专利名称：寡糖-蛋白缀合物的制作方法
技术领域：
本发明总体上涉及包含特定寡糖的寡糖-蛋白缀合物，以及包含这种缀合物的组合物。本发明还涉及使用寡糖-溶酶体酶缀合物治疗溶酶体贮积症的方法。
背景技术：
溶酶体贮积症(LSD)是一类稀少代谢疾患，其包括四十多种基因疾病，包括溶酶体水解酶的活性的缺陷。LSD的标志性特征是溶酶体代谢物的异常积蓄，这导致形成大量肿胀的溶酶体。LSD可通过施用受试者中缺少的活性形式的酶来进行治疗，该方法称为酶替代疗法(ERT)。施用的具有末端甘露糖-6-磷酸酯(M6P)的替代酶通过细胞-表面-相关的阳离子依赖性M6P受体(CI-MPR)-介导的内吞作用而被靶细胞摄取并导向至溶酶体。通常，较差磷酰化的替代酶无法有效地被细胞表面上的M6P受体内在化，因此不能定向至它们发挥作用的溶酶体。因此，较低程度的甘露糖磷酰化对于替代酶的治疗效果可具有明显不利的影响。已经开发了多种方法来增加替代酶的M6P含量。例如，美国专利No. 6，534，300 ； 6，670，165 ；和6，861，242描述了末端甘露糖残基的酶磷酰化。在另外的例子中，美国专利 No. 7，001，994描述了偶联包含M6P的寡糖和糖蛋白的方法。发现溶酶体酶酸性α -葡糖苷酶(GAA)和通过该方法制备的双-Μ6Ρ寡糖的缀合，在蓬佩病的鼠模型中比重组人GAA更有效地减少骨骼和心肌糖原，蓬佩病是常染色体隐性遗传的肌肉疾病，源自GAA的代谢缺失， 并且特征在于溶酶体糖原的积蓄。类似地，Zhu等描述了合成双-Μ6Ρ寡糖(式Α)和GAA的偶联。Zhu等，Biochem. J. 389 =619-628 (2005)。式A通过下列方式从N-连接的聚糖(式 B)的天然三线式ManjI心结构来设计除去一个支链，缩短另一个支链，并且磷酰化末端甘露糖残基。
权利要求
1. 一种寡糖-蛋白缀合物，包含(1)蛋白和⑵式I-VI中任一者的寡糖
2.权利要求1所述的寡糖-蛋白缀合物，其中所述寡糖具有两个甘露糖-6-磷酸酯残基。
3.权利要求1所述的寡糖-蛋白缀合物，其中所述寡糖具有三个甘露糖-6-磷酸酯残基。
4.权利要求1所述的寡糖-蛋白缀合物，其中所述寡糖是寡糖82。
5.权利要求1所述的寡糖-蛋白缀合物，其中所述寡糖是寡糖128、寡糖1 或其混合物。
6.权利要求1所述的寡糖-蛋白缀合物，其中所述寡糖是寡糖130、寡糖131或其混合物。
7.权利要求1所述的寡糖-蛋白缀合物，其中所述寡糖是寡糖132、寡糖133或其混合物。
8.权利要求1所述的寡糖-蛋白缀合物，其中所述寡糖是寡糖136。
9.权利要求1所述的寡糖-蛋白缀合物，其中所述蛋白是糖蛋白。
10.权利要求9所述的寡糖-蛋白缀合物，其中所述糖蛋白是溶酶体酶。
11.根据权利要求10所述的寡糖-蛋白缀合物，其中所述溶酶体酶是酸性α-葡糖苷酶、α-半乳糖苷酶Α、酸性神经磷脂酶、α-L-艾杜糖苷酸酶、艾杜糖酸酯-2-硫酸酯酶或 N-乙酰半乳糖胺-4-硫酸酯酶。
12.根据权利要求10所述的寡糖-蛋白缀合物，其中所述溶酶体酶是酸性α
13.一种药物组合物，包含权利要求1所述的寡糖-蛋白缀合物和赋形剂。
14.权利要求1所述的缀合物在制备用于在需要的受试者中治疗溶酶体贮积症的药物中的用途。
15.一种治疗溶酶体贮积症的方法，包括向哺乳动物施用寡糖-糖蛋白缀合物，所述寡糖-糖蛋白缀合物包含(1)溶酶体酶和( 式I-VI中任一者的寡糖
16.权利要求15所述的方法，其中所述溶酶体贮积症选自法布里病、蓬佩病、尼曼-匹克氏A病、尼曼-匹克氏B病、粘多糖增多症I、粘多糖增多症II和粘多糖增多症VI。
17.权利要求16所述的方法，其中所述溶酶体贮积症是蓬佩病。
18.权利要求15所述的方法，还包括在使用所述寡糖-糖蛋白缀合物治疗之前、之后或过程中向所述哺乳动物施用甲氨蝶呤。
全文摘要
本文中提供包含蛋白和式I-VI中之一的寡糖的缀合物。本文中还提供包含这种缀合物的药物组合物。本文中进一步提供通过施用寡糖-糖蛋白缀合物而在哺乳动物中治疗溶酶体贮积症的方法。
文档编号A61P3/00GK102369023SQ200980156896
公开日2012年3月7日 申请日期2009年12月11日 优先权日2008年12月16日
发明者A·皮尔, C·潘, D·帕特森, J·E·斯特法诺, J·哈拉西, J·库茨科, L·Z·阿维拉, L·扬, M·R·里尔登, P·A·科诺维兹, P·芬, R·J·米勒, 周群, 朱云翔, 郑晓阳 申请人:建新公司