专利名称：乌骨鸡黑色素提取物在制备防治抑郁症的药物中的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及乌骨鸡黑色素提取物的医药用途，特别涉及乌骨鸡黑色素提取物在制备防治抑郁症的药物中的新用途。
背景技术：
抑郁症是一种情感障碍性精神疾病，主要表现为情绪低落、思维迟缓以及运动抑制，常伴有睡眠障碍、消化功能减弱、躯体不适、自责自罪，严重的甚至出现自残、自杀观念及行为。随着社会经济发展、生活节奏加快以及生活压力增加，抑郁症已成为现代社会危害全人类身心健康的常见病，其发病率逐年攀升。据世界卫生组织(WTO)最新统计分析，抑郁症是危害人类健康最严重的十大疾病之一，预计到2020年，可能成为仅次于心血管病的第二大疾病。抑郁症的高发病率、致死率、致残率和疾病负担已引起社会的广泛重视。目前对抑郁症的确切发病机制尚不清楚，因此其临床治疗效果尚不令人满意，用于防治抑郁症的化学合成药物目前主要有三环类抗抑郁剂、单胺氧化酶抑制剂和5-羟色胺重吸收抑制剂等，虽然它们具有一定疗效，但存在药物依赖、毒副作用大、易复发等缺陷， 从而限制其广泛使用。因此，寻求高效、低毒副作用的防治抑郁症的天然来源药物成为该领域新的研究方向。乌骨鸡黑色素是从乌骨鸡提取的一种以吲哚环为主体的含硫异聚物，属于动物源性真黑色素。现代医学研究表明，乌骨鸡黑色素具有抗紫外线、螯合重金属离子、抗肿瘤以及提高机体免疫力等功能。迄今为止，乌骨鸡黑色素或其提取物在制备防治抑郁症的药物方面的用途尚无报道。
发明内容
本发明提供了乌骨鸡黑色素提取物在制备防治抑郁症的药物中的用途，其中，所述乌骨鸡黑色素提取物作为所述药物的活性成分。根据本发明所述的乌骨鸡黑色素提取物的用途，其中，所述药物还包含药学上可接受的载体。根据本发明所述的乌骨鸡黑色素提取物的用途，其中，所述药物的剂型包括胶囊齐U、片剂、颗粒剂、膏剂、散剂、口服液以及注射剂。本发明中乌骨鸡黑色素提取物可采用如下的提取方法获得，该方法包括如下步骤1).制备乌骨鸡肉泥；2).双酶水解采用木瓜蛋白酶和风味酶消化步骤1)制得的乌骨鸡肉泥；3).采用碱液除蛋白。作为本发明的优选实施方式，上述提取方法中，步骤2)包括如下步骤A.向步骤1)制得的乌骨鸡肉泥中添加重量比为1 1至1 3的蒸馏水，加热至 90°C至100°C并保温10分钟至20分钟，然后冷却至60°C至70°C，调节pH为5. 0至6. 0，然后向其中加入终浓度为3. 0%至4. 0%的木瓜蛋白酶，在60°C至70°C条件下消化2小时至 4小时；B.将步骤A所得的混合物冷却至50°C至60°C，调节pH为5. 5至6. 5，向所述混合物中加入终浓度为0. 4%至0. 7%的风味酶，在50°C至60°C条件下消化5小时至7小时；C.将步骤B所得的混合物加热至90°C至100°C并保温20分钟至40分钟；静置分层，收集上层黑色素悬浮层；在3500Xg至4500Xg条件下离心10分钟至20分钟。作为本发明的优选实施方式，上述提取方法中，步骤3)的操作方法如下以1 8至1 15(按体积计)的比例向所述步骤2)所得的物质中添加pH为8 至10的NaOH溶液，加热至55°C至75°C并保温1小时至2小时，然后，在3500 X g至4500 X g 条件下离心5分钟至10分钟，收集沉淀。作为本发明的更加优选的实施方式，上述提取方法中，步骤2)包括如下步骤A.向步骤1)制得的乌骨鸡肉泥中添加重量比为1 1的蒸馏水，加热至100°C并保温15分钟，然后冷却至65°C，调节pH至5. 5，然后向其中加入终浓度为3. 8%的木瓜蛋白酶，在65°C下消化2小时；B.将步骤A所得的混合物冷却至55°C，调节pH至6. 0，加入终浓度为0. 6%的风味酶，在55°C下消化6小时；C.将步骤B所得的混合物加热至100°C并保温30分钟；静置分层，收集上层黑色素悬浮层；在4000Xg条件下离心15分钟。作为本发明的更加优选的实施方式，上述提取方法中，步骤3)的操作方法如下以1 10 (按体积计)的比例向所述步骤2)所得的物质中添加pH为10的NaOH 溶液，加热至60°C并保温1. 5小时，然后，在4000Xg条件下离心5分钟，收集沉淀。根据本发明所述的乌骨鸡黑色素提取物的用途，其中，可将所述乌骨鸡黑色素提取物悬浮于生理盐水中使用。本发明经过动物实验证实了乌骨鸡黑色素提取物具有防治抑郁症的作用，可用于制备防治抑郁症的药物。
图Ia是根据本发明实施例1小鼠悬尾实验不动时间基础测试值的统计分析图。图Ib是根据本发明实施例1小鼠悬尾实验不动时间正式测试值的统计分析图。图2是根据本发明实施例2小鼠强迫游泳实验不动时间测试值的统计分析图。
具体实施例方式下面将结合附图和实施例来进一步详细描述本发明。在本发明的实施例中，分别利用小鼠悬尾实验和小鼠强迫游泳实验来评价乌骨鸡黑色素提取物对实验性动物抑郁症模型的保护作用。实施例中的试验数据均采用GraphPad Prism 5. 0软件进行统计分析并绘制分析图，组间数据差异用单因素方差分析(ANOVA)进行统计分析，并继之以Tukey氏事后检验法进行检验。1、实验材料乌骨鸡黑色素提取物
乌骨鸡黑色素的提取可以采用本领域已知的方法，本发明采用了双酶水解法并结合碱液除蛋白来提取乌骨鸡黑色素，其中，分别使用木瓜蛋白酶和风味酶(也可使用复合蛋白酶)进行第一步和第二步的酶解。具体操作步骤如下1).制备乌骨鸡肉泥将市售的乌骨鸡屠宰，去毛，去内脏，去骨，保留骨膜，绞成肉泥，取肉泥IOOOg ；2).双酶水解A.向步骤1)制得的乌骨鸡肉泥中添加蒸馏水，蒸馏水与鸡肉泥的重量比为 1 1，搅拌均勻，加热至100°C并保温15分钟，然后冷却至65°C，调节pH至5.5，加入终浓度为3.8%的木瓜蛋白酶(购自广西南宁庞博生物工程有限公司)，搅拌均勻，在65°C下消化2小时；B.将步骤A所得的混合物冷却至55°C，调节pH至6. 0，然后，向所述混合物中加入终浓度为0. 6%的风味酶(购自广西南宁庞博生物工程有限公司)，在55°C下消化6小时；C.通过将步骤B所得的混合物加热至100°C并保温30分钟，对酶进行灭活；静置分层，收集上层黑色素悬浮层；在4000Xg条件下离心15分钟，收集沉淀，得到乌骨鸡黑色素粗提品；3).采用碱液除蛋白。以1 10 (按体积计)的比例向步骤3)所得的粗提品中添加pH为10的NaOH溶液，搅拌均勻，加热至60°C并保温1. 5小时，然后，在4000 X g条件下离心5分钟，收集沉淀；
重复该过程，共4次。使用蒸馏水洗涤上述方法所得的沉淀3次，真空干燥洗涤后的沉淀物，得到乌骨鸡黑色素精提品。由上述步骤1)的IOOOg乌骨鸡肉泥获得了 Ig乌骨鸡黑色素精提品。取上述乌骨鸡黑色素提取方法制备的乌骨鸡黑色素精提品，以0. 2g/ml的浓度将其悬浮于生理盐水中备用。2、实验动物8周龄C57/B6小鼠(购于北京维通利华实验动物技术有限公司)，雌雄各半。使小鼠自由饮食饮水，12小时黑暗白昼节律，实验前适应环境3天。实施例1 乌骨鸡黑饩素提取物对小鼠悬尾实验抑郁症模型的保护作用1、实验动物分组和筛选在给药前，测试小鼠悬尾实验基础测试值，如下进行悬尾实验用粘性胶带粘住小鼠尾部末端约2厘米的部位，将小鼠倒悬，固定于水平横杆上，头部距桌面约10厘米。在小鼠两侧用隔板隔开动物视线，防止相互影响。使小鼠前后左右均无攀抓的地方，一段时间后小鼠因失望而活动减少。记录6分钟内后4分钟的不动时间。淘汰基础值超出65到130 秒范围的小鼠，选出20只小鼠作为合格动物供实验用，随机分为两组，每组10只(其基础测试值具体数据参见下表1)。其中，一组为空白对照组，每天1次给予200ul生理盐水腹腔注射；一组为乌鸡黑色素提取物组，每天1次给予30mg/Kg乌鸡黑色素提取物腹腔注射，两组均连续注射7天。表1 小鼠悬尾实验不动时间基础测试值(单位秒)
权利要求
1.乌骨鸡黑色素提取物在制备防治抑郁症的药物中的用途，其中，所述乌骨鸡黑色素提取物作为所述药物的活性成分。
2.根据权利要求1所述的用途，其中，所述药物还包含药学上可接受的载体。
3.根据权利要求1所述的用途，其中，所述药物的剂型包括胶囊剂、片剂、颗粒剂、膏齐U、散剂、口服液以及注射剂。
4.根据权利要求1所述的用途，其中，所述乌骨鸡黑色素提取物的提取方法包括如下步骤1).制备乌骨鸡肉泥；2).双酶水解采用木瓜蛋白酶和风味酶消化步骤1)制得的乌骨鸡肉泥；3).采用碱液除蛋白。
5.根据权利要求4所述的用途，其中，步骤2)包括如下步骤A.向步骤1)制得的乌骨鸡肉泥中添加重量比为1 1至1 3的蒸馏水，加热至90°C 至100°C并保温10分钟至20分钟，然后冷却至60°C至70°C，调节pH为5. 0至6. 0，然后向其中加入终浓度为3. 0%至4. 0%的木瓜蛋白酶，在60°C至70°C条件下消化2小时至4小时；B.将步骤A所得的混合物冷却至50°C至60°C，调节pH为5.5至6. 5，向所述混合物中加入终浓度为0. 4%至0. 7%的风味酶，在50°C至60°C条件下消化5小时至7小时；C.将步骤B所得的混合物加热至90°C至10(TC并保温20分钟至40分钟；静置分层， 收集上层黑色素悬浮层；在3500Xg至4500Xg条件下离心10分钟至20分钟。
6.根据权利要求4所述的用途，其中，步骤3)的操作方法如下以1 8至1 15(按体积计)的比例向所述步骤2)所得的物质中添加pH为8至10 的NaOH溶液，加热至55°C至75°C并保温1小时至2小时，然后，在3500 X g至4500 X g条件下离心5分钟至10分钟，收集沉淀。
7.根据权利要求4所述的用途，其中，步骤2)包括如下步骤A.向步骤1)制得的乌骨鸡肉泥中添加重量比为1 1的蒸馏水，加热至100°C并保温 15分钟，然后冷却至65°C，调节pH至5. 5，然后向其中加入终浓度为3. 8%的木瓜蛋白酶， 在65°C下消化2小时；B.将步骤A所得的混合物冷却至55°C，调节pH至6.0，加入终浓度为0. 6%的风味酶， 在55°C下消化6小时；C.将步骤B所得的混合物加热至100°C并保温30分钟；静置分层，收集上层黑色素悬浮层；在4000 Xg条件下离心15分钟。
8.根据权利要求4所述的用途，其中，步骤3)的操作方法如下以1 10(按体积计)的比例向所述步骤2)所得的物质中添加pH为10的NaOH溶液， 加热至60°C并保温1. 5小时，然后，在4000 Xg条件下离心5分钟，收集沉淀。
9.根据权利要求1至8任一项所述的用途，其中，将所述乌骨鸡黑色素提取物悬浮于生理盐水中使用。
全文摘要
本发明公开了乌骨鸡黑色素提取物在制备防治抑郁症的药物中的用途，其中，所述乌骨鸡黑色素提取物作为所述药物的活性成分。本发明中乌骨鸡黑色素提取物可通过双酶水解法并结合碱液除蛋白来制备。根据本发明可知，乌骨鸡黑色素提取物具有良好的抗抑郁作用，可用于制备防治抑郁症的药物。
文档编号A61P25/24GK102462696SQ201010535778
公开日2012年5月23日 申请日期2010年11月3日 优先权日2010年11月3日
发明者李博, 贺毅 申请人:李博, 贺毅