胰岛素样生长因子-I(IGF-I)、白血病抑制因子(LIF)、血管内皮生长因子(VEGF)、和促红细胞生成素(EPO)；氨基酸，包括L-缬氨酸；和一种或多种抗生素和/或抗真菌剂，以控制微生物污染，例如青霉素G、硫酸链霉素、两性霉素B、庆大霉素、 和制霉菌素，单独或组合添加。
OPAC可以在标准组织培养条件下培养，例如，在组织培养皿或多孔板中。OPAC也可以使用悬滴法培养。在这一方法中，OPAC在约5mL培养基中悬浮，浓度约IXlO4个细胞 /mL，而且一滴或数滴培养基被放置到组织培养容器例如IOOmL培养皿的盖子内部。液滴可以是例如单滴或来自例如多通道移液管的多滴。盖子被小心地翻转，放置到包含一体积液体例如无菌PBS的皿底顶部，并培养细胞，该液体足以保持皿环境中的水分含量。5. 1. 3. 2 OPAC的扩增和增殖一旦获得了分离的0PAC，或分离的OPAC群(例如，OPAC或OPAC群与至少约50 % 的在体内OPAC或OPAC群通常与其关联的绒毛膜细胞分离)，该OPAC或OPAC群可以在体外增殖和扩增。例如，OPAC群可以在组织培养容器例如培养皿、烧瓶、多孔板等中培养足够的时间，让细胞增殖到70-90%融合，S卩，直到细胞及其后代占据了组织培养容器的70-90% 的培养表面面积。OPAC可以在允许细胞生长的密度接种到培养容器中。例如，细胞可以在低密度 (例如，约1，000到约5，000个细胞/cm2)到高密度(例如，约50，000个或更多细胞/cm2) 接种。在一个优选的实施方案中，细胞在约0到约5%体积比CO2的空气中培养。在一些优选的实施方案中，细胞在约2%到约25% O2的空气中，优选地在约5%到约20% O2的空气中培养。细胞优选地在约25°C到约40°C培养，优选地在37°C。细胞优选地在培养箱中培养。培养基可以是静止或搅拌的，例如使用生物反应器。OPAC优选地在低氧化应激下(例如，添加谷胱甘肽、抗坏血酸、过氧化氢酶、生育酚、N-乙酰半胱氨酸等)生长。一旦获得70% -90%融合，细胞可以传代。例如，细胞可以使用本领域熟知的技术被酶处理，例如胰蛋白酶处理，将它们从组织培养表面分离。通过移液移走细胞并计数细胞后，将约20，000-100, 000个细胞，优选地约50，000个细胞，传代到包含新鲜培养基的新培养容器中。典型地，新培养基和细胞转移前的培养基是同一类型的。本文提供的是已传代至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、14、16、18、或20次或更多的胎盘细胞群。5.1.3.3 OPAC 群本发明进一步提供了 OPAC群。OPAC可以直接从来自一个或多个胎盘的绒毛膜分离。本发明提供的分离的OPAC也可以被培养和扩增，以产生OPAC群。包含OPAC的绒毛膜细胞群也可以被培养和扩增，以产生OPAC群。本发明提供的OPAC群包含0PAC，例如本发明描述的0PAC。在各种实施方案中，分离的细胞群中至少约 10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、或 99%的细胞是0PAC。即OPAC群可以包含例如差不多1%、5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、 70%、80%、90% 的非 OPAC 细胞。本发明提供了通过例如从绒毛膜筛选表达特定标记和/或特定培养或形态学特征的细胞以生产OPAC的分离群的方法。在一个实施方案中，例如，本发明提供了生产细胞群的方法，包括筛选附着到底物上并表达CD105但不表达CD200的绒毛膜细胞；和将所述细胞与其它绒毛膜细胞分离，以形成细胞群，例如OPAC群。在一个具体实施方案中，将同时是 NG2+、骨保护素+、α平滑肌肌动蛋白阴性、和/或显示可诱导的碱性磷酸酶活性的CD105+、 CD200—绒毛膜细胞与其它绒毛膜细胞分离。 在以上实施方案中，底物可以是任何可以在其上实现细胞例如OPAC的培养和/或筛选的表面。典型地，底物是塑料制品，例如组织培养皿或多孔板塑料制品。组织培养塑料制品可以用生物分子涂层，例如层粘连蛋白、玻连蛋白、胶原或纤连蛋白涂层。OPAC和OPAC群可以通过任何本领域已知的细胞筛选手段来筛选。例如，可以使用针对一个或多个细胞表面标记的抗体或抗体组合来筛选细胞，例如，在流式细胞术或FACS 中筛选。可以使用抗体与磁珠结合来实现筛选。特异性针对某些干细胞相关标记的抗体是本领域己知的。例如，CD200 (Abeam)或 CD105(Abeam ；BioDesign International, Saco,ME) 等可以用来筛选OPAC或OPAC群。OPAC群可以包含并非OPAC的绒毛膜细胞，或并非绒毛膜细胞或OPAC的细胞。分离的OPAC群可以与一个或多个非OPAC细胞或非绒毛膜细胞群组合。例如， 分离的OPAC群可以与血(例如胎盘血或脐带血)、血液源干细胞(例如，源自胎盘血或脐带血的干细胞)、血液源有核细胞群、骨髓源间充质细胞、骨来源干细胞群、未处理的骨髓、成体(身体的)干细胞、组织内包含的干细胞群、培养的干细胞、完全分化的细胞(例如、软骨细胞、成纤维细胞、羊膜细胞、成骨细胞、肌肉细胞、心脏细胞等)的群等组合。分离的OPAC群中的细胞可以与另一类型的多种细胞组合，与各个群中的总有核细胞数目相比比率为约 100，000，000 1,50, 000, 000 1,20, 000, 000 1、10，000，000 1、 5，000，000 1,2, 000, 000 1,1, 000, 000 1,500, 000 1,200, 000 1,100, 000 1、 50，000 1,20,000 1,10,000 1,5,000 1,2,000 1,1,000 1,500 1、 200 UlOO 1、50 1、20 UlO 1、5 1、2 1、1 1 ;1 2 ;1 5 ;1 10 ； 1 100 ； 1 200 ； 1 500 ； 1 1, 000 ； 1 2, 000 ； 1 5, 000 ； 1 10, 000 ； 1 20,000; 1 50, 000 ； 1 100, 000 ； 1 500, 000 ； 1 1,000，000 ;1 2, 000, 000 ； 1 5, 000, 000 ； 1 10，000，000 ;1 20，000，000 ;1 50，000，000 ；或约 1 100, 000, OOOo 分离的 OPAC 群中的细胞也可以与多种细胞类型的多种细胞组合。在一个实施方案中，分离的OPAC群与多种造血干细胞组合。这样的造血干细胞可以包含在例如未处理的胎盘血、脐带血或外周血内；来自胎盘血、脐带血或外周血的总有核细胞中；来自胎盘血、脐带血或外周血的分离的CD34+细胞群中；未处理的骨髓中；来自骨髓的总有核细胞中；来自骨髓的分离的CD34+细胞群中，等等。5. 1. 4 OPAC和胎盘灌注液或胎盘灌注液细胞的组合本发明提供了胎盘灌注液与分离的胎盘灌注液细胞和/或本发明提供的OPAC的组合。在一个实施方案中，例如，本发明提供了一定体积的补充了大量胎盘灌注液细胞和 /或大量OPAC的胎盘灌注液。在具体的实施方案中，例如，每毫升胎盘灌注液补充了约 IX 104、5X 104、1X 105、5X 105、1X 106、5X IO6或更多的胎盘灌注液细胞或0PAC。在另一个实施方案中，多种胎盘灌注液细胞补充了胎盘灌注液和/或0PAC。在另一个实施方案中，多种OPAC补充了胎盘灌注液和/或大量胎盘灌注液细胞。在某些实施方案中，当灌注液用来补充时，灌注液的体积是细胞(在溶液中)+灌注液总体积的约、大于约、或小于约 50%,45%,40%,35%,30%,25%,20%,15%,10%,8%,6%,4%,2%^； 当胎盘灌注液细胞用来补充多种OPAC时，胎盘灌注液细胞一般包含胎盘灌注液细胞+OPAC总数目的约、大于约、或小于约 50%、45%、40%、35%、30%、25%、20%、15%、10%、8%、6%、4%、 2%或1%。类似地，当OPAC用来补充大量胎盘灌注液细胞时，OPAC—般包含胎盘灌注液细胞+OPAC总数目的约、大于约、或小于约50%、45%、40%、35%、30%、25%、20%、15%、 10% .8^^6% .4^^2%或1%。当OPAC或胎盘灌注液细胞用来补充胎盘灌注液时，悬浮细胞在的溶液(例如，盐水溶液、培养基等)的体积，包含灌注液+细胞总体积的约、大于约、 或小于约 50%、45%、40%、35%、30%、25%、20%、15%、10%、8%、6%、4%、2%或 1%，其中在补充前OPAC被悬浮为约 1 X 104、5X 104、1 X 105、5X 105、1 X 106、5X 106、1 X IO7,5X IO7, 1 X 108、5X IO8或更多个细胞每毫升。本发明进一步提供了由两个或多个来源获得的合并胎盘灌注液，例如，来自两个或多个胎盘并组合例如合并。这样的合并灌注液可以包含来自每个来源的大约等体积的灌注液，或可以包含来自每个来源的不同体积。来自每个来源的相对体积可以被随机选择，或可以基于例如一种或多种细胞因子例如细胞因子、生长因子、激素等的浓度或量；来自每个来源的灌注液中胎盘细胞的数目；或来自每个来源的灌注液的其它特征来选择。来自同一胎盘的多次灌注的灌注液可以类似地被合并。类似地，本发明提供了从两个或多个来源，例如两个或多个胎盘和/或绒毛膜获得并合并的胎盘灌注液细胞和0PAC。这样的合并细胞可以包含来自两个或多个来源的大约相等数目的细胞，或来自一个或多个合并来源的不同数目的细胞。来自每个来源的细胞的相对数目可以基于例如将要合并的细胞中一个或多个特定细胞类型的数目来选择，例如 ⑶；34_干细胞数目等。合并物可以包含，例如，补充了胎盘灌注液细胞的胎盘灌注液；补充了 OPAC的胎盘灌注液；补充了胎盘灌注液细胞和OPAC的胎盘灌注液；补充了胎盘灌注液的胎盘灌注液细胞；补充了 OPAC的胎盘灌注液细胞；补充了胎盘灌注液和OPAC的胎盘灌注液细胞；补充了胎盘灌注液的OPAC ；补充了胎盘灌注液细胞的OPAC ；或补充了胎盘灌注液细胞和胎盘灌注液的OPAC。在某些实施方案中，胎盘灌注液、胎盘灌注液细胞、和OPAC作为药物级可施用单位提供。这样的单位可以以离散体积,例如100mL、150mL、200mL、250mL、300mL、350mL、 400mL、450mL、500mL等提供。这样的单位可以被提供成使得其包含指定数目的例如胎盘灌注液细胞、胎盘灌注液源中间体自然杀伤细胞、或两者，例如，IX 104、5X 104、1X 105、 5 X IO5UX IO6,5 X IO6UX IO7,5 X IO7UX IO8,5 X IO8 或更多细胞每毫升，或 1X104、 5 X IO4UX IO5,5 X IO5UX IO6,5 X IO6UX IO7,5 X IO7UX IO8,5 X IO8UX 10\5 X 10\ 1 X 101(l、5 X IO10,1 X IO11或更多细胞每单位。这样的单位可以被提供为包含指定数目的胎盘灌注液、胎盘灌注液细胞、和/或OPAC中的任意两种或全部三种。在胎盘灌注液、胎盘灌注液细胞和/或OPAC的以上组合中，胎盘灌注液、胎盘灌注液细胞和/或OPAC中的任意一种、任意两种或全部三种，可以对受体是自体的(即，从受体获得)、或对受体是同源的(即，从所述受体以外的至少一个其它个体获得)。本发明也提供了包含OPAC与胎盘灌注液细胞和/或胎盘灌注液的组合的组合物。 因此，另一方面，本发明提供了包含分离的OPAC的组合物，其中所述胎盘干细胞是从胎盘灌注液分离的，而且其中所述OPAC包含组合物中的至少50%的细胞。在一个具体的实施方案中，所述OPAC包含组合物中的至少80%的细胞。在另一个具体的实施方案中，组合物包含分离的胎盘灌注液。在一个更加具体的实施方案中，所述胎盘灌注液与所述OPAC来自相同个体。在另一个更加具体的实施方案中，所述胎盘灌注液包含与所述OPAC来自不同个体的胎盘灌注液。在另一个具体的实施方案中，组合物包含胎盘灌注液细胞。在一个更加具体的实施方案中，所述胎盘灌注液细胞与所述OPAC来自相同个体。在另一个更加具体的实施方案中，所述胎盘灌注液细胞与所述OPAC来自不同个体。在另一个具体的实施方案中， 组合物额外包含分离的胎盘灌注液和分离的胎盘灌注液细胞，其中所述分离的灌注液和所述分离的胎盘灌注液细胞来自不同个体。在任何以上包含胎盘灌注液的实施方案的另一个更加具体的实施方案中，所述胎盘灌注液包含来自至少两个个体的胎盘灌注液。在任何以上包含胎盘灌注液细胞的实施方案的另一个更加具体的实施方案中，所述分离的胎盘灌注液细胞来自至少两个个体。5. 1. 5 OPAC细胞库的生产来自产后绒毛膜的OPAC可以用许多不同的方法培养，以生产一组批次，例如，一组可个体施用的剂量。从多种绒毛膜获得的多组OPAC批次可以排列在OPAC库中，供例如长期贮存。一般地，从绒毛膜材料的初代培养获得0PAC，以形成种子培养物，其在可控条件下扩增，由大约相等数目的倍增形成细胞群。批次优选地源自单一胎盘的绒毛膜组织，但可以源自大量胎盘的组织。在一个实施方案中，OPAC批次如下获得。首先破坏绒毛膜组织，例如通过剁碎，用合适的酶消化，例如分散酶、或者分散酶和胶原酶(参见上面5. 2. 3部分)。绒毛膜组织优选地包含例如来自单一胎盘的完整绒毛膜，但可以包含绒毛膜的仅一部分。消化的组织培养例如约1-3星期，优选地约2星期。去除未贴壁细胞后，收集形成的高密度克隆，例如通过胰蛋白酶处理收集。收集这些细胞并在方便体积的培养基中重悬，并定义为0代细胞。然后使用0代细胞来接种扩增培养。扩增培养可以是分开的细胞培养装置的任意排列，例如NUNC 的细胞工厂。0代培养中的细胞可以再分到任意程度，使得用例如1 X 103、 2X 103、3X 103、4X 103、5X 103、6X 103、7X 103、8X 103、9X 103、1X 104、1X 104、2X 104、 3X 104、4X 104、5X 104、6X 104、7X 104、8X 104、9X 104、或 IOXlO4 个细胞来接种扩增培养。 优选地，使用约2X IO4到约3X IO4个O代细胞来接种每个扩增培养。扩增培养的数目可以取决于O代细胞的数目，而且数目可以多一些或少一些，取决于由其获得OPAC的特定绒毛膜。扩增培养生长，直到培养中的细胞密度达到某个值，例如，约1 X IO5个细胞/cm2。 这时细胞可以被收集并冷冻贮存，或如上面描述的传代到新的扩增培养中。在使用前，细胞可以传代例如2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20次。在扩增培养期间，优选地保持群倍增累积次数的记录。来自O代培养的细胞可以扩增到2、3、4、5、6、7、8、 9、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38 或 40 次倍增，或直到 60 次倍增。但是，优选地，在将细胞群分成个体剂量前，群倍增次数在约15到约30之间，优选地约20次倍增。在扩增过程中，细胞可以连续地培养，或可以在扩增期间的一个或多个点冷冻。用于个体剂量的细胞可以被冷冻，例如冷冻贮存，供以后使用。个体剂量可以包含例如约一百万到约一亿个细胞每ml，而且可以包含总计约IO6到约IO9个之间的细胞。在方法的一个具体实施方案中，O代细胞被培养到大约4次倍增，然后冷冻在第一细胞库中。来自第一细胞库的细胞被冷冻并用来接种第二细胞库，其中的细胞被扩增约另外八次倍增。这个阶段的细胞被收集并冷冻和用来接种新的扩增培养，让其进行约八次另外的倍增，从而使细胞倍增的累积次数达到约20次。在传代的中间点的细胞可以被冷冻， 单位为约100,000到约一千万个细胞每ml，优选地约一百万个细胞每ml，供以后的扩增培养使用。约20次倍增的细胞可以被冷冻为约一百万到约一亿个细胞每ml的个体剂量供施
35用，或用来制造包含OPAC的组合物。在一个优选的实施方案中，对由其获得胎盘的供体(例如母亲)测试至少一种病原体。如果母亲对测试病原体的测试为阳性，来自该胎盘的整个批次被丢弃。这样的测试可以在OPAC细胞批次生产期间的任何时间执行，包括在0代细胞建立之前或之后，或在扩增培养期间。要测试是否存在的病原体，可以包括且不限于甲肝、乙肝、丙肝、丁肝、戊肝、人免疫缺陷病毒(I型和II型)、巨细胞病毒、疱疹病毒等。5. 1.6 OPAC 的分化OPAC可以被诱导分化，例如沿成骨途径。OPAC的成骨分化可以被诱导，例如， 通过将OPAC放置在诱导分化为成骨细胞的细胞培养条件下。优选的骨细胞培养基包含 MSCGM(Cambrex)或DMEM，其补充了 15%脐带血血清；接着是成骨诱导培养基(Cambrex)， 包含0. IyM地塞米松、0.05mM抗坏血酸-2-磷酸盐、IOmM β甘油磷酸。在另一个实施方案中，OPAC在包含约10_7到约10_9Μ地塞米松、约10-50 μ M抗坏血酸磷酸盐(例如，抗坏血酸-2-磷酸盐)和约IOnM到约IOmM β -甘油磷酸的培养基(例如，DMEM-低葡萄糖)中培养。成骨培养基也可以包含血清、一种或多种抗生素/抗真菌剂、转化生长因子(例如，TGF-β 1)和/或骨形态发生蛋白(例如，ΒΜΡ-2、ΒΜΡ-4、或其组合)。可以使用钙特异性染色例如von Kossa染色，和例如碱性磷酸酶、骨钙蛋白、骨涎蛋白和/或骨桥蛋白基因表达的RT/PCR检测，来测试分化。5. 1. 7 OPAC 的C存OPAC可以被贮存，即放置在允许长期贮存的条件下，或抑制细胞死亡(例如凋亡或坏死)的条件下。OPAC可以使用例如包含凋亡抑制剂、坏死抑制剂和/或载氧全氟化碳的组合物贮存，如在 2005 年 12 月 25 日提交的题为 “Improved Medium for Collecting Placental Stem Cells and Preserving Organs (收集胎盘干细胞和保存器官的改进的培养基)”的相关的美国临时申请号60/7M，969中所述。在一个实施方案中，本发明提供了保存OPAC 群的方法，包括将所述OPAC群与包含凋亡抑制剂和载氧全氟化碳的细胞收集组合物接触， 其中所述凋亡抑制剂，与未与凋亡抑制剂接触的OPAC群相比，以足以降低或防止OPAC群中的凋亡的量和时间存在。在一个具体的实施方案中，所述凋亡抑制剂是半胱天冬酶抑制剂。 在另一个具体的实施方案中，所述凋亡抑制剂是JNK抑制剂。在一个更加具体的实施方案中，所述JNK抑制剂不调节所述OPAC的分化或增殖。在另一个实施方案中，所述细胞收集组合物包含分离相的所述凋亡抑制剂和所述载氧全氟化碳。在另一个实施方案中，所述细胞收集组合物以乳液形式包含所述凋亡抑制剂和所述载氧全氟化碳。在另一个实施方案中， 细胞收集组合物额外包含乳化剂，例如卵磷脂。在另一个实施方案中，所述凋亡抑制剂和所述全氟化碳在接触OPAC时温度在约0°C到约25°C之间。在另一个更加具体的实施方案中， 所述凋亡抑制剂和所述全氟化碳在接触OPAC时温度在约2°C到10°C之间，或在约2°C到约 5°C之间。在另一个更加具体的实施方案中，所述接触在所述OPAC群的运输期间执行。在另一个更加具体的实施方案中，所述接触在所述OPAC群的冷冻和解冻期间执行。在另一个实施方案中，本发明提供了保存OPAC群的方法，包括将所述OPAC群与凋亡抑制剂和器官保存化合物接触，其中所述凋亡抑制剂，和未与凋亡抑制剂接触的OPAC 群相比，以足以降低或防止OPAC群中的凋亡的量和时间存在。在一个具体的实施方案中，
36器官保存化合物是UW溶液(在美国专利号4，798，824中描述；也称作ViaSpan ；也可参见 Southard 等，Transplantation 49(2) :251-257(1990))或在 Mern 等的美国专利号 5, 552, 267中描述的溶液。在另一个实施方案中，所述器官保存化合物是羟乙基淀粉、乳糖酸、棉子糖、或其组合。在另一个实施方案中，细胞收集组合物额外包含载氧全氟化碳，不管是处于两相还是作为乳液。在方法的另一个实施方案中，在灌注期间，OPAC与包含凋亡抑制剂和载氧全氟化碳的细胞收集组合物、器官保存化合物、或其组合接触。在另一个实施方案中，所述OPAC在组织破坏(例如酶消化)过程期间接触。在另一个实施方案中，OPAC在通过灌注收集后， 或通过组织破坏(例如酶消化)收集后，与所述细胞收集化合物接触。典型地，在细胞的收集、富集和分离期间，最小化或消除由缺氧和机械应力引起的细胞应激是优选的。因此，在方法的另一个实施方案中，在所述贮存期间，OPAC在收集、富集或分离期间暴露于缺氧条件少于六小时，其中缺氧条件是低于正常的血氧浓度的氧气浓度。在一个更加具体的实施方案中，在所述贮存期间，所述OPAC暴露于所述缺氧条件少于两小时。在另一个更加具体的实施方案中，OPAC在收集、富集或分离期间暴露于所述缺氧条件少于一小时、或少于三十分钟，或没有暴露于缺氧条件。在另一个具体的实施方案中， 所述OPAC在收集、富集或分离期间没有暴露于剪切应力。本发明提供的OPAC可以被冷冻贮存，例如，在冷冻贮存培养基中，在小的容器例如安瓿中。合适的冷冻贮存培养基包括但不限于培养基包括例如生长培养基或细胞冷冻培养基，例如可商业得到的细胞冷冻培养基，例如C2695、C2639或C6039 (Sigma)。冷冻贮存培养基优选地包含DMSO (二甲基亚砜)，浓度例如约10% (ν/ν)。冷冻贮存培养基可以包含额外试剂，例如甲基纤维素和/或甘油。OPAC优选地在冷冻贮存期间以约1°C /min冷却。 优选的冷冻贮存温度是约_80°C到约_180°C，优选地约-125°C到约_140°C。冷冻贮存的细胞在解冻使用前可以被转移到液氮中。在一些实施方案中，例如，一旦安瓿达到约-90°C，它们被转移到液氮贮存区域。冷冻贮存的细胞优选地在温度约25°C到约40°C解冻，优选地在温度约37 °C。5. 1. 8包含OPAC的组合物本发明提供了包含OPAC或由其得到的生物分子的组合物。本发明提供的OPAC可以与任何生理学可接受的或医学可接受的化合物、组合物或装置进行组合，供例如研究或治疗用途。5. 1. 8. 1 冷冻贮存的 OPAC本发明提供的OPAC群可以被贮存，例如冷冻贮存供以后使用。冷冻贮存细胞例如 OPAC的方法是本领域熟知的。OPAC群可以被制备成可容易对个体施用的形式。例如，本发明提供了 OPAC群，其被包含在适合医学用途的容器内。这样的容器可以是例如无菌的塑料袋、烧瓶、罐或其它容器，OPAC群可以从中容易地分配。例如，容器可以是血袋或其它塑料的医学可接受的袋子，适合向受体静脉内施用液体。容器优选地是允许组合的细胞群冷冻贮存的容器。冷冻贮存的OPAC群可以包含源自单一供体或多个供体的OPAC。OPAC群可以与预期的受体完全HLA匹配，或者部分或完全HLA不匹配。因此，在一个实施方案中，本发明提供了容器中的包含OPAC群的组合物。在一个具体的实施方案中，所述群被冷冻贮存。在另一个具体的实施方案中，容器是袋、烧瓶、或罐。在更加具体的实施方案中，所述袋是无菌塑料袋。在一个更加具体的实施方案中，所述袋适合、允许或促进OPAC群的静脉内施用。袋可以包含多个连通的腔或分隔，以在施用前或期间让OPAC与一种或多种其它溶液例如药物混合。在另一个具体的实施方案中，组合物包含一种或多种促进细胞群冷冻贮存的化合物。在另一个具体的实施方案中，所述OPAC群被包含在生理学可接受的水溶液内。在一个更加具体的实施方案中，所述生理学可接受的水溶液是0.9% NaCl溶液。在另一个具体的实施方案中，所述OPAC群包含与所述群的受体 HLA匹配的胎盘细胞。在另一个具体的实施方案中，所述OPAC群包含与所述群的受体至少部分HLA不匹配的细胞。在另一个具体的实施方案中，所述OPAC源自多种供体。 5. 1.8.2药物组合物OPAC群或包含OPAC的细胞群可以被配制成药物组合物供体内使用。这样的药物组合物包含OPAC群、或包含OPAC的细胞群，在药学可接受的载体中，例如，盐水溶液或其它公认的生理学可接受的供体内施用的溶液。本发明提供的药物组合物可以包含本发明别处描述的任意OPAC群。药物组合物可以包含胎儿的、母体的、或胎儿和母体双方的0PAC。本发明提供的药物组合物可以进一步包含从单一个体或绒毛膜、或从大量个体或绒毛膜获得的 OPAC。本发明提供的药物组合物可以包含任意治疗有用数目的0PAC。例如，单一单位剂量的OPAC可以包含，在各种实施方案中，约、至少、或不超过1 X 105、5xl05、l X 106、5X 106、 1 X 107、5 X ΙΟ7、1 X 108、5 X ΙΟ8、1 X 109、5 X ΙΟ9、1 X 1010、5 X ΙΟ10、1 X IO11 或更多的 OPAC0本发明提供的药物组合物可以包含细胞群，其包含50%或更多的存活细胞(即， 群中的至少约50%的细胞是有功能的或活的)。优选地，群中的至少约60%的细胞是存活的。更加优选地，药物组合物中，群中的至少约70 %、80 %、90 %、95 %、或99 %的细胞是存活的。本发明提供的药物组合物可以包含一种或多种例如促进植入的化合物(例如， 抗-T-细胞受体抗体、免疫抑制剂等)，稳定剂例如白蛋白、葡聚糖40、明胶、羟乙基淀粉等。5. 1. 8. 3 OPAC 条件培养基本发明提供的OPAC可以用来生产条件培养基，即包含一种或多种由细胞分泌或排出的生物分子的培养基。在各种实施方案中，条件培养基包含OPAC在其中生长了至少1、 2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或更多天的培养基。在其他实施方案中，条件培养基包含OPAC在其中生长到至少约30 %、40 %、50 %、60 %、70 %、80 %、90 %融合或直到100 %融合的培养基。这样的条件培养基可以用来支持OPAC或另一种类型的干细胞的分离群的培养。在另一个实施方案中，条件培养基包含OPAC在其中已分化成终末分化细胞类型、或具有终末分化细胞的一个或多个特征的细胞的培养基。在另一个实施方案中，本发明提供的条件培养基包含在其中培养了 OPAC和非OPAC的培养基。5. 1. 8. 4 包含 OPAC 的基质本发明进一步提供了包含OPAC或OPAC群的基质、水凝胶、支架等。在某些实施方案中，基质可以是本领域技术人员已知对治疗骨缺损有用的任何底物。例如，基质可以是 β-磷酸三钙底物、β-磷酸三钙-胶原底物、胶原底物、磷酸钙底物、矿化的胶原底物、和透明质酸底物。在一些实施方案中，基质中的胶原可以是胎盘胶原。分离和制备胎盘胶原的方法和组合物被广泛描述，例如在美国专利申请公开号2007/0020225中，其公开内容全文通过引用并入本发明。OPAC可以在分化步骤之前或之后被接种到基质上供治疗骨。例如，OPAC可以在例如成骨培养基中培养例如约1-20天，然后接种到基质上。或者，OPAC可以被分离并接种到基质上，然后如本发明描述的在成骨培养基中培养例如约1-20天。在另一个实施方案中， OPAC在例如成骨培养基中培养例如约1-20天，然后接种到基质上，然后如本发明描述的在成骨培养基中培养例如约1-20天。OPAC可以被接种到天然基质上，例如，胎盘生物材料例如羊膜材料。这样的羊膜材料可以是例如直接从哺乳动物胎盘分割的羊膜；固定的或热处理的羊膜、基本干燥的(即， <20% H2O)羊膜、绒毛膜、基本干燥的绒毛膜、基本干燥的羊膜和绒毛膜等。OPAC可以在上面接种的优选的胎盘生物材料，在Hariri的美国申请公开号2004/0048796中描述。本发明提供的OPAC可以悬浮在水凝胶溶液中，其适合例如注射。对这样的组合物，合适的水凝胶包括自组装肽，例如RAD16。在一个实施方案中，可以让包含细胞的水凝胶溶液硬化，例如在模子中硬化，以形成具有细胞分散在其中的供植入的基质。在这样的基质中的OPAC也可以被培养，以便细胞在植入前有丝分裂扩增。水凝胶是例如有机聚合物(天然或合成的)，其通过共价键、离子键或氢键交联，从而产生三维开放栅格结构，该结构捕捉水分子形成凝胶。形成水凝胶的材料包括多糖例如藻酸盐及其盐、多肽、聚膦嗪和聚丙烯酸酯，其离子交联；或嵌段聚合物例如聚氧化乙烯-聚丙二醇嵌段共聚物，其分别通过温度或 PH交联。在一些实施方案中，水凝胶或基质是可生物降解的。在一些实施方案中，配方包含可原位聚合的凝胶(参见例如，美国专利申请公开 2002/0022676 ;Anseth 等，J. Control Release, 78 (1-3) 199-209 (2002) ；Wang 等， Biomaterials,24(22) :3969_80 (2003)。在一些实施方案中，聚合物在水性溶液例如水、缓冲盐溶液、或水醇溶液中至少部分可溶，其具有带电荷的侧基，或其单价离子盐。具有可以与阳离子反应的酸性侧基的聚合物的例子是聚(磷腈)、聚(丙烯酸)、聚(甲基丙烯酸)、丙烯酸和甲基丙烯酸的共聚物、聚 (醋酸乙烯酯)、以及磺化的聚合物例如磺化的聚苯乙烯。具有通过丙烯酸或甲基丙烯酸与乙烯醚单体或聚合物反应而形成的酸性侧基的共聚物也可以被使用。酸性基团的例子是羧酸基团、磺酸基团、卤代的(优选地氟化的)醇基团、酚的OH基团、和酸的OH基团。OPAC或其群可以被接种到三维框架或支架上并植入体内。这样的框架可以与任意一种或多种生长因子、细胞、药物或其它刺激组织形成、或者增强或改善组织修复的成分联合植入。可以被使用的支架的例子包括非纺织垫、多孔泡 沫、或自组装肽。非纺织垫可以使用包含了合成的可吸收的乙醇酸和乳酸共聚物(例如，PGA/PLA)的纤维来形成(VICRYL， Ethicon,Inc. , Somerville, N. J.) 0 泡沫由例如聚(ε-己内酯)/聚(乙醇酸)(PCL/PGA) 共聚物组成，通过过程例如冷冻干燥或冻干而形成(参见例如，美国专利号6，355，699)，也可以被用作支架。本发明提供的OPAC也可以接种到生理学可接受的陶瓷材料上，或与其接触，陶瓷材料包括但不限于磷酸单_、二 _、三_、α-三-、β-三_、和四-钙，羟磷灰石、氟磷灰石、硫酸钙、氟化钙、氧化钙、碳酸钙、磷酸镁钙、生物活性玻璃例如BI0GLASS 、及其混合物。当前可商业购买的可生物相容的多孔陶瓷材料，包括SURGIBONE (CanMedica Corp., Canada) >END0B0N (Merck Biomaterial France, France) >CEROS (Mathys, AG, Bettlach, Switzerland)、和矿化胶原骨移植产品例如 HEALOS (DePuy，Inc.，Raynham，MA)和 VITOSS 、RHAK0SS 、以及CORTOSS (Orthovita，Malvern，Pa.)。框架可以是天然和/或合成材料的混合物、掺合物或复合物。在另一个 实施方案中，OPAC可以接种到毡上，或与其接触，毡可以例如由用可生物吸收的材料例如PGA、PLA、PCL共聚物或掺合物，或透明质酸制造成的复丝组成。在另一个实施方案中，本发明提供的OPAC可以接种到泡沫支架上，该支架可以是复合结构。这样的泡沫支架可以被模制成有用的形状，例如身体中待修复、替换或扩增的特定结构的一部分。在一些实施方案中，为了增强细胞附着，在接种OPAC前，框架用例如 0. IM醋酸处理，接着在聚赖氨酸、PBSdn /或胶原中培养。基质的外表面可以被改性，以改善细胞的附着或生长以及组织的分化，例如通过基质的等离子涂层，或添加一种或多种蛋白(例如，胶原、弹性纤维、网状纤维)、糖蛋白、葡糖氨基葡聚糖(例如，硫酸肝素、软骨素-4-硫酸、软骨素-6-硫酸、硫酸皮肤素、硫酸角蛋白等)、细胞基质、和/或其他材料，例如但不限于明胶、藻酸盐、琼脂、琼脂糖、和植物胶等来改性。在一些实施方案中，支架包含令它不形成血栓的材料，或用该材料处理。这些处理和材料也可以促进和维持内皮生长、迁移、和细胞外基质的沉积。这些材料和处理的例子包括但不限于天然材料例如基底膜蛋白例如层粘连蛋白和IV型胶原，合成材料例如EPTFE 和嵌段聚氨酯脲硅酮，例如 PURSPAN (The Polymer Technology Group, Inc. , Berkeley, Calif)。支架也可以包含抗血栓形成剂，例如肝素；支架也可以在接种OPAC前被处理以改变表面电荷(例如，等离子涂层)。支架可以进一步包含刺激骨生长和/或抑制骨吸收的试齐U。例如，支架可以包含骨形态发生蛋白，例如BMP-2和/或BMP-7，WNT抑制剂等。5. 1. 9永生化的OPAC细胞系通过用任意包含促生长基因的合适载体转染，OPAC可以条件永生化，即编码蛋白的基因在适当条件下促进被转染的细胞的生长，从而使促生长蛋白的生产和/或活性可通过外部因素调控。在一个优选的实施方案中，促生长基因是原癌基因，例如但不限于v-myc、 N-myC、C-myC、p53、SV40大T抗原、多瘤病毒大T抗原、Ela腺病毒或人乳头瘤病毒的E7蛋白。促生长蛋白的外部调控可以通过将促生长基因放置在外部可调控的启动子控制下来达到，例如，启动子的活性可以通过例如修改转染的细胞的温度或与细胞接触的培养基的组份来控制。在一个实施方案中，可以使用四环素(tet)控制基因表达系统(参 B Gossen 等，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89 5547-5551,1992 ；Hoshimaru 等，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93 1518-1523,1996) tet缺乏时，这一载体内tet控制的转录激活因子 (tTA)强烈激活融合到tet操纵子序列的来自人巨细胞病毒的最小启动子ph·"的转录。 tTA是大肠杆菌(Escherichia coli)的转座子_10_源tet抗性操纵子的阻遏物(tetR)和单纯疱疹病毒的VP16酸性域的融合蛋白。低的无毒浓度的tet (例如，0. 01-1.0yg/mL)几乎完全取消了 tTA的转录激活。在一个实施方案中，载体进一步包含编码可筛选标记的基因，例如赋予药物抗性的蛋白。细菌新霉素抗性基因(neoK)是一个这样的标记，可以如本发明描述般使用。携带neoK的细胞可以通过本领域普通技术人员已知的手段筛选，例如向生长培养基添加例如 100-200 μ g/mL G418。 转染可以通过各种本领域普通技术人员已知的手段中的任一种来实现，包括但不限于逆转录病毒感染。一般来说，通过用从载体的生产者细胞系收集的条件培养基和包含 N2补充物的DMEM/F12的混合物培养，细胞培养可以被转染。例如，如上面描述般制备的胎盘细胞培养，通过在一体积条件培养基和两体积包含N2补充物的DMEM/F12中培养约20小时，可以在例如五天后体外感染。携带可筛选标记的转染的细胞然后可以如上面描述般筛选。转染后，培养物被传代到允许增殖的表面上，例如，在24小时时期中让至少约 30%的细胞倍增。优选地，底物是聚鸟氨酸/层粘连蛋白底物，由用聚鸟氨酸(10yg/mL) 和/或层粘连蛋白(10yg/mL)涂层的组织培养塑料制品组成，聚赖氨酸/层粘连蛋白底物或用纤连蛋白处理过的表面。然后培养每3-4天用生长培养基饲养，其可以补充或可以未补充一种或多种增殖增强因子。当培养低于50%融合时，增殖增强因子可以添加到生长培养基中。当80-95%融合时，条件永生化的OPAC细胞系可以使用标准技术传代，例如通过胰蛋白酶处理。在一些实施方案中，直到大约第二十次传代，保持筛选(通过例如向包含新霉素抗性基因的细胞添加G418)仍是有益的。细胞也可以在液氮中冷冻供长期贮存。克隆细胞系可以从如上面描述般制备的条件永生化的人OPAC细胞系中分离。一般来说，这样的克隆细胞系可以使用标准技术分离和扩增，例如通过有限稀释或使用克隆环分离。克隆细胞系一般可以如上面描述般饲养和传代。条件永生化的人OPAC细胞系，其可以但不必是克隆的，一般可以通过在促进分化的培养条件下抑制促生长蛋白的生产和/或活性来诱导分化。例如，如果编码促生长蛋白的基因在外部可调控的启动子控制下，那么可以通过改变条件例如温度或培养基组份来抑制促生长基因的转录。对于上面讨论的四环素控制的基因表达系统，可以通过添加四环素来抑制促生长基因的转录来实现分化。一般来说，4-5天的1 μ g/mL四环素足以启动分化。 为促进进一步分化，生长培养基中可以包含额外试剂。5. 1. 10 测试本发明提供的OPAC可以在测试中使用，以与未暴露于这样的条件的OPAC比较，确定培养条件、环境因素、分子(例如生物分子、小的无机分子等)等对OPAC增殖、扩增、和/ 或分化的影响。在一个优选的实施方案中，本发明提供的OPAC测试了与一种分子接触后增殖、扩增或分化上的改变。例如，成骨分化可以通过监测碱性磷酸酶活性和/或钙矿化来测试。在一个实施方案中，例如，本发明提供了识别调节多种OPAC增殖的化合物的方法，包括将所述多种OPAC在允许增殖的条件下与所述化合物接触，其中如果与未与所述化合物接触的多种OPAC相比，所述化合物在所述多种OPAC的增殖中引起可检测的变化，那么所述化合物被识别为调节OPAC增殖的化合物。在一个具体的实施方案中，所述化合物被识别为增殖抑制剂。在另一个具体的实施方案中，所述化合物被识别为增殖增强剂。在另一个实施方案中，本发明提供了识别调节多种OPAC扩增的化合物的方法，包括将所述多种OPAC在允许扩增的条件下与所述化合物接触，其中如果与未与所述化合物接触的多种OPAC相比，所述化合物在所述多种OPAC的扩增中引起可检测的变化，那么所述化合物被识别为调节OPAC扩增的化合物。在一个具体的实施方案中，所述化合物被识别为扩增抑制剂。在另一个具体的实施方案中，所述化合物被识别为扩增增强剂。在另一个实施方案中，本发明提供了识别调节OPAC分化的化合物的方法，包括将所述OPAC在允许分化的条件下与所述化合物接触，其中如果与未与所述化合物接触的 OPAC相比，所述化合物在所述OPAC的分化中引起可检测的变化，那么所述化合物被识别为调节OPAC增殖的化合物。在一个具体的实施方案中，所述化合物被识别为增殖抑制剂。在另一个具体的实施方案中，所述化合物被识别为增殖增强剂。5. 2 OPAC 的用途 5. 2. 1使用OPAC治疗骨相关癌症本发明提供了治疗患有骨相关癌症的个体的方法，包括对个体施用治疗有效量的 0PAC。骨相关癌症包括且不限于多发性骨髓瘤、骨癌、乳腺癌、肺癌、神经母细胞瘤、骨肉瘤、 Ewing' s肉瘤、软骨肉瘤、脊索瘤、骨的恶性纤维组织细胞瘤、骨的纤维肉瘤、转移性癌、多发性骨髓瘤、以及特征是骨转移的任何形式的转移性癌。在某些实施方案中，OPAC的施用治疗性地有效降低、改善或反转了与骨相关癌症相关的一种或多种症状，例如，由癌症对个体中一根或多根骨头的影响引起或与其相关的症状。本领域技术人员将意识到，癌症导致的骨缺损的治疗可能不一定减轻癌症本身。本发明提供的癌症相关的骨缺损的治疗可以在另外的癌症治疗之前、之后或同时进行，这如下所讨论。因此，在一个实施方案中，骨缺损在用抗癌治疗来治疗癌症之前治疗。在另一个实施方案中，骨缺损在用抗癌治疗来治疗癌症的同一时间或接近同一时间治疗。在另一个实施方案中，骨缺损在用抗癌治疗来治疗癌症之后治疗。在某些实施方案中，骨相关癌症例如多发性骨髓瘤的治疗包括对含有骨相关癌症细胞例如多发性骨髓瘤细胞的个体施用治疗有效量的0PAC，其中至少一些所述OPAC直接接触了至少一些多发性骨髓瘤细胞，例如，在至少一些所述OPAC和一些所述骨相关癌症细胞之间存在直接的细胞间接触。在某些其它的实施方案中，骨相关癌症例如多发性骨髓瘤的治疗包括对含有骨相关癌症细胞例如多发性骨髓瘤细胞的个体施用治疗有效量的0PAC， 其中没有或基本没有任何所述OPAC直接接触了多发性骨髓瘤细胞，例如，在至少一些所述 OPAC和骨相关癌症细胞之间没有或基本没有直接的细胞间接触。在某些实施方案中，OPAC是损害内施用的，例如直接进入或邻近(例如，在其 l-5cm内)一处或多处癌症导致的骨损害。在某些实施方案中，OPAC与基质联合施用，例如可注射的基质。在某些其它的实施方案中，OPAC与固体基质，例如骨替代物、下文5. 2. 2部分中描述的基质或骨替代物联合向患有骨相关癌症的个体施用。在某些其它的实施方案中，OPAC对个体静脉内施用。OPAC可以从任何容器和通过任何医学上适合递送流体例如包含细胞的流体的递送系统对个体施用。这样的容器可以是例如无菌的塑料袋、烧瓶、罐或其它容器，OPAC群可以从中容易地分配。例如，容器可以是血袋或其它塑料的医学可接受的袋子，适合向受体静脉内施用液体。损害内或静脉内施用在单一剂量中可以包含例如约、至少、或不超过IX 105、 5X105、1X106、5X106、1X107、5X107、1X108、5X108、1X109、5X109、1X1010、5X1010、丄父川“或更多的。 々。OPAC在治疗进程期间可以施用一次，或超过一次。优选地，施用的OPAC包含50%或更多的存活细胞(S卩，群中的至少约50%的细胞是有功能的或活的)。 优选地，群中的至少约60%的细胞是存活的。更加优选地，药物组合物中，群中的至少约 70%、80%、90%、95%、或99%的细胞是存活的。5. 2. 1. 1多发性骨髓瘤的治疗本发明提供了治疗患有多发性骨髓瘤的个体的方法，包括对所述个体施用多种 0PAC，其中所述OPAC具有上文5. 1部分中描述的特征的任意组合或全部特征。在一个具体的实施方案中，所述多种OPAC是⑶105+且⑶200dim的或⑶105+且⑶200—的。本发明提供的治疗方法包含使用任意上文5. 1部分中描述的OPAC、OPAC群或包含OPAC的细胞群。多发性骨髓瘤是浆细胞癌症，浆细胞是产生抗体的免疫系统细胞。疾病典型地存在四个主要特征钙升高、肾衰竭、贫血、和骨损害。这些症状和其它症状在下文讨论。骨痛-骨髓瘤细胞分泌IL-6，也称作破骨细胞活化因子(OAF)，它是激活破骨细胞分解骨头的细胞因子，造成疼痛的骨损害。这些骨损害实际上是溶解性的而且在射线照片中可见，其可能显示“穿孔”再吸收损害。骨髓瘤骨痛通常涉及脊柱和肋骨，而且随活性恶化。持久的局部疼痛可能存在，而且可以指明病理骨折。椎骨损害可能导致脊髓压迫。骨分解还导致钙向血液中释放，引起高钙血症及其相关症状。骨分解区域，如在骨骼调查中观察到的，典型地呈现为骨头上的一处或多处溶解性损害，即其中骨头呈现为不存在或“穿孔”的区域。感染-因为免疫系统被破坏，多发性骨髓瘤的另一种常见症状是感染。感染风险增加的原因是扩散性低丙球蛋白血症导致的免疫缺陷，这是因为正常抗体的生产下降和破坏增加。最常见的感染是肺炎和肾盂肾炎。在多发性骨髓瘤患者中导致疾病的常见肺炎病原体包括月市炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和肺炎克氏杆菌(Klebsiella pneumoniae)，而导致肾盂肾炎的常见病原体包括大肠杆菌(Escherichia coli)。典型地，感染发生在化疗开始后的最初几个月。肾衰竭-多发性骨髓瘤还倾向于导致肾衰竭，其可能急性和慢性发展。多发性骨髓瘤中的肾衰竭很大程度上归因于高钙血症，其因破骨细胞拆卸现存的骨头而发展。肾衰竭也由轻链分泌引起的小管损伤而导致，其也称本周蛋白，可以表明Fanconi综合症(II型肾小管性酸中毒)。其它起因包括淀粉样蛋白的小球沉积、高尿酸血症、复发性感染(例如肾盂肾炎)、和肿瘤细胞的局部浸润。肾衰竭可以与血清肌酐水平的升高有关。贫血-骨髓瘤中发现的贫血通常是红血球和血色素都正常的，而且是由浸润的肿瘤细胞替代了正常骨髓和正常的血红细胞生产(造血作用)被细胞因子抑制而导致的。神经学症状-多发性骨髓瘤的症状包括一系列神经学状况，包括虚弱、由高钙血症性头痛引起的意识错乱和疲劳、视力变化和视网膜病变，这可以是血液高粘滞的结果，取决于病变蛋白(参见下文)的性质。其它神经学症状包括根性疼痛、肠或膀胱控制丧失(例如，由于脊髓损害导致脊髓压迫)、以及腕管综合症和其它神经疾病(例如，由于淀粉样蛋白对外周神经的浸润)。在最近出现的情况中，多发性骨髓瘤可能导致截瘫。病变蛋白的存在_多发性骨髓瘤的一个诊断症状是血和/或尿中存在病变蛋白， 其是单克隆蛋白(M蛋白)，例如，由浆细胞的克隆增殖产生的免疫球蛋白轻链，或免疫球蛋白片段。
当以下症状或信号存在时，典型地诊断为症状性多发性骨髓瘤克隆浆细胞在骨髓活检时组成了超过10%的细胞，或者在其它组织(例如浆细胞瘤)的活检中以任何量存在；血清或尿中的病变蛋白；终末器官损伤证据(相关器官或组织损伤)，例如高钙血症(例如，血液中校正的钙> 2. 75mmol/L)、骨髓瘤引起的肾功能不全、限定为血红蛋白 < 10g/dL血液的贫血、骨损害(例如，溶解损害或伴有压缩性骨折的骨质疏松症、频繁严重感染(一年> 2次)、其它器官的淀粉样变性(淀粉样蛋白沉积)、和高粘滞综合症(血液粘度增加)。患有多发性骨髓瘤的个体分成下列各组。在一个实施方案中，患有多发性骨髓瘤的个体从未被治疗过该疾病。在另一个实施方案中，个体患有应答型骨髓瘤；即，对治疗应答的多发性骨髓瘤。在一个具体的实施方案中，作为治疗结果，这样的个体显示了 M蛋白 (病变蛋白)的至少50%的下降。在另一个具体的实施方案中，作为治疗结果，个体显示了 M蛋白在25%到50%之间的下降。在另一个实施方案中，个体患有稳固型多发性骨髓瘤，其指骨髓瘤对治疗无应答(例如，M蛋白的下降未达到50%)，但没有进展或转坏。在另一个实施方案中，个体患有进行性多发性骨髓瘤，其指恶化中的活性骨髓瘤(例如，增加的M蛋白和恶化中的器官或组织损伤或终末器官损伤)。在另一个实施方案中，个体患有复发的多发性骨髓瘤，其指起初对治疗应答但然后开始再次进展的骨髓瘤疾病。在具体的实施方案中，个体在初始治疗后复发或在后来的治疗后复发。在另一个实施方案中，个体患有难治性多发性骨髓瘤。在一个具体的实施方案中，难治性多发性骨髓瘤是对初始治疗无应答的多发性骨髓瘤。在另一个具体的实施方案中，难治性多发性骨髓瘤是对后来的治疗无应答的复发的多发性骨髓瘤。在另一个具体的实施方案中，难治性多发性骨髓瘤是无应答的进展中的难治性疾病，其指难治性疾病在不断进展。在另一个具体的实施方案中，难治性多发性骨髓瘤是无应答的非进展中的难治性疾病，其指难治性疾病未恶化。因此，在一个实施方案中，本发明提供了治疗患有多发性骨髓瘤的个体的方法，包括对个体施用0PAC、0PAC群或包含OPAC的细胞群，其中所述施用引起多发性骨髓瘤的一种或多种症状的进展的可检测降低、恶化的可检测停止、和/或可检测的改善。在具体的实施方案中，所述一种或多种症状包括与正常值相比升高的血或尿钙、存在骨损害、贫血、或肾衰竭。在一个更加具体的实施方案中，所述一种或多种症状包括克隆浆细胞在骨髓活检时组成了超过10%的细胞，或者在其它组织(例如浆细胞瘤)的活检中以任何量存在；血清或尿中的病变蛋白；和/或终末器官损伤证据。在一个更加具体的实施方案中，所述一种或多种症状是血钙浓度超过2. 75mmol/L、肾功能不全、每升血液血红蛋白低于100g、存在骨损害、或者骨髓外一个或多个器官的淀粉样变性。在另一个具体的实施方案中，所述症状是神经学症状。在更加具体的实施方案中， 所述神经学症状是虚弱、意识错乱、疲劳、头痛、视力变化、视网膜病变、根性疼痛、肠或膀胱控制丧失、腕管综合症、和/或截瘫。在一个具体的实施方案中，本发明提供了治疗患有多发性骨髓瘤的个体的方法， 包含对个体施用OPAC、OPAC群或包含OPAC的细胞群，其中所述施用在个体的一个或多个器官中引起多发性骨髓瘤细胞数目的可检测降低，例如，克隆的多发性骨髓瘤细胞。在一个具体的实施方案中，本发明提供了治疗患有多发性骨髓瘤的个体的方法， 包含对个体施用OPAC、OPAC群或包含OPAC的细胞群，其中所述施用引起个体血液中血红蛋
44白的可检测增加，例如，在正常限度内增加。正常的血红蛋白水平随个体的年龄和性别而变化，如下面表1中显示的表权利要求
1.治疗患有多发性骨髓瘤的个体的方法，其包括对所述个体施用分离的成骨胎盘贴壁细胞(OPAC)，其中所述OPAC是从绒毛膜获得的，而且附着到组织培养塑料制品上，而且其中所述OPAC是⑶200阴性的或是⑶200^的，且⑶105阳性的，而且其中所述施用可检测地降低、停止所述多发性骨髓瘤的一种或多种症状的进展或改善所述多发性骨髓瘤的一种或多种症状。
2.如权利要求1所述的方法，其中所述OPAC是SSEA3+或SSEA4+的。
3.如权利要求1所述的方法，其中所述OPAC是SSEA3+且SSEA4+的。
4.如权利要求1所述的方法，其中当所述OPAC和所述⑶200+胎盘干细胞在生长培养基中培养时，与相等数目的⑶200+ 贴壁胎盘干细胞相比，所述OPAC以可检测的较高水平表达一个或多个基因，其中所述一个或多个基因包括BMP3 (骨形态发生蛋白3)、CDHl 1、COLIOAl、C0L14A1、C0L15A1 ,DMPl (牙本质基质酸性磷蛋白1)、DSPP (牙本质涎磷蛋白)、ENAM(釉蛋白)、FGFR2 (成纤维细胞生长因子受体2) ,MMPlO (基质金属蛋白酶10 (基质分解素2))、TGFB3、和/或TGFBRl中的一个或多个，这通过来自实时定量PCR的Ct值来评估；当所述OPAC和所述胎盘干细胞在成骨培养基中培养时，与相等数目的CD200+贴壁胎盘干细胞相比，所述OPAC以可检测的较高水平表达一个或多个基因，其中所述一个或多个基因包括AMBN(成釉蛋白(釉基质蛋白))、BMP2 (骨形态发生蛋白2、、CALCR(降钙素受体)、 CDH11、COL11A1、COL14A1、COL15A1、C0L2A1、CSF2、CSF3、DMP1、DSPP、ENAM、FGF3、GDF10 (生长分化因子10)、IGFl (胰岛素样生长因子1)、ITGAl (整联蛋白，α 1 (CD49))、ITGA2 (整联蛋白，0 2(0>498))、匪 10、匪 8(基质金属蛋白酶8(中性粒细胞胶原酶))、匪 9、06 六(血小板源生长因子A)、SMADl、TGFB3、TGFBRl和/或TGFBR2 (转化生长因子β，受体2)中的一个或多个，这通过来自实时定量PCR的Ct值来评估；不管所述OPAC和所述胎盘干细胞是在生长培养基中还是在成骨培养基中培养，与不是滋养层或细胞滋养层的相等数目的贴壁CD200+胎盘干细胞相比，所述OPAC在可检测的较高水平表达一个或多个基因，其中所述一个或多个基因包括⑶Hll、C0L14A1、C0L15A1、 DMP1、DSPP、ENAM、MMP10、TGFB3和/或TGFBRl中的一个或多个，或全部，这通过来自实时定量PCR的Ct值来评估；当所述OPAC和所述胎盘干细胞在生长培养基中培养时，与不是滋养层或细胞滋养层的相等数目的贴壁CD200+胎盘干细胞相比，所述OPAC在可检测的较低水平表达一个或多个基因，其中所述一个或多个基因包括AHSG(a-2-HS-糖蛋白)、ALPL(碱性磷酸酶，肝脏 /骨/肾脏)、EGF (表皮生长因子)、FLTl (fins相关的酪氨酸激酶1 (血管内皮生长因子/ 血管通透性因子受体))、IGF2、ITGA2、ITGAM(整联蛋白，α M(补体成分3受体3亚基))、 SCARBl (清道夫受体B类，成员1)、S0X9 (SRY (性别决定区Y)-盒9)、TNF、TffISTl (扭曲同系物1 ；以前称作睑裂狭小、倒转型内眦赘皮和上睑下垂3，尖头并指趾畸形3)、VCAM1 (血管细胞粘附分子1)和/或VDR(维生素D(l，25-二羟基维生素受体)中的一个或多个， 或全部，这通过来自实时定量PCR的Ct值来评估；当所述OPAC和所述胎盘干细胞在成骨培养基中培养时，与不是滋养层或细胞滋养层的相等数目的贴壁CD200+胎盘干细胞相比，所述OPAC在可检测的较低水平表达一个或多个基因，其中所述一个或多个基因包括BGN(双糖链蛋白多糖)、C0L11A1、C0MP (软骨寡聚基质蛋白)、FGF1和/或VCAMl中的一个或多个，或全部，这通过来自实时定量PCR的Ct值来评估；不管所述OPAC和所述胎盘干细胞是在生长培养基中还是在成骨培养基中培养，与不是滋养层或细胞滋养层的相等数目的贴壁CD200+胎盘干细胞相比，所述OPAC在可检测的较低水平表达VCAMl，这通过来自实时定量PCR的Ct值来评估；当OPAC和所述干细胞在生长培养基中培养时，与相等数目的骨髓源间充质干细胞相比，所述OPAC在可检测的较高水平表达一个或多个基因，其中所述一个或多个基因包括 BMP4、CALCR、CD36、CDHl 1、COL12A1、COL14A1、COL15A1、C0L3A1、C0L5A1、DMP1、DSPP、FLT1、 MSX1、PDGFA、TGFB3、TGFBR1和/或TUFTl (釉丛蛋白1)中的一个或多个，或全部，这通过来自实时定量PCR的Ct值来评估；当OPAC和干细胞在成骨培养基中培养时，与相等数目的骨髓源间充质干细胞相比，所述OPAC在可检测的较高水平表达一个或多个基因，其中所述一个或多个基因包括AMBN、 CALCR、COL14A1、COL15A1、CSF3、DMP1、DSPP、ITGA1、ITGA2、MMP10、MMP9、MSX1、PDGFA、TGFB1、 TGFB3、TGFBRl和/或TGFBR2中的一个或多个，或全部，这通过来自实时定量PCR的Ct值来评估；不管所述OPAC和所述胎盘干细胞是在生长培养基中还是在成骨培养基中培养，与相等数目的骨髓源间充质干细胞相比，所述OPAC在可检测的较高水平表达一个或多个基因， 其中所述一个或多个基因包括 CALCR、COL14A1、COL15A1、DMP1、DSPP、MSX1、PDGFA、TGFB3 和 /或TGFBRl中的一个或多个，或全部，这通过来自实时定量PCR的Ct值来评估；当OPAC和间充质干细胞在生长培养基中培养时，与相等数目的骨髓源间充质干细胞相比，所述OPAC在可检测的较低水平表达一个或多个基因，其中所述一个或多个基因包括 ALPL, BGLAP (骨 Y -羧基谷氨酸(gla)蛋白)、IGF2、ITGA2、ITGAM、SCARBl 和 / 或 SOXl 中的一个或多个，或全部，这通过来自实时定量PCR的Ct值来评估；当OPAC和所述干细胞在成骨培养基中培养时，与相等数目的骨髓源间充质干细胞相比，所述OPAC在可检测的较低水平表达一个或多个基因，其中所述一个或多个基因包括 AHSG, ALPL, BGLAP, BGN、BMP3、BMP5、CD36、C0L10A1、COLlIAl、C0L12A1、C0L2A1、C0L4A3、 COMP, EGF、FGFU FGFR2、IGF2、MMP8、PHEX(磷酸盐调节的肽链内切酶同系物，X连锁)、 RUNX2 (runt-相关转录因子2)、SCARB 1、SOXl、VCAMl和/或VEGFB中的一个或多个，或全部，这通过来自实时定量PCR的Ct值来评估；或不管所述OPAC和所述胎盘干细胞是在生长培养基中还是在成骨培养基中培养，与相等数目的骨髓源间充质干细胞相比，所述OPAC在可检测的较低水平表达一个或多个基因， 其中所述一个或多个基因包括ALPL、BGLAP、IGF2、SCARBl和/或S0X9中的一个或多个，或全部，这通过来自实时定量PCR的Ct值来评估。
5.如权利要求1所述的方法，其中所述OPAC 与相等数目的骨髓源间充质干细胞相比以可检测的较高水平表达一个或多个基因，其中所述一个或多个基因包括 BMP4、BMP6、CD36、CDHl 1、C0L14A1、C0L15A1、COLlAl、C0L3A1、 C0L5A1、CSF2、CTSK、FGF2、FGFRl、FLTl、ITGAl、MINPPl、MMP9、MSXl、PDGFA,SERPINH1、TGFB3 和TGFBRl中的一个或多个，其中所述OPAC和所述间充质干细胞经历了相等数目的传代；或与相等数目的成纤维细胞相比以可检测的较高水平表达一个或多个基因，其中所述一3个或多个基因包括 BMP4、BMP6、CDHl 1、C0L14A1、C0L15A1、COLlAl、C0L3A1、C0L5A1、FLTl、 IGF1R、ITGAl、MINPPl、PDGFA、SERPINH1、SMAD3、TGFBl、TGFB2、TGFB3、TGFBRl、TNF、TUFTl、 VCAMl和VEGFA中的一个或多个，而且其中所述成纤维细胞经历了相等数目的传代。
6.如权利要求1所述的方法，其中所述OPAC分泌一种或多种蛋白核心蛋白聚糖、表皮调节素、IGFBP-3、IGFBP-6、IL_2Ra、IL-17RC、IL-27、潜在的 TGF-β 结合蛋白 1 (LTBP)、 NCAM-I、Smad4、TFPI、TGF- β R1/ALK5 或 ΤΙΜΡ-2。
7.如权利要求1所述的方法，其中所述OPAC分泌蛋白核心蛋白聚糖、表皮调节素、 IGFBP-3、IGFBP-6、IL_2Ra、IL-17RC、IL-27、潜在的 TGF-β 结合蛋白 1 (LTBP)、NCAM-U Smad4、TFPI, TGF- β R1/ALK5 禾口 ΤΙΜΡ—2。
8.如权利要求1所述的方法，其中所述一种或多种症状是骨痛、骨细胞损害、贫血、或肾衰竭。
9.如权利要求1所述的方法，包括对所述个体施用至少lX1080PAC/kg。
10.分离的成骨胎盘贴壁细胞(OPAC)，其中所述细胞是从绒毛膜获得的，而且附着到组织培养塑料制品上，而且其中所述细胞是⑶200阴性的或是⑶200dim的，且是⑶105阳性的。
11.如权利要求9所述的分离的细胞，其是SSEA3+或SSEA4+的。
12.如权利要求9所述的分离的细胞，其是SSEA3+且SSEA4+的。
13.如权利要求9所述的分离的细胞，其中所述细胞生产骨保护素。
14.如权利要求9所述的分离的细胞，其中所述细胞额外地是α-平滑肌肌动蛋白表达阴性、RANKL表达阴性、NG2表达阳性、骨保护素表达阳性的，或显示可诱导的碱性磷酸酶活性。
15.如权利要求13所述的分离的细胞，其中所述细胞额外地是α-平滑肌肌动蛋白表达阴性、RANKL表达阴性、NG2表达阳性、骨保护素表达阳性的，并显示可诱导的碱性磷酸酶活性。
16.如权利要求9所述的分离的细胞，其中所述细胞与CD200+贴壁胎盘干细胞相比以可检测的较高水平表达一个或多个基因，其中所述一个或多个基因包括 ΒΜΡ6、CDHl 1、C0L10A1、C0L14A1、C0L15A1、COLlAl、C0L1A2、C0L3A1、 C0L4A3、C0L5A1、CSF3、CTSK、IGF1R、MINPP1、ΜΜΡ2、ΜΜΡ9、MSX1、SMAD1、SMAD3、TGFB3、TGFBRl 和VEGFB中的一个或多个，其中所述OPAC和所述CD200+贴壁胎盘干细胞经历了相等数目的传代；与骨髓源间充质干细胞相比以可检测的较高水平表达一个或多个基因，其中所述一个或多个基因包括81^4、81^6丄036丄0!111、0^14六1、0^15六1、0^认1、0^3六1、0^5六1丄5卩2、 CTSK、FGF2、FGFRl、FLTl、ITGAl、MINPPl、MMP9、MSXl、PDGFA、SERPINH1、TGFB3 和 TGFBRl 中的一个或多个，其中所述OPAC和所述间充质干细胞经历了相等数目的传代；和/或与成纤维细胞相比以可检测的较高水平表达一个或多个基因，其中所述一个或多个基因包括 BMP4、BMP6、CDHl 1、C0L14A1、C0L15A1、COLlAl、C0L3A1、C0L5A1、FLTl、IGF1R、ITGAl、 MINPPl、PDGFA,SERPINH1、SMAD3、TGFBl、TGFB2、TGFB3、TGFBRl、TNF、TUFTl、VCAMl 和 VEGFA 中的一个或多个，其中所述成纤维细胞在培养中经历的传代数目与所述成纤维细胞经历的传代数目相等。
17.如权利要求9所述的分离的细胞，其中所述细胞分泌一种或多种蛋白核心蛋白聚糖、表皮调节素、IGFBP-3、IGFBP-6、IL-2Ra、IL-17RC、IL-27、潜在的 TGF-β 结合蛋白 1 (LTBP)、NCAM-I、Smad4、TFPI、TGF- β R1/ALK5 或 ΤΙΜΡ-2。
18.如权利要求16所述的分离的细胞，其中所述细胞分泌蛋白核心蛋白聚糖、表皮调节素、IGFBP-3、IGFBP-6、IL_2Ra、IL-17RC、IL-27、潜在的 TGF-β 结合蛋白 1 (LTBP)、 NCAM—l、Smad4、TFPI, TGF- β R1/ALK5 禾口 ΤΙΜΡ—2。
19.分离的细胞群，包含如权利要求9所述的细胞。
20.如权利要求9所述的细胞的分离的群，其中当所述OPAC和所述CD200+胎盘干细胞在生长培养基中培养时，与相等数目的CD200+ 贴壁胎盘干细胞相比，所述细胞以可检测的较高水平表达一个或多个基因，其中所述一个或多个基因包括ΒΜΡ3 (骨形态发生蛋白3)、CDHl 1、C0L10A1、C0L14A1、C0L15A1、DMPl (牙本质基质酸性磷蛋白1)、DSPP (牙本质涎磷蛋白)、ENAM(釉蛋白)、FGFR2 (成纤维细胞生长因子受体2) ,MMPlO (基质金属蛋白酶10 (基质分解素2))、TGFB3、和/或TGFBRl中的一个或多个，这通过来自实时定量PCR的Ct值来评估；当所述OPAC和所述胎盘干细胞在成骨培养基中培养时，与相等数目的CD200+贴壁胎盘干细胞相比，所述细胞以可检测的较高水平表达一个或多个基因，其中所述一个或多个基因包括AMBN(成釉蛋白(釉基质蛋白))、BMP2 (骨形态发生蛋白2、、CALCR(降钙素受体)、 CDH11、COL11A1、COL14A1、COL15A1、C0L2A1、CSF2、CSF3、DMP1、DSPP、ENAM、FGF3、GDF10 (生长分化因子10)、IGFl (胰岛素样生长因子1)、ITGAl (整联蛋白，α 1 (CD49))、ITGA2 (整联蛋白，0 2(0>498))、匪 10、匪 8(基质金属蛋白酶8(中性粒细胞胶原酶))、匪 9、？06 六(血小板源生长因子A)、SMADl、TGFB3、TGFBRl和/或TGFBR2 (转化生长因子β，受体2)中的一个或多个，这通过来自实时定量PCR的Ct值来评估；不管所述OPAC和所述胎盘干细胞是在生长培养基中还是在成骨培养基中培养，与不是滋养层或细胞滋养层的相等数目的贴壁CD200+胎盘干细胞相比，所述细胞以可检测的较高水平表达一个或多个基因，其中所述一个或多个基因包括⑶Hll、C0L14A1、C0L15A1、 DMP1、DSPP、ENAM、MMP10、TGFB3和/或TGFBRl中的一个或多个，或全部，这通过来自实时定量PCR的Ct值来评估；当所述OPAC和所述胎盘干细胞在生长培养基中培养时，与不是滋养层或细胞滋养层的相等数目的贴壁CD200+胎盘干细胞相比，所述细胞以可检测的较低水平表达一个或多个基因，其中所述一个或多个基因包括AHSG(a-2-HS-糖蛋白)、ALPL(碱性磷酸酶，肝脏 /骨/肾脏)、EGF(表皮生长因子)、FLTl (fms相关的酪氨酸激酶1 (血管内皮生长因子/ 血管通透性因子受体))、IGF2、ITGA2、ITGAM(整联蛋白，α M(补体成分3受体3亚基))、 SCARBl (清道夫受体B类，成员1)、S0X9(SRY(性别决定区Y)-盒9)、TNF、TffISTl (扭曲同系物1 ；以前称作睑裂狭小、倒转型内眦赘皮和上睑下垂3，尖头并指趾畸形3)、VCAM1 (血管细胞粘附分子1)和/或VDR(维生素D(l，25-二羟基维生素受体)中的一个或多个， 或全部，这通过来自实时定量PCR的Ct值来评估；当所述OPAC和所述胎盘干细胞在成骨培养基中培养时，与不是滋养层或细胞滋养层的相等数目的贴壁CD200+胎盘干细胞相比，所述细胞以可检测的较低水平表达一个或多个基因，其中所述一个或多个基因包括BGN(双糖链蛋白多糖)、C0L11A1、C0MP (软骨寡聚基质蛋白)、FGF1和/或VCAMl中的一个或多个，或全部，这通过来自实时定量PCR的Ct值来评估；不管所述OPAC和所述胎盘干细胞是在生长培养基中还是在成骨培养基中培养，与不是滋养层或细胞滋养层的相等数目的贴壁CD200+胎盘干细胞相比，所述细胞以可检测的较低水平表达VCAMl，这通过来自实时定量PCR的Ct值来评估；当OPAC和所述干细胞在生长培养基中培养时，与相等数目的骨髓源间充质干细胞相比，所述细胞以可检测的较高水平表达一个或多个基因，其中所述一个或多个基因包括 BMP4、CALCR、CD36、CDHl 1、COL12A1、COL14A1、COL15A1、C0L3A1、C0L5A1、DMP1、DSPP、FLT1、 MSX1、PDGFA、TGFB3、TGFBR1和/或TUFTl (釉丛蛋白1)中的一个或多个，或全部，这通过来自实时定量PCR的Ct值来评估；当OPAC和所述干细胞在成骨培养基中培养时，与相等数目的骨髓源间充质干细胞相比，所述细胞以可检测的较高水平表达一个或多个基因，其中所述一个或多个基因包括 AMBN、CALCR、COL14A1、COL15A1、CSF3、DMP1、DSPP、ITGA1、ITGA2、MMP10、MMP9、MSX1、PDGFA、 TGFBl、TGFB3、TGFBRl和/或TGFBR2中的一个或多个，或全部，这通过来自实时定量PCR的 Ct值来评估；不管所述OPAC和所述胎盘干细胞是在生长培养基中还是在成骨培养基中培养，与相等数目的骨髓源间充质干细胞相比，所述细胞在可检测的较高水平表达一个或多个基因， 其中所述一个或多个基因包括 CALCR、C0L14A1、⑶L15A1、DMPl、DSPP、MSXl、PDGFA、TGFB3 和 /或TGFBRl中的一个或多个，或全部，这通过来自实时定量PCR的Ct值来评估；当OPAC和所述间充质干细胞在生长培养基中培养时，与相等数目的骨髓源间充质干细胞相比，所述细胞在可检测的较低水平表达一个或多个基因，其中所述一个或多个基因包括 ALPL、BGLAP (骨 Y-羧基谷氨酸(gla)蛋白)、IGF2、ITGA2、ITGAM、SCARB1 和 / 或 SOXl 中的一个或多个，或全部，这通过来自实时定量PCR的Ct值来评估；当OPAC和所述干细胞在成骨培养基中培养时，与相等数目的骨髓源间充质干细胞相比，所述细胞在可检测的较低水平表达一个或多个基因，其中所述一个或多个基因包括 AHSG, ALPL, BGLAP, BGN、BMP3、BMP5、CD36、C0L10A1、COLl IAl、C0L12A1、C0L2A1、C0L4A3、 COMP, EGF、FGFU FGFR2、IGF2、MMP8、PHEX(磷酸盐调节的肽链内切酶同系物，X连锁)、 RUNX2 (runt-相关转录因子2)、SCARBl、SOXl、VCAMl和/或VEGFB中的一个或多个，或全部，这通过来自实时定量PCR的Ct值来评估；或不管所述OPAC和所述胎盘干细胞是在生长培养基中还是在成骨培养基中培养，与相等数目的骨髓源间充质干细胞相比，所述细胞在可检测的较低水平表达一个或多个基因， 其中所述一个或多个基因包括ALPL、BGLAP、IGF2、SCARBl和/或S0X9中的一个或多个，或全部，这通过来自实时定量PCR的Ct值来评估。
21.如权利要求18所述的分离的细胞群，其中所述细胞群中的细胞表达一种或多种蛋白核心蛋白聚糖、表皮调节素、IGFBP-3、IGFBP-6、IL_2Ra、IL-17RC、IL-27、潜在的 TGF- β 结合蛋白 1 (LTBP)、NCAM-I、Smad4、TFPI、TGF- β R1/ALK5 或 ΤΙΜΡ-2。
22.如权利要求18所述的分离的细胞群，其中所述细胞群中的细胞表达蛋白核心蛋白聚糖、表皮调节素、IGFBP-3、IGFBP-6、IL-2Ra、IL-17RC、IL-27、潜在的TGF-β结合蛋白 1 (LTBP)、NCAM-I、Smad4、TFPI、TGF- β R1/ALK5 禾口 ΤΙΜΡ-2。
23.如权利要求18所述的分离的细胞群，其中所述群的至少50%的细胞是如权利要求 9所述的细胞。
24.如权利要求18所述的分离的细胞群，其中所述群的至少80%的细胞是如权利要求 9所述的细胞。
25.如权利要求18所述的分离的细胞群，其中所述群的至少95%的细胞是如权利要求 9所述的细胞。
26.如权利要求18所述的分离的细胞群，基本由如权利要求9所述的细胞组成。
全文摘要
本发明提供了成骨胎盘贴壁细胞(OPAC)，使用OPAC和OPAC群的方法，以及培养、增殖、扩增或分化OPAC的方法。本发明进一步提供了使用OPAC配制适合对个体施用的可植入或可注射的组合物的方法。本发明更进一步提供的是，提供了用OPAC和包含OPAC的组合物治疗骨缺损的方法。本发明也提供了在多发性骨髓瘤的治疗和控制中使用OPAC的方法，例如，在患有多发性骨髓瘤的个体中对多发性骨髓瘤的一种或多种症状降低其进展、停止其进展、或改善其，该方法包含对个体施用大量OPAC。
文档编号A61P35/00GK102176919SQ200980140287
公开日2011年9月7日 申请日期2009年8月24日 优先权日2008年8月22日
发明者克利斯登·拉巴左, 施缪尔·雅科比, 穆罕默德·A·黑德兰, 萨沙·道恩·阿布拉门逊, 马里安·古拉基斯 申请人:人类起源公司