专利名称：一种小檗胺壳聚糖-琼胶纳米粒的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种小檗胺壳聚糖-琼胶纳米粒的制备方法，属于纳米载体药物缓释 领域。
背景技术：
药物纳米载体是以纳米颗粒作为药物载体，将药物分子包裹在纳米颗粒之中或吸 附在其表面，通过靶向分子与细胞表面特异性受体结合，在细胞摄取作用下进入细胞内，实 现安全有效的靶向药物输送和基因治疗。药物纳米载体具有高度靶向性、缓控释放、提高难 溶药物的溶解率和吸收率等优点，有助提高药物疗效和降低毒副作用。药物纳米载体是一 类极具开发潜力的新型载体，其突出的优点越来越为医药界所关注，现已成为解决重大疾 病的诊断和治疗的一个新亮点。壳聚糖是自然界唯一的聚阳离子型天然高分子材料，是从虾蟹壳等提取出来的化 合物，具有良好的生物可降解性，良好的血液相容性和组织相容性，成膜性好，同时还具有 抗菌活性。作为一种生物医学材料，壳聚糖已广泛应用于人工皮肤、外科手术缝合线、止血 剂等方面。近年来，壳聚糖又被用于药物缓释材料，拓展了它在医学领域的应用。琼胶主要是由石花菜、江蓠等红藻中提取出来的一种多糖，是一种天然易降解的 高分子化合物。琼胶具有抑菌、抗病毒、抗肿瘤、抗氧化等作用以及良好的吸湿保湿特性，在 食品、医药等方面具有广泛应用。小檗胺(Berbamine)是小檗属植物中提取分离得到的一种双苄基异喹啉类生物 碱。小檗胺具有广泛的生理活性，例如升高白细胞血小板、抗炎、调节免疫功能、抗肿瘤、逆 转多药耐药、心血管系统药理活性等。在我国小檗胺盐酸盐(商品名升白安)作为一种辅 助治疗药物早已应用于临床，用于治疗多种原因引起的白细胞及血小板减少症；亦用于预 防癌症放疗、化疗后白细胞减少。小檗胺及其衍生物不但对多种实体瘤显示出广泛的抑制 活性，近年来研究发现对白血病具有强效的抑制活性，显示出小檗胺及其衍生物在抗白血 病方面的潜在应用前景。已有专利技术制备小檗胺、小檗胺衍生物及其盐，并提供了可在制备治疗血液肿 瘤性疾病药物中的应用(中国专利申请号分别:200810060382. 1,200810163438. 6) 0然而 鲜见有以壳聚糖及琼胶为载体，负载小檗胺为抗肿瘤药的纳米粒缓释制剂报道。
发明内容
本发明的目的是为了克服现有技术存在的不足，提供一种能提高药物小檗胺的利 用率，以达到缓释、延长药物作用时间和提高疗效的小檗胺壳聚糖-琼胶纳米微粒的制备 方法。为实现上述发明目的，本发明采取的技术方案是该小檗胺壳聚糖-琼胶纳米粒 的粒径为1 500nm，它由小檗胺、壳聚糖、琼胶和三聚磷酸钠组成，小檗胺的质量百分比为 4% 18%，壳聚糖的质量百分比为67% 81%，琼胶的质量百分比为0.3% 2%，三聚磷酸钠的质量百分比为8% 15% ；制备方法如下(1)取壳聚糖溶解于质量百分数为05% 2.0%的醋酸溶液中，制成浓度为1.0 2. 5mg/mL, pH值在3 6之间的壳聚糖溶液；(2)将小檗胺溶于壳聚糖溶液中，再于室温条件下加入浓度为1. 0 2. Omg/mL的 三聚磷酸钠，充分搅拌后，离心分离，真空冷冻干燥，得小檗胺壳聚糖纳米粒；(3)再取琼胶溶解于热去离子水中，配成浓度为0. 1 0. 5mg/mL的琼胶水溶液；(4)将步骤( 所得小檗胺壳聚糖纳米粒置于热琼胶水溶液中，充分搅拌后，液体 高速离心分离，真空冷冻干燥即得小檗胺壳聚糖-琼胶纳米粒。所述壳聚糖的平均分子量为5. OXlO4 8. OX 105，脱乙酰度为大于90%。所述小檗胺壳聚糖-琼胶纳米粒的粒径为1 500nm。所述小檗胺壳聚糖-琼胶纳米粒包封率达83 %，载药量达16 %，具有良好的缓释 效果，小檗胺壳聚糖-琼胶纳米粒在pH = 7. 4的磷酸缓冲液中释放2天以上，可用于体内 的长循环。本发明的优点在于以壳聚糖-琼胶作为复合材料，通过聚阴阳离子集合的方式将 药物包埋于微粒中，提高了药物的缓释效果；复合材料廉价，生产成本低，制备工艺简单，易 于规模化生产。小檗胺壳聚糖-琼胶纳米粒的体外抗肿瘤活性测定(1)实验材料人白血病K562细胞(2)实验方法将处于对数生长期的肿瘤细胞，以5X IO3/孔的密度接种于96孔板 中，每孔加细胞悬液200 μ L，在培养24h后，分别加入5种浓度的药物，每个浓度设3个复 孔。细胞在37°C ,5% CO2培养箱中孵育72小时后，加入浓度为5mg/mL的MTT溶液20 μ L， 继续培养4小时。吸去上清液，加入150yL DMS0，轻微振荡板使甲瓒完全溶解，用酶联免 疫检测仪测定每孔光密度值(OD值)，取3复孔OD值的平均值，计算细胞抑制率。抑制率 (IR%) = (1-1~00/0)0)乂100%，其中1100为给药组光密度(OD)均值，COD为溶剂对照组OD 均值；将所得数据用LOGIT法计算IC5tl值。(3)实验结果实验结果证实，等剂量小檗胺壳聚糖-琼胶纳米粒比单纯小檗胺药 物具有更强、更持久的抗肿瘤活性。
具体实施例方式实施例一空载药物壳聚糖-琼胶纳米粒的制备将相对分子质量为18万，脱乙酰度为92%的壳聚糖用醋酸溶解完全，得到壳 聚糖溶液，其浓度为1. Omg/mL ；然后将IOmL的1. Omg/mL三聚磷酸钠溶液加入到20mL的 壳聚糖溶液中，室温条件下以SOOrpm的速度搅拌0. 5小时制成纳米粒悬浮液。将悬浮液 在ISOOOrpm的转速下离心20分钟，最后将沉淀物真空冷冻干燥，得到壳聚糖纳米粒。再将 得到的纳米粒加入浓度为0. lmg/mL的琼胶水溶液中，在室温条件下以SOOrpm的速度搅拌 0. 5小时，将液体在ISOOOrpm的转速下离心20分钟，最后将沉淀物真空冷冻干燥，得到壳聚 糖-琼胶纳米粒。实施例二小檗胺壳聚糖-琼胶纳米粒的制备
将相对分子质量为18万，脱乙酰度为92%的壳聚糖用0.5%醋酸溶解完全，得到 壳聚糖溶液，其浓度为1. Omg/mL，再将模型药物小檗胺溶于壳聚糖溶液中，得到小檗胺的浓 度为1. Omg/mL ；然后将IOmL的1. Omg/mL三聚磷酸钠溶液加入到20mL的小檗胺-壳聚糖溶 液中，室温条件下以SOOrpm的速度搅拌0. 5小时制成纳米粒悬浮液。将悬浮液在ISOOOrpm 的转速下离心20分钟，最后将沉淀物真空冷冻干燥，得到小檗胺-壳聚糖纳米粒。再将得 到的纳米粒加入浓度为0. lmg/mL的琼胶水溶液中，在室温条件下以800rpm的速度搅拌0. 5 小时，将液体在18000rpm的转速下离心20分钟，最后将沉淀物真空冷冻干燥，得到小檗胺 壳聚糖-琼胶纳米粒。纳米粒的包封率为78%，载药量为13%，在pH = 7. 4的磷酸缓冲液 中，2天累计释放量达到95%。实施例三小檗胺壳聚糖-琼胶纳米粒的制备将相对分子质量为18万，脱乙酰度为92%的壳聚糖用醋酸溶解完全，得到壳 聚糖溶液，其浓度为1. Omg/mL，再将模型药物小檗胺溶于壳聚糖溶液中，得到小檗胺的浓度 为1. Omg/mL ；然后将IOmL的1. Omg/mL三聚磷酸钠溶液加入到20mL的小檗胺-壳聚糖溶 液中，室温条件下以SOOrpm的速度搅拌0. 5小时制成纳米粒悬浮液。将悬浮液在ISOOOrpm 的转速下离心20分钟，最后将沉淀物真空冷冻干燥，得到小檗胺-壳聚糖纳米粒。再将得 到的纳米粒加入浓度为0. 5mg/mL的琼胶水溶液中，在室温条件下以800rpm的速度搅拌0. 5 小时，将液体在18000rpm的转速下离心20分钟，最后将沉淀物真空冷冻干燥，得到小檗胺 壳聚糖-琼胶纳米粒。纳米粒的包封率为81 %，载药量为12%，在pH = 7. 4的磷酸缓冲液 中，2天累计释放量达到93%。实施例四小檗胺壳聚糖-琼胶纳米粒的制备将相对分子质量为18万，脱乙酰度为92%的壳聚糖用2%醋酸溶解完全，得到壳 聚糖溶液，其浓度为2. 5mg/mL，再将模型药物小檗胺溶于壳聚糖溶液中，得到小檗胺的浓度 为1. 5mg/mL ；然后将IOmL的2. Omg/mL三聚磷酸钠溶液加入到20mL的小檗胺-壳聚糖溶 液中，室温条件下以SOOrpm的速度搅拌0. 5小时制成纳米粒悬浮液。将悬浮液在ISOOOrpm 的转速下离心20分钟，最后将沉淀物真空冷冻干燥，得到小檗胺-壳聚糖纳米微粒。再将 得到的纳米粒加入浓度为0. 2mg/mL的琼胶水溶液中，在室温条件下以SOOrpm的速度搅拌 0. 5小时，将液体在ISOOOrpm的转速下离心20分钟，最后将沉淀物真空冷冻干燥，得到小檗 胺壳聚糖-琼胶纳米粒。纳米粒的包封率为83%，载药量为16%，在pH = 7. 4的磷酸缓冲 液中，2天累计释放量达到92 %。实施例五小檗胺壳聚糖-琼胶纳米粒的制备将相对分子质量为18万，脱乙酰度为92%的壳聚糖用醋酸溶解完全，得到壳 聚糖溶液，其浓度为2. 5mg/mL，再将模型药物小檗胺溶于壳聚糖溶液中，得到小檗胺的浓度 为1. 5mg/mL ；然后将IOmL的2. Omg/mL三聚磷酸钠溶液加入到20mL的小檗胺-壳聚糖溶 液中，室温条件下以SOOrpm的速度搅拌0. 5小时制成纳米粒悬浮液。将悬浮液在ISOOOrpm 的转速下离心20分钟，最后将沉淀物真空冷冻干燥，得到小檗胺壳聚糖纳米粒。再将得到 的纳米粒加入浓度为0. lmg/mL的琼胶水溶液中，在室温条件下以SOOrpm的速度搅拌0. 5 小时，将液体在18000rpm的转速下离心20分钟，最后将沉淀物真空冷冻干燥，得到小檗胺 壳聚糖-琼胶纳米粒。纳米粒的包封率为82%，载药量为15%，在pH = 7. 4的磷酸缓冲液 中，2天累计释放量达到93%。
权利要求
1.一种小檗胺壳聚糖-琼胶纳米粒的制备方法，其特征在于该纳米粒的粒径为1 500nm，它由小檗胺、壳聚糖、琼胶和三聚磷酸钠组成。小檗胺的质量百分比为4% 18%， 壳聚糖的质量百分比为67% 81%，琼胶的质量百分比为0.3% 2%，三聚磷酸钠的质量 百分比为8% 15% ；制备方法如下(1)取壳聚糖溶解于质量百分数为05% 2.0%的醋酸溶液中，制成浓度为1.0 2. 5mg/mL, pH值在3 6之间的壳聚糖溶液；(2)将小檗胺溶于壳聚糖溶液中，再于室温条件下加入浓度为1.0 2. Omg/mL的三聚 磷酸钠，充分搅拌后，离心分离，真空冷冻干燥，得小檗胺壳聚糖纳米粒；(3)再取琼胶溶解于热去离子水中，配成浓度为0.1 0. 5mg/mL的琼胶水溶液；(4)将步骤( 所得小檗胺壳聚糖纳米粒置于热琼胶水溶液中，充分搅拌后，液体高速 离心分离，真空冷冻干燥即得小檗胺壳聚糖-琼胶纳米粒。
2.根据权利要求1所述小檗胺壳聚糖-琼胶纳米粒的制备方法，其特征在于所述壳 聚糖的平均分子量为5. O X IO4 8. O X IO5,脱乙酰度为大于90%。
3.根据权利要求1或2所述小檗胺壳聚糖-琼胶纳米粒的制备方法，其特征在于小 檗胺壳聚糖-琼胶纳米粒的粒径为1 500nm。
4.根据权利要求1所述小檗胺壳聚糖-琼胶纳米粒的制备方法，其特征在于所述小 檗胺壳聚糖-琼胶纳米粒包封率达83 %，载药量达16 %。
全文摘要
一种小檗胺壳聚糖-琼胶纳米粒，属于纳米载体药物缓释领域，该载药纳米粒由小檗胺、壳聚糖、琼胶和三聚磷酸钠组成。该载药纳米微粒的制备方法是将小檗胺溶于壳聚糖醋酸溶液中，滴入作为交联剂的三聚磷酸钠水溶液，经离心，冷冻干燥，得到载药的壳聚糖纳米粒。再将壳聚糖纳米粒加入热琼胶水溶液中，经离心，冷冻干燥即得小檗胺壳聚糖-琼胶纳米粒。体外实验证实，等剂量小檗胺壳聚糖-琼胶纳米粒比单纯小檗胺药物具有更强、更持久的抗肿瘤活性。本发明的优点在于以壳聚糖-琼胶作为复合材料，通过聚阴阳离子集合的方式将药物包埋于微粒中，提高了药物的缓释效果复合材料廉价，生产成本低，制备工艺简单，易于规模化生产。
文档编号A61P35/02GK102078302SQ20101060337
公开日2011年6月1日 申请日期2010年12月17日 优先权日2010年12月17日
发明者吴湛霞, 李先文, 李思东, 杨磊, 欧春艳, 胡章 申请人:广东海洋大学