专利名称：独一味提取物、含有该提取物的药物组合物及质量控制方法
技术领域：
本发明涉及一种独一味提取物及含有该提取物的药物组合物及质量控制方法，属 药物领域。
背景技术：
独一味是藏族习用药材，为唇形科植物独一味Lamio-phlomis rotata(Benth.) Kudo的根及根状茎、全草，生长于海拔3000m以上的高原或高山上。独一味性微寒，味苦，有 小毒 ’功效活血，行瘀消肿，止痛；主治跌伤筋骨，闪腰挫气，关节积黄水。其化学成分有 黄酮类成分，环烯醚萜类化合物，苯乙醇苷类等，报道的药理活性有，镇痛作用、止血作用、 抗炎作用、抗肿瘤，对骨髓粒系祖细胞(CFU-D)的影响(见张凤等，独一味的化学成分及药 理作用，药学实践杂志2008年第26卷第3期)。关于独一味及制剂的质量控制方法，《中国药典》2005年版一部(第184和541页) 收载有独一味药材和独一味胶囊剂，规定了黄酮类成分(木犀草素和/或总黄酮)的检测 项目。众所周所，从植物中获得纯的有用价值的化合物极为困难，成本很高，同时也为了避 免难以预料的副作用，一般不使用植物中的有效纯化合物，而使用药用植物提取物直接作 用药用原料，成本低而且应用简便。但植物提取物的一个缺陷是，由于植物采收季节和产地 不同都会造成有效成分含量的波动，同时，如果主要有效成分及其含量不清楚，都会给药品 的质量控制造成很大困难，因此，为了保持植物药的质量稳定，清楚知道植物中各基本药效 成分及其含量是很重要的。由于黄酮类成分并非是独一味制剂中的主要活性成分之一，因 此仅仅通过对黄酮类成分的质量控制，尚不能完全监控独一味制剂的质量。山桅苷甲酯是独一味中环烯醚萜类化合物之一，张承忠等人(藏药独一味中的环 烯醚萜甙.中草药.1992年第23卷第10期第509、510和560页)首次从藏药独一味中得 到山桅苷甲酯。8-0-乙酰山桅苷甲酯是从独一味根的正丁醇提取物中分得4个环烯醚萜苷 (见易进海等，藏药独一味根环烯醚萜甙的研究，药学学报，1997，32 (5) :357-360)，目前， 尚没有将两个化合物同时作为质量控制的指标成分报道。
发明内容
本发明的技术方案是提供了 一种独一味提取物，本发明的另一技术方案是提供了 含有该提取物的药物组合物及其质量控制方法。本发明提供一种独一味提取物，它含有山桅苷甲酯和8-0-乙酰山桅苷甲酯，总重 量不低于5mg/g。它含有山桅苷甲酯和8-0-乙酰山桅苷甲酯的总重量为6. 1-19. 7mg/g。进一步优选地，山桅苷甲酯与8-0-乙酰山桅苷甲酯的比值范围为0. 27-5. 25。更进一步优选地，山桅苷甲酯与8-0-乙酰山桅苷甲酯的比值范围为0. 81-5. 25。本发明独一味提取物是独一味药材的水或有机溶剂提取物。
本发明还提供了一种药物组合物，它含有所述的独一味提取物为活性成分，加上 药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的药剂。所述的药剂是胶囊剂、片剂、颗粒剂、丸剂、口服液、软胶囊剂或滴丸剂。本发明还提供了一种检测独一味药材及其提取物或含有独一味提取物的药物组 合物的质量的方法，它是以山桅苷甲酯和8-0-乙酰山桅苷甲酯为指标成分进行质量检测。其中，独一味提取物中含有山桅苷甲酯和8-0-乙酰山桅苷甲酯，总重量不低于 5mg/g。本发明还提供了一种检测独一味药材质量的方法，它是以山桅苷甲酯和8-0-乙 酰山桅苷甲酯为指标成分进行质量检测；色谱条件为以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以水为流动 相B，进行梯度洗脱；检测波长为235nm，理论板数按山桅苷甲酯峰计算应不低于3000，梯度 洗脱的步骤为第0-11分钟，流动相A占9%v/v，流动相B占91% ν/ν;第11 35分钟， 流动相A占9- 18% ν/ν，流动相B占91 — 82% ν/ν ；第35-45分钟，流动相A占18% ν/ ν，流动相B占82% ν/ν ；对照品溶液的制备精密称取山桅苷甲酯、8-0-乙酰山桅苷甲酯对照品适量，加 甲醇制成每Iml含山桅苷甲酯、8-0-乙酰山桅苷甲酯各30 μ g的混合溶液，即得；供试品溶液的制备取独一味药材过三号筛，0. 6g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精 密加入70%甲醇25ml，密塞，称定重量，加热回流60分钟，放冷，再称定重量，用70%甲醇补 足减失的重量，摇勻，滤过；精密量取续滤液2ml，置IOml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，即得。本发明还提供了一种检测含有独一味提取物的药物组合物的质量的方法，是以山 桅苷甲酯和8-0-乙酰山桅苷甲酯为指标成分进行质量检测；色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动 相A，以水为流动相B，进行梯度洗脱；检测波长为235nm ；理论板数按山桅苷甲酯峰计算应 不低于3000 ；其中，梯度洗脱的步骤为第0-11分钟，流动相A占9% v/v，流动相B占 91% ν/ν ；第 11 14分钟，流动相 A 占— 15% ν/ν，流动相B 占91-85% ν/ν ；第 14-35 分钟，流动相A占15% ν/ν，流动相B占85% ν/ν ；对照品溶液的制备精密称取山桅苷甲酯、8-0-乙酰山桅苷甲酯对照品适量，加 甲醇制成每Iml含山桅苷甲酯、8-0-乙酰山桅苷甲酯各30 μ g的混合溶液，即得；供试品溶液的制备取独一味胶囊内容物，研细，取约0.2g，精密称定，置具塞锥 形瓶中，精密加入70 %甲醇25ml，密塞，称定重量，加热回流60分钟，放冷，再称定重量，用 70%甲醇补足减失的重量，摇勻，滤过，取续滤液，即得。本发明提取物药效稳定，可控性强。通过将山桅苷甲酯和8-0-乙酰山桅苷甲酯作 为指标成分控制提取物的质量，药效明确，可控性强，本发明质量控制方法准确可靠、稳定 可控，使用该方法测定独一味药材或制剂中山桅苷甲酯的含量能够有效地监控独一味药品 的质量。以下通过具体实施方式
对本发明作进一步的详细描述，但并不限制本发明，本领 域技术人员可以根据本发明作出各种改变和变形，只要不脱离本发明的精神，均应属于本 发明所附权利要求的范围。
图1本发明独一味药材对照品HPLC图谱图2本发明独一味药材HPLC图谱图3本发明独一味胶囊对照品HPLC图谱图4本发明独一味胶囊HPLC图谱
具体实施例方式实施例1本发明药物原料提取物的制备取独一味药材lOOOg，粉碎，加水煎煮3次，第1次2小时，第2、3次分别为1小时， 每次加水量为8倍，合并煎液，滤过，滤液浓缩为相对密度1. 30 (850C )的清膏，在80°C以下 干燥，粉碎，得膏率为15-25%。实施例2本发明药物原料提取物的制备取独一味药材lOOOg，粉碎，加20倍水浸渍24小时，水温为85°C，滤过，滤液浓缩 为相对密度1. 30 (850C )的清膏，干燥，粉碎，得膏率为12-18%实施例3本发明药物原料提取物的制备取独一味药材1000g，粉碎，在压力提取罐中加水加压提取3次，第1次2小时，第 2、3次分别为1小时，每次加水量为8倍，温度为120°C，合并提取液，滤过，浓缩，干燥，粉 碎，得膏率为18-25%。实施例4本发明药物原料提取物的制备取独一味药材lOOOg，粉碎，加水煎煮3次，第1次2小时，第2、3次分别为1小时， 每次加水量为8倍，合并煎液，滤过，浓缩，加乙醇至溶液含醇量为30%，静置12小时，取上 清液，浓缩，干燥，粉碎，得膏率为10-18%。实施例5本发明药物原料提取物的制备取独一味药材lOOOg，粉碎，加20倍量70%乙醇渗漉提取，提取液回收乙醇，浓缩， 干燥，粉碎，得膏率为12-20%。实施例6本发明药物原料提取物的制备取独一味药材lOOOg，粉碎，加20倍量30%乙醇渗漉提取，提取液回收乙醇，浓缩， 干燥，粉碎，得膏率为12-20%。实施例7本发明药物原料提取物的制备取独一味药材lOOOg，粉碎，加8倍量70%乙醇回流提取3次，提取液回收乙醇，浓 缩，干燥，粉碎，得膏率为15-23%。实施例8本发明药物胶囊剂的制备取独一味lOOOg，粉碎，加水煎煮三次，每次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩成相 对密度为1.30的清膏，在80°C以下干燥，加入适量的淀粉，制成颗粒，干燥，装入胶囊，制成 1000粒，即得。实施例9本发明独一味药材质量控制方法独一味药材中的山桅苷甲酯、8-0-乙酰山桅苷甲酯含量测定，具体方法如下1、仪器与试药仪器Agilent 1100高效液相色谱仪及配套工作站；
Agilent 1200高效液相色谱仪及配套工作站；LC-2010高效液相色谱仪及配套工作站。Sartorius CP225D 电子天平 Sartorius BS124S 电子天平
山桅苷甲酯对照品自制；8-0-乙酰山桅苷甲酯对照品自制；试剂色谱用甲醇、乙腈均为色谱纯(购自美国Fisher化学试剂公司)，水为重蒸 馏水(自制)；其它试剂均为分析纯。2、色谱条件2. 1检测波长的选择对山桅苷甲酯、8-0-乙酰山桅苷甲酯对照品溶液进行吸收波长扫描，结果两者 均在在235nm波长附近处有最大吸收(见附图)，试验选择235nm为检测波长。2. 2流动相的选择试验曾选用不同流动相对独一味药材中山桅苷甲酯、8-0-乙酰山桅苷甲酯进行含 量测定，直接选用等度洗脱，在满足分离度的情况下，试验时间均较长，故选择梯度洗脱。综 合考虑分离度、色谱峰行为、分析时间等要素后，选定如下流动相。以乙腈为流动相A，以水 为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱。表1独一味药材含量测定流动相时间表
时间(分钟)流动相A (%)流动相B (%)
Γ 0 11991, 汽
11 35 9—18 91—82 _35 45_18_82_2. 3色谱柱的考察试验参曾选用① Dikma platisil C18 (250mmX4. 6mm, 5 μ m) > (2) Phenomenex Luna C18(150mmX4. 6mm，5ym)、③ Alltima C18 (250mmX 4. 6mm，5 μ m)三个品牌的色谱柱 对独一味胶囊中的山桅苷甲酯、8-0-乙酰山桅苷甲酯进行含量测定，均得到样品中山桅苷 甲酯、8-0-乙酰山桅苷甲酯峰基线分离的对称色谱峰，见附图，分离度大于1.5，理论塔板 数按山桅苷甲酯峰计算大于3000，故该方法适用范围较广。方法学考察以Dikma platisil C18(250mmX4. 6mm, 5 μ m)为分析柱。3、对照品溶液的制备对照品溶液制备方法精密称取山桅苷甲酯、8-0-乙酰山桅苷甲酯对照品适量， 加甲醇制成每Iml含山桅苷甲酯20μ g、8-0-乙酰山桅苷甲酯40 μ g的混合溶液，即得。4、供试品溶液的制备本试验对供试品(独一味药材批号0810)溶液的制备方法做了研究，对提取方 法、提取溶媒、提取时间等因素进行考察，试验方法和结果如下。4. 1提取方法选择考察了实验室分析常规方法加热回流和超声提取方法。①加热回流提取取本发明独一味药材粉末(过三号筛)0. 4g，精密称定，置具塞锥 形瓶中，精密加入甲醇20ml，密塞，称定重量，加热回流60分钟，放冷，再称定重量，用甲醇 补足减失的重量，摇勻，滤过，取续滤液，即得。②超声提取取本发明独一味药材粉末(过三号筛)0. 4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20ml，密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率50kHz) 60分钟，放冷， 再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇勻，滤过，取续滤液，即得。按上述色谱条件测定，测 定结果如下。表2提取方法考察试验结果
权利要求
一种独一味提取物，其特征在于它含有山栀苷甲酯和8 o 乙酰山栀苷甲酯，总重量不低于5mg/g。
2.根据权利要求1所述的独一味提取物，其特征在于它含有山桅苷甲酯和8-0-乙酰 山桅苷甲酯的总重量为6. 1-19. 7mg/g。
3.根据权利要求2所述的独一味提取物，其特征在于山桅苷甲酯与8-0-乙酰山桅苷 甲酯的比值范围为0. 27-5. 25。
4.根据权利要求3所述的独一味提取物，其特征在于山桅苷甲酯与8-0-乙酰山桅苷 甲酯的比值范围为0.81-5. 25。
5.根据权利要求1-4任一项所述的独一味提取物，其特征在于它是独一味药材的水 或有机溶剂提取物。
6.一种药物组合物，它含有权利要求1-5任一项所述的独一味提取物为活性成分，加 上药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的药剂。
7.根据权利要求6所述的药物组合物，其特征在于所述的药剂是胶囊剂、片剂、颗粒 剂、丸剂、口服液、软胶囊剂或滴丸剂。
8.—种检测独一味药材质量的方法，其特征在于它是以山桅苷甲酯和8-0-乙酰山桅 苷甲酯为指标成分进行质量检测；色谱条件为以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以水为流动相B， 进行梯度洗脱；检测波长为235nm，理论板数按山桅苷甲酯峰计算应不低于3000，梯度洗脱 的步骤为第0-11分钟，流动相A占9% v/v，流动相B占91% ν/ν ；第11 35分钟，流 动相A占9 — 18% ν/ν，流动相B占91 - 82% ν/ν ；第35-45分钟，流动相A占18% ν/ ν，流动相B占82% ν/ν ；对照品溶液的制备精密称取山桅苷甲酯、8-0-乙酰山桅苷甲酯对照品适量，加甲醇 制成每Iml含山桅苷甲酯、8-0-乙酰山桅苷甲酯各30 μ g的混合溶液，即得；供试品溶液的制备取独一味药材过三号筛，0. 6g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加 入70%甲醇25ml，密塞，称定重量，加热回流60分钟，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减 失的重量，摇勻，滤过；精密量取续滤液2ml，置IOml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，即得。
9.一种检测含有独一味提取物的药物组合物的质量的方法，其特征在于是以山桅苷 甲酯和8-0-乙酰山桅苷甲酯为指标成分进行质量检测；色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A， 以水为流动相B，进行梯度洗脱；检测波长为235nm ；理论板数按山桅苷甲酯峰计算应不低 于3000 ；其中，梯度洗脱的步骤为第0-11分钟，流动相A占9% v/v，流动相B占91% ν/ ν ；第11 14分钟，流动相A占9 — 15% ν/ν，流动相B占91 — 85% ν/ν ；第14-35分钟， 流动相A占15% ν/ν，流动相B占85% ν/ν ；对照品溶液的制备精密称取山桅苷甲酯、8-0-乙酰山桅苷甲酯对照品适量，加甲醇 制成每Iml含山桅苷甲酯、8-0-乙酰山桅苷甲酯各30 μ g的混合溶液，即得；供试品溶液的制备取独一味胶囊内容物，研细，取约0. 2g，精密称定，置具塞锥形瓶 中，精密加入70%甲醇25ml，密塞，称定重量，加热回流60分钟，放冷，再称定重量，用70% 甲醇补足减失的重量，摇勻，滤过，取续滤液，即得。
10.根据权利要求9所述的检测方法，其特征在于独一味提取物中含有山桅苷甲酯和8-0-乙酰山桅苷甲酯，总重量不低于5mg/g。
全文摘要
本发明提供一种独一味提取物，它含有山栀苷甲酯和8-o-乙酰山栀苷甲酯，总重量不低于5mg/g。本发明还提供了一种检测独一味药材及其提取物或含有独一味提取物的药物组合物的质量的方法，它是以山栀苷甲酯和8-o-乙酰山栀苷甲酯为指标成分进行质量检测。本发明提取物药效稳定，可控性强，通过将山栀苷甲酯和8-o-乙酰山栀苷甲酯作为指标成分控制提取物的质量，药效明确，可控性强，本发明质量控制方法准确可靠、稳定可控，使用该方法测定独一味药材或制剂中山栀苷甲酯的含量能够有效地监控独一味药品的质量。
文档编号A61P29/00GK101984983SQ20101024499
公开日2011年3月16日 申请日期2010年7月27日 优先权日2009年7月28日
发明者卢胜明, 廖立东, 张康宁, 杨婷, 邓艳, 阙文彬 申请人:甘肃独一味生物制药股份有限公司