专利名称：含有益生菌的红曲制造方法
技术领域：
本发明属于药品或者是健康食品的制造领域，特别是涉及一种含有Monacolin K 等活性物质亦含有益生菌的红曲制造方法。
背景技术：
红曲菌(Monascus spp.)是我国重要的微生物资源，在我国已有上千年的使用历 史，被广泛用于食品发酵剂、食品着色剂和中药配伍的生产。红曲菌在发酵过程中能产生多 种具有生理活性的代谢产物如红曲色素、Monacolin类物质、Y -氨基丁酸以及多种酶类。 自1979年，日本学者在红曲的发酵液中发现具有降血脂效果的Monacolin K以来。红曲这 一中华民族先民智慧结晶的产物，便开始成为国际生物领域学术研究的热点。这从另一个 方面又促进了红曲的产业化发展与普及。而今，我们国家生产的功能性红曲已经远销欧洲， 美洲，非洲等等多个国家和地区，其卓越的效果和极低的副作用，正受到越来越多国家消费 者的喜爱。对功能性红曲的研究是从降血脂开始的，关于功能性红曲降血脂效果，已为中国、 美国、德国、挪威等等许多国家的动物试验和临床试验所证实。但近年来的研究结果表明， 功能性红曲的效果不仅局限于降低血脂，在防治心脑血管疾病方面，功能性红曲在抗癌、抗 氧化、抗疲劳、降血压、抗炎症、防治骨质疏松等方面也有相当不错的表现。益生菌作为人体肠道内的有益菌，随着研究的不断深入日益为人民所熟知， 它在癌症、冠心病、孤僻症、老年痴呆、乳糖不耐受症，糖尿病、肠道易激综合症、唐氏综合症 等方面均有良好的效果。(《益生菌是最好的药》，美，马克·Α 布鲁奈克著，王丽译，2008年 1月出版)。如今益生菌已经发展成世界菌类的第一大产业。带有益生菌的各种产品更是层 出不穷益生菌酸奶、益生菌豆奶，益生菌奶片等等。益生菌通常都是以液态发酵，浓缩，加入抗冻剂，再进行冷冻干燥后获得的， 所获得的都是单纯的益生菌，如公开号为CN101559082A，CN101028289A, CN101028290A和 CN101045903A等的中国发明。虽然也有固态发酵获得益生菌的报道，但均是以单一获得益 生菌为目的的单一发酵，如王天云等对嗜酸乳杆菌固态发酵进行了研究(王天云等，生命科 学研究，2002年6月第6卷第2期)，周剑忠等对嗜热链球菌固态培养的研究(周剑忠等，中 国酿造2004年第4期)，季伟等利用乳酸链球菌固态发酵豆粕的研究(季伟等，利用乳酸链 球菌固态发酵豆粕的研究，粮食与饮料工业，2006年第五期)，郑裴等对植物乳杆菌固态发 酵豆粕的研究(郑裴等，植物乳杆菌发酵豆粕及其抗营养因子的研究，安徽农学通报，2009， 15(10))。此外，还有公开号为CN101671637A的中国发明公开“一种肠道益生菌固态营养 载体培养方法”等。公开号为CN1974782A的中国发明提供了“一种固态发酵生产富含益生 菌多肽制品的方法”，其虽然以同时获得多肽和益生菌为目的，但是多肽是作为益生菌的产 物而获得的。就目前来说，在获得红曲有效成分的同时，获得一定数量益生菌的方法未见报 道。
发明内容
红曲以其对中老年人“三高”，以及骨质疏松等老年性慢性疾病的良好的功效，已 经为人们所认同。而体内益生菌的减少作为引起中老年相关疾病的原因之一，也已经为众 多试验所证实。如何将二者有机的结合起来，在获得红曲疗效的同时，低成本的补充体内的 益生菌，达到更好的健康效果是本发明要解决的问题。本发明提供一种含有益生菌的红曲制造方法，通过二次发酵技术，在先接种红曲 菌进行发酵的情况下，进行灭活后，再接入益生菌进行二次发酵，最后进行干燥，获得含有 益生菌的红曲，利用本发明的方法在以红曲中活性物质Monacolin K为评价指标的情况，接 种益生菌后，对Monacolin K含量没有影响，且获得的红曲中，益生菌的数量均在IXlO8个
/克(干重)以上。本发明采用的技术方案是
一种含有益生菌的红曲制造方法，包括
固态培养基经灭菌处理后，接种红曲菌进行发酵，发酵结束后作灭活处理，然后接种 益生菌进行二次发酵，二次发酵结束后再经干燥处理得到含有益生菌的红曲，其中，所述接 种红曲菌发酵为接种量2-25 % (v/w，即体积重量比)，30-35°C下培养3-5天，然后转入 20-24°C下培养5-30天；接种益生菌进行二次发酵为接种量2-10 %(v/w，即体积重量比)， 28-37 °C下培养2-5天。作为优选方案，根据本发明所述的含有益生菌的红曲制造方法，其中，所述的红 曲菌选自紫色红曲菌(Monascus purpureus)、红曲红曲菌(Monascus anka)、丛毛红曲菌 (Monascus pilosus)或红色红曲菌(Monasucs ruber)。作为优选方案，根据本发明所述的含有益生菌的红曲制造方法，其中，所述 的益生菌选自植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)、酿酒酵母(Sccharomyces cerevisiae)、嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)、乳酸链球菌(Streptococcus lactis)、产朊假丝酵母(Cadida atilis)、乳 酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)或干酪乳杆菌(Lactobacillus Casei)中的一种或 它们之间的任意组合物。作为优选方案，根据本发明所述的含有益生菌的红曲制造方法，其中，所述的固态 培养基主要是以大米、麸皮、大豆、米糠中的一种或者是它们之间的任意组合物作为固态基 质，加入营养液调整含水量为30-50%，营养液中的大豆蛋白胨含量为2-5% (g/mL)、蔗糖含 量为2-5% (g/mL)。大米、大豆一般需要粉碎处理后过20目筛再使用。作为优选方案，根据本发明所述的含有益生菌的红曲制造方法，其中，所述的红曲 菌菌种是经过液态菌种扩培后获得红曲液态菌种。这样既可以获得足够的红曲菌种，有利 于缩短发酵时间，又可以给固态培养基补充水分。所述的液态培养基中包括红曲菌生长的 各种碳源、氮源、微生素以及微量元素。本领域技术人员根据现有技术不需要付出创造性劳 动，选用通用的液态培养基都可实现本发明的目的。作为优选方案，根据本发明所述的含有益生菌的红曲制造方法，其中，所述的益生 菌菌种是经过液态菌种扩培后获得益生菌液态菌种。这样既可以获得足够的益生菌菌种， 有利于缩短发酵时间，又可以给固态培养基补充水分。所述的液态培养基中包括益生菌生 长的各种碳源、氮源、微生素以及微量元素。本领域技术人员根据现有技术不需要付出创造性劳动，选用通用的液态培养基都可实现本发明的目的。作为优选方案，根据本发明所述的含有益生菌的红曲制造方法，其中，所述的二次 发酵结束后干燥处理的温度在45°C以下，优选冷冻真空干燥，这样可以保证益生菌的存活。 所述的冷冻真空干燥采用本领域通用的冷冻干燥机即可，温度控制在-50 -10°C之间，真 空度控制在1.3 13帕之间。作为优选方案，根据本发明所述的含有益生菌的红曲制造方法，其中，所述的含有 益生菌的红曲中益生菌数量大于IXlO8个/g (干重)，同时红曲产品中亦含有Monacolin K等活性物质，因此本发明所得的含有益生菌的红曲干粉，可以用作具有调节肠道和降低血 脂的药物或者是健康食品原料。本发明具有以下优点
本发明以红曲中活性物质Monacolin K作为评价指标的情况，接种益生菌后，对 Monacolin K含量没有影响，且获得的红曲中，益生菌的数量均在1 X IO8个/克(干重)以 上。本发明的另一优势在于不添加任何设施设备的情况下，仅利用一条红曲生产线， 就能完成红曲和益生菌两条生产线的作用，极大的节约了生产成本。
具体实施例方式下面结合实施例，更具体地说明本发明的内容。应当理解，本发明的实施并不局 限于下面的实施例，对本发明所做的任何形式上的变通和/或改变都将落入本发明保护范围。在本发明中，若非特指，所有的份、百分比均为重量单位，所有的设备和原料等均 可从市场购得或是本行业常用的。下述实施例中的方法，如无特别说明，均为本领域的常规 方法。设备说明
LZG冷冻真空干燥机，常州市科龙干燥机械设备有限公司。实施例1
植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)的液态培养
液态培养基的组成(均为重量百分比)葡萄糖4%、乳糖1%、大豆蛋白胨2%、酵母膏1%， 乳清粉1%，碳酸钙1%、MgSO4 0. 2%、KH2PO4 0. 2%、ZnSO4 0. 1%，余量为蒸馏水，pH值自然。 500mL三角瓶装量300mL，然后将液态培养基于121°C下灭菌处理20分钟，待冷却到40°C下 后，用接种环接种植物乳杆菌3环，然后置于37°C下静止培养48小时后，作为二次发酵用的 益生菌液态种。紫色红曲菌(Monasucs purpureus)的液态培养
液态培养基的组成(均为重量体积比)葡萄糖2%、蔗糖2%、大米粉1%、黄豆粉1%、 MgSO4 0. 1%,ZnSO4 0. 1%,KH2PO4 0. 2%，余量为蒸馏水，pH 值自然。500mL 三角瓶装量 250mL， 然后将液态培养基于121°C下灭菌处理20分钟，待冷却到40°C下后，接种从斜面上洗脱下 来的紫色红曲菌孢子大于IO8个/mL的红曲孢子悬液10mL，然后于温度为32°C和180r/min 下培养72h后作为红曲液态种。取经粉碎过20目筛的大米lkg，黄豆粉100克，米糠100克，混合均勻后，加入营
5养液(含蔗糖40g/L，大豆蛋白胨40g/L，酵母膏20g/L)273 mL，使含水量为30%，得到固态 培养基。将固态培养基质装到塑料瓶中，121°C灭菌45分钟后，冷却到30°C以下，接种入上 述紫色红曲菌(Monasucs purpureus)液态种，接种量为20% (mL/g)。接种后转入32°C下 培养3天，扣瓶转入23°C下培养14天后，放入灭菌锅内121°C灭菌10分钟，待冷却到40°C 后接种入植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)液态种，接种量为5% (mL/g)，37°C发酵 72个小时。最后将发酵产物置于冷冻真空干燥机干燥后，低温粉碎(40°C以下)得到粉状红 曲产品，测定粉状红曲产品中的植物乳杆菌数量为3 X IO8个/g (干重)，测定Monacolin K 含量为6. 01mg/g。而未接种植物乳杆菌的红曲Monacolin K含量为6. 12mg/g。实施例2
酉良酒酵母(Sccharomyces cerevisiae)液态培养
液态培养基组成(重量体积百分比)葡萄糖2%，蔗糖2%，大豆蛋白胨2%，MgSO4 0. 2%， KH2PO4 0. 2%, ZnSO4 0. 1%，余量为蒸馏水，pH值自然。500mL三角瓶装量250mL，然后将液态 培养基于121°C下灭菌20分钟，待冷却到40°C后，用接种环接种酿酒酵母3环，然后于28°C 和160r/min下培养48个小时后，作为二次发酵用的益生菌液态种。红曲红曲菌(Monasucs anka)的液态培养
液态培养基组成(重量体积百分比)葡萄糖2%，蔗糖2%，大米粉1%，黄豆粉1%，MgSO4 0. 1%，ZnSO4 0. 1%，KH2PO4 0. 2%，余量为蒸馏水，pH值自然。500mL装量250mL，然后将液态 培养基于121°C下灭菌20分钟，待冷却到40°C下后，接种从斜面上洗脱下来的红曲红曲菌 孢子大于IO8个/mL的红曲孢子悬液15mL，然后于32°C和180r/min下培养72h后作为红 曲液态种。取经粉碎过20目筛的大米lkg，黄豆粉50克，米糠100克，麸皮200混合均勻后， 加入营养液(含蔗糖40g/L，大豆蛋白胨40g/L，酵母膏20g/L)，使含水量为50%，得到固 态培养基。将固态培养基装到塑料瓶中，121°C灭菌45分钟后，冷却到30°C以下，接种上述 红曲液态菌种，接种量为25%(mL/g)，接种后转入30°C下培养5天，再扣瓶转入24°C下培养 5天后，放入灭菌锅内121°C灭菌10分钟，待冷却到40°C后接种入酿酒酵母(Sccharomyces cerevisiae)，接种量为5% (mL/g)，28°C下发酵48个小时，最后将发酵产物在40°C进行 干燥，经低温粉碎(40°C以下)得到粉状红曲产品。测定粉状红曲产品中酵母菌体数量为 5X IO9个/克(干重)，Monacolin K为2. 53mg/g，而未接种酿酒的酵母的红曲Monacolin K 经测定含量为2. 56mg/g。实施例3
乳酸链球菌(Sti^ptococcus lactis)液态培养
液态培养基组成(重量体积百分比):葡萄糖2%，麦芽糖2%，大豆蛋白胨2%，酵母膏1%， 碳酸钙1%，MgSO4 0. 2%，KH2PO4 0. 2%，ZnSO4 0. 1%，余量为蒸馏水，pH值自然。500mL三角瓶 装量300mL，然后将液态培养基于121°C下灭菌20分钟，待冷却到40°C后，用接种环接种乳 酸链球菌3环，置于37°C下静止培养48小时后，作为二次发酵用的益生菌液态种。紫色红曲菌(Monasucs purpureus)的液态培养
液态培养基组成(重量体积百分比)葡萄糖2%，大米粉1%，黄豆粉1%，MgSO4O. 1%, ZnSO4 0. 1%, KH2PO4 0. 2%，余量为蒸馏水，pH值自然。500mL装量250mL，然后将液态培养基 于121°C下灭菌20分钟，待冷却到40°C下后，接种从斜面上洗脱下来的紫色红曲菌孢子大于IO8个/mL的红曲孢子悬液10mL，于32°C和180r/min下培养72h后作为红曲液态种。取经粉碎过20目筛的大米1kg，黄豆粉100克，米糠100克，麸皮100混合均勻 后，加入营养液(含蔗糖40g/L，大豆蛋白胨40g/L，酵母膏20g/L)，使含水量为40%，得到 固态培养基。将固态培养基装到塑料瓶中，121°C灭菌45分钟后，冷却到30°C以下，接种紫 色红曲菌(Monasucs purpureus)液态种，接种量为5%(mL/g)，接种后转入35°C下培养3天， 再扣瓶转入20°C下培养30天后，放入灭菌锅内121°C灭菌10分钟，待冷却到40°C后接种入 上述已培养好的液态乳酸链球菌(Str印tococcus lactis)，接种量为2%(mL/g)，于37°C下 发酵120个小时。最后将发酵产物进行真空冷冻干燥(冷冻温度为-30°C，真空度5Pa)，经 低温粉碎(40°C以下)得到粉状红曲产品。测定粉状红曲产品中链球菌菌体数量为3X IO8 个/g (干重)，Monacolin K为5. 78mg/g。而未接种乳酸链球菌的红曲的Monacolin K含量 为 5. 56mg/g.
实施例4
干酪乳杆菌(Lactobacillus Casei)液态培养
液态培养基组成(重量体积百分比)葡萄糖2%，麦芽糖1%，大豆蛋白胨1%，酵母膏1%， 碳酸钙1%，MgSO4 0. 2%，KH2PO4 0. 2%，ZnSO4 0. 1%，余量为蒸馏水，pH值自然。500mL三角瓶 装量300mL，然后将液态培养基于121°C下灭菌20分钟，待冷却到40°C后，用接种环接种干 酪乳杆菌3环，置于35°C下静止培养48小时后，作为二次发酵用的益生菌液态种。紫色红曲菌(Monasucs purpureus)的液态培养
液态培养基组成(重量体积百分比):葡萄糖2%，蔗糖2%，大米粉1%，黄豆粉1%，大豆蛋 白胨 2%, MgSO4, ZnSO4 0. 1%, KH2PO4 0. 2%，余量为蒸馏水，pH 值自然。500mL 装量 250mL，然 后将液态培养基于121°C下灭菌20分钟，冷却到40°C下后，接种从斜面上洗脱下来的紫色 红曲菌孢子大于IO8个/mL的红曲孢子悬液20mL，于32°C和180r/min下培养72h后作为 红曲液态种。取经粉碎过20目筛的大米1kg，黄豆粉50克，米糠100克，麸皮100混合均勻后， 加入营养液(含蔗糖40g/L，大豆蛋白胨40g/L，酵母膏20g/L)，使含水量为45%，得到固 态培养基。于121°C灭菌45分钟后，冷却到30°C以下，接种上述红曲液态菌种，接种量为 20% (mL/g)，接种后转入32°C下培养3天，再扣瓶转入22°C下培养20天后，放入灭菌锅内 121°C灭菌10分钟，待冷却到40°C后接种入上述已培养好的干酪乳杆菌(Lactobacillus Casei)液态种，接种量为6% (mL/g)，于37°C下发酵60个小时。最后将发酵物进行冷冻干 燥，低温粉碎(40°C以下)，得到粉状红曲产品。测定粉状红曲产品中乳杆菌数量4X IO9个/ g (干重)，M0naC0lin K为10. 24mg/g。同样的条件下，未接种干酪乳杆菌的红曲，经干燥测 定 Monacolin K 含量为 10. 53mg/g.
实施例5
嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)液态培养
液态培养基组成(重量体积百分比)葡萄糖2%，蔗糖1%，麦芽糖1%，大豆蛋白胨2%，酵 母膏 1%，碳酸钙 1%,MgSO4 0. 2%,KH2PO4 0. 2%, ZnSO4 0. 1%，余量为蒸馏水，pH 值自然。500mL 三角瓶装量300mL，然后将液态培养基于121°C下灭菌20分钟，待冷却到40°C后，用接种环 接种嗜酸乳杆菌3环，置于35°C下静止培养48小时后，作为二次发酵用的益生菌液态种。紫色红曲菌(Monasucs purpureus)的液态培养基葡萄糖2%，蔗糖2%，大米粉1%，牛肉浸膏1%，黄豆粉1%，MgSO4O. 1%，ZnSO4 0. 1%，KH2PO4 0. 2%，余量为蒸馏水，pH值自 然。500mL装量250mL，然后将液态培养基于121°C下灭菌20分钟，待冷却到40°C下后，接 种从斜面上洗脱下来的紫色红曲菌孢子大于IO8个/mL的红曲孢子悬液20mL，于32°C和 180r/min下培养72h后作为红曲液态种。取经粉碎过20目筛的大米1kg，黄豆粉50克，米糠200克，混合均勻后，加入营养 液(含蔗糖40g/L，大豆蛋白胨40g/L，酵母膏20g/L)，使含水量为40% (wt)，得到固态培 养基。将固态培养基装到塑料瓶中，121°C灭菌45分钟后，就热打散后，冷却到30°C以下，接 种紫色红曲菌(Monasucs purpureus)液态种，接种量为20% (mL/g)，接种后转入32°C下培 养3天，再扣瓶转入23°C下培养12天后，放入灭菌锅内121°C灭菌10分钟，待冷却到40°C 后接种入已发酵好的上述液态嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)菌种，接种量为 5%(mL/g)，于37°C下发酵60个小时。最后将发酵产物真空冷冻干燥，低温粉碎(40°C以下) 得到粉状红曲产品。测定粉状红曲产品中菌体数量为5X IOltl个/g(干重)，Monacolin K 为4. 98mg/g。同样条件下，未接种嗜酸乳杆菌的红曲中Monacolin K含量为4. 87mg/g。实施例6
产朊假丝酵母(Cadida atilis)液态培养
液态培养基组成(重量体积百分比)葡萄糖2%，蔗糖2%，大豆蛋白胨2%，酵母膏1%， MgSO4 0. 2% KH2PO4 0.2%，ZnSO4 0. 1%，余量为蒸馏水，pH 值自然。500mL 三角瓶装量 250mL， 然后将液态培养基于121°C下灭菌20分钟，待冷却到40°C后，用接种环接种产朊假丝酵母 3环，置于28°C和160r/min下培养48个小时后，作为二次发酵用的益生菌液态种。红曲红曲菌(Monasucs anka)的液态培养
液态培养基组成(重量体积百分比):葡萄糖1%，蔗糖4%，大米粉1%，黄豆粉1%，酵母膏 2%, MgSO4O. 1%，ZnSO4 0. 1%，KH2PO4 0. 2%，余量为蒸馏水，pH 值自然。500mL 装量 250mL，然 后将液态培养基于121°C下灭菌20分钟，冷却到40°C下后，接种从斜面上洗脱下来的红曲 红曲菌孢子大于IO8个/mL的红曲孢子悬液20mL，于32°C和180r/min下培养72h后作为 红曲液态种。取经粉碎过20目筛的大米lkg，黄豆粉100克，米糠100克，混合均勻后，加入营 养液(含蔗糖40g/L，大豆蛋白胨40g/L，酵母膏20g/L) 273 mL，使含水量为30%，得到固 态培养基。将固态培养基装到塑料瓶中，121°C灭菌45分钟后，就热打散后，冷却到30°C以 下，接种上述红曲液态菌种，接种量为20% (mL/g)，接种后转入32°C下培养3天，再扣瓶转 入23°C下培养12天后，放入灭菌锅内121°C灭菌10分钟，待冷却到40°C后接种入产朊假丝 酵母(Cadida atilis)液态种，接种量为5% (mL/g)，于28°C下发酵48个小时。最后将发 酵产物于40°C下干燥处理，粉碎得到粉状红曲产品。测定粉状红曲产品中菌体数量7X IO9 个/g (干重)，Monacolin K为5. 34mg/g。而未接种产朊假丝酵母的红曲中Monacolin K含 量为 5. 42mg/g。实施例7
乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)液态培养
液态培养基组成(重量百分比)葡萄糖4%，蔗糖2%，大豆蛋白胨2%，MgSO4 0. 2%，KH2PO4 0. 2%，ZnSO4 0. 1%，余量为蒸馏水，pH值自然。500mL三角瓶装量250mL，然后将液态培养基 于121°C下灭菌20分钟，待冷却到40°C后，用接种环接种乳酸克鲁维酵母3环，置于28°C和
8160r/min下培养48个小时后，作为二次发酵用的益生菌液态种。红色红曲菌(Monasucs ruber)的液态培养
液态培养基组成(重量体积百分比)葡萄糖2%，蔗糖2%，大米粉1%，黄豆粉1%， MgSO4O. 1%，ZnSO4 0. 1%，KH2PO4 0. 2%，余量为蒸馏水，pH 值自然。500mL 装量 250mL，然后将 液态培养基于121°C下灭菌20分钟，冷却到40°C下后，接种从斜面上洗脱下来的红色红曲 菌孢子大于IO8个/mL的红曲孢子悬液15mL，于32°C和180r/min下培养72h后作为红曲 液态种。取经粉碎过20目筛的大米1kg，黄豆粉100克，米糠100克，麸皮50克混合均勻 后，加入营养液(含蔗糖40g/L，大豆蛋白胨40g/L，酵母膏20g/L)，使含水量为35%，得到 固态培养基。将固态培养基装到塑料瓶中，121°C灭菌45分钟后，就热打散后，冷却到30°C 以下，接种上述红曲液态菌种，接种量为20% (mL/g)，接种后转入32°C下培养3天，再扣瓶 转入23°C下培养12天后，放入灭菌锅内121°C灭菌10分钟，待冷却到40°C后接种入乳酸 克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)液态种，接种量为5% (mL/g)，于28°C下发酵60个小 时。最后将发酵产物于37°C下干燥处理，粉碎得到粉状红曲产品。测定粉状红曲产品中菌 体数量为5X IOki个/g (干重)，Monacolin K为4. 76mg/g。未接种乳酸克鲁维酵母的红曲 Monacolin K 含量为 4. 64mg/g。实施例8
嗜热链球菌(Sti^ptococcus thermophilus)液态培养
液态培养基组成(重量体积百分比)乳糖2%，葡萄糖2%，脱脂乳粉1%，大豆蛋白胨2%， 碳酸钙1%，MgSO4 0. 2%，KH2PO4 0. 2%，ZnSO4 0. 1%，余量为蒸馏水，pH值自然。500mL三角瓶 装量300mL，然后将液态培养基于121°C下灭菌20分钟，待冷却到40°C后，用接种环接种嗜 热链球菌3环，置于37°C下静止培养48小时后，作为二次发酵用的益生菌液态种。丛毛红曲菌(Monascus pilosus)的液态培养
液态培养基组成(重量体积分比)葡萄糖2%，蔗糖2%，大米粉1%，黄豆粉1%，MgSO4 0. 1%，ZnSO4 0. 1%，KH2PO4 0. 2%，余量为蒸馏水，pH值自然。500mL装量250mL，然后将液态 培养基于121°C下灭菌20分钟，冷却到40°C下后，接种从斜面上洗脱下来的丛毛红曲菌孢 子大于IO8个/mL的红曲孢子悬液10mL，于32°C和180r/min下培养72h后作为红曲液态 种。取经粉碎过20目筛的大米lkg，黄豆粉100克，米糠100克，麸皮100克，混合均勻 后，加入营养液(含蔗糖40g/L，大豆蛋白胨40g/L，酵母膏20g/L)，使含水量为35%，得到 固态培养基。将固态培养基装到塑料瓶中，121°C灭菌45分钟后，就热打散后，冷却到30°C 以下，接种上述红曲液态菌种，接种量为15%(mL/g)，接种后转入32°C下培养3天，再扣瓶转 入23°C下培养16天后，放入灭菌锅内121°C灭菌10分钟，待冷却到40°C后接种入嗜热链球 菌(Streptococcus thermophilus)液态菌种，接种量为8%(mL/g)，于37°C下发酵60个小 时。最后将发酵产物于40°C下干燥处理，低温粉碎得到粉状红曲产品。测定粉状红曲产品 中菌体数量为6X IO8个/g(干重)，Monacolin K为8. 32mg/g。未接种嗜热链球菌的红曲 经测定，其Monacolin K含量为8. 21mg/g。工业实用性
本发明以红曲中活性物质Monacolin K作为评价指标的情况，接种益生菌后，对Monacolin K含量没有影响，且获得的红曲中，益生菌的数量均在1 X IO8个/克以上，因此 本发明所得的含有益生菌的红曲干粉，可以用作具有调节肠道和降低血脂的药物或者是健 康食品原料。本发明的在不添加任何设施设备的情况下，仅利用一条红曲生产线，就能完成 红曲和益生菌两条生产线的作用，可极大的节约生产成本。 尽管发明人已经对本发明的技术方案做了较为详细的阐述和列举，应当理解，对 于本领域一个熟练的技术人员来说，对上述实施例作出修改或变通或者采用等同的替代方 案是显然的，都不能脱离本发明精神的实质，本发明中出现的术语用于对本发明技术方案 的阐述和理解，并不能构成对本发明的限制。
权利要求
一种含有益生菌的红曲制造方法，包括固态培养基经灭菌处理后，接种红曲菌进行发酵，发酵结束后作灭活处理，然后接种益生菌进行二次发酵，二次发酵结束后再经干燥处理得到含有益生菌的红曲，其中，所述接种红曲菌发酵为接种量2 25%(v/w)，30 35℃下培养3 5天，然后转入20 24℃下培养5 30天；接种益生菌进行二次发酵为接种量2 10%(v/w)，28 37℃下培养2 5天。
2.根据权利要求1所述的含有益生菌的红曲制造方法，其特征在于，所述的红曲菌选 自紫色红曲菌、红曲红曲菌、丛毛红曲菌或红色红曲菌。
3.根据权利要求1所述的含有益生菌的红曲制造方法，其特征在于，所述的益生菌选 自植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、酿酒酵母、嗜热链球菌、乳酸链球菌、产朊假丝酵母、乳酸克鲁 维酵母或干酪乳杆菌中的一种或它们之间的任意组合物。
4.根据权利要求1所述的含有益生菌的红曲制造方法，其特征在于，所述的固态培养 基主要是以大米、麸皮、大豆、米糠中的一种或者是它们之间的任意组合物作为固态基质， 加入营养液调整含水量为30-50%，营养液中的大豆蛋白胨含量为2-5%(g/mL)、蔗糖含量为 2-5% (g/mL)。
5.根据权利要求1所述的含有益生菌的红曲制造方法，其特征在于，所述的红曲菌菌 种是经过液态菌种扩培后获得红曲液态菌种。
6.根据权利要求1所述的含有益生菌的红曲制造方法，其特征在于，所述的益生菌菌 种是经过液态菌种扩培后获得益生菌液态菌种。
7.根据权利要求1所述的含有益生菌的红曲制造方法，其特征在于，所述的二次发酵 结束后干燥处理的温度在45°C以下。
8.根据权利要求1所述的含有益生菌的红曲制造方法，其特征在于，所述的干燥处理 采用冷冻真空干燥。
9.根据权利要求1所述的含有益生菌的红曲制造方法，其特征在于，所述的含有益生 菌的红曲中益生菌数量以干重计大于1 X IO8个/g。
全文摘要
本发明属于药品或者是健康食品的制造领域，特别是涉及一种含有益生菌的红曲制造方法，包括固态培养基经灭菌处理后，接种红曲菌进行发酵，发酵结束后作灭活处理，然后接种益生菌进行二次发酵，二次发酵结束后再经干燥处理得到含有益生菌的红曲，其中，所述接种红曲菌发酵为接种量2-25%(v/w)，30-35℃下培养3-5天，然后转入20-24℃下培养5-30天；接种益生菌进行二次发酵为接种量2-10%(v/w)，28-37℃下培养2-5天。本发明的红曲产品中益生菌的数量均在1×108个/克(干重)以上，使红曲和益生菌二者有机结合，在获得红曲疗效的同时，低成本的补充体内的益生菌，可达到更好的健康效果。
文档编号A61K36/064GK101912423SQ201010213999
公开日2010年12月15日 申请日期2010年7月1日 优先权日2010年7月1日
发明者冯永刚, 方俊, 邵群慧, 陈小林, 陈平华 申请人:杭州千岛湖星遥实业有限公司