专利名称：新脑苷脂用于制备治疗炎症性肠炎药物的用途的制作方法
技术领域：
本发明属于制药技术领域，具体涉及一种Fusaruside用于制备治疗炎症性肠炎 药物的用途。
背景技术：
新脑苷脂Fusaruside最初是从菌种Fusarium sp. IFB-121中提取得到(Shu, R.G., et al. 2004. Antibacterial and xanthine oxidase inhibitory cerebrosides fromFusarium sp IFB-121, an endophytie fungus in Quercus variabilis. Lipids. 39(7) :p. 667-673.)，它的化学结构自被报道以来，对该化合物的研究甚少，关于其 药理活性方面，尤其是抑制炎症反应、保护消化道器官的作用等，迄今未见报道。本发明主 要发现了伪仰皿&如对2，4，6-三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的炎症性肠炎具有显著的改善 作用。该肠炎模型被公认为克罗恩氏病及溃疡性结肠炎的动物模型之一。
发明内容
本发明的目的是提供fusaruside的一种新用途。本发明所说的fusaruside的新用途是=Fusaruside用于制备治疗炎症性肠炎药 物的用途。所说的炎症性肠炎包括各种溃疡性肠炎、克罗恩氏病及其它肠组织相关疾病。本发明所说的fusaruside可通过下述方法获得从植物内生菌栓皮栎镰刀属 真菌Fusarium sp. IFB-121固体发酵产物中分离得到fusaruside。即提取Fusariumsp. IFB-121菌液，胶柱层析，ODS反相柱层析，20%甲醇/水系统——纯甲醇洗脱，最后用HPLC 制备得 fusaruside。本发明的药理实验表明对TNBS诱导的结肠炎的小鼠，2. 5、5、10mg/kg的 fusaruside均能提高其生存率。5和10mg/kg的fusaruside可显著减轻TNBS诱导的结肠 炎小鼠体重的降低。对TNBS诱导的结肠炎的小鼠，5和10mg/kg的fusaruside可显著改善 肠部红斑，出血，水肿，血便，腹泻，束紧形成，出现粘液等病变。对TNBS诱导的结肠炎的小 鼠，5和10mg/kg的fusaruside可显著改善上皮腺体层增厚，溃疡，隐窝缺失，溃疡处大量中 性粒细胞等病变。以上显示，fusaruside能显著改善TNBS诱导的结肠炎，显示出良好的抑制炎症的 作用。已知TNBS诱导的小鼠结肠炎是炎症性肠炎及克罗恩氏病的典型动物模型，故其作为 克罗恩氏病、溃疡性结肠炎及其它肠组织炎症相关疾病的治疗药物中得到应用。
四
图IFusaruside对TNBS诱导的结肠炎小鼠体重的影响。C57BL/6 小鼠随机分成 6 组，分别为正常组，TNBS 组，fusaruside 2. 5、5、10mg/kg 和dexamethasone，造模后连续经腹腔给药三天，每天称量体重。体重结果以平均数士标准 误表示。* :P < 0. 05vs模型组小鼠；# =P < 0. Olvs模型组小鼠(Dunnett，s test)。
3
图2FuSaruSide对TNBS诱导的结肠炎小鼠的结肠宏观指标分析。第三天，取TNBS诱导的结肠炎小鼠的结肠，进行宏观指标评分。结果以平均数士 标准误表示。* :P<0. 05vs TNBS组小鼠；** :P<0. Olvs TNBS组小鼠(Dunnett，s test)。图3FuSaruSide对TNBS诱导的结肠炎小鼠的结肠病理切片微观指标分析。第三天，取TNBS诱导的结肠炎小鼠的结肠，并切取相同位置的结肠组织，石蜡包 埋，用H&E染色，并进行微观学评分，结果以平均数士标准误表示。* :P < 0. 05vs TNBS组 小鼠；** :P < 0. Olvs TNBS 组小鼠(Dunnett' s test)。
五具体实施例方式本文所涉及的栓皮栎镰刀属真菌Fusarium sp. IFB-121是从栓皮栎的树皮中提取 (Shu, R. G. , et al. 2004. Antibacterial and xanthine oxidase inhibitorycerebrosides from Fusarium sp IFB-121, an endophytic fungus in Quercus variabilis. Lipids. 39 (7) :p. 667-673.)，由南京大学谭仁祥教授提供。实施例一 Fusaruside的提取分离及结构本发明所研究的fusaruside系从植物内生菌栓皮栎镰刀属真菌Fusarium sp. IFB-121 固体发酵产物中分离得到。即在 50L YPD (10% Yeast extract ；20% Peptone ；20% Dextrose)培养基中，于28°C，180rpm，培养Fusarium sp. IFB-121，7天。用纱布过滤并抽 滤制菌饼，干燥，然后再用丙酮浸泡菌饼12h，每30min搅拌一次，浓缩提取液，得粗膏52g。 对提取液进行硅胶柱层析，洗脱剂为1 :40%丙酮的氯仿溶液及2 :20%甲醇的丙酮溶液。接 着用ODS反相柱层析，20%甲醇/水系统——纯甲醇洗脱。98%的甲醇/水洗脱时得到脑 苷脂组分。最后用HPLC制备，洗脱条件为97%色谱甲醇(水)，得fusaruside，其结构式如 下。 实施例二 Fusaruside的药理实验及结果分析1)TNBS诱导的结肠炎取C57BL/6小鼠(8_10周)，随机分成6组，除正常组外先用150 μ 11% TNBS溶液 涂在成年雄性C57BL/6小鼠的刮毛后的腹部。七天后，用的戊巴比妥麻醉小鼠后轻轻直 肠注射TNBS溶液(2. 5mg TNBS在50%乙醇溶液中)。其中4组在直肠注射后分别经腹腔 给2. 5、5、10mg/kg的fusaruside和lmg/kg的地塞米松(dexamethasone)，模型组和正常组 给予等量的PBS，连续3天，动物每天测量体重，观察小鼠存活率和腹泻情况。第三天，取小 鼠结肠，先进行宏观指标评分，再切取相同位置的结肠组织，石蜡包埋，用H&E染色，进行病理学评分。2) Fusaruside对TNBS诱导的结肠炎小鼠生存率的影响在第三天时，在模型组中还有30%的小鼠存活，2. 5、5、10mg/kg的fusaruside和 lmg/kg的地塞米松处理组中则分别为40%、40%、50%和40%，该结果说明2. 5,5UOmg/ kg的fusaruside均能增加结肠炎小鼠的存活率。3) Fusaruside对TNBS诱导的结肠炎小鼠体重的影响如图1所示，在模型组小鼠体重有明显的下降。在第三天时，与模型组小鼠相比， 5和10mg/kg的fusaruside，以及lmg/kg dexamethasone对结肠炎小鼠的体重下降均有显
著改善作用。4) Fusaruside对TNBS诱导的结肠炎其它宏观指标的影响宏观学评分规则为，出现出血、水肿、束紧形成、溃疡、血便、出现粘液、腹泻各计 1分，红斑和粘连根据程度可给0-2分。如图2所示，肠组织切片分析显示与正常组相 比，模型组有典型的红斑，出血，水肿，血便，腹泻，束紧形成，并出现粘液。评分结果显示， fusaruside 5、10mg/kg均能显著改善这些病变，作用呈剂量依赖性。Dexamethasone lmg/ kg也能改善这些病变。5) Fusaruside对TNBS诱导的结肠炎微观指标的影响微观学评分规则为，无炎症计为0分，少量粒细胞的浸润计为1分，中度粒细胞的 浸润计为2分，高度粒细胞的浸润，中度纤维化，高血管密度，肠壁变厚，隐窝畸变及Goblet 细胞丢失计为3分，透壁浸润，大片Goblet细胞丢失，多处纤维化及隐窝大面积丢失计为4 分。如图3所示，肠组织切片分析显示与正常组相比，模型组有典型的结肠炎特点如隐窝畸 变，Goblet细胞丢失，单核细胞侵润和严重的粘膜损伤。相关评分结果显示，fusaruside 5、 10mg/kg均能显著改善这些病变，作用呈剂量依赖性。Dexamethasone lmg/kg也能改善这 些病变。本发明所述，fusaruside可用于制备多种克罗恩氏病和溃疡性结肠炎及其它肠组 织炎症相关疾病的治疗药物。
权利要求
Fusaruside在制备治疗炎症性肠炎药物中的应用。
2.如权利要求1所说的应用，其特征在于所说的炎症性肠炎是克罗恩氏病、溃疡性肠 炎或其它肠组织炎症相关疾病。
全文摘要
本发明属于制药技术领域。本发明所述，从植物内生菌栓皮栎镰刀属真菌Fusarium sp.IFB-121固体发酵产物中分离得到fusaruside。Fusaruside能显著改善TNBS诱导的结肠炎。由此可见，fusaruside能明显改善免疫性肠部炎症。综上所述，fusaruside作为一种新型炎症肠病治疗药物，具有良好的抑制炎症和保护肠组织等活性，可用于各种溃疡性肠炎、克罗恩氏病及其他肠组织相关疾病的治疗并制备相应的治疗药物。
文档编号A61P1/00GK101912406SQ20101018840
公开日2010年12月15日 申请日期2010年6月1日 优先权日2010年6月1日
发明者吴兴新, 徐建梁, 徐强, 胥苏海, 谭仁祥 申请人:南京大学