专利名称：八珍益母胶囊的质量检测方法
技术领域：
本发明涉及中药复方制剂的检测方法，特别是八珍益母胶囊的检测方法。
背景技术：
八珍益母丸源于《景岳全书》，处方组成为益母草、党参、熟地黄、炒白术、茯苓、当 归、酒白芍、川芎和甘草，具有补气血，调月经的功效，临床用于妇女素体亏虚、或大病久病 后、或失血过多所致气虚血亏、经血不调，为气血双亏，月经不调的首选方剂。但是蜜丸以全 部的原料药直接打粉入药，服用量大，服用不方便；因此，药物研究人员开发出方便患者服 用且疗效有所提高的八珍益母胶囊剂，并研究了系统的质量控制方法，建立了制剂中当归、 川芎以及益母草中盐酸水苏碱薄层色谱鉴别，制定了制剂中酒白芍中芍药苷含量测定方 法，从而保证用药安全。
发明内容
本发明的目的是提供八珍益母胶囊的质量检测方法。为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是本发明所述八珍益母胶囊的原料药组成如下益母草273重量份 党参68重量份 熟地黄137重量份炒白术68重量份 茯苓68重量份 当归137重量份酒白芍68重量份 川芎68重量份 甘草34重量份本发明所述胶囊的制备工艺是取三分之一重量份的茯苓与所述重量份的酒白芍粉碎成粗粉；所述重量份的当 归、川芎、炒白术蒸馏提取挥发油，蒸馏后的水溶液另器收集，药渣与所述重量份的党参、熟 地黄、益母草、甘草及剩余三分之二重量份的茯苓加水煎煮二次，第一次2小时，第二次1. 5 小时，煎液滤过，滤液合并，与蒸馏后的水溶液合并，浓缩至60°C时相对密度为1. 25 1. 30 的浸膏，加入所述粗粉，搅勻，80 90°C烘干，粉碎，加入淀粉，过蹄，混勻，用90%乙醇制颗 粒，干燥，喷入所述挥发油，密封，装入胶囊，每粒装0. 28g，即得。本发明所述胶囊的制备工艺，蒸馏提取当归、川芎、炒白术的挥发油时，优选的蒸 馏提取时间为3小时；加水煎煮时，优选总加水量为所述重量份的当归、川弯、炒白术、党 参、熟地黄、益母草、甘草及三分之二重量份茯苓的总重量的19倍，第一次加10倍量水，第 二次加9倍量水。所述八珍益母胶囊口服，一次3粒，一日3次，每lg所述八珍益母胶囊内容物折算 成原料药量，相当于3. 29g，也就是每1粒所述八珍益母胶囊的内容物折算成原料药量，相 当于 0. 921g。本发明所述八珍益母胶囊的质量检测方法包括如下I、II的鉴定方法I、取所述八珍益母胶囊的内容物6g，加正己烷25ml，超声处理15分钟，滤过，滤 液挥干，残渣加正己烷1ml使溶解，作为供试品溶液；另取当归对照药材、川芎对照药材各lg，分别加正己烷15ml，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各 3 yl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为10 0.4的60 90°C石油醚-乙酸乙酯 为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱 相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；II、取所述八珍益母胶囊的内容物8g，加适量硅藻土，研勻，置索氏提取器中，加乙 醇回流提取4小时，提取液滤过，滤液回收乙醇，用0. lmol/L盐酸溶液8ml分次溶解，酸溶 液滤过，合并滤液，加入临用配制的硫氰酸铬铵盐饱和溶液12ml，在10°C以下放置1小时， 用垂熔玻璃漏斗滤过，沉淀用少量水洗涤后，加丙酮5ml使溶解，再加入约5ml的0. 5%硫 酸银溶液至沉淀不再析出，滤过，沉淀用少量丙酮洗涤，洗液与滤液合并，浓缩至约2ml，加 入氯化钡溶液约2. 5ml，混勻，加在内径为15mm，内装80 100目中性氧化铝1. 5g的层 析柱上，用70%乙醇35ml洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，残渣加乙醇1. 5ml使溶解，作为供 试品溶液；另取盐酸水苏碱对照品，加乙醇制成每1ml含lmg的溶液，作为对照品溶液；照 薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10 yl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为 8:1: 3的正丁醇-乙酸乙酯-盐酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以新配制的改良碘化 铋钾试液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。酒白芍为方中主要药味，而且以原粉入药，芍药苷的含量可以直接反映酒白芍的 等级质量和投料量，故对芍药苷进行含量测定对本发明所述中药复方制剂的质量检测是有 意义的。因此，本发明所述的质量检测方法还包括如下的高效液相色谱法的含量测定色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比为 13 87的乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相，检测波长为230nm，理论板数按芍药苷峰计算应 不低于1500 ；对照品溶液的制备取芍药苷对照品，精密称定，加50%甲醇制成每1ml含20y g 的溶液，即得；供试品溶液的制备取所述八珍益母胶囊的内容物2. 8g，混勻，研细，取约0. 3g， 精密称定，精密加入50%甲醇50ml，称定重量，密塞，功率250W、频率25kHz的超声处理60 分钟，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇勻，滤过，取续滤液，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 iU，注入液相色谱仪，测 定，即得；每粒所述八珍益母胶囊含酒白芍以芍药苷C23H280n计，不得少于0. 90mg。上述高效液相色谱法中，为保证测定结果的准确性，制备对照品溶液时，优选经五 氧化二磷干燥至恒重的芍药苷对照品。本发明所述八珍益母胶囊的质量检测方法优选所述鉴别方法I和II，以及所述含 量测定方法的组合，能够从多方面反映制剂的质量。下面通过实验说明本发明所述八珍益母胶囊的制备工艺研究，以及本发明所述质 量检测方法的建立。实验例1八阵益母胶囊的制备工艺本发明所述八珍益母胶囊的制备涉及挥发油提取、水溶性成分提取以及原料药直 接入药，因此，制备工艺对上述三方面都进行了考察，以确定最佳工艺条件。1. 1挥发油提取时间
当归、川芎、白术含有大量挥发性活性物质，因此，应当单独将挥发性成分提取出 来。按照本发明说明书记载的原料药组成配比，称取共400g的当归、川芎和白术各三份， 每份加水2000ml，蒸馏提取挥发油，以挥发油的得量为指标考察了不同提取时间，结果见表 1。表1挥发油提取时间考察 结果表明，一般提取3小时后，挥发油已基本提取完全，得率约为0. 12%。因此，确 定挥发油的提取时间为3小时。1. 2水煎煮的最佳工艺条件水煎煮的提取工艺，受煎煮次数、加水量、煎煮时间等因素的影响，为了简化影响 因数，首选在固定加水量和煎煮时间的情况下，考察煎煮次数；其次，在优选的煎煮次数下， 考察加水量和煎煮时间。1.2. 1水煎煮次数按照本发明所述优选的原料药组成，称取一定量的用水煎煮的原料药，在总加水 量为15倍于原料药和煎煮时间为每次4. 5小时的固定条件下，以干浸膏收率为考察指标， 考察了不同煎煮次数，结果见表2。表2水煎煮次数的考察
结果表明，在加水15倍量，每次煎煮时间为4. 5小时的煎煮条件下，煎煮3次比2 次干浸膏收率只提高1%，从生产成本考虑，水煎煮的次数确定为2次。1. 2. 2加水量和煎煮时间按照本发明所述优选的原料药组成，称取一定量的用水煎煮的原料药，在煎煮2 次的条件下，以干浸膏收率和盐酸水苏碱含量为考察指标，考察了不同加水量和煎煮时间， 结果见表3。表3加水量和煎煮时间考察 结果表明，总加水19倍量——第1次10倍，第2次9倍，提取时间分别为——第1 次2小时，第2次1. 5小时的条件下，干浸膏收率和盐酸水苏碱含量都最高；故确定该条件 为最佳的工艺条件。1. 3酒白芍、茯苓直接打粉入药酒白芍、茯苓富含淀粉和蛋白质，色泽白，易粉碎；将二者打粉直接入药，可以减少 制剂的引湿性、增加崩解度，便于干浸膏粉碎、制粒、装胶囊和保存。但是如果茯苓全部打粉 入药，则按8. 3g原料药折合成的日服用量体积过大，9粒1号胶囊也装不下。采用三分之一 茯苓打粉入药，按8. 3g原料药折合成的日服用量刚好装入9粒1号胶囊。故确定以全部重 量份的酒白芍和三分之一重量份的茯苓打粉入药。实验例2八珍益母胶囊与现有技术中的八珍益母丸的药效学比较八珍益母丸的原料组成为益母草200g 党参50g 熟地黄100g 炒白术50g 茯苓50g 当归 100g 酒白芍50g 川芎50g 甘草25g通过下述方法制备以上九味粉碎，按照重量比为原料药炼蜜=100 45，加入炼蜜以及适量水泛 丸，干燥，制成水蜜丸。每lg所述八珍益母丸折算成原料药量，相当于0. 69g。通过药理学试验发现，两种剂型均能促进大鼠子宫发育、提高血液中雌二醇含量 及降低孕酮含量；对正常大鼠离体子宫平滑肌活动无明细影响、能明显增加催产素对大鼠 离体子宫的兴奋作用，增加其收缩频率及活动力，能对抗黄体酮对催产素兴奋大鼠离体子 宫平滑肌的抑制作用，增加其收缩频率、幅度及活动力；能提高小鼠碳粒廓清速率、血清溶 血素水平、外周血淋巴细胞转化率；能延长小鼠游泳、耐缺氧时间；能促进失血性血虚大鼠 症状体征的改善及体重增长，加快血液RBC、Hb恢复；此外，尚能减轻琼脂所致的大鼠足跖 肿胀及肉芽肿增生。本发明所述胶囊剂与所述八珍益母丸相比，在促进大鼠子宫发育、提高 血液中雌二醇含量，增强催产素对大鼠离体子宫的兴奋作用，提高小鼠碳粒廓清速率，延长 小鼠游泳时间等方面都有不同程度的增强。说明与现有技术中的丸剂相比，本发明所述胶 囊剂可以在一定程度上提高疗效。实验例3当归、川芎薄层色谱鉴别的专属性试验鉴别方法I为当归、川芎的薄层色谱鉴别。当归、川芎原料药来源于伞形科植物， 两者化学成分比较近似，在适宜的薄层层析条件下，二者的薄层色谱也有一定程度的相似;因此，通过一次薄层层析，就可以同时定性鉴别当归和川芎。取处方中不含当归、川芎的其它药材按照说明书记载的制备方法制成阴性样品， 取本发明所述八珍益母胶囊的内容物(以下简称供试品)6g，阴性样品6g，当归对照药材 lg(中国药品生物制品检定所，批号120927-200613)，川芎对照药材lg(中国药品生物制 品检定所，批号120918-200501)按说明书所述的方法配制成供试品溶液、阴性样品溶液、 对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液、 阴性样品溶液、对照药材溶液各3iU，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为10 0.4 的60 90°C石油醚-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试 品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；阴性样品色谱中与对照 品色谱相应的位置上无相应的斑点。说明阴性无干扰。(见图1)实验例4益母草薄层色谱鉴别的专属性试验鉴别方法II为益母草的薄层色谱鉴别。取处方中不含益母草的其它药材按照说明书记载的制备方法制成阴性样 品，取供试品8g，阴性样品8g，盐酸水苏碱对照品(中国药品生物制品检定所，批号 110712-200508)按说明书所述的方法配制成供试品溶液、阴性样品溶液、对照品溶液。照薄 层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述溶液各10 yl，分别点于同 一硅胶G薄层板上，以体积比为8 1 3的正丁醇-乙酸乙酯-盐酸为展开剂，展开，取 出，晾干，喷以新配制的改良碘化铋钾试液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上， 显相同颜色的斑点；阴性样品色谱中与对照品色谱相应的位置上无相应的斑点。说明阴性 无干扰。(见图2)实验例5芍药苷含量测定1、仪器与试药 SHIMADZU LC-2010AHT 高效液相色谱仪，SHIMADZU LC-2010AHT 化学工作站， VP-ODS C18色谱柱(150讓\4.6讓，511111)，紫外可变检测器。水为超纯水，乙腈为色谱纯，其它试剂均为分析纯；芍药苷对照品(中国药品生物 制品检定所，批号110736-200526)。2、系统适应性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比为13 87乙腈-0. 磷酸溶液为 流动相，检测波长为230nm，理论塔板数按芍药苷峰计算应不低于1500。3、波长选择取芍药苷对照品适量，用50%甲醇制成适当的浓度，以50%甲醇为空白，在400 200nm波长范围内进行光谱扫描，结果在230nm波长处有最大吸收(见图3)，故确定检测波 长为230nm。4、流动相的选择现有技术中，流动相是体积比为13 87的乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液，但 芍药苷峰形不好，理论板数低，在换成体积比为13 87的乙腈-0.1%磷酸溶液后，芍药苷 峰形好，理论板数高(见图4)。5、供试品溶液的制备5. 1提取溶剂的考察
取本发明所述八珍益母胶囊的内容物四份，各0.3g，精密称定，分别以50%甲醇、 乙醇、50%乙醇、甲醇四种溶剂进行考察，采用超声处理(功率250W，频率25kHz)提取方法 进行提取，测定结果见表8。表8不同溶剂提取测定结果 确定50%甲醇为最佳提取溶剂。5. 2提取时间的考察取本发明所述八阵益母胶囊的内容物三份，各0.3g，精密称定，分别超声处理(功 率250W，频率25kHz) 30分钟、60分钟、120分钟，结果见表9。表9不同提取时间测定结果 结果表明，超声处理(功率250W，频率25kHz) 60分钟和120分钟含量测定结果基 本一致，说明超声提取60分钟已能达到效果，故确定超声处理时间为60分钟。6、空白试验取处方中不含酒白芍的其它对照样品，按说明书记载的供试品溶液制备方法制成 阴性样品，再按照说明书中记载的供试品溶液制备方法制成阴性样品溶液，依说明书记载 的含量测定方法试验，比较供试品溶液色谱及芍药苷对照品色谱，结果阴性样品中其他成 分对芍药苷峰无干扰(见图4、5、6)，且芍药苷有较好的色谱分离。7、对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷干燥至恒重的所述芍药苷对照品12. 59mg,置50ml量瓶 中，加入50%甲醇溶解并稀释至刻度，摇勻。精密量取2ml置25ml量瓶中，加50%甲醇至 刻度，摇勻，即得。8、线性关系考察精密吸取上述对照品溶液各5111、10111、20111、30111、40111，注入液相色谱仪， 按照说明书记载的色谱分析条件，测定峰面积，结果见表10。表10线性关系测定结果
程为
芍药苷在0. 10072 0. 80576 u g之间呈良好线性。9、精密度试验9. 1对照品精密度试验精密吸取所述对照品溶液20 iU，按说明书记载的液相色谱条件，重复进样5次， 结果见表11，芍药苷面积相对标准偏差为0. 2%。表11对照品精密度试验结果 9. 2供试品精密度试验取所述八珍益母胶囊的内容物0.3g，精密称定，按照说明书记载的方法制备供试 品溶液，精密吸取所述供试品溶液20 u 1，按说明书记载的液相色谱条件，重复进样5次，结 果见表12，芍药苷面积相对标准偏差为0. 2%。表12供试品精密度试验结果 10、稳定性试验取所述八珍益母胶囊的内容物0.3g，精密称定，按照说明书记载的方法制成供试 品溶液，按说明书记载的色谱条件，精密吸取所述供试品溶液20 yl，注入液相色谱仪，每隔 一定时间进样测定一次，在24小时内，峰面积基本保持一致，RSD= 1.6%。表明芍药苷在 所述流动相溶液中24小时内稳定，结果见表13。表13稳定性试验结果
10 11、重复性试验分别取同一批所述八珍益母胶囊的内容物5份，精密称定，按照说明书记载的方 法制成供试品溶液，在说明书记载的色谱条件下，测定芍药苷的含量，RSD= 1.9%，表明本 法重复性良好，结果见表14。表14重复性试验结果 12、加样回收率试验取同一批已知芍药苷含量为2. 9113mg/g的所述八珍益母胶囊的内容物5份，每份 约0. 15g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密添加芍药苷对照品溶液(浓度7. 554 ug/ ml) 50ml，按照说明书记载的方法制成供试品溶液，在说明书记载的色谱条件下，测定芍药 苷的含量，计算回收率，平均回收率为99. 86%,RSD = 0.9%，表明本法回收率良好，结果见 表15。 表15回收率试验结果 13、样品测定
取本发明所述八珍益母胶囊6批，按照说明书记载的方法制成供试品溶液，在 明书记载的色谱条件下，测定芍药苷的含量，测定结果见表16。
表16样品测定结果
根据表16中样品测定结果，拟定本发明所述八珍益母胶囊每粒含酒白芍以芍药 苷C23H280n计，不得少于0. 90mg。本领域技术人员应当理解，本发明所述八珍益母胶囊的质量检测方法同样适用于 原料药组成与本发明所述八珍益母胶囊相同或相似的其它中药复方制剂，如丸剂、片剂、颗 粒剂、口服液、浓缩丸等。不同中药复方制剂的日服剂量因为制剂工艺的不同而有差异，但 是每日服用剂量折算成原料药是一致的，因此可以折算成原料药的量来称取所要的供检测 的制剂。
图1是当归和川芎薄层鉴别，其中1为阴性样品，2为当归对照药材，3为川芎对照 药材，4、5、6为三批样品。图2是益母草薄层鉴别，其中1为阴性样品，2为盐酸水苏碱对照品，3、4、5为三批样品。图3是芍药苷对照品的紫外吸收光谱
图4是芍药苷对照品溶液HPLC图谱图5是所述胶囊剂供试品溶液HPLC图谱图6是阴性样品溶液HPLC图谱图7是芍药苷标准品溶液标准曲线图
具体实施例方式下述实施例均能实现上述实验例的效果，但本发明并不限于所述实施例。实施例1八珍益母胶囊益母草273g 党参68g 熟地黄137g 炒白术68g 茯苓68g 当归 137g酒白芍68g 川芎68g 甘草34g取22. 5g的茯苓与68g酒白芍粉碎成粗粉；所述处方量的当归、川芎、白术提取挥 发油，蒸馏后的水溶液另器收集，药渣与所述处方量的党参、熟地黄、益母草、甘草及剩余的 茯苓加水煎煮二次，第一次2小时，加10倍量水，第二次1. 5小时，加9倍量水；合并煎液， 滤过，滤液与蒸馏后的水溶液合并，浓缩至60°C时相对密度为1. 25 1. 30的浸膏，加入所 述粗粉，搅勻，80 90°C烘干，粉碎，加入淀粉调整总量为280g，过蹄，混勻，用90%醇制粒， 干燥，喷入上述挥发油，密封，装入胶囊，制成1000粒，每粒装0. 28g，即得。服用方法口服，一次3粒，一天三次。每lg所述八珍益母胶囊内容物折算成原料药量，相当于3. 29g。实施例2八珍益母片益母草300g 党参75g 熟地黄120g 炒白术60g 茯苓72g 当归 150g酒白芍75g 川芎65g 甘草35g取48g的茯苓与75g酒白芍粉碎成粗粉；所述处方量的当归、川芎、白术提取挥发 油，蒸馏后的水溶液另器收集，药渣与所述处方量的党参、熟地黄、益母草、甘草及剩余的茯 苓加水煎煮二次，第一次2小时，加10倍量水，第二次1. 5小时，加9倍量水；合并煎液，滤 过，滤液与蒸馏后的水溶液合并，浓缩至60°C时相对密度为1. 25 1. 30的浸膏，加入所述 粗粉，搅勻，80 90°C烘干，粉碎，加入常规辅料，制粒，喷入预先用适量的无水乙醇稀释的 挥发油，密封，压成片剂，制成1000片，每片0. 3g,即得。服用方法口服，一次3片，一天三次。每lg所述八珍益母片折算成原料药量，相当于3. 17g。实施例3八珍益母颗粒益母草250g 党参60g 熟地黄150g 炒白术70g 茯苓66g 当归 120g酒白芍70g 川芎65g 甘草30g以上九味，按照常规制剂方法制备颗粒剂，每袋1. 5g。服用方法一次一袋，一天三次。每lg所述八珍益母颗粒折算成原料药量，相当于1.89g。实施例4八珍益母丸益母草200g 党参50g 熟地黄100g 炒白术50g 茯苓50g 当归 100g酒白芍50g 川芎50g 甘草25g以上九味粉碎，按照重量比为原料药炼蜜=100 45，加入炼蜜以及适量水泛丸，干燥，制成水蜜丸。服用方法一次1丸，一天二次。每lg所述八珍益母丸折算成原料药量，相当于0. 69g。实施例5八珍益母浓缩丸益母草300g 党参75g 熟地黄150g 炒白术70g 茯苓75g 当归 150g酒白芍75g 川芎70g 甘草35g取36g的茯苓与60g酒白芍粉碎成粗粉；所述处方量的当归、川芎、白术提取挥发 油，蒸馏后的水溶液另器收集，药渣与所述处方量的党参、熟地黄、益母草、甘草及剩余的茯 苓加水煎煮二次，第一次2小时，加10倍量水，第二次1. 5小时，加9倍量水；合并煎液，滤 过，滤液与蒸馏后的水溶液合并，浓缩至60°C时相对密度为1. 25 1. 30的浸膏，加入所述 粗粉，搅勻，80 90°C烘干，粉碎，加入常规辅料，制成1000粒浓缩丸，装瓶，每瓶100粒。服用方法每次8丸，一天三次每lg所述八珍益母浓缩丸折算成原料药量，相当于2. 78g。实施例6实施例1制备的八珍益母胶囊质量检测方法鉴别照中国药典2005年版一部附录VIB薄层色谱法I、取所述八珍益母胶囊的内容物6g，研细，加正己烷25ml，超声处理15分钟，滤 过，滤液挥干，残渣加正己烷1ml使溶解，作为供试品溶液；另取当归对照药材、川芎对照药 材各lg，分别加正己烷15ml，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶 液各3 iU，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为10 0.4的60 90°C石油醚-乙 酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药 材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；II、取所述八珍益母胶囊的内容物8g，加适量硅藻土，研勻，置索氏提取器中，加乙 醇回流提取4小时，提取液滤过，滤液回收乙醇，用0. lmol/L盐酸溶液8ml分次溶解，酸溶 液滤过，合并滤液，加入临用配制的硫氰酸铬铵盐饱和溶液12ml，在10°C以下放置1小时， 用垂熔玻璃漏斗滤过，沉淀用少量水洗涤后，加丙酮5ml使溶解，再加入约5ml的0. 5%硫 酸银溶液至沉淀不再析出，滤过，沉淀用少量丙酮洗涤，洗液与滤液合并，浓缩至约2ml，加 入氯化钡溶液约2. 5ml，混勻，加在内径为15mm，内装80 100目中性氧化铝1. 5g的层 析柱上，用70%乙醇35ml洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，残渣加乙醇1. 5ml使溶解，作为供 试品溶液；另取盐酸水苏碱对照品，加乙醇制成每1ml含lmg的溶液，作为对照品溶液；照 薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10 yl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为 8:1: 3的正丁醇-乙酸乙酯-盐酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以新配制的改良碘化 铋钾试液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。含量测定照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VID)测定色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比为 13 87的乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相，检测波长为230nm，理论板数按芍药苷峰计算应 不低于1500 ；对照品溶液的制备取经五氧化二磷干燥至恒重的芍药苷对照品，精密称定，加 50%甲醇制成每1ml含20 y g的溶液，即得；供试品溶液的制备取所述八珍益母胶囊的内容物2. 8g，混勻，研细，取0.3g，精密称定，精密加入50%甲醇50ml，称定重量，密塞，功率250W，频率25kHz的超声处理60分 钟，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇勻，滤过，取续滤液，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20iU，注入液相色谱仪，测 定，即得；每粒所述八珍益母胶囊含酒白芍以芍药苷C23H280n计，不得少于0. 90mg。实施例7实施例2制备的片剂的质量检测方法鉴别照中国药典2000年版一部附录VIB薄层色谱法I、取所述片剂6. 3g，研细，加正己烷25ml，超声处理15分钟，滤过，滤液挥干，残渣 加正己烷1ml使溶解，作为供试品溶液；另取当归对照药材、川芎对照药材各lg，分别加正 己烷15ml，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各3iU，分别点 于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比为10 0.4的60 90°C 石油醚-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在 与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；II、取所述片剂8. 2g，加适量硅藻土，研勻，置索氏提取器中，加乙醇回流提取4小 时，提取液滤过，滤液回收乙醇，用0. lmol/L盐酸溶液8ml分次溶解，酸溶液滤过，合并滤 液，加入临用配制的硫氰酸铬铵盐饱和溶液12ml，在10°C以下放置1小时，用垂熔玻璃漏斗 滤过，沉淀用少量水洗涤后，加丙酮5ml使溶解，再加入约5ml的0. 5%硫酸银溶液至沉淀不 再析出，滤过，沉淀用少量丙酮洗涤，洗液与滤液合并，浓缩至约2ml，加入1 %氯化钡溶液 约2. 5ml，混勻，加在内径为15mm，内装80 100目中性氧化铝1.5g的层析柱上，用70% 乙醇35ml洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，残渣加乙醇1. 5ml使溶解，作为供试品溶液；另取盐 酸水苏碱对照品，加乙醇制成每1ml含lmg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验， 吸取上述两种溶液各10iU，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为8 1 3的正丁 醇-乙酸乙酯-盐酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以新配制的改良碘化铋钾试液；供试品 色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。含量测定照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VID)测定色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比为 13 87的乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相，检测波长为230nm，理论板数按芍药苷峰计算应 不低于1500 ；对照品溶液的制备取经五氧化二磷干燥至恒重的芍药苷对照品，精密称定，加 50%甲醇制成每1ml含20 y g的溶液，即得；供试品溶液的制备取所述片剂3g，研细，取0.3g，精密称定，精密加入50%甲醇 50ml，称定重量，功率250W，频率25kHz的超声处理60分钟，放冷，再称定重量，用50%甲醇 补足减失的重量，摇勻，滤过，取续滤液，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20iU，注入液相色谱仪，测 定，即得；相当于原料药0.92g的所述片剂含酒白芍以芍药苷(C23H280n)计，不得少于 0.90mg。实施例8实施例3制备的颗粒剂的质量检测方法鉴别照中国药典2005年版一部附录VIB薄层色谱法
I、取所述颗粒剂10. 6g，研细，加正己烷25ml，超声处理15分钟，滤过，滤液挥干， 残渣加正己烷1ml使溶解，作为供试品溶液；另取当归对照药材、川芎对照药材各lg，分别 加正己烷15ml，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各3 yl，分 别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比为10 0.4的60 90°C石油醚-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱 中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；II、取所述颗粒剂13. 8g，加适量硅藻土，研勻，置索氏提取器中，加乙醇回流提取 4小时，提取液滤过，滤液回收乙醇，用0. lmol/L盐酸溶液8ml分次溶解，酸溶液滤过，合并 滤液，加入临用配制的硫氰酸铬铵盐饱和溶液12ml，在10°C以下放置1小时，用垂熔玻璃漏 斗滤过，沉淀用少量水洗涤后，加丙酮5ml使溶解，再加入约5ml的0. 5%硫酸银溶液至沉淀 不再析出，滤过，沉淀用少量丙酮洗涤，洗液与滤液合并，浓缩至约2ml，加入1 %氯化钡溶 液约2. 5ml，混勻，加在内径为15mm，内装80 100目中性氧化铝1. 5g的层析柱上，用70% 乙醇35ml洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，残渣加乙醇1. 5ml使溶解，作为供试品溶液；另取盐 酸水苏碱对照品，加乙醇制成每1ml含lmg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验， 吸取上述两种溶液各10 yl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为8 1 3的正丁 醇-乙酸乙酯-盐酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以新配制的改良碘化铋钾试液；供试品 色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。含量测定照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VID)测定色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比为 13 87的乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相，检测波长为230nm，理论板数按芍药苷峰计算应 不低于1500 ；对照品溶液的制备取经五氧化二磷干燥至恒重的芍药苷对照品，精密称定，加 50%甲醇制成每1ml含20 y g的溶液，即得；供试品溶液的制备取所述颗粒剂5g，研细，取0. 5g，精密称定，精密加入50%甲 醇50ml，称定重量，功率250W，频率25kHz的超声处理60分钟，放冷，再称定重量，用50%甲 醇补足减失的重量，摇勻，滤过，取续滤液，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20iU，注入液相色谱仪，测 定，即得。实施例9实施例4制备的蜜丸剂的质量检测方法鉴别照中国药典2005年版一部附录VIB薄层色谱法I、取所述蜜丸剂28g，研均勻，加正己烷25ml，超声处理15分钟，滤过，滤液挥干， 残渣加正己烷1ml使溶解，作为供试品溶液；另取当归对照药材、川芎对照药材各lg，分别 加正己烷15ml，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各3 yl，分 别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比为10 0.4的60 90°C石油醚-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱 中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；II、取所述蜜丸剂37. 7g，加适量硅藻土，研勻，置索氏提取器中，加乙醇回流提取 4小时，提取液滤过，滤液回收乙醇，用0. lmol/L盐酸溶液8ml分次溶解，酸溶液滤过，合并 滤液，加入临用配制的硫氰酸铬铵盐饱和溶液12ml，在10°C以下放置1小时，用垂熔玻璃漏斗滤过，沉淀用少量水洗涤后，加丙酮5ml使溶解，再加入约5ml的0. 5%硫酸银溶液至沉淀 不再析出，滤过，沉淀用少量丙酮洗涤，洗液与滤液合并，浓缩至约2ml，加入1 %氯化钡溶 液约2. 5ml，混勻，加在内径为15mm，内装80 100目中性氧化铝1. 5g的层析柱上，用70% 乙醇35ml洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，残渣加乙醇1. 5ml使溶解，作为供试品溶液；另取盐 酸水苏碱对照品，加乙醇制成每1ml含lmg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验， 吸取上述两种溶液各10 yl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为8 1 3的正丁 醇-乙酸乙酯-盐酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以新配制的改良碘化铋钾试液；供试品 色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。含量测定照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VID)测定色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比为 13 87的乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相，检测波长为230nm，理论板数按芍药苷峰计算应 不低于1500 ；对照品溶液的制备取经五氧化二磷干燥至恒重的芍药苷对照品，精密称定，加 50%甲醇制成每1ml含20 y g的溶液，即得；供试品溶液的制备取所述蜜丸剂13g，研均勻，取1. 5g，精密称定，精密加入50% 甲醇50ml，称定重量，功率250W，频率25kHz的超声处理60分钟，放冷，再称定重量，用50 % 甲醇补足减失的重量，摇勻，滤过，取续滤液，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20iU，注入液相色谱仪，测 定，即得；相当于原料药0.92g的所述蜜丸剂含酒白芍以芍药苷(C23H280n)计，不得少于 0.90mg。实施例10实施例5制备的浓缩丸剂的质量控制方法鉴别照中国药典2005年版一部附录VIB薄层色谱法I、取所述浓缩丸剂7. 2g，研均勻，加正己烷25ml，超声处理15分钟，滤过，滤液挥 干，残渣加正己烷1ml使溶解，作为供试品溶液；另取当归对照药材、川芎对照药材各lg，分 别加正己烷15ml，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各3 yl， 分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比为10 0.4的60 90°C石油醚-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱 中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；II、取所述浓缩丸剂9. 4g，加适量硅藻土，研勻，置索氏提取器中，加乙醇回流提取 4小时，提取液滤过，滤液回收乙醇，用0. lmol/L盐酸溶液8ml分次溶解，酸溶液滤过，合并 滤液，加入临用配制的硫氰酸铬铵盐饱和溶液12ml，在10°C以下放置1小时，用垂熔玻璃漏 斗滤过，沉淀用少量水洗涤后，加丙酮5ml使溶解，再加入约5ml的0. 5%硫酸银溶液至沉淀 不再析出，滤过，沉淀用少量丙酮洗涤，洗液与滤液合并，浓缩至约2ml，加入1 %氯化钡溶 液约2. 5ml，混勻，加在内径为15mm，内装80 100目中性氧化铝1. 5g的层析柱上，用70% 乙醇35ml洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，残渣加乙醇1. 5ml使溶解，作为供试品溶液；另取盐 酸水苏碱对照品，加乙醇制成每1ml含lmg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验， 吸取上述两种溶液各10 yl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为8 1 3的正丁 醇-乙酸乙酯-盐酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以新配制的改良碘化铋钾试液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。含量测定照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VID)测定色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比为 13 87的乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相，检测波长为230nm，理论板数按芍药苷峰计算应 不低于1500 ；对照品溶液的制备取经五氧化二磷干燥至恒重的芍药苷对照品，精密称定，加 50%甲醇制成每1ml含20 y g的溶液，即得；供试品溶液的制备取所述浓缩丸剂3. 3g，研均勻，取0. 36g，精密称定，精密加入 50%甲醇50ml，称定重量，功率250W，频率25kHz的超声处理60分钟，放冷，再称定重量，用 50%甲醇补足减失的重量，摇勻，滤过，取续滤液，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 iU，注入液相色谱仪，测 定，即得；相当于原料药0.92g的所述中药复方制剂含酒白芍以芍药苷(C23H280n)计，不得 少于 0. 90mgo
权利要求
原料药组成如下的八珍益母胶囊的质量检测方法，益母草273重量份，党参68重量份，熟地黄137重量份，炒白术68重量份，茯苓68重量份，当归137重量份，酒白芍68重量份，川芎68重量份，甘草34重量份；所述胶囊通过如下方法制备取三分之一重量份的茯苓与所述重量份的酒白芍粉碎成粗粉；所述重量份的当归、川芎、白术蒸馏提取挥发油，蒸馏后的水溶液另器收集，药渣与所述重量份的党参、熟地黄、益母草、甘草及剩余三分之二重量份的茯苓加水煎煮二次，第一次2小时，第二次1.5小时，煎液滤过，滤液合并，与蒸馏后的水溶液合并，浓缩至60℃时相对密度为1.25～1.30的浸膏，加入所述粗粉，搅匀，80～90℃烘干，粉碎，加入淀粉，过筛，混匀，用90％乙醇制粒，干燥，喷入所述挥发油，密封，装入胶囊，每粒装0.28g，即得；其特征在于所述质量检测方法包括如下I、II的鉴定方法I、取所述八珍益母胶囊的内容物6g，加正己烷25ml，超声处理15分钟，滤过，滤液挥干，残渣加正己烷1ml使溶解，作为供试品溶液；另取当归对照药材、川芎对照药材各1g，分别加正己烷15ml，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为10∶0.4的60～90℃石油醚-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；II、取所述八珍益母胶囊的内容物8g，加适量硅藻土，研匀，置索氏提取器中，加乙醇回流提取4小时，提取液滤过，滤液回收乙醇，用0.1mol/L盐酸溶液8ml分次溶解，酸溶液滤过，合并滤液，加入临用配制的硫氰酸铬铵盐饱和溶液12ml，在10℃以下放置1小时，用垂熔玻璃漏斗滤过，沉淀用少量水洗涤后，加丙酮5ml使溶解，再加入约5ml的0.5％硫酸银溶液至沉淀不再析出，滤过，沉淀用少量丙酮洗涤，洗液与滤液合并，浓缩至约2ml，加入1％氯化钡溶液约2.5ml，混匀，加在内径为15mm，内装80～100目中性氧化铝1.5g的层析柱上，用70％乙醇35ml洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，残渣加乙醇1.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取盐酸水苏碱对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为8∶1∶3的正丁醇-乙酸乙酯-盐酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以新配制的改良碘化铋钾试液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
2.根据权利要求1所述的八珍益母胶囊的质量检测方法，其特征在于所述质量检测方 法还包括如下的照高效液相色谱法的含量测定色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比为13 87 的乙腈-0. 磷酸溶液为流动相，检测波长为230nm，理论板数按芍药苷峰计算应不低于 1500 ；对照品溶液的制备取芍药苷对照品，精密称定，加50%甲醇制成每1ml含20 y g的溶 液，即得；供试品溶液的制备取所述八珍益母胶囊的内容物2. 8g，混勻，研细，取0. 3g，精密称 定，精密加入50%甲醇50ml，称定重量，密塞，功率250W、频率25kHz的超声处理60分钟，放 冷，再称定重量，用50 %甲醇补足减失的重量，摇勻，滤过，取续滤液，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 yl，注入液相色谱仪，测定，即得；每粒所述八珍益母胶囊含酒白芍以芍药苷C23H280n计，不得少于0. 90mg。
3.根据权利要求1或2所述的质量检测方法，其特征在于所述重量份的当归、川芎、 白术蒸馏提取挥发油的时间为3小时；加水煎煮的总加水量为所述重量份的当归、川芎、白 术、党参、熟地黄、益母草、甘草及三分之二重量份茯苓的总重量的19倍，第一次10倍，第二 次9倍。
全文摘要
本发明公开了一种由益母草273重量份，党参68重量份，熟地黄137重量份，炒白术68重量份，茯苓68重量份，当归137重量份，酒白芍68重量份，川芎68重量份，甘草34重量份等九味原料药组成的八珍益母胶囊的质量检测方法。该方法包括当归、川芎及益母草的薄层色谱鉴别，制剂中酒白芍中的芍药苷的含量测定。所述质量检测方法能够从多个方面反映所述八珍益母胶囊的质量，从而保证用药安全和临床疗效。本发明还公开了所述八珍益母胶囊的制备工艺。
文档编号A61K9/48GK101874852SQ201010158809
公开日2010年11月3日 申请日期2010年4月28日 优先权日2010年4月28日
发明者张龙辉, 李振华, 杨俊华, 罗国仕, 虞井红, 谢志勇, 邹俊武 申请人:江西南昌桑海制药厂