专利名称：三肽的用途的制作方法
三肽的用途本发明涉及某些特定的三肽衍生物用于紧致(tightening)、紧实(firming)和/ 或保湿(moisturizing)皮肤的用途。此外，本发明涉及刺激成纤维细胞和/或角化细胞对含有D-葡糖胺和/或N-乙酰-D-葡糖胺的葡糖胺聚糖的合成和/或对蛋白聚糖的合成的方法，例如，刺激透明质酸的合成和/或蛋白聚糖Decorin和/或Lumican的合成。皮肤由一组细胞构成，所述细胞一起排列为柔软耐久的组织形式，并且覆盖身体全部。皮肤发挥的主要作用是作为抵挡外界因素的保护性屏障，同时又允许内环境和外环境之间进行某些交换。其是受生物的生理条件和环境条件调控的很多代谢过程的位点。皮肤由两层相邻的层——表皮和真皮构成，真皮联结有皮下组织。表皮主要作用是保护身体，其是皮肤的最外层，赋予皮肤不可透过性和耐久性。其大约每四周更新一次。虽然表皮中共存有不同的细胞类型，但角化细胞是主要的细胞类型 (90%)。它们的特征活性是角蛋白的合成，角蛋白占到表皮总蛋白的95%。角蛋白是纤维性的、不溶于水的蛋白，其是保护皮肤抵挡有害外界因素(热、冷、脱水)的表皮角膜层的构成成分表皮通过被称为真皮-表皮交界(dermo-印idermal junction)或表皮基底膜的区域与真皮相连。该结构提供了真皮至表皮的粘连，并且具有机械支持作用，这部分地负责皮肤强韧性(tonicity)。其由基底角化细胞和真皮成纤维细胞构成。真皮是皮肤的内层，其是纤维-弹性连接组织，包含分布于被称为细胞外基质的复合介质中的细胞(成纤维细胞)。该基质由胶原、弹性纤维、糖蛋白和蛋白聚糖(PG)构成。葡糖胺聚糖(GAG)的游离形式(即并非与蛋白联结的形式)也被发现于细胞外基质中。葡糖胺聚糖(GAG)是二糖单元形成的多聚物。在人类皮肤中最频繁发现的GAG中， 透明质酸是首要的，其以最大的丰度存在。还存在4-硫酸软骨素和6-硫酸软骨素、硫酸皮肤素以及少量的肝素和硫酸乙酰肝素O^paran sulfate)。GAG的二糖单元由己糖胺(D-葡糖胺或D-半乳糖胺)与糖醛酸(D-葡糖醛酸或L-艾杜糖醛酸)交替形成，己糖胺常见为硫酸化的。GAG通常与蛋白共价键合，以形成蛋白聚糖，例如Lumican或Decorin，它们二者均属于小的富亮氨酸蛋白聚糖(SLRP)家族。已知的GAG中，仅上文提到的透明质酸不是合成的与中央蛋白键合的。蛋白聚糖是复杂的大分子，其由支化的中央蛋白主干或蛋白网络构成，其上联结有大量的已知为葡糖胺聚糖的碳水化合物侧链。蛋白聚糖的结构例如被描述于‘The Journal of investigative dermatology (1982)，79，Suppl· 1，31s-37s'中。公知GAG以及蛋白聚糖通过其与水分子紧密结合并形成凝胶的性质，确保了对真皮和表皮的保湿作用。被良好保湿的皮肤是好的外观和令人满意的生理和功能状态、特别是良好的机械性质的保证。特别地，随着衰老的进程，成纤维细胞和角化细胞生产的PG和GAG越来越少，它们的合成减弱。这导致了相当大的瓦解形成PG的皮肤骨架上的GAG的沉积异常，其后果是这些PG的水亲合力降低，由此使得组织的保湿性和强韧性降低，这还反映为皮肤柔软度的损失。因此，存在对下述活性试剂的持续需求，所述试剂的作用是保持皮肤中PG(例如 Lumican或Decorin)和GAG(例如透明质酸)的水平，并且所述试剂因此适用于紧致、紧实和/或保湿皮肤。作为结果，皮肤呈现为提紧的状态，皮肤强韧性被改善，皮肤松垂被预防或减少，皮肤的柔软度和弹性被保持或恢复(重构作用)。此外，疤痕愈合被促进，表皮微损伤可被修复，拉伸痕迹(stretch mark)被降低。令人吃惊地，已经发现，某些特定的三肽衍生物能增加人成纤维细胞对透明质酸 (Hyaluronan,也作 Hyaluronic acid)的合成禾口 / 或对蛋白聚糖 Decorin 禾口 / 或 Lumican 的合成，它们因此特别适用于处理如前文所述由于这些GAG和PG的生产不足造成的上文概括的皮肤状况。这还被阐释于体内研究中，该研究显示了局部应用包含此类三肽衍生物的化妆品组合物后皮肤强韧性和皮肤紧实性的改善以及重构作用(即对松垂和双下巴的作用)。因此，本发明涉及通式(I)的三肽衍生物及其皮肤可耐受的盐用于紧致、紧实和/ 或保湿皮肤的用途，R1-A-B-C-R2(I)其中Rl表示棕榈酰或十四烷基氨基羰基；R2表示OH或NH-十六烷基；A表示精氨酰、赖氨酰、鸟氨酰或2，4_ 二氨基丁酰；B表示缬氨酰、亮氨酰、异亮氨酰或正缬氨酰，以及C表示精氨酰、赖氨酰或2，4- 二氨基丁酰。特别地，根据本发明的三肽衍生物适合用于提紧皮肤、预防或减少皮肤松垂、保持或恢复皮肤的柔软度和弹性(重构作用)、促进疤痕愈合和修复表皮微损伤和/或降低拉伸痕迹。在另一实施方式中，本发明涉及刺激成纤维细胞和/或角化细胞对含有D-葡糖胺和/或N-乙酰-D-葡糖胺残基的葡糖胺聚糖的合成和/或对蛋白聚糖的合成的方法，所述方法包括向需要此类处理的个体施用有效量的至少一种对应于上文概括的式(I)的三肽衍生物。特别地，本发明涉及刺激对透明质酸和/或蛋白聚糖Decorin和/或Lumican的合成的方法。所述方法特别适合对遭受上文讨论的葡糖胺聚糖合成不足和/或蛋白聚糖合成不足(特别是透明质酸、Decorin和/或Lumican合成不足)的受试者加以处理，以通过改善皮肤的紧致性和紧实性和/或通过改善皮肤的保湿，来校正所述不足的负面影响。因此，所述方法特别适用于提紧皮肤，适用于对皮肤松垂进行处理或联合处理，适用于保持或恢复皮肤的柔软度和弹性，适用于促进疤痕愈合，适用于修复表皮微损伤或者适用于降低拉伸痕迹。此外，本发明涉及至少一种对应于式(I)的三肽衍生物或其皮肤可耐受的盐(如上文所概括的)用于刺激透明质酸合成的用途，其中，Rl是棕榈酰或十四基氨基羰基；R2是 OH或NH-十六烷基；A是精氨酰、赖氨酰、鸟氨酰或2，4-二氨基丁酰；B是缬氨酰、亮氨酰、 异亮氨酰或正缬氨酰，并且C是精氨酰、赖氨酰或2，4- 二氨基丁酰。本发明还涉及对皮肤进行治疗性处理的下述任何方法，所述方法的目的是刺激葡糖胺聚糖合成，特别是透明质酸合成。本发明还包括对应于式(I)的三肽衍生物的光学异构体，并且还涉及这些衍生物的生理可接受盐。式(I)化合物和酸一起可形成单价或多价的均质或混合盐，例如与无机酸(例如盐酸、氢溴酸、硫酸或磷酸)；或与合适的羧酸(例如脂肪族单羧酸或二羧酸，例如甲酸、乙酸、三氟乙酸、三氯乙酸、丙酸、乙醇酸、琥珀酸、富马酸、丙二酸、马来酸、草酸、邻苯二甲酸、 柠檬酸、乳酸或酒石酸)；或与芳香族羧酸(例如苯甲酸或水杨酸)；或与芳香族-脂肪族羧酸(例如扁桃酸或肉桂酸)；或与杂芳香族羧酸(例如烟碱酸)；或与脂肪族或芳香族磺酸 (例如甲磺酸或甲苯磺酸)一起。优选的是“皮肤耐受的盐”。根据本发明，根据式(I)的三肽衍生物可单独使用或以任何比例作为混合物使用。根据本发明的一种优选的实施方式中，使用的根据式(I)的三肽衍生物是下述这些，其中A和C可以是相同的或不同的，并且它们具有赖氨酰或2，4_ 二氨基丁酰的定义。根据本发明的另一优选的实施方式中，使用的根据式(I)的三肽衍生物是其中R2 代表OH的那些。根据本发明的另一优选的实施方式中，使用的根据式(I)的三肽衍生物是氯化
盐、乙酸盐或三氟乙酸盐，特别是三氟乙酸盐。根据本发明使用的根据式(I)的三肽衍生物中，优选的是下述这些Palm-Lys-Val-Lys-OHPalm-Orn-Val-Lys-OHPalm-Lys-Leu-Lys-OHPalm-Lys-Ile-Dab-OHPalm-Lvs-Nva-Dab-OHPalm-Lys-Leu-Dab-OHPalm-Lys-Val-Dab-NH-十六烷基十四烷基-NH-C(0) -Dab-Val-Dab-OH十四烷基-NH-C(O)-Lys-Ile-Dab-OH十四烷基-NH-C(O)-Arg-Val-Arg-OH,其中，Palm表示棕榈酰，Dab表示2，4_ 二氨基丁酰。根据本发明使用的根据式(I)的三肽衍生物中，最优选的是十四烷基-NH-C(0) -Dab-Val-Dab-OH,特别是三氟乙酸盐形式的。优选地，根据本发明的三肽衍生物中的所有氨基酸都是L-构型的。根据式(I)的三肽衍生物及其组合物是专利文献中已知的，其被描述于WO 2004/099237 中。根据本发明的三肽衍生物可以用于适于紧致、紧实和/或保湿皮肤的任何想要的应用形式中，例如用于局部组合物中。但是，根据本发明的三肽衍生物还适于被包埋于纳米颗粒(例如脂质体、nanosome、环糊精)中，纳米颗粒随后可被加入想要的应用形式中。优选地，有效量的、具有上文给出的定义和偏好的至少一种三肽衍生物被掺入还包含化妆品可接受的载体的局部组合物中。
此类局部组合物特别适用于紧致、紧实和/或保湿皮肤，例如，特别用于提紧皮肤，预防或减少皮肤松垂，保持或恢复皮肤的柔软度和弹性(重构作用)，促进疤痕愈合，以及修复表皮微损伤和/或降低拉伸痕迹。术语“有效量”一般而言表示按局部组合物的重量计至少0. 00001%。优选地，组合物含有基于组合物总重而言0.0001%至10%的量的三肽衍生物，优选地，0. 0001%至的量的三肽衍生物。术语“局部组合物”用于本文中特别表示可局部应用至哺乳动物角质组织(例如人的皮肤或毛发(包括睫毛、眉毛)或指甲，特别是人的皮肤)的化妆品组合物。术语“化妆品组合物”在本申请中使用时指R0mpp Lexikon Chemie, IOth edition 1997, Georg Thieme Verlag Stuttgart, New York ^feH "Kosmetika" T^J^.
βπ ^ ^^^ L Domsch, “ Cosmetic Compositions" , Verlag fur chemische Industrie (ed. H. Ziolkowsky), 4th edition, 1992 中公开的化妆品组合物。术语“化妆品可接受的载体”表示传统用于局部组合物或组合物的所有载体和/ 或赋形剂和/或稀释剂。优选地，局部组合物是溶剂或脂肪物质中的悬浮液或分散体系的形式，或者，是乳液或微乳液(特别是0/W型或W/0型的)、PIT-乳液、多重乳液(例如0/W/0型或W/0/W型)、 Pickering乳液、水凝胶、醇凝胶、脂质体凝胶、单相或多相溶液或泡分散体系(vesicular dispersion)的形式或还可通过笔、作为膜或作为喷雾应用的其它常用形式。如果局部组合物是乳液或包含乳液，则其还可含有一种或多种阴离子、非离子、阳离子或两性表面活性剂。优选的局部组合物是皮肤护理组合物以及功能组合物。皮肤护理组合物的例子是特别地，身体油、身体护肤液、身体凝胶、修护霜、皮肤保护软膏、剃须组合物(例如剃须泡沫或凝胶)、皮肤粉(例如婴儿粉)、保湿凝胶、保湿喷雾、活力身体喷雾、紧致凝胶、面部和/或身体保湿剂、面部和/或身体清洁剂、面膜、抗痤疮组合物和/或磨皮组合物。功能性组合物的例子是含有活性成分的化妆品或药物组合物，例如但不限于激素组合物、维生素组合物、植物提取物组合物、抗衰老组合物和/或抗微生物(抗细菌或抗真菌)组合物。根据本发明的局部组合物可以是液体、护肤液、增稠护肤液、凝胶、乳霜、乳液、软膏、糊膏、粉末、化妆用品或固体管棒状品的形式，其可任选地被包装作气溶胶，并且可以以摩丝(mousse)的形式提供，例如作为气溶胶摩丝、泡沫或喷雾泡沫、喷雾、棒状品(stick)、 贴膏(plaster)、清洁剂、肥皂、拭巾(wipe)或冻干品(例如Pentapharm Dual Vial体系)。根据本发明的组合物优选被配制为水包油或油包水乳液、硅酮(silicone)包水或水包硅酮乳液，或配制为水性浆液或水性凝胶。根据本发明的化妆品组合物具有3-10范围内的pH，优选4-8范围内的pH，最优选 pH 4-6范围内的。根据本发明，局部组合物含有至少一种上文定义的三肽，任选地，组合其它成分， 例如用于下述用途的成分皮肤提亮；预防晒黑；治疗色素沉着过多；预防或减少痤疮、皱纹、细纹(lines)、萎缩和/或炎症；以及局部麻醉；抗微生物剂和/或抗真菌剂；螯合剂和/或多价螯合剂；抗脂肪团和塑身(例如，植烷酸)、紧实、保湿和赋予活力、美黑、镇定，以及提高弹性的试剂和皮肤屏障和/或UV遮光剂物质。局部化妆品组合物还可含有常用的化妆品佐剂和添加剂，例如防腐剂/抗氧化剂，脂肪类物质/油，水，有机溶剂，硅酮，增稠剂，软化剂，乳化剂，消泡剂，保湿剂，增加好感的组分(例如香料)，表面活性剂，填料，多价螯合剂，阴离子、阳离子、非离子或两性聚合物或其混合物，推进剂，酸化或碱化试剂，染料，颜料 /着色剂，研磨剂，吸收剂，精油，皮肤感觉剂(skin sensates)，收敛剂，消泡剂，色素或纳米色素，例如适于通过物理阻隔紫外线照射提供光保护效果的那些，或者通常配制进化妆品组合物的任何其它成分。适用于本发明的局部组合物的、通常用于皮肤护理工业的此类化妆品成分被例如描述于 CTFA Cosmetic Ingredient Handbook, Second Edition (1992)中， 但不限于此。常用的化妆品佐剂和添加剂，例如，乳化剂、增稠剂、表面活性成分和成膜剂，可显示出协同效果，这可由本领域专家以常规试验或针对化妆品组合物配方的常见考虑来确定。必需的量可由技术人员基于想要的产品容易地确定。可用于本申请的化妆品活性成分在一些情况下可提供不止一种益处，或可通过不止一种作用模式生效。如无另外说明，下文中提到的载体、赋形剂、添加剂、稀释剂、佐剂和添加剂等特别适用于根据本发明的局部组合物。根据本发明的局部组合物还可含有化妆品活性成分。化妆品活性成分的例子包括但不限于肽和/或寡肽(例如，Matrixyl [五肽衍生物]，SYN _TACKS中含有的肽之一或二者，SYN -COLLdNCI 棕榈酰三肽_5，甘油)，SYN -AKE (INCI 水、甘油、二肽二氨基丁酸苯甲酰胺二乙酸酯(来自 DSM Nutritional Products Ltd. ,Branch Pentapharm), Ac-Gln-Asp-Val-His-OH 和 / 或 H-Lys-Asp-Val-Cit_NH2*2TFA)，基于蜡的合成肽和棕榈酰-寡肽，丁基氨基甲酸碘丙酯(iodopropyl butylcarbamate)，甘油，尿素，胍(例如氨基胍)；维生素及其衍生物，例如维生素C(抗坏血酸)，维生素A(例如，类维生素A衍生物，例如视黄醇棕榈酸酯或视黄醇丙酸酯)，维生素E (例如，生育酚乙酸酯)，维生素R3 (例如烟酰胺)和维生素B5 (例如泛酰醇)，维生素 和维生素B12，生物素，叶酸；抗痤疮活性物质或药物(例如，间苯二酚、水杨酸等等)；抗氧化剂(例如植物固醇类，硫辛酸) ’类黄酮(例如异黄酮、植物雌激素)；皮肤镇定和舒缓试剂，例如芦荟提取物，尿囊素等等； 适用于增加好感目的的试剂，例如精油，香料，皮肤感觉剂，不透明剂，芳香化合物(例如， 丁香油、甲醇、樟脑、桉树油和丁子香酚及其衍生物)，剥落性(desquamatory)活性物质， 羟基酸，例如AHA酸，BHA酸，多不饱和脂肪酸，自由基清除剂，法呢醇，抗真菌活性物质， 特别是没药醇，烷基二醇，例如1，2-戊二醇，己二醇或1，2-辛二醇，植醇，多元醇，例如植烷三醇，神经酰胺和拟神经酰胺，氨基酸，蛋白水解产物，多不饱和脂肪酸，植物提取物，例如激动素(kinetin)，DNA或RNA及其片段化产物，碳水化合物，共轭脂肪酸，肉毒碱，肌肽 (carnosine), Biochinonen,六氧番爺烃(phytofluen),八氧番艇工素(phytoen)及它们对应的衍生物，辅酶QlO/泛醌)，抗氧化剂，例如优选地，(-)_表没食子儿茶素没食子酸酯 (EGCG)，羟基酪醇，和/或橄榄提取物，乳木果油，藻类提取物，可可脂，芦荟提取物，透明质酸和弹性蛋白。化妆品活性成分的优选例子是维生素C(抗坏血酸)和/或其衍生物(例如，抗坏血酸磷酸酯，例如来自DSM Nutritional Products Ltd.的May C (抗坏血酸单磷酸钠))、 维生素A和/或其衍生物(例如，类维生素A衍生物，例如视黄醇棕榈酸酯或视黄醇丙酸酯)、维生素E和/或其衍生物(例如生育酚乙酸酯)、维生素 、维生素B12、生物素、辅酶 Q10、EGCG、羟基酪醇和/或橄榄提取物、乳木果油、藻类提取物、可可脂、芦荟提取物、霍霍巴油、松果菊属植物(echinacea)提取物、弹性蛋白和透明质酸。额外的化妆品活性成分典型地以基于局部组合物总重而言至少0. 001重量％的量被包括进去。通常，使用约0. 001重量％至约30重量％的量的、优选约0. 001重量％至约10重量％的量的额外的化妆品活性试剂。维生素C (抗坏血酸)和/或其衍生物，特别是抗坏血酸磷酸酯，例如May C(抗坏血酸单磷酸钠)，优选以0. 1-5重量％的量，特别是0. 1-2重量％的量用于根据本发明的局部组合物中。乳木果油(shea butter)优选以0. 5-10重量％的量，特别是0. 5-5重量％的量用于根据本发明的局部组合物中。藻类提取物优选以0. 1-10重量％的量，特别是0.5-1重量％的量用于根据本发明的局部组合物中。芦荟提取物优选以0. 1-10重量％的量，特别是0.5-1重量％的量用于根据本发明的局部组合物中。弹性蛋白优选以0.01-10重量％的量，特别是0.01-1重量％的量用于根据本发明的局部组合物中。用于本发明中的维生素E衍生物是生育酚乙酸酯。生育酚乙酸酯可以以大约0.05 重量％至大约25重量％的量，特别是0. 05重量％至5重量％的量存在于局部组合物中。另一感兴趣的维生素E衍生物是生育酚亚油酸酯。生育酚亚油酸酯可以以大约0. 05重量％ 至大约25重量％的量，特别是0. 05重量％至5重量％的量存在于局部组合物中。请验证维生素A和/或其衍生物，特别是类维生素A衍生物，例如视黄醇棕榈酸酯或视黄醇丙酸酯，优选以0.01-5重量％的量，特别是0.01-0. 3重量％的量用于根据本发明的局部组合物中。可可脂优选以0. 5-5重量％的量用于根据本发明的局部组合物中。透明质酸优选与三肽组合用于根据本发明的局部组合物中，因为此类组合能有效保护内层和外层中的皮肤。透明质酸优选以0.1-0. 5重量％的量使用。最优选地，透明质酸作为透明质酸一BT (其例如可从 DSM Nutritional Products Ltd. , Branch Pentapharm 以商品名Hyasol -BT获得)的溶液被包括进去。如无另外指明，符号“重量％ ”总是基于组合物的总重。当然，本领域技术人员将慎重选择上文所述的可选的、额外的一种或多种化合物和/或它们的量，使得预计的一种或多种添加不会或不会实质上对根据本发明的组合固有的有利特性造成有害影响。将被应用的局部组合物的量取决于活性成分在产品中的浓度和想要的化妆品效果。典型的“驻留性”("leave-on")组合物，例如，皮肤护理乳液或功能性组合物，例如通常以每cm2皮肤约0. 5至约2mg的量应用。应用的量通常并不关键，可通过使用更多的组合物、重复应用组合物和/或应用含有更多活性成分的组合物，来实现想要的效果。
在本文中使用时，“‘驻留性’组合物”表示这样的局部组合物其应用到皮肤上之后，并不被故意去除。优选地，其在皮肤上保留至少大约15分钟的时间，更优选地，至少大约30分钟，进一步更优选地，至少大约1小时，最优选地，至少若干小时，例如，多达大约12 小时。在另一实施方式中，本发明还涉及紧致、紧实和/或保湿皮肤的方法，所述方法包括下述步骤将有效量的、根据本发明的局部组合物(以上文给出的所有定义和偏好)应用至需要此类处理的受试者的皮肤。特别地，本发明涉及处理或联合处理皮肤松垂、保持或恢复皮肤柔软度和弹性、促进疤痕愈合以及修复表皮微损伤或降低拉伸痕迹的方法，所述方法包括下述步骤将有效量的局部组合物(以上文给出的所有定义和偏好)应用至需要此类处理的受试者的皮肤。术语处理或联合处理在用于本发明中时还包括预防性使用局部组合物，以预防皮肤松垂、疤痕愈合或拉伸痕迹。在这些方法中，有效量的局部组合物(以上文给出的所有定义和偏好)指获得生理学效果所需的量。生理学效果可通过一次单独的剂量或通过重复剂量实现。施用的剂量当然可根据多种已知因素而变化，例如特定组合物的生理学特征及其施用模式和途径；接受者的年龄、健康和体重；症状的性质和程度；同时进行的处理的种类；处理的频率；以及想要的结果，并且可由本领域技术人员对施用的剂量加以调整。优选地，局部组合物每天至少两次应用，例如，早上一次，晚上一次。提供了下述实施例，以进一步阐述本发明的组合物和效果。这些实施例仅作阐述用，其并非旨在以任何方式限制本发明的范围。实施例1研究三肽衍生物对透明质酸的合成的影响在正常人成纤维细胞(NHF)中测量透明质酸的合成将正常人成纤维细胞(NHF) 接种于96孔细胞培养板(Nimclon)中。培养三天后，将本发明的三肽衍生物加入没有FCS 的培养基中，对细胞再进行三天的培养。使用来自Echelon (Salt Lake City, Utah)的透明质酸检验试剂盒，测量生长培养基中的分泌的透明质酸合成。实施例2研究三肽衍生物对蛋白聚糖“Decorin”的合成的影响在正常人成纤维细胞(NHF)中测量Decorin的合成将正常人成纤维细胞(NHF) 接种于96孔细胞培养板(Nimclon)中。培养三天后，将本发明的三肽衍生物加入没有FCS 的培养基中，对细胞再进行三天的培养。为测量Decorin的合成，进行酶联免疫检验(EIA)。 简言之用4%多聚甲醛(paraformaldehyde)固定细胞，用0. 5Triton_X100进行透化处理 (permeabiliz)，接着用5%脱脂奶对非特定的结合位点加以封闭。为针对Decorin进行染色，将细胞与山羊抗Decorin抗体(R&Dsystems) —起孵育，用兔抗山羊HRP缀合(Pierce) 二抗来检测山羊抗Decorin抗体。加入底物后，在吸光度平板读数仪(Multiskan Ascent, Thermolabsystems)中于 49&ιπι 测量 Decorin 的合成。实施例3研究三肽衍牛物对蛋白聚糖“Lumican”的合成的影响在正常人成纤维细胞(NHF)中测量Lumican的合成将正常人成纤维细胞(NHF) 接种于96孔细胞培养板(Nimclon)中。培养三天后，将本发明的三肽衍生物加入没有FCS 的培养基中，对细胞再进行三天的培养。为测量Lumican的合成，进行酶联免疫检验(EIA)。 简言之用4%多聚甲醛(paraformaldehyde)固定细胞，用0. 5Triton_X100进行透化处理，接着用5%脱脂奶对非特定的结合位点加以封闭。为针对Lumican进行染色，将细胞与山羊抗 Lumican (L-20)抗体(Santa Cruz Biotechnology, sc-27718) —起孵育，用山羊抗小鼠HRP缀合(Pierce) 二抗来检测山羊抗Lumican(L-20)抗体。加入底物后，在吸光度平板读数仪(Multiskan Ascent，Thermolabsystems)中于 49&im 测量 Lumican 的合成。相对于由未经式(I)的三肽衍生物处理的细胞构成的对照(被设定为100% )来评估结果。TFA表示三肽衍生物以三氟乙酸盐的形式存在。n. t.=未测试结果报道于下表中表 权利要求
1.通式(I)的三肽衍生物或其皮肤可耐受的盐用于紧致、紧实和/或保湿皮肤的用途，R1-A-B-C-R2(I)其中Rl表示棕榈酰或十四烷基氨基羰基；R2表示OH或NH-十六烷基；A表示精氨酰、赖氨酰、鸟氨酰或2，4- 二氨基丁酰；B表示缬氨酰、亮氨酰、异亮氨酰或正缬氨酰，以及C表示精氨酰、赖氨酰或2，4- 二氨基丁酰，其中所述三肽衍生物选自 Palm-Lys-Val-Lys-OH、Palm-Orn-Val-Lys-OH, Palm-Lys-Leu-Lys—OH、Palm-Lys-Ile-Dab—OH、Palm-Lys-Nva-Dab-OHPalm-Lys-Leu-D ab-OH、Palm-Lys-Val-Dab-NH-十六烧基、十四烧基-NH-C (0) -Dab-Val-Dab-OH,十四烷基-NH-C (0) -Lys-Ile-Dab-OH、十四烧基-NH-C (0)-Arg-Val-Arg-OH。
2.根据权利要求1的用途，用于提紧皮肤、预防或减少皮肤松垂、保持或恢复皮肤的柔软度和弹性、促进疤痕愈合、修复表皮微损伤和/或降低拉伸痕迹。
3.根据权利要求1或2的用途，其中A和C可以是相同的或不同的，并且具有赖氨酰或 2，4-二氨基丁酰的定义。
4.根据权利要求1-3中任意一项的用途，其中R2代表0H。
5.根据权利要求1-4中任意一项的用途，其中所述三肽衍生物是三氟乙酸盐形式的十四烷基-NH-C (0) -Dab-Val-Dab-OH0
6.根据权利要求1-5中任意一项的用途，其中所述三肽衍生物中的所有氨基酸都是 L-构型的。
7.根据权利要求1-6中任意一项的用途，其中有效量的至少一种所述三肽衍生物被包含进还包含化妆品可接受的载体的局部组合物中。
8.根据权利要求7的用途，其中所述局部组合物还包含0.1至0.5重量％的透明质酸。
9.紧致、紧实和/或保湿皮肤的方法，所述方法包括下述步骤将有效量的下述局部组合物应用至需要此类处理的受试者的皮肤，所述局部组合物包含有效量的权利要求1和 3-6中任意一项定义的三肽衍生物和化妆品可接受的载体。
10.根据权利要求9的方法，所述方法用于处理或联合处理皮肤松垂、保持或恢复皮肤柔软度和弹性、促进疤痕愈合、修复表皮微损伤或降低拉伸痕迹。
11.刺激成纤维细胞和/或角化细胞对含有D-葡糖胺和/或N-乙酰-D-葡糖胺残基的葡糖胺聚糖的合成和/或对蛋白聚糖的合成的方法，所述方法包括向需要此类处理的个体施用有效量的至少一种对应于下式(I)的三肽衍生物或其皮肤可耐受的盐R1-A-B-C-R2(I)，其中Rl是棕榈酰或十四烷基氨基羰基；R2是OH或NH-十六烷基；A是精氨酰、赖氨酰、鸟氨酰或2，4-二氨基丁酰；B是缬氨酰、亮氨酰、异亮氨酰或正缬氨酰，以及，C是精氨酰、赖氨酰或2，4-二氨基丁酰。
12.根据权利要求11的方法，所述方法包括刺激对透明质酸的合成和/或对蛋白聚糖 Decorin 禾口 / 或 Lumican 的合成。
全文摘要
本发明涉及三肽衍生物用于紧致、紧实和/或保湿皮肤的用途。此外，本发明涉及刺激成纤维细胞和/或角化细胞对含有D-葡糖胺和/或N-乙酰-D-葡糖胺的葡糖胺聚糖的合成和/或对蛋白聚糖的合成的方法，例如，刺激透明质酸的合成和/或蛋白聚糖Decorin和/或Lumican的合成。
文档编号A61K8/64GK102355885SQ201080012521
公开日2012年2月15日 申请日期2010年3月16日 优先权日2009年3月16日
发明者多米尼克·伊菲尔德, 彼得·维克斯特罗姆, 胡戈·齐格勒, 艾克·沐勒, 里莫·格拉优博, 马克·海德尔 申请人:帝斯曼知识产权资产管理有限公司