专利名称：板蓝根活性部位组合物及其制备方法及应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种板蓝根药物制剂，具体涉及一种具有抗病毒活性、抗菌和解热活 性的板蓝根活性部位组合物及其制备方法，属医药技术领域。
背景技术：
板蓝根具有清热解毒，凉血利咽功能，在现代临床上常用于病毒性疾病及细菌感 染疾病，尤其在抗病毒方面疗效确切，众多文献报道板蓝根对于病毒引起的流感、乙型肝 炎、单纯疱疹、病毒性心肌炎、肾病综合征出血热等多种疾病在临床上均有较好的治疗或预 防作用。作为清热解毒常用中药之一，板蓝根在现代药理上体现为抗病毒、提高免疫力以及 抗氧化的协同作用，从而通过多种有效成分在生物体内经多环节、多途径发挥协同作用而 表现出清热解毒功效。近年来国外对菘蓝属植物的关注在于吲哚类生物碱的抗肿瘤活性上，抗病毒成分 的研究则未见报道。国内对板蓝根的研究多集中在临床及制剂工艺等应用领域，物质基础、 活性成分的基础研究工作则比较薄弱。刘云海等人曾做过板蓝根抗内毒素活性成分的筛 选，但板蓝根在临床上最大的优势在于病毒的治疗和预防，抗病毒成分的分离和活性筛选 的研究很少，且没有系统。综合现有的研究成果表明，与板蓝根抗病毒作用相关的成分主要 集中在大极性部位，这与板蓝根临床应用以水提物为主相符。日本学者Yamada认为板蓝根 抗病毒成分为糖蛋白和多糖，且分离出单一分子量的抗病毒多糖，在他的研究结果中还表 明，板蓝根多糖除有直接抗病毒作用外，还可促进抗流感病毒IgG抗体的生成，可作为抗病 毒疫苗的佐剂。我国学者也研究发现，板蓝根的抗病毒成分为其水提液中的凝集素成分，也 有实验结果证实有效部位为结合氨基酸。板蓝根生物碱成分中的4 (3H)-喹唑酮经药理实 验证明具有抑制流感病毒、柯萨奇病毒的活性，还可显著促进脾细胞增殖及刀豆蛋白诱导 的淋巴细胞增殖。另外，板蓝根抗病毒作用还可能与其中的免疫调节成分及抗炎成分密切 相关；病毒常常合并细菌感染，所以板蓝根中的抗菌及抗内毒素成分也可能在抗病毒治疗 中发挥一定作用。目前，已有为数不少的人对板蓝根的部位进行研究，包括生物碱，有机酸 等，但是有效部位的含量都不是很高，提取纯化方法也不一致，特别是没有活性部位组合后 进行药效应用的报道。
发明内容
发明目的本发明的目的是为了克服现有技术的不足，提供一种具有强抗病毒和 抗菌、解热多重活性，且有效成分含量高的板蓝根活性部位组合物，本发明另一个目的是提 供板蓝根活性部位组合物的制备方法和其应用。技术方案为了实现以上目的，本发明采取的技术方案为板蓝根活性部位组合物，它由下列原料组成板蓝根总苯丙素部位和板蓝根总有 机酸部位。作为优选方案，板蓝根活性部位组合物，它由下列重量份数的原料组成板蓝根总苯丙素部位10 90份、板蓝根总有机酸部位10 90份。作为更优选方案，它由下列重量 份数的原料组成板蓝根总苯丙素部位30份、板蓝根总有机酸部位40份。作为另一优选方案，板蓝根活性部位组合物，它由下列重量份数的原料组成板蓝根总苯丙素部位10 90份、板蓝根总有机酸部位10 90份、板蓝根总生物 碱部位10 90份。作为更优选方案，它由下列重量份数的原料组成板蓝根总苯丙素部位 30份、板蓝根总有机酸部位40份、板蓝根总生物碱部位20份。作为另一优选方案，板蓝根活性部位组合物，它由下列重量份数的原料组成板蓝根总苯丙素10 90份、板蓝根总有机酸10 90份、板蓝根总多糖10 90 份、板蓝根总生物碱10 90份。作为进一步优选方案，板蓝根活性部位组合物，它由下列重量份数的原料组成板蓝根总苯丙素30份、总生物碱20份、总有机酸40份、总多糖40份。作为优选方案，以上所述的板蓝根活性部位组合物，所述板蓝根总苯丙素部位为 含有重量百分含量50% 100%总苯丙素的板蓝根提取物；总生物碱部位为含有重量百分 含量50% 100%总生物碱的板蓝根提取物；总有机酸部位为含有重量百分含量50% 100%总有机酸的提取物，总多糖部位为含有重量百分含量50% 100%总多糖的提取物。本发明所述的板蓝根活性部位组合物，其中板蓝根总苯丙素包括有异落叶松脂 醇、异落叶松脂醇-4-0-β -D-葡萄糖苷、落叶松脂素-4-0-β -D-葡萄糖苷、落叶松脂素-4， 4’- 二 -O-β -D- 二葡萄糖苷、丁香苷等成分，总生物碱包括有吲哚-3-乙腈-6-0-β -D-葡 萄糖苷、3-[2’ -(5’ -羟甲基)呋喃基]-1 (2Η)-异喹啉酮-7-0- β -D-葡萄糖苷]、色胺酮、 依靛蓝酮、依靛蓝双酮等成分，总有机酸包括有水杨酸、2-羟基-1，4-苯二甲酸、3-吲哚乙 酸、顺丁烯二酸、丁香酸、苯甲酸、琥珀酸等成分。以上所述的板蓝根活性部位组合物，把板蓝根活性部位组合物和药学上可接受的 载体制成胶囊剂、片剂、滴丸、颗粒剂、注射剂、微囊剂型的药物。本发明提供的板蓝根活性部位组合物在制成片剂时把板蓝根活性部位组合物和 载体乳糖或玉米淀粉，需要时加入润滑剂硬脂酸镁，混合均勻，然后压片制成片剂。本发明 提供的板蓝根活性部位组合物制成胶囊剂时把板蓝根活性部位组合物和载体乳糖或玉米 淀粉混合均勻，整粒，然后装胶囊制成胶囊剂。本发明提供的板蓝根活性部位组合物制成颗 粒剂时，把板蓝根活性部位组合物和稀释剂乳糖或玉米淀粉混合均勻，整粒，干燥，制成颗 粒剂。本发明提供的板蓝根活性部位组合物的制备方法，具体包括以下步骤(1)以菘蓝属植物的板蓝根为原料，采用溶剂提取法，得提取液，提取液采用超滤 膜过滤，截留分子量1000 1000000部分，干燥得板蓝根总多糖部位；或提取液中加入醇使 醇浓度达到30 90%，放置沉淀，过滤得沉淀和上清液，沉淀干燥得板蓝根总多糖部位，上 清液上大孔吸附树脂，先用水洗脱，再用浓度10% 60%醇溶液洗脱，收集醇洗脱液，浓缩 干燥，得板蓝根总苯丙素部位；(2)以菘蓝属植物的板蓝根为原料，采用溶剂提取法，得提取液，浓缩，浓缩物加酸 水提取，过滤得酸水提取物和酸不溶物，酸水提取物浓缩后上阳离子交换树脂吸附，依次用 水和碱性醇溶液洗脱，收集10% 90%碱性醇洗脱部位，浓缩，上阴离子交换树脂，吸附杂 质，收集流出液，浓缩干燥，得板蓝根总生物碱部位；酸不溶物上阴离子交换树脂吸附，依次用水和酸性醇溶液洗脱，收集10% 90%酸性醇洗脱部位，浓缩，浓缩物上阳离子交换树 脂，吸附杂质，收集流出液，浓缩，干燥，得板蓝根总有机酸部位；(3)按比例选取板蓝根总苯丙素部位、总有机酸部位和/或总生物碱部位和/或总 多糖部位，混合均勻，即得。作为优选方案，以上所述的板蓝根活性部位组合物的制备方法，其中步骤(1)和 (2)中溶剂提取法，选用提取溶剂为水或浓度为30% 100%的甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、戊 醇、丙酮、乙酸乙酯或甲酸乙酯或它们的混合溶剂，提取方法为浸渍提取法、超声提取法或 加热回流提取法。作为优选方案，以上所述的板蓝根活性部位组合物的制备方法，步骤(1)中大孔 吸附树脂为丙烯酸系列或苯乙烯系列树脂，如DlOl型大孔树脂。作为优选方案，以上所述的板蓝根活性部位组合物的制备方法，步骤(2)中总生 物碱的分离精致可以先通过阴离子交换树脂，再通过阳离子交换树脂洗脱得到，总有机酸 的分离精致也可以先通过阳离子交换树脂，再通过阴离子交换树脂洗脱得到。本发明提供的板蓝根活性部位组合物在制备抗病毒、抗菌和/或解热药物中的应 用，本发明提供的板蓝根活性部位组合物也可以作为清热解毒药物应用。本发明所述的板蓝根活性部位组合物也可以与可食用的载体制备成保健品，能提 高抗病毒免疫力。本发明通过实验表明，板蓝根活性部位组合物也可以由板蓝根总苯丙素和板蓝根 总生物碱组合得到具有抗病毒和抗菌作用的组合物；或者板蓝根活性部位组合物也可以由 板蓝根总有机酸和总生物碱组合得到具有抗病毒和抗菌解热作用的组合物。有益效果本发明提供的板蓝根活性部位组合物和现有技术相比具有以下优点本发明提供的板蓝根活性部位组合物，经大量药效学筛选试验，确定活性部位的 最佳组合，所得活性部位组合物有效成分含量高，活性成分明确，经实验结果表明本发明提 供的板蓝根活性部位组合物既具有明显抗病毒活性，同时又具有较好的抗菌和解热活性， 各有效成分组合后，达到了良好的协同增效作用，多靶点，多途径发挥抗病毒和抗菌、解热 活性，可以用于病毒性疾病合并细菌炎症发热疾病的治疗，临床应用范围更为广泛。本发明提供的板蓝根活性部位组合物的制备方法，根据各有效成分的理化性质优 化设计提取精制工艺，制备得到的活性部位有效成分含量高，杂质少，临床用量少，质量安 全，不良反应低，且制备方法可操作性强，可实现工业化大生产。
具体实施例方式根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实 施例所描述的具体的物料配比、工艺条件及其结果仅用于说明本发明，而不应当也不会限 制权利要求书中所详细描述的本发明。实施例1板蓝根活性部位组合物的制备(1)取板蓝根药材lKg，分别用8倍和6倍量水回流提取2h、l. 5h，合并提取液，放 冷，过滤，减压回收浓缩，得到水提部位，于提取液中加入95%乙醇，至乙醇终浓度为70%， 静置过夜，滤过，过滤得沉淀和上清液，沉淀干燥得板蓝根总多糖部位45g，苯酚-硫酸法测 得总多糖含量为65. 16%;上清液上DlOl大孔吸附树脂，先用水洗脱，再用浓度10% 60%醇溶液洗脱，收集醇洗脱液，浓缩干燥，得板蓝根总苯丙素部位15g，紫外分光光度法测得总 苯丙素含量为64.4% ；(2)取板蓝根药材lKg，用10倍量70%乙醇加热回流提取两次，每次lh，回收乙 醇，合并提取液，浓缩，得浓缩物加入浓度为5 %的盐酸溶解，过滤得酸水提取物和酸不溶 物，酸水提取物浓缩后上732强酸性阳离子交换树脂吸附，依次用水和碱性醇溶液洗脱， 收集浓度为10% 90%碱性乙醇洗脱部位，浓缩，上717强碱性阴离子交换树脂，吸附杂 质，收集流出液，浓缩干燥，得板蓝根总生物碱部位10g，酸碱滴定法测得总生物碱含量为 55. 57%;酸不溶物先上717强碱性阴离子交换树脂，水洗无色后，用lmol/L的酸性醇洗脱， 洗脱液回收醇后，调至PH 4，通过732强酸性阳离子交换树脂，流出液浓缩，得精制总有机 酸部位20g。酸碱滴定法测得有机酸含量为68. 46%。(3)取步骤(1)和(2)制备得到的板蓝根总苯丙素部位30份，总有机酸部位40 份，混合均勻即得(批号001)。取以上板蓝根活性部位组合物10g，加入药用淀粉6g，混合均勻，加水制成软材， 过20目筛制粒，干燥，制成颗粒，装入胶囊，每粒0. 2g，或者取板蓝根活性部位组合物10g， 玉米淀粉5g，加入润滑剂硬脂酸镁5g，混合均勻，然后压片制成片剂。实施例2板蓝根活性部位组合物的制备步骤⑴和⑵同实施例1，取步骤(1)和(2)制备得到的板蓝根总苯丙素部位 30份，总有机酸部位40份，总生物碱部位20份，混合均勻即得(批号002)。取以上板蓝根活性部位组合物20g，加入药用淀粉10g，混合均勻，加水制成软材， 过20目筛制粒，干燥，制成颗粒，装入胶囊，每粒0. 2g，或者取板蓝根活性部位组合物10g， 玉米淀粉5g，加入润滑剂硬脂酸镁5g，混合均勻，然后压片制成片剂。或取以上板蓝根活性 部位组合物10g，加入药用淀粉8g，混合均勻，过20目筛整粒，干燥，制成颗粒剂。实施例3板蓝根活性部位组合物的制备(1)取板蓝根药材lKg，分别用8倍和6倍量水超声提取2h、l. 5h，合并提取液，放 冷，过滤，减压回收浓缩，得到水提部位，采用超滤膜过滤，截留分子量1000 1000000滤 液，干燥得板蓝根总多糖部位48g，苯酚-硫酸法测得总多糖含量为60. 21%;另提取液中加 入95%乙醇，至乙醇终浓度为80%，静置过夜，滤过，过滤得沉淀和上清液，上清液上DlOl 大孔吸附树脂，先用水洗脱，再用浓度10% 60%醇溶液洗脱，收集醇洗脱液，浓缩干燥， 得板蓝根总苯丙素部位17g，紫外分光光度法测得总苯丙素含量70. 68% ；(2)取板蓝根药材lKg，用10倍量70%乙醇超声提取两次，每次1. 5h，回收乙醇， 合并提取液，浓缩，得浓缩物加入浓度为5%的盐酸溶解，过滤得酸水提取物和酸不溶物，酸 水提取物浓缩后上732强酸性阳离子交换树脂吸附，依次用水和lmol/L碱性乙醇溶液洗 脱，收集碱性乙醇洗脱部位，浓缩，上717强碱性阴离子交换树脂，吸附杂质，收集流出液部 分，浓缩干燥，得板蓝根总生物碱部位llg，酸碱滴定法测得总生物碱含量为60. 57% ；酸不 溶物先上717强碱性阴离子交换树脂，水洗无色后，用lmol/L的酸性醇洗脱，洗脱液回收醇 后，调至PH 4，通过732强酸性阳离子交换树脂，流出液浓缩，得精制总有机酸部位23g。酸 碱滴定法测得有机酸含量为75. 46%。(3)取步骤(1)和(2)制备得到的板蓝根总苯丙素部位60份，总生物碱部位40 份、总有机酸部位80份，总多糖部位80份，混合均勻即得(批号003)。
取以上板蓝根活性部位组合物10g，加入药用淀粉6g，混合均勻，加水制成软材， 过20目筛制粒，干燥，制成颗粒，装入胶囊，每粒0. 2g，或者取板蓝根活性部位组合物10g， 玉米淀粉5g，加入润滑剂硬脂酸镁5g，混合均勻，然后压片制成片剂。实施例4板蓝根活性部位组合物的制备步骤⑴和⑵同实施例3，取步骤(1)和⑵制备得到的板蓝根总苯丙素部位 60份，总有机酸部位90份混合均勻即得(批号004)。取以上板蓝根活性部位组合物100g，加入药用淀粉60g，混合均勻，加水制成软 材，过20目筛制粒，干燥，制成颗粒，装入胶囊，每粒0. 2g，或者取板蓝根活性部位组合物 100g，玉米淀粉50g，加入润滑剂硬脂酸镁30g，混合均勻，然后压片制成片剂。或取以上板 蓝根活性部位组合物100g，加入药用淀粉60g，混合均勻，过20目筛整粒，干燥，制成颗粒 剂。实施例5板蓝根活性部位组合物的制备步骤⑴和⑵同实施例3，取步骤(1)和⑵制备得到的板蓝根总苯丙素部位 40份，总有机酸部位80份、总生物碱部位80份，混合均勻即得(批号005)。取以上板蓝根活性部位组合物10g，加入药用淀粉6g，混合均勻，加水制成软材， 过20目筛制粒，干燥，制成颗粒，装入胶囊，每粒0. 2g，或者取板蓝根活性部位组合物10g， 玉米淀粉5g，加入润滑剂硬脂酸镁5g，混合均勻，然后压片制成片剂。或取以上板蓝根活性 部位组合物10g，加入药用淀粉6g，混合均勻，过20目筛整粒，干燥，制成颗粒剂。实施例6板蓝根活性部位组合物的制备步骤(1)和(2)同实施例3，取步骤(1)和(2)制备得到的板蓝根总苯丙素部位60 份，总生物碱部位20份、总有机酸部位40份，总多糖部位40份，混合均勻即得(批号006)。取以上板蓝根活性部位组合物10g，加入药用淀粉6g，混合均勻，加水制成软材， 过20目筛制粒，干燥，制成颗粒，装入胶囊，每粒0. 2g，或者取板蓝根活性部位组合物10g， 玉米淀粉5g，加入润滑剂硬脂酸镁5g，混合均勻，然后压片制成片剂。或取以上板蓝根活性 部位组合物10g，加入药用淀粉6g，混合均勻，过20目筛整粒，干燥，制成颗粒剂。实施例7板蓝根活性部位组合物的制备步骤(1)和(2)同实施例3，取步骤(1)和(2)制备得到的板蓝根总苯丙素部位30 份，总生物碱部位10份、总有机酸部位60份，总多糖部位60份，混合均勻即得(批号006)。取以上板蓝根活性部位组合物10g，加入药用淀粉6g，混合均勻，加水制成软材， 过20目筛制粒，干燥，制成颗粒，装入胶囊，每粒0. 2g，或者取板蓝根活性部位组合物10g， 玉米淀粉5g，加入润滑剂硬脂酸镁5g，混合均勻，然后压片制成片剂。或取以上板蓝根活性 部位组合物10g，加入药用淀粉6g，混合均实施例8板蓝根活性部位组合物的体内抗病毒药效学研究1实验材料1. 1受试药物实施例1所得批号001，实施例2所得批号002，实施例3所得批号003，实施例4 所得批号004，实施例5所得批号005和实施例6所得批号006的有效部位组合物。1.2实验试剂与仪器板蓝根颗粒(河南省宛西制药股份有限公司，批号20090102)；利巴韦林片(四
8川美大康药业股份有限公司，批号090627)；乙醚(南京试剂厂，批号090601)；鸡红细胞 (新鲜公鸡血，用生理盐水洗涤三次后备用)；氯化钠(太仓化工厂，批号20080429)；苦味 酸(上海化学试剂采购供应站，批号090123)；鸡胚(9-11日龄)(南京中牧股份药械厂)； FA1004电子分析天平(上海天平厂)；净化工作台(苏州净化设备厂)；孵箱(上海分析仪 器厂)；24孔微孔板(美国corning公司)。1. 3实验用病毒甲型流感病毒A/PR8/34(Hmi)，由中国预防医学科学院病毒所提供。1. 4实验动物ICR级小鼠早J兼用(由扬州大学实验动物中心提供，合格证号SCXK2007-0001)。1. 5试验用饲料全价营养颗粒饲料由江苏省协同医药生物技术有限公司提供。1. 6实验条件ICR级小鼠随机分组、分笼饲养，自由饮水，喂全价颗粒饲料，室温22士2°C，湿度 55-65%。1.7实验用药配制利巴韦林颗粒IOOmg/袋和20ml生理盐水，配成5mg/ml备用；板蓝根颗粒5g/袋和IOml生理盐水，配成0. 5g/ml备用；活性部位组合物批号001、批号003、批号005按活性部位的重量用CMC-Na溶液 分别配制成1. 5g/ml的浓度；批号002、批号004、批号006按活性部位的重量用CMC-Na溶 液分别配制成2. Og/ml的浓度。单活性部位板蓝根总苯丙素部位用CMC-Na溶液配制成1. 5g/ml的浓度；总生物 碱部位用CMC-Na溶液配制成1. Og/ml的浓度；总有机酸部位用CMC-Na溶液配制成2. Og/ ml的浓度；总多糖部位用CMC-Na溶液配制成2. Og/ml的浓度。1. 8实验统计方法资料统计采用t检验，卡方检验。2.实验方法与结果2. 1甲型流感病毒鸡胚增毒试验取9龄鸡胚，于照蛋机上标记气室，放置无菌净化台内，用75%乙醇和2%碘酊分 别消毒2次后，用无菌砂轮轻轻于气室隔膜处磨一小口，约0. 05cm直径大小(为针尖大 小)。取甲型流感病毒(粉状)，分次加入0.3ml生理盐水2-3次，混勻后，吸出置无菌试 管内，并稀释至2ml，吹打后，每个鸡胚接种0. 2ml甲型流感病毒，置37°C恒温箱内培养48h。以上9日龄鸡胚培养48h后，放入4 V冰箱内，使血管内血液凝固，次日取出，置超 净台内，用75%乙醇和2%碘酊消毒后，用无菌镊子除去封口处石蜡，用镊子除去气室及隔 膜层，用无菌吸管轻轻吸取尿囊液(弃去混浊尿囊液)以上收集为增毒一次的尿囊液。以 上试验重复3次后，用于实验，实验前做血凝试验。2. 2血凝试验取24孔微孔板，每孔加入生理盐水0. 5ml，(第1管加NS 0. 9ml)，将尿囊液编号 (以每只鸡胚)，取尿囊液0. Iml加入第1管混勻后取出0. 5ml加入第二管内，依次稀释至第8管，第9管不加病毒，做空白对照(生理盐水)，随后取新鲜公鸡血(啼叫)用生理盐水 洗涤3次后配成0. 5%鸡红细胞溶液(生理盐水)0. 25ml轻轻加入后摇勻，置室温放置2h 后观察记录。观察标准++++ 一层红细胞呈增殖状均勻铺于管底+++ 基本同上，但边缘较薄++ 血球于管底形成一个环状，但四周有小凝集块+ 血球于管底形成小团，边缘不光滑整齐-血球沉于管底形成小团，边缘光滑整齐实验结果判断2、4、5、6、8收集尿囊液的血凝滴定均为640以上，可以用于体内感 染小鼠。2. 3甲型流感病毒感染小鼠致死量(LD5tl)测定取ICR小鼠56只，体重13_16g，雌雄各半，随机分7组，每组8只，取增毒3次病 毒尿囊液，以10倍稀释，每组滴以各病毒浓度，观察14d内死亡数，按Reed Muench法计算。 结果按Reed Muench法计算LD50 = 1.71,甲型流感病毒LD50 = 10_171。2. 4板蓝根组合物对甲型流感病毒感染小鼠的死亡保护作用取ICR小鼠240只，体重13_16g，雌雄各半，随机分为12组，每组20只。各组动 物均灌胃给药，给药量10ml/kg，每日一次，连续7d。于给药当日，各组小鼠在乙醚浅度麻醉 下，以血凝滴度640以上的甲型流感病毒尿囊液给小鼠滴鼻感染，每只鼠30 μ 1。观察动物 感染甲型流感病毒后发病及死亡情况，记录14d内死亡数，并进行组间比较，计算死亡率、 存活天数、存活率。具体实验结果结果见表1。
0096]表1板蓝根组合物对甲型流感病毒A/PR8/34感染小鼠死亡的保护0097]组别剂量动物数死亡数保护率存活天数0098](g/kg)(只)(只)(%)(d)0099]模型组等量NS201955. 20 士 2. 330100]利巴韦林颗粒组0. 05201145*10. 10 士 3. 72**0101]板蓝根颗粒组10. 002015257. 50 士 3. 94*0102]组合物批号0011. 50201240*9. 00 士 4. 28**0103]组合物批号0022. 00201145*9. 40 士 3. 89**0104]组合物批号0031. 50201240*8. 80 士 3. 99林0105]组合物批号0042. 00201335*8. 75 士 4. 09**0106]组合物批号0051. 50201430*9. 05 士 4. 64**0107]组合物批号0062. 00201430*8. 25 士 3. 78**0108]总苯丙素组1. 502016207. 35 士 3. 600109]总生物碱组2. 002017156. 35 士 3. 420110]总有机酸组2. 002016207. 15 士 3. 500111]总多糖组2. 002018106. 05 士 4. 060112](*P < 0. 05 ；**P<0.01与模型组比较)0113]由表1实验结果所示板蓝根活性部位组合物批号001组、批号002组、批号003
10组、批号004组、批号005组和批号006组可明显延长甲型流感病毒(H1N1)感染小鼠后的存 活天数，与模型组比较具有明显差异(P < 0. 01)。板蓝根部位组合物批号001组、002组、 003组、004组、005组和006组对甲型流感病毒(H1N1)感染的小鼠的保护作用较强，与模型 组比较具有显著差异(P <0.05)。且实验结果对比表明，本发明提供的活性部位组合物和 单个的总苯丙素、总生物碱、总有机酸或总多糖相比具有更好的抗病毒作用，表明各活性成 分科学配比后，抗病毒活性增强，各活性成分起到了协同增效的作用，能多靶点多途径发挥 抗病毒作用。实施例9板蓝根活性部位组合物的抗菌药效学研究1实验材料1.1受试药物实施例1所得批号001，实施例2所得批号002，实施例3所得批号003，实施例4 所得批号004，实施例5所得批号005和实施例6所得批号006的有效部位组合物。1.2实验试剂与仪器板蓝根颗粒(按药典法自制)lg相当于生药2.86g; 二甲基亚砜(分析纯)(国 药集团化学试剂有限公司，T20080711)；蛋白胨(0X0ID LP0042, OXOID LID. BASINGSTOKE, HAMPSHIRE)；牛肉膏(国药集团化学试剂有限公司，F20080107)；氯化钠(分析纯) (广东·汕头市西陇化工厂，080719)；琼脂粉(纯化)(国药集团化学试剂有限公司， KS20080322)。牛津杯(不锈钢管，内径6mm，外径8mm，高IOmm)，培养皿(直径90mm，深20mm，
大小一致，皿底平坦)，带塞试管，锥形瓶，滴管，接种环，涂布器，移液枪，镊子，游标卡 尺。SpectrUm752型紫外可见分光光度计(上海光谱仪器有限公司)；手提式压力蒸汽灭 菌器(上海华线医用核子仪器有限公司)；PYX-DHS-40X50-S-II型隔水式电热恒温培养 箱(上海跃进医疗器械厂)；华利达HZ-9201K型台式恒温振荡器(太仓市科教器材厂)； Sff-CJ-IFB型单人水平垂直两用净化工作台(苏州净化设备有限公司)。1.3实验用菌株金黄色葡萄球菌(ATCC25923)，大肠埃希菌(ATCC25922)，绿脓假单孢菌 (ATCC27853)，枯草芽孢杆菌(ACCC11060)，均购自江苏省疾控中心南京博达生物卫生技术 有限公司。1.4培养基的配制液体培养基一般培养基蛋白胨10g，牛肉膏5g，氯化钠5g，琼脂粉(优质)12g， 蒸馏水1L。将上述成分(除琼脂外)溶于水中，校正pH 7.2 7.4后，煮沸溶解，根据用 途不同进行分装，经121°C灭菌15min，倾注广口锥形瓶中，冷藏备用。固体培养基一般培 养基蛋白胨10g，牛肉膏5g，氯化钠5g，琼脂粉(优质)12g，蒸馏水1L。将上述成分(除 琼脂外)溶于水中，校正PH 7. 2 7. 4后加入琼脂，煮沸溶解，根据用途不同进行分装，经 121°C灭菌15min，倾注平板或制成斜面，冷藏备用。1.5实验用药配制抑菌试验板蓝根颗粒高浓度用DMSO配成1500g · L—1备用；低浓度用DMSO配 成300g · Γ1备用。各提取物按有效部位提取率折算，用DMSO配制成相当于板蓝根颗粒的 量(见表2)。
2实验方法与结果将板蓝根组合物配制成相应浓度，用琼脂平板扩散法进行抑菌圈DD值的测定。首 先，将浓度为2 X IO8CFU ^mr1的菌液0. 1-0. 2ml均勻地涂在平板上，然后放置牛津杯，用移 液枪将10 μ L样品注入涂有菌液的平板上。将平板置于37°C培养箱中培养24h后，测量抑 菌圈直径大小。每个菌种重复3次测定，结果取平均值。DMSO为阴性对照。具体实验结果 如表2所示表2板蓝根组合物的抑菌效果
权利要求
板蓝根活性部位组合物，其特征在于它由下列原料组成板蓝根总苯丙素部位和板蓝根总有机酸部位。
2.根据权利要求1所述的板蓝根活性部位组合物，其特征在于它由下列重量份数的 原料组成板蓝根总苯丙素部位10 90份、板蓝根总有机酸部位10 90份。
3.板蓝根活性部位组合物，其特征在于它由下列重量份数的原料组成板蓝根总苯丙素部位10 90份、板蓝根总有机酸部位10 90份、板蓝根总生物碱部 位10 90份。
4.板蓝根活性部位组合物，其特征在于它由下列重量份数的原料组成板蓝根总苯丙素部位10 90份、板蓝根总有机酸部位10 90份、板蓝根总生物碱部 位10 90份、板蓝根总多糖部位10 90份。
5.根据权利要求4所述的板蓝根活性部位组合物，其特征在于所述板蓝根总苯丙素 部位为含有重量百分比50% 100%总苯丙素的板蓝根提取物；板蓝根总有机酸部位为含 有重量百分比50% 100%总有机酸的板蓝根提取物；板蓝根总生物碱部位为含有重量百 分比50% 100%总生物碱的板蓝根提取物；板蓝根总多糖部位为含有重量百分比50% 100%总多糖的板蓝根提取物。
6.根据权利要求1至5任一项所述的板蓝根活性部位组合物，其特征在于把板蓝根 活性部位组合物和药学上可接受的载体制成胶囊剂、片剂、滴丸、颗粒剂、注射剂、微囊剂型 的药物。
7.权利要求2、3或4所述的板蓝根活性部位组合物的制备方法，其特征在于包括以下 步骤(1)以菘蓝属植物的板蓝根为原料，采用溶剂提取法，得提取液，提取液采用超滤膜过 滤，截留分子量1000 1000000部分，干燥得板蓝根总多糖；或提取液中加入醇使醇浓度达 到30 90%，放置沉淀，过滤得沉淀和上清液，沉淀干燥得板蓝根总多糖部位，上清液上大 孔吸附树脂，先用水洗脱，再用浓度10% 60%醇溶液洗脱，收集醇洗脱液，浓缩干燥，得 板蓝根总苯丙素部位；(2)以菘蓝属植物的板蓝根为原料，采用溶剂提取法，得提取液，浓缩，浓缩物加酸水提 取，过滤得酸水提取物和酸不溶物，酸水提取物浓缩后上阳离子交换树脂吸附，依次用水和 碱性醇溶液洗脱，收集10% 90%碱性醇洗脱部位，浓缩，上阴离子交换树脂，吸附杂质， 收集流出液，浓缩干燥，得板蓝根总生物碱部位；酸不溶物上阴离子交换树脂吸附，依次用 水和酸性醇溶液洗脱，收集10% 90%酸性醇洗脱部位，浓缩，浓缩物上阳离子交换树脂， 吸附杂质，收集流出液，浓缩，干燥，得板蓝根总有机酸部位；(3)按权利要求2、3或4所述的比例选取板蓝根总苯丙素部位、总有机酸部位和/或总 生物碱部位和/或总多糖部位，混合均勻，即得。
8.根据权利要求7所述的板蓝根活性部位组合物的制备方法，其特征在于步骤⑴ 和(2)中溶剂提取法，选用提取溶剂为水或浓度为30% 100%的甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、 戊醇、丙酮、乙酸乙酯或甲酸乙酯或它们的混合溶剂，提取方法为浸渍提取法、超声提取法 或加热回流提取法。
9.根据权利要求7所述的板蓝根活性部位组合物的制备方法，其特征在于步骤(1)中大孔吸附树脂为丙烯酸系列或苯乙烯系列树脂。
10.权利要求1至5任一项所述的板蓝根活性部位组合物在制备抗病毒、抗菌、解热药 物中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种板蓝根活性部位组合物及其制备方法和应用，该板蓝根活性部位组合物由板蓝根总苯丙素部位、总生物碱部位、总有机酸部位、总多糖部位制成。本发明所得活性部位组合物有效成分含量高，活性成分明确，实验结果表明板蓝根活性部位组合物既具有明显抗病毒活性，同时又具有较好的抗菌和解热活性，各有效成分组合后，达到了良好的协同增效作用，多靶点，多途径发挥抗病毒和抗菌、解热活性，可用于病毒性疾病合并细菌炎症发热疾病的治疗，临床应用范围更为广泛。并且本发明根据各有效成分的理化性质优化设计提取精制工艺，制备得到的活性部位有效成分含量高，且制备方法可操作性强，可实现工业化大生产。
文档编号A61P31/12GK101933966SQ20101026995
公开日2011年1月5日 申请日期2010年8月31日 优先权日2010年8月31日
发明者李祥, 王盛, 陈妍, 陈建伟 申请人:南京中医药大学