专利名称：靶向性季铵盐类阳离子高分子脂质基因载体、制备方法及应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及改性高分子聚合物构建的药物和基因载体、制备方法及应用，进一步的说是一种靶向性季铵盐类阳离子高分子脂质基因载体、制备方法及应用，属于功能化脂质体的制备及应用技术。
背景技术：
基因治疗主要是向靶细胞或组织中引入外源基因DNA或RNA片段以纠正或补偿基因的缺陷或抑制异常表达的基因，从而达到治疗的目的，而基因投递系统则是指将目的基因、基因片断或短链干扰RNA导入靶细胞以达到治疗目的的方式。基因投递系统是恶性肿瘤基因治疗最为关键的瓶颈问题，也是制约恶性肿瘤基因治疗从实验研究到临床应用的核心技术问题。基因投递系统主要依赖于载体系统，而理想的基因载体应具备(1)靶向特异性，并且可被免疫系统识别；( 高度稳定，容易制备，可浓缩和纯化；C3)无毒性，对病人及环境安全无害；(4)有利于基因高效转移和长期表达。而本发明的主要目的是构建一种制备简单、成本低廉、安全性好、转染效率高的非病毒基因载体系统。目前，在基因载体的设计上，大致可分为两大类病毒类和非病毒类。病毒载体效率较高，但存在导向性差、携带能力低、免疫原性和潜在致瘤性等缺点。非病毒性载体主要是针对病毒载体的缺点而研制的，并具有低毒性、低免疫原性、低致瘤性、易制备等优点，其主要包括真核细胞表达质粒载体、阳离子聚合物、阳离子脂质体、聚合物嵌段共聚物和胶
>κ寸。常用的可用于基因转染的阳离子聚合物包括聚赖氨酸(poly-L-lysine，PLL)、 多聚赖氨酸(PLL)、聚乙烯亚胺(polyehylenimine，PEI)、天然高分子生物材料壳聚糖、树枝状大分子、及由这些阳性聚合物载体所构建的聚合物胶束系统和聚合物微球(聚乳酸类)；如聚乙二醇(PEG)修饰的PLL(PEG-PLL)、硬脂酰化聚赖氨酸、转铁蛋白修饰的PLL、 PEG-PEI、PEG-壳聚糖、PEI-壳聚糖、壳聚糖季铵盐等。这些材料作为转基因的载体有其优越性，然而也或多或少的存在转染效率低、稳定性差、部分材料毒性大、制备工艺复杂等问题；再者微球材料工艺中使用的有机金属催化剂、有机溶剂和稳定剂的残存都可能在转染中引起不容忽视的副作用，微球包裹外源基因也可能在制备消毒过程中受损。阳离子脂质体因具有优良的特性(无免疫原性、制备简单、使用方便、转染效率高等)而在科研及临床实验中广泛应用，其通常由一个阳离子两亲化合物和一个中性脂质组成。常用的阳离子脂质材料有N-[l-(2，3-二油基氧)丙基]-N，N，N，-氯化三甲铵(DOTMA)、 1，2-二油酰-3-三甲铵基丙烷(DOTAP)、3 β [Ν_(Ν，，N，- 二甲氨基乙基)氨甲酰基-胆固醇(DC-Chol)等。但阳离子脂质体也存在毒性大、成本高、针对性差(对特定肿瘤可能转染效率低下)等缺点；而将阳离子脂质体技术与阳离子聚合物技术相结合所开发的阳离子高分子脂质体则可能具有更优良的特性，其具有脂质体和高分子胶束的优点，可将二者的优势互补，并充分克服阳离子脂质体所存在的缺点。
发明内容
本发明目的是提供一种靶向性季铵盐类阳离子高分子脂质基因载体，是构建一种制备简单、成本低廉、安全性好、转染效率高的非病毒基因载体系统。本发明的目的还是提供一种上述靶向性季铵盐类阳离子高分子脂质基因载体制备方法。本发明另一目的是提供一种上述靶向性季铵盐类阳离子高分子脂质基因载体的应用。本发明采用具有双亲性特性的高聚物物质高分子季铵盐来代替普通阳离子脂质体中的阳性成分，再与普通阳离子脂质体的脂质成分组合来制备阳离子高分子脂质基因载体，该阳离子高分子脂质基因载体具有与普通脂质体相类似的双层膜结构，可包载药物、结合基因，并介导DNA/siRNA的转染，可转染的细胞种类多，转染效率高，可在含血清的培养液中使用，制备和操作简单。本发明所述的靶向性高分子季铵盐类阳离子脂质基因载体，其关键特征在于使用高分子季铵盐来代替普通阳离子脂质体中所含有的阳性成分，因此可以称之为阳离子高分子脂质体。阳离子高分子脂质体是将阳离子脂质体技术与阳离子聚合物技术相结合所开发的一种与阳离子脂质体结构相同的纳米基因载体系统，其具有更优良的特性，并有脂质体和高分子胶束的优点，可将二者的优势互补。本发明的阳离子高分子脂质体不仅具备小分子脂质体的优点，且制备方法简单，稳定性好，药物渗漏少，同时含有氨基和羧基等官能团， 易进行多功能化组装。本发明中的靶向性季铵盐类阳离子高分子脂质基因载体由高分子季铵盐和脂质成分组成，其中，高分子季铵盐与脂质成分的质量比为0.05 20 1，优先选择的高分子季铵盐与脂质成分的质量比为1 8 1。高分子季铵盐作为主膜材构成高分子脂质基因载体的主体，所述的基因载体为具有类似脂质体双层膜结构的纳米粒，粒径在1 lOOOOOnm， 优选10 500nm。本发明中所述的靶向性高分子季铵盐类阳离子脂质基因载体中，所述的高分子季铵盐是可溶于极性有机溶剂(氯仿、二氯甲烷、乙醇等)和水，高分子季铵盐在极性有机溶剂或水溶液中的溶解度均大于0. lmg/mL，高分子季铵盐的重均分子量在1000 1000000 之间，优选为2000 200000，高分子季铵盐的分子结构中可以含有氨基、羧基、羟基等官能团，具体为壳聚糖基-季铵盐、聚乙烯亚胺(PEI)基-季铵盐、海藻酸钠基-季铵盐、多聚赖氨酸基-季铵盐和聚酯胺(Poly EsterAmine, PEA)基-季铵盐，其中优选为聚乙烯亚胺基三(十二烷基)氯化铵、聚乙烯亚胺基三(十六烷基)氯化铵、聚乙烯亚胺基三(十八烷基)氯化铵、海藻酸钠基三(十二烷基)氯化铵、多聚赖氨酸基三(十八烷基)氯化铵、羧甲基壳聚糖基三(十二烷基)氯化铵、羧甲基壳聚糖基三(十六烷基)氯化铵、羧甲基壳聚糖基三(十八烷基)氯化铵、羧甲基壳聚糖基甲基二(十八烷基)氯化铵、赖氨酸壳聚糖基三(十二烷基)氯化铵、赖氨酸壳聚糖基三(十六烷基)氯化铵、赖氨酸壳聚糖基三(十八烷基)氯化铵、赖氨酸壳聚糖基甲基二(十八烷基)氯化铵、壳聚糖基三甲基氯化铵、壳聚糖羟丙基三甲基氯化铵及其上述季铵盐的相应溴化物。本发明中所述的靶向性高分子季铵盐类阳离子脂质基因载体的制备方法为脂质体的通用制备方法包括薄膜分散法、逆向蒸发法、复乳法、离心法、PH梯度法、注入法和混溶法等，其中可优选为薄膜分散法和逆向蒸发法；其中薄膜分散法的基本步骤为将壳聚糖长链烷基季铵盐(质量浓度 100% )和脂质成分(质量浓度0. 60% )共溶于有机溶剂氯仿中，混勻作为有机相； 除去有机溶剂使成薄膜，然后加入水相振荡使脂质膜水化，水相为水相为0. 9%的生理盐水或pH = 6 9的缓冲溶液。其中逆向蒸发法的基本步骤为将壳聚糖长链烷基季铵盐(质量浓度 100% )和脂质成分(质量浓度0. 60% )共溶于有机溶剂氯仿中，混勻作为有机相； 将水相与有机相(水相和有机相的比例为1/6 6/1)混合，超声乳化后，旋转蒸发除去有机溶剂。本发明中所述的脂质成分为构成普通脂质体和阳离子脂质体的基本成分，具体为胆固醇、二油酰脂酰乙醇胺ΦθΡΕ)、3β-[Ν-(Ν’，Ν’ - 二甲基胺乙基)胺基甲酰基]胆固醇 (DC-Chol)、卵磷脂、二硬脂酰磷脂酰胆碱、棕榈酰油酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰乙醇胺、 二棕榈酰油酰磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺或棕榈酰油酰磷脂酰乙醇胺中的一种或多种，如2-3种的脂质成分，优选为胆固醇、DOPE和DC-Cho 1。本发明所述的靶向性季铵盐类阳离子高分子脂质基因载体的可以用于制备基因药物。所述的基因药物可为有机药物、水溶性药物、水不溶性药物、基因DNA/siRNA、探针和诊断试剂，如治疗基因、RB基因和p53基因、紫杉醇、消炎痛、抗叶酸类(如甲氨蝶呤)、抗嘌呤类(如巯嘌呤)、抗嘧啶类(如氟尿嘧啶、替加氟)、核苷酸还原酶抑制药(如羟基脲)、 脱氧核糖核苷酸多聚酶抑制药(如环胞苷)、直接影响和破坏DNA结构及其功能的药物(如氮芥、环磷酰胺、氮甲、顺钼、丝裂霉素、喜树碱)、抑制蛋白质合成的药(如阿霉素、柔红霉素、光辉霉素)、影响微管蛋白质组装和纺锤丝形成的药物(长春碱、依托泊苷)。本发明所述的靶向性季铵盐类阳离子高分子脂质基因载体可通过对高分子季铵盐阳离子脂质基因载体进行修饰或组装而增加纳米粒的使用功能，所用的修饰制剂包括抗体配体(肿瘤相关抗原标志物)、蛋白和酶(酶类标志物)、转铁蛋白、激素、肽类、聚乙二醇 (PEG)、基因和小分子制剂等；优选为甲胎蛋白、癌胚抗原、组织多肽抗原、淀粉酶、乳酸脱氢酶、核糖核酸酶、5-核苷酸酶、促肾上腺皮质激素、抗利尿激素、生长激素、转化生长因子、雌激素、孕激素、儿茶酚胺类及其衍生物、ras基因家族及其表达产物、myc基因家族及其表达产物、表皮生长因子受体、叶酸、三苯氧胺、磁性颗粒。使用以上物质对基因载体进行改性时所使用的方法包括直接对基因载体纳米粒的表面修饰或先制备含活性成分的前体物质再进行组装等方法。其中叶酸修饰的高分子季铵盐阳离子脂质纳米粒对叶酸受体高表达的肿瘤细胞具有靶向性，如肿瘤细胞IGR0V1、KB3-1、Ishikawa和MCF-7等；叶酸修饰的高分子季铵盐阳离子脂质纳米粒的制备方法优选为a 制备前体物质叶酸修饰的高分子季铵盐；b 将高分子季铵盐(质量浓度 100% )和脂质成分(质量浓度0. 60% )溶于氯仿中，将叶酸修饰的高分子季铵盐(质量浓度0. 39% )溶于水相，然后使用薄膜分散法或逆向蒸发法制备叶酸修饰的高分子季铵盐阳离子脂质纳米粒。
其中PEG修饰的高分子季铵盐阳离子脂质纳米粒具有体内长循环功能和被动靶向功能，其制备方法优选为a 制备前体物质PEG修饰的高分子季铵盐；b 将高分子季铵盐(质量浓度 100% )和脂质成分(质量浓度0. 60% )溶于氯仿中，将PEG修饰的高分子季铵盐(质量浓度0. 39% )溶于水相，然后使用薄膜分散法或逆向蒸发法制备PEG修饰的高分子季铵盐阳离子脂质纳米粒。其中EGFR抗体修饰的高分子季铵盐阳离子脂质纳米粒对EGFR受体高表达的肿瘤细胞具有靶向性，如肿瘤细胞SMMC-7721和MCF-7等；EGFR抗体修饰的高分子季铵盐阳离子脂质纳米粒的制备方法优选为可先制备在水相当中浓度为0. 1 5mg/mL的高分子季铵盐阳离子脂质基因载体纳米粒，然后使用偶联剂将EGFR抗体偶联到高分子季铵盐阳离子脂质基因载体的表面既得EGFR抗体修饰的高分子季铵盐阳离子脂质基因载体，其中高分子季铵盐、脂质成分和 EGFR抗体的质量组成依次为1% 100%，0.1% 60%，0.1% 39%。本发明所述的靶向性高分子季铵盐类阳离子脂质基因载体的用途，包括对药物和基因的递送、缓控释、逆转肿瘤细胞的耐药特性及对疾病的诊断和治疗；高分子季铵盐阳离子脂质基因载体作为基因转染的非病毒载体时，与商用阳离子脂质体Lipofectamine 2000 相比，具有更低的细胞毒性和更高的基因转染效率。本发明所述的靶向性高分子季铵盐类阳离子脂质基因载体纳米粒，采用与阳离子脂质体具有更大相似性的阳离子高分子脂质基因载体来构建功能化的、安全性好、效率高的纳米基因载体系统，并充分利用阳离子高分子脂质体所具有的优点以克服阳离子脂质体的缺点。阳离子脂质体与阳离子高分子脂质体的组成及性质，N-[l-(2，3-二油基氧)丙基]-N，N，N，-氯化三甲铵(DOTMA)、1，2-二油酰-3-三甲铵基丙烷(DOTAP)等对照如下表 1。表 1
阳离子脂质体阳离子髙分子脂质体DDAB . DTAB、TTAB , CTAB, DC-ChoUDDAB-CMC、DTAB-CMC , TTAB-CMC ,ChoK DOPE等的不同组合CTAB-CMC. DC-Choi, ChoK DOPE等的组不同组合成注二甲基双十八烧基漠化铵(DDAB)；注O·羧甲基壳聚糖(CMC);胆固醇(Choi);十二烧基三甲基溴化按(DTAB):3β - [Ν-(Ν', N·-二甲基胺乙基>胺基甲故基]十四烧基三甲基溴化钱(ΤΓΑΒ):-￡固醉(DC-Choi)；十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)；二袖乙醇胺(DOPE) 物理化学稳定性较差 物理化学稳定性较好性 不易进行表面修饰，功能单一 表面含官能团，易进行修饰；质 针对性差 可裉据需要进行耙向性设计，提高基因转染 成本较商效率和针对性 成本较低 本发明所述的靶向性高分子季铵盐类阳离子脂质纳米基因载体系统具有以下特占.
^ \\\ ·(1)将功能强大的阳离子高分子脂质体用做基因载体。(2)阳离子高分子脂质体具有灵活多样、基因转染效率高、毒性低、制备方法简便等优点。(3)将阳离子高分子脂质体进行靶向性设计可得到专一性好的基因载体系统。为提高载体系统针对特定肿瘤的基因递送效率，即专一性，则可充分利用阳离子高分子脂质体相对阳离子脂质体所具有的功能化修饰容易的优点。利用肿瘤细胞表面的特异性受体配体结合原理，可选择对乳腺癌具有较好靶向功能的叶酸或EGFR抗体对阳离子高分子脂质体进行修饰来增强其针对乳腺癌的基因转染效果，同时也采用多靶点联用的方法来提高载体的专一性。
图1为阳离子高分子脂质体的微观结构图(透射电子显微镜照片)及功能化组装示意图；a.单层阳离子高分子脂质体(聚乙烯亚胺基三(十八烷基)氯化铵/胆固醇)；b.大单层阳离子高分子脂质体(聚乙烯亚胺基三(十八烷基)氯化铵/胆固醇)。图2为使用逆向蒸发法所制备的PEG修饰的阳离子高分子脂质体多聚赖氨酸基三 (十八烷基)氯化铵/胆固醇(a)和叶酸修饰的阳离子高分子脂质体多聚赖氨酸基三(十八烷基)氯化铵/胆固醇(b)的透射电子显微镜照片；由图可见阳离子高分子脂质体的粒径较小，且分布均勻。图3是用流式细胞仪测定的阳离子高分子脂质体羧甲基壳聚糖基三(十八烷基) 氯化铵/DOPE (0QC/D0PE)和阳离子脂质体LipofectamineTM2000在细胞中的转染效率图。其中Lipofectamine^OOO为阳离子脂质体阳性对照，阳离子高分子脂质体中羧甲基壳聚糖基三(十八烷基)氯化铵和DOPE的质量比为2 1，其中A Lipofectamine 2000 组；B =OQC 胶束组；C :0QC/D0PE 组，逆向蒸发法制备；D :0QC/D0PE组，薄膜法制备。图4是用荧光显微镜观察阳离子高分子脂质体赖氨酸壳聚糖基甲基二(十八烷基)氯化铵(LDQA)/DOPE的基因转染照片。LDQA/D0PE包载绿色荧光蛋白质粒后对细胞进行基因导入(左暗场；右 明场)，A =Lipofectamine 2000 组；B =LDQA 胶束组；C :LDQA/D0PE 组，逆向蒸发法制备；D LDQA/D0PE组，薄膜法制备。
具体实施例方式下面的实施例中将对本发明作进一步的阐述，但本发明不限于此。实施例1 本实施例探讨采用逆向蒸发法时聚乙烯亚胺基三(十八烷基)氯化铵(PQA)和胆固醇的不同配比对阳离子高分子脂质体粒径产生的影响。将不同配比的PQA(重均分子量为2万)和胆固醇共溶于二氯甲烷中，混勻得溶液I ；准备去离子水溶液II，其中溶液I和溶液II的比例为1 2;将两种溶液混合后，充分超声乳化，在旋转蒸发仪上减压蒸馏除尽二氯甲烷得高分子脂质体溶液。由表2可见，调整 PQA和胆固醇的质量配比可以得到不同粒径大小的高分子脂质体，所得的阳离子高分子脂质体在水溶液中的粒径大小分布也都比较均勻。其中图1为PQA/胆固醇阳离子高分子脂质体的TEM照片。表权利要求
1.一种靶向性季铵盐类阳离子高分子脂质基因载体，其特征在于所述的高分子季铵盐类阳离子脂质基因载体由高分子季铵盐和脂质成分组成，其中，高分子季铵盐与脂质成分的质量比为0. 05 20 1 ；粒径在1 IOOOOOnm ；所述的高分子季铵盐是在极性有机溶剂或水中的溶解度大于0. lmg/mL，重均分子量在 1000 1000000之间，分子结构中含有季铵盐基团的高分子物质，其中的季铵盐优选为氯化物和溴化物；所述的脂质成分为胆固醇、二油酰脂酰乙醇胺、3 β _[N-(N’，N’ - 二甲基胺乙基)胺基甲酰基]胆固醇、卵磷脂、二硬脂酰磷脂酰胆碱、棕榈酰油酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰乙醇胺、二棕榈酰油酰磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺或棕榈酰油酰磷脂酰乙醇胺中的一种或2-3种，优选为胆固醇、二油酰脂酰乙醇胺或3 β-[N-(N’，N’ - 二甲基胺乙基)胺基甲酰基]胆固醇。
2.如权利要求1所述的靶向性季铵盐类阳离子高分子脂质基因载体，其特征在于所述的高分子季铵盐为聚乙烯亚胺基-季铵盐、海藻酸钠基-季铵盐、壳聚糖基-季铵盐、多聚赖氨酸基-季铵盐和聚酯胺基-季铵盐。
3.如权利要求2所述的靶向性季铵盐类阳离子高分子脂质基因载体，其特征在于所述的高分子季铵盐为聚乙烯亚胺基三(十二烷基)氯化铵、聚乙烯亚胺基三(十六烷基)氯化铵、聚乙烯亚胺基三(十八烷基)氯化铵、海藻酸钠基三(十二烷基)氯化铵、多聚赖氨酸基三(十八烷基)氯化铵、羧甲基壳聚糖基三(十二烷基)氯化铵、羧甲基壳聚糖基三(十六烷基)氯化铵、羧甲基壳聚糖基三(十八烷基)氯化铵、羧甲基壳聚糖基甲基二(十八烷基)氯化铵、赖氨酸壳聚糖基三(十二烷基)氯化铵、赖氨酸壳聚糖基三(十六烷基)氯化铵、赖氨酸壳聚糖基三(十八烷基)氯化铵、赖氨酸壳聚糖基甲基二(十八烷基)氯化铵、 壳聚糖基三甲基氯化铵、壳聚糖羟丙基三甲基氯化铵及其上述季铵盐相应的溴化物。
4.一种如权利要求书1所述的靶向性高分子季铵盐类阳离子脂质基因载体的制备方法，其特征在于所提供下述的薄膜分散法或逆向蒸发法获得薄膜分散法的基本步骤为将质量浓度 100%的高分子季铵盐和质量浓度0. 60%的脂质成分共溶于极性有机溶剂中，混勻作为有机相，除去有机溶剂使成薄膜，然后加入水相使脂质膜水化， 水相为0. 9%的生理盐水或pH = 5 9的缓冲溶液；逆向蒸发法的基本步骤为将质量浓度 100%的高分子季铵盐和质量浓度0. 60%脂质成分共溶于极性有机溶剂中，混勻作为有机相；水相为0. 9%的生理盐水或pH = 6 9的缓冲溶液；将水相与有机相混合，水相和有机相的体积比为1 6 6 1，超声乳化后，旋转蒸发除去有机溶剂；所述的高分子季铵盐和脂质成分同权利要求1 3所述。
5.一种如权利要求4所述的靶向性季铵盐类阳离子高分子脂质基因载体的用途，其特征是用于制备基因药物。
6.如权利要求5所述的靶向性季铵盐类阳离子高分子脂质基因载体的用途，其特征是所述的基因药物为治疗基因、RB基因和p53基因、紫杉醇、消炎痛、甲氨蝶呤、巯嘌呤、氟尿嘧啶、羟基脲、环胞苷、氮芥、环磷酰胺、氮甲、顺钼、丝裂霉素、喜树碱、阿霉素、柔红霉素、光辉霉素、长春碱、依托泊苷中的一种或几种。
7.如权利要求6所述的靶向性季铵盐类阳离子高分子脂质基因载体的用途，其特征是所述的制备是对靶向性季铵盐类阳离子高分子脂质基因载体进行表面修饰或先制备含活性成分的前体物质再进行组装；所用的修饰剂为聚乙二醇、EGFR抗体、叶酸、三苯氧胺、 转铁蛋白、甲胎蛋白、癌胚抗原、组织多肽抗原、淀粉酶、乳酸脱氢酶、核糖核酸酶、5-核苷酸酶、促肾上腺皮质激素、抗利尿激素、生长激素、转化生长因子、雌激素、孕激素、儿茶酚胺类及其衍生物、ras基因家族及其表达产物、myc基因家族及其表达产物、表皮生长因子受体、 磁性颗粒。
8.如权利要求6所述的靶向性季铵盐类阳离子高分子脂质基因载体的用途，其特征是所述的修饰剂为叶酸时，需要先制备前体物质叶酸修饰的高分子季铵盐；然后，将质量浓度为0. 39%的叶酸修饰的高分子季铵盐、质量浓度为 100%的高分子季铵盐和质量浓度为0. 60%的脂质成分使用薄膜分散法或逆向蒸发法制备叶酸修饰的高分子季铵盐阳离子脂质基因载体；所述的高分子季铵盐和脂质成分如权利要求1所述。
9.如权利要求6所述的靶向性季铵盐类阳离子高分子脂质基因载体的用途，其特征是所述的修饰剂为聚乙二醇时，需要先制备前体物质聚乙二醇修饰的高分子季铵盐；然后，将质量浓度为0. 39%的聚乙二醇修饰的高分子季铵盐、质量浓度 100%的高分子季铵盐和质量浓度为0. 60%脂质成分使用薄膜分散法或逆向蒸发法制备聚乙二醇修饰的高分子季铵盐阳离子脂质基因载体；所述的高分子季铵盐和脂质成分如权利要求1所述。
10.如权利要求6所述的靶向性季铵盐类阳离子高分子脂质基因载体的用途，其特征是所述的修饰剂为EGFR抗体时，可先制备在水相当中浓度为0. 1 5mg/mL的高分子季铵盐阳离子脂质基因载体，然后使用偶联剂将EGFR抗体偶联到高分子季铵盐阳离子脂质基因载体的表面既得EGFR抗体修饰的高分子季铵盐阳离子脂质基因载体，其中高分子季铵盐、脂质成分和EGFR抗体的质量组成依次为1% 100%，0.1% 60%，0.1% 39%;所述的高分子季铵盐和脂质成分如权利要求1所述。
全文摘要
本发明公开了一种靶向性季铵盐类阳离子高分子脂质基因载体、制备方法及应用。由高分子季铵盐和脂质成分按质量比为0.05～20∶1制成季铵盐类阳离子高分子脂质基因载体；可通过组装或修饰的方法进行改性，制备叶酸或EGFR抗体修饰的阳离子高分子脂质基因载体。基因转染实验的结果表明在293T和NIH-3T3细胞中的基因转染效率与阳性对照阳离子脂质体LipofectamineTM2000相当；EGFR抗体修饰的阳离子高分子脂质体在肝癌Huh-7和乳腺癌MCF-7细胞中的转染效率高于LipofectamineTM2000。所述的阳离子高分子脂质基因载体系统具有较好的生物相容性，细胞毒性低，可作为优良的非病毒基因给药载体。
文档编号A61K9/127GK102234658SQ20101015381
公开日2011年11月9日 申请日期2010年4月23日 优先权日2010年4月23日
发明者孙彦明, 李晓昱, 梁晓飞, 段友容, 王琪 申请人:上海市肿瘤研究所