专利名称：短指软珊瑚中一种具有抗菌活性的开环甾体皂苷类化合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及医药技术领域，是从海洋动物短指软珊瑚中分离到的一种新的具有抗 菌活性的开环留体皂苷类化合物Sinularoside A和Sinularoside B。
背景技术：
我国南海海域辽阔，地处亚热带，软珊瑚资源尤其丰富，是世界上软珊瑚集中分布 的海域之一。短指软珊瑚在南海海域内广泛分布，数量众多。短指软珊瑚(Sinularia. sp) 属腔肠动物门(Coelenterata)珊瑚虫纲(Anthoaoa)八放珊瑚亚纲(Octocorallia)软珊 瑚目(Alcy0nacea)软珊瑚科(Alcyoniidae)动物。短指软珊瑚化学成分研究始于1975年， 多年来对该属软珊瑚的研究一直非常活跃。到目前为止，已研究了该属中42个的化学成 分。这些化学成分主要有萜类(尤其是西松烯二萜)、留醇类、含氮化台物和一些长链脂肪 酸、酯、醇类等。已从该种珊瑚中分离得到开环留体类化合物，但未见有关从该种珊瑚甚至 整个珊瑚动物中提取分离得到开环留体苷成分的报道。
发明内容
本发明提供一种从短指软珊瑚中提取分离到的两个开环留体苷类化合物，化学式 分别为C36H58O8和C34H56O7,分别命名为Sinularoside A和Sinularoside B,它们的化学结
构通式如下 其 其中， Sinularoside A为无色油状固体，由高分辨质谱(HR-ESI-MS+)中准分子离子峰 提供的精确分子量 m/z 641. 4026[M+Na]+, (Calcd. fOrC36H58O8Na, 6418. 4026)，给出该化合 物的分子式 C36H58O8,分子量 618 ；红外光谱3418 (OH)，2956 ；2927 (CH3，CH2)，1738 (C = 0)， 1716 (C = 0)，1671 (C = C) ；1H和13C核磁共振数据见表1。Sinularoside B为无色油状固体，由高分辨质谱(HR-ESI-MS+)中准分子离子峰 提供的精确分子量 m/z599. 3929 [M+Na]+，(Calcd. forC34H56O7Na, 6418. 4026)，给出该化合物 的分子式 C34H56O7,分子量 576. 3929 ；红外光谱3359 (OH), 3192 (C = C),2923 ；2852(CH3, CH2)，1633(C = 0)，1658 (C = C) ；1H 禾口 13C 核磁共振数据见表 1。表1. Sinularoside A 和 Sinularoside B 的 1H 和 13C 核磁共振数据 (600MHz/125MHz)
COQCH3 20.8_2.17 s_J值偶合常数本发明Sinularoside A和Sinularoside B的制备方法如下1.制备总浸膏取新鲜的短指软珊瑚洗净剪碎，用重量比为5 10倍的丙酮超声提取至提取液无 色，减压回收丙酮至干，用等体积水分散，乙醚分次萃取，合并萃取液，减压回收乙醚浓缩至 干，得总浸膏；2.分离纯化将总浸膏用正相硅胶色谱(200 300目)分离，用石油醚/丙酮系统梯度洗脱， 根据薄层板检测监测，分别收集、合并得部分1和部分2。部分1经过S印handex LH-20凝 胶柱色谱，流动相体积比为1 1的三氯甲烷/甲醇洗脱，根据薄层板检测监测，分别收集、 合并得部分a和b。将a部分进行反相高效液相色谱分离，以甲醇水的体积比为90 10 的混合溶剂进行洗脱，根据示差检测器监测，收集含Sinularoside A流份，减压回收甲醇 并浓缩至干，得Sinularoside A。将部分2进行反相高效液相色谱分离，以甲醇水的体 积比为90 10的混合溶剂进行洗脱，根据示差检测器监测，减压回收甲醇并浓缩至干，得 Sinularoside B。对Sinularoside A和Sinularoside B进行的体外抗菌试验表明，它们对于试验 用真菌、细菌和藻类具有明显的抑制效果，因此，可用于制备抗菌药物。本发明为研制新的抗菌药物提供了新的先导化合物，为开发利用中国的海洋药用 生物资源具有重要意义。
具体实施例方式现结合实施例对本发明作详细描述。实施例1.制备 Sinularoside A 和 Sinularoside B取中国广西涠洲岛海域的短指软珊瑚(Sinularia. sp) 2600克，洗净，剪碎，用6 倍重量的丙酮超声提取，减压回收丙酮至无丙酮味，用等体积水分散，乙醚萃取6次，每次 1000毫升，合并萃取液，回收乙醚并浓缩至干，得总浸膏14. 6g。将总浸膏经正相硅胶色谱 (200 300目)分离，以体积比为1 1 0 1的石油醚/丙酮梯度洗脱，根据薄层板监 测，收集并合得部分1 (0. 21g)和部分2 (0. 43g)。部分1经过Sephandex LH-20凝胶柱色 谱，流动相体积比为1 1的三氯甲烷/甲醇洗脱，根据薄层板监测，分别收集、合并，得部 分a和b。将a部分进行反相高效液相色谱分离，以甲醇水的体积比为90 10的混合 溶剂进行洗脱，根据示差检测器监测，收集含Sinularoside A流份，减压回收甲醇并浓缩至干，得Sinularoside A 6. 5毫克。将部分2进行反相高效液相色谱分离，以甲醇水的体 积比为90 10的混合溶剂进行洗脱，根据示差检测器监测，收集含Sinularoside B流份， 减压回收甲醇并浓缩至干，得Sinularoside B 4. 8毫克。体外抗菌试验一、试验用真菌、细菌和藻类1.试验用真菌花药黑粉菌(Microbotryum violaceum)、灰霉菌(Botrytis cinerea)禾口壳针孢叶枯病菌(Septoria tritici)；2.试验用细菌大肠杆菌(Escherichia coli)、巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)；3.试验用藻类小球藻(Chlorella fusca)。二、实验用药1.阳性对照药青霉素(Penicillin)、链霉素(Str印tomycin)；2.阴性对照品丙酮(Acetone)；3. Sinularoside A 和 Sinularoside B,由实施例 1 制备三.实验方法1.配制药物溶液将青霉素、链霉素、Sinularoside A和Sinularoside B分别用 丙酮配制成浓度为lmg/ml的溶液，单次测试用量50 μ 1。2.将上述3种真菌、2种细菌和1种藻类按无菌操作的要求分别用7ml灭菌水配制 成菌液，各用喷雾器取4ml菌液，分别均勻喷洒于各自培养皿的培养基表面，再在每个培养 皿内分别放置直径约Icm灭菌滤纸两块，覆盖于培养基表面，然后分别取上述配制的药液 50 μ 1滴于滤纸上，盖上培养基盖子进行培养。各培养皿盖子上均注明相应培养基种类、菌 种、化合物名称、接种时间。花药黑粉菌室温4天，灰霉菌室温5天，壳针孢叶枯病菌20°C 4 天，大肠杆菌37度24小时，巨大芽孢杆菌37°C 24小时，小球藻20°C 5天。按时观察结果， 测量抑菌圈的大小(直径)，平行试验3次，结果见表2。表2.琼脂扩散实验活性筛选(mm) 由表2可见，本发明inularoside A和Sinularoside B对花药黑粉菌、壳针孢叶 枯病菌、巨大芽孢杆菌和小球藻均具有显著的抑制作用，因此可用于制备抗菌药物。
权利要求
一种开环甾体皂苷类化合物Sinularoside A和Sinularoside B，其特征在于它们的化学结构通式如下其R基团为其中，Sinularoside A的Sinularoside B的FSA00000168652100011.tif,FSA00000168652100012.tif,FSA00000168652100013.tif,FSA00000168652100014.tif
2.权利要求1所述的开环留体皂苷类化合物SinularosideA或Sinularoside B在制 备抗菌药物中的应用。
全文摘要
本发明涉及医药技术领域，是从短指软珊瑚中分离得到的具有抗菌作用的两个开环甾体皂苷类化合物Sinularoside A和Sinularoside B，它们的化学结构通式如下其R基团为其中，Sinularoside A的Sinularoside B的对Sinularoside A和Sinularoside B进行的体外抗菌试验表明，它们对于试验用真菌、细菌和藻类具有明显的抑制效果，因此，可用于制备抗菌药物。本发明为研制新的抗菌药物提供了新的先导化合物，为开发利用中国的海洋药用生物资源具有重要意义。
文档编号A61P31/04GK101863936SQ201010207938
公开日2010年10月20日 申请日期2010年6月23日 优先权日2010年6月23日
发明者刘宝姝, 孙鹏, 孟丽媛, 张文, 易杨华, 李玲, 汤华 申请人:中国人民解放军第二军医大学