专利名称：新型癌抗原eEF2的制作方法
技术领域：
本发明提供检测癌症的方法和癌症治疗/预防用药物组合物。本发明还提供包含与HLA分子具有结合能力的来自eEF2蛋白的连续的氨基酸的肽、包含这些肽的癌症治疗/ 预防用药物组合物，详细而言，提供HLA-A1402限制性eEF2肽、HLA_A*0201限制性eEF2肽、 或HLA-A*0206限制性eEF2肽、以及包含这些肽的癌症治疗/预防用药物组合物等。需要说明的是，本申请对日本国专利申请第2009-002608号主张优先权，并通过参照而将其全部内容纳入本申请。
背景技术：
迄今为止已知有各种癌症标志物，但通过一种标志物可以诊断多种癌症的癌症标志物几乎不存在，人们正在积极探索所述的癌症标志物。另一方面，现在人们相继开发了以HER2为靶的曲妥珠单抗(trastuzumab)、以酪氨酸激酶中的一种为靶的伊马替尼(imatinib)、以EGFR为靶的吉非替尼(gefitinib)、以CD20抗原为靶的利妥昔单抗(rituximab)等癌分子靶向药物，但以作为翻译延伸因子而已知的真核翻译延伸因子 (eukaryotic translation elongation factor 2，eEF2)为靴的癌症治疗 / 预防用药物组合物尚不存在(非专利文献1)。另外，人们还就各种癌症进行了抗原蛋白的检索，但被证明是癌抗原的抗原蛋白不多。1 :Nygard 0, Nilsson L. Kinetic determination of the effects of ADP-ribosylation on the interaction of eukaryotic elongation factor 2 with ribosomes. J Biol Chem. 1990 ；265 :6030-
发明内容
发明所要解决的课题因此，本发明的解决课题在于提供以在多种癌症中表达的蛋白为指标来检测癌症的方法、以及用于治疗或预防通过该方法检测出的癌症的药物组合物。本发明的解决课题还在于提供包含来自该蛋白的癌抗原肽的药物组合物。解决课题的方法本发明人等为了解决上述课题，进行了深入研究。于是，发现了在多种癌组织中高度表达的1种标志物蛋白eEF2，完成了以该标志物蛋白的表达和相对于该标志物蛋白在体内产生的抗体为指标的癌症的检测方法、以及以eEF2蛋白为靶的癌症的治疗/预防用药物组合物。本发明人等还发现编码eEF2蛋白的连续的氨基酸序列的一部分发挥癌抗原肽的功能，显示可以将它们用作癌症的治疗/预防用药物组合物。S卩，本发明提供下述(1) 06)(1)检测对象的癌症的方法，该方法包括测定在由该对象得到的试样中eEF2多肽、eEF2抗体或eEF2基因的转录物的存在或量的步骤。(2) (1)所述的方法，其中，上述癌症选自肺腺癌、非小细胞性肺癌、小细胞性肺癌、头颈部扁平上皮癌、食道癌、食道扁平上皮癌、胃癌、大肠癌、胰管癌、神经胶质母细胞瘤 (神経膠芽腫)和恶性淋巴瘤。(3)双链siRNA，该双链SiRNA抑制癌细胞的增殖，其中，有义链由SEQ ID NO :2所示的RNA序列构成，反义链由SEQ ID NO 3所示的RNA序列构成。(4) (3)所述的双链siRNA，其中，上述癌细胞来自选自胃癌、肺癌、胰癌、神经胶质母细胞瘤和恶性淋巴瘤的癌。(5)药物组合物，其用于治疗或预防癌症，该药物组合物包含C3)或(4)所述的双链siRNA作为有效成分。(6)用于治疗或预防癌症的方法，其特征在于给予对象有效量的权利要求5所述的药物组合物。(7) (3)或(4)所述的双链siRNA在制造用于治疗或预防癌症的药物中的应用。(8) shRNA，该shRNA抑制癌细胞的增殖，并以由SEQ ID N0:18或SEQ ID N0:19所示的DNA序列转录的mRNA为靶。(9)核酸，该核酸是⑶所述的shRNA所转录的核酸，其具有SEQ ID NO :20或SEQ ID NO 22所示的DNA序列。(10)载体，该载体包含(9)所述的核酸。(11)药物组合物，其用于治疗或预防癌症，该药物组合物含有⑶所述的shRNA、 (9)所述的核酸或(10)所述的载体。(12)用于治疗或预防癌症的方法，其特征在于给予对象有效量的(11)所述的药物组合物。(13)⑶所述的shRNA、(9)所述的核酸或(10)所述的载体在制造用于治疗或预防癌症的药物中的应用。(14)药物组合物，其用于治疗或预防HLA-A1402阳性对象的癌症，该药物组合物包含eEF2肽，所述eEF2肽具有由来自eEF2蛋白的连续的氨基酸构成的氨基酸序列，上述氨基酸序列选自下述(a) (e)(a)Arg Phe Tyr Ala Phe Gly Arg Val Phe(SEQ ID NO 4)；(b)Ala Phe Gly Arg Val Phe Ser Gly Leu(SEQ ID NO :5)；(c)Arg Phe Asp Val His Asp Val Thr Leu(SEQ ID NO :6)；(d)Ala Tyr Leu Pro Val Asn Glu Ser Phe (SEQ ID NO :7)；以及(e)在(a) (d)所示的氨基酸序列中，取代、缺失或添加1个或多个氨基酸而得到的氨基酸序列。(15) (14)所述的药物组合物，其中，氨基酸序列为Ala Tyr Leu Pro Val Asn Glu Ser Phe(SEQ ID NO :7)。(16)药物组合物，其用于治疗或预防对象的癌症，该药物组合物包含编码(14)所述的肽的多核苷酸。(17) (14) (16)中任一项所述的药物组合物，其中，上述癌症选自肺腺癌、小细胞性肺癌、食道癌、胃癌、大肠癌、胰管癌、恶性神经胶质母细胞瘤、恶性淋巴瘤和头颈部扁平上皮癌。(18)用于治疗或预防癌症的方法，其特征在于对HLA-A*2402阳性对象给予有效量的(14) (17)中任一项所述的药物组合物。(19) (14)所述的肽在制造用于治疗或预防癌症的药物中的应用。(20)药物组合物，其用于治疗或预防HLA-A*0201阳性对象的癌症，该药物组合物包含eEF2肽，所述eEF2肽具有由来自eEF2蛋白的连续的氨基酸构成的氨基酸序列，上述氨基酸序列选自下述(a) (h)(a)Arg Leu Met Glu Pro lie Tyr Leu Val (SEQ ID NO :8)；(b)Lys Leu Val Glu Gly Leu Lys Arg Leu(SEQ ID NO :9)；(c)Tyr Leu Asn Glu lie Lys Asp Ser Val(SEQ ID NO :10)；(d)Ile Leu Thr Asp lie Thr Lys Gly Val(SEQ ID NO :11)；(e)Leu Met Met Tyr lie Ser Lys Met Val (SEQ ID NO :12)；(f)Lys Leu Pro Arg Thr Phe Cys Gln Leu(SEQ ID NO :13)；(g)Leu lie Leu Asp Pro lie Phe Lys Val (SEQ ID NO :14)；以及(h)在(a) (g)所示的氨基酸序列中，取代、缺失或添加1个或多个氨基酸而得到的氨基酸序列。(21) (20)所述的药物组合物，其中，氨基酸序列为Arg Leu Met Glu Pro lie Tyr Leu Val (SEQ ID NO :8)或 lie Leu Thr Asp lie Thr Lys Gly Val (SEQ ID NO :11)。(22M20)所述的药物组合物，其中，氨基酸序列为在Leu lie Leu Asp Pro Ile Phe Lys Val (SEQ ID NO :14)中将第2位氨基酸lie取代成Leu或Met、和/或将第9位氨基酸Val取代成Leu而得到的氨基酸序列。(23)药物组合物，其用于治疗或预防对象的癌症，该药物组合物包含编码O0)所述的肽的多核苷酸。(24) (20) 03)中任一项所述的药物组合物，其中，上述癌症选自肺腺癌、小细胞性肺癌、食道癌、胃癌、大肠癌、胰管癌、恶性神经胶质母细胞瘤、恶性淋巴瘤和头颈部扁平上皮癌。(25)用于治疗或预防癌症的方法，其特征在于给予对象有效量的00) 04) 中任一项所述的药物组合物。(26) (20)所述的肽在制造用于治疗或预防癌症的药物中的应用。发明效果根据本发明，在患有癌症或有可能患有癌症的对象或预后的对象中，可以高灵敏度地检测多种癌症、例如肺腺癌、非小细胞性肺癌、小细胞性肺癌、头颈部扁平上皮癌、食道癌、食道扁平上皮癌、胃癌、大肠癌、胰管癌、神经胶质母细胞瘤、恶性淋巴瘤等。并且，可以抑制通过上述方法检测出的癌细胞的增殖。根据本发明，还可以得到HLA-Ai402限制性 eEF2肽或HLA-A*0201限制性eEF2肽、以及包含这些肽的癌症的治疗/预防用药物组合物等，因此可以在具有HLA-A5402或HLA-A*0201的对象中诱导体内和体外的eEF2特异性 CTL0特别是约55%的日本人具有至少一种HLA-A1402分子、而约19. 9%的日本人具有至少一种HLA-A*0201分子，所以可以在非常广范围的对象中诱导eEF2特异性CTL。
图1显示在来自肺癌患者的血清中检测出eEF2IgG抗体。
图2显示使用由患有非小细胞性肺癌(左图)和小细胞性肺癌(右图)的患者得到的肺的组织切片中的抗eEF2抗体的免疫染色的结果。图3显示使用由患有头颈部扁平上皮癌(左图)和食道扁平上皮癌(右图)的患者得到的头颈部扁平上皮和食道扁平上皮的组织切片中的抗eEF2抗体的免疫染色的结^ ο图4显示使用由患有胃癌(左图)和大肠癌(右图)的患者得到的胃和大肠的组织切片中的抗eEF2抗体进行的免疫染色的结果。图5显示由各种癌症的患者和健康人得到的血清中的eEF2抗体的检测。图6显示在非小细胞性肺癌患者中，血清中的eEF2抗体效价的值高的对象中预后良好。图7显示以eEF2基因的mRNA为靶的双链siRNA抑制胃癌细胞株的增殖。图8显示以eEF2基因的mRNA为靶的双链siRNA抑制各种癌细胞株的细胞增殖。图9显示使用eEF2786_794肽诱导的CTL的细胞毒活性。图10显示使用eEF2786_794肽诱导的CTL对内源性eEF2基因表达细胞的细胞毒活性。图11显示通过FACS分析使用eEF2739_747肽诱导的干扰素Y的图。图12显示通过FACS分析使用eEF2661_669肽诱导的干扰素Y的图。图13是显示eEF2蛋白的强制表达促进细胞周期G2/M期的进展的图。图14是显示eEF2蛋白的强制表达促进体内的肿瘤形成的图。图15是显示eEF2蛋白的强制表达促进体内的肿瘤形成的图。图16是显示使用eEF2739_747肽诱导的CTL的细胞毒活性的图。图17是显示使用eEF&19_527肽诱导的CTL的细胞毒活性的图。图18是显示使用eEF2671_679肽诱导的CTL的细胞毒活性的图。图19是显示使用eEF2661_669肽诱导的CTL的细胞毒活性的图。图20是显示使用eEFA94_4(12肽诱导的CTL的细胞毒活性的图。图21是显示使用eEF2284_2i32肽诱导的CTL的细胞毒活性的图。图22是显示使用eEFAf肽诱导的CTL的细胞毒活性的图。图23是显示使用eEF2292_3QQ2L肽诱导的CTL的细胞毒活性的图。图M是显示使用eEF2292_3(1(12M肽诱导的CTL的细胞毒活性的图。
图25是显示使用eEF2292_3QQ2L9L肽诱导的CTL的细胞毒活性的图。图26 是显示用 eEF&92_3。。肽或修饰型 eEF&92_3。。肽(eEF22i32_3。。2L、eEF2 292_3。。2M 和 eEF2292_3(l(l2L9L肽)进行脉冲时的干扰素-γ活性测定的结果的图。图27是显示eEF2的新型shRNA在体外抑制癌细胞增殖的图。细胞数以导入有表达eEF2的shRNA的载体的细胞数相对于导入有对照载体即shLuc的细胞数的比例(％ )表
7J\ ο图28是显示用修饰型eEF2 292_3QQ肽(eEF492_3QQ2M9L肽)进行脉冲时的干扰素_ Y 活性测定的结果的图。图四是显示7 种 eEF2 肽(eEFAw-·肽、eEF2739_747 肽、eEF&19_527 肽、eEF&71_679 肽、 eEF2661_669肽、eEF2394_4(12肽和eEF2284_2i32肽)也是HLA_A*0206限制性肽的干扰素Y活性测定的结果。图30 是显示用 3 种 eEF2 肽(eEF2409_417 肽、eEF2412_420 肽和 eEF2701_709 肽)进行脉冲时的干扰素-Y活性测定的结果的图。
具体实施例方式在一个方案中，本发明提供检测癌症的方法。可以利用本发明的方法检测癌症的对象可以是任何动物、例如人、猴、小鼠、大鼠、仓鼠、豚鼠、牛、马、绵羊、山羊、猪、狗、猫、兔等，但最优选为人。在本发明中，即使对象动物健康也可以使用，优选为患有癌症或有可能患有癌症的状态。另外，即使对象是癌症治疗的预后也可以使用。并且，本发明的特征在于 可以较用作现有的癌症标志物的CEA更早地检测出癌症。例如，本发明的方法可以在早期阶段、特别是在I期阶段以高灵敏度检测出非小细胞性肺癌。这里，I期阶段是指在由恶性肿瘤的病期分类即国际癌症防治联合会规定的 M分类中，表示分类为Tl或T2、NO和MO 的肿瘤的状态的时期。本发明可以使用由上述对象得到的试样来实施。本发明中使用的试样可以是任何试样，例如可以使用含有细胞的组织。本发明中使用的试样优选为各种组织切片或血清。由对象获得试样可以在本领域技术人员中利用普通方法来进行。例如，使用组织切片作为本发明中使用的试样时，可以将通过手术或活体得到的组织在10%福尔马林中固定一夜，之后进行石蜡包埋以制成薄切切片。此外，使用血清作为本发明中使用的试样时，可以使对象的末梢血在装有分离剂的试管中凝固，之后通过离心来获取。通过本发明的方法能够检测的癌症包括表达eEF2蛋白的所有癌症，优选为肺腺癌、非小细胞性肺癌、小细胞性肺癌、头颈部扁平上皮癌、食道癌、食道扁平上皮癌、胃癌、大肠癌、胰管癌、神经胶质母细胞瘤和恶性淋巴瘤。特别优选的癌症为肺腺癌、小细胞性肺癌、 胃癌、大肠癌、恶性淋巴瘤。本发明中检测的癌症可以是处于任何分期的癌症。例如，可以检测由上述国际癌症防治联合会规定的 m分类的I期、II期、III期中任一分期的癌症。 另外，在本发明的方法中，特别可以在早期检测的癌症是非小细胞性肺癌。在对象中实施本发明的检测方法时，可以测定上述试样中eEF2多肽的存在或量。 本发明中的eEF2多肽是指具有eEF2蛋白的氨基酸序列或其部分序列的多肽，包括以下的突变型多肽。即，本发明中的eEF2多肽可以是具有SEQ ID NO :1所示的人eEF2蛋白的氨基酸序列的多肽，或者可以是具有下述氨基酸序列的多肽在SEQ ID NO :1的氨基酸序列中， 缺失、取代或添加1个或多个氨基酸而得到的氨基酸序列；或在SEQ ID NO 1的氨基酸中， 缺失、取代、添加和/或插入1个或多个氨基酸而得到的氨基酸序列，例如缺失、取代或添加 1 9个、优选1 5个、1 4个、1 3个、进一步优选1 2个、更优选1个氨基酸而得到的氨基酸序列，或缺失、取代、添加和/或插入1 9个、优选1 5个、1 4个、1 3 个、进一步优选1 2个、更优选1个氨基酸而得到的氨基酸序列；与SEQ ID NO 1的氨基酸序列具有70%以上的同源性、优选80%以上的同源性、更优选90%以上的同源性、进一步优选93%、95%或99%以上的同源性的氨基酸序列；以及上述中的任一个氨基酸序列的片段的氨基酸序列。氨基酸序列的同源性可以利用FASTA、BLAST等普通的序列分析用工具来测定。本发明中的片段是指上述eEF2多肽的一部分。并且，在本发明中，eEF2多肽是指与eEF2蛋白具有同等性质的多肽，包括具有下述氨基酸序列的多肽，所述氨基酸序列由在严格条件下与编码SEQ ID NO :1所示的氨基酸序列的核苷酸序列杂交的核苷酸序列编码。 本说明书中的同等的性质是指，作为eEF2蛋白，具有同等的生物学、化学和物理学特性。在本发明中，eEF2蛋白是来源于人的eEF2蛋白，但即使是来源于例如小鼠、猴、大鼠、牛、猫等其他动物的eEF2蛋白，这些动物种中的eEF2也可以包含在本说明书中的eEF2蛋白中。本发明中，上述杂交条件可以根据J. Sambrook等人，“Molecular Cloning =A Laboratory Manual, Second Edition",1989, Cold Spring Harbor Laboratory Press 白勺记载，由本领域技术人员适当选择。杂交条件可以是严格性差的条件，但优选为严格性强的条件。严格性差的条件是指，根据上述文献在杂交后的清洗中，例如42°C、0. 1XSSC、0. 1% SDS的条件，优选为50°C、0. 1XSSC.0. 1% SDS的条件。严格性强的条件例如包括65°C、 5XSSC和0. 1% SDS的条件等。但是，本领域技术人员通过适当选择这些要素，可以实现同样的条件。本发明的检测方法可以通过任何方法来进行。例如，本发明的检测方法可以使用抗上述eEF2多肽的抗体来进行。在本发明的检测方法中，可以使用抗具有上述eEF2多肽的任何区的氨基酸序列的多肽的抗体，例如可以是抗具有人eEF2蛋白的氨基酸序列中的第1 417位或第411 858位的区的多肽的抗体。本发明中使用的抗体可以是IgG、IgA、 IgM、IgD、IgE中的任一个同种型。本发明中使用的抗体可以是单克隆抗体或多克隆抗体。 本发明中使用的抗体可以利用普通方法来制作，可以是市售的抗体。本发明的检测方法还可以使用抗eEF2抗体的抗体来进行。本发明中可以检测的 eEF2抗体是在体内、即对象的体内制作的抗体。在本发明的检测方法中，上述抗eEF2抗体的抗体可以利用公知的方法来制作，或者可以是市售的抗体。优选为抗_eEF2抗体(H-118， Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA) 0本发明中，为了测定试样中的eEF2多肽或eEF2抗体的存在或量，可以使用公知的手段、方法。只要是可以定性、定量地检测eEF2多肽或eEF2抗体的方法，可以是任何手段、 方法，例如包括免疫染色法、点渍法、荧光抗体法、补体结合反应、中和抗体测定法、免疫沉淀法、蛋白质印迹法、放射免疫测定(RIA)法、ELISA法、双杂交系统等免疫学的蛋白检测方法。在本发明中，可以优选使用免疫染色法或点渍法。在本发明的检测方法中，通过将由对象得到的试样中的eEF2多肽或eEF2抗体的存在或量与由健康对象或正常时期的对象得到的试样中的eEF2多肽或eEF2抗体的存在或量进行比较，可以确定为阳性。在本发明的检测方法中，使用血清作为试样时，可以以血清中的eEF2抗体的抗体效价(光密度单位(densitometric units))为指标。此时，利用点渍法测定对象的血清中的eEF2抗体的抗体效价，可以确定高于来自健康对象的血清的数值、 优选1000以上、更优选2000以上的抗体效价(光密度单位)为阳性，但该数值可以依赖于癌症的种类或组织等各种因子而变动，本领域技术人员可以适当设定。另外，使用组织切片作为试样时，可以以组织切片中免疫染色法的染色程度为基准。此时，例如与对应的正常细胞相比显示出强染色的癌细胞为癌细胞总体的25%以上时，可以判断为阳性，但本领域技术人员可以适当判断。当在对象中实施本发明的检测方法时，可以测定试样中eEF2基因的转录物的存在或量。本发明中的eEF2基因的转录物是指由编码上述eEF2多肽或其片段的氨基酸序列的核苷酸序列转录的产物，例如可以是mRNA或所有的其他类型的RNA、以及它们的片段等。另外，在本发明的检测方法中，可以测定具有编码eEF2多肽或其片段的氨基酸序列的核苷酸序列(例如DNA序列)的多核苷酸的存在或量。在本发明中，为了测定试样中的上述转录物或多核苷酸的存在或量，作为多核苷酸的检测方法，在本领域技术人员中可以使用普通的手段、方法。例如包括原位杂交法、 RNA印迹法、DNA印迹法、点渍法、RNA酶保护试验(RNase Protection Assay)法、PCR法、 RT-PCR法、实时PCR等多核苷酸的检测方法。另外，还可以进行使用微阵列(例如DNA微阵列、microRNA微阵列、蛋白微阵列等)的基因分析方法，只要可以定性、定量地检测上述转录物或多核苷酸，可以是上述方法以外的方法。并且，本发明的方法可用于诊断患有癌症的对象的预后。可以应用本发明的方法的癌症可以是如上所述的表达eEF2蛋白的任何癌症，但优选为肺腺癌、非小细胞性肺癌、 小细胞性肺癌、头颈部扁平上皮癌、食道癌、食道扁平上皮癌、胃癌、大肠癌、胰管癌、神经胶质母细胞瘤、恶性淋巴瘤。更优选为非小细胞性癌。在本发明的预后的诊断中，由对象得到的试样中的eEF2抗体的抗体效价越高，则可以判断预后越良好。eEF2抗体的抗体效价(光密度单位)例如为1000以上、优选2000以上、更优选为4000以上的值，本领域技术人员可以考虑各种因素后适当确定。在另一方案中，本发明涉及用于检测癌症的诊断试剂盒，该试剂盒包含抗上述 eEF2多肽或eEF2抗体的抗体、或与上述eEF2基因的转录物或其一部分互补的多核苷酸探针作为必须构成成分。在本发明中，上述抗体或探针优选被标记。上述标记可以按照普通方法进行。本发明的试剂盒除包含抗上述eEF多肽或eEF2抗体的抗体、或与上述eEF2基因的转录物或其一部分互补的多核苷酸探针以外，还包含例如蛋白或多核苷酸的检测方法所必须的试剂、试样的获取手段、反应容器等。通常，试剂盒中附带操作说明书。使用本发明的试剂盒，可以在血清或组织中高效率地检测表达eEF2蛋白的癌症。在又一方案中，本发明涉及抑制癌细胞增殖的双链siRNA。本发明中，可以抑制增殖的癌细胞可以是表达eEF2蛋白的任一种癌，优选为肺腺癌、非小细胞性肺癌、小细胞性肺癌、头颈部扁平上皮癌、食道癌、食道扁平上皮癌、胃癌、大肠癌、胰管癌、神经胶质母细胞瘤和恶性淋巴瘤。特别优选的癌是肺腺癌、小细胞性肺癌、胃癌、大肠癌、恶性淋巴瘤。本发明的siRNA是包含以由人eEF2基因转录的mRNA的核苷酸序列为靶的有义链和反义链的双链siRNA。本发明的siRNA所靶向的核苷酸序列可以是编码SEQ ID NO :1所示的氨基酸序列的核苷酸序列的部分序列。本发明的siRNA优选为由具有以下所示的RNA 序列的有义链(SEQ ID N0J)和反义链(SEQ ID NO⑶构成的双链siRNA。本发明的siRNA 的有义链(SEQ ID NO 2)；5’ -CAUGGGCAACAUCAUGAUCGAUCCU⑶CCU-3，本发明的siRNA的反义链(SEQ ID NO 3)；5’ -AGGACAGGAUCGAUCAUGAU⑶UGCCCAUG-3’本发明的siRNA的优选的RNA序列为上述SEQ ID NO 2和SEQ ID NO 3所示的序列，但在这些序列中可以添加、缺失、取代1个、2个或3个碱基。或者，在这些序列中可以取代、缺失、添加和/或插入1 3个、优选1个或2个、更优选1个碱基。就此时的杂交条件而言，当向生物体内给予本发明的siRNA而加以使用时，杂交条件为生物体内的条件；当将本发明的siRNA作为试剂在体外使用时，杂交条件为中度的严格条件或严格性强的条件，作为这样的条件，例如有400mM NaCl、40mM PIPES pH6. 4UmM EDTA、50°C 70°C下、12 16 小时的杂交条件。另外，本发明的siRNA的有义链序列与靶序列具有90%以上、优选95% 以上、进一步优选95、96、97、98或99%以上的序列同源性。并且，本发明的siRNA可以在5’末端或3’末端添加突出端序列。这里，突出端序列是指，为了提高双链siRNA的稳定性而添加在有义链和反义链配对的双链序列的5’末端或3’末端的任一端的突出的序列，例如从5’侧起是AG、UA、AUG、UUG和AAGCUU等序列，但可以是任何序列。本发明的双链siRNA优选在有义链和反义链的3’末端添加UU。另外， 上述的本发明的双链siRNA可以通过环状序列(loop sequence)连接双链siRNA以形成 shRNA。本发明的双链siRNA在本领域技术人员中可以通过普通方法来制备。例如，可以在体外进行化学或酶合成、或者可以在体内合成，但并不限于这些方法。优选为化学合成法。利用上述合成方法合成各链后，可以在一般的配对条件下使之配对。使用时，根据需要可以适当纯化。另外，本发明的双链siRNA可以以表达上述siRNA的RNA序列(SEQ ID NO 2和SEQ ID NO :3)的siRNA表达载体的形式制备。此时，例如可以使用tRNA_shRNA表达载体、piGENE tRNA Pur(Clontech, Palo Alto, CA)来制作。对本发明中使用的siRNA的长度没有特别限定，但作为本发明的优选的siRNA的例子，有15 50mer的siRNA ；作为进一步优选的例子，有20 40mer的siRNA ；作为更优选的例子，有25 35mer (例如30mer) 的siRNA。因此，本发明的优选的siRNA的例子有可以和eEF2 mRNA的5’ -CAUGGGCAACAU CAUGAUCGAUCCU⑶CCU-3，序列杂交的双链siRNA，其中，各siRNA的长度为15 50mer、优选 20 40mer、进一步优选25 35mer (例如3Omer)的双链siRNA。通常，已知在导入有siRNA的细胞内，通过靶基因与mRNA的结合来抑制siRNA的表达。因此，本发明的双链siRNA具有抑制eEF2基因的表达的功能，由此可以抑制导入有双链siRNA的对象中的细胞的增殖。本发明中的siRNA的导入或给药方法可以是使用转染试剂的磷酸钙法、脂质体法、非脂质体法、电穿孔、磁颗粒等本领域技术人员中公知的方法、 或将siRNA插入普通siRNA表达载体中后利用上述公知的方法将其导入的方法。优选利用公知方法导入表达上述siRNA的RNA序列(SEQ ID NO :2和SEQ ID NO 3)的siRNA表达载体。另外，如下所述，本发明的siRNA可以以药物组合物的形式进行给药。在本发明中，提供以上述双链siRNA作为有效成分的用于治疗或预防癌症的药物组合物。在本发明的药物组合物中，作为有效成分，除上述双链siRNA以外，还可以含有公知的抗癌药。在本发明的药物组合物中，作为有效成分的siRNA可以以被插入到载体中的形式含有。例如，可以以克隆到由制造商市售的siRNA表达载体等公知的siRNA表达载体或根据使用方式适当重组的公知的siRNA表达载体中的形态含有。因此，本发明提供编码本发明的siRNA的核酸、以及包含该核酸的载体。本发明的药物组合物可以含有药学上可接受的载体。本发明中可以使用的药学上可接受的载体可以是选自生理盐水、蒸馏水、林格液(Ringer ’ s液)、缓冲生理盐水、葡萄糖溶液、麦芽葡萄糖溶液、甘油、乙醇和脂质体中的一种或多种成分，但并不限于这些。还可以在本发明的药物组合物中添加抗氧剂、缓冲水溶液、抑菌剂等其他普通的添加剂。另外，为了制造注射用溶液、丸药、胶囊、颗粒或片剂，可以进一步添加稀释剂、喷雾剂、表面活性剂、粘合剂和润滑剂。本发明的药物组合物的给药方式可以是口服给药或胃肠外给药(例如静脉内给药、皮内给药、皮下给药、肌肉内给药、经鼻给药或口服给药)，只要能够将有效成分有效送达患处或其附近，也可以是上述给药方式以外的给药方式。可以根据对象的状态、例如对象的重量、年龄、性别和健康状态等、以及饭量、给药频率、给药方法、排泄量和疾病的严重程度等确定以本发明的药物组合物的形式给药的本发明的siRNA的有效量。以本发明的药物组合物的形式给药的本发明的siRNA的有效量通常为每天0. 01 100mg/kg，优选为每天 0. 1 10mg/kgo在又一方案中，本发明涉及用于治疗或预防癌症的方法，其特征在于给予对象有效量的上述药物组合物。所治疗或预防的癌症只要是表达eEF2蛋白的癌症即可，可以是任一种癌症，例如包括肺腺癌、非小细胞性肺癌、小细胞性肺癌、头颈部扁平上皮癌、食道癌、 食道扁平上皮癌、胃癌、大肠癌、胰管癌、神经胶质母细胞瘤和恶性淋巴瘤。另外，本发明优选对通过上述癌症的检测方法确定为阳性的对象进行给药。在又一方案中，本发明涉及上述双链siRNA在制造用于治疗或预防癌症的药物中的应用。需要说明的是，在又一方案中，本发明涉及抑制癌细胞增殖的shRNA或siRNA。 shRNA (short hairpin RNA or small hairpin RNA，短发夹 RNA 或小发夹 RNA)通常是指有义链和反义链通过环状序列连结而成的RNA，有时在细胞内环状结构被切断而形成双链 siRNA。本发明的siRNA优选为双链siRNA。对本发明的shRNA或siRNA所靶向的eEF2 的区没有特别限定，优选的例子有以由下述DNA序列5’ -gcc tggccgagga catcgataaa ggcgagg-3' (SEQ ID NO 18) 5 5' -actcaac cataacactt gatgccgttt ctt_3，(SEQ ID NO 19)转录的mRNA为靶的shRNA或siRNA。本发明的shRNA可以是由包含DNA序列的载体转录的shRNA，所述DNA序列由上述DNA序列的有义序列-环状序列-反义序列构成。若由包含所述DNA序列的载体转录到RNA中，则来自有义序列和反义序列的RNA结合，形成短的发夹(短发夹)RNA，变得稳定。需要说明的是，本发明中使用的环状序列可以是任何序列，本领域技术人员可以适当选择。本发明的优选的siRNA的例子有能够与由 5'-gcc tggccgagga catcgataaa ggcgagg-3'(SEQ ID NO 18) 5 5'-actcaac cataacactt gatgccgttt ctt-3’(SEQ ID NO :19)转录的mRNA杂交的siRNA。本发明的更具体的siRNA的 M^W :%! 5'-gcc tggccgagga catcgataaa ggcgagg-3' (SEQ ID NO :18) 5 5'-actcaac cataacactt gatgccgttt ctt_3，(SEQ ID NO :19)转录的 mRNA 具有互补序列的 siRNA。或者，本发明的siRNA可以是由与SEQ ID N0:18或SEQ ID NO 19所示的DNA序列对应的RNA 的有义链和反义链构成的双链siRNA。此外，本发明的优选的shRNA的例子有包含能够与 ^ 5' -gcc tggccgagga catcgataaa ggcgagg-3' (SEQ ID NO 18) $1 mRNA 1RNA 和能够与该RNA杂交的RNA的shRNA。并且，本发明的优选的shRNA的例子有包含能够与由 5'-actcaac cataacactt gatgccgttt ctt-3' (SEQ ID NO :19)转录的 mRNA 杂交的 RNA 和能够与该RNA杂交的RNA的shRNA。本发明的shRNA的更具体的例子有由具有下述DNA 序列5' -gcc tggccgagga catcgatgaa agcgtgg cttcctgtca cctcgcc tttatcgatg tcctcggcca ggc-3，(SEQ ID NO :20)；
5' -actcaac cataacactt gataccattt gtt cttcctgtca aag aaacggcatc aagtgttatg gttgagt-3' (SEQ ID NO 22)；3' -egg accggctcct gtagctactt tcgcacc gaaggacagt ggagcgg aaatagctac aggagccggt ccg-5，(SEQ ID NO :21)；或3' -tgagttg gtattgtgaa ctatggtaaa caa gaaggacagt ttc tttgccgtag ttcacaatac caactca-5' (SEQ ID NO :23)的核酸转录的shRNA。本发明可以在上述DNA序列或RNA序列中添加、缺失、取代 1个、2个或3个碱基，或者可以是与上述DNA序列或RNA序列具有90%以上、优选95%以上、进一步优选95、96、97、98或99%以上的序列同源性的shRNA。需要说明的是，同源性、 杂交条件、siRNA的长度如上所述。另外，本发明可以在上述DNA序列或RNA序列中添加、 缺失、取代和/或插入1个、2个或3个碱基。本发明的ShRNA或siRNA可以在本领域技术人员中利用普通方法进行制备。例如， 可以在体外进行化学或酶合成、或者可以在体内合成，并不限于这些方法。另外，本发明的 shRNA或siRNA可以以包含上述SEQ ID NO 20或SEQ ID NO 22所示的DNA序列的shRNA 表达载体或siRNA表达载体的形式制备。此时，例如可以使用tRNA-shRNA表达载体、piGENE tRNA Pur (Clontech, Palo Alto, CA)来制作。本发明的shRNA或siRNA的导入或给药方法可以是使用转染试剂的磷酸钙法、 脂质体法、非脂质体法、电穿孔、磁颗粒等本领域技术人员中公知的方法、或插入普通siRNA 表达载体中后利用上述公知的方法将其导入的方法。如下所述，本发明的shRNA或siRNA 可以以药物组合物的形式给药。在本发明中，提供以上述shRNA或siRNA作为有效成分的、用于治疗或预防癌症的药物组合物。本发明的药物组合物可以同时含有公知的抗癌药。本发明的药物组合物可以含有编码本发明的shRNA或siRNA的核酸(例如包含 SEQ ID N0:20或SEQ ID NO :22所示的DNA序列的核酸)作为有效成分。例如，包含所述的DNA序列的核酸可以是被插入到市售的shRNA表达载体或siRNA表达载体中核酸。因此， 本发明提供编码本发明的shRNA或siRNA的核酸、以及包含该核酸的载体。本发明的药物组合物可以含有药学上可接受的普通载体和添加剂。本发明的药物组合物的给药方式可以是口服给药或胃肠外给药(例如静脉内给药、皮内给药、皮下给药、 肌肉内给药、经鼻给药或口服给药)。以本发明的药物组合物的形式给药的本发明的shRNA 或siRNA的有效量可以根据对象的状态、例如对象的重量、年龄、性别和健康状态等、以及饭量、给药频率、给药方法、排泄量和疾病的严重程度等来确定。在又一方案中，本发明涉及用于治疗或预防癌症的方法，其特征在于给予对象有效量的上述药物组合物。所治疗或预防的癌症只要是表达eEF2蛋白的癌症即可，可以是任一种癌症，例如包括肺腺癌、非小细胞性肺癌、小细胞性肺癌、头颈部扁平上皮癌、食道癌、 食道扁平上皮癌、胃癌、大肠癌、胰管癌、神经胶质母细胞瘤和恶性淋巴瘤。在又一方案中，本发明涉及上述shRNA或siRNA在制造用于治疗或预防癌症的药物中的应用。在又一方案中，本发明涉及包含来自eEF2蛋白的连续的氨基酸的肽。本发明的肽的例子有包含后述的氨基酸序列的肽或由后述的氨基酸序列构成的肽。优选这些肽与HLA分子具有结合能力。优选这些肽诱导细胞毒活性。优选这些肽为HLA-A1402限制性 eEF2肽、HLA-A*0201限制性eEF2肽或HLA_A*0206限制性eEF2肽。优选这些肽为9 30 个氨基酸的长度。本发明还提供包含这些肽的、用于治疗或预防癌症的药物组合物；这些肽在制备用于治疗或预防癌症的药物中的应用；以及癌症的治疗或预防方法等，该方法的特征在于将这些肽给予对象。因此，在一个方案中，本发明提供HLA-A1402限制性eEF2肽。本发明还提供用于治疗或预防HLA-Ai402阳性对象的癌症的HLA-A1402限制性eEF2肽、以及包含这些肽的药物组合物。作为本发明中使用的HLA-Ai402限制性eEF2肽，可以例示具有由来自eEF2 蛋白的连续的氨基酸构成的氨基酸序列的肽或含有由来自eEF2蛋白的连续的氨基酸构成的氨基酸序列的肽，上述氨基酸序列选自=Arg Phe Tyr Ala Phe Gly Arg Val Phe (SEQ ID NO 4) ；Ala Phe Gly Arg Val Phe Ser Gly Leu(SEQ ID NO 5) ；Arg Phe Asp Val His Asp Val Thr Leu (SEQ ID NO :6) ；Ala Tyr Leu Pro Val Asn Glu Ser Phe (SEQ ID NO :7)；以及在上述中的1个氨基酸序列中，取代、缺失或添加多个、例如1 9个、优选1 5个、1 4个、1 3个、进一步优选1 2个、更优选1个氨基酸而得到的氨基酸序列，但并不限于这些肽。还可以包含上述氨基酸序列选自在上述中的1个氨基酸序列中取代、缺失、添加和/或插入多个、例如1 9个、优选1 5个、1 4个、1 3个、进一步优选1 2个、 更优选1个氨基酸而得到的氨基酸序列的肽。取代上述肽的氨基酸时，优选的取代位点有 2位和/或9位的氨基酸。上述肽的2位的氨基酸的优选例子有Phe或Tyr。上述肽的9 位的氨基酸的优选例子有Ile、Leu或I^he。这样的修饰型肽的具体例子有表12或表13 所记载的肽。本发明中优选的eEF2肽为Ala Tyr Leu Pro Val Asn Glu Ser Phe (SEQ ID NO :7)。但即使是上述的任一种肽，也是以保持与HLA-A1402分子的结合能力为条件。在本说明书中，将保持与HLA-A1402的结合能力的肽称作HLA-A1402限制性eEF2肽。需要说明的是，本发明的上述肽可用于HLA-Ai402阳性对象以外的对象。因此，本发明提供包含上述任一个氨基酸序列的肽、以及包含该肽的药物组合物。在又一方案中，本发明提供HLA_A*0201限制性eEF2肽。本发明还提供用于治疗或预防HLA-A*0201阳性对象的癌症的、包含HLA-A*0201限制性eEF2肽的药物组合物。本发明中使用的HLA-A*0201限制性eEF2肽是具有由来自eEF2蛋白的连续的氨基酸构成的氨基酸序列的肽或含有由来自eEF2蛋白的连续的氨基酸构成的氨基酸序列的肽。下述表1 7中例示本发明中使用的HLA-A*0201限制性eEF2肽的候选。其中，作为本发明中优选的肽，例示上述氨基酸序列选自下述序列的肽Arg Leu Met Glu Pro lie Tyr Leu Val (SEQ ID NO 8) ；Lys Leu Val Glu Gly Leu Lys Arg Leu(SEQ ID NO :9) ；Tyr Leu Asn Glu lie Lys Asp Ser Val(SEQ ID NO :10) ；lie Leu Thr Asp lie Thr Lys Gly Val(SEQ ID NO: 11) ；Leu Met Met Tyr lie Ser Lys Met Val (SEQ ID NO :12) ；Lys Leu Pro Arg Thr Phe Cys Gln Leu (SEQ ID NO :13) ；Leu lie Leu Asp Pro lie Phe Lys Val (SEQ ID NO :14)； 以及上述中的1个氨基酸序列中，取代、缺失或添加多个、例如1 9个、优选1 5个、1 4个、1 3个、进一步优选1 2个、更优选1个氨基酸而得到的氨基酸序列，但并不限于这些肽。还可以包含上述氨基酸序列选自在上述中的1个氨基酸序列中取代、缺失、添加和/或插入多个、例如1 9个、优选1 5个、1 4个、1 3个、进一步优选1 2个、 更优选1个氨基酸而得到的氨基酸序列的肽。其中，特别优选的HLA-A*0201限制性eEF2肽为 Arg Leu Met Glu Pro lie Tyr Leu Val(SEQ ID NO :8)或 lie Leu Thr Asp lie Thr Lys Gly Val (SEQ ID NO :11)。本发明的HLA_A*0201限制性eEF2肽特别可以是将第2位的氨基酸和/或第9位的氨基酸取代成其他氨基酸的肽。上述肽的2位的氨基酸的优选例子有Leu或Met。上述肽的9位的氨基酸的优选例子有Leu或Val。这样的修饰型肽的例子有表15 21中记载的肽，优选列举在Leu lie Leu Asp Pro lie Phe Lys Val (SEQ ID NO 14)中将第2位的氨基酸Ile取代成Leu或Met、和/或将第9位的氨基酸Val取代成 Leu 的肽。特别优选的例子有Leu Leu Leu Asp Pro lie Phe Lys Val (SEQ ID NO :15)、 Leu Met Leu Asp Pro lie Phe Lys Val (SEQ ID NO :16)或 Leu Leu Leu Asp Pro lie Phe Lys Leu(SEQ ID NO :17)、Leu Met Leu Asp Pro lie Phe Lys Leu(SEQ ID NO :24)。 但即使是上述的任一种肽，也是以保持与HLA-A*0201分子的结合能力为条件。在本说明书中，将保持与HLA-A*0201的结合能力的肽称作HLA-A*0201限制性eEF2肽。另外，本发明的 HLA-A*0201限制性eEF2肽可以具有使干扰素、活性升高的作用。需要说明的是，本发明的上述肽可用于HLA-A*0201阳性对象以外的对象。因此，本发明提供包含上述任一个氨基酸序列的肽、以及包含该肽的药物组合物。在又一方案中，本发明提供HLA_A*0206限制性eEF2肽。本发明还提供用于治疗或预防HLA-A*0206阳性对象的癌症的、包含HLA_A*0206限制性eEF2肽的药物组合物。本发明中使用的HLA-A*0206限制性eEF2肽是具有由来自eEF2蛋白的连续的氨基酸构成的氨基酸序列的肽或含有由来自eEF2蛋白的连续的氨基酸构成的氨基酸序列的肽。在本发明所使用的HLA-A*0206限制性eEF2肽中，作为优选的肽，可以例示上述氨基酸序列为Arg Leu Met Glu Pro lie Tyr Leu Val (SEQ ID NO :8) ；Lys Leu Val Glu Gly Leu Lys Arg Leu(SEQ ID NO :9) ；Tyr Leu Ash Glu lie Lys Asp Ser Val (SEQ ID NO :10) ；lie Leu Thr Asp lie Thr Lys Gly Val (SEQ ID NO :11) ；Leu Met Met Tyr lie Ser Lys Met Val (SEQ ID NO 12) ；Lys Leu Pro Arg Thr Phe Cys Gln Leu(SEQ ID NO :13) ；Leu lie Leu Asp Pro lie Phe Lys Val (SEQ ID NO :14)的肽；以及上述氨基酸序列选自在上述中的1个氨基酸序列中取代、缺失和/或添加多个、例如1 9个、优选1 5个、1 4个、1 3个、 进一步优选1 2个、更优选1个氨基酸而得到的氨基酸序列的肽，但并不限于这些肽。还可以包含上述氨基酸序列选自在上述中的1个氨基酸序列中取代、缺失、添加和/或插入多个、例如1 9个、优选1 5个、1 4个、1 3个、进一步优选1 2个、更优选1个氨基酸而得到的氨基酸序列的肽。但即使是上述的任一种肽，也是以保持与HLA-A*0206分子的结合能力为条件。在本说明书中，将保持与HLA-A*0206的结合能力的肽称作HLA_A*0206 限制性eEF2肽。另外，本发明的HLA-A*0206限制性eEF2肽可以具有使干扰素γ活性升高的作用。需要说明的是，本发明的上述肽可用于HLA-A*0206阳性对象以外的对象。因此， 本发明提供包含上述任一种氨基酸序列的肽、以及包含该肽的药物组合物。[表1]
权利要求
1.检测对象的癌症的方法，该方法包括测定在由该对象得到的试样中eEF2多肽、 eEF2抗体或eEF2基因的转录物的存在或量的步骤。
2.权利要求1所述的方法，其中，上述癌症选自肺腺癌、非小细胞性肺癌、小细胞性肺癌、头颈部扁平上皮癌、食道癌、食道扁平上皮癌、胃癌、大肠癌、胰管癌、神经胶质母细胞瘤和恶性淋巴瘤。
3.双链siRNA，该双链siRNA抑制癌细胞的增殖，其中，有义链由SEQID NO :2所示的 RNA序列构成，反义链由SEQ ID NO 3所示的RNA序列构成。
4.权利要求3所述的双链siRNA，其中，上述癌细胞来自选自胃癌、肺癌、胰癌、神经胶质母细胞瘤和恶性淋巴瘤的癌。
5.药物组合物，其用于治疗或预防癌症，该药物组合物含有权利要求3或4所述的双链 siRNA作为有效成分。
6.用于治疗或预防癌症的方法，其特征在于给予对象有效量的权利要求5所述的药物组合物。
7.权利要求3或4所述的双链siRNA在制造用于治疗或预防癌症的药物中的应用。
8.shRNA，该shRNA抑制癌细胞的增殖，并以由SEQ ID N0:18或SEQ ID N0:19所示的 DNA序列转录的mRNA为靶。
9.核酸，该核酸是权利要求8所述的shRNA所转录的核酸，其具有SEQID N0:20或SEQ ID NO 22所示的DNA序列。
10.载体，该载体包含权利要求9所述的核酸。
11.药物组合物，其用于治疗或预防癌症，该药物组合物含有权利要求8所述的shRNA、 权利要求9所述的核酸或权利要求10所述的载体。
12.用于治疗或预防癌症的方法，其特征在于给予对象有效量的权利要求11所述的药物组合物。
13.权利要求8所述的shRNA、权利要求9所述的核酸或权利要求10所述的载体在制造用于治疗或预防癌症的药物中的应用。
14.药物组合物，其用于治疗或预防HLA-A1402阳性对象的癌症，该药物组合物中包含 eEF2肽，所述eEF2肽具有由来自eEF2蛋白的连续的氨基酸构成的氨基酸序列，上述氨基酸序列选自下述(a) (e)(a)ArgPhe Tyr Ala Phe Gly Arg Val Phe 即 SEQ ID NO 4 ；(b)AlaPhe Gly Arg Val Phe Ser Gly Leu 艮口 SEQ ID NO 5 ；(c)ArgPhe Asp Val His Asp Val Thr Leu 艮口 SEQ ID NO 6 ；(d)AlaTyr Leu Pro Val Asn Glu Ser Phe 即 SEQ ID NO 7 ；以及(e)在(a) (d)所示的氨基酸序列中，取代、缺失或添加1个或多个氨基酸而得到的氨基酸序列。
15.权利要求14所述的药物组合物，其中，氨基酸序列为AlaTyr Leu Pro Val Asn Glu Ser Phe 艮口 SEQ ID NO :7。
16.药物组合物，其用于治疗或预防对象的癌症，该药物组合物中含有编码权利要求 14所述的肽的多核苷酸。
17.权利要求14 16中任一项所述的药物组合物，其中，上述癌症选自肺腺癌、小细胞性肺癌、食道癌、胃癌、大肠癌、胰管癌、恶性神经胶质母细胞瘤、恶性淋巴瘤和头颈部扁平上皮癌。
18.用于治疗或预防癌症的方法，其特征在于对HLA-A1402阳性对象给予有效量的权利要求14 17中任一项所述的药物组合物。
19.权利要求14所述的肽在制造用于治疗或预防癌症的药物中的应用。
20.药物组合物，其用于治疗或预防HLA-A*0201阳性对象的癌症，该药物组合物中包含 eEF2肽，所述eEF2肽具有由来自eEF2蛋白的连续的氨基酸构成的氨基酸序列，上述氨基酸序列选自下述(a) (h)(a)Arg Leu Met Glu Pro lie Tyr Leu Val 艮口 SEQIDNO8 ；(b)Lys Leu Val Glu Gly Leu Lys Arg Leu 即 SEQIDNO9 ；(c)Tyr Leu Asn Glu lie Lys Asp Ser Val 即 SEQIDNO10 ；(d)Ile Leu Thr Asp lie Thr Lys Gly Val 即 SEQIDNO11 ；(e)Leu Met Met Tyr lie Ser Lys Met Val 即 SEQIDNO12 ；(f)Lys Leu Pro Arg Thr Phe Cys Gln Leu 即 SEQIDNO13 ；(g)Leu lie Leu Asp Pro lie Phe Lys Val 艮口 SEQIDNO:14;以及(h)在(a) (g)所示的氨基酸序列中，取代、缺失或添加1个或多个氨基酸而得到的氨基酸序列。
21.权利要求20所述的药物组合物，其中，氨基酸序列为ArgLeu Met Glu Pro lie Tyr Leu Val 即 SEQ ID NO :8 或 lie Leu Thr Asp lie Thr Lys Gly Val 即 SEQ ID NO 11。
22.权利要求20所述的药物组合物，其中，氨基酸序列为在Leulie Leu Asp Pro Ile Phe Lys Val即SEQ ID NO 14中将第2位氨基酸Ile取代成Leu或Met、和/或将第9位氨基酸Val取代成Leu而得到的氨基酸序列。
23.药物组合物，其用于治疗或预防对象的癌症，该药物组合物包含编码权利要求20 所述的肽的多核苷酸。
24.权利要求20 23中任一项所述的药物组合物，其中，上述癌症选自肺腺癌、小细胞性肺癌、食道癌、胃癌、大肠癌、胰管癌、恶性神经胶质母细胞瘤、恶性淋巴瘤和头颈部扁平上皮癌。
25.用于治疗或预防癌症的方法，其特征在于给予对象有效量的权利要求20 M中任一项所述的药物组合物。
26.权利要求20所述的肽在制造用于治疗或预防癌症的药物中的应用。
全文摘要
本发明提供使用在多种癌症中表达的蛋白来检测癌症的方法、以及用于治疗或预防以该蛋白为靶的癌症的药物组合物。本发明还提供包含来自该蛋白的癌抗原肽的药物组合物。详细而言，该方法包括测定在由对象得到的试样中eEF2多肽或eEF2抗体的存在或量的步骤。
文档编号A61P43/00GK102348796SQ201080011749
公开日2012年2月8日 申请日期2010年1月8日 优先权日2009年1月8日
发明者尾路祐介, 杉山治夫 申请人:株式会社癌免疫研究所