专利名称：一种高效载钆脂质体制剂及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种诊断用顺磁性钆造影剂的脂质体制剂，它具有高效载钆、缓慢释 放等特点，可作为造影增强剂，用于诊断成像形式如MRI、CT、闪烁照相法中，进而用于肿瘤 的早期诊断。
背景技术：
肿瘤严重威胁着人类的健康与生命，全世界每年因恶性肿瘤死亡约600万人，确 诊约1000万人。肿瘤治疗面临的关键问题是如何早期发现，诊断和治疗。目前影像学已有 多种肿瘤诊断技术，如磁共振成像，X-射线成像，超声波成像和核医学成像等。其中造影剂 被用来增强影像的强度，通过改变组织局部磁场强度或弛豫时间，或通过造影剂生理、生化 特性来增强成像因素的差异，达到造影目的。磁共振造影剂用的最广泛的就是顺磁性金属钆离子的螯合物，这些亲水性螯合 物，如Gd-DTPA，Gd-DOTA, Gd-D03A_HP和Gd-DTPA-BMA分布于胞外，且被肾脏消除。游离的 钆具有高毒性，在体内分布于骨骼和肝脏，并可迅速导致肝脏坏死。所有的含钆造影剂都是 螯合物，螯合后能改变体内的分布以提高图像对比度，同时改善其毒副作用。脂质体作为一种定向药物载体，可以将药物粉末或溶液包埋在类细胞结构的微粒 中改变药物的体内分布，减少药物的治疗剂量和降低药物的毒副作用，并且可做为药物储 库，产生持久的治疗作用。脂质体注入体内后，会被网状内皮系统摄取而从血流中快速清 除，而纳米脂质体由于其的小尺寸效应、表面效应可使其逃避网状内皮系统的摄取而延长 药物在体内的停留时间，进而达到病变部位。目前，国内外已有许多将顺磁性金属离子及其螯合物包被于脂质体中的报 道，已有技术主要可分两类第一类是利用脂质体将所需要的诊断剂包裹在中心水性 腔内，因这些螯合物均是亲水性的，极易从脂质膜中渗漏，包封率较低(参见Inter J Pharm，2006，312 105-112. UyenM Le，Zhengrong Cui，et al.Long-circulating gadolinium-encapsulated liposomes for potentialapplication in tumor neutron capture therapy)，而一些采取适合脂质体包裹水溶性药物的方法如复乳法制备的多室 脂质体(参见 Acad J Sec Mil Med Univ. 2007,28(1) :87-90. ZHANG Wei, GENG Fang, et al. Preparation and characterization of pulmonary targeting DepoFoam loaded MRcontrast media :gadopentetate dimeglumine)，虽然包封率提高，但其粒径较大，在微 米级范围；第二类是将所需要的螯合物与疏水性“锚”基结合，使螯合物限定在脂质体膜上， 这类结合物已报道的有Hnatowich等人的DTPA- 二硬脂酰胺(参见J Nucl Med, 1981，22 810-814. Hnatowich D J, Friedman B, Clancy B, and Novak Μ. Labeling of Preformed Liposomes withGd_67and Tc-99m by Chelation)，Kabalka 等人的 DTPA-二硬脂酰酯(参 见Magn Reson Medl991，19 :406-415. Kabalka G W,Davis M A,et al. Gadolinium-labeled liposomes containingamphiphilic Gd-DTPA derivatives of varying chain length targeted MRI contrast enhancementagents for the liver)禾口 Volkmar 等人的DTPA-PLL-NGPE 多螯合聚合物(参见 Colloids andSurfaces B =Biointerfaces, 2000, 18,293-299. Weissig V, Babich J, Torchilin V. Long-circulatinggadolinium-loaded liposomes-potential use for magnetic resonance imaging of the blood pool),此类 方法制备的脂质体稳定性较好，钆螯合物或络合物不易从脂质膜渗漏出来，但制备步骤比 较复杂，一些成分也较昂贵，并且一些水不溶性物质无法从肝脏中消除，而永久保留其中。尽管有许多顺磁性钆造影剂的脂质体剂的报道，但其性能仍然难以满足临床应用 要求。这主要是由于其低的包封率，难以去除脂质体中游离的三价钆离子螯合物，及其存储 时造影剂易泄露等原因引起的。—般来说，脂溶性药物易于包裹进脂质体中，另一方面，对于水溶性药物，通过药 物所带电荷同带电脂类间的静电作用或靠脂质体内外梯度主动载药，水溶性药物也可高包 封率的包入脂质体内水相中。然而对于一种水溶性的不带电荷药物，高包封的包入脂质体 并非易事。为了有效的将这种水溶性的药物大量的包被于脂质体内水相中，Brandl M等人 (ChemPhys Lipids, 1997,87,65-72. Brandl Μ, Drechsler Μ, Bachmann D, and Bauer K H. Morphologyof semisolid aqueous phosphatidylcholine dispersions, a freeze fracture electron microscopy study.)提出了一种囊泡型磷脂凝胶(VPG)的概念，其是 当脂质浓度远远高于250mg/g或325mmol/L时制备的一种出具有独特囊泡形态的凝胶状物 质。VPG囊泡内水性介质的比率与囊泡外相比更高，即包封水性药物的能力更强；在囊泡核 心及其周围不存在浓度梯度，长期保存下仍能保证VPG内部载药量的恒定；在应用前加入 过量的水性介质，并轻微搅拌，可使VPG转变为小脂质体(SUV)分散体。本发明借鉴囊泡磷脂凝胶的制备原理，改进制备方法，通过薄膜分散-高压均 质-真空浓缩的新型方法，制备了高载钆的脂质体制剂。其制备工艺简单，脂质体对钆螯合 物的载钆量较高，粒径较小，性能稳定，而且具有良好的缓释效果，可有效诊断早期肿瘤。
发明内容
本发明的目的是制备一种高效载钆、纳米粒径的脂质体制剂，旨在将大量钆包入 脂质体中，通过钆造影剂的纳米脂质体化，延缓其在体内的循环时间，提高造影效果。本发明公开的是由磷脂凝胶制备的高效载钆脂质体，研究了一种有效提高水溶性 药物脂质体剂型包封率的方法，尤其适用于包裹钆螯合物。本发明的目的通过以下措施来实现一种高效载钆脂质体制剂，其特征是以下述重量配比原料及辅料组成以金属钆 的重量计的顺磁性钆造影剂30 80份，卵磷脂250 500份，脂质体稳定剂50 200份， 缓冲溶液200 600份，所述的顺磁性钆造影剂为金属钆的三价离子的螯合物，其用量是以 金属钆的重量为计算基准的。按比例称取相应重量的卵磷脂、脂质体稳定剂溶于定量有机 溶剂中，减压蒸干溶剂，获得脂类薄膜；加入缓冲溶液进行水合洗脱薄膜，水合温度为30 500C，水合时间为2 4小时，获得空白脂质体悬浮液；将所得空白脂质体悬浮液高压均质， 压力为40 90MPa，循环次数为6 15次，控制粒径在20 200nm ；然后再转入旋蒸中进 行减压真空浓缩，除去水分直至磷脂浓度达到250mg/ml以上，获得磷脂凝胶；按比例将磷 脂凝胶和造影剂混合，45°C下保温5小时，获得高效载钆脂质体制剂。进一步的，优选的，所述的高效载钆脂质体制剂，其特征是以下述重量配比原料及辅料组成以金属钆的重量计的顺磁性钆造影剂40 60份，卵磷脂300 400份，脂质体 稳定剂100 200份，缓冲溶液200 600份。上述的顺磁性钆造影剂为金属钆的三价离子与螯合剂的螯合物，其用量是以 金属钆的重量为计算基准的，下同；所述顺磁性钆造影剂选自Gd-DTPA(钆喷酸葡胺)、 Gd-DTPA-BMA (钆双胺)、Gd-D03A_HP(钆替醇)、Gd-DOTA (Dotarem)，优选 Gd-DTPA, Gd-DTPA-BMA。所述顺磁性钆造影剂可采用市售产品，如德国Bayer Schering Wiarma公司的 钆喷酸葡胺注射液或Amersham Health公司的钆双胺产品，或者采用李铁福等人(“MRI 顺磁性造影剂Gd-DTPA的合成”，化学试剂，2004，沈(3)，ppl90_191) ^ Tatjana, N等 入("Paramagnetic liposomescontaining amphiphilic bisamide derivatives of Gd-DTPA with aromatic side chain groups aspossible contrast agents for magnetic resonance imaging”，Eur Biophys J (2006) 35 :136-144)文献报道的方法进行制备；所述的卵磷脂选自蛋黄卵磷脂、大豆卵磷脂、氢化大豆卵磷脂或氢化蛋黄卵磷 脂；所述脂质体稳定剂选自胆固醇、硬脂胺、磷脂酸或维生素E，优选胆固醇或维生素 E ；所述缓冲溶液选自pH为6. 8或7. 4的磷酸盐缓冲溶液、注射用生理盐水。根据上述制备方法，通过改变磷脂凝胶中磷脂浓度可改变脂质体对钆螯合物的包 封率和载钆量。(所述载钆量是指脂质体的载钆浓度，由加入的总钆浓度乘包封率计算得 出。)本发明所用的有机溶剂是氯仿、氯仿与甲醇混合溶剂(体积比为1 1 3 1)、 乙醇其中的一种。所用的缓冲溶液选自PH为6. 8或pH7. 4的磷酸盐缓冲溶液，注射用生理 盐水。本发明所述的采用高压均质机优化的压力参数为60 80MPa，循环次数为8 12次。本发明所述高效载钆脂质体制剂是凝胶状制剂。本发明提供了一种高效载钆脂质体制剂，该脂质体由诊断用钆造影剂、卵磷脂、脂 质体稳定剂作为组分制备而成。本发明提供的脂质体具有如下特点(1)载钆量高；(2)粒 径小；C3)有良好的缓释效果；(4)稳定性好，储存三月几无药物泄露。
图1为载钆脂质体制剂的透射电镜照片。图2为载钆脂质体制剂粒径分布图。图3为载钆脂质体制剂的体外缓释曲线(▲钆喷酸葡胺注射液；·载钆脂质 体)。
具体实施例方式通过下面实施例说明本发明的具体实施方式
，但本发明的保护范围，不局限于此。实施例1
称取大豆卵磷脂10g、胆固醇2. 5g、维生素E 0. 2g原料溶于300ml氯仿中，45°C 恒温减压下旋转蒸发去除溶剂形成脂质薄膜；加入IOOOml磷酸盐缓冲液(pH7. 4)进行水 合洗脱薄膜3. 5h，制得空白脂质体；将空白脂质体进行高压均质，50MI^下均质15次，用 0. 22微米滤膜过滤除菌后，室温下进行真空浓缩至20ml，即得磷脂凝胶。取Iml磷脂凝胶 与ImlO. 8mmol/ml的Gd-DTPA混合，45°C保温5小时。分装、封口。用动态光散射激光粒度分析仪测定其体积平均粒径为107. Onm，其透射电镜图片 与粒径分布图见图1和图2，其在PBS(pH = 7.4)中的体外缓释曲线见图3，在此例中改变 卵磷脂浓度测得的包封率与载钆量结果见表1。表1磷脂浓度对脂质体包封率和载钆量的影响
磷脂浓度(mg/ml)包封率(％ )载钆量(mg/ml)25030. 919. 430037. 723. 735045. 628. 640051. 732. 5实施例2称取蛋黄磷脂Mg、胆固醇4g、维生素E 0. 6g原料溶于300ml氯仿与甲醇(体积 比1 1)中，35°C恒温减压下旋转蒸发去除溶剂形成脂质薄膜；加入1500ml生理盐水进 行水合洗脱薄膜池，制得空白脂质体；将空白脂质体进行高压均质，SOMPa下均质10次，用 0. 22微米滤膜过滤除菌后，室温下进行真空浓缩至20ml，即得磷脂凝胶。取Iml磷脂凝胶 与 ImlO. 6mmol/ml 的 Gd-DTPA-BMA 混合，45°C保温 5 小时。分装、封口。实施例3称取氢化大豆磷脂15g、胆固醇2g、维生素E 0.4g原料溶于300ml无水乙醇中， 40°C恒温减压下旋转蒸发去除溶剂形成脂质薄膜；加入IOOOml磷酸盐缓冲液(pH6. 8)进 行水合洗脱薄膜3h，制得空白脂质体；将空白脂质体进行高压均质，90MPa下均质6次，用 0. 22微米滤膜过滤除菌后，室温下进行真空浓缩至20ml，即得磷脂凝胶。取Iml磷脂凝胶 与ImlO. 4mmol/ml的Gd-DTPA混合，45°C保温5小时。分装、封口。
权利要求
1.一种高效载钆脂质体制剂，其特征是以下述重量配比原料及辅料组成以金属钆的 重量计的顺磁性钆造影剂30 80份，卵磷脂250 500份，脂质体稳定剂50 200份，缓 冲溶液200 600份；所述的顺磁性钆造影剂为金属钆的三价离子的螯合物，其用量是以 金属钆的重量为计算基准的。按比例称取相应重量的卵磷脂、脂质体稳定剂溶于定量有机 溶剂中，减压蒸干溶剂，获得脂类薄膜；加入缓冲溶液进行水合洗脱薄膜，水合温度为30 500C，水合时间为2 4小时，获得空白脂质体悬浮液；将所得空白脂质体悬浮液高压均质， 压力为40 90MPa，循环次数为6 15次，控制粒径在20 200nm ；然后再转入旋蒸中进 行减压真空浓缩，除去水分直至磷脂浓度达到250mg/ml以上，获得磷脂凝胶；按比例将磷 脂凝胶和造影剂混合，45°C下保温5小时，获得高效载钆脂质体制剂。
2.根据权利要求1所述的高效载钆脂质体制剂，其特征是以下述重量配比原料及辅料 组成以金属钆的重量计的顺磁性钆造影剂40 60份，卵磷脂300 400份，脂质体稳定 剂100 200份，缓冲溶液200 600份。
3.根据权利要求1 2所述的高效载钆脂质体制剂，其特征在于所述顺磁性钆 造影剂选自Gd-DTPA (钆喷酸葡胺)、Gd-DTPA-BMA (钆双胺)、Gd-D03A_HP (钆替醇)、 Gd-DOTA (Dotarem)，优选 Gd-DTPA, Gd-DTPA-BMA0
4.根据权利要求1 2所述的高效载钆脂质体制剂，其特征在于所述卵磷脂选自蛋 黄卵磷脂、大豆卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、氢化蛋黄卵磷脂其中的一种或几种。
5.根据权利要求1 2所述的高效载钆脂质体制剂，其特征在于所述脂质体稳定剂 选自胆固醇、硬脂胺、磷脂酸、维生素E，优选胆固醇、维生素E。
6.根据权利要求1 2所述的高效载钆脂质体制剂，其特征在于所述缓冲溶液选自 pH为6. 8或7. 4的磷酸盐缓冲溶液、注射用生理盐水。
7.根据权利要求1所述的高效载钆脂质体制剂，其特征在于所述有机溶剂可以是氯 仿、氯仿与甲醇混合溶剂(体积比为1 1 3 1)、乙醇其中的一种。
8.根据权利要求1所述的高效载钆脂质体制剂，其特征在于其采用高压均质机压力 参数为60 80MPa，循环次数为8 12次。
9.根据权利要求1 8所述的高效载钆脂质体制剂，其特征在于所述高效载钆脂质 体制剂是凝胶状制剂。
全文摘要
本发明涉及一种可用于人体或动物体的诊断的组合物——高效载钆脂质体制剂及其制备方法。所述脂质体制剂是由如下重量百分比的组分制备的以金属钆的重量计的顺磁性钆造影剂30～80份；卵磷脂250～500份；脂质体稳定剂50～200份；缓冲溶液200～600份。本发明采用一种磷脂凝胶方法制备载钆脂质体，此种方法制备的脂质体载钆量高，有效延缓造影剂在体内的停留时间，而且储存稳定性好。
文档编号A61K49/18GK102078624SQ201010607578
公开日2011年6月1日 申请日期2010年12月23日 优先权日2010年12月23日
发明者徐云龙, 戎丽娜, 赵崇军, 钱秀珍 申请人:华东理工大学