专利名称：壳五糖在制备抑制肿瘤血管生成药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及治疗肿瘤的药物，具体地说是壳五糖在制备抑制肿瘤血管生成药物中的应用，更进一步说是壳五糖在制备治疗肿瘤和抑制肿瘤转移药物或保健食品中的应用。
背景技术：
随着人类社会发展，环境污染加剧，肿瘤尤其是恶性肿瘤一癌症，已经成为人类死亡的第一位或第二位原因，从1996年以来全球每年新确诊的肿瘤病人均在1000万以上，约有700万人死于癌症。目前癌症病人呈总体增加及“年轻化”趋势，同时随着全球老龄化社会的到来以及肿瘤发病率的上升，临床上对疗效好、毒副反应小的抗肿瘤药物的需求量激
+曰O肿瘤不管是良性还是恶性，本质上都表现为细胞的异常增殖，在恶性肿瘤中表现为对邻近正常组织的侵犯及经血管、淋巴管和体腔转移到身体其它部位，即肿瘤转移。肿瘤转移是恶性肿瘤的基本生物学特征，是临床上绝大多数患者的致死因素。因此肿瘤转移对于癌症治疗是一种严峻挑战。文献1阐述了 Folkman提出的“肿瘤的生长和转移都依赖于新生血管”的概念(文献 L Folkman J. Angiogenesis in psoriasis therapeutic implications. J Invest Dermatol 1972，59 (1) :40.)，并指出可以通过抑制肿瘤血管生成抑制肿瘤的生长和转移。肿瘤的血管生成能力被认为是肿瘤侵袭性的标志，丰富的血管网不仅为肿瘤细胞提供充足的氧气、营养成分和肿瘤生长因子等，而且也是肿瘤转移的通道。文献2阐述了肿瘤血管生成的分子机制(文献1. Patrick A, Sylvie L, Fr'ederic LL, Andreas B. Molecular mechanisms of tumor vascularization. Critical Reviews in Oncology/Hema to logy 2005; 54: 53 - 61.)。血管生成需要血管内皮细胞的迁移、增殖和形成管状结构。肿瘤细胞能够产生大量的生长因子，包括VEGF、FGF、 TGF等。这些生长因子能够通过一系列的信号传导促进血管内皮细胞的迁移、增殖和形成管状结构，最终形成新的血管。可见，血管内皮细胞的迁移、增殖和形成管状结构是形成新生血管的必要条件。
发明内容
本发明的目的在于提供壳五糖在制备抑制肿瘤血管生成药物中的应用，进一步说，壳五糖可在制备抑制肿瘤生长和抑制肿瘤转移药物中的应用；壳五糖通过作用于人脐静脉内皮细胞，抑制肿瘤细胞培养液诱导的人脐静脉内皮细胞的增殖和迁移，从而抑制肿瘤的新生血管生成。为实现上述目的，本发明采用的技术方案为 壳五糖在制备抑制肿瘤血管生成药物中的应用。所述壳五糖能够通过抑制血管内皮细胞的增殖和迁移进而抑制肿瘤新生血管生成，即壳五糖可进一步用于制备治疗肿瘤和抑制肿瘤转移的药物；所述治疗肿瘤和抑制肿瘤转移的药物为治疗实体瘤和抑制实体瘤转移的药物。所述壳五糖为纯度彡70wt%的壳五糖；所述壳五糖于患处体液中的有效作用浓度为 12. 5-200 μ g/mL。所述壳五糖与药物学上可接受的药物辅料混合形成各种形式的散剂、膏剂，粉剂， 针剂、水剂或注射剂；所述药物辅料为聚乙烯吡咯烷酮、微硅胶粉等。在使用时可以采取皮下、静脉注射或肛肠给药；注射液的使用可以任意选用生理盐水、葡萄糖、稳定剂、防腐剂、悬浮剂或乳化剂等。本发明的优点为
1.根据实施例1 实验证明壳五糖能够明显抑制由肿瘤细胞培养液诱导的人脐静脉内皮细胞的增殖，当壳五糖浓度为50-100 μ g/mL时抑制率可达到35%以上，较壳六糖具有更好的抑制肿瘤细胞培养液诱导的人脐静脉内皮细胞的增殖。因此，壳五糖具有潜在的抑制肿瘤血管生成作用，有望开发成抗肿瘤和抑制肿瘤转移的药物及与抗肿瘤相关的保健食品及食品添加剂等。2.根据实施例2 实验证明壳五糖能够明显抑制由肿瘤细胞培养液诱导的人脐静脉内皮细胞的迁移，在壳五糖浓度为25 μ g/mL时的抑制率为49. 0%(P<0. 01)，浓度为50 μ g/mL时的抑制率为64. 2%(P<0. 01)，相对于诱导组均具有非常显著性差异，且通过测定系列浓度的抑制率计算IC5tl值(抑制率达到50%时的浓度值)为27. 39 μ g/mL，浓度值较壳六糖更低。因此，壳五糖具有更明显的抑制肿瘤血管生成作用，有望开发成抗肿瘤和抑制肿瘤转移的药物及与抗肿瘤相关的保健食品及食品添加剂等。
图1不同浓度、不同聚合度的壳寡糖对人脐静脉内皮细胞增殖的作用。A为不同浓度不同聚合度的壳寡糖对正常的脐静脉内皮细胞的作用(24小时)；B为不同浓度不同聚合度的壳寡糖对肿瘤细胞培养液诱导的人脐静脉内皮细胞的作用(24小时)。图2不同浓度的壳五糖对抑制肿瘤细胞培养液诱导的人脐静脉内皮细胞迁移的作用。
具体实施例方式肿瘤的血管生成是一个复杂的过程，乏氧、炎症以及外界的机械刺激等都是肿瘤血管生成的诱因。而参与肿瘤血管生成的生长因子、细胞因子也很多。目前抑制肿瘤血管生成是抗肿瘤研究中的热点问题，具有很好的生物相容性和生物可降解性，有望开发为一种有效的、安全的抑制肿瘤生长和转移的药物、保健食品或食品添加剂。本发明采用质量含量> 70%的壳五糖，通过细胞生物学方法发现壳五糖能够明显抑制肿瘤细胞培养液诱导的人脐静脉内皮细胞的增殖和迁移。说明壳五糖能够通过抑制血管内皮细胞的增殖和迁移从而抑制肿瘤新生血管的生成。参照文献(Anti-angiogenic activities of chitooligosaccharides,Haige Wu, Ziang Yao, Xuefang Bai, Yuguang Du, Bingcheng Lin,Carbohydrate Polymers, Volume 73，Issue 1，4 July 2008, Pages 105-110)，人脐静脉内皮细胞的培养条件为在完全培养基RPMI1640培养液中添加10%小牛血清、100U/ml青霉素、100ug/ml链霉素；37°C，通入(X)2体积含量为5%的空气培养。用人结肠癌细胞、肝癌细胞、卵巢癌、乳腺癌细胞等培养液作为诱导因子；人结肠癌细胞、肝癌细胞、卵巢癌、乳腺癌细胞的培养条件为在完全培养基RPMI1640培养液中添加10%小牛血清、100U/ml青霉素、100ug/ml链霉素；37°C，通入(X)2体积含量为5%的空气培养。实施例1
参照文献(Anti-angiogenic activities of chitooligosaccharides, Haige Wu, Ziang Yaoj Xuefang Baij Yuguang Duj Bingcheng Lin, Carbohydrate Polymers, 73 (1 )，2008 105-110),将人脐静脉内皮细胞按1_2 X IO6个/mL密度接种于96孔板中，培养 10-24h后加药，同时用肿瘤细胞培养液为诱导因子，继续培养24h后加入5mg/mL MTT试剂 20 μ L和200 μ L DMS0, 3h后用酶标仪检测药物对细胞增殖的抑制作用。由图1可以看出，壳五糖在12. 5-100 μ g/mL的浓度范围内可以抑制肿瘤细胞培养液对脐静脉内皮细胞的增殖，并与浓度呈正相关，在浓度较高时(25-100 μ g/mL)较壳六糖具有更好的抑制肿瘤细胞培养液诱导的人脐静脉内皮细胞的增殖；但是浓度超过200 μ g/ mL后这种抑制作用不明显。实施例2
将人脐静脉内皮细胞按1-2X106个/mL密度接种于6孔板中，培养10_24h (本例采用 24h)，人脐静脉内皮细胞在6孔培养板中长成单层后，用细胞刮棒划痕，用PBS (pH 7. 4)冲洗3遍，然后将壳五糖加入到培养液中，终浓度分别为6. 25 μ g/mL, 12. 5 μ g/mL, 25 μ g/mL, 50 μ g/mL,同时用肿瘤细胞培养液为诱导因子，继续培养24h后在倒置光学显微镜下观察结果。由图2可以看出，肿瘤细胞培养液能够明显促进人脐静脉内皮细胞的迁移。由图2可以看出，25μ g/mL和50μ g/mL的壳五糖均能够显著抑制或拮抗肿瘤细胞培养液对人脐静脉内皮细胞迁移的作用。
权利要求
1.壳五糖在制备抑制肿瘤血管生成的药物中的应用。
2 按照权利要求1所述的应用，其特征在于所述壳五糖能够通过抑制血管内皮细胞的增殖和迁移而抑制肿瘤血管的生成，即壳五糖可进一步用于制备抑制肿瘤转移的药物中。
3.按照权利要求2所述的应用，其特征在于所述抑制肿瘤转移的药物为治疗肿瘤和抑制实体瘤转移的药物。
4.按照权利要求1或2所述的应用，其特征在于所述壳五糖在细胞生存环境或培养体系中的有效作用浓度为12. 5-200 μ g/mL。
5.按照权利要求1或2所述的应用，其特征在于所述壳五糖与药物学上可接受的药物辅料混合形成各种形式的散剂、膏剂，粉剂，针齐U、水剂或注射剂。
6.按照权利要求5所述的应用，其特征在于所述药物辅料为聚乙烯吡咯烷酮或微硅胶粉。
全文摘要
本发明涉及生物医药，具体地说是壳五糖在制备预防肿瘤血管生成药物中的应用；所述壳五糖能够通过抑制血管内皮细胞的增殖和迁移而抑制肿瘤血管生成，即壳五糖可进一步用于制备抑制肿瘤转移的药物中。本发明通过用肿瘤细胞培养液作为诱导因子，以人脐静脉内皮细胞为研究对象发现，壳五糖能够显著抑制肿瘤细胞培养液诱导的人脐静脉内皮细胞的增殖和迁移。
文档编号A61K31/702GK102475709SQ20101056118
公开日2012年5月30日 申请日期2010年11月26日 优先权日2010年11月26日
发明者吴海歌, 杜昱光, 熊川男, 白雪芳, 谭成玉, 魏鹏 申请人:中国科学院大连化学物理研究所