专利名称：一种提纯桑叶黄酮的方法
技术领域：
本发明属于生物分离技术领域，特别涉及一种采用大孔树脂和聚酰胺联用制备高 纯度桑叶黄酮的工艺。
背景技术：
我国是世界上种桑养蚕最早的国家，也是中华民族对人类文明的伟大贡献之一。 桑树的栽培已有七千多年的历史。栽培范围广泛，东北自哈尔滨以南；西北从内蒙古南部至 新疆、青海；南至两广，东至台湾；西至四川、云南；长江中下游各地栽培最多。桑叶为桑科(Moraceae)桑属植物桑(Morns dba L.)的叶，味苦、甘，性寒，归肺、 肝经，具有疏散风热、清肺润燥、平肝明目、凉血止血之功效。《本草纲目》记载桑叶乃手、足 阳明之药，治劳热咳嗽，明目长发，止消渴。桑叶含有含牛膝留酮、脱皮留酮、保留醇、芸香甙、桑甙、异槲皮甙、伞形花内 酯、东莨菪甙、a_、己烯醛、葫芦巴碱(trigonelline、胆碱、腺嘌呤、天冬氨酸、氯原酸。 桑叶中黄酮类成分含量丰富，含量约占干叶重的1.0% 3.0%，是植物茎叶中黄酮类化合 物含量较高的一种。黄酮类化合物因其生理活性多种多样，引起了国内外学者的广泛重视， 研究进展很快。它具有良好的自由基、抗氧化、抗衰老、降血脂、免疫调节、抗菌等生理活性， 具有广阔的应用前景。现有提取桑叶黄酮多是乙醇提取或水煎煮，再经大孔树脂吸附或萃取。如专利申 请号200810059049 “一种从桑叶中提取黄酮、多糖的方法”，公开的方法采用乙醇超声提取 制备出低含量桑叶黄酮。还如专利200810236144 “一种联产桑叶黄酮、多糖和生物碱”，公 开的方法采用水加热浸提、大孔树脂吸附。还如陈建明等发表的“AB-8大孔树脂分离纯化 桑叶黄酮的工艺研究”也是采取乙醇超声提取。这些方法存在着醇耗大或工业化难度大，所 得黄酮含量比较低。
发明内容
本发明的目的是为了克服以上述已有工艺缺陷和不足，提供一种高纯度桑叶黄酮
生产工艺。本发明的目的是这样来实现的一种提纯桑叶黄酮的方法，其特征在于包括以下几个步骤1)将桑叶粉碎，用6-10倍量ph9_12碱水40_60°C动态提取1_3小时，提取2_3次， 合并提取液；2)提取液调ph5_6加入大孔树脂柱吸附，水_醇洗脱，收集桑叶黄酮流分，减压浓 缩至密度1. 2-1. 3 ；3)浓缩液加入聚酰胺树脂烘干，再1 2聚酰胺树脂装柱，水一醇梯度洗脱，收集 桑叶黄酮流分调phl-3，静置结晶；4)重结晶将上述结晶物滤出，用70-80%乙醇回流溶解静置结晶2-3次，干燥即得广品。步骤1)中的碱可选氢氧化钠或氢氧化钙。优选氢氧化钙。步骤2)、3)中的调ph的可选盐酸、硫酸或磷酸的一种。步骤2)中大孔树脂可选D101或SPD100，水-醇洗脱为水洗中性再5-6BV650_70% 乙醇洗脱桑叶黄酮。优选65%乙醇步骤3)中的水一醇梯度洗脱顺序为5-7BV水一4-6BV10-30 %乙醇 —5-6BV60-80% 乙醇。综上所述，本发明存在以下优点1)碱水提取，黄酮溶出快，无需浓缩，直接上柱。2)大孔树脂和聚酰胺柱的应用，除杂效果好，中间产物更易纯化。下面将结合具体实施方式
进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限 于下列实施方式。
具体实施例方式实施例1 取1kg干燥桑叶(桑叶黄酮含量3% )，粉碎，加入lOLphlO的氢氧化钙溶液，加热 至50°C动态提取2小时，提取两次，合并提取液滤过盐酸调ph至5加入500mlD101树脂柱 吸附，水洗中性，2. 5L65 %乙醇洗脱桑叶黄酮，减压浓缩至密度1. 2，加入20g聚酰胺，烘干 和100g新聚酰胺一起装柱，依次用800ml水一500ml30%乙醇一600ml75%乙醇洗脱，收集 桑叶黄酮流分加入盐酸调ph至1静置结晶，滤出结晶物再用75%乙醇回流溶解静置结晶2 次，滤出结晶，干燥得桑叶黄酮21g，含量95%。实施例2 取1kg干燥桑叶(桑叶黄酮含量3% )，粉碎，加入10Lphl2的氢氧化钙溶液，加热 至40°C动态提取2小时，提取两次，合并提取液滤过硫酸调ph至6加入500mlD101树脂柱 吸附，水洗中性，2. 5L70%乙醇洗脱桑叶黄酮，减压浓缩至密度1. 25，加入20g聚酰胺，烘干 和100g新聚酰胺一起装柱，依次用700ml水一700ml 10%乙醇一700ml60%乙醇洗脱，收集 桑叶黄酮流分加入硫酸调Ph至3静置结晶，滤出结晶物再用75%乙醇回流溶解静置结晶3 次，滤出结晶，干燥得桑叶黄酮19g，含量96%。实施例3 取lkg干燥桑叶(桑叶黄酮含量3% )，粉碎，加入8LpM的氢氧化钠溶液，加 热至60°C动态提取3次，提取时间3 — 2 — 1小时，合并提取液滤过盐酸调ph至5加 入500mlSPD100树脂柱吸附，水洗中性，3L50%乙醇洗脱桑叶黄酮，减压浓缩至密度1. 2， 加入30g聚酰胺，烘干和150g新聚酰胺一起装柱，依次用800ml水一500ml20 %乙醇 —600ml75%乙醇洗脱，收集桑叶黄酮流分加入盐酸调ph至2静置结晶，滤出结晶物再用 75%乙醇回流溶解静置结晶，滤出结晶，干燥得桑叶黄酮20g，含量95%。实施例4 取10kg干燥桑叶(桑叶黄酮含量3% )，粉碎，加入100Lphl0的氢氧化钙溶液，加 热至40°C动态提取2小时，提取两次，合并提取液滤过盐酸调ph至6加入5LD101树脂柱吸 附，水洗中性，25L65%乙醇洗脱桑叶黄酮，减压浓缩至密度1. 25，加入200g聚酰胺，烘干和1000g新聚酰胺一起装柱，依次用8L水一5L30%乙醇一6L75%乙醇洗脱，收集桑叶黄酮流 分加入盐酸调ph至1静置结晶，滤出结晶物再用75%乙醇回流溶解静置结晶2次，滤出结 晶，干燥得桑叶黄酮208g，含量95.2%。实施例5 取10kg干燥桑叶(桑叶黄酮含量3% )，粉碎，加入lOOLphlO的氢氧化钠溶液，加 热至50°C动态提取1. 5小时，提取3次，合并提取液滤过硫酸调ph至5加入5LSPD100树脂 柱吸附，水洗中性，30L65%乙醇洗脱桑叶黄酮，减压浓缩至密度1. 25，加入200g聚酰胺，烘 干和1000g新聚酰胺一起装柱，依次用7L水一6L20%乙醇一7L70%乙醇洗脱，收集桑叶黄 酮流分加入盐酸调ph至2静置结晶，滤出结晶物再用75%乙醇回流溶解静置结晶2次，滤 出结晶，干燥得桑叶黄酮201g，含量95%。
权利要求
一种提纯桑叶黄酮的方法，其特征在于包括以下几个步骤1)将桑叶粉碎，用6-10倍量ph9-12碱水40-60℃动态提取1-3小时，提取2-3次，合并提取液；2)提取液调ph5-6加入大孔树脂柱吸附，水—醇洗脱，收集桑叶黄酮流分，减压浓缩至密度1.2-1.3；3)浓缩液加入聚酰胺树脂烘干，再1∶2聚酰胺树脂装柱，水→醇梯度洗脱，收集桑叶黄酮流分调ph1-3，静置结晶；4)重结晶将上述结晶物滤出，用70-80％乙醇回流溶解静置结晶2-3次，干燥即得产品。
2.根据权利要求1所述提纯桑叶黄酮的方法，其特征在于步骤1)中的碱可选氢氧化钠 或氢氧化钙。
3.根据权利要求1所述提纯桑叶黄酮的方法，其特征在于步骤2)、3)中的调ph的可选 盐酸、硫酸或磷酸的一种。
4.根据权利要求1所述提纯桑叶黄酮的方法，其特征在于步骤2)中大孔树脂可选 DlOl或SPD100，水一醇洗脱为水洗中性再5-6BV50-70%乙醇洗脱桑叶黄酮。
5.根据权利要求1所述提纯桑叶黄酮的方法，其特征在于步骤3)中的水一醇梯度洗脱 顺序为 5-7BV 水一4-6BV10-30% 乙醇一5-6BV60_80% 乙醇。
全文摘要
本发明涉及一种提纯桑叶黄酮的方法。工艺步骤包括碱水加热提取，调酸过大孔树脂柱，聚酰胺分离纯化，调酸结晶和重结晶。采用本发明生产桑叶黄酮，工艺简单、能耗低、大孔树脂、聚酰胺和乙醇可以重复使用，所得产品纯度高、符合食品医药要求。该工艺适合工业化。
文档编号A61P39/06GK101862372SQ201010130290
公开日2010年10月20日 申请日期2010年3月23日 优先权日2010年3月23日
发明者苏刘花 申请人:南京泽朗农业发展有限公司