专利名称：取代噻唑巯乙酰胺类衍生物及其制备方法与应用的制作方法
技术领域：
本发明属于医药技术领域，具体涉及一类取代噻唑巯乙酰胺类衍生物，本发明还 涉及这类衍生物的制备方法及其抗人免疫缺陷病毒(HIV)及抗流感病毒的用途。
背景技术：
病毒感染性疾病是严重危害人类生命健康的一大类疾病。人免疫缺陷病毒1型 (HIV-I)是艾滋病(AIDS)的主要病原体。虽然目前高效抗逆转录疗法(HAART)的实施是 抗艾滋病治疗的一项重大突破，但是由于耐药性的出现及长期服药的毒性问题极大地限制 了该疗法的应用，新型抗艾滋病药物的研发刻不容缓(参见《抗艾滋病药物研究》，刘新泳 主编，人民卫生出版社，北京，2006，12)。流行性感冒病毒(简称流感病毒)是严重危害人 类健康的一种急性呼吸道传染病毒。当前，新的流感病毒毒株引发的流感大流行还在全球 蔓延，影响着数百万人的健康，造成了比较严重的经济和社会问题。全球范围内流行的甲型 H1NUH3N2.H5N1等属于流感中的一些亚型。到目前为止，人类对流感病毒一直缺乏安全有 效的控制手段和防治药物，这使得研发新型高效的抗流感病毒药物成为当前药物研发领域 的热点之一。(参见张强等，抗流感病毒药物研究进展，药学学报，2010,45 (3)，289-299)。杂环化合物具有广泛的抗病毒活性，它们一般是作为构成药效团的基本结构母 核，以适合药物特殊作用靶点的空间要求，或者是作为活性取代基或环系的组成部分而产 生相应的生物活性。药物之所以依赖于杂环是因为杂环较脂肪或芳香化合物在体内更不易 代谢分解，且具有更好的生物相容性。
发明内容
本发明针对现有技术的不足，提供一种取代噻唑巯乙酰胺类衍生物及其制备方 法，本发明还提供了取代噻唑巯乙酰胺类衍生物的抗HIV-I活性、抗流感病毒活性筛选结 果及其在抗病毒领域中的应用。本发明的技术方案如下1.取代噻唑巯乙酰胺类衍生物本发明所涉及的是具有通式I的取代噻唑巯乙酰胺类衍生物，以及其N-氧化物、 立体异构体形式、立体异构体混合物或药学上可接受的盐 其中，
4
R为氨基、氯原子、氟原子、溴原子、碘原子、羟基、甲基或乙基；Ar1为取代苯环、取代萘环、各种取代的六元杂环、各种取代的五元杂环、各种取代 的六元并五元杂环、各种取代的六元并六元杂环、各种取代的五元并五元杂环、各种取代的 苯并五元杂环或各种取代的苯并六元杂环；优选的，Ar1为2，4- 二卤代苯环、取代萘环或取代喹啉环；Ar2为取代苯环、取代萘环、各种取代的六元杂环、各种取代的五元杂环、各种取代 的六元并五元杂环、各种取代的六元并六元杂环、各种取代的五元并五元杂环、各种取代的 苯并五元杂环或各种取代的苯并六元杂环；优选的，Ar2为具有通式II的2，4- 二取代苯环或2，4_ 二取代六元杂环； 其中，乂、￥、2分别为碳原子或氮原子，R1为H、F、Cl、Br、I、NO2 或16 ；R2为H、F、C1、 Br、I、Me、OCH3、COMe、COOMe、COOEt、COOH 或 SO2NH2。2.取代噻唑巯乙酰胺类衍生物的合成路线如下 上述反应式中，R为氨基、氯原子、氟原子、溴原子、碘原子、羟基、甲基或乙基；
Ar1为取代苯环、取代萘环、各种取代的六元杂环、各种取代的五元杂环、各种取代 的六元并五元杂环、各种取代的六元并六元杂环、各种取代的五元并五元杂环、各种取代的 苯并五元杂环或各种取代的苯并六元杂环。优选的，Ar1为2，4- 二卤代苯环、取代萘环或取代喹啉环；Ar2为取代苯环、取代萘环、各种取代的六元杂环、各种取代的五元杂环、各种取代 的六元并五元杂环、各种取代的六元并六元杂环、各种取代的五元并五元杂环、各种取代的 苯并五元杂环或各种取代的苯并六元杂环。试剂及条件(i)Br2AcOH 或 C1C0CH2C1/A1C13 ； (ii) HSCH2COOEt, Na2CO3, EtOH ； (iii) Br2AcOH ； (iv) NH2CSNH2, AcONa, EtOH ； (v) NaOH, DMS0/H20 ； (vi) SOCl2,取代芳胺 (Ar2-NH2)，THF, rt ； (Vii)CuR2, t-BuONO，MeCN.3.氨基噻唑巯乙酰胺衍生物A8及氯代噻唑巯乙酰胺衍生物B8的制备方法取代芳基乙酮1，或取代芳环1分别通过卤代反应或傅克反应(Friedel-Crafts) 得到2-氯(溴)-1-取代芳基乙酮2 ;2与2-巯基乙酸乙酯在乙醇溶液中室温反应数小时 得到硫醚3，不经纯化直接进行下步反应，在α-位溴代得到制备氨基噻唑杂环的重要中间 体4 ；然后，该化合物与硫脲环合，得到高收率的2- (2-氨基-4-取代芳基-噻唑-5-巯基) 乙酸乙酯5 ；在NaOH-DMSO-H2O溶液中，化合物5发生水解反应生成氨基噻唑乙酸6，然后 再转化成相应的乙酰氯7 ；在三乙胺的条件下，化合物7与不同的取代芳胺反应得到相应的 2- (2-氨基-4-取代芳基-噻唑-5-巯基)-N-乙酰胺衍生物Α8 ；另外，在此基础上经过重 氮化和卤化反应得到卤代噻唑巯乙酰胺衍生物Β8。上述各种取代芳胺(Ar2-NH2)中的Ar2为取代苯环、取代萘环、各种取代的六元杂 环、各种取代的五元杂环、各种取代的六元并五元杂环、各种取代的六元并六元杂环、各种 取代的五元并五元杂环、各种取代的苯并五元杂环或各种取代的苯并六元杂环。优选的，Ar2为具有通式II的2，4- 二取代苯环或2，4_ 二取代六元杂环； 其中，乂、丫、2分别为碳原子或氮原子，1 1为!^、(1、81~、1、而2或16 ；R2为H、F、C1、 Br、I、Me、OCH3、COMe、COOMe、COOEt、COOH 或 SO2NH204.目标化合物的抗HIV-I (IIIb)及耐药毒株活性和毒性实验对按照上述方法合成的部分取代噻唑巯乙酰胺类化合物(I系列，Ar1 = 2，4_二氯 苯基)进行了细胞水平的抗HIV-I(IIIb)、抗HIV-2(R0D)及多种耐药毒株的活性筛选，其中 抗HIV-I (IIIb)活性结果如表1所示，氯代噻唑化合物(I-B系列)具有显著的抗HIV-I活 性，其中有4个化合物(I-B8a、I-B8e、I_B8f、I_B8g)的EC5tl值达到微摩尔水平，且细胞毒 性较低。而且化合物I_B8e、I-B8f、I_B8g对部分耐药株(E138K、K103N、L100I)具有显著 的抑制作用(表2)。氨基噻唑化合物(I-A系列)无抗HIV活性。表1化合物I-A8及I-B8的结构及抗HIV_1 (IIIb)的抑制活性和细胞毒性(MT_4
6细胞)
注=aEC5tl 保护50%感染HIV-I的MT-4细胞免于细胞病变的化合物浓度；bCC5tl 使 50%未感染HIV-I的细胞发生病变的化合物浓度选择性系数CC5(1/EC5(1的比值。表2部分化合物对HIV耐药毒株的抑制活性和细胞毒性(MT-4细胞) 注=aEC5tl 保护50%感染HIV-I的MT-4细胞免于细胞病变的化合物浓度；bCC5tl 使 50%未感染HIV-I的细胞发生病变的化合物浓度选择性系数CC5(1/EC5(1的比值。取代噻唑巯乙酰胺类衍生物是一系列结构新颖的HIV-I抑制剂，具有进行进一步 研发的价值，可作为抗HIV的先导化合物加以利用。本发明的取代噻唑巯乙酰胺类衍生物可作为HIV-I抑制剂应用。具体地说，作为 HIV-I抑制剂用于制备抗艾滋病药物。一种抗HIV-I药物组合物，包括本发明的取代噻唑巯乙酰胺类衍生物。5.目标化合物的抗流感病毒活性实验(MDCK细胞)通过对部分氨基噻唑巯乙酰胺类化合物及氯代噻唑巯乙酰胺化合物进行细 胞水平的抗流感病毒活性筛选，所筛选的毒株有influenza A/H1N1 (strain A/Puerto Rico/8/34)、A/H3N2 (strain A/HK/7/87)和 influenza B (strain B/HK/5/72)。结果发现 化合物I_A8g和I_A8h呈现出显著的抗流感病毒活性(表3)，尤其对甲型Hmi流感病毒毒 株有较高的选择性及较强的抑制作用。活性比磷酸奥塞米韦、利巴韦林、金刚烷胺及金刚乙 胺等对照药物高1-2个数量级，可作为新的药物先导物进行深入的研究。因此，取代噻唑巯乙酰胺类衍生物是一系列结构新颖的流感病毒抑制剂，具有进 行进一步研发的价值，可作为抗流感病毒的先导化合物加以利用。本发明的取代噻唑巯乙酰胺类衍生物可作为流感病毒抑制剂应用。具体地说，作 为流感病毒抑制剂用于制备抗流感病毒药物。一种抗流感病毒药物组合物，包括本发明的取代噻唑巯乙酰胺类衍生物。表3部分化合物对A型流感病毒Him亚型的抑制活性和细胞毒性(MT-4细胞)
aCC50 使50%未感染流感病毒的细胞发生病变的浓度，由MTS法测得。b最小细胞毒性浓度致使显微镜下可见的正常细胞形态学发生变化所需要化合 物的最小浓度。cEC50 抑制50%的病毒诱导的致细胞突变效应的化合物浓度或保护50%感染 流感病毒的细胞免于细胞病变的化合物浓度，分别由致细胞病变效应法(cytopathi c effect, CPE)和 MTS 法测得。本发明提供了结构全新的取代噻唑巯乙酰胺类衍生物、其制备方法、其抗HIV-I 活性、抗流感病毒活性筛选结果及其在抗病毒领域中的首次应用。经过试验证明，本发明的 取代噻唑巯乙酰胺类衍生物可作为HIV-I抑制剂应用。具体地说，作为HIV-I抑制剂用于 制备抗艾滋病药物。本发明的取代噻唑巯乙酰胺类衍生物还可作为流感病毒抑制剂应用。 具体地说，作为流感病毒抑制剂用于制备抗流感病毒药物。
具体实施例方式通过下述实例(以通式I中Ar1为2，4_ 二溴苯基为例)有助于理解本发明，但是 不能限制本发明的内容，在下列实例中，所有化合物的编号与表1相同。原料说明1，3_ 二溴苯济南贵恒科贸有限公司产售。无水氯化铝济南贵恒科贸有限公司产售。氯乙酰氯济南贵恒科贸有限公司产售。巯基乙酸乙酯南京天尊化学试剂有限公司。实施例1. 2- (2-氨基-4- (2,4- 二溴苯基)噻唑_5_巯基)乙酸1-6的合成将购买的1，3_ 二溴苯(1-1，23. 6g，0. lmol)和无水氯化铝的混合物在室温下剧烈 搅拌，向其中滴加氯乙酰氯(13g，0. lmol)。反应混合物在60-65°C下搅拌反应10h，TLC检测反应完毕后，冷却，混合物用40mL 二氯甲烷稀释。有机相依次用水、饱和NaHCO3溶液和 盐水洗涤。有机层经过Na2SO4干燥，过滤，浓缩得到2-氯-1-(2，4-二溴苯基)乙酮1_2的 粗品26. 7g，为淡黄色油状液体，产率85. 4%。此产物不必纯化直接用于下一步反应。将巯基乙酸乙酯(6.5mL，0. 06mol)和 Na2CO3(6. 5g，0. 06mol)溶于 150mL 乙醇中， 加入2-氯-1-(2，4-二溴苯基)乙酮(1-2，15. 6g，0. 05mol)，反应混合液在室温下搅拌12h。 减压蒸去溶剂，残渣用IOOmL 二氯甲烷稀释，然后依次用0. IM HCl水溶液、饱和NaHCO3溶 液、水以及盐水洗涤。有机层经无水Na2SO4干燥，过滤，浓缩得到1-3粗品，为淡黄色油状液 体。室温下，向1-3(19. 8g，0. 05mol)的冰乙酸(IOOmL)溶液中加入 Br2 (8. Og, 0. 05mol)的冰乙酸(30mL)溶液，约30min滴加完毕。TLC检测该混合物在室温下搅拌约 8h反应完毕后，倾入冰水中，用二氯甲烷(3X50mL)萃取。得到的有机相依次用水和5% NaHCO3溶液洗涤，干燥后得到黄色油状化合物1-4。将硫脲(11. 42g，0. 15mmol)溶于150mL乙醇中，然后加入α -溴代酮 1-4(0. 05mmol)。反应混合物在室温下搅拌，TLC检测约IOh后反应完毕，旋干溶剂，残余物 加入150mL水，乙酸乙酯(3X50mL)进行提取。有机层用饱和NaHCO3溶液、水以及盐水洗 涤，无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩得到2- (2-氨基-4- (2,4- 二溴苯基)噻唑-5-巯基) 乙酸乙酯1-5粗品，甲醇重结晶得到黄色片状晶体10g，产率44. 3%。将1-5 (2. 98g，6. 6mmol)、IN NaOH溶液(20mL)和二甲基亚砜(20mL)的溶液在室温 下搅拌4h，然后加入30mL乙酸乙酯和150mL水。分离水层，用10% HCl中和至pH= 2。有 固体析出，过滤，水洗，在空气中干燥得到2- (2-氨基-4- (2,4- 二溴苯基)噻唑-5-巯基) 乙酸1-6粗品，产品不需进一步纯化。实施例2. 2- (2-氨基-4- (2,4- 二溴苯基)噻唑_5_巯基)-N-芳基乙酰胺(I-A8) 的合成反应的一般操作将1-6(0. 2g，0. 5mmol)加入到20mL乙醚中，在室温快速搅拌下加入五氯化磷 (0. 15g，0. 6mmol)，混合物在室温下搅拌5h，蒸去溶剂后得到黄色油状物1_7，直接用于 I-A8的制备。取代芳胺(0. 5mmol)和三乙胺(2mmol)溶解于的二氯甲烷(IOmL)溶液中，冰浴搅 拌下，滴加用IOmL无水二氯甲烷溶解的酰氯1-7 (0. 5mmol)溶液，混合物在室温下搅拌10h， 有机层用10% HCl洗涤除去过量的胺，然后用饱和NaHCO3溶液、水和盐水洗涤，Na2SO4干 燥，减压蒸干，以乙酸乙酯石油醚=1 2快速柱层析分离得2-(2-氨基-4-(2，4-二溴 苯基)噻唑-5-巯基)-N-芳基乙酰胺I-A8，为白色或黄色固体。以不同的取代芳胺和酰氯1-7用上述方法分别制得通式I的目标产物(Ar1为2， 4-二溴苯基)，部分结果如下
操作同上，所不同的是使用邻氯苯胺。白色针晶，收率42· 6% .mp :192-194°C . 1H-WR(O)Cl3, ppm) δ :9· 47 (s，1Η，NH)，
7.88 (d, 1H, J=L 8Hz, PhH)，7. 80 (d, 1H, J = 7. 8Hz, Ph，H)，7. 52 (dd, 1H, J1 = 8. 4Hz, J2 =1. 8Hz, PhH)，7. 37 (d, 1H, J = 8. 4Hz, PhH)，7. 34-7. 32 (m, 2H, Ph，H)，7. 17 (t, 1H, Ph，H)， 5. 26 (s，2H, NH2)，3. 52 (s, 2H, S-CH2) · MS (ESI) :m/z 532. 2 (M+1)，534. 1 (M+3)，536. 2 (M+5) · C17H12Br2ClN3OS2 (530. 85). 操作同上，所不同的是使用邻氟苯胺。白色针晶，收率39.4 % . mp 173-175 "C .1H-WR(O)Cl3, ppm) δ :8.25(t，lH， Ph，H)，8· 19(brs, 1H, NH), 7. 66 (d, 1Η, J1 = 1. 8Hz, PhH), 7. 28 (dd, 1Η, J1 = 1. 8Hz, J2 =
8.4Hz, PhH), 7. 15-7. 08 (m，4Η，1 X PhH&3 X Ph，H)，5· 27(s，2H，NH2), 3. 45(s，2H，S-CH2). MS (ESI) :m/z 516. 1 (M+1) ,518. 1 (M+3)，520. 1 (M+5). C17H12Br2FN3OS2 (514. 88). 操作同上，所不同的是使用邻溴苯胺。白色方晶，收率55. 7% .mp :176_178°C · 1H-WR(O)Cl3, ppm) δ :8· 59 (s, 1H, NH)， 8. 30 (d, 1H, J = 7. 8Hz，Ph，H)，7. 66 (d, IHjJ1 = 1. 8Hz，PhH)，7. 55 (d, IHjJ2 = 8. 4Hz，PhH)， 7. 34-7. 32 (m, 1H, Ph，H)，7· 26-7. 24 (m, 1Η, Ph，H)，7· 11-7. 10 (m, 1H, PhH), 7. 03-7. 00 (t, 1Η，Ph，H)，5· 27(s，2H，NH2)，3· 48(s，2H，S-CH2) · MS (ESI) :m/z 576. 0 (M+1)，578. 0 (M+3)， 580. 0 (M+5) · C17H12Br3N3OS2 (574. 80) · 操作同上，所不同的是使用2，4_ 二氯苯胺。白色针晶，收率54· 8 % .mp 183-185 "C . 1H-WR(O)Cl3, ppm) δ :8· 39 (s, 1H, NH) ,8. 23 (d, 1H, J = 7. 2Hz，Ph，H)，7· 65 (d，1H，J = 1. 8Hz，PhH)，7. 44-7. 15 (m，4H， 2XPhH&2XPh，H) , 5. 24(s，2H，NH2) , 3. 52(s，2H，S-CH2). MS (ESI) :m/z 566. 1 (M+1)， 568. 1 (M+3)，570. 1 (M+5) · C17H11Br2C12N3OS2 (564. 81) ·操作同上，所不同的是使用2-氯-3-氨基吡啶。白色针晶，收率70. 4% .mp 103-106 °C · 1H-WR(O)Cl3, ppm) δ :8· 68 (d, 1H, J1 =2. 4Hz, J2 = 7. 8Hz,吡啶-H)，8· 60(brs, 1Η, NH), 8. 16 (dd, 1Η, J=L 8Hz, J = 4. 8Ηζ, 吡啶-H)，7. 68 (d, 1Η, J1 = 1. 8Hz, PhH)，7. 35 (dd, 1Η, J1 = 1. 8Hz, J2 = 8. 4Hz, PhH)， 7. 29-7. 27 (m, 1Η, PhH), 7. 14 (d, 1Η, J = 7. 8Ηζ,批啶-H)，5· 24 (s，2Η，NH2)，3· 48 (s，2Η， S-CH2). MS (ESI) :m/z 533. 2 (M+l), 535. 11 (M+3). C16H11Br2ClN4OS2 (531. 84).操作同上，所不同的是使用2-硝基-4-甲基苯胺。黄色固体，收率61·9 % .mp :218_219 "C . 1H-WR(O)Cl3, ppm) δ 10. 83 (s, 1H, NH)，8. 54 (d, 1H, J = 8. 4Hz, Ph，H)，8. 04 (d, 1H, J1 = 1. 8Hz, PhH), 7. 59 (d, 1H, J=L 8Hz, Ph，H)，7· 47 (dd, 1Η, J1 = 1. 8Hz, J2 = 8. 4Hz, PhH), 7. 25 (d, 1Η, J = 8. 4Hz, PhH), 7. 14 (d, 1Η, J = 8. 4Hz, Ph，H)，5. 78 (s, 2Η, NH2)，3. 49 (s, 2Η, S-CH2)，2. 43 (s, 3Η, CH3). MS (ESI) :m/z 557. O (M+l)，559. 1 (M+3) ,561. 1 (M+5) · C18H14Br2N4O3S2 (555. 89) ·操作同上，所不同的是使用邻硝基苯胺。黄色固体，收率58.7%. mp :186-189°C. 1H-WR(CDClyppm) δ 10. 75 (s，1Η，NH)， 8. 74(d，lH，J = 8. 4Hz，Ph，Η)，8· 24(dd, IHjJ1 = 1. 2Hz, J2 = 8. 4Hz，Ph，H) ,8. IKdjIHjJ1 =1. 8Hz, PhH)，7. 68 (dt, 1H, J1 = 1. 2Hz, J2 = 8. 4Hz, Ph，H)，7. 40 (dd, 1H, J1 = 1. 8Hz, J2 =8. 4Hz，PhH)，7. 26 (d, 1H, J = 8. 4Hz，PhH)，7. 24(m，lH，Ph，H)，5. 75 (s，2H，NH2)，3. 51 (s， 2H, S-CH2) · MS (ESI) :m/z 543. 1 (M+l)，545. 1 (M+3)，547. 1 (M+5) · C17H12Br2N4O3S2 (541. 87) ·
操作同上，所不同的是使用邻甲基苯胺。白色粉末，收率62· 8 % .mp 198-200 "C . 1H-WR(O)Cl3, ppm) δ :7· 95(brs, 1H, NH)，7. 88 (d, 1H, J1 = 7. 8Hz, PhH)，7. 68 (d, 1H, J=L 8Hz, Ph，H)，7. 26-7. 17 (m, 3H, 2XPhH&lXPh，H)，7· 12-7. 07 (m, 2Η, Ph，H)，5. 72(s，2H，NH2)，3. 86(s，2H，S-CH2)，2. 17 (s， 3H, CH3). MS (ESI) :m/z512. 2 (M+l) ,514. 2 (M+3) ,516. 1 (M+5). C18H15Br2N3OS2 (510. 90).实施例3· 2- (2-氯-4- (2,4- 二溴苯基)噻唑_5_巯基)N-芳基乙酰胺(Ι-Β8)的 合成2-(2-氨基-4-(2，4-二溴苯基)噻唑_5_巯基)_Ν_芳基乙酰胺Ι-Α8 (Immol)、无 水氯化铜(1.5mm0l)和乙腈(15mL)的混合物在室温搅拌和氮气保护下，15min内滴加亚硝 酸叔丁酯(1. 5mmol)，此时溶液微微放热并伴有氮气放出。滴加完毕后混合物搅拌2h。然后 加入15mL水和15mL氯仿并用5N盐酸酸化。分离水层并加入氯仿(2X15mL)进行提取。分 取有机溶剂用无水Na2SO4干燥，然后减压蒸干，残渣以乙酸乙酯石油醚=1 4经硅胶快 速柱层析分得化合物2-(2_氯-4-(2，4- 二溴苯基)噻唑-5-巯基)N-芳基乙酰胺IX-B8。不同的2-(2-氨基-4-(2，4-二溴苯基)噻唑_5_巯基)N-芳基乙酰胺I_A8经过 上述氯代反应得到目标产物I-B8，部分结果如下 操作同上，所不同的是以I-ASa为反应底物。白色粉末，收率55. 8 % . mp 129-130 "C . 1H-NMR(DMS0-d6, ppm) δ :9· 71(s，1Η，NH)，8· 02(d，1Η，J = 1. 8Hz, PhH),
7.70 (d, 1H, J = 7. 8Hz，Ph，H)，7. 60 (dd, IHjJ1 = 8. 4Hz, J2 = 1. 8Hz，PhH)，7. 50 (d, 1H, J =
8.4Hz，PhH)，7. 39 (d, 1H, J = 7. 8Hz，Ph，H)，7. 35 (t, lH，Ph，H)，7. 22 (t, lH，Ph，H)，3. 78 (s, 2H, S-CH2) · MS (ESI) :m/z 551. 1 (M+l)，553. 1 (M+3)，555. 0 (M+5) · C17H10Br2Cl2N2OS2 (549. 80) · 操作同上，所不同的是以I_A8b为反应底物。白色针晶，收率48.6% .mp 106-109 "C . 1H-WR (DMS0-d6，ppm) δ :9.95(s，lH，NH)，8. 01 (d，1H，J1 = 1. 2Hz, Ph，H)， 7. 90-7. 87 (m, lH，PhH)，7· 58 (dd, IHjJ1 = 1. 8Hz, J2 = 8. 4Hz，PhH)，7. 39 (d, 1H, J = 8. 4Hz, Ph，H)，7. 29-7. 25 (m, 1H, PhH)，7. 20-7. 18 (m, 2H, Ph，H)，3. 76 (s, 2H, S-CH2) · MS (ESI) :m/z 535. 0 (M+l)，537. 0 (M+3)，539. 1 (M+5) · C17H10Br2ClFN2OS2 (533. 83) ·
I-B8a
13 操作同上，所不同的是以I-ASc为反应底物。白色固体，收率62.3% .mp 160-162 "C · 1H-匪R(DMS0-d6，ppm) δ :9· 66 (s, 1H, NH), 8. 02 (d, 1Η, J=L 8Hz, Ph，H)， 7. 66 (d, 1Η, J = 7. 8Hz, PhH)，7. 62 (dd, 1Η, J=L 8Hz, J = 7. 8Hz, PhH)，7. 60 (d, 1Η, J = 7. 2Hz, Ph，H)，7· 42-7. 38 (m，2Η，1 XPh，H&lXPhH)，7· 17-7. 15 (t，1Η, Ph，H)，3· 77(s，2H， S-CH2) · MS (ESI) :m/z 595. 4 (M+l)，597. 1 (M+3)，599. 2 (M+5) · C17H10Br3ClN2OS2 (593. 75) · 操作同上，所不同的是以I-ASd为反应底物。白色针晶，收率69. 4 % . mp 173-174 "C . 1H-NMR (DMS0_d6，ppm) δ :8.40(s，lH，NH)，8· 23 (d，1H，J = 8. 4Hz, Ph，H)，7. 71 (d, 1H, J = 2. 4Hz, PhH)，7. 41 (d, 1H, J=L 8Hz, Ph，H)，7. 33 (dd, 1H, J = 2. 4Hz, J = 8. 4Hz, PhH)，7. 27 (dd, 1H, J=L 8Hz, J = 8. 4Hz, Ph，H)，7. 13 (d, 1H, J = 8. 4Hz, PhH)，3. 55 (s, 2H, S-CH2) · MS (ESI) :m/z 585. 3 (M+l)，587. 1 (M+3)，589. 1 (M+5) · C17H9Br2Cl3N2OS2 (583. 76). 操作同上，所不同的是以I_A8e为反应底物。白色固体，收率75. 8 % . mp 168-170°C . 1H-WR(DMS0-d6，ppm) δ :8· 64 (d, 1Η, J = 7. 8Ηζ，吡啶-H)，8· 46 (brs, 1Η, NH)， 8. 17 (dd, 1Η, J = 1. 8Hz，J = 4. 8Ηζ，吡啶-H)，7. 74 (d, 1Η, J=L 8Hz, PhH), 7. 40 (dd, 1Η, J1 = 1. 8Hz, J2 = 8. 4Hz, PhH), 7. 31-7. 26 (m, 1Η, PhH), 7. 17 (d, 1Η, J = 7. 8Ηζ,吡啶-H)， 3. 57 (s，2Η, S-CH2) · MS (ESI) :m/z552. 1 (M+l)，554. 1 (M+3) · C16H9Br2Cl2N3OS2 (550. 79) · 操作同上，所不同的是以I_A8f为反应底物。黄色固体，收率70.8% .mp 187-189 "C . 1H-WR (DMS0-d6，ppm) δ 10. 42(s, 1H, NH)，7. 99 (d，1H，J = 1. 8Hz, Ph，H)，
7. 83 (d, 1H, J=L 8Hz, PhH)，7. 59 (dd, 1H, J1 = 1. 8Hz, J2 = 8. 4Hz, Ph，H)，7. 58-7. 54 (m, 2H, PhH)，7. 39 (d, 1H, J = 8. 4Hz, Ph，H)，3. 74(s，2H，S-CH2)，2. 38(s，3H，CH3). MS (ESI) :m/ ζ 576. 2 (Μ+1)，578. 3 (Μ+3)，580. 2 (Μ+5) · C18H12Br2ClN3O3S2 (574. 84) ·
操作同上，所不同的是以I-ASg为反应底物。黄色固体，收率56.2% .mp 137-138 "C . 1H-WR (DMS0-d6，ppm) δ :10.51(s，lH，NH)，8. 01 (d，1H，J = 1. 8Hz, Ph，H)， 7. 99(d，lH，J = 1. 8Hz，PhH)，7. 74(t，1H，Ph，H)，7. 70-7. 60(d，1H，J = 8. 4Hz，PhH)， 7. 60 (dd, 1H, J1 = 1. 8Hz, J2 = 8. 4Hz, PhH)，7. 42-7. 40 (m, 2H, Ph，H)，3. 77 (s, 2H, S-CH2) · MS (ESI) :m/z 562. 2 (M+l)，564. 2 (M+3)，566. 3 (M+5) · C17H10Br2ClN3O3S2 (560. 82) ·操作同上，所不同的是以I_A8h为反应底物。白色固体，收率47.6% .mp 174-176 "C . 1H-WR(DMS0-d6，ppm) δ 9. 48 (brs, 1H, NH)，8. 04 (d，1H，J = 2. 4Hz, PhH)，
7.62 (dd, 1H, J= 1. 8Hz, J = 8. 4Hz, Ph，H)，7. 42 (d, 1H, J = 8. 4Hz, PhH)，7. 37 (d, 1H, J =
8.4Hz, PhH), 7. 22-7. 17(m，2H，Ph，H)，7. 10 (t, 1H, Ph，H)，3. 74(s，2H，S-CH2)，2. 12(s，3H， CH3) · MS (ESI) :m/z 431. 1 (M+l)，533. 1 (M+3)，535. 1 (M+5) · C18H13Br2ClN2OS2 (529. 85) ·实施例4.目标化合物的体外抗HIV活性测试(参见(① Pauwels R, et al. T. Virol. Methods. 1988, 20, 309.② Pannecouaue C, et al. Nat Protocols2008, 3,427.)术语解释MT-4细胞人急性淋巴母细胞白血病细胞。MTT分析法MTT即为3-(4，5_ 二甲基噻唑-2)-2，5_ 二苯基四氮唑溴盐，商品名 噻唑蓝。Nevirapine(NVP)抗艾滋病上市药物奈韦拉平。AZT 抗艾滋病上市药物齐多夫定。DMSO 二甲基亚砜。测试原理由于HIV感染的MT-4细胞在一定时间内(5_7天)会发生病变，因此向HIV感染 的MT-4细胞悬浊液中加入适当浓度的待检测化合物溶液，经过一段时间(5-7天)的培养 后，用MTT分析法测定MT-4细胞活力，得到保护50%细胞免于细胞病变的药物浓度(EC5tl) 即可得出目标化合物的抗HIV的活性。同时得到目标化合物使50%未感染HIV的细胞发生
病变的浓度(CC5tl)，计算出选择系数(selectivity index, SI = CC50/EC50)。MTT分析法原理MTT即溴化-3_(4，5_ 二甲基_2_噻唑基)_2，5_ 二苯基四唑氮， 可与活的细胞内琥珀酸脱氢酶相结合，而不与死亡细胞发生反应。目前MTT法是一种快速、 简洁反映细胞活力的酶分析方法。测试材料和方法(I)HIV-I (IIIB)、HIV-2 (ROD)毒株、各种 HIV-1 耐药株由比利时 Leuven 大学 Rega研究院微生物与免疫学研究所提供。(2)MT-4细胞由比利时Leuven大学Rega研究院微生物与免疫学研究所提供。(3)MTT 购自美国 Sigma 公司。(4)样品处理样品临用前溶于DMSO配成适当浓度，并用双蒸水作5倍稀释，各5 个稀释度。(5)阳性对照药Nevirapine (NVP)、AZT。(6)测试方法样品稀释后加入到HIV感染MT-4细胞悬浊液中，经过一段时间后 用MTT比色法测定细胞活力，于酶标仪中，在590m下记录吸光度㈧值，计算出EC5tl，CC5tl以 及Si。(7) MTT染色法加入样品培养一段时间后，再向每孔加入MTT溶液(5mg/ ML) 20 μ L，继续培养若干小时，弃染色液，并向每孔加入150 μ L DMS0,充分混合，于酶标仪 中，在590nm下记录吸光度。具体操作如下将化合物用DMSO或水溶解后用磷酸盐缓冲液稀释，将3X 105MT-4 细胞与100 μ L不同浓度的化合物溶液在37°C共同预孵育lh。然后向该混合物中加入 100 μ L适当浓度的病毒稀释液，将细胞于37°C孵育lh。洗涤三次后，将细胞再次分别悬浮 于含有或不含化合物的培养基质中。接着将细胞在5% CO2环境中，于37°C下再孵育7天， 并于感染后的第三天用含有或不含化合物的培养基质补充原培养液。每种培养条件都重复 操作两次。对病毒的细胞病变作用每天都用反向光学显微镜监控。一般来讲，本实验中所 用的病毒稀释液常常会在病毒感染后第五天发生细胞病变。药物抑制浓度以药物对病毒致 细胞病变作用产生50%抑制作用而同时对细胞无直接毒性的浓度(EC5tl)表示。值得强调 的是，当化合物水溶性较差，需要用DMSO才能溶解时，DMSO体积比浓度相对于水来讲，一般 会低于10% (DMS0在MT-4细胞培养介质中最终浓度小于2% )。因为DMSO能影响测试化 合物抗病毒活性，对含有相同浓度DMSO溶液的抗病毒活性对比空白实验也应该平行操作 进行。另外，DMSO最终浓度(1/1000)远远低于影响HIV-I在T-细胞中复制所需浓度。目标化合物的体外抗HIV-I (IIIB)、HIV-2 (ROD)及多种耐药株活性筛选数据由比 利时Leuven大学Rega研究院微生物与免疫学研究所提供，所有的活性数据都经过至少两 次独立、平行的实验测得。实施例5.目标化合物的体外抗流感病毒活性测试(Sld)Vanderlinden E, et al. J Virol. 2010,84(9) :4277_88·② Naesens L, et al. Antiviral Res. 2009,82(1) :89_94·)测试原理病毒是在易感的活的动物、鸡胚或细胞内才能进行复制增殖。因此可用动物、鸡胚 或细胞来进行病毒培养和药物的抗病毒试验。可通过观察细胞培养液酸碱度的变化、病毒
16致细胞病变效应(CPE)、病毒滴度(PFU)改变、病毒基因组mRNA水平变化、鸡胚尿囊液或动 物血清等相应指标的改变，来判断药物的抗病毒试验效果。病毒CCID5tl滴定原理多数病毒感染体外培养的细胞后，常引起细胞形态学改 变，如细胞团缩、裂解和细胞肿大等，这种改变称为病毒致病变效应(cytopathic effect, CPE)，可以直接通过显微镜观察，亦可通过染色得以识别和判断。CPE的程度可间接反映 病毒的毒力，因此利用这种特征可以用来测定病毒的毒力。即能在培养板孔或试管内引起 半数细胞发生病变所需的病毒量，定义为病毒的50%细胞感染指数(50% cell culture infective dose，CCID5tl)。在药物的抗病毒试验中，常用IOOCCID5ci的病毒感染量表征。本 试验采用50CCID5(1的病毒感染量。测试材料(1)influenza A/H1N1(strain A/Puerto Rico/8/34) > A/H3N2 (strain A/ HK/7/87)和 influenza B (strain B/HK/5/72)由比利时 Leuven 大学 Rega 研究院微生物 与免疫学研究所提供。(2)MDCK细胞狗肾上皮细胞(Madin Darby canine kidney cells，MDCK)，由比利 时Leuven大学Rega研究院微生物与免疫学研究所提供。(3) MTS 3- (4，5- 二甲基噻唑-2-基)-5- (3-羧甲氧基苯基)_2_ (4_磺酸苯 基)-2H-四氮唑，购自美国Sigma公司。(4)样品处理样品临用前溶于DMSO配成适当浓度，用双蒸水作5倍稀释，各5个 稀释度。(5)阳性对照药磷酸奥塞米韦(达菲，Oseltamivir carboxylate)、利巴韦林 (Ribavirin)、金刚烷胺(Amantadine)和金刚乙胺(Rimantadine)。测试方法致细胞突变效应法(CPE)将病毒原种接种至9 10日龄的鸡胚中，感染48h后收集尿囊液，在MDCK细胞 中滴定。将MDCK细胞悬浮在被感染介质(Ultra-MDCK )中。接着转移到96孔板上，每孔 含有7500细胞，并在35°C下孵育20小时。然后，将系列稀释的待测化合物和病毒一起加 入到培养基中(感染复数每孔50CCID5(1相当于每孔0. 0003个噬斑形成单位)，在35°C下 继续孵育。在感染72小时后，用显微镜进行观察记录病毒诱导的细胞病变效应(CPE)，按 Reed-Muench法计算能抑制50% CPE产生的药物有效浓度(EC5tl)。Reed-Muench公式为CCID50 =高于50%的感染的稀释度的倒数的对数+距离比例X稀释系数的对数距离比例=(高于50%的感染的百分数-50%)/(高于50%的感染的百分数-低 于50%的感染的百分数)MTS 法活性结果进一步由基于甲臜的MTS细胞活性试验证实。基本步骤同上，当病毒对 照组细胞CPE在75% 100%时弃培养液上清，每孔加入含5g · L-1MTS的培养液50 μ L，继 续培养2 3h后弃去MTS上清，每孔加DMSO 100 μ L，混勻5min后，用酶标仪测570nm波长 处的吸光度A值。按照下述公式计算药物对病毒的抑制率病毒抑制率=(药物处理组A均值-病毒对照组A均值)/ (细胞对照组A均值-病 毒对照组A均值)X 100%,结合细胞毒性试验结果，用统计学软件SPSS的Probit回归法，或按Reed-Muench法计算化合物保护50%感染流感病毒细胞免于病变的化合物浓度(EC5tl) 和使50%未感染病毒细胞发生病变的化合物浓度(CC5tl)。
权利要求
具有通式I的取代噻唑巯乙酰胺类衍生物，以及其N 氧化物、立体异构体形式、立体异构体混合物或药学上可接受的盐其中，R为氨基、氯原子、氟原子、溴原子、碘原子、羟基、甲基或乙基；Ar1为取代苯环、取代萘环、各种取代的六元杂环、各种取代的五元杂环、各种取代的六元并五元杂环、各种取代的六元并六元杂环、各种取代的五元并五元杂环、各种取代的苯并五元杂环或各种取代的苯并六元杂环。FSA00000182876900011.tif
2.如权利要求1所述的取代噻唑巯乙酰胺类衍生物，其特征在于所述通式I中Ar1为 2，4- 二卤代苯环、取代萘环或取代喹啉环。
3.如权利要求1所述的取代噻唑巯乙酰胺类衍生物，其特征在于所述通式I中Ar2为 取代苯环、取代萘环、各种取代的六元杂环、各种取代的五元杂环、各种取代的六元并五元 杂环、各种取代的六元并六元杂环、各种取代的五元并五元杂环、各种取代的苯并五元杂环 或各种取代的苯并六元杂环。
4.如权利要求1所述的取代噻唑巯乙酰胺类衍生物，其特征在于所述通式I中Ar2为 具有通式II的2，4- 二取代苯环或2，4- 二取代六元杂环；其中，X、Y、Z分别为碳原子或氮原子，R1为H、F、Cl、Br、I、NO2或Me ；R2为H、F、Cl、Br、 I、Me、OCH3、COMe、COOMe、COOEt、COOH 或 SO2NH2。
5.如权利要求1所述的取代噻唑巯乙酰胺类衍生物，其特征在于所述化合物的药学上 可接受的盐是盐酸盐，硫酸盐，酒石酸盐，柠檬酸盐，以及药学上可接受的前体药物或衍生 物。
6.权利要求1所述的取代噻唑巯乙酰胺类衍生物的制备方法，步骤如下取代芳基乙酮(1’)或取代芳环(1)分别通过卤代反应或傅克反应(Friedel-CraftS) 得到2-氯(溴)-1_取代芳基乙酮(2) ； (2)与2-巯基乙酸乙酯在乙醇溶液中室温反应数 小时得到硫醚(3)，不经纯化直接进行下步反应，在α-位溴代得到制备氨基噻唑杂环的 重要中间体(4)；然后，该化合物与硫脲环合，得到高收率的2-(2_氨基-4-取代芳基-噻 唑-5-巯基)乙酸乙酯(5)；在NaOH-DMSO-H2O溶液中，化合物(5)发生水解反应生成氨基 噻唑乙酸(6)，然后再转化成相应的乙酰氯(7)；在三乙胺的条件下，化合物(7)与不同的取其中，代芳胺反应得到相应的2- (2-氨基-4-取代芳基-噻唑-5-巯基)-N-乙酰胺衍生物(A8)； 另外，在此基础上经过重氮化和卤化反应得到卤代噻唑巯乙酰胺衍生物(B8)。
7.—种如权利要求1-5任一项所述化合物在制备治疗和预防人免疫缺陷病毒(HIV)、 流感病毒感染药物中的应用。
8.—种药物组合物，包含权利要求1-5任一项所述化合物和一种或多种药学上可接受 载体或赋形剂。
全文摘要
本发明属于医药技术领域，具体公开了一类如通式I所示的取代噻唑巯乙酰胺类化合物、其N-氧化物、立体异构体形式、立体异构体混合物和药学上可接受的盐、其水合物和溶剂化物，其多晶和共晶，其同样生物功能的前体和衍生物，其制备方法以及含有一个或多个此类化合物的组合物在治疗和预防人免疫缺陷病毒(HIV)及流感病毒感染药物中的应用。
文档编号A61K31/4439GK101914074SQ201010223400
公开日2010年12月15日 申请日期2010年7月12日 优先权日2010年7月12日
发明者刘新泳, 展鹏, 方增军, 李震宇 申请人:山东大学