专利名称：一种具有抗菌活性的呋喃酮类化合物Cytosporanone A的制作方法
技术领域：
本发明涉及医药技术领域，是一种从植物内生真菌Cytospora sp.发酵物中分离 到一个新的具有抗菌活性的呋喃酮类化合物Cytosporanone A。
背景技术：
内生真菌(endophytic fungus)是存在于健康植物的茎叶中，形成不明显侵染的 一类真菌。内生真菌作为主要的微生物物种，种类及数量庞大，分布的宿主植物范围广，其 所处的微生态系统的多样性，加上宿主植物本身所处生态环境的多样性，因而其次生代谢 产物也具有丰富的多样性，能够为天然药物的研究提供丰富的潜在资源。内生真菌Cytospora sp.属于半知菌亚门(Deuteromycotina)、腔孢纲 (Coelomycetes)、球壳抱目(Sphaeropsidales)、壳囊抱属(Cytospora)真菌。Cytospora sp.菌株分离自冬青目(Aquifoliales)、冬青科(Aquifoliaceae)、冬青属(Ilex)植物加那 利冬青(Ilex canariensis)，加那利冬青是一种常绿灌木，采自西班牙戈梅拉岛(Gomera)。 已报道的从壳囊孢属真菌中分离的化合物约有35个。化合物类型有大环内酯类、聚酮类、 二蒽醌类、异香豆素类、萘酮类等。部分化合物都具有较强的生物活性，如抗真菌、抗细菌、 抗氧化、抗病毒等活性。但至今未见从内生真菌Cytospora sp.中分离到具有抗菌活性的 呋喃酮类化合物Cytosporanone A的报道。
发明内容
本发明提供从植物内生真菌Cytospora sp.发酵物中提取分离得到一个具有抗菌 活性的新化合物，分子式为C11H12O3,命名为Cytosporanone A，系统命名为(R)-5-((S)-hyd roxy (phenyl) -methyl) dihydrofuran-2 (3H) -one,化学结构式如下 通过红外、紫外、质谱和二维核磁共振等多种现代光谱技术的综合解析，确定了化 合物Cytosporanone A的化学结构，并通过旋光确定了其绝对构型。化合物Cytosporanone A为白色粉末状固体，熔点:124°C ；分子式为C11H12O3 ；[α]203 +50. 2(c 0. 18，CHCl3)；电子轰 击质谱 EI-MS :m/z 192 [Μ]+ (12), 107 (100), 85 (29), 77 (39)；红外光谱 IR(film) Vmax :3364， 3029,2924,2853,1770,1664,1606,1455,1182,1025,704cm-1 ；UV(MeOH) Amax nm(log ε ) 257(3. 53) ；1H和13C核磁共振数据见表1。表1.化合物 Cytosporanone A 的 1H 和 13C 匪R 数据(CDCl3,400MHz/100MHz)
本发明化合物Cytosporanone A的制备方法如下由内生真菌Cytospora sp.的发酵物制备Cytosporanone A，此发酵物由德国不伦 瑞克大学提供。将发酵物用IOml氯仿完全溶解，用正相硅胶色谱(200 300目)分离，以二氯甲 烷丙酮体积比为100 1,80 20,50 50,30 70，1 100的洗脱液进行梯度洗脱， 根据薄层板监测，各流份按照极性的差别从小到大共收集18个部分洗脱液Fr 1 Fr 18 ； 将Fr. 6部分再经正相硅胶色谱(400 500目)分离纯化，以氯仿甲醇20 1的洗脱液 进行洗脱，根据薄层板监测，得到3个部分洗脱液Fr 6.1 Fr 6.3。将Fr 6. 3部分通过 半制备型HPLC进行纯化，以甲醇水为80 1的混合溶剂作为流动相，检测器为示差检测 器，流速1. 5ml/min，收集保留时间为11. 4min的流份，得化合物Cytosporanone A。经体外抗菌试验。表明化合物Cytosporanone A对灰霉菌、壳针孢叶枯病菌和巨 大芽孢杆菌有明显的抑菌效果。因此可以用于制备抗菌药物。本发明为研制抗菌药物提供了新的先导化合物，为开发利用中国的植物内生菌资
源具有重要意义。
具体实施例方式实施例1.制备化合物Cytosporanone A按常规取内生真菌Cytospora sp.发酵物18. 73g。发酵物由德国不伦瑞克大学提 供。将发酵物溶于IOml氯仿中，用正相硅胶色谱(200 300目)分离，以二氯甲烷丙酮 体积比为100 1,80 20,50 50,30 70，1 100的洗脱液进行梯度洗脱，根据薄层 板监测，各流份按照极性的差别从小到大共收集18个部分Fr 1 Fr 18。Fr 6部分再经 正相硅胶色谱(400 500目)分离纯化，以氯仿甲醇20 1的洗脱液进行洗脱，根据薄 层板监测，得到3个部分Fr6. 1 Fr6. 3。将Fr6. 3部分通过半制备型HPLC进行纯化，以甲 醇水的体积比为80 1的混合溶剂作为流动相，检测器为示差检测器，流速1. 5ml/min, 收集保留时间为11. 4min的流份，减压蒸干，得化合物Cytosporanone A共18. 6mg。体外抗菌试验
一、试验用真菌、细菌和藻类1.试验用真菌花药黑粉菌(Microbotryum violaceum)、灰霉菌(Botrytis cinerea)和壳针孢叶枯病菌(Septoria tritici)；2.试验用细菌大肠杆菌(Escherichia coli)、巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)；3.试验用藻类小球藻(Chlorella fusca)。二、实验用药1.阳性对照药青霉素(Penicillin)、链霉素(Sti^ptomycin)；2.阴性对照品丙酮(Acetone)；3. Cytosporanone A 由实施例 1 制备三.实验方法1.配制药物溶液将青霉素、链霉素和Cytosporanone A分别用丙酮配制成浓度 为lmg/ml的溶液，单次测试用量50 μ 1。2.将上述3种真菌、2种细菌和1种藻类按无菌操作的要求分别用7ml灭菌水配制 成菌液，各用喷雾器取4ml菌液，分别均勻喷洒于各自培养皿的培养基表面，再在每个培养 皿内分别放置直径约Icm灭菌滤纸两块，覆盖于培养基表面，然后分别取上述配制的药液 50 μ 1滴于滤纸上，盖上培养基盖子进行培养。各培养皿盖子上均注明相应培养基种类、菌 种、化合物名称、接种时间。花药黑粉菌室温4天，灰霉菌室温5天，壳针孢叶枯病菌20°C 4 天，大肠杆菌37°C 24小时，巨大芽孢杆菌37°C 24小时，小球藻20°C 5天。按时观察结果， 测量抑菌圈的大小(直径)，平行试验3次，结果见表2。表2.琼脂扩散实验活性筛选(mm) 由表2可见，化合物Cytosporanone A对灰霉菌、壳针孢叶枯病菌和巨大芽孢杆菌 均有显著的抑制作用，对巨大芽孢杆菌的抑制作用接近阳性对照药。因此，本发明化合物 Cytosporanone A可用于制备抗菌药物。
权利要求
一种呋喃酮类化合物Cytosporanone A，其特征在于化学结构式如下FSA00000168848100011.tif
2.权利要求1所述的呋喃酮类化合物Cytosporanone A在制备抗菌药物中的应用,
全文摘要
本发明涉及医药技术领域，是从植物内生真菌Cytospora sp.发酵物中分离得到1个具有抗菌活性的呋喃酮类化合物Cytosporanone A，系统命名为(R)-5-((S)-hydroxy(phenyl)-methyl)dihydrofuran-2(3H)-one，化学结构式如下经体外抗菌试验，表明化合物Cytosporanone A对灰霉菌、壳针孢叶枯病菌和巨大芽孢杆菌有明显的抑菌效果，因此可用于制备抗菌药物。本发明为研制新的抗菌药物提供了先导化合物，对开发利用中国的内生真菌药用资源具有重要价值。
文档编号A61K31/341GK101880266SQ20101020794
公开日2010年11月10日 申请日期2010年6月23日 优先权日2010年6月23日
发明者刘宝姝, 卢山, 孙鹏, 张文, 易杨华, 李玲, 汤华 申请人:中国人民解放军第二军医大学