专利名称：牛蒡苷元的医药用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及中药牛蒡子提取物牛蒡苷元的医药用途，特别是牛蒡苷元在制备治疗癌症方面的用途，属于化合物的治疗活性领域。
背景技术：
癌症是当前严重影响人类健康、威胁人类生命的主要疾病之一。癌症与心脑血管疾病和意外事故一起，构成当今世界所有国家三大死亡原因。因此，世界卫生组织和各国政府卫生部门都把攻克癌症列为一项首要任务。世界上治疗癌症的方法主要有三种，一是采用手术切除法，切除病变组织，防止癌细胞扩散；二是采用化疗或放疗，以杀死癌细胞 ’三是用药物治疗。采用手术切除的方法增加了病人的痛苦，伤其元气，费用巨大。用化疗或放疗的方法，在杀死癌细胞的同时，也伤及红细胞和白细胞，病人苦不堪言。白血病是严重危害人类生命健康的造血系统恶性肿瘤，是一类起源于造血(或淋巴)干细胞的恶性疾病。由于干细胞受损，白血病细胞失去进一步分化成熟的能力，或者增值与分化能力不平衡，而停止在细胞发育的不同阶段，具体表现为细胞在体内无限增值，而其分化成熟和凋亡受阻。因此，白血病的治疗可从三个方面入手诱导细胞凋亡、诱导细胞分化及干细胞移植重建造血功能。迄今白血病的治疗仍主要采用传统的联合化疗，但此疗法副作用甚大，复发率高，尤其对机体免疫与造血系统有较大的损害。牛蒡苷与牛蒡苷元均来源于牛蒡的干燥成熟果实牛蒡子，牛蒡苷活性很小，必须经过代谢转化为牛蒡苷元才能被人体吸收，而牛蒡苷元是可以被人体直接吸收的有效成分。目前，已有文献报道牛蒡苷元具有如下药理活性1)抗炎及免疫调节作用；2)抗病毒作用，包括HIV-I与流感病毒；3)诱导肿瘤细胞凋亡的作用；4)肾病及糖尿病、糖尿病并发症治疗作用；5)热休克反应抑制作用；6)神经保护作用；7)扩张血管作用；8)血小板活化因子拮抗作用；9)抗老年性痴呆的作用；10)抑制K+挛缩的作用等。比如，Cho J Y，et al. Immunomodulatory effect of arctigenin, a lignan compound on tumor necrosis factor-α and nitric oxide production, and lymphocyte proliferation[J]. J Pharm Pharmcol. 1999 ；51 (11) :1267-1273.公开了牛蒡苷元具有抗炎及免疫调节作用；Gao Y， et al. Activity of in vitro anti-influenza virus of arctigenin[J]. Chinese Traditional and Herbal Drugs (中草药).2002 ;33 (8) :724-726.公开了牛蒡苷元具有抗病毒的作用；Kim S H, et al. Hepatoprotective dibenzylbutyrolactone lignans of Torreya nucifera against CC14-induced toxicity in primary cultured rat hepatocytes[J], Biol Pharm Bull. 2003 ；26 (8) :1202-1205.公开了牛蒡苷元具有诱导肿瘤细胞凋亡的作用。
发明内容
恶性肿瘤细胞在诱导分化剂作用下，可以向正常或接近正常的细胞方向分化逆转。癌细胞的诱导分化和分化治疗作为肿瘤治疗的一条新的途径，近年来研究非常活跃。体内外实验表明，在一些制剂诱导下，肿瘤细胞可发生分化，有的出现类似正常细胞的表型， 有的恢复了正常细胞的某些功能，这是对“一旦成为癌细胞，永远是癌细胞”的传统观念提出的有力挑战，为抗肿瘤研究开辟了一条崭新的途径。本发明的目的就是公开牛蒡苷元在制备癌细胞或白血病细胞分化的药物中的用途。形态学上的分化成熟是表明肿瘤细胞分化的标志。发明人通过大量的体外试验意外地发现，当癌细胞与牛蒡苷元共同培养后，可明显出现细胞形态向成熟方向转化，细胞表现出核固缩，核浆比降低，核仁减少等特征。这个意外的发现促使发明人将牛蒡苷元制备成癌细胞或白血病细胞分化的药物。通过如下体外试验可以看出，牛蒡苷元可以诱导人源慢性髓性白血病细胞K562、 人源急性早幼粒白血病细胞HL-60、人源胃癌细胞SGC7901和人源肺癌细胞A549分化。具体地，在牛蒡苷元诱导白血病细胞分化的试验中，无论是K562细胞，还是HL-60细胞，其与牛蒡苷元共同培养后，可出现细胞形态明显向成熟方向转化，细胞表现出体积减小，核染色质浓缩，核浆比降低，核仁减少等特征，分化抗原试验表明，K562细胞向粒系方向分化，HL-60 向红系、粒系方向分化。在牛蒡苷元诱导人源胃癌细胞SGC7901分化的试验中，经牛蒡苷元处理后的SGC7901细胞由椭圆形转变成长圆形或近似菱形，细胞核浆比例下降等变化，细胞周期动力学发生改变，提示牛蒡苷元可诱导胃癌细胞出现一定程度的分化。在牛蒡苷元诱导人源肺癌细胞A549分化的试验中，牛蒡苷元抑制A549细胞在软琼脂中形成集落的能力。并抑制A549细胞的DNA合成和有丝分裂，使细胞发生Gl/Go期阻滞，证明了牛蒡苷元对A549细胞具有诱导分化的作用。一、牛蒡苷元诱导白血病细胞分化试验试验分组和给药终浓度如下阴性对照组赋形剂牛蒡苷元A 组0. lymol/L牛蒡苷元B 组0. 5ymol/L牛蒡苷元C 组1.0ymol/L取常规培养的处于对数生长期的人源慢性髓性白血病细胞K562、人源急性早幼粒白血病细胞HL-60，以2 X 105/ml接种于M孔板中，和分化诱导剂牛蒡苷元共同培养，培养条件为RPMI 1640(含体积分数为川^的胎牛血清)，〗？！^1^ C02，饱和湿度培养6天。 此后收集细胞检测细胞形态的变化及其它分化指标的检测。取500 μ L新鲜配置含IOOg/ mlTPA的0. NBT溶液，分别与牛蒡苷元处理后的细胞悬液混合，37°C孵育30min后，离心去上清，沉淀涂片。胞质含蓝灰色颗粒的细胞为阳性细胞，计数200个细胞，计算NBT阳性率。NBT阳性率=(NBT阳性细胞数/细胞总数)X 100%。取牛蒡苷元作用后的细胞，调整细胞密度为1 X 106/ml，加入PE标记的鼠抗人CDm单克隆抗体，混勻后室温孵育20min，加入500 μ L PBS溶液，流式细胞仪检测2 X IO5个细胞中的抗原表达。(1)细胞形态变化阴性对照组Κ562细胞体积大，核大而明显，核仁清楚，核质比例大，经牛蒡苷元处理6天后，Κ562细胞直径和体积有进一步变小的趋势，核质比减小，细胞向成熟方向分化较为明显。具体参见
图1-4。阴性对照组HL-60细胞体积大，外形不规则，且核大，染色质疏松细致，可见多个核仁。经牛蒡苷元处理后的HL-60细胞形态发生明显变化，细胞体积变小，核染色质浓缩， 核质比例变小，核质呈灰蓝色，原始细胞减少。具体参见图5-8。(2) NBT还原能力的测定。0. 5 μ mol/L牛蒡苷元可显著增高两种白血病细胞的NBT 还原能力，其中HL-60细胞的变化较为显著，NBT阳性细胞从对照组的42%升高至57%，而 K562细胞NBT的阳性率为36% (对照21% )，P值均< 0. 01，见图9。(3)牛蒡苷元作用后细胞表面特异性分化抗原的变化。HL-60细胞与0. 5μπι01/ L牛蒡苷元作用后，我们检测了细胞表面CDllb、CD13与CD14的表达，发现牛蒡苷元可诱导 HL-60细胞向成熟粒、单细胞分化，细胞表面分化抗原⑶lib、⑶13与⑶14明显高于对照组。K562细胞与牛蒡苷元作用后，粒系分化抗原CD15表达增强，而单核细胞系表面分化抗原⑶14表达无明显变化，提示牛蒡苷元可能诱导K562细胞向粒系方向分化。参见表1、2。表1牛蒡苷元对HL-60白血病细胞分化抗原⑶lib、⑶13与⑶14表达的影响
权利要求
1.牛蒡苷元在制备促进癌细胞分化的药物中的用途。
2.如权利要求1所述的用途，所述癌细胞是白血病细胞、胃癌细胞或肺癌细胞。
3.如权利要求1或2所述的用途，所述药物是牛蒡苷元的微乳制剂，它含有牛蒡苷元、 微乳载体，微乳载体包含油相、乳化剂和助乳化剂，所述的微乳制剂的平均粒径为15-90nm。
4.如权利要求3所述的用途，所述药物是含牛蒡苷元的口服液、胶囊、注射剂。
全文摘要
本发明涉及中药牛蒡子提取物牛蒡苷元的医药用途，特别是牛蒡苷元在制备治疗癌症方面的用途，属于化合物的治疗活性领域。通过体外试验可以看出，牛蒡苷元可以诱导人源慢性髓性白血病细胞K562、人源急性早幼粒白血病细胞HL-60、人源胃癌细胞SGC7901和人源肺癌细胞A549的分化。
文档编号A61K9/00GK102342928SQ201010241038
公开日2012年2月8日 申请日期2010年7月23日 优先权日2010年7月23日
发明者姚景春, 赵志全 申请人:山东新时代药业有限公司