专利名称：基于巯嘌呤类药物的新型两亲性大分子前药及其制备方法
技术领域：
本发明涉及药物技术领域，特别是涉及一种基于巯嘌呤类药物的新型两亲性大分子前药及其制备方法。
背景技术：
巯嘌呤及其衍生物是由Ellion和Hitching于20世纪50年代发现并获得诺贝尔 奖，其广泛应用于人类白血病以及其他疾病的治疗，如急性肠炎、全身性红斑狼疮、类风湿 关节炎等。巯嘌呤及其衍生物的发现在白血病的治疗上是一个新的突破。它们是一种细胞 周期特异性药物，通过负反馈作用抑制酰胺转移酶，干扰了嘌呤核苷酸合成的起始阶段；同 时抑制复杂的嘌呤间的相互转变、抑制辅酶I (NAD+)的合成，并减少了生物合成DNA所必需 的脱氧三磷酸腺苷(dATP)及脱氧三磷酸鸟苷(dGTP)，因而肿瘤细胞不能增殖。临床主要 通过注射用药用于绒毛膜上皮癌、恶性葡萄胎、急性淋巴细胞白血病及急性非淋巴细胞白 血病、慢性粒细胞白血病急变期的治疗。然而，该类药物制剂水溶性差，半衰期短，血浆清除 速率高，大大减弱了它的治疗效应；同时该类药物细胞选择性差、毒副作用大、不良反应严 重，易引起急性肝胆损害，重者可致肝硬化，而且在免疫刺激之后给药会增加对免疫的抑制 作用。前药即前体药物(prodrug orpro-agent)，是将原药与无毒载体通过化学键连 接，形成暂时的化学结合物或覆盖物，在体内水解酶解生成原药而发挥其药效作用的一类 药物。原药通过载体修饰，不仅可以改变其理化性质，而且可改善其体内的吸收与分布， 从而可达到提高其药效的目的。经过对现有技术的检索发现，巯嘌呤前药可分为小分子 前药和大分子前药两类。Christa E.等制备了一系列由巯嘌呤通过二硫键连接长链烷 烃的高脂溶性小分子前药，实现了病变细胞中巯嘌呤的有效释放(Christa E. Miiller, Peter T. Daniel, Joachim Holzschuh andHermann J. Roth, International Journal of Pharmaceutics, 57 (1989)，41-47) ；Τ. Miron 等制得了大蒜素-巯嘌呤小分子前 药(SA-6MP)，实验证明这种前药在提高抗癌疗效的同时也可实现可控释药(T.Miron， F. Arditti, L. Konstantinovski, A. Rabinkov, D. Mirelman, A. Berrebi, Μ. Wilchek, European Journal of Medicinal Chemistry，44 (2009)，541-550)。由于这两种前药均为 脂溶性小分子前药，在体内生物相容性低，肾滤过率和血浆清除速率高，易排泄，指定时间 内药物难以达到治疗作用。由于小分子前药大都存在上述共性问题，关于巯嘌呤的大分子 前药开始引起人们的关注。目前巯嘌呤大分子前药的报道比较少见，Marina等通过巯嘌呤 与两端氯代的聚乙二醇2000反应，以化学键方式载于生物相容性良好的聚乙二醇载体上 获得PEG-巯嘌呤前药，这种前药不仅能改善巯嘌呤的水溶性并延长其作用时间，而且能降 低其细胞毒苜 1J作用(Marina Zacchigna,Francesca Cateni,Gabriella Di Luca and Sara Drioli, Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 17 (2007)，6607-6609)。但这种前 药不能充分保证在通过体内循环过程转运至病灶细胞之前不释放药物，致使到达病灶细胞 的药物不能达到有效剂量而降低药物疗效；而且该前药在转入病灶细胞之后也不能响应细胞内环境释药。另外，聚乙二醇作为前药载体有明显的缺点，其降解过程中产生的乙二醇和 二甘醇具有一定的生物毒性(中国专利200710024888. 2)。药物载体的选择是大分子前药制备的关键，羧甲基壳聚糖(Carboxymethyl Chitosan，简称CMC)是天然高分子壳聚糖的羧甲基化产物，是分子链上含有阳离子(-NH+3) 和阴离子(-coo—)的两性聚电解质；用作疏水小分子及生物活性大分子(多肽、蛋白和基 因)药物的前药载体时，它可与生物组织形成非共价键合的氢键，从而产生粘附作用，延长 在吸收部位的滞留时间，增进药物的吸收；同时其分子链上质子化的氨基可作用于细胞膜 表面的类脂_蛋白质复合物，增进药物的透膜性能。以CMC为载体的前药研究已有文献报 道，如谢永美等制备了一种以羧甲基壳聚糖为载体的阿霉素前药(谢永美，唐小海.N，0-羧 甲基壳聚糖_阿霉素偶联物的合成及其淋巴靶向特性.高等学校化学学报，2006)，中国专利200710024888. 2则公开了一种以羧甲基壳聚糖为载体的灯盏乙素前药。目前将羧甲基 壳聚糖作为载体，用于设计巯嘌呤类前药尚未见报道。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是针对上述技术存在的不足，提供一种羧甲基壳聚 糖为载体的巯嘌呤类药物的新型两亲性大分子前药，以巯基乙酸等为连接臂，使载体羧甲 基壳聚糖和抗癌药物巯嘌呤等以二硫键连接。该前药能在血液循环过程中稳定存在，在病 灶细胞里能响应谷胱甘肽的浓度变化释药；同时该两亲性大分子可用于载体材料，自组装 成纳米给药系统，通过该系统表面部分羧基的靶分子或靶基团修饰，有望实现药物靶向到 达病灶细胞的目的。本发明所要解决的另一个技术问题是提供一种容易实施的基于巯嘌呤类药物的 新型两亲性大分子前药的制备方法。本发明解决其技术问题采用以下的技术方案本发明提供的基于巯嘌呤类药物的新型两亲性大分子前药(CMC-6MP)，具体是 两亲性大分子的亲水段为羧甲基壳聚糖，疏水段为一种巯嘌呤类药物；巯嘌呤类药物先与 连接臂巯基乙酸类化合物以二硫键连接为其修饰物，连接臂另一端羧基与亲水段的氨基以 酰胺键连接；在所述前药的整体结构中包含以下亚结构
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其中m为大于等于1的整数，η为大于等于1的整数。
所述的羧甲基壳聚糖为O-羧甲基壳聚糖、N-羧甲基壳聚糖或N，0-羧甲基壳聚糖， 它们的取代度均为大于等于0. 5且小于等于1. 5的任意数。所述的巯嘌呤类药物包括巯嘌呤及其衍生物硫鸟嘌呤等，它们的取代度均为大于 0且小于等于1的任意数。所述的巯基乙酸类化合物为巯基乙酸、巯基丙酸或巯基丁酸。本发明提供了制备上述基于巯嘌呤类药物的新型两亲性大分子前药(简称两亲 性大分子前药)的方法，该方法采用包括以下步骤的方法步骤1是双-(6-嘌呤)二硫化物的制备，巯嘌呤经碘氧化反应得到其二硫化物；步骤2是6-巯基嘌呤磺酸钠的制备，由双-(6-嘌呤)二硫化物与亚硫酸钠反应 制得；步骤3是2-[(9H_嘌呤-6-基)二巯基]乙酸的合成，由6_巯基嘌呤磺酸钠与巯 基乙酸反应得到；步骤4是2_[ (9H-嘌呤-6-基)二巯基]乙酸活性酯的制备；步骤5是羧甲基壳聚糖为载体的两亲性大分子前药的合成，用2-[(9H_嘌 呤-6-基)二巯基]乙酸活性酯与羧甲基壳聚糖反应；经过上述步骤，制得所述的基于巯嘌呤类药物的新型两亲性大分子前药。上述步骤1中，可以将巯嘌呤溶解于热的磷酸缓冲溶液，过滤溶液，滤液冷至 30°C 40°C，加入碘化钠和碘重量比2 1的水溶液，过滤出生成的沉淀物，用水和乙 醚-乙醇洗涤，真空干燥，得到产物。上述步骤2中，可以将磨细的双-(6-嘌呤)二硫化物加到亚硫酸钠的水溶液中， 搅拌2h后，过滤除去析出的6-MP，滤液以活性炭脱色后，减压浓缩，所得白色浆状物中加乙 醇析出结晶，过滤，干燥，得6-巯基嘌呤磺酸钠粗品；经重结晶得到类白色鳞片状晶体，即 为6-巯基嘌呤磺酸钠。上述步骤3中，可以将6-巯基嘌呤磺酸钠溶于缓冲溶液中，通氮除氧，降温至 0-10°C，向溶液中逐滴加入巯基乙酸反应24h，反应液过滤，所得沉淀用蒸馏水和乙醇洗涤， 真空干燥即得2-[(9H-嘌呤-6-基)二巯基]乙酸。上述步骤4中，可以将2- [ (9H-嘌呤_6_基)二巯基]乙酸溶于DMF，降温至0_5°C， 首先按2-[ (9H-嘌呤-6-基)二巯基]乙酸N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)为1 1. 1 2. 0 的摩尔投放NHS，然后按2-[(9H-嘌呤-6-基)二巯基]乙酸1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙 基碳二亚胺盐酸盐(EDC · HCl)为1 1. 1 2. 0的摩尔投放EDC · HCl，室温反应24h，反 应液过滤，滤液即为2-[ (9H-嘌呤-6-基)二巯基]乙酸活性酯溶液。上述步骤5中，可以将羧甲基壳聚糖溶于蒸馏水中，加入制备的所述活性酯和 0. 3mL四甲基二乙胺，室温反应72h，经透析、冷冻干燥得到两亲性大分子前药。本发明与现有技术相比具有以下的主要优点(1)本两亲性大分子前药将疏水巯嘌呤药物连接于大分子载体羧甲基壳聚糖上，该两亲性大分子可用于载体材料，自组装成纳米给药系统，通过该系统表面部分羧基的靶 分子或靶基团修饰，有望实现药物靶向到达病灶细胞的目的。(2)本两亲性大分子前药在较低浓度(微摩尔级)的谷胱甘肽溶液中，由于二硫键的稳定存在，药物几乎不被释放，从而使得两亲性大分子前药在人体血液循环中不释放药物，降低巯嘌呤类药物对正常细胞的毒副作用。(3)本两亲性大分子前药在较低浓度(毫摩尔级)的谷胱甘肽溶液中，由于连接药 物的二硫键会被由外向内逐渐打开，二硫键被还原成巯基，巯嘌呤药物因此被逐渐释放出 来，从而使得大分子前药在人体病灶细胞里具有智能可控释药性能。
图1为实施例1中羧甲基壳聚糖为载体的巯嘌呤类药物的大分子前药合成路线 图。图2为实施例1中巯嘌呤与巯嘌呤磺酸钠的紫外吸收图。图3为实施例1中2-[ (9H-嘌呤_6_基)二巯基]乙酸的1HNMR谱图。图4为实施例1中制备的大分子前药CMC-6MP在不同浓度谷胱甘肽中响应释药曲 线图。
具体实施例方式以下结合实施例及附图对本发明作进一步详细描述。本实施例在以本发明前药结构和技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施 方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。本发明的合成路线如图1所示将巯嘌呤或巯嘌呤衍生物先通过碘氧化变成 双_ (6-嘌呤)二硫化物，再与亚硫酸钠反应后得到6-巯基嘌呤磺酸钠，把6-巯基嘌呤磺酸 钠与巯基乙酸等反应制得2-[(9H-嘌呤-6-基)二巯基]乙酸，最后将2-[(9H-嘌呤-6-基) 二巯基]乙酸经活化后与羧甲基壳聚糖反应可制得絮状的巯嘌呤前药。实施例1 (采用取代度为0. 74的N，0_羧甲基壳聚糖为载体，巯基乙酸为连接臂， 巯嘌呤为治疗药物)(1)双-(6-嘌呤)二硫化物的制备称取(1. Og, 0. 0066mol)巯嘌呤溶解于IL热的磷酸缓冲溶液(pH7. 6)，过滤溶液， 冷至33°C。同时按重量比2 1称取碘化钠和碘配成6mL(0.0033mol)的溶液。往巯嘌呤 溶液中边搅拌边在5min内分批加入所配置的碘溶液，立即过滤出生成的白色沉淀物，用水 洗涤除去表面残留的磷酸缓冲溶液，用乙醚-乙醇将其洗至完全粉末状，用80%乙醇重结 晶，最后将该粉末在45°C下真空干燥，得到产物。(2) 6-巯基嘌呤磺酸钠的制备将磨细的双-(6-嘌呤)二硫化物3. 025g(0. Olmol)加到亚硫酸钠 1.263g(0. Olmol)的水(IOmL)溶液中，经搅拌下，固体逐渐溶解，同时析出6-MP，此时反应 液变稠，颜色从淡黄色变为乳白色。搅拌2小时后，滤去6-MP，滤液以活性炭脱色后，减压蒸去水(水浴温度应不超过50°C，否则易生成嘌呤-6-磺酸钠之副产物)。残物加乙醇括 擦，过滤，干燥，得1.85g6-巯基嘌呤磺酸钠粗品，将粗品(1份)溶于水(4份)中，脱色，过 滤，滤液中加入无水乙醇(24份)，放过夜，生成类白色鳞片状晶体。测定该化合物和巯嘌呤 的紫外吸收，如图2。溶液配制方法均依照药典中的相关规定，实验结果符合药典中规定的 "287nm有最大吸收，238nm处有最小吸收”。(3) 2_[ (9H-嘌呤_6_基)二巯基]乙酸的合成
将6-巯基嘌呤磺酸钠0. 94g(0. 003mol)溶于20mLpH7. 4缓冲溶液中，抽真空后 向系统中充满氮气，冰浴中降温至5-10°C，向溶液中逐滴加入286 μ L巯基乙酸。5-10°C 反应24h，反应液过滤，得到的白色沉淀用蒸馏水和乙醇洗数次，真空干燥即得2-[(9H-嘌 呤-6-基)二巯基]乙酸，其IHNMR表征如图3所示。
(4)羧甲基壳聚糖_巯嘌呤两亲性大分子前药的制备2- [ (9H-嘌呤-6-基)二巯基]乙酸0. 0501g溶于3mLDMF中，溶解后降温 至0-5°C，按以下摩尔比投料羧基1-(3_ 二甲氨基丙基)-3_乙基碳二亚胺盐酸盐 (EDOHCl) N-羟基琥珀酰亚胺(NHS) = 1 1. 1 1. 1，先加入0. 0269gNHS，再滴入已配 置好的0. 0436g EDC .HClz^mLDMF溶液，室温条件下搅拌反应12h，反应液过滤。将0. 0510g 羧甲基壳聚糖溶于5mL蒸馏水配成浓度水溶液，将之前制备的活性酯溶液滴入到该溶 液中，并加入0. 3mL四甲基二乙胺，反应72h，先用DMF透析两天，再用蒸馏水透析三周，冷冻 干燥得到两亲性大分子前药。实施例2 (采用取代度为0. 60的0-羧甲基壳聚糖为载体，巯基乙酸为连接臂，巯 嘌呤为治疗药物)(1)双-(6-嘌呤)二硫化物的制备同实施例1。(2) 6-巯基嘌呤磺酸钠的制备同实施例1。(3) 2_[ (9H-嘌呤-6-基)二巯基]乙酸的合成同实施例1。(4)羧甲基壳聚糖_巯嘌呤两亲性大分子前药的制备2- [ (9H-嘌呤-6-基)二巯基]乙酸0. 0501g溶于3mLDMF中，溶解后降温 至0-5°C，按以下摩尔比投料羧基1-(3_ 二甲氨基丙基)-3_乙基碳二亚胺盐酸盐 (EDOHCl) N-羟基琥珀酰亚胺(NHS) = 1 1. 1 1. 1，先加入0. 0269gNHS，再滴入已配 置好的0. 0436g EDC -HCl/3mLDMF溶液，室温条件下搅拌反应12h，反应液过滤。将0. 0468g 羧甲基壳聚糖溶于5mL蒸馏水配成浓度0. 94%水溶液，将之前制备的活性酯溶液滴入到该 溶液中，并加入0. 3mL四甲基二乙胺，反应72h，先用DMF透析两天，再用蒸馏水透析三周，冷 冻干燥得到两亲性大分子前药。实施例3 (采用取代度为0. 50的N-羧甲基壳聚糖为载体，巯基乙酸为连接臂，巯 嘌呤为治疗药物)(1)双-(6-嘌呤)二硫化物的制备同实施例1。(2) 6-巯基嘌呤磺酸钠的制备同实施例2。(3) 2_[ (9H-嘌呤-6-基)二巯基]乙酸的合成同实施例1。(4)羧甲基壳聚糖_巯嘌呤两亲性大分子前药的制备2- [ (9H-嘌呤-6-基)二巯基]乙酸0. 0501g溶于3mLDMF中，溶解后降温 至0-5°C，按以下摩尔比投料羧基1-(3_ 二甲氨基丙基)-3_乙基碳二亚胺盐酸盐(EDOHCl) N-羟基琥珀酰亚胺(NHS) = 1 1. 1 1. 1，先加入0. 0269gNHS，再滴入已配置好的0. 0436g EDC -HCl/3mLDMF溶液，室温条件下搅拌反应12h，反应液过滤。将0. 0936g 羧甲基壳聚糖溶于5mL蒸馏水配成浓度1.9%水溶液，将之前制备的活性酯溶液滴入到该 溶液中，并加入0. 3mL四甲基二乙胺，反应72h，先用DMF透析两天，再用蒸馏水透析三周，冷 冻干燥得到两亲性大分子前药。实施例4 (采用取代度为0. 74的N，0_羧甲基壳聚糖为载体，巯基丙酸为连接臂， 巯嘌呤为治疗药物)(1)双-(6-嘌呤)二硫化物的制备同实施例1。(2) 6-巯基嘌呤磺酸钠的制备同实施例2。(3) 3_[ (9H-嘌呤_6_基)二巯基]丙酸的合成将6-巯基嘌呤磺酸钠0. 94g溶于20mLpH7. 4缓冲溶液中，抽真空后向系统中充满 氮气，冰浴中降温至5-10°C，向溶液中逐滴加入265 μ L巯基丙酸。5-10°C反应24h，反应液 过滤，得到的白色沉淀用蒸馏水和乙醇洗数次，真空干燥即得3-[ (9H-嘌呤-6-基)二巯
基]丙酸。(4)羧甲基壳聚糖-巯嘌呤两亲性大分子前药的制备3- [ (9H-嘌呤-6-基)二巯基]丙酸0. 0514g溶于3mLDMF中，溶解后降温 至0-5°C，按以下摩尔比投料羧基1-(3_ 二甲氨基丙基)-3_乙基碳二亚胺盐酸盐 (EDOHCl) N-羟基琥珀酰亚胺(NHS) = 1 1. 5 1. 5，先加入0. 0356NHS，再滴入已配 置好的0. 0593g EDC -HCl/3mLDMF溶液，室温条件下搅拌反应12h，反应液过滤。将0. 0522g 羧甲基壳聚糖溶于5mL蒸馏水配成浓度水溶液，将之前制备的活性酯溶液滴入到该溶 液中，并加入0. 3mL四甲基二乙胺，反应72h，先用DMF透析两天，再用蒸馏水透析三周，冷冻 干燥得到两亲性大分子前药。实施例5 (采用取代度为0. 74的N，0_羧甲基壳聚糖为载体，巯基乙酸为连接臂， 硫鸟嘌呤为治疗药物)(1)双-(9H-嘌呤-2-胺-6-基)二硫化物的制备将lLpH7. 6磷酸缓冲溶液和0. 75L水混合，并加热至65 °C，称取(1. Og, 0.0060mol)硫鸟嘌呤溶解于其中，过滤溶液，冷至38°C。同时按重量比2 1称取碘化钠 和碘配成5. 7mL(0. 0030mol)的溶液。往硫鸟嘌呤溶液中边搅拌边逐滴加入所配置的碘溶 液，碘溶液刚加入，溶液中立即有白色固体生成，随着碘溶液继续加入，固体由白色变黄色， 用水洗涤除去表面残留的磷酸缓冲溶液，用乙醚_乙醇将其洗至完全粉末状，最后将该粉 末在45°C下真空干燥，得到产物。(2) 2-氨基-6-(巯基磺酸钠)-9-钠代嘌呤的制备将“双-(6-嘌呤)二硫化物3. 025g”换为“双-(9H-嘌呤_2_胺_6_基)二硫化 物3. 325g”，其它同实施例1。(3) 2_[ (9H-嘌呤_2_胺_6_基)二巯基]乙酸的合成将“6-巯基嘌呤磺酸钠0. 94g”换为“2-氨基_6_(巯基磺酸钠)_9_钠代嘌呤 0. 99g”，其它同实施例1。
(4)羧甲基壳聚糖_硫鸟嘌呤两亲性大分子前药的制备将“2-[(9H-嘌呤-6-基)二巯基]乙酸 0.0501g” 换为 “2-[(9H_ 嘌 呤-2-胺-6-基)二巯基]乙酸0. 0514g”，其它同实施例1。实施例6将上述实施例1得到的两亲性大分子前药进行体外模拟释放实验，据文献已知人体血液里谷胱甘肽的浓度较低(微摩尔级)，病灶细胞后由于谷胱甘肽浓度相对较高(毫摩 尔级)。具体操作是谷胱甘肽(ImM)的配制，称取15. 366mg的谷胱甘肽溶于50mL的PBS 缓冲溶液急得；谷胱甘肽(10 μ Μ)的配制，精确称取谷胱甘肽3. 0732mg溶解于IOOOmlPBS 缓冲溶液中即得。称取羧甲基壳聚糖-巯嘌呤两亲性大分子前药Ig溶于10mLpH7. 4的PBS缓冲溶 液。将该溶液平均分为2份装于两个透析袋中，分别置于30ml谷胱甘肽(10μΜ))、30πι1谷 胱甘肽(ImM)的试管中。将试管放置于37°C，90r/min的恒温摇床中振荡处理，间隔一段时 间取出3ml，补充相应的释放介质3ml，利用紫外分光光度计在325nm处测定吸收度，计算累 积释放率，结果如图4，a为置于30ml谷胱甘肽(ImM)中释药曲线，b为置于30ml谷胱甘肽 (10 μ M))中释药曲线。结果显示，该两亲性大分子前药在谷胱甘肽(10 μ Μ)溶液中二硫键稳定，只有很 微量释药；而在谷胱甘肽(ImM)溶液中二硫键断裂，药物巯嘌呤逐渐被释放出来，在3h时巯 嘌呤释放约80%，在4h时检测到得累积释放率减小，是因为巯嘌呤在释放过程中容易被空 气氧化为二硫化物。这一结果表明，该两亲性大分子前药能响应人体中不同部位谷胱甘肽 浓度的刺激释药，从而在人体血液中稳定存在，不释放药物，而在病灶部位智能释放。
权利要求
一种基于巯嘌呤类药物的新型两亲性大分子前药，其特征在于两亲性大分子的亲水段为羧甲基壳聚糖，疏水段为一种巯嘌呤类药物；巯嘌呤类药物先与连接臂巯基乙酸类化合物以二硫键连接为其修饰物，连接臂另一端羧基与羧甲基壳聚糖的氨基以酰胺键连接；在所述前药的整体结构中包含如下亚结构其中m为大于等于1的整数，n为大于等于1的整数。FSA00000105070100011.tif
2.根据权利要求1所述的新型两亲性大分子前药，其特征在于羧甲基壳聚糖为0-羧甲 基壳聚糖、N-羧甲基壳聚糖或N，0-羧甲基壳聚糖，它们的取代度为大于等于0. 5且小于等 于1. 5的任意数。
3.根据权利要求1所述的新型两亲性大分子前药，其特征在于巯嘌呤类药物包括巯嘌 呤及其衍生物硫鸟嘌呤，它们的取代度均为大于0且小于等于1的任意数。
4.根据权利要求1所述的新型两亲性大分子前药，其特征在于巯基乙酸类化合物为巯 基乙酸、巯基丙酸或巯基丁酸。
5.一种基于巯嘌呤类药物的新型两亲性大分子前药的制备方法，其特征在于该方法采 用包括以下步骤的方法步骤1是双_(6_嘌呤)二硫化物的制备，巯嘌呤经碘氧化反应得到其二硫化物；步骤2是6-巯基嘌呤磺酸钠的制备，由双-(6-嘌呤)二硫化物与亚硫酸钠反应制得；步骤3是2-[ (9H-嘌呤-6-基)二巯基]乙酸的合成，由6-巯基嘌呤磺酸钠与巯基乙 酸反应得到；步骤4是2-[ (9H-嘌呤-6-基)二巯基]乙酸活性酯的制备；步骤5是羧甲基壳聚糖为载体的两亲性大分子前药的合成，用2-[ (9H-嘌呤-6-基) 二巯基]乙酸活性酯与羧甲基壳聚糖反应；经过上述步骤，制得权利要求1至4中任一权利要求所述的前药。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于步骤1是将巯嘌呤溶解于热的磷酸 缓冲溶液，过滤溶液，滤液冷至30°C 40°C，加入碘化钠和碘重量比2 1的水溶液，过滤 出生成的沉淀物，用水和乙醚-乙醇洗涤，真空干燥，得到产物。
7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于步骤2是将磨细的双_(6_嘌呤)二 硫化物加到亚硫酸钠的水溶液中，搅拌2h后，过滤除去析出的巯嘌呤，滤液以活性炭脱色 后，减压浓缩，所得白色浆状物中加乙醇析出结晶，过滤，干燥，得6-巯基嘌呤磺酸钠粗品； 经重结晶得到类白色鳞片状晶体，即为6-巯基嘌呤磺酸钠。
8.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于步骤3是将6-巯基嘌呤磺酸钠溶于 缓冲溶液中，通氮除氧，降温至0-10°C，向溶液中逐滴加入巯基乙酸反应24h，反应液过滤， 所得沉淀用蒸馏水和乙醇洗涤，真空干燥即得2-[(9H-嘌呤-6-基)二巯基]乙酸。
9.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于步骤4是将2-[(9H-嘌呤-6-基)二 巯基]乙酸溶于DMF，降温至0-5°C，首先按2-[(9H-嘌呤-6-基)二巯基]乙酸N_羟基琥 珀酰亚胺(NHS)为1 1.1 2.0的摩尔投放NHS，然后按2-[(9H-嘌呤-6-基)二巯基] 乙酸1_(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDO HC1)为1 1.1 2.0的摩 尔投放EDC HC1，室温反应24h，反应液过滤，滤液即为2-[ (9H-嘌呤-6-基)二巯基]乙 酸活性酯溶液。
10.根据权利要求5或9所述的制备方法，其特征在于步骤5是将羧甲基壳聚糖溶于 蒸馏水中，加入制备的所述活性酯和0. 3mL四甲基二乙胺，室温反应72h，经透析、冷冻干燥 得到两亲性大分子前药。
全文摘要
本发明涉及基于巯嘌呤类药物的新型两亲性大分子前药及其制备方法。所述前药的结构是两亲性大分子的亲水段为羧甲基壳聚糖，疏水段为一种巯嘌呤类药物；巯嘌呤类药物先与连接臂巯基乙酸类化合物以二硫键连接为其修饰物，连接臂另一端羧基与羧甲基壳聚糖的氨基以酰胺键连接。所述前药的制备方法步骤包括双-(6-嘌呤)二硫化物的制备、6-巯嘌呤磺酸钠的制备、2-[(9H-嘌呤-6-基)二巯基]乙酸的合成、2-[(9H-嘌呤-6-基)二巯基]乙酸活性酯的制备和所述前药的合成。所述前药在血液循环中不释放原药，在进入病灶细胞后能响应谷胱甘肽浓度变化释；该两亲性大分子可用于载体材料，自组装成纳米给药系统。
文档编号A61K47/48GK101829338SQ20101016019
公开日2010年9月15日 申请日期2010年4月23日 优先权日2010年4月23日
发明者殷以华, 舒凯凯, 郑化, 饶艳 申请人:武汉理工大学