专利名称：紫景天总黄酮及其提取方法和药物用途的制作方法
技术领域：
本发明属于医药领域。
背景技术：
紫景天为景天科植物紫景天Hylotekphium purpureum(L· )Holub的全草入 药。别名紫八宝《中国长白山药用植物彩色图志》，主产于长白山区，民间用于治疗口腔溃 疡。本品含多种黄酮、山柰酚、山柰酚-7-葡萄糖甙、槲皮素_3，7-鼠李糖葡萄糖甙、槲皮 素-3-β-D-葡萄吡喃糖甙、山柰酚-3，7-鼠李糖葡萄甙、槲皮素_3’ -葡萄糖甙，根和地上 部分含熊果甙。全草含有蒽甙类、鞣质、苹果酸钙和维生素C。全草浸膏能够减轻或消除再 生障碍性贫血引起的蛋白代谢障碍，增加血清中白蛋白、球蛋白、纤维蛋白及总蛋白含量。 据国外报道，用本植物汁液洗伤口，化脓性溃疡，黄癣，瘰疬，瘭疽等，有消炎及促进伤口愈 合作用，本品还可做为感冒、风湿及痛风等病的镇痛药。曾有报道“紫景天膜剂治疗复发性 口疮”、“紫景天溃疡膜的药理研究”。中医认为紫景天有清热解毒、收敛止血、消肿生肌功效。现代医学研究亦表明，紫 景天有抗炎、镇痛和调节免疫功能的作用，还能消除或减轻蛋白代谢障碍。由此可见，采用紫景天做为药用资源，开发研制治疗口腔病的新型药物，解决广大 口腔疾病患者的痛苦，满足目前市场的需求，将具有重要的现实意义，并将产生良好的社会 效益和巨大的经济效益。
发明内容
本发明提供一种紫景天总黄酮及其提取方法和药物用途。紫景天总黄酮提取方法，包括下列步骤紫景天鲜茎叶捣碎轧炸取汁，取轧炸汁用石油醚脱脂后，用正丁醇1 3倍，提取 2 4次，合并正丁醇液，回收正丁醇，浓缩蒸干、干燥后得总黄酮。本发明紫景天总黄酮在制备治疗或预防复发性口疮、口腔溃疡和牙周炎的药物中 的应用。功能主治清热解毒，收敛止血，消肿生肌。用于治疗或预防复发性口疮、口腔溃 疡、牙周炎及相关口腔疾病。当本发明用于制备治疗或预防复发性口疮、口腔溃疡和牙周炎的药物时，其口服 或胃肠外给药，均是安全的。可以单方制成药剂，即制成膜剂、凝胶剂、原位凝胶剂、缓释剂、 漱口剂、喷雾剂、气雾剂、经皮给药制剂。在口服情况下，其可以任何常规形式给药，如凝胶 剂、散剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、丸剂、溶液剂、悬浮液、糖浆、口腔含片、舌下含片等；当该药 物肠胃外给药时，可采取任何常规形式，例如静脉内注射剂、软膏剂、栓剂、和吸入剂等。本发明制备治疗或预防复发性口疮、口腔溃疡和牙周炎的药物是由有效成分单体 或有效成分与固体或液体的赋形剂一起构成的，这里使用的固体或液体的赋形剂在本领域 是众所周知的，下面举几个具体例子，散剂是内服的粉末剂，它的赋形剂有乳糖、淀粉、浆糊精、碳酸钙、合成或天然硫酸铝、氧化镁、硬脂酸镁，碳酸氢钠、干燥酵母等；溶液剂的赋形剂 有水、甘油、1，2_丙二醇、单糖浆、乙醇、乙二醇、聚乙二醇、山梨糖醇等；软膏剂的赋形剂可 以使用脂油，含水羊毛脂、凡士林、甘油、蜂腊、木腊、液体石腊、树脂、高级腊等组合成的疏 水剂或亲水剂。功能主治清热解毒，收敛止血，消肿生肌。用于治疗或预防复发性口疮、口腔溃 疡、牙周炎及相关口腔疾病。本发明的积极效果在于本发明对已知的紫景天发掘了新的医疗用途；其具有资 源丰富、价廉易得、疗效好、安全无毒、制备工艺简单、质量可控、适合工业化大生产等优点， 具有良好的药用开发前景。并可做成膜剂、凝胶剂、原位凝胶剂、缓释剂、漱口剂、喷雾剂、气 雾剂、经皮给药等制剂。由此可见，采用紫景天做为药用资源，开发研制治疗口腔病的新型 药物，解决广大口腔疾病患者的痛苦，满足目前市场的需求，将具有重要的现实意义，并将 产生良好的社会效益和巨大的经济效益。用法用量口腔用药或外用5 IOg生药/d ； 口服10 20g生药/d。
具体实施例方式实施例1紫景天鲜茎叶捣碎轧炸取汁，取轧炸汁用石油醚脱脂后，用正丁醇1倍，提取2次， 合并正丁醇液，回收正丁醇，浓缩蒸干、干燥后得总黄酮。实施例2紫景天鲜茎叶捣碎轧炸取汁，取轧炸汁用石油醚脱脂后，用正丁醇2倍，提取3次， 合并正丁醇液，回收正丁醇，浓缩蒸干、干燥后得总黄酮。实施例3紫景天鲜茎叶捣碎轧炸取汁，取轧炸汁用石油醚脱脂后，用正丁醇3倍，提取4次， 合并正丁醇液，回收正丁醇，浓缩蒸干、干燥后得总黄酮。本发明紫景天还可分别采取下列方法制得紫景天干燥药材，加水煎煮，煎煮液用石油醚脱脂后，用正丁醇1 3倍，提取2 4次，合并正丁醇液，回收正丁醇，浓缩蒸干、干燥后得总黄酮。紫景天干燥药材，用60% 80%乙醇1 3倍，回流提取2 4次，乙醇液回收乙 醇，浓缩至无醇味，水液用石油醚脱脂后，用正丁醇1 3倍，提取2 4次，合并正丁醇液， 回收正丁醇浓缩蒸干、干燥后得总黄酮。实验例紫景天总黄酮的药效学研究采用丝线结扎加感染牙龈卟啉单胞菌复合法制备“大鼠实验性牙周炎模型”，观察 药物对牙周炎大鼠的影响；同时采用鼠耳肿胀法、足趾肿胀法、热板法、醋酸扭体法及玻片 法观察该药抗炎、镇痛和止血作用；并进行了体外抑菌实验。结果表明本品可明显减少实验 性牙周炎大鼠牙龈指数、龈沟出血指数，增加血液中S0D、GSH，降低MDA含量，减轻牙周组织 病理改变；可明显抑制二甲苯所致小鼠耳肿胀及大鼠角叉菜胶性足肿胀，显著延长小鼠热 疼痛反应时间，减少醋酸所致小鼠扭体反应次数，并可缩短小鼠断尾出血时间及凝血时间； 对牙龈卟啉单胞菌、放线共生放线杆菌、产黑色素拟杆菌均有较好的抑菌效果。试验目的按照中药新药研究指南要求，根据中医药理论和该药的功能主治，运用现代科学方法，选用或建立与中医“证”或“病”相符或相近似的动物模型和实验方法，研究 紫景天总黄酮的主要药理作用，对该药的有效性作出科学的评价，为其临床应用提供科学 依据。实验材料药物紫景天总黄酮6、3、1.5g生药/ml，由吉林省中医药科学院制剂室提供，批 号20071220。阳性对照药复方牙痛酊，贵州同济堂制药有限公司生产，批号20070509。 三七片，沈阳中药制药有限公司，生产，批号20071219。实验菌株国际标准株放线共生放线杆菌ATCCM523。临床分离株放线共生放线 杆菌16株，牙龈卜啉菌13株，变形链球菌沈株，产黑色素拟杆菌11株。由吉林大学微生 物研究室提供。试剂SOD试剂盒，南京建成生物工程制品研究所，批号20080223。MDA试剂盒，南 京建成生物工程制品研究所，批号20080213。GSH试剂盒，南京建成生物工程制品研究所， 批号20080213。二甲苯，中国人民解放军第九零六六工厂，批号960525。冰醋酸，北京化 工厂生产，批号20041008。仪器磨牙机，吉林大学中日联谊医院口腔科提供。GJ-8402型热板测痛仪。动物昆明种小白鼠，体重19 21g或25 ^g，雌雄均用；Wistar大鼠，体 重180 280g，雌雄各半，均由吉林大学基础医学院动物实验中心提供。合格证号 2003-0001。实验方法与结果一、对大鼠“实验性牙周炎”的治疗作用参照文献方法并加以改进制备“实验性牙周炎”模型，取Wistar大鼠50只，雌雄均 用。取出8只为正常对照组，剩余动物以3%水合氯醛10ml/kg腹腔注射麻醉，剥离上颂牙 龈，将4号无菌丝线先加入到0. 5个麦氏单位牙龈卟啉单胞菌的菌液中2h，使丝线上带有足 够的细菌，双股穿过大鼠第一和第二磨牙间隙，在颊侧打结3次，再绕过第一磨牙，于腭侧 第一磨牙和第二磨牙间结扎并打结3次，以使结头足够大，能够持续刺激牙龈。并分别将结 头埋入两侧牙龈下，在实验的第3、5和7天3次将0. 5个麦氏单位牙龈卟啉单胞菌的2 μ L 盐水注射到颊腭侧埋有丝线结头的龈下，每日用30%蔗糖水喂养。从第3周开始观察牙龈 红肿、糜烂、溢脓、探诊出血等症状，并按国际通用标准评价牙龈指数记录牙龈指数(判定 标准分为4级，0为牙龈健康；1为牙龈轻度炎症，牙龈的色有轻度改变并轻度水肿，探诊不 出血；2为牙龈中度炎症，牙龈红色，水肿光亮，探诋出血；3为压印严重炎症，牙龈明显红肿 或有溃疡，并有自动出血倾向)及龈沟出血指数(判定标准共记6级，0为龈缘和龈乳头外 观健康，轻探龈沟后不出血；1为龈缘和龈乳头呈轻度炎症，轻探龈沟后不出血；2为牙龈呈 轻度炎症，有颜色改变，探诊后点状出血；3为牙龈呈中度炎症，有颜色改变和轻度水肿，探 诊后出血，血在龈沟内扩延；4为牙龈呈中度炎症，探诊后出血，血溢出龈沟；5为牙龈有色 的改变，明显肿胀，有时有溃疡，探诊后出血或自动出血)。第4周随机取动物两只，处死，取 上颂磨牙及其牙周组织进行病理组织学检查，以确认模型成立。第5周开始按表1所示剂 量牙龈涂擦给药，每日2次，次间隔他，连续涂药14天，正常对照组和模型组均给予基质。 于给药后第15天，以3%水合氯醛10ml/kg腹腔注射麻醉，观察并记录药后牙龈指数及龈沟 出血指数，然后腹主动脉取血，测量血清中的超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH)、丙二醛含量(MDA)，同时取上颂磨牙及其牙周组织，进行X射线摄片及病理组织学检 查。结果见表1 表3。1、紫景天总黄酮治疗给药对实验性牙周炎大鼠牙龈指数、龈沟出血指数的影响表1.紫景天总黄酮治疗给药对实验性牙周炎大鼠牙龈指数、龈沟出血指数的影 响(n = 8，X ±S)
剂量牙龈指数龈沟出血指数
组别
(g生药/ml)给药前给药后给药前给药后
正常对照组一0000模型对照组一2.50±0.762. 88±0. 353.63±1.063.50±1.07牙痛酊0. 5m 12.75 ±0.461. 25±0. 71*林3.63±1.192.25±0.89*紫景天总黄酮6. 02.50 + 0.760. 88 + 0.83***3.75±1.041.75±1.04氺氺紫景天总黄酮3.02.63±0·521. 38±0· 74*林3.63±1.302.13±1·13*紫景天总黄酮1. 52.50 ±0.531. 75 土 0. 46林*3.88 + 1.252.25 + 1.16*注与模型对照组比较*P < 0. 05 ；**P < 0. 01 ；***P < 0. 001。由表1结果可见，紫景天总黄酮6、3、1. 5g生药/ml和牙痛酊均可明显降低牙龈指 数及龈沟出血指数，明显减轻牙周炎损伤程度，对大鼠“实验性牙周炎”有明显的治疗作用。 紫景天总黄酮对实验性牙周炎保护作用略强于牙痛酊。2、紫景天总黄酮治疗给药对实验性牙周炎大鼠血清中S0D、GSH、MDA的影响表2.紫景天总黄酮治疗给药对实验性牙周炎大鼠血清中S0D、GSH、MDA的影响(η =8，1士S)
组别剂量 (g生药/ml)超氧化物歧化酶 SOD (U)谷胱甘肽过氧化物酶 GSH (U)丙二醛 MDA (mraol/L)正常对照组_230士42. 3***658土37. 9***4. 34 ±0. 69***模型对照组—131 土 32. 8554±35. 59. 15 土 1. 10牙痛酊0. 5m 1193±42. 4**605±22. 7林6. 60 + 0. 85林*紫景天总黄酮6.0217±52. 1**615±44. 3林6. 15±1. 09*林紫景天总黄酮3.0173 ±34. 0*596士30. 0*7. 61 ±1. 04*紫景天总黄酮1. 5169±33. 1*597 ±36. 4*7. 48±1.29*注与模型对照组比较*Ρ < 0. 05 ；**Ρ < 0. 01 ；***Ρ < 0. 001。由表2结果可见，模型组血清中超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶比对照组 明显降低，丙二醛含量明显升高，紫景天总黄酮6、3、1.5g生药/ml和牙痛酊均可明显升高大鼠血清中超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶，降低丙二醛含量。表明紫景天总黄酮及 牙痛酊均可明显减轻对大鼠“实验性牙周炎”的损伤程度，对实验性牙周炎具有显著的治疗 作用。紫景天总黄酮作用略强于牙痛酊。3、外观行为观察及病理组织学检查(1)外观行为正常对照组体重逐渐增加，毛泽光亮，饮食饮水正常，神态、活动正 常；模型组动物造模后逐渐出现皮毛疏松不顺，食欲不振，体重下降；经过14天给药，给药 组可见动物神态、活动逐渐恢复，食欲增加，体重亦有所增加。(2)病理组织学检查肉眼观察正常对照组动物牙龈呈粉红色，龈缘菲薄且紧贴牙面；模型组动物牙 龈肿胀暗红，牙周袋逐渐形成、加深，牙龈触之易出血，两周后牙周袋进一步加深，牙周袋有 食物残渣，牙龈组织糜烂，溢脓。第4周处死两只动物，取牙及牙周组织进行病理组织学检 查，确认“牙周炎模型”复制成功。第五周开始给药，模型组动物组牙龈组织出血、糜烂、溢 脓等症状进一步加深；给药组动物牙龈颜色变浅，出血减少，牙周袋变浅。病理组织学检查正常大鼠牙周软组织、牙周膜附着正常，牙槽骨骨小梁排列紧 密，未见骨吸收破坏。模型组大鼠牙周软组织有大量炎细胞浸润；上皮部分向根方向增生， 形成深牙周袋；牙槽骨出现骨吸收陷窝，骨吸收破坏明显，模型组大鼠出现中重度牙周炎症 状。与模型组相比，阳性药牙周组织有炎细胞浸润，但有所减轻。紫景天总黄酮中小剂量组 病理变化与阳性药相似；高剂量组软组织炎细胞浸润明显减轻，牙周袋变浅或消失，牙槽骨 破坏处于静止状态，牙槽骨周围有大量的成骨细胞增生，显示牙周组织正处于修复阶段。同时对牙周组织炎症情况进行分级评分0 无炎症反应；1 牙周膜血管轻度充 血、出血，炎症细胞轻度浸润，破骨细胞偶见或无；2 牙周膜血管明显扩张充血、出血，炎症 细胞中度浸润，膜增宽或部分消失，可见少量破骨细胞，牙槽骨轻度吸收；3 牙周膜炎症细 胞重度浸润，有脓肿形成，破骨细胞大量浸润，牙骨质及牙槽骨吸收明显。表3.紫景天总黄酮治疗给药对大鼠实验性牙周炎炎症分级病理评分的影响(n = 8，叉士S)
权利要求
1.一种紫景天总黄酮，其特征在于它是由下列方法制得的紫景天鲜茎叶捣碎轧炸取汁，取轧炸汁用石油醚脱脂后，用正丁醇1 3倍，提取2 4次，合并正丁醇液，回收正丁醇，浓缩蒸干、干燥后得总黄酮。
2.如权利要求1所述的紫景天总黄酮的制备方法。
3.紫景天总黄酮在制备治疗或预防复发性口疮、口腔溃疡和牙周炎的药物中的应用。
全文摘要
本发明涉及一种紫景天总黄酮及其提取方法和药物用途，属于医药领域。紫景天鲜茎叶捣碎轧炸取汁，取轧炸汁用石油醚脱脂后，用正丁醇1～3倍，提取2～4次，合并正丁醇液，回收正丁醇，浓缩蒸干、干燥后得总黄酮。紫景天总黄酮在制备治疗或预防复发性口疮、口腔溃疡和牙周炎的药物中的应用。具有清热解毒，收敛止血，消肿生肌的功能。用于治疗或预防复发性口疮、口腔溃疡、牙周炎及相关口腔疾病。
文档编号A61P1/02GK102068482SQ20101062189
公开日2011年5月25日 申请日期2010年12月31日 优先权日2010年12月31日
发明者李伟, 牛志多, 王伟 申请人:李伟