透明质酸衍生物及含有其的药剂的制作方法

专利名称：透明质酸衍生物及含有其的药剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种通过在生物体内可以分解的间隔物导入了非留类抗炎症化合物 及改善病情抗风湿化合物的透明质酸衍生物及其制造方法。
背景技术：
作为变形性膝关节症(OA)及风湿性膝关节炎(RA)等关节炎的治疗剂，使用透明 质酸钠溶液。透明质酸钠溶液，通常作为注射剂被使用，对作为患部的膝、肩等的关节直接 给药，为了改善由关节炎引起的机能障碍及抑制疼痛而被频繁使用着。作为由这样的关节炎引起的疼痛的抑制、缓和剂，也正在使用非甾类的抗炎症剂 (也叫作NSAIDs或NSAID)及矫正关节风湿病等病态的改善病情抗风湿化合物(下面，也叫 作DMARD)。一般来讲，这些NSAIDs，经口给药的情况多，且并用上述透明质酸钠溶液注射剂 的注入给药和NSAIDs的经口给药并用的情况也多。在由经口给药使用这些NSAIDs的过程 中，存在这样的问题NSAIDs被吸收，在血液中循环，到达患部以前其几乎完全消失。因此， 要使血中维持有效的量，NSAIDs到达患部，必须服用大量的NSAIDs。这种大量的NSAIDs经 口服用，有称为消化器官障碍这样的很大的副作用，正在成为问题。另外，作为DMARD，可以列举与被认为是炎症原因的免疫异常等的控制有关的免疫 疗法药(免疫调整剂或免疫抑制剂)。另一方面，已知透明质酸是由以N-乙酰基-D-葡萄糖胺和D-葡糖醛酸的二糖单 元为基本骨架的重复结构构成的多糖，因为在各个二糖单元中含有羧基及多个羟基，亲水 性极高。作为透明质酸亲水性即与水分子的水和性高的一例，透明质酸可以保持自身体重 的约1000倍的水。但是以往，已知在这样具有高的亲水性的透明质酸中导入NSAIDs这样 的疏水性高的药剂时，由于透明质酸分子自身的疏水性增大，故在水中形成半不溶的胶状 或不溶物的形态，作为注射剂的使用是困难或不可能的。而且，以长期缓释为目的，随着药 剂的导入率的增加，不溶化程度也增大，形成不适合作为注射剂的形态。不限于NSAIDs，作为将药剂导入透明质酸中的实例，报道了(专利文献1)不通过 间隔物或通过间隔物使作为关节炎治疗药的基质蛋白酶抑制剂(MMP抑制剂)和透明质酸 结合成的结合体。但是在该报道中，作为MMP抑制剂和透明质酸的适当结合方式，列举了更 强的共价键，暗示以在给药部位中结合体不解离、分解为MMP抑制剂和透明质酸为前提，可 以期待MMP抑制剂的作用和透明质酸的效果的协同药效。另外，作为与透明质酸的结合部 位，列举了羧基，但是该羧基上药剂的导入率非常低，另外，没有进行作为注射剂适当的形 态(溶液)的处理。此外，也有将透明质酸用不溶性碳化二亚胺活化，使其与亲核药剂反应的报道
4(专利文献2)，但这些药剂不是NSAIDs，最终剂形是不溶性薄膜。另外，也有使用二低级烷 基硫膦基卤化物(Rpt-X)作为缩合剂，在透明质酸中导入各种药剂的实例(专利文献3)，但 未提及与配制的衍生物有关的剂形，在其配制中可以作为溶液使用的这样的处理也未被加 入工序中。专利文献1 :W099/59603专利文献2 特表平3-502704专利文献3 特开平9-18870
发明内容
通过在患部直接注入NSAIDs，避免通过NSAIDs的经口给药引起的消化器官障碍 的问题的方法尽管理论上也可以考虑，但例如在膝关节腔内直接注入NSAIDs时，由于吸收 快，故NSAIDs效果持续时间短，这样的方法一直没被采用。另外，由于NSAIDs自身以疼痛 的缓和、抑制为目的，故这种方法不能作为关节症的根本治疗。因此，本发明的目的在于，提供一种药剂，通过制成在作为关节症治疗剂的透明质 酸钠上化学导入了 NSAIDs或DMARD而得到的新衍生物，并将其注入到患部，可以大大有助 于关节症伴随疼痛的缓和、抑制及关节症的根本治疗；以及提供一种通过控制NSAIDs或 DMARD的释放而具有持续效果的药剂。本发明者考虑上述目的，为了开发可以作为能注入到关节炎患者的患部的注射剂 使用，而且不仅对关节炎的根本治疗，而且对疼痛、炎症的缓和、抑制也都具有高的效果的 NSAIDs导入的透明质酸衍生物及DMARD导入的透明质酸衍生物，进行了专心研究。结果发现，通过具有在生物体内可以分解的部位的间隔物在透明质酸中导入了 NSAIDs或DMARD的衍生物适于上述目的；而且优选在制造过程中，通过给予碱处理，使溶解 性提高，可以得到作为注入剂(注射剂)可以注入的溶液可以利用的可溶性NSAIDs导入的 透明质酸衍生物及可溶性DMARD导入的透明质酸衍生物，完成了本发明。即本发明如下所述。1. 一种透明质酸衍生物，其中，通过具有在生物体内可以分解的部位的间隔物，抗 炎症化合物利用共价键结合在透明质酸上。2.如上述1所述的透明质酸衍生物，其中，抗炎症化合物选自非留类抗炎症化合 物及改善病情抗风湿化合物。3.如上述1或2所述的透明质酸衍生物，其中，抗炎症化合物具有羧基。4.如上述3所述的衍生物，其中，抗炎症化合物是选自由水杨酸、阿司匹林、甲芬 那酸、托芬那酸、氟灭酸、双氯芬酸、舒林酸、联苯丁酮酸、吲哚美辛、阿西美辛、氨芬酸、依托 度酸、联苯乙酸、布洛芬、氟比洛芬、酮洛芬、萘普生、普拉洛芬、非诺洛芬、噻洛芬酸、奥沙普 嗪、洛索洛芬、阿明洛芬、扎托洛芬、吡罗昔康、替诺昔康、氯诺昔康、美洛昔康、噻拉米特、托 美汀、二氟尼柳、醋氨酚、氟喹氨苯酯、替诺立定和阿克他利组成的组中的化合物的残基。5.如上述1 4中任一项所述的透明质酸衍生物，其中，间隔物是分别至少具有1 个以上的与透明质酸键合的官能团及与抗炎症化合物键合的官能团的化合物。6.如上述1 5中任一项所述的透明质酸衍生物，其中，间隔物选自碳数2 18 的二氨基烷烃、可以具有取代基的碳数2 12的氨基烷基醇及氨基酸。
7.如上述1 6中任一项所述的透明质酸衍生物，其中，透明质酸的重均分子量为 500，000 3，000，000。8.如上述1 7中任一项所述的透明质酸衍生物，其中，每个透明质酸的重复2糖 单元导入了 5 50摩尔％的抗炎症化合物。9. 一种透明质酸衍生物，通过非留类抗炎症化合物用共价键结合在透明质酸上 而得到，其中，导入了该抗炎症化合物的透明质酸组成二糖单元每个的部分结构，用下述式 ⑴表示Y-CO-NH-R-^-R2)^!)Y-C0-表示透明质酸的组成二糖单元1残基，R2表示用Z-C0-表示的非留类抗炎 症化合物残基或氢原子(其中，不包括全部为氢原子的情况)、-HN-R1-^-、表示用含有n 个羟基的！！力-！^-⑴！！^表示的间隔物化合物的间隔物残基，R1表示可以具有取代基的碳数 2 12的直链或具有分支的烃基，-C0-NH-表示作为透明质酸的组成糖的葡糖醛酸的羧基 和间隔物化合物具有的氨基的酰胺键，-0-C0-表示间隔物化合物具有的羟基和非留类抗炎 症化合物残基具有的羧基的酯键；n表示1 3的整数；另外，该透明质酸衍生物中的非甾 类抗炎症化合物的导入率为每个透明质酸的重复二糖单元5 50摩尔％，构成透明质酸衍 生物的透明质酸残基中的羰基，根据非类固醇抗炎症化合物残基的导入率，作为参与与该 间隔物结合的抗炎症化合物残基的键合的酰胺键或者作为不参与与该间隔物结合的抗炎 症化合物残基的键合的游离的羧基存在。10.如上述9所述的透明质酸衍生物，其中，非留类抗炎症化合物是用下述式(2)
表示的化合物。
,3
R、
^V^COOH
(2)R3表示选自低级烷基及低级烷氧基的取代基或氢原子；R4、R5及R6分别独立地表 示选自由低级烷基、低级烷氧基及羟基组成的组中的取代基、卤原子或氢原子；X分别独立 地相同或不同，表示选自低级烷基及三氟甲基的取代基或卤原子，至少X的任一个是卤原 子。11.如上述10所述的透明质酸衍生物，其中，非留类抗炎症化合物是双氯芬酸或 其衍生物。12.如上述9 11中任一项所述的透明质酸衍生物，其中，所述式(1)中的R1是
可以具有取代基的亚乙基、三亚甲基或亚丙基。13.如上述1 12中任一项所述的透明质酸衍生物，其通过包括使透明质酸和间 隔物结合的抗炎症化合物反应或者使间隔物结合的透明质酸与抗炎症化合物反应，然后使
6该反应液成为碱性条件的工序的方法可以得到。14.如上述1 13中任一项所述的透明质酸衍生物，其特征在于，将所述透明质酸 衍生物以1. 0重量％溶解在水性介质中得到的溶液，在温度为24°C的条件下，在5. Okg/cm2 的加压下，可以1分钟通过多孔过滤器(孔径(孔隙大小)0. 4511111、直径25111111)21^以上。15.如上述1 13中任一项所述的透明质酸衍生物，其特征在于，将所述透明质 酸衍生物以1. 0重量％溶解在水性介质中得到的溶液，在温度24°C的条件下，在5. Okg/cm2 的加压下，可以1分钟通过多孔过滤器(孔径(孔隙大小)0. 2211111、直径25111111)21^以上。16. 一种利用注入装置可以推出的透明质酸衍生物溶液，通过上述1 15中任一 项所述的透明质酸衍生物溶解在水性介质中而得到。17.如上述16所述的透明质酸衍生物溶液，其中，水性介质是选自磷酸缓冲生理 盐水、生理盐水及注射用水的水性介质。18.如上述17所述的透明质酸衍生物溶液，其被过滤灭菌。19. 一种药剂，其含有上述1 15中任一项所述的透明质酸衍生物作为有效成分。20.如上述19所述的药剂，其是关节炎处置剂、抗炎症剂或镇痛剂。21.如上述19或20所述的药剂，其是非经口给药用。22.如上述21所述的药剂，其是局部给药用的注入剂。23.如上述21或22所述的药剂，其是关节给药用的注入剂。24. 一种利用注入装置可以推出的药剂，其含有上述1 15中任一项所述的透明 质酸衍生物作为有效成分，并且由在水性介质中溶解了该透明质酸衍生物的溶液构成。25. 一种透明质酸衍生物注入用试剂盒，通过上述16 18中任一项所述的透明质 酸衍生物溶液填充在可以推出该溶液的注入装置中而得到。26.如上述25所述的试剂盒，其中，填充的溶液是权利要求19 24中任一项所述 的药剂。27. 一种医疗用注射剂试剂盒，通过将在药学上容许的磷酸缓冲生理盐水、生理盐 水或注射用水中溶解有上述1 15中任一项所述的透明质酸衍生物的溶液填充在注射筒 中，并用药剂推出用柱塞可以滑动地密封而得到。28. 一种由具有在生物体内可以分解的部位的间隔物和抗炎症化合物共价键合而 成的衍生物。29.如上述28所述的衍生物，其中，具有在生物体内可以分解的部位的间隔物是
二氨基烷烃、氨基烷基醇或氨基酸的残基。30.如上述28或29所述的衍生物，其中，具有在生物体内可以分解的部位的间隔 物是对1分子该间隔物可以键合2个以上抗炎症化合物的化合物的残基。31.如上述28 30中任一项所述的透明质酸衍生物，其中，抗炎症化合物是选自 由水杨酸、阿司匹林、甲芬那酸、托芬那酸、氟灭酸、双氯芬酸、舒林酸、联苯丁酮酸、喷哚美 辛、阿西美辛、氨芬酸、依托度酸、联苯乙酸、布洛芬、氟比洛芬、酮洛芬、萘普生、普拉洛芬、 非诺洛芬、噻洛芬酸、奥沙普嗪、洛索洛芬、阿明洛芬、扎托洛芬、吡罗昔康、替诺昔康、氯诺 昔康、美洛昔康、噻拉米特、托美汀、二氟尼柳、醋氨酚、氟喹氨苯酯、替诺立定和阿克他利组 成的组中的化合物的残基。32.如上述28 31中任一项所述的衍生物，其中，共价键是酯键或酰胺键。
33.如上述32所述的衍生物，其用下述式(3)表示^N-Ri-^-R2、 (3)其中，R2表示用Z-C0-表示的非留类抗炎症化合物残基或氢原子(其中，不包 括全部是氢原子的情况)，^N-R1-^-、表示用含有n个羟基的Hp-R^OH、表示的间隔 物化合物的间隔物残基，R1表示可以具有取代基的碳数2 12的直链或具有分支的烃 基，-o-co-表示间隔物化合物具有的羟基和非留类抗炎症化合物残基具有的羧基的酯键； n表示1 3的整数。34. 一种透明质酸衍生物制造方法，所述透明质酸衍生物是通过具有在生物体内 可以分解的部位的间隔物，抗炎症化合物用共价键结合在透明质酸上而得到的，该方法的 特征在于，使透明质酸和间隔物结合的抗炎症化合物反应，或者使间隔物结合的透明质酸 和抗炎症化合物反应。35.如上述34所述的透明质酸衍生物制造方法，其特征在于，包括在碱性条件下 处理透明质酸和间隔物结合的抗炎症化合物的反应生成物或间隔物结合的透明质酸和抗 炎症化合物的反应生成物的溶液的工序。通过本发明，提供一种透明质酸衍生物，通过具有在生物体内可以分解的部位的 间隔物，抗炎症化合物通过共价键结合在透明质酸上而得到，特别是非留类抗炎症化合物 通过共价键结合的非留类抗炎症化合物导入的透明质酸衍生物(下面，也叫作本发明的物 质1)；同样提供改善病情抗风湿化合物用共价键结合的改善病情抗风湿化合物导入的透 明质酸衍生物(下面，也叫作本发明物质2，另外，前述的本发明物质1和本发明物质2加在 一起，叫做本发明物质)，以及含有这些衍生物作为有效成分的药剂(下面，也叫本发明药 剂)。本发明的物质，由于易于溶解在作为注射剂等的溶剂使用的缓冲液、生理盐水、注射用 水等中，故可以作为可以在患部直接给药的注射剂使用。另外，本发明药剂，可以用于关节 炎的治疗、炎症的抑制及疼痛的抑制，也可以作为注入剂非经口给药或局部给药(例如关 节内给药)。


[图1]是表示对大鼠缓激肽引起疼痛模型的疼痛评分图。[图2]是表示对大鼠硝酸银溶液引起疼痛模型的疼痛评分图。[图3]是表示对大鼠硝酸银溶液引起疼痛模型的荷重加载率(％)的图。[图4]是表示通过对兔膝关节进行氨基丙醇酮洛芬导入的透明质酸钠(KP-HA)、 酮洛芬和HA混合及酮洛芬的给药兔膝关节内的历时残存率的图。[图5]是表示导入率(DS)不同的氨基丙醇双氯芬酸导入的透明质酸钠对大鼠 1 %硝酸银溶液引起疼痛模型的效果图。[图6]是表示对大鼠硝酸银溶液引起疼痛模型的双氯芬酸钠经口给药产生的 效果图。[图7]是表示双氯芬酸单剂、透明质酸对大鼠硝酸银溶液引起疼痛模型的效 果图。[图8]是表示氨基丙醇双氯芬酸导入的透明质酸(65kDa)钠、二氨基丙烷-双氯 芬酸导入的透明质酸钠及氨基乙醇-双氯芬酸导入的透明质酸钠对大鼠硝酸银溶液引起疼痛模型的效果比较图。[图9(a)]是表示双氯芬酸钠单剂及双氯芬酸导入的透明质酸衍生物对C0X-2的 作用(体外)图。[图9(b)]是表示透明质酸钠单剂及双氯芬酸导入的透明质酸衍生物对C0X-2的 作用(体外)图。[图10(a)]是表示对大鼠佐剂性关节炎(AIA)模型的佐剂给药足中通过双氯芬酸 导入的透明质酸衍生物的给药引起的效果图。[图10(b)]是表示相对大鼠佐剂性关节炎(AIA)模型的佐剂非给药足中通过双氯 芬酸导入的透明质酸衍生物的给药引起的效果图。
具体实施例方式下面，通过发明的实施方式详细地说明本发明。本发明物质是通过具有在生物体内可以分解的部位的间隔物，抗炎症化合物用共 价键结合在透明质酸上的透明质酸衍生物。在本发明中，所谓抗炎症化合物，选自非留类抗 炎症化合物(NSAID或NSAIDs)及改善病情抗风湿化合物。需要说明的是，“NSAIDs”用于总称多种化合物分类的非甾类抗炎症化合物的情 况，“NSAIDs”也有时指各自的非甾类抗炎症化合物的情况，在本发明书中不是特别严格地 分开使用。本发明物质1是非留类抗炎症化合物用共价键结合着的透明质酸衍生物，示意结 构用如下的通式(4)表示。HA-SP-NSAID (4)(HA表示透明质酸链，SP表示间隔物残基，NSAID表示非留类抗炎症化合物残基， 并且，_表示共价键)另外，本发明物质2是改善病情抗风湿化合物用共价键结合着的透明质酸衍生 物，示意结构用如下通式(5)表示。HA-SP-DMARD (5)(HA表示透明质酸链，SP表示间隔物残基，DMARD表示改善病情抗风湿化合物残 基，并且，-表示共价键。)本发明物质在水性溶剂中可以溶解，其溶液是具有粘性的溶液。在此，所谓“水性溶剂”，是指水、含有水的缓冲液、药学上容许的金属盐、pH调节剂 等的水溶液、缓冲液等，具体地例如有注射用水、磷酸缓冲生理盐水、生理盐水等。在本发明物质中使用的透明质酸，只要是以N-乙酰基-D-葡糖胺和D-葡糖醛酸 用日1，3键结合的二糖单元为基本骨架，该二糖单元重复并通过日1，4键结合而构成的葡 萄糖胺基葡聚糖，即通常使用的透明质酸，就没有特别限定。另外，通过来自动物、微生物及 化学合成等任意方式得到的透明质酸都可以使用。透明质酸的重均分子量没有特别限定，例如可以列举10，000 5，000, 000。优选 500, 000 3，000，000、更优选为作为关节炎治疗剂使用的规格600，000 1，500，000及 1，500，000 3，000，000。另外，本发明中使用的透明质酸可以是不形成盐的游离的状态，还可以是药学上(6)进一步特别优选使用用下述式(2)表示的化合物。
R3
(2)R3表示选自低级烷基及低级烷氧基的取代基或氢原子。R4、R5及R6分别独立地表
示选自由低级烷基、低级烷氧基及羟基组成的组中的取代基、卤原子或氢原子。X分别独立
地相同或不同，表示选自低级烷基及三氟甲基的取代基或卤原子，至少X的任何一个是商 原子。另外，上述的低级烷基及低级烷氧基优选可以具有分支的碳数1 12的低级烷基及 低级烷氧基，更优选可以具有分支的碳数1 6的低级烷基及低级烷氧基。另外，在R3键合的苯环中将羧甲基设定为第1位，将氨基残基设定为2位时，R3优
能容许的盐的状态。所谓透明质酸药学上能容许的盐的状态，例如有钠盐、钾盐之类的碱金 属离子盐及镁盐、钙盐之类的碱土金属离子盐等。在适用于生物体的药剂等中使用透明质 酸衍生物时，由于对生物体的亲和性特别高，故使用的透明质酸盐优选药学上容许的碱金 属离子盐，其中特别优选钠离子盐。作为本发明中的抗炎症化合物之一的NSAIDs，通常指被称为非甾类抗炎症剂的全 部化合物，没有特别限定，但其中特别优选适用于关节炎的化合物。目前作为NSAIDs的分 类法，有根据化学结构中的骨架的不同进行的分类。如果本发明中适用的NSAIDs按每种分 类举例，则作为水杨酸类NSAIDs有水杨酸、阿司匹林等，作为芬那酸类NSAIDs有甲芬那酸、 托芬那酸、氟芬那酸等，作为芳基醋酸类NSAIDs有双氯芬酸、舒林酸、联苯丁酮酸、吲哚美 辛、阿西美辛、氨芬酸、依托度酸、联苯乙酸等，作为丙酸类NSAIDs有布洛芬、氟比洛芬、酮 洛芬、萘普生、普拉洛芬、非诺洛芬、噻洛芬酸、奥沙普嗪、洛索洛芬、阿明洛芬、扎托洛芬等， 作为昔康类NSAIDs有吡罗昔康、替诺昔康、氯诺昔康、美洛昔康等，作为其它的NSAIDs有噻 拉米特、托美汀、二氟尼柳、醋氨酚、氟喹氨苯酯、替诺立定等。作为在本发明中使用的NSAIDs，优选在其化学结构中具有羧基、羟基、氨基等的官 能团的NSAIDs。本发明物质1，由于可以根据这些NSAIDs具有的官能团选择间隔物的官能 团，故没有特别限定，但特别优选使用至少具有羧基的NSAIDs。其中，更优选适用具有用下述式(6)表示的骨架的化合物。
(T^^COOH
10选在5位的位置上键合。作为用上述式⑵表示的化合物，例如可以列举W099/11605中所述的化合物，该 公报的记载内容通过弓I用并入本说明书。另外，NSAID具有的羧基可以是游离型，也可以形成盐。本发明中抗炎症化合物之一的DMARD，通常指作为抗风湿病剂被使用的全部药剂， 没有特别限定，但优选在其化学结构中含有羧基、羟基、氨基、巯基等官能团的DMARD。作为 DMARD，例如可以列举阿克他特、甲氨喋呤、柳氮磺胺嘧啶、布西拉明等。另外，作为本发明中的抗炎症化合物，例如有上述说明的NSAID及DMARD，但其中 优选具有羧基的化合物。另外，通过根据上述的NSAIDs及DMARD含有的官能团选择间隔物的官能团，可以 用希望的结合方式导入透明质酸。另外，本发明物质，不一定必须导入1种NSAIDs或DMARD， 也包含导入2种以上的NSAIDs或DMARD的透明质酸衍生物。用前述的SP表示的间隔物，是具有在生物体内可以分解的部位的间隔物，是分别 至少具有1个以上与透明质酸键合的官能团及与NSAIDs及DMARD键合的官能团的化合物 (下面，也叫作间隔物化合物)的残基。间隔物的在生物体内可以分解的部位，只要是由该 透明质酸衍生物游离的NSAIDs及DMARD具有效果就没有限定，但优选在NSAIDs及DMARD 和间隔物的键合部位被分解。间隔物化合物的官能团，通过与各个透明质酸及NSAIDs或DMARD的结合方式可 以有种种选择。例如通过与透明质酸的羧基的酰胺键导入间隔物时，可以选择具有氨基的 间隔物化合物；通过与透明质酸的羧基的酯键导入时，可以选择具有羟基的间隔物化合物； 通过与透明质酸的羟基的酯键导入时，可以选择具有羧基的间隔物化合物。此时，根据导入透明质酸的难易程度及在生物体内的稳定性，具有可以通过酰胺 键导入透明质酸的羧基上的氨基的间隔物化合物作为优选的方式之一。同样，与NSAIDs或DMARD键合的间隔物化合物的官能团，也可以根据NSAIDs或 DMARD具有的官能团进行选择。例如，在具有羟基的NSAIDs或DMARD的情况下，如果选择具 有羧基的间隔物化合物，则可以利用酯键结合；在具有羧基的NSAIDs或DMARD的情况下，如 果选择具有羟基的间隔物化合物，则可以利用酯键结合，如果选择具有氨基的间隔物化合 物，则可以利用酰胺键结合；在具有巯基的NSAIDs或DMARD的情况下，如果选择具有羧基的 间隔物化合物，则可以利用硫酯键结合。这种情况下，考虑在生物体内分解的难易程度，优选具有可以用酯键与NSAIDs或 DMARD键合的官能团的间隔物化合物，进一步特别优选用酯键与NSAIDs或DMARD的羧基和 间隔物化合物的羟基键合。间隔物化合物，如上所述，可以根据透明质酸及NSAIDs或DMARD的特性进行适当 选择，例如可以列举碳数2 18的二氨基烷烃、可以具有取代基的碳数2 12的氨基烷 基醇、氨基酸等。作为氨基酸，可以是天然、非天然的氨基酸，没有特别限定，但优选甘氨酸、
丙氨酸、氨基丁酸。如上所述，在考虑了与透明质酸及NSAIDs的结合方式的情况下，作为间隔物化合 物的优选例之一，例如可以列举可以具有取代基的碳数2 12的氨基烷基醇。另外，在1分子中具有2个以上与NSAIDs或DMARD键合的这些官能团的间隔物化
11合物(下面，也叫作多价间隔物化合物)也可以。选择多价间隔物化合物时，在1个间隔物中可以同时结合多个NSAIDs或DMARD。 因此，对于导入NSAIDs或DMARD的透明质酸的官能团，例如1个羧基，可以同时导入多个 NSAIDs或DMARD。作为这些多价间隔物化合物的例子，例如有丝氨醇及其衍生物、丝氨酸 衍生物、苏氨酸衍生物、2-氨基-1，5-戊二醇及其衍生物、3-氨基-1，2-丙二醇及其衍生 物、三(羟甲基)氨基甲烷及其衍生物，Bis-Homotris及其衍生物。使用该多价间隔物化合物的优点在于不使多个有助于透明质酸亲水性的羧基及 羟基参与取代反应，可以导入更多的NSAIDs或DMARD，故虽然导入很多NSAIDs或DMARD，但 仍可以更加保持亲水性即对水性介质的可溶性。本发明物质的合成方法，只要是可以得到如上所述的本发明物质的方法就没有特 别限定。另外，一般来讲，在透明质酸上导入了化合物的透明质酸衍生物中，由于透明质酸 具有的羧基及羟基参与化合物的结合，故伴随物质的导入率的上升，透明质酸衍生物的亲 水性降低。作为本发明物质1的合成方法之一例，例如可以列举有如下特征的方法通过具 有在生物体内可以分解的部位的间隔物在透明质酸上导入NSAIDs的导入反应后，进行碱处理。将上述导入反应后的反应溶液作成碱性的碱处理，只要是该溶液成为碱性的处理 就没有特别限定。具体地来讲，例如有将有机碱或无机碱的任何一种添加到该溶液中的方 法，但如果考虑以后的处理等，优选无机碱。而且，即使在无机碱中，与氢氧化钠之类的强碱 相比，从对透明质酸及NSAIDs产生影响的可能性低的方面考虑，更优选碳酸氢钠及碳酸钠 这样的弱碱。在此的碱处理的PH条件例如为7. 2 11，优选7. 5 10。碱处理的处理时间，只要对透明质酸的低分子化不产生影响就没有特别限定，例 如2 12小时，优选2 6小时，如果进行该时间的处理，则可以得到对透明质酸不产生影 响的可溶性的透明质酸衍生物。作为具体的一例，将导入了间隔物的NSAIDs衍生物与透明质酸反应后，在反应液 中加入例如碳酸氢钠等的弱碱，进行几小时搅拌处理，然后通过中和、乙醇沉淀、干燥等的 后处理，可以得到目的物可溶性的透明质酸衍生物。上述的方法，也可以适用于本发明物质2的合成，可以得到可溶性的本发明物质 2。另外，对于在透明质酸上导入间隔物及NSAIDs或DMARD的方法，在透明质酸上导 入间隔物后，在该间隔物键合的透明质酸上导入NSAIDs或DMARD的方法，或预先在NSAIDs 或DMARD上导入间隔物后，在透明质酸上导入该间隔物键合的NSAIDs或该间隔物键合的 DMARD的方法的任一种都可以，但优选后者的方法。分别使NSAIDs或DMARD、透明质酸及间隔物键合的方法没有特别限定，例如，只要 是可以完成酯键合、酰胺键合及硫酯键合等的方法，则作为进行该键合反应的手段，可以使 用一般使用的常规方法，即使与反应条件有关，本领域的技术人员也可以适宜地判断选择。另外，透明质酸和间隔物键合的NSAIDs或间隔物键合的DMARD，或与间隔物化合 物的键合，利用透明质酸的羧基或羟基的任一个都可以完成。但从官能团具有的反应性的
12高低来看，羧基可以容易地完成。作为实现这种键合的方法，例如使用水溶性碳化二亚胺等 (例如，1-乙基-3- (3- 二甲基氨基丙基)-碳化二亚胺盐酸盐(EDC1 -HC1)、1-乙基-3 (3- 二 甲基氨基丙基)碳化二亚胺甲碘化物等)等的水溶性的缩合剂的方法，使用N-羟基琥珀酰 亚胺(HOSu)及N-羟基苯并三唑(HOBt)等的缩合辅助剂和上述的缩合剂的方法，活性酯 法，酸酐法等。在这些当中，作为水性溶剂存在下的反应，优选使用水溶性的缩合剂的方法、 或使用缩合辅助剂和水溶性的缩合剂的方法，特别是从副反应的抑制这种观点来看，更优 选使用缩合辅助剂和水溶性的缩合剂的方法。这种透明质酸的羧基与间隔物键合的NSAIDs 或间隔物键合的DMARD、或与间隔物化合物的键合，优选用酯键或酰胺键进行，更优选用酰 胺键进行。本发明物质中的对透明质酸的NSAIDs或DMARD的导入率，在本发明物质的合成工 艺中，通过改变缩合剂、缩合辅助剂、间隔物键合的NSAIDs或间隔物键合的DMARD的投入量 可以调整。另外，导入率用使用吸光度的测定及HPLC、NMR等的方法可以测定。在本发明中，只要能保持该衍生物在水性介质中的可溶性，NSAIDs或DMARD的导 入率没有特别限定，但优选每个透明质酸的重复二糖单元为0. 1 80摩尔％，更优选5 50摩尔％。另外，以本发明物质作为医药品的有效成分使用时，考虑在患部的NSAIDs或 DMARD的有效浓度或缓释效率确定适合的导入率。如上所述，在透明质酸的羧基上导入间隔物键合的NSAIDs或间隔物键合的DMARD 时，羧基通过形成酰胺键或酯键就会降低、丧失其亲水性。作为解决该问题的手段之一，通过利用多价间隔物化合物，可以更加仍旧维持亲 水性，导入较多的NSAIDs或DMARD。例如，在间隔物化合物中使用具有3个羟基和1个氨基 的氨基三醇衍生物时，如果3个羟基上完全导入NSAIDs，则1分子间隔物就会导入3个分子 的NSAIDs。该氨基三醇键合的NSAIDs相对于透明质酸的羧基以例如20%的取代率(每个 透明质酸二糖单元的取代率)导入时，NSAIDs的导入率就成为所谓3倍的60%。而且，如上所述，作为本发明物质的合成方法之一例，例如，使用在用于合成抗炎 症化合物导入的透明质酸衍生物的导入反应后进行碱处理的方法时，保持得到的透明质酸 衍生物在水性介质中的溶解性。该溶解性的保持效果不需要过于考虑间隔物化合物的种类 及药剂的导入率等，另外，由于是简单的处理，故非常有用。概括上述的说明，例如作为具体的本发明物质1的适合的形态，例如有具有通过 下述式(1)表示的透明质酸组成二糖单元的透明质酸衍生物。另外，下述式(1)表示导入 了抗炎症化合物的N-乙酰基-D-葡萄糖胺和D-葡糖醛酸进行0 -1，3键合的透明质酸组 成二糖单元每个的部分结构。Y-C0-NH-R-(0-R2)n (1)Y-C0-表示透明质酸的组成二糖单元1残基，R2表示用Z-C0-表示的NSAIDS 基或氢原子(其中，不包括全部为氢原子的情况)、-HN-R1-^-、表示用含有n个羟基的 邸-！^-⑴！^表示的间隔物化合物的间隔物残基，R1表示可以具有取代基的碳数2 12的 直链或具有分支的烃基，-C0-NH-表示作为透明质酸的组成糖的葡糖醛酸的羧基和间隔物 化合物具有的氨基的酰胺键，-0-C0-表示间隔物化合物具有的羟基和NSAID具有的羧基的 酯键。n表示1 3的整数。需要说明的是，构成透明质酸衍生物的透明质酸残基中的羰 基，根据NSAID残基导入率，作为参与同该间隔物键合的抗炎症化合物残基的键合的酰胺键，或作为不参与的游离的羧基而存在。作为R1中的取代基，列举有烷基、烯基、芳基、烷氧基、酰基、羧基、卤素等，烷基、 烯基、烷氧基、酰基中的碳数优选为1 11，更优选为1 4，作为芳基优选苯基。例如作为 具有羧基取代基的间隔物化合物，例如有丝氨酸；作为具有羧基和甲基的间隔物化合物，例 如有苏氨酸。另外，根据上述式(1)，Y-C00H表示反应前的一个透明质酸组成二糖单元， ！！力-！^-⑴！！^表示反应前的间隔物化合物，H00C-Z表示反应前的NSAID。作为合成用上述式(1)表示的透明质酸组成二糖单元最适合的方法，例如有使间 隔物化合物和NSAID结合后，接着，使其与透明质酸反应的方法。概念性表示该反应如下所 述R^N-R1-(OH) n+HOOC-Z —(酯形成)—(脱保护)—HJ-R1-(0-R2) n
HA-R1- (0-R2) n+Y-COOH —Y-C0-NH-R1-(0-R2) nR7表示氨基保护基，作为保护基，可以使用作为氨基的保护基通常使用的保护基， 没有特别限定，例如有叔丁氧羰基、苄氧羰基、9-芴甲氧羰基之类的尿烷型保护基及甲酰 基、苯二甲酰基类的酰基型保护基，优选尿烷型保护基。另外，R1、R2及Z与前述意义相同。但是，上述是概念性表示反应途径的内容，如果是本领域技术人员，能考虑的有效 地进行反应的办法等省略。在上述式(1)中，R1更优选可以具有取代基的碳数2 5的直链或具有分支的烃 基，其中优选碳数为2或3的烃基，例如有亚乙基、三亚甲基或亚丙基等。另外，作为在上述式(1)中使用的NSAID，可以从如上所述的NSAID中选择。例如 进一步优选用下述式(7)表示的化合物。 R8表示选自低级烷基及低级烷氧基的取代基或氢原子，更优选可以具有分支的碳 数1 12的低级烷基或氢原子，其中更优选碳数1 4的低级烷基或氢原子。X\X2分别独立地表示选自低级烷基及三氟甲基的取代基或卤原子，至少任何一个 为卤原子，x\x2更优选相同或不同的卤原子，其中更优选选自氟原子或氯原子。另外，在R8键合着的苯环中，将羟基甲基设定为1位，将氨基残基设定为2位的情 况下，R8优选在5位的位置上键合。作为用上述式(7)表示的化合物的典型的例子，例如有用下述式⑶及(9)表示 的化合物。 例如，在合成使用式(9)表示的双氯芬酸的双氯芬酸导入的透明质酸衍生物时， 上述式(1)中的-C0-Z用下述式(10)表示。
(10)需要说明的是，双氯芬酸导入的透明质酸衍生物，具有非常强的镇痛作用、抗炎症 作用。作为具有用上述式(1)表示的透明质酸组成二糖单元的本发明物质中可以使用 的透明质酸，优选具有重均分子量50，000 3，000, 000的透明质酸，更优选具有重均分子 量50，000 2，000, 000的透明质酸。具有用上述式(1)表示的透明质酸组成二糖单元的本发明的物质中的NSAIDs的 导入率(DS)，每个透明质酸的重复二糖单元优选5 50摩尔％，更优选10 50 %。作为本发明物质的大的特征，例如有本发明物质在水性溶剂中是可以溶解的，即 是易水溶性的，当在本发明物质中添加水性溶剂时，不进行加温及增溶处理等而溶解。另 外，即使导入率高，例如5%以上，甚至为10%以上，也可以溶解。因此，在水性介质中使本 发明物质溶解的溶液是可以注入的液体状，并且，对过滤用过滤器具有通过性。顺便说一 下，如上所述，已知在具有高的亲水性的透明质酸上导入NSAIDs或DMARD那样的疏水性高 的药剂时，由于透明质酸分子自身的疏水性增大，故成为在水中半不溶的粘弹性高的胶状 或不溶物的形态，作为由注入装置推出的注入剂不合适。但是，本发明物质，例如，如上所述，通过在制造过程中进行碱处理，保持透明质酸 衍生物的溶解性，因此，可以形成对过滤用过滤器具有通过性的透明溶液。因此，本发明物质的溶液可以进行过滤器过滤，通过过滤器过滤可以除尘、除菌、
15灭菌。即，通过使其通过5 μ m或0. 45 μ m的过滤器，可以除尘、除菌，也可以更优选通过使 其滤过0. 22 μ m的过滤器进行灭菌。更具体地来讲，在水性介质中以1.0重量％溶解本发明物质得到的溶液，优选在 温度24°C的条件下，在5. Okg/cm2的加压下，可以1分钟通过多孔过滤器(孔径(孔隙大 小)0· 45口111、直径25謹)21^以上。另外，在水性介质中以1.0重量％溶解本发明物质得到的溶液，进一步优选在与 上述同样的条件下，在5. Okg/cm2的加压下，可以1分钟通过多孔过滤器(孔径(孔隙大 小)0. 22ym,l;@25mm) 2mL 以上。如后所述，作为将本发明物质应用于生物体(哺乳动物、特别优选人)的药剂使用 时，由于除尘及杀菌、灭菌为必需项目，故本发明物质的这种特征是非常有用的。另外，在通 过加热及紫外线照射等的灭菌中，担心透明质酸衍生物的分解及低分子化等，但在过滤灭 菌中，可以避免出现那样的问题。所谓本发明药剂，是含有本发明物质即透明质酸衍生物作为有效成分的药剂。本 发明药剂有效地利用如上所述的本发明物质的特性，可以得到利用注射装置(注入装置) 等可以推出的形态，也可以作为在水性介质中溶解了本发明物质的溶液利用。例如，以生物 体内可以给药的生理盐水、磷酸缓冲生理盐水或注射用水作为溶剂，含有0. 1重量％ 10 重量％的本发明物质浓度的溶液。该溶液优选不混浊、并且是透明的。如上所述，本发明药剂，可以通过过滤器过滤进行除尘、除菌、灭菌，通过使其进行 5 μ m或4. 5 μ m的过滤器过滤也可以除尘灭菌，也可以通过使其进行0. 22 μ m的过滤器过滤 进行灭菌。而且，本发明药剂，在不影响本发明药剂具有的可以过滤灭菌这样的优点的范围 内，本发明物质也可以与制药上能容许的载体组合在一起使用。这样制备的本发明药剂，可以应用过滤灭菌，并且，优选为某种程度上具有粘弹性 的状态。本发明药剂，可以作为非经口给药用药剂及局部给药用药剂使用。作为在非经口 给药及局部给药中使用的形态，例如优选在水性溶剂中溶解了上述的本发明物质的溶液， 优选注射及注入等给药方法(在说明书中，“注入”也有包含“注射”的情况)。通过注入， 进行局部给药，由此可以避免在消化器官中的副作用。另外，由于也可以避免消化器官引起 的代谢，故可以通过经口给药使给药量减少，进一步也可以避免由大量的经口给药引起的 全身性中毒的问题。在注射及注入等中使用的推出装置，可以使用通过推出填充的药剂达到给药目的 的通常使用的注射器及注入装置等器具。另外，也可以提供本发明药剂及本发明物质的溶液填充在具备有药剂推出用柱塞 等的可以推出的注入装置内的试剂盒。另外，该试剂盒可以将在医学上容许的磷酸缓冲生 理盐水、生理盐水或注射用水中溶解了本发明物质的溶液填充到注射筒内，做成用药剂推 出用柱塞可以滑动地密封而成的医用注射剂试剂盒。需要说明的是，药剂推出用柱塞可以 使用通常使用的柱塞，但要通过橡胶或合成橡胶等形成，且可以滑动的以密合状态插入注 射器中。另外，在试剂盒中，也可以含有用于推进柱塞、推出药剂用的柱塞棒。本发明药剂的所对疾患、给药途径没有特别限定，优选可以用作以关节炎的处置、 炎症的抑制及疼痛的抑制等为目的的处理剂(下面，也叫做本发明处理剂)。需要说明的是，在本说明书中，所谓“处理剂”」不仅是仅用于治疗的“治疗剂”，也包含为了预防及缓和 炎症的目的而使用的药剂。本发明处理剂，如下所述，不仅具有NSAIDs等的抗炎症化合物的缓释作用及药物 输送系统(Drug Delivery System)作用，而且在关节炎的处置中，除由抗炎症化合物产生 的治疗效果以外，同时也可以期待由目前在临床中使用的透明质酸制剂产生的对关节炎的 效果。另外，本发明处置剂的给药量，应是按照给药途径、给药形态、使用目的、成为给药 对象的动物的具体的症状、年龄、体重等，要达到最适当地发挥治疗效果来分别决定的项 目，没有特别限定。例如，人用的注射剂的情况下，作为透明质酸衍生物，成人1人1次约 Img 约1，OOOmg,优选约5mg 约500mg，更优选约IOmg 约lOOmg。但是对于本发明处置 剂的药效强度，由于通常认为作为有效成分的本发明物质中所使用的NSAIDs或DMARD本身 具有的药效强度影响较大，因此，不一定限于上述范围是合适，必须考虑换算为NSAIDs或 DMARD单一物质的用量进行设定。另外，如后述的实施例中例示的那样，本发明药剂与给药 NSAIDs单一物质的情况不同，由于在给药部位稳定地、而且持续地存在，故也需要考虑这一 点而设定。本发明处置剂的适用部位只要是通过非经口给药可以给药的部位就没有特别限 定，但其中优选关节，特别优选膝关节、肩关节、股关节、颚关节等。特别优选适用于变形性 膝关节症(OA)及风湿性膝关节炎(RA)。另外，将本发明药剂作为处置剂使用时，如上所述，作为对关节的注入(注射)齐U， 可以适宜地选择适合的浓度，但作为溶液的浓度，优选0. 3 3. 0重量％，更优选0. 5 1. 5
重量％。作为本发明药剂的最优选的1个形态例如有以下的构成。NSAID 用上述式⑵表示的化合物间隔物及结合形态氨基烷基醇与NSAIDs通过酯键键合、与透明质酸通过酰胺键 键合。透明质酸的分子量重均分子量500，000 3，000, 000NSAIDs的导入率每个透明质酸2糖单元5 50摩尔％浓度及溶剂0. 3 3. 0重量％浓度的磷酸缓冲生理盐水溶液提供状态以灭菌状态填充在注射器中。而且，作为NSAID，更优选用上述式(7)表示的化合物，进一步优选用上述式(8)及 上述式(9)表示的化合物，其中双氯芬酸或其衍生物更优选。作为间隔物更优选选自氨基
丙基醇或氨基乙基醇。作为导入率，更优选每个透明质酸二糖单元10 50摩尔％。另外可以进行5μπι或0.45μπι的过滤器过滤，进一步来讲，最优选可以进行 0. 22 μ m的过滤器过滤。如在后述的实施例中例示的那样，本发明药剂特别适合作为关节炎的处置剂，特 别是作为关节炎处置用的关节注入剂而使用。例如，在关节腔内直接注入NSAIDs等的低分 子化合物时，由于这些化合物直接通过滑膜向血中转移，不能期待很大的效果。另一方面，在将作为本发明的物质的用共价键导入了 NSAIDs的NSAIDs导入的透明质酸衍生物的溶液给药至关节腔内时，如上所述，虽然低分子化合物单一物质在滑膜中 代谢快，但如后述的实施例所例示的那样，在滑膜组织中NSAIDs仍持续存在。推测出如通 常所知由于透明质酸对滑膜具有亲和性，故本发明药剂以透明质酸和NSAIDs结合着的状 态程度滞留在滑膜内，缓慢地进入组织或细胞后，NSAIDs从透明质酸脱离、起作用。也就是 推测为在本发明药剂的给药中，由于NSAIDs不立即转移至血中，在关节液及滑膜组织中 NSAIDs持续地存在，故显示持续的效果。由此，本发明药剂优选透明质酸与间隔物化合物的键合比NSAIDs和间隔物的键 合对在生物体内的分解显示耐性。另外，优选的形态为，NSAIDs和间隔物化合物的键合部 分在关节腔内不被分解，被移入到滑膜后，在滑膜组织中被分解。通过改变NSAIDs和间隔 物化合物及透明质酸和间隔物化合物的键合方式，可以改变对生物分解的耐性，由此也可 以控制脱离难易度及脱离速度。例如，考虑在生物体内引起的水解情况，酯键比酰胺键易受 分解。因此，选择与透明质酸通过酰胺键键合、与NSAIDs通过酯键键合的间隔物时，酯键易 受水解，受到水解的本发明物质脱离NSAIDs，产生作用。本发明药剂，也可以是缓释药剂。另外，在后述的实施例中，将透明质酸和间隔物化合物用酰胺键键合，NSAIDs和间 隔物化合物通过酰胺键或酯键键合的本发明物质2种进行各种给药后，NSAIDs和间隔物化 合物进行酯键合的本发明物质的一方显示更显著的疼痛抑制效果。对伴随NSAIDs引起的关节炎的炎症及疼痛的抑制，已知由目标细胞内的环加氧 酶(COX)阻碍活性引起的前列腺素的生成抑制为机理。使用作为用于C0X-2阻碍作用评价 的通用方法的 Chemiluminescent COX Inhibitor screening Assay Kit (Cayman 社制)进 行了本发明物质的评价。其结果，即使在NSAIDs单一物质明显地显示C0X-2阻碍作用的给 药量和含有与以NSAIDs换算的单一物质给药量相当的量的NSAIDs的本发明物质1的给药 量中，本发明物质1也没有确认有C0X-2阻碍作用。通过该体外的评价，明确地推测各种条件及状态对参与的生物体内给药中的行 为不能一概适用，但本发明药剂，在作用部位中脱离NSAIDs的一方更适合。另外，本发明物质由于是低分子化合物，故在单独给药时在生物体内代谢快，作为 已知难以有效地向目标部位(细胞)输送的NSAIDs或DMARD的药物运载输送系统(DDS) 基材也是有用的。以本发明的NSAIDs或DMARD导入的透明质酸衍生物的形态，将NSAIDs 或DMARD输送到目标物细胞，进一步使其以该形态移入到细胞内，在目标部位使其持续地 存在，这对降低代谢的影响，得到效率良好的效果是非常重要的。通过使用本发明物质，由于与药剂的单独给药相比，在给药部位中会有效地保持 对治疗有效的药剂量，故可期待用比经口给药更微的量而得到更强的治疗效果。另外，由于 效果的缓释性及持续性的提高也可以追求，故在临床中减少给药次数等也可以期待。
实施例下面，通过实施例具体地说明本发明。但是，不由此限定本发明的技术范围。另外，在下面的实施例中，透明质酸及透明质酸钠全部使用生化学工业株式会社 制的制品。下面，只要是不特别说明，在下面的实施例中作为磷酸缓冲生理盐水(PBS)，是使 用 5mM 的 PBS。
<试验例 > 过滤器通过性试验以1. 0重量％配制溶解有被检物质的PBS。在24°C条件下、在5. Okg/cm2的加压 下、使由下述实施例配制成的被检物质的溶液通过0. 45 μ m多孔过滤器(直径25mm)，测定 每分钟的通过量(mL)。在通过2mL以上时用“Α”表示，在通过不足2mL时用“B”表示，在不 通过时用“C”表示。〈制造例〉(参考例1)叔丁氧羰基-氨基丙醇(Boc-NH(CH2) 30H) (Boc-氨基丙醇)的合成将氨基丙醇1. 542g(20. 5mmol)溶解在IOmL 二氯甲烷中，在冰冷却下将二 -叔丁 基_ 二碳酸酯(Boc2O) 4. 484g(20. 5mmol) / 二氯甲烷溶液IOmL缓慢滴下。然后将反应液返 回到室温，搅拌2小时40分种，用薄层色谱法(TLC)确认原料消失后，减压蒸馏二氯甲烷。 反应定量地进行，以回收量3. 92g得到油状物质。结构通过1H-NMR(⑶Cl3)鉴定。1H-NMR (500MHz , CDCl3) δ (ppm) = 1 · 4 6 (9H，s，B ο c)，1 · 6 6 (2 H， quant, -NHCH2CHaCH2O-)，3. 27 (3H, m, -NHCH2CH2CH2O-)，3. 66 (2H, m, -NHCH2CH2CHiO-)， 4. 91 (1H, br, CH2OH)(实施例1)氨基丙醇_酮洛芬盐酸盐的合成(I)Boc-氨基丙醇_酮洛芬的合成将Boc-氨基丙醇 2. 371g(13. 5mmol)和酮洛芬 3. 441g(13. 5mmol)(东京化成 工业株式会社制)溶解在14mL 二氯甲烷中，在冰冷却下依次加入4-二甲基氨基吡啶 (DMAP) 323mg(2. 6mmol)、水溶性碳化二亚胺盐酸盐(WSC1 'HCl) 2. 833g(14. 8mmol)/ 二氯甲 烷14mL。返回到室温，搅拌一昼夜后，减压蒸馏二氯甲烷，加入醋酸乙酯，依次用5%柠檬酸 2次，水、5%碳酸氢钠2次，水、饱和食盐水分液洗涤。用硫酸钠脱水干燥后，减压蒸馏醋酸 乙酯，以5. 430g(收率98% )得到标题化合物。结构通过1H-NMR(CDCl3)鉴定。1H-WR(SOC)MHz, CDCl3) δ (ppm) = 1. 43 (9H, s, Boc)，1. 54 (3H, d, -OCOCh(CH3)-)， 1. 77 (2H, quant, -NHCH2CH2CH2O-)，3. 09 (2H, m, -NHCHaCH2CH2O-)，3. 82 (1H, q, -OCOCH(CH3)-)， 4. 15 (2H, m, -NHCH2CH2CH2O-)，4. 69 (1H, br, -MiCH2-)，7. 42-7. 83 (9H, m,芳族 H)2)氨基丙醇_酮洛芬盐酸盐的合成在由上述得到的Boc-氨基丙醇-酮洛芬5. 330g(12.95mmol)中，在冰冷却下加入 4M盐酸/醋酸乙酯20mL，在冰冷却下搅拌15分钟，且在室温下搅拌2小时。用TLC确认 Boc-氨基丙醇-酮洛芬消失后，减压蒸馏溶剂，用二乙醚倾析残渣2次。然后进行减压干 燥，以回收量4. 569g定量得到标题物质。结构通过1H-NMR(⑶Cl3)鉴定。1H-NMR (500MHz, CDCl3) δ (ppm) = 1. 50 (5H, d, -OCOCH (CH1) -) , 2. 08 (2Η, m, -NHCH2CH2CH2O-), 3. 04 (2Η, br, -NHCHaCH2CH2O-), 3. 82 (1Η, q, -OCOCH(CH3) -) ,4. 16 (2Η, m, -NHCH2CH2CHaO-)，7. 36-7. 80 (9Η, m,芳族 H)，8. 20 (br, H3N1CH2-)(实施例2)氨基丙醇_酮洛芬导入的透明质酸钠的合成使重均分子量90万的透明质酸钠200mg(0. 5mmol/ 二糖单元)在水22. 5mL/ 二嗯 烷22. 5mL中溶解后，依次加入2M羟基琥珀酸亚胺(HOSu)水溶液0. 25mL、lmol/L WSCl -HCl 水溶液0. 25mL,由实施例1得到的0. 5M氨基丙醇-酮洛芬盐酸盐水溶液0. 5mL,搅拌一昼 夜。在反应液中加入5%碳酸氢钠水溶液3mL，搅拌3小时20分钟。在反应液中加入50% 醋酸86 μ L中和后，加入SOOmg氯化钠且搅拌。加入到200mL乙醇中且使其沉淀，将沉淀物
19用80%乙醇洗涤2次、乙醇洗涤2次、二乙醚洗涤2次，且在室温下减压干燥一晚上。得到 198mg的白色固体。利用HPLC算出的酮洛芬的导入率为15. 5%。将得到的物质使其以浓度 1. 0重量％溶解在PBS中，制成溶液，该溶液是无色透明的液体，过滤器通过性试验为“A”。(实施例3)氨基丙醇_酮洛芬导入的透明质酸钠的合成使重均分子量90万的透明质酸400mg(l. Ommol/ 二糖单元)在水45mL/ 二嗯焼 45mL 中溶解后，依次加入 HOSu 1. 66mmol/ 水 lmL、WSCl · HCl 0. 83mmol/ 水 lmL，由实施例 1得到的氨基丙醇_酮洛芬盐酸盐0. 83mmol/4mL,搅拌一昼夜。在反应液中加入碳酸氢钠 300mg/水lmL，搅拌3小时10分钟。在反应液中加入醋酸86 μ L中和后，加入400mg氯化 钠且搅拌。加入300mL乙醇且使其沉淀，将沉淀物用80%乙醇、乙醇、二乙醚各洗涤2次，且 在室温下减压干燥一晚上。得到246mg的白色固体。利用HPLC算出的酮洛芬的导入率为 26. 3%。将得到的物质使其以浓度1. 0重量％溶解在PBS中，制成溶液，该溶液是无色透明 的液体，过滤器通过性试验为“A”。(实施例4)氨基丙醇_萘普生盐酸盐的合成1) Boc-氨基丙醇_萘普生的合成将Boc-氨基丙醇350mg (2mmol)和萘普生462g (2mmol)(和光纯药工业株式 会社制)溶解在2mL 二氯甲烷中，在冰冷却下依次加入DMAP48mg(0. 4mmol)、WSCl · HCl 422g (2. 2mmol) / 二氯甲烷2mL。返回到室温，搅拌4小时50分钟后，减压蒸馏二氯甲烷，加 入醋酸乙酯，依次用5%柠檬酸2次，水、5%碳酸氢钠2次，水、饱和食盐水分液洗涤。用硫 酸钠脱水干燥后，减压蒸馏醋酸乙酯，以720mg(收率93% )的白色结晶得到标题化合物。 结构通过1H-NMR (CDCl3)鉴定。1H-WR(SOC)MHz, CDCl3) δ (ppm) = 1. 42 (9H, s, Boc)，1. 58 (3H, d, -OCOCh(CH3)-)， 1. 75 (2H, quant, -NHCH2CH2CH2O-)，3. 07 (2H, m, -NHCH2CHaCH2O-)，3. 85 (1H, q, -OCOCH(CH3)-)， 3. 91 (3H, s, -OCH3)，4. 13 (2H, m, -NHCH2CH2CHaO-)，4. 63 (1H, br, -MiCH2-)，7. 09-7. 75 (6H, m, 芳族H)2)氨基丙醇_萘普生盐酸盐的合成将由上述得到的Boc-氨基丙醇-萘普生684mg(l. 76mmol)溶解在ImL 二氯甲烷 中，在冰冷却下加入4M盐酸/醋酸乙酯2mL，在冰冷却下搅拌20分钟，且在室温下搅拌1小 时。用TLC确认Boc-氨基丙醇-萘普生消失后，加入二乙醚，倾析3次。然后进行减压干 燥，以回收量564mg定量得到标题物质。结构通过1H-NMR(⑶Cl3)鉴定。1H-WR(SOC)MHz, CDCl3+CD30D) δ (ppm) = 1.57(3H, d, -OCOCH (CH3)-), 2. 02 (2H, quant, -NHCH2CHaCH2O-)，2. 88 (2H, m, -NHCH2CH2CH2O-)，3. 87 (1H, q, -OCOCH(CH3) -)，3. 90 (3H, s, -OCH3)，4. 17 (2H, m, -NHCH2CH2CHaO-)，7. 08-7. 73 (6H, m,芳族 H)，8. 10 (br, H3N1CH2-)(实施例5)氨基丙醇_萘普生导入的透明质酸钠的合成使重均分子量90万的透明质酸钠IOOmg(0. 25mmol/二糖单元)在水11. 5mL/二職 烷 11. 5mL 中溶解后，依次加入 HOSu (0. 2mmol)/水 0. lmL、WSCl · HCl (0. Immol)/水 0. ImL, 由实施例4得到的氨基丙醇-萘普生盐酸盐(0. Immol)/水0. 3mL，搅拌一昼夜。在反应液 中加入5%碳酸氢钠水溶液1. 5mL，搅拌3小时35分钟。在反应液中加入50%醋酸43 μ L 中和后，加入500mg氯化钠且搅拌。加入50mL乙醇使其沉淀，将沉淀物用80%乙醇洗涤2 次，用乙醇洗涤2次，用二乙醚洗涤，且在室温下减压干燥一晚上。得到95mg的白色固体。利用HPLC算出的萘普生的导入率为13. 1%。将得到的物质使其以浓度1.0重量％溶解在 PBS中，制成溶液，该溶液是无色透明的液体，过滤器通过性试验为“A”。(实施例6)氨基丙醇_布洛芬盐酸盐的合成DBoc-氨基丙醇_布洛芬的合成将Boc-氨基丙醇352mg(2mmol)和布洛芬412g(2mmol)(和光纯药工业株式 会社制)溶解在2mL 二氯甲烷中，在冰冷却下依次加入DMAP48mg(0. 4mmol)、WSCl · HCl 423g (2. 2mmol) / 二氯甲烷2mL。返回到室温，搅拌一昼夜后，加入醋酸乙酯，依次用5%柠檬 酸2次，水、5%碳酸氢钠2次，水、饱和食盐水分液洗涤。用硫酸钠脱水干燥后，减压蒸馏醋 酸乙酯，以665mg (收率91% )得到标题化合物。结构通过1H-NMR (⑶Cl3)鉴定。1H-NMR(500MHz, CDCl3) δ (ppm) = 0. 88 (6H, d, -CH(CH3I3) ,1. 44(9H, s, Boc)，
1.49 (3H, d, -OCOCH (CH1) -)，1. 75 (2H, m, -NHCH2CHaCH2O-)，1. 85 (1H，m, -CH2CH(CH3)2)，
2.45 (2H, d, -CH2CH(CH3)2) ,3. 05 (2H, m, -NHCH2CH2CH2O-), 3. 69 (1H, q, _0C0￡H(CH3)-)， 4. 13 (2H, t, -NHCH2CH2CH2O-)，4. 63 (1H, br, -MICH2-)，7. 07-7. 21 (4H, m,芳族 H)2)氨基丙醇_布洛芬盐酸盐的合成将由上述得到的Boc-氨基丙醇-布洛芬636mg(1.75mmol)溶解在ImL 二氯甲烷 中，在冰冷却下加入4M盐酸/醋酸乙酯4mL，在冰冷却下搅拌10分钟，且在室温下搅拌3小 时。用TLC确认Boc-氨基丙醇-布洛芬消失后，加入二乙醚，倾析3次。然后进行减压干 燥，以回收量406mg(77% )得到标题物质。结构通过1H-NMR(⑶Cl3)鉴定。1H-NMR (500MHz, CDCl3) δ (ppm) = 0. 89 (6H, d, -CH (CH1 “)，1 · 47 (3H， d, -OCOCH(CHg)-)，1. 83 (1H, m, -CH2CH(CH3) 2), 2. 08 (2H, quant, -NHCH2CHaCH2O-), 2. 44 (2H, d, -CH2HCH(CH3)2)，3. 01 (2H, t, -NHCH2CH2CH2O-)，3. 71 (1H, q, -OCOCH(CH3) -)，4. 11-4. 27 (2H, m, -NHCH2CH2CHaO-)，7. 06-7. 20 (4H, m,芳族 H)，8. 25 (br, H3N1CH2-)(实施例7)氨基丙醇_布洛芬导入的透明质酸钠的合成使重均分子量90万的透明质酸钠IOOmg(0. 25mmol/二糖单元)在水11. 5mL/二噁 烷 11. 5mL 中溶解后，依次加入 HOSu (0. 2mmol)/水 0. ImL, WSCl · HCl (0. Immol)/水 0. lmL、 由实施例6得到的氨基丙醇-布洛芬盐酸盐(0. Immol) /水0. 3mL,搅拌一昼夜。在反应液 中加入5%碳酸氢钠水溶液1. 5mL，搅拌3小时35分钟。在反应液中加入50%醋酸43 μ L 中和后，加入500mg氯化钠且搅拌。加入50mL乙醇使其沉淀，将沉淀物用80%乙醇洗涤2 次，用乙醇洗涤2次，用二乙醚洗涤，且在室温下减压干燥一晚上。得到93mg的白色固体。 利用HPLC算出的布洛芬的导入率为16.4%。将得到的物质使其以浓度1.0重量％溶解在 PBS中，制成溶液，该溶液是无色透明的液体，过滤器通过性试验为“A”。(实施例8)氨基丙醇-氟比洛芬盐酸盐的合成1) Boc-氨基丙醇_氟比洛芬的合成将Boc-氨基丙醇352mg(2mmol)和氟比洛芬489g(2mmol)(和光纯药工业株式 会社制)溶解在2mL 二氯甲烷中，在冰冷却下依次加入DMAP 48mg(0. 4mmol)、WSCl · HCl 423g (2. 2mmol) / 二氯甲烷2mL。返回到室温，搅拌一昼夜后，加入醋酸乙酯，依次用5%柠檬 酸2次，水、5%碳酸氢钠2次，水、饱和食盐水分液洗涤。用硫酸钠脱水干燥后，减压蒸馏醋 酸乙酯，以753mg (收率94% )得到标题化合物。结构通过1H-NMR (⑶Cl3)鉴定。
1H-WR(SOC)MHz, CDCl3) δ (ppm) = 1. 26 (9H, s, Boc)，1. 54 (3H, d, -OCOCh(CH3)-)， 1. 80 (2H, quant, -NHCH2CH2CH2O-)，3. 13 (2H, m, -NHCE,CH2CH20-)，3. 76 (1H, q, -OCOCH(CH3)-)， 4. 15 (2H, m, -NHCH2CH2CH2O-)，4. 66 (1H, br, -MICH2-)，7. 10-7. 55 (9H, m,芳族 H)2)氨基丙醇-氟比洛芬盐酸盐的合成将由上述得到的Boc-氨基丙醇-氟比洛芬720mg(l. 79mmol)溶解在ImL 二氯甲 烷中，在冰冷却下加入4M盐酸/醋酸乙酯4mL，在冰冷却下搅拌3分钟，且在室温下搅拌3 小时10分钟。用TLC确认Boc-氨基丙醇-氟比洛芬消失后，加入二乙醚，倾析2次。然后 进行减压干燥，以回收量352mg(94%)得到标题物质。结构通过1H-NMR(⑶Cl3)鉴定。1H-NMR (500MHz, CDCl3) δ (ppm) = 1. 51 (3H, d, -OCOCH(CH1) -) , 2. 10 (2Η, quant, -NHCH2CHaCH2O-) , 3. 05 (2H, t, -NHCHiCH2CH2O-) , 3. 76 (1Η, q, -OCOCH(CH3)-), 4. 13-4. 29 (2Η, m, -NHCH2CH2CH2O-)，7. 07-7. 53 (9Η, m,芳族 H)，8. 27 (br, H3N1CH2-)(实施例9)氨基丙醇_氟比洛芬导入的透明质酸钠的合成使重均分子量90万的透明质酸钠IOOmg(0. 25mmol/二糖单元)在水11. 5ml. .d恶 烷 11. 5mL 中溶解后，依次加入 HOSu (0. 2mmol)/水 0. ImL, WSCl · HCl (0. Immol)/水 0. lmL、 由上述实施例8得到的氨基丙醇-氟比洛芬盐酸盐(0. Immol)/水0. 3mL，搅拌一昼夜。在 反应液中加入5%碳酸氢钠水溶液1. 5mL，搅拌3小时35分钟。在反应液中加入50%醋酸 43 μ L中和后，加入500mg氯化钠且搅拌。加入50mL乙醇使其沉淀，将沉淀物用80%乙醇洗 涤2次，用乙醇洗涤2次，用二乙醚洗涤，且在室温下减压干燥一晚上。得到94mg的白色固 体。利用HPLC算出的氟比洛芬的导入率为21. 1%。将得到的物质使其以浓度1.0重量％ 溶解在PBS中，制成溶液，该溶液是无色透明的液体，过滤器通过性试验为“A”。(实施例10)氨基丙醇_乙酰水杨酸盐酸盐的合成1) Boc-氨基丙醇_乙酰水杨酸的合成将Boc-氨基丙醇(2. Ilmmol)、乙酰水杨酸(2. Ilmmol)(和光纯药工业 株式会社制)、DMAP(0.42mmol)溶解在二氯甲烷(2 l、6mL)中，在冰冷却下加入 WSCl · HCl (2. 35mmol)。返回到室温，搅拌一昼夜后，加入醋酸乙酯，依次用5%柠檬酸水溶 液、5%碳酸氢钠水溶液、饱和食盐水分液洗涤。用硫酸钠脱水干燥后，减压蒸馏醋酸乙酯。 将得到的残渣用硅胶柱色谱法(己烷醋酸乙酯=3 1,0. 5%三乙胺)纯化，得到标题化 合物(298. Omg、收率48% ) ο结构通过1H-NMR(CDCl3)鉴定。1H-NMR (500MHz, CDCl3) δ (ppm) = 1. 44 (9H, s, Boc) , 1. 90-1. 96 (2Η, m, BocHNCH2CHaCH2O-)，235 (3H, s, -COCHa)，3. 24-3. 28 (2H, m, BocHNCHaCH2CH2O-), 4. 35 (2H, t, BocHNCH2CH2CHaO-), 4. 78 (1H, s, NH)，7. 11 (1H, dd,芳族),7. 32 (1H, td,芳族)， 7. 55-7. 59 (1H，m，芳族)，8. 01 (1H，dd,芳族)2)氨基丙醇_乙酰水杨酸盐酸盐的合成将由上述得到的Boc-氨基丙醇-乙酰水杨酸(0. 814mmol)溶解在二氯甲烷(Iml) 中，在冰冷却下加入4N盐酸/醋酸乙酯(3ml)，搅拌2小时，用TLC确认Boc-氨基丙醇-乙 酰水杨酸消失后，加入二乙醚。将生成的沉淀进行离心分离，倾析上清液。得到的沉淀经减 压蒸馏得到标题化合物213. 9mg(96% )。结构通过1H-NMR(⑶Cl3)鉴定。1H-NMR (500MHz, CDCl3) δ (ppm) = 2. 22 (2H, t, H2NCH2CHaCH2O-) , 2. 35 (3Η, s, -COCH3)，3. 13 (2Η, t, H2NCH2CH2CH2O-)，4. 41 (2H, t, H2NCH2CH2CH2O-)，7. 09 (1H, dd,芳族)，7. 31 (1H，dt，芳族)，7. 56 (1H，dt，芳族)，7. 99 (1H，dd，芳族)(实施例11)氨基丙醇_乙酰水杨酸导入的透明质酸的合成将重均分子量90万的透明质酸(IOOmg)O. 25mmol/二糖单元在水-二H恶烷(1 1) 中溶解，依次加入2mol/L的HOSu (0. lml) Umol/L的WSCl · HCl (0. Iml)、由上述实施例10 得到的氨基丙醇-乙酰水杨酸盐酸盐(0. IOmmol)水-二嗯烷(1 1)溶液(2ml)，搅拌 一昼夜。在反应液中加入5%碳酸氢钠水溶液(1.5ml)，搅拌3小时。加入50%醋酸水溶 液(43μ1)中和后，加入氯化钠(0.4g)进行搅拌。加入乙醇(IOOml)使其沉淀，将沉淀物 用80%乙醇水溶液、乙醇、二乙醚依次各洗涤2次。然后进行减压干燥，得到标题化合物 (97.7mg)。利用吸光光度法算出的乙酰水杨酸的导入率为13.5%。将得到的物质使其以 浓度1. 0重量％溶解在PBS中，制成溶液。该溶液是无色透明的液体，过滤器通过性试验为 “K”。(实施例12)氨基丙醇_联苯乙酸盐酸盐的合成DBoc-氨基丙醇_联苯乙酸的合成使Boc-氨基丙醇(2. 04mmol)、联苯乙酸(2. 04mmol) (Aldrich Chem. Co.制)、 DMAP (0. 41mmol)在二卩恶烷(7mL)中溶解后，在冰冷却下加入WSCl 'HCl (2. 35mmol)的二P恶 烷-二氯甲烷(3 4)溶液(7ml)。在反应液中加入二甲基甲酰胺(DMF) (3ml)变为澄清后， 返回到室温，搅拌一昼夜。加入醋酸乙酯，依次用5%柠檬酸水溶液，5%碳酸氢钠水溶液，饱 和食盐水分液洗涤。用硫酸钠脱水干燥后，减压蒸馏溶剂。将得到的残渣用硅胶柱色谱法 (己烷醋酸乙酯=3 1、0. 5%三乙胺)纯化，得到标题化合物(623. Omg、收率83% )。 结构通过1H-NMR (CDCl3)鉴定。1H-NMR (500MHz, CDCl3) δ (ppm) = 1. 44 (9H, s, Boc) , 1. 80-1. 85 (2Η, m, BocHNCH2CHaCH2O-)，3. 15-3. 19 (2H, m, BocHNCH2CH2CH2O-)，3. 67 (2H, s, PhCH2-)，4. 18 (2H, t, BocHNCH2CH2CH2O-)，4. 67 (1H, s, NH)，7. 34-7. 59 (9H, m,芳族)2)氨基丙醇_联苯乙酸盐酸盐的合成将由上述得到的Boc-氨基丙醇-联苯乙酸(1.69mm0l)溶解在二氯甲烷(Iml) 中，在冰冷却下加入4N盐酸/醋酸乙酯(3ml)，返回到室温，搅拌2小时，用TLC确认 Boc-氨基丙醇-联苯乙酸消失后，加入二乙醚，将生成的沉淀进行离心分离，将得到的沉淀 用二乙醚倾析3次后，进行减压干燥，得到标题化合物(511.7mg、收率99%)。结构通过 1H-WR(O)Cl3 CD3OD3= 1 1)鉴定。1H-NMR (500MHz, CDCl3 CD3OD = 1 1) δ (ppm) = 1. 98-2. 04(2H, m, H2NCH2CHaCH2O-)，2. 95 (2H, t, H2NCHaCH2CH2O-)，3. 73 (2H, s, -PhCHa-)，4. 23 (2H, t, H2NCH2CH2CH2O-)，7. 33-7. 59 (9H, m,芳族)(实施例13)氨基丙醇_联苯乙酸导入的透明质酸的合成将重均分子量90万的透明质酸(200mg) 0. 5mmol/二糖单元在水-二嗯烷(1:1、 45ml)中溶解，依次加入 2mol/LHOSu (0. 25ml)、lmol/LWSCl .HCl (0. 25ml)、由上述实施例 12 得到的0. 5M氨基丙醇-联苯乙酸盐酸盐水溶液(0. 5ml)，搅拌一昼夜。在反应液中加入5% 碳酸氢钠水溶液(3ml)，搅拌3小时。在反应液中加入50%醋酸水溶液(86 μ 1)中和后，加 入氯化钠(0.8g)进行搅拌。加入乙醇(200ml)进行搅拌，将生成的沉淀进行离心分离，将 得到的沉淀用80%的乙醇水溶液、乙醇、二乙醚依次各洗涤2次。将其在室温下减压干燥一晚上，得到标题化合物(205. Img)。利用HPLC法算出的联苯乙酸的导入率为27.8%。将得 到的物质使其以浓度1. 0重量％溶解在PBS中，制成溶液。该溶液是无色透明的液体，过滤 器通过性试验为“A”。(实施例14)氨基丙醇_联苯丁酮酸盐酸盐的合成1) Boc-氨基丙醇_联苯丁酮酸的合成将Boc-氨基丙醇(2. 18mmol)、联苯 丁酮酸(2. 18mmol) (ICNBiochemicals. Inc.制)、DMAP (0. 44mmol)在DMF- 二氯甲烷(5 3、8mL)中溶解，在冰冷却下加入 WSCl -HCl (2. 48mmol)的二氯甲烷溶液(5ml)。缓慢地将反应温度返回到室温，搅拌一 昼夜。加入醋酸乙酯，依次用5%柠檬酸水溶液、5%碳酸氢钠水溶液、饱和食盐水分液洗 涤。用硫酸钠脱水干燥后，减压蒸馏溶剂。将得到的残渣用硅胶柱色谱法(己烷醋酸 乙酯=40 1、0. 5%三乙胺)纯化，得到标题化合物(747.8mg、收率83% )。结构通过 1H-WR(CDCl3)鉴定。1H-NMR (500MHz, CDCl3) δ (ppm) = 1. 44 (9H, s, Boc) , 1. 82-1. 87 (2Η, m, BocHNCH2CHiCH2O-)，2. 79 (2H, t, -COCiH4CO-)，3. 20-3. 24 (2H, m, BocHNCHiCH2CH2O-)， 3. 36 (2H, t, -COCaHiCO-) 4. 19 (2H, t, BocHNCH2CH2CH2O-)，4. 76 (1H, s，NH)，7. 39-7. 64 (5H, m, 芳族)，7. 70 (2H，td，芳族)，8. 06 (2H，td，芳族)2)氨基丙醇_联苯丁酮酸盐酸盐的合成将由上述得到的Boc-氨基丙醇-联苯丁酮酸(1. 82mmol)溶解在二氯甲烷(4ml) 中，在冰冷却下加入4N盐酸·醋酸乙酯溶液(4ml)，然后缓慢地达到室温，搅拌90分钟，反 应开始后可见白色沉淀析出。用TLC确认Boc-氨基丙醇-联苯丁酮酸消失后，在反应液中 加入二乙醚，将白色沉淀进行离心分离。将沉淀用二乙醚洗涤3次后，进行减压干燥，得到 标题化合物(621.4mg、收率98% )。结构通过1H-NMR(CDCl3 CD3OD=I 1)鉴定。1H-NMR (500MHz, CDCl3 CD3OD = 1 1) δ (ppm) = 2. 01-2. 07 (2H, m, H2NCH2CHaCH2O-)，2. 79 (2H, t, -COCaH4CO-)，3. 05 (2H, t, H2NCHaCH2CH2O-)，3. 44 (2H, t, -COC2HiCO-)，4. 26 (2H, t, H2NCH2CH2CHaO-)，7. 41-7. 50 (3H, m,芳族)，7. 66 (dd, 2H,芳族)， 7. 75 (d，2H，芳族)，8. 08 (d，2H，芳族)(实施例15)氨基丙醇_联苯丁酮酸导入的透明质酸的合成使重均分子量90万的透明质酸(200mg)0. 5mmol/ 二糖单元溶解在水-二卩恶烷 (1 l、45ml)中后，加入 2mol/L HOSu (0. 25ml)、lmol/LWSCl .HCl (0. 25ml)、由上述实施例 14得到的氨基丙醇-联苯丁酮酸盐酸盐(0. 25mmol)的水-二卩恶烷(25 8)溶液(0. 66ml)， 搅拌一昼夜。在反应液中加入5%碳酸氢钠水溶液(3ml)，搅拌3小时。加入50%醋酸水溶 液(86μ 1)中和后，加入氯化钠(0.8g)进行搅拌。加入乙醇(200ml)进行搅拌。将生成的 沉淀进行离心分离，将得到的沉淀用80%的乙醇水溶液、乙醇、二乙醚各洗涤2次。进行减 压干燥，得到标题化合物(214. Img)。利用HLPC算出的联苯乙酸的导入率为23.8%。将得 到的物质使其以浓度1. 0重量％溶解在PBS中，制成溶液。该溶液是无色透明的液体，过滤 器通过性试验为“A”。(实施例16)氨基丙醇_甲芬那酸盐酸盐的合成l)Boc-氨基丙醇-甲芬那酸的合成将Boc-氨基丙醇(0. 616mmol)、甲芬那酸(0. 620mmol)(和光纯药工业株式会社
24制)、DMAP(0. 126mmol)在二氯甲烷(3mL)中溶解，在冰冷却下加入WSCl · HCl (0. 758mmol) 的二氯甲烷溶液(1.5ml)。缓慢地将反应温度返回到室温，搅拌一昼夜。再次将反应液进 行冰冷却，加入WSCl · HCl (0. 207mmol)的二氯甲烷溶液(Iml)，一边缓慢地升到室温，一边 搅拌5小时。在反应液中加入醋酸乙酯，依次用5%柠檬酸水溶液、5%碳酸氢钠水溶液、饱 和食盐水洗涤。用硫酸钠脱水干燥后，减压蒸馏溶剂。将得到的残渣用硅胶柱色谱法(己 烷醋酸乙酯=6 1,0. 5%三乙胺)纯化，得到标题化合物(190. 4mg、收率78% )。结构 通过1H-NMR (CDCl3)鉴定。1H-NMR (500MHz, CDCl3) δ (ppm) = 1. 45 (9H, s, Boc) , 1. 96-2. 01 (2Η, m, BocHNCH2CHaCH2O-)，2. 18 (3H, s, PhCH1)，2. 33 (3H, s, PhCH1)，3. 31-3. 32 (2H, m, BocHNCH2CH2CH2O-) , 4. 38 (2H, t, BocHNCH2CH2CH2O-) , 4. 78 (1H, s, NH)，6. 64-6. 67 (1H, m, 芳族)，6. 74 (1H，dd，芳族)，7. 02-7. 26 (4H，m，芳族)，7. 94 (1H，dd，芳族)，9. 24 (1H， s, -PhMiPh-)2)氨基丙醇_甲芬那酸盐酸盐的合成将由上述得到的Boc-氨基丙醇-甲芬那酸(0. 462mmol)溶解在二氯甲烷(0. 5ml) 中，在冰冷却下加入4N盐酸/醋酸乙酯溶液(1.5ml)，搅拌3小时。用TLC确认Boc-氨基丙 醇-甲芬那酸消失后，在反应液中加入二乙醚，将生成的沉淀进行离心分离。将得到的沉淀 用二乙醚洗涤后，进行减压干燥，得到标题化合物(154. 4mg、qU.)。结构通过1H-NMR(⑶Cl3) 鉴定。1H-NMR (500MHz, CDCl3) δ (ppm) = 2. 16 (3H, s, PhCH1) , 2. 25-2. 30 (2Η, m, H2NCH2CHaCH2O-)，2. 31 (3H, s, PhCH1)，3. 20 (2H, t, H2NCHiCH2CH2O-)，4. 44 (2H, t, H2NCH2CH2CH2O-), 6. 63-6. 66 (1H, m,芳族),6. 70-6. 72 (1H, dd,芳族)，7. 02 (1H, d,芳族)， 7. 09 (1H，t，芳族)，7. 14 (1H，d，芳族)，7. 22-7. 25 (1H，m，芳族)，7. 92 (1H，dd,芳族)， 9. 17 (1H, s, -PhMiPh-)(实施例17)氨基丙醇_甲芬那酸导入的透明质酸的合成将重均分子量90万的透明质酸(IOOmg)O. 25mmol/二糖单元在水-二嗯烷 (1 1、22. 5ml)中溶解，依次加入 2mol/L HOSu(0. lml)、lmol/LWSCl · HCl (0. lml)、由上 述实施例16得到的氨基丙醇-甲芬那酸盐酸盐(0. IOmmol)的水_ 二嗯烷(1 1)溶液 (2ml)，搅拌一昼夜。在反应液中加入5%碳酸氢钠水溶液(1.5ml)，搅拌4小时。加入50% 醋酸水溶液(43μ 1)中和后，加入氯化钠(0.4g)进行搅拌。加入乙醇(IOOml)进行搅拌， 将生成的沉淀进行离心分离。将得到的沉淀用80%的乙醇水溶液、乙醇、二乙醚依次各洗涤 2次。进行减压干燥，得到标题化合物(101. 7mg)。利用吸光光度法算出的甲芬那酸的导入 率为17.5%。将得到的物质使其以浓度1.0重量％溶解在PBS中，制成溶液。该溶液是无 色透明的液体，过滤器通过性试验为“A”。(实施例18)氨基丙醇_双氯芬酸盐酸盐的合成1) Boc-氨基丙醇_双氯芬酸的合成将Boc-氨基丙醇135. 8mg (0. 775mmol)溶解在二氯甲烷中，依次加入双氯 芬酸229. 6mg (0. 775mmol)(和光纯药工业株式会社制)的二氯甲烷溶液4mL、DMAP 18. 9mg (0. 155mmol)的二氯甲烷溶液lmL、DMFO. 5mL,在冰冷却下加入WSCl · HCl 191. 4mg(0. 998mmol)的二氯甲烷溶液(2ml)，一边缓慢地升到室温一边搅拌7小时。再使反应液冰冷却，作为追加操作依次加入双氯芬酸91. 9mg(0. 310mmol)的二氯甲烷溶液1ml、 DMAP 7. 5mg (0. 061mmol)、WSCl · HCl 170. 9mg (0. 370mmol)的二氯甲烷溶液 lmL，一边慢慢 地回到室温一边搅拌。进行该追加操作共5次。加入醋酸乙酯，依次用5%柠檬酸水溶液2 次，5%碳酸氢钠水溶液2次，饱和食盐水分液洗涤。用硫酸钠脱水后，减压蒸馏醋酸乙酯。 用硅胶柱色谱法纯化残渣，得到标题化合物280. 2mg(收率80% )。结构通过1H-NMR鉴定。1H-NMR (500MHz , CDCl3) δ (ppm) = 1 · 4 4 (9H，s，B ο c)，1 · 8 5 (2 H， quant, -NHCH2CE,CH20-), 3. 16 (2H, q, -NHCE,CH2CH20-), 3. 82 (2Η, s, Ph-CH2-CO), 4. 22 (2Η, t, -NHCH2CH2CE^o-)，4. 68 (1Η, s，NH)，6. 54-7. 35 (8H, m,芳族 H, NH)2)氨基丙醇-双氯芬酸盐酸盐的合成将由上述得到的Boc-氨基丙醇-双氯芬酸1019mg溶解在2mL 二氯甲烷中，在冰 冷却下加入4M盐酸/醋酸乙酯8ml，搅拌3小时。加入150mL 二乙醚使其沉淀，将沉淀进行 减压干燥，得到标题化合物791mg(90% )。结构通过1H-NMR鉴定。1H-WR(SOi)MHz, CDCl3) δ (ppm) = 2. 13 (2H, quant, -NHCH2CH2CH2O-) , 3. 08 (2Η, t, -NHCe^CH2CH2O-)，3. 84 (2H, s, Ph-CH2-CO)，4. 25 (2H, t, -NHCH2CH2CH2O-)，6. 52-7. 33 (8H, m, 芳族H，NH)(实施例19)氨基丙醇_双氯芬酸导入的透明质酸的合成使重均分子量80万的透明质酸500mg(l. 25mmol/ 二糖单元)在水56. 3mL/ 二嗯 烷 56. 3mL 中溶解后，依次加入 HOSu (Immol) / 水 0. 5mL、WSCl · HCl (0. 5mmol) / 水 0. 5mL、由 上述实施例18得到的氨基丙醇-双氯芬酸盐酸盐(0.5mmol)/(水二卩恶烷=1 l、5mL)， 搅拌一昼夜。在反应液中加入5%碳酸氢钠水溶液7. 5mL，搅拌3小时40分钟。在反应液 中加入50%醋酸215 μ L中和后，加入氯化钠2. 5g进行搅拌。加入乙醇400ml使其沉淀，将 沉淀物用80%的乙醇、乙醇、二乙醚各洗涤2次，且在室温下减压干燥一晚上。得到541mg 的白色固体。利用分光光度计求出的双氯芬酸的导入率为18.2%。(实施例20)氨基丙醇_依托度酸盐酸盐的合成1) Boc-氨基丙醇_依托度酸的合成将Boc-氨基丙醇 178. 8mg(l. 02mmol)、依托度酸 293. 8mg(l. 02mmol)(和光纯 药工业株式会社制)、DMAP 23. 8mg(0. 20mmol)溶解在4mL 二氯甲烷中，在冰冷却下加入 WSCl · HCl 233. 8mg (1. 22mmol)的二氯甲烷溶液2mL，一边缓慢地升到室温一边搅拌一昼 夜。进一步在冰冷却下加入WSCl · HCl 68. 8mg(0. 36mmol)的二氯甲烷溶液2mL，一边缓慢 地升到室温一边搅拌80分钟。加入醋酸乙酯，依次用5%柠檬酸水溶液2次，5%碳酸氢钠 水溶液2次，饱和食盐水分液洗涤。用硫酸钠脱水后，减压蒸馏醋酸乙酯。用硅胶柱色谱法 纯化残渣，得到标题化合物436. 3mg(收率96% )。结构通过1H-NMR鉴定。1H-NMR (500MHz, CDCl3) δ (ppm) = 0. 83 (3H, t, -CH2CH3), 1. 37 (3Η, t, -CH2CHa), 1. 43 (9Η, s, Boc)，1. 79 (2Η, quant, -NHCH2CHiCH2O-)，3. 14 (2H, q, -NHCHaCH2CH2O-)， 4. 10-4. 22 (2H, m, -NHCH2CH2CHaO-)，4. 63 (1H, s，NH)，7. 00-7. 37 (3H, m,芳族 H)，8. 97 (1H, s, NH)2)氨基丙醇_依托度酸盐酸盐的合成将由上述得到的Boc-氨基丙醇依托度酸421. 5mg(0. 948mmol)溶解在ImL 二氯甲 烷中，在冰冷却下加入4M盐酸/醋酸乙酯3mL，搅拌3小时。加入二乙醚、己烷使其沉淀，将沉淀进行减压干燥。用硅胶柱色谱法纯化沉淀，得到标题化合物197. 6mg(55%)。结构通 过1H-NMR鉴定。1H-NMR (500MHz, CDCl3) δ (ppm) = 0. 81 (3H, t, -CH2CH3), 1. 35 (3Η, t, -CH2CHa), 1. 92-2. 17 (4Η, m, -CE^CH3, -NHCH2CH2CH2O-), 4. 12 (1Η, quant, -NHCH2CH2CE,0-), 4. 20 (1Η, quant, -NHCH2CH2CE,0-)，6. 99-7. 35 (3Η, m,芳族 H)，8. 99 (1H, s, NH)(实施例21)氨基丙醇_依托度酸导入的透明质酸钠的合成使重均分子量80万的透明质酸114mg(0. 285mmol/ 二糖单元)在水12. 8mL/ 二 β恶焼 12. 8mL 中溶解后，依次加入 HOSu (0. 228mmol) / 水 0. lmL、WSCl · HCl (0. 114mmol) / 水 0. lmL、由上述实施例20得到的氨基丙醇-依托度酸盐酸盐(0. IHmmol)/(水二聰烷= 1 l、2mL)，搅拌一昼夜。在反应液中加入5%碳酸氢钠水溶液1. 71mL，搅拌4小时30分 钟。在反应液中加入50%醋酸49 μ L中和后，加入氯化钠456mg进行搅拌。加入乙醇IlOml 使其沉淀，将沉淀物用80%的乙醇、乙醇、二乙醚各洗涤2次，且在室温下减压干燥一晚上。 得到Illmg的白色固体。利用HPLC求出的依托度酸的导入率为14. 4%。(实施例22)氨基丙醇_阿克他利盐酸盐的合成DBoc-氨基丙醇_阿克他利的合成将参考例1得到的Boc-氨基丙醇123. lmg(0. 703mmol)溶解在2mL 二氯甲烷 中，加入阿克他利136. Omg (0. 704mmol)的DME溶液(ImL)，在冰冷却下依次加入DMAP 17. Img(0. 140mmol)、WSCl · HCl 175. 4mg(0. 915mmol)，一边缓慢地升到室温一边搅拌一 昼夜。加入醋酸乙酯，依次用5%柠檬酸水溶液、5%碳酸氢钠水溶液、饱和食盐水分液洗 涤。用硫酸钠脱水后，减压蒸馏醋酸乙酯。用硅胶柱色谱法纯化残渣，得到标题化合物 203. Img (83% ) 结构通过 1H-NMR 鉴定。1H-NMR (500MHz , CDCl3) δ (ppm) = 1 · 4 4 (9H，s，B ο c)，1 · 8 0 (2 H， quant, -NHCH2CHaCH2O-), 2. 18 (3H, s, NAc), 3. 14 (2H, q, -NHCHaCH2CH2O-), 3. 59 (2Η, s, Ph-CH2-CO)，4. 15 (2H, t, -NHCH2CH2CHaO-)，4. 66 (1H, s，NH)，7. 13 (1H, s，NH)，7. 23 (2H, d,芳 族 H)，7. 46 (2H，d，芳族 H)另外，阿克他利用下述合成法制备。将对氨基苯基醋酸(和光纯药工业株式会社制)(1. 02mmol)溶解在二氯甲烷-甲 醇-水(1 3 l、50ml)中，在冰冷却下加入无水醋酸(2. 12mmol)，一边缓慢地升到室温 一边搅拌一昼夜。减压蒸馏溶剂，得到标题化合物(196. 4mg、收率99%)。结构通过1H-NMR鉴定。1H-NMR (500MHz, CD3OD) d (ppm) = 2. 11 (3H, s, Ac) ,3. 55 (2H, s, Ph-CHi")‘ 7.21-7. 49 (4H，m，芳族 H)2)氨基丙醇_阿克他利盐酸盐的合成将由上述得到的Boc-氨基丙醇-阿克他利201. 3mg(0. 574mmol)溶解在2mL 二氯 甲烷中，在冰冷却下加入4M盐酸/醋酸乙酯3mL，搅拌3小时。加入二乙醚使其沉淀，用二 乙醚洗涤2次沉淀后，进行减压干燥，得到标题化合物161. 3mg(98% )。结构通过1H-NMR鉴定。1H-WR(SOi)MHz, CD3OD) δ (ppm) = 1. 94-1. 99 (2H, m, -NHCH2CHaCH2O-)，2. 11 (3H, s, NAc)，2. 94 (2H, t, -NHCH2CH2CH2O-)，3. 63 (2H, s, Ph-CH2-CO)，4. 19 (2H, t, -NHCH2CH2CH2O-)，7. 22-7. 51(4H，m，芳族 H)(实施例23)氨基丙醇_阿克他利导入的透明质酸钠的合成使重均分子量80万的透明质酸IOOmg (0. 25mmol/二糖单元)在水11. 25mL/二嗯 烧 11. 25mL 中溶解后，依次加入 HOSu (0. 2mmol)/水 0. ImL,WSCl 'HCl (0. Immol)/水 0. lmL、 由实施例22得到的氨基丙醇-阿克他利盐酸盐(0. Immol)/(水二嗯烷=1 l、2mL)， 搅拌一昼夜。在反应液中加入5%碳酸氢钠水溶液1.5mL，搅拌3小时。在反应液中加入 50%醋酸43 μ L中和后，加入氯化钠400mg进行搅拌。加入乙醇IOOml使其沉淀，将沉淀物 用80%的乙醇洗涤2次、用乙醇洗涤2次、用二乙醚洗涤，且在室温下减压干燥一晚上。得 到97mg的白色固体。利用HPLC求出的阿克他利的导入率为13. 2%。(实施例24)氨基丙醇-酮洛芬导入的透明质酸钠的合成使重均分子量90万的透明质酸钠200mg (0. 5mmol/ 二糖单元)在水23mL/ 二卩恶烷 23mL中溶解后，依次加入HOSu水溶液0. 3mmol/2mL、WSCl 'HCl水溶液0. 15mmol/2mL、由实 施例1得到的氨基丙醇_酮洛芬盐酸盐水溶液1. 5mmol/2mL，搅拌一昼夜。取11. 5mL反应 液，加入氯化钠IOOmg且搅拌。加入50mL乙醇使其沉淀，将沉淀物用80%乙醇、乙醇、二乙 醚各洗涤2次，且在室温下减压干燥一晚上。得到35mg的白色固体。利用HPLC算出的酮 洛芬的导入率为7. 2%。将得到的物质使其以浓度1. 0重量％溶解在PBS中，制成溶液，该 溶液是无色透明的液体，过滤器通过性试验为“ C”。(参考例2)Boc-丝氨醇的合成将丝氨醇(10.lmmol) (Aldrich Chem. Co.制)溶解在水-二卩恶烷(1 l、20ml) 中，在冰冷却下加入Boc2O (10. 8mmol)的二卩恶烷溶液(15ml)，返回到室温，搅拌一昼夜。减 压蒸馏溶剂。用己烷洗涤残渣后进行减压干燥，得到标题化合物(1847mg、收率95%)。结 构通过1H-NMR鉴定。1H-WR(SOi)MHz, CD3OD) δ (ppm) = 1. 44 (9H, s, Boc)，3. 57-3. 58 (5H, m，丝氨醇)(实施例25)丝氨醇-酮洛芬盐酸盐的合成DBoc-丝氨醇_酮洛芬的合成将酮洛芬(1. llmmol)(东京化成工业株式会社制)在二氯甲烷(3ml)中溶解， 依次加入三乙胺(1. llmmol)、二甲基硫膦基氯化物(Mpt-Cl) (1. llmmol)的二氯甲烷溶液 (2ml)，搅拌25分钟。进一步加入三乙胺(0. 36mmol)，搅拌20分钟。将反应液冰冷却，依次 加入三乙胺(1. llmmol)、DMAP (0. 19mmol)、由参考例2得到的Boc-丝氨醇(0. 50mmol)，返 回到室温，搅拌一昼夜。再将反应液冰冷却，依次加入25%的氨水(2ml)、二卩恶烷(10ml)， 搅拌20分钟。将反应液浓缩至5ml，加入醋酸乙酯。依次用水、5%柠檬酸水溶液、5%碳酸 氢钠水溶液、饱和食盐水分液洗涤，用硫酸钠脱水干燥后，减压蒸馏溶剂，将得到的残渣用 硅胶柱色谱法(己烷醋酸乙酯=2 1,0. 5%三乙胺)纯化，得到标题化合物(287. 3mg、 收率87% )。结构通过1H-NMR(⑶Cl3)鉴定。1H-NMR (500MHz, CDCl3) δ (ppm) = 1. 38-1. 40 (9H, m, Boc) , 1. 51-1. 53 (6Η, m, -OCOCH (CH3) -)，3. 76-3. 81 (2H, m, -0C0CH (CH3) -)，3. 96-4. 11 (4H, m, -CHaCH (NHBoc) CH2-)， 4. 61 (1H, btd, -CH2CH(NHBoc) CH2-)，7. 40-7. 80 (18H, m,芳族)2)丝氨醇_酮洛芬盐酸盐的合成将Boc-丝氨醇-酮洛芬(0. 428mmol)在二氯甲烷(Iml)中溶解，在冰冷却下加入4N盐酸/醋酸乙酯(4ml)，然后缓慢地升到室温，搅拌2小时。用TLC确认丝氨醇-酮洛芬 的消失后，加入二甲醚、己烷，将析出的沉淀进行离心分离。将得到的沉淀进行减压干燥，得 到标题化合物(203. 6mg、qu.)。结构通过1H-NMR(CDCl3)鉴定。1H-NMR (500MHz, CDCl3) δ (ppm) = 1. 49 (6H, t, -OCOCH(CH1)-) ,3. 79 (1H, m, -CH2CH(NHBoc) CH2-)，4. 00-4. 53 (6H, m, Serinol, Ketoprofen)，7. 31-7. 80 (18H, m,芳族)(实施例26)丝氨醇_酮洛芬导入的透明质酸钠的合成将重均分子量90万的透明质酸(IOOmg)O. 25mmol/二糖单元在水/二噁烷(1 1、 22. 5ml)中溶解，加入 2mol/L HOSu (0. 1ml)、lmol/LWSCl 'HCl (0. 1ml)、由实施例 25 得到的 丝氨醇-酮洛芬盐酸盐(0. IOmmol)的二卩恶烷溶液(2ml)，搅拌一昼夜。在反应液中加入5% 碳酸氢钠水溶液(1.5ml)，搅拌4小时。加入50%醋酸水溶液(43 μ 1)进行中和，加入氯化 钠(0.4g)进行搅拌。加入乙醇(IOOml)进行搅拌，将产生的沉淀进行离心分离。将得到的 沉淀用80%的乙醇水溶液、乙醇、二乙醚依次各洗涤2次。进行减压干燥，得到标题化合物 (92.3mg)。利用HPLC算出的酮洛芬的导入率为11.2%。将得到的物质使其以浓度1. 0重 量％溶解在PBS中，制成溶液，该溶液是无色透明的液体，过滤器通过性试验为“A”。(实施例27) 2-氨基-1，5-戊二醇-酮洛芬盐酸盐的合成1) Boc-氨基-1，5-戊二醇-酮洛芬的合成将Boc-氨基-1，5-戊二醇(Boc-NHCH(CH2OH) CH2CH2CH2OH^Aldrich Chem. Co.制) (1. 98mmol)在二氯甲烷(2ml)中溶解，依次加入酮洛芬(3. 96mmol)(东京化成工业株式会 社制)的二氯甲烷溶液(4ml)、DMAP(0.791mmol)的二氯甲烷溶液(1ml)，且进行搅拌。将 反应液进行冰冷却，加入WSCl · HCl (4. 93mmol)的二氯甲烷溶液(5ml)，一边缓慢地升到室 温一边搅拌一昼夜。将反应液用醋酸乙酯稀释，依次用5%柠檬酸水溶液、5%碳酸氢钠水 溶液、饱和食盐水洗涤。用硫酸钠脱水干燥后，减压蒸馏溶剂。将得到的残渣用硅胶柱色谱 法(己烷醋酸乙酯=5 2、0.5%三乙胺)纯化，得到标题化合物(1.361g、收率99%)。 结构通过1H-NMR(CDCl3)鉴定。1H-NMR (500MHz, CDCl3) δ (ppm) = 1. 39-1. 40 (9H, m, Boc) , 1. 51-1. 55 (6Η, m, -OCOCH (CH3) -) , 3. 75-4. 55 (8Η, m, Ketoprofen, 2-amino-l, 5-pentanediol), 7. 40-7. 80(18H, m，芳族)2) 2-氨基-1，5-戊二醇-酮洛芬盐酸盐的合成将由上述得到的Boc-氨基-1，5-戊二醇-酮洛芬(1.95mm0l)在二氯甲烷(Iml) 中溶解，在冰冷却下加入4N盐酸/醋酸乙酯(4ml)，然后缓慢地升到室温，搅拌3小时。在 反应液中加入己烷，将析出的白色沉淀进行离心分离，将得到的沉淀进行减压干燥，得到标 题化合物(1.20g、收率98% )。结构通过1H-NMR(CDCl3)鉴定。1H-NMR (500MHz, CDCl3) δ (ppm) = 1. 50 (3H, d, -OCOCH(CH1)-) , 1. 51 (3Η, d，-OCOCH(CH3) -),3. 47 (1H，bd，2-氨基-1，5-戊二醇)，3. 44-4. 48 (6H，m，酮洛芬，2-氨 基-1，5-戊二醇)，7. 33-7. 84 (18H, m,芳族)(实施例28)2-氨基-1，5-戊二醇-酮洛芬导入的透明质酸的合成使重均分子量90万的透明质酸(137mg)0. 34mmol/二糖单元在水/二{I恶烷(1 1、 30.8ml)中溶解后，依次加入 2mol/L HOSu (0. 137ml)、lmol/L WSCl .HCl (0. 137ml)、由实施 例27得到的2-氨基-1，5-戊二醇-酮洛芬盐酸盐(0. 137mmol)的水-二 恶烷(1 1)溶液(4ml)，搅拌一昼夜。在反应液中加入5%碳酸氢钠水溶液(2. Iml)，搅拌5小时。加入 50%醋酸水溶液(59μ1)进行中和后，加入氯化钠(0.548g)进行搅拌。加入乙醇(140ml) 进行搅拌，将产生的沉淀进行离心分离。 将得到的沉淀用80%的乙醇水溶液、乙醇、二乙醚洗涤。进行减压干燥，得到标题 化合物(135. Img)。利用HPLC算出的酮洛芬的导入率为18. 5%。将得到的物质使其以浓度 1.0重量％溶解在PBS中，制成溶液。该溶液是无色透明的液体，过滤器通过性试验为“A”。
(实施例29) 3-氨基-1，2-丙二醇-酮洛芬盐酸盐的合成DBoc-氨基-1，2-丙二醇-酮洛芬的合成将Boc-氨基-1，2-丙二醇(Boc-NHCH2CH (OH) CH2OH、Aldrich Chem. Co.制) (2. 05mmol)在二氯甲烷(2ml)中溶解，依次加入酮洛芬(4. llmmol)(东京化成工业株式会 社制)的二氯甲烷溶液(4ml)、DMAP(0.803mmol)的二氯甲烷溶液(1ml)，且进行搅拌。将反 应液进行冰冷却，加入WSCl · HCl (4. 94mmol)的二氯甲烷溶液(5ml)，一边缓慢地升到室温 一边搅拌一昼夜。将反应液进行冰冷却，加入WSCl -HCl (1. 24mmol)的二氯甲烷溶液(Iml)， 在室温下搅拌1小时，在35°C下搅拌2小时。加入醋酸乙酯，依次用5%柠檬酸水溶液、5% 碳酸氢钠水溶液、饱和食盐水洗涤。用硫酸钠脱水干燥后，减压蒸馏溶剂。将得到的残渣用 硅胶柱色谱法(己烷醋酸乙酯=2 1,0. 5%三乙胺)纯化，得到标题化合物(1. 175g、 收率87% )。结构通过1H-NMR(⑶Cl3)鉴定。1H-NMR (500MHz, CDCl3) δ (ppm) = 1. 36-1. 40 (9H, m, Boc) , 1. 42-1. 53 (6Η, m, -OCOCH(CHa) -) , 3. 10-3. 30 (2Η, m, BocNHCHi-) , 3. 65-3. 82 (2Η, m, -OCOCH(CH3)-)， 3. 99-4. 36 (2Η, m, BocNHCH2 (CH0-) CH2O-), 4. 49-4. 76 (1Η, m, BocNH"), 5. 04-5. 09 (1Η, m, BocNHCH2 (CH0-) CH2O-)，7. 38-7. 80 (18Η, m,芳族)2) 3-氨基-1，2-丙二醇-酮洛芬盐酸盐的合成将由上述得到的Boc-氨基-1，2-丙二醇-酮洛芬(1. 76mmol)在二氯甲烷 (Iml)中溶解，在冰冷却下加入4N盐酸/醋酸乙酯(4ml)，搅拌3小时。在反应液中加入 己烷，将析出的白色沉淀进行减压干燥，得到标题化合物(1.029g、收率97%)。结构通过 1H-WR(CDCl3)鉴定。1H-Wr(SoomHzADCI3) δ (ppm) = 1. 33-1. 49 (6H, m, -OCOCH (CH3) -), 3. 02-3. 20 (m, 2H, H2NCHa (CH0-) CH2O-)，3. 56-3. 82 (1H, m, -OCOCH(CH3) -)，3. 90-4. 15 (2H, m, H2NCH2 (CH0-) CHaO-, -OCOCH(CH3)-) ,4. 18-4. 50 (1H, m, H2NCH2CH (0-) CHaO-) , 5. 35-5. 37 (1H, m, H2NCH2CH (0-) CH2O-)，7. 30-7. 80 (18H, m,芳族)(实施例30)3-氨基-1，2-丙二醇-酮洛芬导入的透明质酸的合成使重均分子量90万的透明质酸(200mg)0. 5mmol/二糖单元在水/ 二嗯烷(1 1、 45ml)中溶解，依次加入 2mol/L HOSu (0. 25ml) Umol/L WSCl (0. 25ml)、由实施例 29 得到的 3_氨基-1，2-丙二醇-酮洛芬盐酸盐(0.20mmol)的水-二卩恶烧(1 1)溶液(4ml)，搅拌 一昼夜。在反应液中加入5%碳酸氢钠水溶液(3ml)，搅拌4小时。加入50%醋酸水溶液 (86 μ 1)进行中和，加入氯化钠(0. Sg)进行搅拌。加入乙醇(200ml)进行搅拌，将产生的沉 淀进行离心分离。将得到的沉淀用80%的乙醇水溶液、乙醇、二乙醚洗涤。将沉淀进行减压 干燥。得到标题化合物(217. 4mg)。利用HPLC算出的酮洛芬的导入率为40.3%。将得到 的物质使其以浓度1.0重量％溶解在PBS中，制成溶液，该溶液是无色透明的液体，过滤器通过性试验为“A”。(参考例3)Boc-三(羟甲基)氨基甲烷的合成将三(羟甲基)氨基甲烷(10. Immol)溶解在水-二聰烧(1 l、20ml)中，加入 Boc20(10. 8mmol)的水-二卩恶烷(1 9、IOml)，在室温下搅拌45分钟，在40°C下搅拌70分 钟。加入BOc20(5.41mmOl)的二卩恶烷溶液(3ml)，一边缓慢地升到室温一边搅拌一昼夜。减 压蒸馏溶剂。用己烷洗涤残渣后进行减压干燥，得到标题化合物(2. 21g、收率99% )。结构 通过1H-NMR鉴定。1H-WR(SOC)MHz, CD3OD) d(ppm) = 1. 44 (9H, s, Boc)，3. 68 (6H, s, -C (CH2OH) 3)(实施例31)三(羟甲基)氨基甲烷-酮洛芬盐酸盐的合成l)Boc-三(羟甲基)氨基甲烷-酮洛芬的合成将酮洛芬419mg (1. 65mmol)(东京化成工业株式会社制)溶解在3mL 二氯甲烷中， 在冰冷却下依次加入三乙胺230 μ L(1. 65mmol)、Mpt-Cl 213mg(l. 65mmol)/ 二氯甲烷溶液 2mL，搅拌10分钟。依次加入三乙胺230 μ L(l. 65mmol) ,DMAP 33mg(0. 27mmol)、由参考例3 得到的Boc-三(羟甲基)氨基甲烷(Boc-NHC(CH2OH)3)IIOmg(0. 5mmol)，返回到室温，搅拌 一昼夜。加入2mL氨水，并加入二嗯烷至二氯甲烷和氨水变得均勻，搅拌40分钟。减压蒸 馏二氯甲烷，加入醋酸乙酯，依次用5%柠檬酸水溶液2次、水、5%碳酸氢钠2次、水、饱和食 盐水分液洗涤。用硫酸钠脱水干燥后，减压蒸馏醋酸乙酯。用硅胶柱色谱法(二氯甲烷 甲醇=100 1 — 75 1)纯化，定量地得到标题化合物467mg。结构通过1H-NMR(⑶Cl3) 鉴定，确认对1分子Boc-三(羟甲基)氨基甲烷导入了三分子酮洛芬。1H-NMR (500MHz, CDCl3) δ (ppm) = 1. 29 (9H, s, Boc) , 1. 44-1. 54(3ΗΧ3, m, -OCOCH(CHg) -) ,3. 76(1ΗΧ3, q, -OCOCH(CH3) -) ,4. 04-4. 27 (6Η, m, -NHC (CHaO-KP) 3), 4. 81 (1Η, br, _腿_)，7. 37-7. 85 (9ΗΧ 3，m,芳族 H)2)三(羟甲基)氨基甲烷-酮洛芬盐酸盐的合成将有上述得到的Boc-三(羟甲基)氨基甲烷-酮洛芬453mg(0.49mmol)在二氯 甲烷(Iml)中溶解，在冰冷却下加入4M盐酸/醋酸乙酯3mL，在冰冷却下搅拌30分钟，在室 温下搅拌1小时30分钟。用TLC确认Boc-三(羟甲基)氨基甲烷-酮洛芬消失后，加入 二乙醚、己烷，进行倾析。之后，进行减压干燥，以回收量411mg(97%)得到标题物质。结构 通过1H-NMR (CDCl3)鉴定。1H-NMR (500MHz, CDCl3) δ (ppm) = 1. 39-1. 50 (3HX3, m, -OCOCH(CH1)-), 3· 96 (1ΗΧ 3，q，-OCOCH(CH3) _)，4. 09-4. 46 (6H, m, -NHC (CHaO-KP) 3)，7. 25-7. 80 (9HX 3，m，芳 族 H)，9. 31 (br, H3NiCH2-)(实施例32)甘氨酸-三(羟甲基)氨基甲烷-酮洛芬盐酸盐的合成l)Boc-甘氨酸-三(羟甲基)氨基甲烷-酮洛芬的合成将甘氨酸133mg(0. 76mmol)溶解在ImL氯仿中，在冰冷却下依次加入三乙胺 106 μ L(0. 76mmol)、Mpt-Cl 98mg(0. 76mmol)/ 氯仿 ImL,搅 10 分钟。之后，分 4 次缓慢地 加入由实施例31得到的三(羟甲基)氨基甲烷-酮洛芬盐酸盐433mg(0. 5mmol)/三乙胺 70μ 1(0. 5mmol)/氯仿2mL、三乙胺106 μ L(0. 76mmol)。在室温下搅拌1小时后，进一步在 冰冷却下加入三乙胺106 μ L (0. 76mmol)，将Boc-甘氨酸131mg(0. 75mmol)用ImL氯仿溶 解，在冰冷却下加入三乙胺105 μ L (0. 75mmol)、Mpt_C195mg (0. 75mmol)/氯仿lmL，且加入活化的Boc-甘氨酸的混合酸酐，在室温下搅拌一昼夜。加入醋酸乙酯，依次用5%柠檬酸2 次、水、5%碳酸氢钠2次、水、饱和食盐水分液洗涤。用硫酸钠脱水干燥后，减压蒸馏醋酸乙 酯，用硅胶柱色谱法(己烷醋酸乙酯=3 2)纯化，得到标题化合物411mg(收率55%)。 结构通过1H-NMR (CDCl3)鉴定。1H-NMR (500MHz, CDCl3) δ (ppm) = 1.43(9H, s, Boc) , 1. 45-1. 52 (3HX 3, m, -OCOCH(CHa) -)，3. 56 (2Η, br, -N職C0-)，3. 76 (1HX 3，q, -OCOCH(CH3) -)，3. 98-4. 28 (6H, m, -NHC(CHaO-KP) 3) , 5. 51 (1Η, br,-皿CH2CO-) , 6. 63 (1Η, br, -MiC(CH2O-KP)3)，
7.34-7. 83 (9HX 3，m,芳族 H)2)甘氨酸-三(羟甲基)氨基甲烷-酮洛芬盐酸盐的合成向上述得到的Boc-甘氨酸-三(羟甲基)氨基甲烷-酮洛芬361mg(0.37mmol) 中，在冰冷却下加入4M盐酸/醋酸乙酯2mL，在室温下搅拌2小时。用TLC确认Boc-甘氨 酸-三(羟甲基)氨基甲烷-酮洛芬消失后，加入二乙醚、己烷，进行倾析。之后，进行减压 干燥，以回收量336mg定量地得到标题物质。结构通过1H-NMR(⑶Cl3)鉴定。1H-Wr(SoomHzJDCI3) δ (ppm) = 1. 40 (3HX 3,m,-OCOCh(CH3)-), 3. 68-4. 24(11H, m，2H ；-N職CO-，IHX 3 ；-OCOCH(CH3)-, 6H ；-NHC (CH2O-KP) 3), 7. 27-7. 82 (9ΗΧ 3，m，芳族 H)，
8.31 (br, H3N1CH2-)(实施例33)甘氨酸-三(羟甲基)氨基甲烷-酮洛芬导入的透明质酸的合成使重均分子量90万的透明质酸钠100mg(0. 25mmol/ 二糖单元)在水11. 5mL/ 二 嗯烷 11. 5mL 中溶解后，依次加入 2mol/L HOSu/水 0. lmLUmol/L WSCl · HCl/水 0. ImL、由 实施例32得到的甘氨酸-三(羟甲基)氨基甲烷_酮洛芬盐酸盐93mg(0. lmmol)/ 二嗯烷 3mL，搅拌一昼夜。在反应液中加入5%碳酸氢钠水溶液1.5mL，搅拌4小时45分钟。在反 应液中加入50%醋酸水溶液43 μ L中和后，加入氯化钠400mg进行搅拌。加入乙醇100ml 使其沉淀，将产生的沉淀物用80%的乙醇洗涤2次、用乙醇洗涤2次、用二乙醚洗涤。在室 温下减压干燥一晚上。得到白色的固体95mg。利用HPLC算出的酮洛芬的导入率为39%。 将得到的物质使其以浓度1.0重量％溶解在PBS中，制成溶液，该溶液是无色透明的液体， 过滤器通过性试验为“A”。(参考例4)Boc-氨基丙基溴化物的合成将3-溴丙胺氢溴酸盐1. 222g (5. 58mmol)溶解在20mL 二氯甲烷中，在冰冷却下加 入三乙胺0. 778mL(5. 58mmol)，进一步用10分钟滴下Boc2Ol. 214mg(5. 56mmol)的二氯甲烷 溶液50mL并搅拌，在室温下搅拌50分钟后，加入醋酸乙酯，依次用5%柠檬酸水溶液、水、饱 和食盐水分液洗涤。用硫酸钠脱水后，减压蒸馏溶剂。得到标题化合物1.304(98%)。结 构通过1H-NMR鉴定。1H-NMR (500MHz , CDCl3) δ (ppm) = 1. 44 (9H, s, Boc) , 2. 05 (2Η, quant, -NHCH2CHaCH2Br) , 3. 28 (2H, q, -NHCHaCH2CH2Br) , 3. 44 (2H, t, -NHCH2CH2CHiBr), 4. 64 (1Η, s, NH)(实施例34)氨基丙醇_双氯芬酸盐酸盐的合成(I)Boc-氨基丙醇-双氯芬酸将双氯芬酸钠1. 476g(4. 64mmol)溶解在3mL DMF中，在冰冷却下滴下由参考例6 得到的Boc-氨基丙基溴化物1. 105g(4. 64mmol)的DMF溶液7mL，在室温下搅拌一晚上后，在60°C下搅拌10小时。在室温下搅拌一晚上后，在60°C下搅拌9小时，进一步在室温下搅 拌3天。加入醋酸乙酯，依次用5%碳酸氢钠水、水、饱和食盐水分液洗涤。用硫酸钠脱水 后，减压蒸馏醋酸乙酯，将残渣用硅胶柱色谱法(己烷醋酸乙酯=7 1、0.5%三乙胺) 纯化，得到标题化合物1. 702g (收率81% )。(2)氨基丙醇_双氯芬酸盐酸盐将由上述得到的Boc-氨基丙醇-双氯芬酸1019mg(2. 25mmol)溶解在2mL 二氯甲 烷中，在冰冷却下加入4M盐酸/醋酸乙酯8mL，搅拌3小时。加入150mL 二乙醚使其沉淀， 将沉淀进行减压干燥，得到标题化合物791mg(90% )。结构通过1H-NMR鉴定。1H-WR(SOi)MHz, CDCl3) δ (ppm) = 2. 13 (2H, quant, -NHCH2CH2CH2O-) , 3. 08 (2Η, t, -NHCe^CH2CH2O-)，3. 84 (2H, s, Ph-CH2-CO)，4. 25 (2H, t, -NHCH2CH2CH2O-)，6. 52-7. 33 (8H, m, 芳族H，NH)(实施例35)氨基丙醇-双氯芬酸导入的透明质酸钠(DS4.3% )的合成使重均分子量80万的透明质酸500mg(l. 25mmol/ 二糖单元)在水57. 5mL/ 二P恶 烷 57. 5mL 中溶解后，依次加入 0. 33M · HOSu/ 水 0. 75mL、0. 16M · WSCl · HCl/ 水 0. 75mL、由 实施例34得到的0. 16M氨基丙醇-双氯芬酸盐酸盐/水0. 75mL，搅拌一昼夜。在反应液中 加入碳酸氢钠375mg/水3mL，搅拌4小时。在反应液中加入醋酸108 μ L中和后，加入氯化 钠3. Og进行搅拌。加入乙醇200ml使其沉淀，将沉淀物用80%的乙醇、乙醇、二乙醚各洗涤 2次。在室温下减压干燥一晚上。得到505mg白色的固体。利用分光光度计算出的双氯芬 酸的导入率为4.3%。(实施例36)氨基丙醇-双氯芬酸导入的透明质酸钠(DS9.7% )的合成使重均分子量80万的透明质酸500mg(l. 25mmol/二糖单元)在水57. 5mL/二卩恶烷 57. 5mL 中溶解后，依次加入 0. 5M .HOSu/(水二聰烷=1 1) 1. 0mL、0. 25M · WSCl 'HCl/ (水二碟烷=1 1)1.0!^、由上述实施例34得到的0.2511氨基丙醇-双氯芬酸盐酸盐/ (水二嗯烷=1 1)1. OmL，搅拌一昼夜。在反应液中加入碳酸氢钠380mg/水5mL，搅拌 4小时。在反应液中加入醋酸108 μ L中和后，加入氯化钠3. Og进行搅拌。加入乙醇200ml 使其沉淀，将沉淀物用80%的乙醇洗涤3次，用乙醇、二乙醚各洗涤2次。在室温下减压干 燥一晚上。得到503mg白色的固体。利用分光光度计算出的双氯芬酸的导入率为9.7%。(实施例37)使用平均分子量65kDa的透明质酸的氨基丙醇-双氯芬酸导入的透 明质酸(65kDa)钠(DS7. 1% )的合成使平均分子量65kDa的透明质酸200. 8mg(0. 5mmol/ 二糖单元)在水22. 5mL/ 二 P恶烷22. 5mL中溶解后，依次加入IM · HOSu 0. 4mL、0. 5M · WSCl · HCl 0. 4mL、由上述实施例 34得到的0. IM氨基丙醇-双氯芬酸盐酸盐/(水二螺烷=1 l)2.0mL，搅拌一昼夜。 在反应液中加入5%碳酸氢钠水溶液3mL，搅拌3小时。在反应液中加入50%醋酸86 μ L中 和后，加入氯化钠1. Og进行搅拌。加入乙醇200ml使其沉淀，将沉淀物用85%的乙醇洗涤 2次，用乙醇洗涤2次，用二乙醚洗涤。在室温下减压干燥一晚上。得到190. 5mg白色的固 体。利用分光光度计算出的双氯芬酸的导入率为17.1%。(参考例5)Boc-氨基乙基溴化物将3-溴乙胺氢溴酸盐2. 155g(10. 5mmol)溶解在20mL 二氯甲烷中，在冰冷却下加 入三乙胺 1. 463mL(10. 5mmol)，进一步加入 Boc202. 299mg(10. 5mmol)的二氯甲烷溶液 5mL
33且搅拌。在室温下搅拌90分钟后，加入醋酸乙酯，依次用5%柠檬酸水溶液、水、饱和食盐 水分液洗涤。用硫酸钠脱水后，减压蒸馏溶剂。得到标题化合物2.287g(97%)。结构通过 1H-WR鉴定。1H-NMR (500MHz, CDCl3) δ (ppm) = 1. 45 (9H, s, Boc) , 3. 45-3. 55 (4Η, m, -NHCE^CH2Br)，4. 93 (1H, s, NH)(实施例38)氨基乙醇_双氯芬酸盐酸盐的合成(I)Boc-氨基乙醇-双氯芬酸将由参考例5得到的Boc-氨基乙基溴化物2. 287g(10. 2mmol)的DMF溶液5mL 进行冰冷却，加入双氯芬酸钠3. 255 (10. 2mmol)的DMF溶液6mL，在室温下搅拌一晚上。在 60°C下搅拌11小时。在室温下搅拌一晚上。加入醋酸乙酯，依次用5%碳酸氢钠水溶液、水、 饱和食盐水分液洗涤。用硫酸钠脱水后，减压蒸馏醋酸乙酯，将残渣用硅胶柱色谱法(甲 苯醋酸乙酯=20 1、0.5%三乙胺)纯化，得到标题化合物2.6758(60%)。结构通过 1H-WR鉴定。1H-WR(SOC)MHz, CDCl3) δ (ppm) = 1. 42 (9H, s, Boc)，3. 41 (2H，d, -NHCE^CH2O-), 3. 83 (2H, s, Ph-OirCO)，4. 21 (2H, t, -NHCH2CH2O-)，4. 72 (1H, s, NH)，6. 54-7. 47 (8H, m,芳族 H, NH)(2)氨基乙醇_双氯芬酸盐酸盐将由上述得到的Boc-氨基乙醇-双氯芬酸2. 108mg(4. 80mmol)溶解在5mL 二氯 甲烷中，在冰冷却下加入4M盐酸/醋酸乙酯20mL，搅拌2. 5小时。加入二乙醚、己烷使其沉 淀，将沉淀进行减压干燥，得到标题化合物1. 775g(98% )。结构通过IH-NMR鉴定。1H-NMR(500MHz, CDCl3) δ (ppm) = 3. 18 (2H, t, NH2CHiCH2O-) , 3. 94 (2Η, s, Ph-CH2-CO)，4. 37 (2H, t, NH2CH2CHaO-)，6. 47-7. 31 (8H, m,芳族 H, NH)(实施例39)氨基乙醇-双氯芬酸导入的透明质酸钠(DS14.7% )的合成使重均分子量80万的透明质酸500mg(l. 25mmol/ 二糖单元)在水57. 5mL/ 二嗯 烷57. 5mL中溶解后，依次加入2M 'HOSu 0. 5mLUM 'WSCl 'HCl 0. 5mL、由上述实施例38得 到的氨基乙醇-双氯芬酸盐酸盐188.6mg(0. 5mmol)的溶液(水二卩恶烷=1 l)3mL，搅 拌一昼夜。加入碳酸氢钠水溶液7. 5mL，搅拌4小时。在反应液中加入50%醋酸215μ L中 和后，加入氯化钠2. 5g进行搅拌。加入乙醇500ml使其沉淀，将沉淀物用85%的乙醇、乙 醇、二乙醚各洗涤2次。在室温下减压干燥一晚上。得到473. 7mg白色的固体。利用分光 光度计算出的双氯芬酸的导入率为14.7%。(实施例40)二氨基丙烷_双氯芬酸盐酸盐的合成(1) Boc-丙基酰胺_双氯芬酸将N-(2_氨基丙基)氨基甲酸叔丁酯338.4mg(1.94mm0l、东京化成工业株式 会社制)、双氯芬酸694. 4mg (2. 34mmol)溶解在3mL 二氯甲烷中，在冰冷却下加入DMAP 59. Omg (0. 483mmol)、WSCl · HCl 505. 3mg(2. 64mmol)，搅拌 70 分钟，一边升到室温一边搅 拌90分钟。加入醋酸乙酯，依次用5%柠檬酸水溶液、5%碳酸氢钠水溶液、饱和食盐水分液 洗涤。用硫酸钠脱水后，减压蒸馏醋酸乙酯。将残渣用硅胶柱色谱法(己烷醋酸乙酯= 2 1)纯化，得到标题化合物835. 5g(95% )。结构通过1H-NMR(CDCl3)鉴定。1H-NMR (500MHz , CDCl3) δ (ppm) = 1. 45 (9H, s, Boc) , 1. 60 (2Η,quant, -NHCH9CH二CH9NHBoc) , 3. 14 (2H, q, -NHCH9CH,CH1NHBoc) ,3.31 (2H, q, -Nhch2CH2CH2NHBoc)，3. 69 (2H, s, Ph-OirCO)，4. 93 (1H, s，NH)，6. 50-7. 60 (9H, m,芳族 H, NH)(2) 二氨基丙烷_双氯芬酸盐酸盐向由上述得到的Boc-丙基酰胺-双氯芬酸825. Omg(1.82mm0l)的二氯甲烷溶液 ImL中，在冰冷却下加入4M盐酸/醋酸乙酯20mL，搅拌2小时。加入二乙醚使其沉淀，将沉 淀进行减压干燥。得到标题化合物714. 5mg(101% )。结构通过1H-NMR鉴定。1H-NMR (500MHz, CDCl3) δ (ppm) = 1. 90 (2H, t, -NHCH2CHaCH2NH2) , 2. 99 (2Η, t, -NHCH2CH2a^NH2)，3. 26 (2H, d, -NHcH2CH2CH2NH2) ,3. 71 (2H, s, Ph-CH2-CO)，6. 40-7. 49 (8H, m，芳族 H，NH)(实施例41)二氨基丙烷-双氯芬酸导入的透明质酸(DS18. 1% )的合成使重均分子量80万的透明质酸200mg(0. 5mmol/ 二糖单元)在水22. 5mL/ 二卩恶烷 22. 5mL中溶解后，依次加入2M · HOSu 0. 2mL、IM · WSCl · HCl 0. 2mL、由上述实施例40得到 的二氨基丙烷-双氯芬酸盐酸盐78.4mg(0. 2mmol)的溶液(水二卩恶烷=1 l)lmL，搅 拌一昼夜。加入5%碳酸氢钠水溶液3mL，搅拌4小时。在反应液中加入50%醋酸86μ L中 和后，加入氯化钠Ig进行搅拌。加入乙醇200ml使其沉淀，将沉淀物用85%的乙醇洗涤2 次、乙醇洗涤2次、二乙醚洗涤，在室温下减压干燥一晚上。得到206. 2mg的白色固体。利 用分光光度计算出的双氯芬酸的导入率为18. 1%。(实施例42)生物试验用氨基丙醇_酮洛芬导入的透明质酸钠溶液的制备在由实施例3得到的氨基丙醇_酮洛芬导入的透明质酸钠(导入率26. 3% ) 22mg 中，加入5mM磷酸缓冲生理盐水使总量为2. 19g，搅拌一晚上，配制1 %溶液。将溶液用 0. 45 μ m过滤器过滤，作为标题溶液。将该溶液的内毒素含量用作为日本药典刊载的一般试 验法的内毒素试验法(比色法)测定，内毒素值为0. 0073EU/M1。<给药试验>(实施例4幻氨基丙醇_酮洛芬导入的透明质酸钠对大鼠缓激肽引起疼痛模型的效果1)被检物质的给药作为全身麻醉剂，使用在小动物用麻醉器(TK-4、K ^才* f >J 一制)中填充的 异氟烷(7才一 > > (注册商标)、大日本制药株式会社制)的吸入麻醉(浓度3.0%、流 量 2. OL/ 分)。作为被检物质，使用PBS、1%的透明质酸钠溶液(HA)、在PBS中溶解了酮洛芬的 3. 7mg/mL酮洛芬钠溶液(KP)、及由实施例42制备的1 %氨基丙醇-酮洛芬导入的透明质酸 钠的PBS溶液(KP-HA)。将大鼠(Crj :SD系(SPF)、雄性、7周大)在乙醚麻醉下背位固定，用理发器将左后 肢膝关节周围大面积地剃毛。用70%乙醇将关节周围喷雾消毒，使用29G胰岛素用的带针 注射器(f 制)，将上述各被检物质以20μιν关节的用量在左后肢膝关节腔内给药。 各被检物质按每组5例(η = 5)实施。2)致痛物质(BK+PGE2溶液)的给药在各被检物质给药1天后，在无麻醉下，将大鼠背位固定，用70%乙醇将关节周围喷雾消毒后，使用29G胰岛素用的带针注射器(，> 制、注射针的粗度0. 33mm)，在左后肢 膝关节腔内将作为致痛物质的缓激肽(BK)和前列腺素E2 (PGE2)的混合溶液按50 μ L/关节 的用量给药。另外，将该致痛物质溶液配制成BK及PGE2各自终浓度4yg/mL、2yg/mL。自 致痛物质给药之后肉眼观察疼痛反应。3)疼痛观察自致痛物质给药之后，约2分钟，用肉眼观察有无提腿、三腿行走、跛行程度约2分 钟，对行走状态进行评化。将疼痛评分在0 2分的阶段进行评价，提腿加1分，跛行或三 腿行走加1分。另外，评价在遮光状态下实施。在图1中显示对各个体的疼痛反应评分后 的图。在图1中，通过平均疼痛评分士标准偏差表示结果。结果，与给药组相比，按KP-HA > KP > HA的顺序确认疼痛抑制效果。(实施例44)对大鼠硝酸银引起疼痛模型的氨基丙醇-酮洛芬导入的透明质酸钠的关节腔 内给药引起的效果1)引起疼痛物质的给药作为全身麻醉剂，使用填充在小动物用麻醉器(TK-4、K ^才*少1J 一制)中的 异氟烷(7才一> > (注册商标)、大日本制药株式会社制)的吸入麻醉(浓度3.0%、流 量 2. OL/ 分)。将大鼠(Crj :SD系(SPF)、雄性、6周大)在乙醚麻醉下背位固定，用理发器将左后 肢膝关节周围大面积地剃毛。用70%乙醇将关节周围喷雾消毒，使用29G胰岛素用的带针 注射器(制)，将1%硝酸银溶液以50 μ l/关节的用量在左后肢膝关节腔内给药。2)被检物质的给药作为被检物质，制备了以各自PBS为溶剂的透明质酸钠溶液(HA)及由实施例 42制备的氨基丙醇-酮洛芬导入的透明质酸钠溶液(KP-HA)。在硝酸银溶液给药 24小时后，将大鼠按5只1组分成2组，在各组中给药被检物质。给药方法与疼痛引起物质 一样，在异氟烷的吸入麻醉下，用70%乙醇将关节周围进行喷雾消毒，使用29G胰岛素用的 带针注射器按40 μ L/关节的用量在左后肢膝关节腔内进行给药。2)评价方法使用在遮光状态下将行走状态评分的下述疼痛评分表，肉眼观察各组的行走状 态。结果在图2中表示。在图2中，通过平均疼痛评分士标准偏差表示结果。评分0 正常(含大致正常)1:轻度的跛行2:重度的跛行3:三腿行走另外，使用四肢负荷装置(有)卜7 * >社制)测定施加在硝酸银给药腿(左后 肢)中的负荷，用体重除的结果作为荷重加载率(需要说明的是，荷重加载率正常时约为 32%)。至被检物质给药后2天每天测定一次。结果在图3中表示。由图2来看，HA给药组与KP-HA给药组均是疼痛评分缓慢地减少，但KP-HA给药
36组比HA给药组疼痛减轻的程度(由疼痛的恢复度)快。另外，在荷重加载率测定中，通常 越是由疼痛恢复，荷重加载率越升高，但由图3的结果看，KP-HA给药组比HA给药组荷重加 载率的值用更短的时间实现了明显地升高。图2和图3结果中的KP-HA给药组和HA给药 组的相关关系相同。(实施例45)兔膝关节中NSAIDs导入的透明质酸的缓释性的研究1)被检物质的给药方法作为被检物质，使用实施例42得到的氨基丙醇_酮洛芬导入的透明质酸钠溶 液(KP-HA)、在ImL的PBS中溶解了 1. 42mg的酮洛芬的酮洛芬溶液(KP)、及在ImL的
HA溶液中溶解了 1. 4Img的酮洛芬的酮洛芬与HA的混合溶液(KP+HA)。对各被检物质使用兔子各5只，在氯胺酮全身麻醉下(ImL/头、静脉注射)背位固 定，用理发器将左膝关节周围大面积地剃毛，用装载了 25G的注射针(子> 制、注射针的 粗度为0. 5mm)的f > ImL注射器从兔膝关节外侧在关节腔内各自投入300 μ L上述被检 物质。在从被检物质给药6小时、12小时、24小时、2天、4天后实施解剖。2)关节液中的游离型KP量及结合型KP量的测定方法将兔子在氯胺酮全身麻醉下放血杀死，全部回收关节液后，在分离的膝关节部的 关节腔内使用25G注射针注入生理盐水2mL，洗涤关节腔内，该洗涤液也回收。该洗涤进行 2次。用下述步骤测定合并了回收的洗涤液的关节液中的KP量及HA-KP量。在关节液(4ml vol.)中加入IN HCl (2ml)，确认盐酸酸性后，加入与溶液同体积的 醋酸乙酯，剧烈地搅拌，回收上部的有机层。共进行3次该提取操作。在回收的有机层中添 加乙腈溶液成为乙腈溶液，使用HPLC，测定游离KP量。(关节液中的游离型KP量)其次，在用上述的提取操作得到的水层中加入IN NaOH使其为强碱性，在室温下搅 拌1小时。接着，将水层冰冷却，一边缓慢地加入4N HCl—边搅拌，成为盐酸酸性后，加入 与溶液同体积的醋酸乙酯，进行剧烈地搅拌，回收上部的有机层。共进行3次该提取操作。 在回收的有机层中添加乙腈溶液作为乙腈溶液，使用HPLC，测定HA-KP量(结合型KP量)。 (关节液中的结合体HA-KP量)3)滑膜组织的消化液中的KP量的测定方法从回收了上述(2)的关节液后的膝关节分离收集滑膜组织。收集的滑膜组织用生 理盐水IOOmL仔细地洗涤，完全除去附着的关节液。滑膜组织在去掉膝盖骨以后，放入管 中，添加用IOmM醋酸钠溶液(pH7. 5)调制成2mg/mL浓度的蛋白酶K(批号102K8633、SIGMA 制)5mL，一边以适当涡流搅拌，一边在55°C下进行酶消化41小时。消化后，在100°C下、用 5分钟使酶失活，用下述步骤测定得到的消化液中的KP量。在得到的消化液中加入1/4量的4N NaOH，在室温下搅拌1小时。接着，将该溶液冰 冷却，加入4N HCl成为盐酸酸性后，加入与溶液同体积的二乙醚，剧烈地进行搅拌，除去上 部有机层。该脱脂操作共进行3次。在冰冷却下，在脱脂操作后的溶液中加入4N HCl并进 行搅拌，确认盐酸酸性后，加入与溶液同体积的醋酸乙酯，进行剧烈地搅拌，回收上部的有 机层。共进行3次该提取操作。在回收的有机层中添加乙腈溶液作为乙腈溶液，使用HPLC， 测定游离KP量。(滑膜组织消化液中的游离型KP量)算出在关节液中、滑膜组织消化液中相继的KP及HA-KP的残存率。(表1、图4)
表 1
被检物质回收部位存在方式6小时 (%)12小时 (%)24小时 (%)2 天(％)4 天(％)KP (单剂)关节液游离型KP0滑膜组织0KP+ HA (混合物)关节液游离型KP0.070滑膜组织00KP-HA (结合体)关节液游离型KP0.130.140.220.160结合体型KP46.5634.9418.958.110.63滑膜组织11.35.2032.9012.107.4 作为被检物质，在给药KP (单剂)或KP+HA (混合物)的情况下，在6小时、12小时 后，KP从关节液及滑膜组织消失。但是，在给药作为本发明物质的KP-HA(结合体)的情况 下，确认4天后关节液及滑膜组织也与KP共存，推测在给药部位中KP持续地存在，显示持 续效果。在关节引起的疼痛据推测不是通过作为非神经组织的软骨，而是通过滑膜组织产 生，另外认为，当在关节腔内给药NSAIDs时，NSAIDs快速地向滑膜转移，转移到滑膜显示作 用。因此认为滑膜中的NSAIDs浓度的维持与疼痛抑制的持续效果及缓释效果有很大关系。 由上述表来看，KP(单剂)的给药，在6小时后利用滑膜的通过及代谢从滑膜组织消失，但 在给药KP-HA (结合体)时，即使在滑膜组织中也持续地保持KP，作为NSAIDs的缓释性制剂 更有效。(实施例46)对大鼠硝酸银引起疼痛模型的导入率(DS)不同的氨基丙醇-二 氯苯胺乙酸导入的透明质酸钠的关节腔内给药引起的效果按照上述实施例44的实验顺序进行试验，对与下述被检验物质有关的关节腔内 给药进行评价。被检物质(i)由实施例19得到的氨基丙醇-双氯芬酸导入的透明质酸钠(DS18.2% ) 的PBS溶液(ii)由实施例36得到的氨基丙醇-双氯芬酸导入的透明质酸钠(DS9. 7%) 的PBS溶液(iii)由实施例35得到的氨基丙醇-双氯芬酸导入的透明质酸钠(DS4. 3% ) 的PBS溶液(iv) PBS与上述实施例44 一样，使用在遮光状态下将行走状态评分的疼痛评分表，肉眼观 察各组的行走状态。结果在图5中表示。结果通过平均疼痛评分士标准偏差显示，DS18%、 DS10%及DS4%分别与DS18. 2%,DS9. 7%及DS4. 3%相对应。另外，在图5中，*表示风险率0. 01 < P < 0. 05，对PBS存在有显著差异，**表示风险率P < 0. 01，对PBS存在有显著差异。从结果来看，作为被检物质的DS18. 2%, DS9. 7%及DS4. 3%的双氯芬酸导入的透 明质酸钠衍生物，都显示镇痛效果。其中，DS18. 2%及DS9. 7%的被检物质与PBS相比，显 示剧烈的镇痛效果。另外，镇痛效果随双氯芬酸的导入率(DS)的增加而提高。(参考例6)对大鼠硝酸银引起疼痛模型的双氯芬酸钠的经口给药引起的效果按照上述实施例44进行实验，关于被检物质的给药方法实行下述被检物质的经 口给药进行评价。但是，被检物质的给药使用大鼠用经口给药探棒P千方$器械店)按 ImL/头的用量经口给药。被检物质(i)l%双氯芬酸钠悬浊液(10%阿拉伯树胶)(ii)0. 02%双氯芬酸钠悬浊液(10%阿拉伯树胶)另外，⑴(高用量组)作为双氯芬酸钠相当于给药50mg/kg，(ii)(低用量组)作 为双氯芬酸钠相当于大体上与临床给药量相同的lmg/kg的给药。与上述实施例46 —样，使用在遮光状态下将行走状态评分的疼痛评分表，肉眼观 察各组的行走状态。结果在图6中表示。在图6中，“双氯芬酸Na(ρ. ο. )50mg/kg”与上述⑴ (高用量组)相对应，“双氯芬酸Na (ρ. ο.) lmg/kg”与上述(ii)(低用量组)相对应。另外， 在图6中，作为参考，由上述实施例46测定的双氯芬酸导入的透明质酸衍生物(DS18. 2% ) 及PBS的关节腔内注入引起的疼痛评分的结果也一起分别作为“双氯芬酸-HA”、“PBS”记 载。从结果来看，在双氯芬酸钠的高用量组(50mg/kg)的经口给药中，可以看出疼痛 抑制效果，但从第二天看到便潜血反应阳性、黄疸样症状、体重减少。高用量组的用量，是临 床给药量的数十倍的用量，在副作用、毒性方面不是现实的用量。大体上为临床给药量的低用量组(lmg/kg)的经口给药组，即使与PBS的关节注入 组相比也未看到效果。另一方面，在双氯芬酸导入的透明质酸衍生物的关节腔内给药中，发现自给药后 疼痛抑制。另外，被认为双氯芬酸钠的高用量组(50mg/kg)的经口给药这样的副作用的症 状也没观察到，确认有高的有效性。(参考例7)对大鼠硝酸银引起疼痛模型的双氯芬酸单剂、透明质酸的关节腔 内给药引起的效果按照上述实施例44进行实验，关于被检物质的给药方法，实行与下述被检物质有 关的关节腔内给药进行评价。被检物质(i)0. 双氯芬酸溶液(ii)0. 双氯芬酸/1%透明质酸混合溶液(iii)PBS与上述实施例46 —样，使用在遮光状态下将行走状态评分的疼痛评分表，肉眼观 察各组(η = 9)的行走状态。结果在图7中表示。在图7中，结果通过平均疼痛评分士标准偏差显示，0. 双氯芬酸Na与上述(i)0. 双氯芬酸溶液相对应，“0. Diclo+HA” 与上述(ii)0. 双氯芬酸/1%透明质酸混合溶液相对应。另外，在图7中，作为参考， 由上述实施例46测定的双氯芬酸导入的透明质酸衍生物(DS18.2%)的结果也一起作为 “Dic-HA(结合体)”进行了记载。从结果来看，双氯芬酸单剂及双氯芬酸和透明质酸的混合物，与作为对照组的PBS 相比，未显示显著的效果。(实施例47)对大鼠硝酸银引起疼痛模型的氨基丙醇-双氯芬酸导入透明质 酸(65kDa)钠、二氨基丙烷-双氯芬酸导入透明质酸钠及氨基乙醇-双氯芬酸导入透明质 酸钠的关节腔内给药引起的效果按照实施例44进行实施，对与下述被检物质有关的关节腔内给药进行评价被检物质(i)由实施例37得到的氨基丙醇-双氯芬酸钠导入的透明质酸(65kDa)钠的 PBS溶液(ii)由实施例41得到的二氨基丙烷-双氯芬酸钠导入的透明质酸钠的PBS 溶液(iii)由实施例39得到的氨基乙醇-双氯芬酸钠导入的透明质酸钠的PBS溶 液(iv) PBS与上述施实例44 一样，使用在遮光状态下将行走状态评分的疼痛评分表，肉眼 观察各组(η = 7)的行走状态。结果在图8中表示。在图8中，结果通过平均疼痛显示， “65kDa”与上述(i)l%氨基丙醇-双氯芬酸钠导入的透明质酸(65kDa)钠的PBS溶液相对 应，“二氨化物”与上述(ii) 1 %二氨基丙烷_双氯芬酸导入的透明质酸钠的PBS溶液相对 应，“C2”与上述(iii)l%氨基乙醇-双氯芬酸导入的透明质酸钠的PBS溶液相对应。另外， 在图8中，D表示风险率为0. 05 < P < 0. 1，对PBS存在有显著差异，*表示风险率为0. 01 < P < 0. 05，对PBS存在有显著差异，**表示P < 0.01 JfPBS存在有显著差异。由结果来看，间隔物碳数使用比氨基丙醇少一个的氨基乙醇的氨基乙醇_双氯芬 酸导入的透明质酸钠溶液也显示高的镇痛效果，但双氯芬酸通过酰胺键导入的二氨基丙 烷-双氯芬酸导入的透明质酸钠溶液，在本实施例的实验体系中完全不显示效果。另外，使 用分子量65kDa的透明质酸的双氯芬酸导入的透明质酸衍生物，与分子量80万的相比，镇 痛效果降低了。由此来看，显然镇痛效果依赖于与双氯芬酸的结合方式或透明质酸的分子量。(实施例48)双氯芬酸钠单剂及双氯芬酸导入的透明质酸衍生物对C0X-2的作用 (体外)使用 Chemiluminescent COX Inhibitor Screening Assay kit (Cayman)(以来自 羊的C0X-2引起的过氧化物酶活性为指标，筛选抑制剂的试剂盒)，对下述被检物质评价了 C0X-2抑制作用。被检物质(i)由实施例19得到的氨基丙醇-双氯芬酸导入的透明质酸钠水溶液 (Dic-C3-HA)(相当于200 μ g/ml HA，相当于80 μ M双氯芬酸)
(ii)用与实施例39同样的步骤得到的氨基乙醇_双氯芬酸导入的透明质酸钠水 溶液(DIC-C2-HA、DS 18. 5% )(相当于200 μ g/ml HA，相当于80 μ M双氯芬酸)(iii) 80 μ M双氯芬酸钠水溶液(iv) 200 μ g/ml透明质酸钠(HA)水溶液制作上述被检物质的原液及用蒸馏水稀释了 10倍、100倍、1000倍的被检物质，用 COX Inhibitor Screening Assay kit测定了 C0X-2抑制活性(无处理组η = 6、被检物质 组η = 3)。结果，将未处理组的C0X-2酶活性设定为100%，通过下述式用相对％表示各处 理组的酶活性值。结果在图9(a)及图9(b)中表示。在图9(a)中，“双氯芬酸Na”与上述 双氯芬酸钠水溶液相对应，"Dic-C3-HA"与上述氨基丙醇-双氯芬酸导入的透明质酸钠水 溶液相对应，“Dic-C2-HA”与上述氨基乙醇-双氯芬酸导入的透明质酸钠水溶液相对应。在 图9 (b)中，“HA”与上述200 μ g/ml透明质酸钠水溶液相对应。酶活性值(％ )=被检物质处理群+未处理组X 100结果，在双氯芬酸钠单剂显示明显的C0X-2抑制活性的浓度中，含有相当浓度的 双氯芬酸的双氯芬酸导入的透明质酸衍生物(Dic-C3-HA及DIC-C2-HA)没有显示出C0X-2 抑制活性。HA单剂也没有显示出C0X-2抑制活性。从该结果来看，体外试验中的双氯芬酸 导入的透明质酸衍生物的效果，不是双氯芬酸衍生物本身的作用，显示了起因于由HA脱离 的双氯芬酸的可能性。体外(实施例46、47)中的双氯芬酸导入的透明质酸衍生物的效果，作为比双氯芬 酸单一物质更好的理由之一，可以认为是由于HA利用对该细胞的亲和性，运送更多量的双 氯芬酸至目的细胞内的缘故。(实施例49)双氯芬酸导入的透明质酸衍生物对大鼠佐剂性关节炎(AIA)模型的 作用1)佐剂的诱导将 Mycobacterium butyricum( fth ^ 2115687、Difco)6mg/mL 用高压灭菌器在 121°C下热处理20分钟后，使用29G胰岛素用的带针注射器(f > )按50 μ L/关节的用 量注射在左后肢趾皮下。2)试验物质的给药被检物质(i)由实施例19得到的氨基丙醇-双氯芬酸导入的透明质酸(DS18% )钠的 水溶液(双氯芬酸-HA)(ii)PBS上述被检物质与佐剂注射时一样，在无麻醉条件下使用29G胰岛素用的带针注射 器()按50 yL/关节的用量在两腿的胫骨-脚跟骨关节腔内佐剂注射之后，在注射 后1、2、3周进行给药(共4次)(η = 14)4)评价在佐剂诱导前、引起后3、5、7、10、12、14、21、28日进行评价。·体重·两后肢脚体积(大鼠·小鼠后肢脚垫浮肿体积测定装置(TK-101CMP、(有)二 二 二 A社制)
5)结果通过下述式测定佐剂给药足及非给药足的膨胀率。佐剂给药足膨胀率的结果在图 10(a)中表示，佐剂非给药足的结果在图10(b)中表示。在图10中，“双氯芬酸-HA”表示 上述(i)l%氨基丙醇-双氯芬酸导入的透明质酸(DS18%)钠的PBS溶液，“正常”表示佐 剂及被检物质给药组。在图10中，D表示风险率为0. 05 < P < 0. IJ^PBS存在有显著差 异，*表示风险率为0. 01 < P < 0. 05，对PBS存在有显著差异，**表示风险率P < 0. 01，对 PBS存在有显著差异。膨胀率=(测定日的足体积_佐剂诱导前的足体积)/佐剂诱导前体积X 100自佐剂诱导后3天开始看到在给药足(R)内浮肿，双氯芬酸-HA在引起后3、5、21 日内与PBS组相比，统计学上显著，在7、26、28日内虽然不显著，但显示抑制足浮肿体积的 作用。尽管在其他的时刻也是非显著的，但在任何时刻双氯芬酸-HA组都显示低值。非给药足(L)自诱导后14日看到明显的肿胀(二次炎症)。双氯芬酸-HA在诱导 后14、26日内统计学上显著地抑制了该浮肿。另外，在21、28日内虽然不显著，但显示出抑 制倾向。另外，该大鼠佐剂性关节炎(AIA)模型，一般来讲作为自身免疫疾患引起的关节 炎的风湿性关节炎的模型使用，从上述结果来看，本发明物质也期待对风湿性关节炎有效^ ο详细地或参照特定实施方式说明本发明，但在不脱离本发明的精神和范围的情况 下，可以添加各种变更及修正，这对本领域的技术人员来说是一目了然的。本申请是基于2004年1月7日申请的日本专利申请(特愿2004-2478)的文本， 其内容在此作为参照被引用。在此引用的全部的参照作为整体被引用。工业上利用的可能性利用本发明，提供通过具有在生物体内可以分解的部位的间隔物NSAIDs以共价 键结合在透明质酸上的NSAIDs导入的透明质酸衍生物、同样地DMARD共价键结合的DMARD 导入的透明质酸衍生物、及含有这些衍生物作为有效成分的药剂。NSAIDs导入的透明质酸 衍生物及DMARD导入的透明质酸衍生物由于良好地溶解在作为注射剂等溶剂使用的缓冲 液中，故作为在患部可以直接给药的注射剂可以使用。另外，本发明药剂可以在关节炎的治 疗、炎症的抑制及疼痛的抑制中使用，作为注射剂也可以非经口给药或局部给药(例如，关 节内给药)。
权利要求
一种透明质酸衍生物，通过由下述式(2)表示的非甾类抗炎症化合物用共价键结合在透明质酸上而得到，其中，导入了该抗炎症化合物的透明质酸组成二糖单元的部分结构，用下述式(1)表示，Y CO NH R1 (O R2)n(1)Y CO 表示透明质酸的组成二糖单元的一个残基，R2表示非甾类抗炎症化合物残基或氢原子，其中不包括全部为氢原子的情况， HN R1 (O R2)n表示用含有n个羟基的H2N R1 (OH)n表示的间隔物化合物的间隔物残基，R1表示具有或不具有取代基的碳数2～12的直链或具有分支的烃基， CO NH 表示作为透明质酸的组成糖的葡糖醛酸的羧基和间隔物化合物具有的氨基的酰胺键，n表示1～3的整数；另外，间隔物化合物的残基和非甾类抗炎症化合物的残基之间的键是间隔物化合物具有的羟基和非甾类抗炎症化合物具有的羧基的酯键；该透明质酸衍生物中的非甾类抗炎症化合物的导入率为每个透明质酸的重复二糖单元5～50摩尔％，构成透明质酸衍生物的透明质酸残基中的羰基，根据非甾类抗炎症化合物残基的导入率，作为参与与该间隔物结合的抗炎症化合物残基的键合的酰胺键或者作为不参与与该间隔物结合的抗炎症化合物残基的键合的游离的羧基存在，R3表示选自低级烷基及低级烷氧基的取代基或氢原子；R4、R5及R6分别独立地表示选自由低级烷基、低级烷氧基及羟基组成的组中的取代基、卤原子或氢原子；X分别独立地相同或不同，表示选自低级烷基及三氟甲基的取代基或卤原子，至少X的任一个是卤原子。FSA00000214650300011.tif
2. 一种透明质酸衍生物，通过非留类抗炎症化合物用共价键结合在透明质酸上而得 到，其中，导入了该抗炎症化合物的透明质酸组成二糖单元的部分结构，用下述式(1)表Y-CO-NH-R1-(O-R2)n(I)Y-CO-表示透明质酸的组成二糖单元的一个残基，R2表示非留类抗炎症化合物残 基或氢原子，其中不包括全部为氢原子的情况，-HN-R1-(O-R2)n表示用含有η个羟基的 !！力-！^-⑴！！^表示的间隔物化合物的间隔物残基，R1表示具有或不具有取代基的碳数2 12的直链或具有分支的烃基，-CO-NH-表示作为透明质酸的组成糖的葡糖醛酸的羧基和间 隔物化合物具有的氨基的酰胺键，η表示1 3的整数；另外，间隔物化合物的残基和非甾 类抗炎症化合物的残基之间的键是间隔物化合物具有的羟基和非留类抗炎症化合物具有 的羧基的酯键；该透明质酸衍生物中的非留类抗炎症化合物的导入率为每个透明质酸的重 复二糖单元5 50摩尔％，构成透明质酸衍生物的透明质酸残基中的羰基，根据非留类抗 炎症化合物残基的导入率，作为参与与该间隔物结合的抗炎症化合物残基的键合的酰胺键 或者作为不参与与该间隔物结合的抗炎症化合物残基的键合的游离的羧基存在， 所述非留类抗炎症化合物从如下组中选择酮洛芬、萘普生、布洛芬、氟比洛芬、乙酰水 杨酸、联苯乙酸、联苯丁酮酸、甲芬那酸、双氯芬酸和依托度酸。
3.如权利要求1或2所述的透明质酸衍生物，其中，所述式(1)中的R1是具有或不具 有取代基的亚乙基、三亚甲基或亚丙基。
4.一种利用注入装置能够推出的透明质酸衍生物溶液，通过权利要求1或2所述的透 明质酸衍生物溶解在水性介质中而得到。
5.一种药剂，其含有权利要求1或2所述的透明质酸衍生物作为有效成分。
6.一种酸衍生物，用下述式(3)表示，其通过间隔物化合物共价结合在由下述式(2)表 示的非留类抗炎症化合物上而得到， (3)R2表示用下述式(2)表示的非留类抗炎症化合物残基或氢原子，其中不包括全部是氢 原子的情况，H2N-R1-(0-) n表示用含有η个羟基的H2N-R1- (OH) η表示的间隔物化合物的间隔 物残基，R1表示具有或不具有取代基的碳数2 12的直链或具有分支的烃基，η表示1 3的整数，另外，间隔物化合物的残基和非甾类抗炎症化合物的残基之间的键是间隔物化合 物具有的羟基和非留类抗炎症化合物具有的羧基的酯键，R3表示选自低级烷基及低级烷氧基的取代基或氢原子；R4、R5及R6分别独立地表示选 自由低级烷基、低级烷氧基及羟基组成的组中的取代基、卤原子或氢原子；X分别独立地相 同或不同，表示选自低级烷基及三氟甲基的取代基或卤原子，至少X的任一个是卤原子。
7. 一种酸衍生物，用下述式(3)表示，其通过间隔物化合物共价结合在非留类抗炎症 化合物上而得到，H2N-R1-(O-R2)n (3)R2表示用下述式(2)表示的非留类抗炎症化合物残基或氢原子，其中不包括全部是氢 原子的情况，H2N-R1-(0-) η表示用含有η个羟基的H2N-R1- (OH) η表示的间隔物化合物的间隔 物残基，R1表示具有或不具有取代基的碳数2 12的直链或具有分支的烃基，η表示1 3的整数，另外，间隔物化合物的残基和非甾类抗炎症化合物的残基之间的键是间隔物化合 物具有的羟基和非留类抗炎症化合物具有的羧基的酯键，所述非留类抗炎症化合物从如下组中选择酮洛芬、萘普生、布洛芬、氟比洛芬、乙酰水 杨酸、联苯乙酸、联苯丁酮酸、甲芬那酸、双氯芬酸和依托度酸。
全文摘要
通过具有在生物体内可以分解的部位的间隔物，抗炎症化合物用共价键结合在透明质酸上的透明质酸衍生物及其制造方法。
文档编号A61K45/00GK101921347SQ20101024329
公开日2010年12月22日 申请日期2005年1月7日 优先权日2004年1月7日
发明者吉冈敬二, 安田洋祐, 宫本建司 申请人:生化学工业株式会社