肺炎球菌疫苗及其用途的制作方法

专利名称：肺炎球菌疫苗及其用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及新的肺炎球菌疫苗。本发明还涉及使用所述新的肺炎球菌疫苗给对象、特别是免疫功能受损对象进行抗肺炎球菌感染的疫苗接种。
背景技术：
肺炎球菌性疾病是全世界的主要公共健康问题。由肺炎球菌所引起的感染是全世界发病率和死亡率的主要起因。肺炎、发热性菌血症和脑膜炎是侵入性肺炎球菌性疾病的最常见表现形式，而呼吸道内的细菌扩散可导致中耳感染、窦炎或复发性支气管炎。与侵入性疾病相比，非侵入性的表现形式通常不那么严重，但是却更相当地多见。虽然肺炎球菌性疾病很重要，关于疾病负担(disease burden)的信息仍很缺乏， 特别是对于发展中国家。这部分地是由于在肺炎的情况中获得病因诊断的固有问题。然而， 基于可用的数据，急性呼吸道感染每年估计使二百六十万的5岁以下儿童死亡。肺炎球菌引起超过一百万的此类死亡，其中大部分发生在发展中国家，在发展中国家肺炎球菌可能是婴儿早期最重要的病原体。在欧洲和美国，肺炎球菌性肺炎是最常见的社区获得性细菌性肺炎，估计每年在100000成人中影响大约100人。发热性菌血症和脑膜炎的相应数字分别为每100000中15-19人和每100000中1_2人。这些表现形式中一或多种的风险在婴儿和老年人以及免疫受损的任何年龄的人群中要高得多。即使在经济发达的地区，侵入性肺炎球菌性疾病也带来高死亡率；对于患有肺炎球菌性肺炎的成人死亡率平均为10% -20%, 而其在高风险群体中可超过50%。肺炎迄今为止是全世界肺炎球菌性死亡的最常见原因。肺炎球菌性疾病的病原物质，肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae，肺炎球菌)是革兰氏阳性的包膜球菌，被多糖荚膜所包围。此荚膜的组成中的差异使得可以在大约90种荚膜类型之间进行血清学区分，其中某些经常与肺炎球菌性疾病相关，其它的则很少相关。侵入性肺炎球菌感染包括肺炎、脑膜炎和发热性菌血症；常见的非侵入性表现形式是中耳炎、窦炎和支气管炎。肺炎球菌对于重要的抗微生物剂如青霉素、头孢菌素和大环内酯类的抗性是严重的且快速增长的世界性问题。与严重肺炎球菌性疾病升高的风险相关的病症包括年龄极端(婴儿、老年人)和由于任何原因而免疫功能受损，包括但不限于HIV感染、其它慢性病毒感染、镰刀状细胞贫血、糖尿病、癌症和癌症治疗、吸烟、慢性器官衰竭、器官移植和免疫阻抑治疗。进来对重要抗生素的普遍微生物抗性的发展以及免疫功能受损人群数目的增加突出了对更有效的肺炎球菌疫苗的迫切需求。目前疫苗接种的一些缺点包括需要若干次加强以实现保护、保护性抗体产生中的延迟、疫苗无应答者(non-responder)的普及(这对于免疫受损的个体尤其是个问题)、 抗原和疫苗生产的成本(这在新的缀合的肺炎球菌疫苗的开发中是非常显著的限制)、具有低亲和性的弱保护性抗体、抗体效价随时间降低。本发明的新肺炎球菌疫苗的目标是至少部分地克服某些此类缺点。特别是涉及给免疫功能受损对象进行疫苗接种以抗肺炎球菌感染。
发明概述在第一方面，本发明涉及新的肺炎球菌疫苗，其中所述疫苗包含一或多种缀合至载体蛋白的肺炎球菌(pneumoccal)多糖抗原作为抗原以及Toll-样受体9 (TLR9)的激动剂作为佐剂。在另外的方面，本发明涉及包含一或多种缀合至载体蛋白的肺炎球菌多糖抗原作为抗原以及TLR-9激动剂作为佐剂的肺炎球菌疫苗用于给免疫功能受损对象进行疫苗接种的用途。在一方面中，本发明涉及本文所公开的任何肺炎球菌疫苗，其用于给免疫功能受损对象进行疫苗接种，优选本文公开的任何免疫功能受损对象。在另外的方面，本发明涉及本文所公开的任何肺炎球菌疫苗用于给免疫功能受损对象、优选本文所公开的任何免疫功能受损对象进行疫苗接种的用途。在另外的方面，本发明涉及本文所公开的任何疫苗用于对肺炎链球菌感染所引起的疾病进行预防和治疗，优选在免疫功能受损对象中进行。在另外的方面，本发明涉及针对肺炎链球菌感染所引起的疾病而免疫对象、优选是本文所公开的任何免疫功能受损对象的方法，包括给所述对象施用免疫保护性剂量的本文所公开的任何疫苗。在另外的方面，本发明涉及本文所公开的任何疫苗在制备药物中的用途，所述药物用于预防和治疗肺炎链球菌感染所引起的疾病，优选在免疫功能受损对象中进行。在另外的方面，本发明涉及本文所公开的任何肺炎球菌疫苗以及本文所公开的至少一种TLR-9激动剂。在另外的方面，本发明涉及本文所公开的任何肺炎球菌疫苗以及本文所公开的至少一种TLR-9激动剂，其用于对本文所公开的任何免疫功能受损对象进行疫苗接种。 本发明的Tol 1-样受体9激动剂(TLR-9激动剂)在本发明的实施方案中，用于本发明的TLR-9激动剂是CpG寡核苷酸。如本文所用的CpG寡核苷酸是指免疫刺激性CpG寡脱氧核苷酸(CpG 0DN)，因此除非另有指明，这些术语可互换使用。免疫刺激性CpG寡脱氧核苷酸含有一或多个免疫刺激性CpG基序(其是未甲基化的胞嘧啶-鸟嘌呤二核苷酸)，任选地存在于某些优选碱基背景之中。所述CpG 免疫刺激性基序的甲基化状况通常是指二核苷酸中的胞嘧啶残基。含有至少一个未甲基化的CpG 二核苷酸的免疫刺激性寡核苷酸是含有5'未甲基化的胞嘧啶通过磷酸键连接3' 鸟嘌呤的寡核苷酸，并且其通过结合至Toll-样受体9 (TLR-9)激活免疫系统。在另一实施方案中，免疫刺激性寡核苷酸可含有一或多个甲基化的CpG 二核苷酸，其将通过TLR9激活免疫系统但却不像该一或多个CpG基序未甲基化时那么强。CpG CpG免疫刺激性寡核苷酸可包含一或多个回文序列，所述回文序列继而可包围所述CpG 二核苷酸。CpG寡核苷酸已在多个授权的专利、公开的专利申请、和其它出版物中描述，包括美国专利6，194，388 ； 6，207，646 ；6，214，806 ；6，218，371 ；6，239，116 和 6，339，068。已鉴别出不同类的CpG免疫刺激性寡核苷酸。这些是指A、B、C和P类，并在下文中有更详细描述。本发明的方法包括使用这些不同类的CpG免疫刺激性寡核苷酸。任何所述类可以经E修饰，这增强了其效力。E修饰可以是卤素取代5'端核苷酸； 此类取代的例子包括但不限于溴-尿苷或碘-尿苷取代。E修饰还可以包括对5'端核苷酸的乙基-尿苷取代。“A类” CpG免疫刺激性寡核苷酸功能性的特征在于从浆细胞样树突细胞(pDC)诱导高水平的干扰素-α (IFN-α)的能力并且诱导NK细胞激活，却对B细胞激活具有最小的影响。结构上来说，该类通常在5'和3'末端具有稳定化的聚-G序列。其也具有含回文磷酸二酯CpG 二核苷酸的至少6个核苷酸的序列，例如但并非必然地，其含有下列六聚体回文序列之一 GACGTC、AGCGCT或AACGTT，由Yamamoto及其同事所描述。Yamamoto S et al. J. Immunol 148 :4072-6 (1992)。A类CpG免疫刺激性寡核苷酸以及该类的示例性序列已在 U. S. Non-Provisional Patent Application Serial No. 09/672, 126 以及公开的 PCT 申请PCT/US00/26527(W0 01/22990)中描述，二者均提交于2000年9月27日。在一个实施方案中，本发明的“A类” CpG寡核苷酸具有如下核酸序列 5' GGGGACGACGTCGTGGGGGGG 3' (SEQ ID NO :1)。一些A-类寡核苷酸的非限制性例子包括5' G*G*G_G_A_C_G_A_C_G_T_C_G_T_G_ G*G*G*G*G*G 3' (SEQ ID NO :2)；其中*是指硫代磷酸酯键而_是指磷酸二酯键。“B类” CpG免疫刺激性寡核苷酸功能性的特征在于激活B细胞和pDC的能力， 除了在诱导IFN-α和NK细胞激活中相对较弱。结构上来说，该类通常可以用硫代磷酸酯连接(linkage)来完全稳定化，但是其也可以具有一或多个磷酸二酯连接，优选在所述 CpG基序的胞嘧啶和鸟嘌呤之间，在这种情况中该分子被称为是半软的(semi-soft)。在一个实施方案中，用于本发明的TLR-9激动剂是至少由下式表示的B类CpG寡核苷酸 5' X1X2CGX3X4Y，其中XI、X2、X3和X4是核苷酸。在一个实施方案中，\是腺嘌呤、鸟嘌呤或胸腺嘧啶。在另一实施方案中，&是胞嘧啶、腺嘌呤或胸腺嘧啶。在另一实施方案中，用于本发明的TLR-9激动剂是至少由下式表示的B类CpG寡核苷酸5' N1X1X2CGX3X4N2S'，其中X1^j3和&是核苷酸而N是任何核苷酸并且N1和N2 是每个由约0-25个N所组成的核酸序列。在一个实施方案中，X1X2是选自下组的二核苷酸 GpT、GpG、GpA、ApA、ApT, ApG, CpT, CpA、CpG, TpA、TpT 和 TpG ；并且 X3X4 是选自下组的二核苷酸TpT、ApT、TpG、ApG、CpG、TpC、ApC、CpC、TpA、ApA 和 CpA。优选 X1X2 是 GpA 或 GpT 并且Χ3Χ4是ΤρΤ。在另外的实施方案中，X1或\或者二者均为嘌呤并且或&或者二者均为嘧啶或者W是GpA并且\或&或者二者均为嘧啶。在一个优选的实施方案中，X1X2是选自下组的二核苷酸TpA、ApA、ApC、ApG和GpG。在另一个实施方案中，X3)(4是选自下组的二核苷酸TpT、TpA、TpG、ApA、ApG、GpA和CpA。在另一实施方案中，X1X2是选自下组的二核苷酸TpT、TpG、ApT, GpC, CpC, CpT, TpC、GpT和CpG ；X3是选自下组的核苷酸=A和T，并且 X4核苷酸，但是当X1X2是TpC、GpT或CpG时，X3X4不是TpC、ApT或ApC0在另一个优选实施方案中，所述CpG寡核苷酸具有序列5' TCN1TX1X2CGX3X4 3'。 在一些实施方案中，本发明的CpG寡核苷酸包括选自下组的:GpT、GpG、GpA和ApA以及选自下组的X3X4 :TpT、CpT和TpC。本发明的B类CpG寡核苷酸序列是以上所广泛描述的那些以及在如下公开的那些公开的PCT专利申请PCT/US95/01570和PCT/US97/19791，以及美国专利6，194，388、 6，207，646,6, 214，806,6, 218，371,6, 239，116 和 6，339，068。示例性的序列包括但不限于后者的申请和专利中所公开的那些。在一个实施方案中，本发明的“B类” CpG寡核苷酸具有下述核酸序列
5'TCGTCGTTTTTCGGTGCTTTT 3‘(SEQ ID NO :3)、或
5'TCGTCGTTTTTCGGTCGTTTT 3‘(SEQ ID NO :4)、或
5'TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT3' (SEQ ID NO5)、或
5'TCGTCGTTTCGTCGTTTTGTCGTT3' (SEQ ID NO6)、或
5'TCGTCGTTTTGTCGTTTTTTTCGA3' (SEQ ID NO7)。
在任何这些序列中，所有的连接可以都是硫代磷酸丨酯键。在另--实施方案中，在任
何这些序列中，一或多个连接可以是磷酸二酯，优选在所述CpG基序的"C"和"G"之间而使之成为半软的CpG寡核苷酸。在任何这些序列中，乙基-尿苷或卤素可以取代5' T； 卤素取代的例子包括但不限于溴-尿苷或碘-尿苷取代。一些B-类寡核苷酸的非限制性例子包括5'3‘ (SEQ ID NO :8)、或5'3‘ (SEQ ID NO :9)、或5'3‘ (SEQ ID NO 10)、 或5'3‘ (SEQ ID NO 11)、 或5 ‘ T*C*G*T*C*G*T*T*T*T*G*T*C*G*T*T*T*T*T*T*T*C*G*A 3 ‘ (SEQ ID NO 12)‘其中*是指硫代磷酸酯键。“C类”CpG免疫刺激性寡核苷酸功能性的特征在于激活B细胞和NK细胞以及诱导 IFN-α的能力。结构上来说，该类通常包括具有一或多个B类-类型免疫刺激性CpG基序的区域、以及富含GC的回文序列或者临近-回文序列的区域使得该分子形成二级(例如茎环)或三级(例如二聚体)类型的结构。一些此类寡核苷酸具有传统的“刺激性”CpG序列和“富含GC”或“B细胞中和”基序。这些组合基序寡核苷酸具有免疫刺激作用，其介于与传统的B类CpG寡核苷酸相关的作用(即B细胞激活和树突细胞(DC)激活的强诱导)和与A 类CpG ODN相关的作用(S卩IFN-α和NK细胞激活的强诱导但却对B细胞和DC激活有相对弱的诱导)之间。Krieg AM et al. (1995)Nature 374:546-9 ；Ballas ZK et al. (1996) J Immunol 157 :1840-5 ；Yamamoto S et al. (1992)J Immunol 148:4072-6。C类的组合基序免疫刺激性寡核苷酸可以具有完全稳定化的(例如全都是硫代磷酸酯)、嵌合的(磷酸二酯中心区域)或半软的(例如CpG基序内磷酸二酯)骨架。该类已在美国专利申请US 10/224,523 (2002年8月19日提交)中描述。C类CpG寡核苷酸的一个刺激性结构域或基序由下式所定义5' X1DCGHX2 3'。 D是除了 C以外的核苷酸。C是胞嘧啶。G是鸟嘌呤。H是除了 G以外的核苷酸。&和)(2 是0-10核苷酸长的任何核酸序列。&可包括CG，在这种情况下优选在紧接此CG之前有T。 在一些实施方案中，DCG是TCG。&优选长度为0-6个核苷酸。在一些实施方案中，&不含有任何聚-G或聚-A基序。在另外的实施方案中，所述免疫刺激性寡核苷酸在5'末端或在3'末端具有聚-T序列。如本文所用，“聚-A”或“聚-T”分别是指4个或更多个连续的 A或T的延伸，例如5' AAAA 3'或5' TTTT 3'。如本文所用，“聚-G末端”是指4个或更多个连续的G的延伸，例如5' GGGG 3'，发生在核酸的5'末端或3'末端。如本文所用，“聚-G寡核苷酸”是指具有式5' X1X2GGGX3X4S'的寡核苷酸，其中&、&、&和&是核苷酸并且优选\和\的至少一个是G。B细胞刺激性结构域按照此式的一些优选设计包括 TTTTTCG、TCG、TTCG、TTTCG、TTTTCG、TCGT、TTCGT、TTTCGT、TCGTCGT。C类CpG寡核苷酸的第二个基序被称为P或N并且位于紧接&的5'处或紧接\ 的3'处。N是B细胞中和序列，其起始于CGG三核苷酸并且长度至少为10个核苷酸。B细胞中和基序包括至少一个CpG序列，其中该CG之前为C或之后为G (Krieg AM et al. (1998) Proc Natl Acad Sd USA 95 :12631-12636)或者是含 CG 的 DNA 序列(其中该 CG 的 C 被甲基化)。中和基序或序列在存在于非刺激性基序中时具有某种程度的免疫刺激性能力，但当存在于其它的免疫刺激性基序的背景中时会降低其它基序的免疫刺激性潜力。P是富含GC的回文序列，含有至少10个核苷酸长的序列。如本文所用，“回文结构”和等价的“回文序列”是指倒转重复序列，即如 ABCDEE' D' C' B' A'的序列，其中A和A' ,B^PB'等是能够形成通常的Watson-Crick 碱基对的碱基。如本文所用，“富含GC回文序列”是指具有至少三分之二 G和C的碱基组成的回文序列。在一些实施方案中，富含GC的结构域优选是在“B细胞刺激性结构域”的3'处。在 10个碱基长的富含GC回文序列的情况中，该回文序列因而含有至少8个G和C。在12个碱基长的富含GC回文序列的情况中，该回文序列也含有至少8个G和C。在14-聚体的富含GC回文序列的情况中，该回文序列的至少10个碱基是G和C。在一些实施方案中，所述富含GC的回文序列完全由G和C构成。在一些实施方案中，所述富含GC的回文序列具有至少81% G和C的碱基组成。在此类的10个碱基长的富含GC回文序列的情况下，该回文序列因而完全由G和C构成。在此类的12个碱基长的富含GC回文序列的情况下，优选该回文序列的至少10个碱基(83% ) 是G和C。在一些优选的实施方案中，12个碱基长的富含GC回文序列完全由G和C所构成。 在14-聚体的富含GC回文序列的情况中，该回文序列的至少12个碱基(86%)是G和C。 在一些优选的实施方案中，14个碱基长的富含GC回文序列完全由G和C所构成。富含GC 回文序列的C可以是未甲基化的或者它们可以是甲基化的。通常此结构域具有至少3个C和G，更优选每种4个，更优选每种5个或更多。此结构域中的G和C的数目不必是相同的。优选排列所述G和C从而它们能够形成自身互补双链体或回文序列，如CCGCGCGG。这可以由A或T中断，但是优选该自身互补性至少部分地保留，例如在基序CGACGTTCGTCG或CGGCGCCGTGCCG中那样。当互补性未保留时，优选非互补的碱基对是TG。在优选的实施方案中，不是该回文序列的部分不超过3个连续碱基，优选不超过2个，最优选只有1个。在一些实施方案中，所述富含GC回文序列包括至少一个 CGG三聚体、至少一个CCG三聚体、或至少一个CGCG四聚体。在另外的实施方案中，所述富含 GC 回文序列不是 CCCCCCGGGGGG 或 GGGGGGCCCCCC、CCCCCGGGGG 或 GGGGGCCCCC。所述富含GC区域的至少一个G可以被肌苷(I)所取代。在一些实施方案中，P包括超过一个的I。在某些实施方案中，所述免疫刺激性寡核苷酸具有下式之一 5' NX1DCGHX2 3 ‘、5 ‘ X1DCGHX2N 3 ‘、5 ‘ PX1DCGHX2 3 ‘、5 ‘ X1DCGHX2P 3 ‘、5 ‘ X1DCGHX2PX3 3 ‘、5' X1DCGHPX3 3'、5' DCGHX2PX3 3'、5' TCGHX2PX3 3'、5' DCGHPX3 3'或 5' DCGHP3'。本发明提供了其它由式5' N1PyGN2P 3'所定义的免疫刺激性寡核苷酸。N1是任何1-6个核苷酸长的序列。Py是嘧啶。G是鸟嘌呤。N2是任何0-30个核苷酸长的序列。P 是含有至少10个核苷酸长的序列的富含GC回文序列。N1和N2可含有超过50%的嘧啶，更优选超过50%的T。N1可以包括CG，在这种情况下优选在紧接此CG之前有T。在一些实施方案中，N1PyG是TCG，最优选TCGN2，其中N2不是G0N1PyGN2P可以包括一或多个肌苷(I)核苷酸。N1中的C或G可以被肌苷所代替， 但是CpI优选于IpG。对于肌苷取代如IpG，最佳活性可以通过使用“半软的”或嵌合的骨架来实现，其中IG或CI之间的连接是磷酸二酯。m可以包括至少一个Cl、TCI、IG或TIG基序。在某些实施方案中，N1PyGN2是选下组的序列TTTTTCG、TCG、TTCG、TTTCG、TTTTCG、 TCGT、TTCGT、TTTCGT 和 TCGTCGT。在一个实施方案中，本发明的“C类” CpG寡核苷酸具有如下核酸序列5' TCGCGTCGTTCGGCGCGCGCCG 3‘ (SEQ ID NO 13)，或5' TCGTCGACGTTCGGCGCGCGCCG 3‘ (SEQ ID NO 14)，或5' TCGGACGTTCGGCGCGCGCCG 3‘ (SEQ ID NO 15)，或5' TCGGACGTTCGGCGCGCCG 3' (SEQ ID NO 16)，或5' TCGCGTCGTTCGGCGCGCCG 3‘ (SEQ ID NO 17)，或5' TCGACGTTCGGCGCGCGCCG 3‘ (SEQ ID NO 18)，或5' TCGACGTTCGGCGCGCCG 3' (SEQ ID NO 19)，或5' TCGCGTCGTTCGGCGCCG 3' (SEQ ID NO :20)，或5' TCGCGACGTTCGGCGCGCGCCG 3‘ (SEQ ID NO :21)，或5' TCGTCGTTTTCGGCGCGCGCCG 3‘ (SEQ ID NO :22)，或5' TCGTCGTTTTCGGCGGCCGCCG 3‘ (SEQ ID NO :23)，或5' TCGTCGTTTTACGGCGCCGTGCCG 3‘ (SEQ ID NO :24)或5' TCGTCGTTTTCGGCGCGCGCCGT 3' (SEQ ID NO :25)。在任何这些序列中，所有的连接可以都是硫代磷酸酯键。在另一实施方案中，在任何这些序列中，一或多个连接可以是磷酸二酯，优选在所述CpG基序的“C”和“G”之间，使之成为半软的CpG寡核苷酸。C-类寡核苷酸的一些非限制性例子包括5' T*C_G*C_G*T*C_G*T*T*C_G*G*C*G*C_G*C*G*C*C*G 3‘ (SEQ ID NO :26)，或5' T*C_G*T*C_G*A*C_G*T*T*C_G*G*C*G*C_G*C*G*C*C*G 3' (SEQ ID NO :27)，或5' T*C_G*G*A*C_G*T*T*C_G*G*C*G*C_G*C*G*C*C*G 3‘ (SEQ ID NO :28)，或5' T*C_G*G*A*C_G*T*T*C_G*G*C*G*C*G*C*C*G 3‘ (SEQ ID NO :29)，或5' T*C_G*C_G*T*C_G*T*T*C_G*G*C*G*C*G*C*C*G 3‘ (SEQ ID NO :30)，或5'3‘ (SEQ ID NO :31)，或5' T*C_G*A*C_G*T*T*C_G*G*C*G*C*G*C*C*G 3‘ (SEQ ID NO :32)，或
5' T*C_G*C_G*T*C_G*T*T*C_G*G*C*G*C*C*G 3‘ (SEQ ID NO :33)，或5' T*C_G*C_G*A*C_G*T*T*C_G*G*C*G*C_G*C*G*C*C*G 3‘ (SEQ ID NO :34)，或5' T*C*G*T*C*G*T*T*T*T*C*G*G*C*G*C*G*C*G*C*C*G 3‘ (SEQ ID NO 35)，或5' T*C*G*T*C*G*T*T*T*T*C*G*G*C*G*G*C*C*G*C*C*G 3‘ (SEQ ID NO 36)，或5' T*OG*T*C_G*T*T*T*T*A*C_G*G*C*G*OC_G*T*G*OOG 3‘ (SEQ ID NO 37)， 或5'3‘ (SEQ ID NO 38)其中*是指硫代磷酸酯键而_是指磷酸二酯键。在任何这些序列中，乙基-尿苷或卤素可以取代5' T ；卤素取代的例子包括但不限于溴-尿苷或碘-尿苷取代。“P类” CpG免疫刺激性寡核苷酸已经在W02007/095316中描述并且特征在于其含有形成双链体的区域，如例如在5'和3'末端或其附近的完全或者不完全的回文序列，使得它们有潜力形成更加高度有序的结构如连环体(concatamer)。这些称作P-类寡核苷酸的寡核苷酸在某些情况下具有能力诱导比C-类高得多的水平的IFN-α分泌。P-类寡核苷酸具有能力自发地在体外和/或在体内自组装成连环体。对于这些分子的运作方法不局限于任何特定的理论，一种潜在的假说是此种特性赋予了 P-类寡核苷酸在某些免疫细胞内更加高度地交联TLR9的能力，与前述类别的CpG寡核苷酸相比，诱导了不同的免疫激活模式。在一个实施方案中，用于本发明的TLR-9激动剂是含有5 ‘ TLR激活结构域和至少两个回文区域的P类CpG寡核苷酸，一个回文区域是长度至少6个核苷酸的5 ‘回文区域并且直接或通过间隔区连接至长度至少8个核苷酸的3'回文区域，其中该寡核苷酸包括至少一个YpR 二核苷酸。在一个实施方案中，所述寡核苷酸不是T*C_G*T*C_G*A*C_G*T*T*C_ G*G*OG*C_G*OG*OC*G (SEQ ID NO :27)。在一个实施方案中，P类CpG寡核苷酸包括至少一个未甲基化的CpG 二核苷酸。在另一实施方案中，TLR激活结构域是TCG、TTCG、TTTCG、 TYpR, TTYpR, TTTYpR, UCG、UUCG, UUUCG, TTT 或 TTTT。在另一个实施方案中，TLR 激活结构域在5'回文区域内。在另一实施方案中，TLR激活结构域紧接在5'回文区域的5'处。 在另一个实施方案中，5'回文区域长度至少是8个核苷酸。在另一实施方案中，3'回文区域长度至少是10个核苷酸。在另一实施方案中，5'回文区域长度至少是10个核苷酸。在另一个实施方案中，3'回文区域包括未甲基化的CpG 二核苷酸。在另一实施方案中，3'回文区域包括两个未甲基化的CpG 二核苷酸。在另一实施方案中，5'回文区域包括未甲基化的CpG 二核苷酸。在另一个实施方案中，5'回文区域包括两个未甲基化的CpG 二核苷酸。 在另一实施方案中，5'和3'回文区域具有至少25的双链体稳定性值(duplex stability value)。在另一实施方案中，5'和3'回文区域具有至少30的双链体稳定性值。在另一实施方案中，5'和3'回文区域具有至少35的双链体稳定性值。在另一实施方案中，5' 和3'回文区域具有至少40的双链体稳定性值。在另一实施方案中，5'和3'回文区域具有至少45的双链体稳定性值。在另一实施方案中，5'和3'回文区域具有至少50的双链体稳定性值。在另一实施方案中，5'和3'回文区域具有至少55的双链体稳定性值。在另一实施方案中，5'和3'回文区域具有至少60的双链体稳定性值。在另一实施方案中， 5'和3'回文区域具有至少65的双链体稳定性值。
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在一个实施方案中，两个回文区域直接相连。在另一实施方案中，两个回文区域经由3' -3'连接相连。在另一实施方案中，两个回文区域重叠一个核苷酸。在另一个实施方案中，两个回文区域重叠两个核苷酸。在另一实施方案中，两个回文区域不重叠。在另一实施方案中，两个回文区域由间隔区连接。在一个实施方案中，所述间隔区是具有1-50个核苷酸长度的核酸。在另一实施方案中，所述间隔区是具有1个核苷酸长度的核酸。在另一实施方案中，所述间隔区是非核苷酸间隔区。在一个实施方案中，非核苷酸间隔区是D-间隔区。在另一实施方案中，非核苷酸间隔区是接头。在一个实施方案中，所述寡核苷酸具有式5' XP1SP2T 3'，其中X是TLR激活结构域，P1是回文序列，S是间隔区，P2是回文序列， T是0-100核苷酸长度的3'尾。在一个实施方案中，X是TCG、TTCG或TTTCG。在另一实施方案中，T长度是5-50个核苷酸。在另一个实施方案中，T长度是5-10个核苷酸。在一个实施方案中，S是具有1-50个核苷酸长度的核酸。在另一实施方案中，S是具有1个核苷酸长度的核酸。在另一实施方案中，S是非核苷酸间隔区。在一个实施方案中，非核苷酸间隔区是D-间隔区。在另一实施方案中，非核苷酸间隔区是接头。在另一实施方案中，所述寡核苷酸不是反义寡核苷酸或核酶。在一个实施方案中，P1是富含A和T的。在另一实施方案中，P1包括至少4个T。在另一实施方案中，P2是完全的回文序列。在另一实施方案中， P2是富含G-C的。在另一个实施方案中，P2是CGGCGCXACGCCG，其中&是T或不存在。在一个实施方案中，所述寡核苷酸包括至少一个硫代磷酸酯连接。在另一实施方案中，所述寡核苷酸的所有核苷酸间的连接是硫代磷酸酯连接。在另一实施方案中，所述寡核苷酸包括至少一个磷酸二酯样连接。在另一实施方案中，所述磷酸二酯样连接是磷酸二酯连接。在另一实施方案中，亲脂性基团缀合至所述寡核苷酸。在一个实施方案中，所述亲脂性基团是胆固醇。在一个实施方案中，用于本发明的TLR-9激动剂是具有5' TLR激活结构域和至少两个含互补性的区域的P类CpG寡核苷酸，所述两个含互补性的区域即5'和3'含互补性的区域，每个含互补性的区域长度为至少8个核苷酸并且直接或者通过间隔区互相连接，其中所述寡核苷酸包括至少一个嘧啶-嘌呤(YpR) 二核苷酸，并且其中至少一个含互补性的区域不是完全的回文序列。在一个实施方案中，所述寡核苷酸包括至少一个未甲基化的CpG 二核苷酸。在另一实施方案中，TLR激活结构域是TCG、TTCG, TTTCG, TYpR, TTYpR, 1"1"^ 1 、肌6、皿06，、而肌6、1"17或1717。在另一实施方案中，TLR激活结构域在5 ‘含互补性的区域内。在另一实施方案中，TLR激活结构域紧接在5'含互补性的区域的5'处。在另一实施方案中，3'含互补性的区域长度为至少10个核苷酸。在另一个实施方案中，5'含互补性的区域长度为至少10个核苷酸。在一个实施方案中，3'含互补性的区域包括未甲基化的CpG 二核苷酸。在另一实施方案中，3'含互补性的区域包括两个未甲基化的CpG 二核苷酸。在另一个实施方案中，5'含互补性的区域包括未甲基化的CpG 二核苷酸。在另一实施方案中，5'含互补性的区域包括两个未甲基化的CpG 二核苷酸。在另一实施方案中， 含互补性的区域包括至少一个核苷酸类似物。在另一实施方案中，含互补性的区域形成分子内双链体。在一个实施方案中，分子内双链体包括至少一个非-Watson Crick碱基对。在另一实施方案中，非-Watson Crick碱基对是G-T、G-A、G-G或C-A。在一个实施方案中，含互补性的区域形成分子间双链体。在另一实施方案中，至少一个分子间双链体包括至少一个非-Watson Crick碱基对。在另一实施方案中，非-Watson Crick碱基对是G-T、G-A、G-G或C-A。在另一个实施方案中，含互补性的区域含有错配。在另一个实施方案中，含互补性的区域含有两个错配。在另一实施方案中，含互补性的区域含有插入核苷酸(intervening nucleotide)。在另一实施方案中，含互补性的区域含有两个插入核苷酸。在一个实施方案中，5'和3'含互补性的区域具有至少25的双链体稳定性值。在另一实施方案中，5'和3'含互补性的区域具有至少30的双链体稳定性值。在另一实施方案中，5'和3'含互补性的区域具有至少35的双链体稳定性值。在另一实施方案中，所述含互补性的区域具有至少40的双链体稳定性值。在另一实施方案中，所述含互补性的区域具有至少45的双链体稳定性值。在另一实施方案中，所述含互补性的区域具有至少50 的双链体稳定性值。在另一实施方案中，所述含互补性的区域具有至少55的双链体稳定性值。在另一实施方案中，所述含互补性的区域具有至少60的双链体稳定性值。在另一实施方案中，所述含互补性的区域具有至少65的双链体稳定性值。在另一实施方案中，两个含互补性的区域直接相连。在另一实施方案中，两个回文区域经由3' -3'连接相连。在另一个实施方案中，两个含互补性的区域重叠一个核苷酸。 在另一实施方案中，两个含互补性的区域重叠两个核苷酸。在另一实施方案中，两个含互补性的区域不重叠。在另一实施方案中，两个含互补性的区域由间隔区连接。在另一实施方案中，间隔区是具有1-50个核苷酸长度的核酸。在另一实施方案中，间隔区是具有1个核苷酸长度的核酸。在一个实施方案中，间隔区是非核苷酸间隔区。在另一实施方案中，非核苷酸间隔区是D-间隔区。在另一个实施方案中，非核苷酸间隔区是接头。在一个实施方案中，P-类寡核苷酸具有式5' XNSPT 3'，其中X是TLR激活结构域，N是不完全的回文序列，P是回文序列，S是间隔区，T是长度为0-100个核苷酸的3' 尾。在另一实施方案中，X是TCG、TTCG或TTTCG。在另一实施方案中，T长度为5_50个核苷酸。在另一实施方案中，T长度为5-10个核苷酸。在另一实施方案中，S是具有1-50个核苷酸长度的核酸。在另一实施方案中，S是具有1个核苷酸长度的核酸。在另一实施方案中，S是非核苷酸间隔区。在另一实施方案中，非核苷酸间隔区是D-间隔区。在另一实施方案中，非核苷酸间隔区是接头。在另一实施方案中，所述寡核苷酸不是反义寡核苷酸或核酶。在另一实施方案中，N是富含A和T的。在另一实施方案中，N包括至少4个T。在另一实施方案中，P是完全的回文序列。在另一实施方案中，P是富含G-C的。在另一实施方案中，P是CGGCGCXACGCCG，其中&是T或不存在。在另一实施方案中，所述寡核苷酸包括至少一个硫代磷酸酯连接。在另一实施方案中，所述寡核苷酸的所有核苷酸间的连接都是硫代磷酸酯连接。在另一实施方案中，所述寡核苷酸包括至少一个磷酸二酯-样连接。在另一实施方案中，磷酸二酯-样连接是磷酸二酯连接。在另一实施方案中，亲脂性基团缀合至所述寡核苷酸。在一个实施方案中，亲脂性基团是胆固醇。在一个实施方案中，本发明的“P类”CpG寡核苷酸具有下述核酸序列 5' TCGTCGACGATCGGCGCGCGCCG 3' (SEQ ID NO :39)。在所述序列中，所有的连接可以都是硫代磷酸酯键。在另一实施方案中，一或多个连接可以是磷酸二酯，优选在所述CpG基序的“C”和“G”之间，使之成为半软的CpG寡核苷酸。在任何这些序列中，乙基-尿苷或卤素可以取代5' T ；卤素取代的例子包括但不限于溴-尿苷或碘-尿苷取代。P-类寡核苷酸的非限制性例子包括5' T*C_G*T*C_G*A*C_G*A*T*C_G*G*C*G*C_G*C*G*C*C*G 3' (SEQ ID NO :40)其中*是指硫代磷酸酯键而_是指磷酸二酯键。在一个实施方案中，本文公开的CpG寡核苷酸的所有核苷酸间的连接都是磷酸二酯键(“软的”寡核苷酸，如PCT申请W02007/(^6190所述)。在另一实施方案中，本发明的 CpG寡核苷酸被赋予了对降解的抗性(例如经稳定化)。“经稳定化的寡核苷酸”是指对体内降解(例如经外切-或内切-核酸酶)具有相对抗性的寡核苷酸。核酸稳定化可以经由骨架修饰来实现。具有硫代磷酸酯连接的寡核苷酸提供了最大活性并且保护该寡核苷酸不受细胞内外切-或内切-核酸酶的降解。所述免疫刺激性寡核苷酸可以具有嵌合骨架，其具有磷酸二酯和硫代磷酸酯连接的组合。用于本发明目的的嵌合骨架是指部分稳定化的骨架，其中至少一个核苷酸间连接是磷酸二酯或磷酸二酯-样的，并且其中至少一个其它核苷酸间连接是稳定化的核苷酸间连接，其中所述至少一个磷酸二酯或磷酸二酯-样连接以及所述至少一个稳定化的连接是不同的。当磷酸二酯连接优先位于所述CpG基序内时，此类分子被称为“半软的”，如PCT申 it W02007/026190 所述。其它经修饰的寡核苷酸包括磷酸二酯、硫代磷酸酯、甲基磷酸酯、甲基硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯和/或P-乙氧基连接的组合。由于经报道硼烷磷酸酯(boranophosphonate)连接相对于磷酸二酯连接稳定，用于骨架的嵌合性质的目的时，硼烷磷酸酯连接根据背景可以被划分为磷酸二酯-样的或者是经稳定化的。例如，根据本发明的嵌合骨架在一些实施方案中可以包括至少一个磷酸二酯(磷酸二酯或磷酸二酯-样)连接和至少一个硼烷磷酸酯(经稳定化的)连接。在另外的实施方案中，根据本发明的嵌合骨架可以包括硼烷磷酸酯(磷酸二酯或磷酸二酯-样) 和硫代磷酸酯(经稳定化的)连接。“经稳定化的核苷酸间连接”意指与磷酸二酯核苷酸间连接相比对体内降解(例如经外切-或内切-核酸酶)相对具有抗性的核苷酸间连接。优选的经稳定化的核苷酸间连接包括但不限于硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、甲基磷酸酯和甲基硫代磷酸酯。其它经稳定化的核苷酸间连接包括但不限于肽、烷基、脱磷(dephospho)以及其它如上所述的。经修饰的骨架如硫代磷酸酯可以由自动化的技术利用氨基磷酸酯或H-磷酸酯化学来合成。芳基-和烷基-磷酸酯可以如例如美国专利4，469，863所述制备；而烷基磷酸三酯(其中带电的氧部是烷基化的，如美国专利5，023，243和欧洲专利092，574所述)可以通过自动化的固相合成利用商业可购的试剂来制备。用于进行其它DNA骨架修饰和取代的方法已有描述。Uilmann E et al. (1990)Chem Rev 90:544 ；GoodchiId J(1990)Bioconjugate Chem 1:165。用于制备嵌合寡核苷酸的方法也是已知的。例如授予Wilmarm et al.的专利已经描述了此类技术。混合的骨架修饰的ODN可以如PCT申请W02007/026190所述合成。本发明的寡核苷酸也可包括其它修饰。这些包括非离子DNA类似物，如烷基-和芳基-磷酸酯(其中带电的磷酸酯氧被烷基或芳基所代替)、磷酸二酯和烷基磷酸三酯，其中带电的氧部分被烷基化。在一端或两端含有二醇的核酸如四乙二醇或六乙二醇也显示出对核酸酶降解具有实质上的抗性。所述CpG寡核苷酸的大小(即沿着该寡核苷酸长度的核苷酸残基的数目)也对该寡核苷酸的刺激性活性有贡献。为了促进摄取入细胞内，本发明的CpG寡核苷酸优选具有最小6个核苷酸残基的长度。如果存在足够的免疫刺激性基序，任何大小大于6个核苷酸的寡核苷酸(甚至长度为许多1Λ)都能够诱导免疫应答，因为较大的寡核苷酸在细胞内降解。在某些实施方案中，所述CpG寡核苷酸长度为6-100个核苷酸，优选长度为8-30个核苷酸。在重要的实施方案中，本发明的核酸和寡核苷酸不是质粒或表达载体。在一个实施方案中，本文公开的CpG寡核苷酸包含取代或修饰，如在 W02007/026190的段落134-147所描述的碱基和/或糖中。在一个实施方案中，本发明的CpG寡核苷酸经化学修饰。化学修饰的例子为本领域技术人员所已知，并且在例如 Uhlmann E. et al. (1990)，Chem. Rev. 90 :543，S. Agrawal, Ed. , Humana Press, Totowa, USA 1993 ；Crooke, ST. et al. (1996)Annu. Rev. Pharmacol Toxicol. 36 :107-129 ；和 Hunziker J. et al.，(1995)，Mod. Synth. Methods 7 :331-417 中描述。本发明的寡核苷酸可以具有一或多个修饰，其中与天然DNA或RNA所组成的相同序列的寡核苷酸相比，每个修饰位于特定的磷酸二酯核苷间桥和/或位于特定的β -D-核糖单位和/或位于特定的天然核苷碱基位置。在本发明的一些实施方案中，含有CpG的核酸可以依据本领域技术人员已知的方法简单地与免疫原性载体混合(参见例如W003/0M480)。在本发明具体的实施方案中，本文所公开的任何疫苗包含2 μ g-100mg的CpG寡核苷酸，优选0. lmg-50mg的CpG寡核苷酸，优选0. 2mg-10mg的CpG寡核苷酸，优选0. 3mg-5mg 的CpG寡核苷酸，优选0. 3mg-5mg的CpG寡核苷酸，更优选0. 5-2mg的CpG寡核苷酸，更优选 0. 75-1. 5mg的CpG寡核苷酸。在优选的实施方案中，本文所公开的任何疫苗包含大约Img 的CpG寡核苷酸。肺炎球菌疫苗本发明的肺炎球菌疫苗通常包含缀合荚膜糖抗原，其中所述糖源自至少7种血清型的肺炎链球菌。肺炎链球菌荚膜糖的数目范围可以从7种不同的血清型(或“V”，价 (valence))到23种不同的血清型(23v)。在一个实施方案中，有7、8、9、10、11、12、13、14、 15、16、17、18、19、20、21、22或23种不同的血清型。在一个实施方案中，有10或11种不同的血清型。在一个实施方案中，有7或13种不同的血清型。所述荚膜糖抗原如下文所述缀合至载体蛋白。在本发明的另一实施方案中，疫苗可包含缀合的肺炎链球菌糖和未缀合的肺炎链球菌糖。优选糖血清型的总数目少于或等于23。例如，疫苗可包含7种缀合的血清型和16 种未缀合的糖。在另一实施方案中，疫苗可包含13种缀合的血清型和10种未缀合的糖。以类似的方式，疫苗可分别包含8、9、10、11、12、13、14、15或16种缀合的糖和15、14、13、12、 11、10、9、8或7种未缀合的糖。1.在一个实施方案中，本发明的疫苗包含来自血清型4、6B、9V、14、18C、19F和23F 的缀合的肺炎链球菌糖。2.在另一实施方案中，本发明的疫苗在上述第1点之外包含来自血清型1的缀合的肺炎链球菌糖。3.在另一实施方案中，本发明的疫苗在上述第1或2点之外包含来自血清型5的缀合的肺炎链球菌糖。4.在另一实施方案中，本发明的疫苗在上述第1、2或3点之外包含来自血清型7F的缀合的肺炎链球菌糖。5.在另一实施方案中，本发明的疫苗在上述第1、2、3或4点之外包含来自血清型 3的缀合的肺炎链球菌糖。6.在另一实施方案中，本发明的疫苗在上述第1、2、3、4或5点之外包含来自血清型6A的缀合的肺炎链球菌糖。7.在另一实施方案中，本发明的疫苗在上述第1、2、3、4、5或6点之外包含来自血清型19A的缀合的肺炎链球菌糖。8.在另一实施方案中，本发明的疫苗在上述第1、2、3、4、5、6或7点之外包含来自血清型22F的缀合的肺炎链球菌糖。9.在另一实施方案中，本发明的疫苗在上述第1、2、3、4、5、6、7或8点之外包含来自血清型15的缀合的肺炎链球菌糖。10.在另一实施方案中，本发明的疫苗在上述第1、2、3、4、5、6、7、8或9点之外包含来自血清型8的缀合的肺炎链球菌糖。11.在另一实施方案中，本发明的疫苗在上述第1、2、3、4、5、6、7、8、9或10点之外
包含来自血清型12F的缀合的肺炎链球菌糖。12.在另一实施方案中，本发明的疫苗在上述第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11点之
外包含来自血清型2的缀合的肺炎链球菌糖。13.在另一实施方案中，本发明的疫苗在上述第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12
点之外包含来自血清型9N的缀合的肺炎链球菌糖。14.在另一实施方案中，本发明的疫苗在上述第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12或
13点之外包含来自血清型IOA的缀合的肺炎链球菌糖。15.在另一实施方案中，本发明的疫苗在上述第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、
13或14点之外包含来自血清型IlA的缀合的肺炎链球菌糖。16.在另一实施方案中，本发明的疫苗在上述第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、
13、14或15点之外包含来自血清型IlA的缀合的肺炎链球菌糖。17.在另一实施方案中，本发明的疫苗在上述第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、 13、14、15或16点之外包含来自血清型17F的缀合的肺炎链球菌糖。18.在另一实施方案中，本发明的疫苗在上述第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、 13、14、15、16或17点之外包含来自血清型20的缀合的肺炎链球菌糖。19.在另一实施方案中，本发明的疫苗在上述第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、 13、14、15、16、17或18点之外包含来自血清型33F的缀合的肺炎链球菌糖。在一个实施方案中，本发明的疫苗包含来自血清型4、6B、9V、14、18C、19F和23F的缀合的肺炎链球菌糖。在一个实施方案中，本发明的疫苗包含来自血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、 18C、19A、19F和23F的缀合的肺炎链球菌糖。在一个实施方案中，本发明的疫苗包含来自血清型1、4、5、6B、7F、9V、14、18C、19F 和23F的缀合的肺炎链球菌糖。在一个实施方案中，本发明的疫苗包含来自血清型1、3、4、5、6B、7F、9V、14、18C、 19F和23F的缀合的肺炎链球菌糖。
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在优选的实施方案中，所述荚膜糖抗原缀合至独立地选自下组的载体蛋白TT、 DT、CRM197、TT 的片段 C、PhtD、PhtDE 融合体(特别是 WO 01/98334 和 WO 03/54007 中描述的那些)、脱毒肺炎球菌溶血素和蛋白D。在优选的实施方案中，所述荚膜糖抗原缀合至选自下组的载体蛋白DT(白喉毒素)、TT (破伤风类毒素)或TT的片段C、CRM197(白喉毒素的非毒性但却抗原性等同的变体)、其它 DT 点突变体，如 CRM176、CRM228、CRM 45 (Uchida et al J. Biol. Chem. 218 ； 3838-3844,1973) ；CRM 9、CRM 45、CRM 102、CRM 103 和 CRM 107 以及其它由 Nicholls 和 Youle 在 Genetically Engineered Toxins, Ed :Frankel, Maecel Dekker Inc,1992 中描述的突变；Glu-148的缺失或突变至Asp、Gln或Ser和/或Ala 158至Gly和其它US 4709017 或 US 4950740 中公开的突变；Lys 516、Lys 526,Phe 530 和 / 或 Lys 534 中至少一或多个残基的突变和其它US 5917017或US 6455673中公开的突变；或者US 5843711 中公开的片段，肺炎球菌肺炎球菌溶血素(Kuo et al (1995) Infect Immun 63 ；2706-13), 包括以某些方式脱毒的 ply,例如 dPLY-GMBS (W0 04081515，PCT/EP2005/010258)或 dPLY-formol, PhtX，包括 PhtA、PhtB、PhtD、PhtE (PhtA、PhtB、PhtD 或 PhtE 的序列在 WO 00/37105或WO 00/39299中公开)和Pht蛋白的融合体例如PhtDE融合体、PhtBE融合体、 Pht A-E (W0 01/98334、WO 03/54007、W02009/000826)，OMPC (脑膜炎球菌外膜蛋白-通常提取自脑膜炎奈瑟氏菌(N.meningitides)血清组B-EP0372501)，PorB(来自脑膜炎奈瑟氏菌)，PD(流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae)蛋白D-参见例如EP 0 594 610B) 或者其免疫学功能等价物，合成肽(EP0378881、EP0427347)，热休克蛋白(W0 93/17712、 WO 94/03208)，百日咳蛋白(W0 98/58668、EP0471 177)，细胞因子，淋巴因子，生长因子或激素(W0 91/01146)，包含来自各种病原体所衍生的抗原的多个人CD4+T细胞表位的人工蛋白(Falugi et al (2001)Eur J Immunol 31 ;3816_3824)如 N19 蛋白(Baraldoi et al (2004) Infect Immun 72 ；4884-7)肺炎球菌表面蛋白 PspA(W) 02/091998)，铁摄取蛋白 (W0 01/72337)，艰难梭菌(C. difficile)的毒素 A 或 B(W0 00/61761)。在一个实施方案中，所述荚膜糖抗原缀合至DT(白喉类毒素)。在另一实施方案中，所述荚膜糖抗原缀合至TT (破伤风类毒素)。在另一实施方案中，所述荚膜糖抗原缀合至TT的片段C。在另一实施方案中，所述荚膜糖抗原缀合至PD (流感嗜血杆菌蛋白D-参见例如EP 0 594 610B)。在优选的实施方案中，本发明的荚膜糖抗原缀合至CRM197蛋白。所述CRM197蛋白是白喉毒素的无毒形式，但在免疫学上与白喉毒素不可区别。CRM197是由经非产毒性噬菌体β 197tM-感染的白喉杆菌(C. diphtheriae)产生的，所述β 19是通过对产毒性β 棒状噬菌体进行亚硝基胍诱变产生的(Uchida, Τ. et al. 1971，Nature New Biology 233 8-11)。CRM197蛋白具有与白喉毒素相同的分子量但却在结构基因中与其因单个碱基的变化(鸟嘌呤至腺嘌呤)而有差异。此单个碱基的变化引起成熟蛋白中的氨基酸取代(谷氨酸取代为甘氨酸)并消除了白喉毒素的毒性特性。CRM197蛋白是用于糖的安全有效的T-细胞依赖性载体。关于CMR197的其它细节以及其生产可在例如US 5，614，382中找到。在一个实施方案中，如果组合物中2或更多种糖的蛋白载体是相同的，所述糖可缀合至蛋白载体的同一分子(载体分子具有2种更多的不同糖缀合至其上)[参见例如WO04/083251]。或者所述糖可以每种独立地缀合至蛋白载体的不同分子(每个蛋白载体分子仅仅具有一种类型的糖缀合至其上)。在所述实施方案中，荚膜糖即所述地独立缀合至载体蛋白。在一个实施方案中，本发明的荚膜糖抗原来自不同的肺炎链球菌血清型并且缀合至一或多种载体蛋白。在一个实施方案中，本发明的疫苗包含7、8、9、10、11、12、13、14、15、 16、17、18、19、20、21、22或23种不同血清型荚膜糖缀合物，其中CRM 197是载体蛋白。在一个实施方案中，本发明的疫苗包含7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、 20,21,22或23种不同血清型荚膜糖缀合物，其中蛋白D是载体蛋白。在一个实施方案中，来自血清型1、2、3、4、5、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、 158、17卩、18(、19六、19卩、20、22卩、23卩或33卩的糖缀合至蛋白D。在一个实施方案中，来自血清型1、2、3、4、5、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、 15B、17F、18C、19A、19F、20、22F、23F 或 33F 的糖缀合至 CRM197。在一个实施方案中，来自至少血清型1和3、1和4、1和5、1和6A、1和6B、1和7、 1 禾口 9V、1 禾口 14、1 禾口 22F、1 禾口 23F、3 禾口 4、3 禾口 5、3 禾口 6A、3 禾口 6B、3 禾口 7F、3 禾口 9V、3 禾口 14、3 和 22F、3 禾口 23F、4 禾口 5、4 禾口 6A、4 禾口 6B、4 禾口 7F、4 禾口 9V、4 禾口 14、4 禾口 22F、4 禾口 23F、5 禾口 6A、 5 禾口 6B、5 禾口 7F、5 禾口 9V、5 禾口 14、5 禾口 22F、5 禾口 23F、6A 禾口 6B、6A 禾口 7F、6A 禾口 9V、6A 禾口 14、6A 和 22F、6A 禾口 23F、6B 禾口 7F、6B 禾口 9V、6B 禾口 14、6B 禾口 22F、6B 禾口 23F、7F 禾口 9V、7F 禾口 14、7F 和 22F、7F 和 23F、9V 和 14、9V 和 22F、9V 和 23F、14 和 22F、14 和 23F 或 22F 和 23F 的糖缀合至 CRM197。在一个实施方案中，来自至少血清型1、3和4 ；1,3和5 ；1,3和6A ；1,3和6B ；1,3 禾口 7F ；1、3 禾口 9V ；1、3 禾口 14 ；3、4 禾口 7F ；3、4 禾口 5 ；3、4 禾口 7F ；3、4 禾口 9V ；3、4 禾口 14 ；4、5 禾口 7F ； 4、5 禾口 9V ；4、5，禾口 14 ；5、7F 禾口 9V ；5、7F 禾口 14 ；7F、9V 禾口 14 ； 1、3、4 禾口 5 ；3、4、5 禾口 7F ；4、5、7F 和 9V ；4、5、7F 禾口 14 ；4、5、9V 禾口 14 ；4、7F、9V 禾口 14 ；5、7F、9V 禾口 14 ；或 4、5、7F、9V 禾口 14 的糖缀合至CRM197。在一个实施方案中，来自至少血清型1和3、1和4、1和5、1和6A、1和6B、1和7、 1 禾口 9V、1 禾口 14、1 禾口 22F、1 禾口 23F、3 禾口 4、3 禾口 5、3 禾口 6A、3 禾口 6B、3 禾口 7F、3 禾口 9V、3 禾口 14、3 和 22F、3 禾口 23F、4 禾口 5、4 禾口 6A、4 禾口 6B、4 禾口 7F、4 禾口 9V、4 禾口 14、4 禾口 22F、4 禾口 23F、5 禾口 6A、 5 禾口 6B、5 禾口 7F、5 禾口 9V、5 禾口 14、5 禾口 22F、5 禾口 23F、6A 禾口 6B、6A 禾口 7F、6A 禾口 9V、6A 禾口 14、6A 和 22F、6A 禾口 23F、6B 禾口 7F、6B 禾口 9V、6B 禾口 14、6B 禾口 22F、6B 禾口 23F、7F 禾口 9V、7F 禾口 14、7F 和 22F、7F 和 23F、9V 和 14、9V 和 22F、9V 和 23F、14 和 22F、14 和 23F 或 22F 和 23F 的糖缀合至蛋白D。在一个实施方案中，来自至少血清型1、3和4、1、3和5、1、3和6A ；1,3和6B ；1,3 禾口 7F ；1、3 禾口 9V ；1、3 禾口 14 ；3、4 禾口 7F ；3、4 禾口 5 ；3、4 禾口 7F ；3、4 禾口 9V ；3、4 禾口 14 ；4、5 禾口 7F ； 4、5 禾口 9V ；4、5，禾口 14 ；5、7F 禾口 9V ；5、7F 禾口 14 ；7F、9V 禾口 14 ； 1、3、4 禾口 5 ；3、4、5 禾口 7F ；4、5、7F 和 9V ；4、5、7F 禾口 14 ；4、5、9V 禾口 14 ；4、7F、9V 禾口 14 ；5、7F、9V 禾口 14 ；或 4、5、7F、9V 禾口 14 的糖
缀合至蛋白D。在一个实施方案中，本发明的疫苗包含7种不同血清型荚膜糖缀合物，其中CRM 197是载体蛋白。
在一个实施方案中，本发明的疫苗包含7种不同血清型荚膜糖缀合物，其中蛋白D 是载体蛋白。在一个实施方案中，本发明的疫苗包含10种不同血清型荚膜糖缀合物，其中CRM 197是载体蛋白。在一个实施方案中，本发明的疫苗包含10种不同血清型荚膜糖缀合物，其中蛋白 D是载体蛋白。在一个实施方案中，本发明的疫苗包含11种不同血清型荚膜糖缀合物，其中CRM 197是载体蛋白。在一个实施方案中，本发明的疫苗包含11种不同血清型荚膜糖缀合物，其中蛋白 D是载体蛋白。在一个实施方案中，本发明的疫苗包含13种不同血清型荚膜糖缀合物，其中CRM 197是载体蛋白。在一个实施方案中，本发明的疫苗包含13种不同血清型荚膜糖缀合物，其中蛋白 D是载体蛋白。在一个实施方案中，本发明的疫苗包含23种不同血清型荚膜糖缀合物，其中CRM 197是载体蛋白。在一个实施方案中，本发明的疫苗包含23种不同血清型荚膜糖缀合物，其中蛋白 D是载体蛋白。在一个实施方案中，本发明的疫苗包含缀合至蛋白D的来自血清型4、6B、9V、14、 18CU9F 和 23F 的糖。在一个实施方案中，本发明的疫苗包含缀合至CRM197的来自血清型4、6B、9V、14、 18CU9F 和 23F 的糖。在一个实施方案中，本发明的疫苗包含缀合至蛋白D的来自血清型1、3、4、5、6A、 6B、7F、9V、14、18C、19A、19F 和 23F 的糖。在一个实施方案中，本发明的疫苗包含缀合至CRM197的来自血清型1、3、4、5、6A、 6B、7F、9V、14、18C、19A、19F 和 23F 的糖。在一个实施方案中，本发明的疫苗包含缀合至蛋白D的来自血清型1、4、5、6B、7F、 9V、14、18C、19F 和 23F 的糖。在一个实施方案中，本发明的疫苗包含缀合至CRM197的来自血清型1、4、5、6B、 7F、9V、14、18C、19F 和 23F 的糖。在一个实施方案中，本发明的疫苗包含缀合至蛋白D的来自血清型1、3、4、5、6B、 7F、9V、14、18C、19F 和 23F 的糖。在一个实施方案中，本发明的疫苗包含缀合至CRM 197的来自血清型1、3、4、5、 6B、7F、9V、14、18C、19F 和 23F 的糖。在一个实施方案中，本发明的疫苗包含缀合至蛋白D的来自血清型1、2、3、4、5、 6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、17F、18C、19A、19F、20、22F、23F 和 33F 的糖。在一个实施方案中，本发明的疫苗包含缀合至CRM 197的来自血清型1、2、3、4、5、 6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、17F、18C、19A、19F、20、22F、23F 和 33F 的糖。在一个实施方案中，发明的疫苗包含缀合至蛋白D的来自血清型1、4、5、6B、7F、9V、14和23F的糖，缀合至破伤风类毒素(TT)的来自血清型18C的糖和缀合至白喉类毒素 (DT)的来自血清型19F的糖。在一个实施方案中，本发明的疫苗包含缀合至破伤风类毒素(TT)的来自血清型 1、4、5、7F、9V、19F和23F的糖和缀合至白喉类毒素(DT)的来自血清型3、14、18C和6B的糖。在一个实施方案中，本发明的疫苗包含独立缀合至蛋白D的来自血清型1、4、5、 6B、7F、9V、14和23F的糖、缀合至破伤风类毒素(TT)的来自血清型18C的糖和缀合至白喉类毒素(DT)的来自血清型19F的糖。在一个实施方案中，本发明的疫苗包含独立缀合至破伤风类毒素(TT)的来自血清型1、4、5、7F、9V、19F和23F的糖和缀合至白喉类毒素(DT)的来自血清型3、14、18C和6B 的糖。术语“糖”在本说明书全文中可以表示多糖或寡糖并且包括这两者。肺炎链球菌的荚膜多糖包含重复的可含有达8个糖残基的寡糖单位。对于关键的肺炎链球菌血清型的寡糖单位的综述参见 JONES，Christopher. Vaccines based on the cell surface carbohydrates of pathogenic bacteria. An. Acad. Bras. Cienc,June 2005,vol. 77,no. 2, p. 293-324Table II ISSN 0001-3765。本发明的荚膜糖抗原由本领域技术人员已知的标准技术所制备。通常，多糖缀合物通过分别的过程制备并配制成单剂量配制物。例如，在一个实施方案中，使每种肺炎球菌多糖血清型在基于大豆的培养基中生长。继而通过离心、沉淀、超离心和柱层析纯化各个多糖。将纯化的多糖经化学活化以使得该糖能够与载体蛋白反应。一旦被活化，分别将每种荚膜多糖缀合至载体蛋白以形成糖缀合物。在一个实施方案中，将每种荚膜多糖缀合至相同的载体蛋白。在此实施方案中，通过还原性胺化来实现缀合。多糖的化学活化以及随后的缀合至载体蛋白是通过常规手段完成的。参见例如美国专利4，673，574和4，902，506。在将荚膜多糖缀合至载体蛋白后，通过多种技术纯化该多糖-蛋白缀合物(相对于该多糖-蛋白缀合物的量被富集)。这些技术包括浓缩/渗滤操作、沉淀/洗脱、柱层析、 和深度过滤(cbpth filtration)。参见例如 US2007/0184072 或 W02008/079653。在将各个糖缀合物纯化后，将它们调配以配制本发明的疫苗。本发明的免疫原性组合物的配制可以使用本领域已知的方法来实现。例如，可以将各个肺炎球菌缀合物与生理学可接受的载体(vehicle)配制来制备所述组合物。此类载体的例子包括但不限于水、缓冲盐水、多元醇 (例如甘油、丙二醇、液体聚乙二醇)和葡萄糖溶液。每剂疫苗中缀合物的量是经选择的量，该量在典型的受接种者中诱导免疫保护性反应而无显著地不良副作用。此种量会根据使用哪种具体的免疫原以及如何将其呈递而变化。在一个实施方案中，每剂包含0. 1-1000 μ g的每种糖或糖-蛋白缀合物，优选2-100 μ g， 最优选4-40 μ g。在一个实施方案中，每剂包含0. 1-20 μ g、1-10 μ g或者1-5 μ g的糖。在一个实施方案中，本发明的疫苗含有0. 1-20 μ g、0. 5-10 μ g的剂量的每种肺炎链球菌荚膜糖；0. 5-5μ g或1-5μ g的糖。在一个实施方案中，荚膜糖可以以不同的剂量存在，例如一些荚膜糖可按大约或精确的2μ g的剂量存在或者一些荚膜糖可按大约或精确的4yg的剂量存在。
在本发明具体的实施方案中，疫苗含有独立缀合至CRM197的来自血清型4、6B、 9V、14、18C、19F和23F的糖，其中每种肺炎链球菌荚膜糖的剂量为2 μ g，只有6B的剂量为 4μ g0在本发明具体的实施方案中，疫苗含有独立缀合至CRM197的来自血清型4、6B、 9V、14、18C、19F和23F的糖，其中每种肺炎链球菌荚膜糖的剂量为4 μ g，只有6B的剂量为 8 μ g0在本发明具体的实施方案中，疫苗含有独立缀合至CRM197的来自血清型4、6B、 9V、14、18C、19F和23F的糖，其中每种肺炎链球菌荚膜糖的剂量为6 μ g，只有6B的剂量为 12 μ g0在本发明具体的实施方案中，疫苗含有独立缀合至CRM197的来自血清型4、6B、 9V、14、18C、19F和23F的糖，其中每种肺炎链球菌荚膜糖的剂量为8 μ g，只有6B的剂量为 16 μ g0在本发明具体的实施方案中，疫苗含有独立缀合至CRM197的来自血清型1、3、4、 5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19FJP 23F的糖，其中每种肺炎链球菌荚膜糖的剂量为2 μ g， 只有6B的剂量为4 μ g。在本发明具体的实施方案中，疫苗含有独立缀合至CRM197的来自血清型1、3、4、 5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19FJP 23F的糖，其中每种肺炎链球菌荚膜糖的剂量为4 μ g， 只有6B的剂量为8 μ g。在本发明具体的实施方案中，疫苗含有独立缀合至CRM197的来自血清型1、3、4、 5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19FJP 23F的糖，其中每种肺炎链球菌荚膜糖的剂量为6 μ g， 只有6B的剂量为12 μ g。在本发明具体的实施方案中，疫苗含有独立缀合至CRM197的来自血清型1、3、4、 5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19FJP 23F的糖，其中每种肺炎链球菌荚膜糖的剂量为8 μ g， 只有6B的剂量为16 μ g。在本发明具体的实施方案中，本文公开的疫苗含有5-500 μ g、优选10-200 μ g、更优选20-100 μ g的CRM197载体蛋白。在本发明具体的实施方案中，本文公开的疫苗含有20-50 μ g、优选20-40 μ g、更优选25-30 μ g、更优选大约观或四μ g的CRM 197载体蛋白。在本发明具体的实施方案中，本文公开的疫苗含有40-100 μ g、优选40-80 μ g、更优选50-60 μ g、更优选大约57或58 μ g的CRM197载体蛋白。在本发明具体的实施方案中，本文公开的疫苗含有氯化钠和/或琥珀酸钠缓冲液作为赋形剂。在一个实施方案中，用于本文的肺炎球菌疫苗是US2007/0184072中公开的7_价的缀合的肺炎球菌疫苗O^revenar)或者13-价的缀合的肺炎球菌疫苗-Prevenar 13)。 7-价I^revenar含有独立缀合至CRM197的来自血清型4、6B、9V、14、18C、19F和23F的糖。 13-价 Prevenar 含有独立缀合至 CRM197 的来自血清型 1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、 19AU9F 和 23F 的糖。在一个实施方案中，本发明的疫苗包含独立缀合至蛋白D的来自血清型1、4、5、 6B、7F、9V、14和23F的糖、缀合至破伤风类毒素(TT)来自血清型18C的糖和缀合至白喉类毒素(DT)的来自血清型19F的糖，其中每种肺炎链球菌荚膜糖的剂量为lyg，只有4、18C 和19F的剂量为3 μ g。在本发明具体的实施方案中，所述疫苗含有5-500 μ g、优选7-100 μ g 的蛋白D载体蛋白，2-200 μ g、优选4-50 μ g的破伤风类毒素(TT)载体蛋白和1-100 μ g、 优选2-25 μ g的白喉类毒素(DT)载体蛋白。在本发明具体的实施方案中，所述疫苗含有
9-16μ g的蛋白D载体蛋白、5-10 μ g的破伤风类毒素(TT)载体蛋白和3-6 μ g的白喉类毒素(DT)载体蛋白。在一个实施方案中，本发明的疫苗包含独立缀合至蛋白D的来自血清型1、4、5、 6B、7F、9V、14和23F的糖、缀合至破伤风类毒素(TT)来自血清型18C的糖和缀合至白喉类毒素(DT)的来自血清型19F的糖，其中每种肺炎链球菌荚膜糖的剂量为2 μ g，只有4、 18C和19F的剂量为6 μ g。在本发明具体的实施方案中，所述疫苗含有10-1000 μ g、优选 14-200 yg的蛋白D载体蛋白，4-400 μ g、优选8-100 μ g的破伤风类毒素(TT)载体蛋白和
2-200yg、优选4-50yg的白喉类毒素(DT)载体蛋白。在本发明具体的实施方案中，所述疫苗含有18-32 μ g的蛋白D载体蛋白、10-20 μ g的破伤风类毒素(TT)载体蛋白和6_12yg 的白喉类毒素(DT)载体蛋白。在一个实施方案中，本发明的疫苗包含独立缀合至蛋白D的来自血清型1、4、5、 6B、7F、9V、14和23F的糖、缀合至破伤风类毒素(TT)的来自血清型18C的糖和缀合至白喉类毒素(DT)的来自血清型19F的糖，其中每种肺炎链球菌荚膜糖的剂量为3yg，只有4、 18C和19F的剂量为9 μ g。在本发明具体的实施方案中，所述疫苗含有15-1500 μ g、优选 21-300 μ g的蛋白D载体蛋白，6-600 μ g、优选12-150 μ g的破伤风类毒素(TT)载体蛋白和
3-300μ g、优选6-75 μ g的白喉类毒素(DT)载体蛋白。在本发明具体的实施方案中，所述疫苗含有27-48 μ g的蛋白D载体蛋白、15-30 μ g的破伤风类毒素(TT)载体蛋白和9_18 μ g 的白喉类毒素(DT)载体蛋白。在一个实施方案中，本发明的疫苗包含独立缀合至蛋白D的来自血清型1、4、5、 6B、7F、9V、14和23F的糖、缀合至破伤风类毒素(TT)的来自血清型18C的糖和缀合至白喉类毒素(DT)的来自血清型19F的糖，其中每种肺炎链球菌荚膜糖的剂量为4yg，只有4、 18C和19F的剂量为12 μ g。在本发明具体的实施方案中，所述疫苗含有20-2000 μ g、优选
的蛋白D载体蛋白，8-800μβ、优选16-200 μ g的破伤风类毒素(TT)载体蛋白和4-400yg、优选S-IOOyg的白喉类毒素(DT)载体蛋白。在本发明具体的实施方案中， 所述疫苗含有36-64 μ g的蛋白D载体蛋白、20-40 μ g的破伤风类毒素(TT)载体蛋白和的白喉类毒素(DT)载体蛋白。在本发明具体的实施方案中，本文所公开的疫苗含有氯化钠缓冲液作为赋形剂。在一个实施方案中，用于本文的肺炎球菌疫苗是以商品名Synflorix 销售的
10-价的缀合的肺炎球菌疫苗。另外的佐剂在一些实施方案中，本文所公开的肺炎球菌疫苗在本文所公开的至少一种TLR-9 激动剂之外还包含至少一种、两种或三种佐剂。术语“佐剂”是指增强对抗原的免疫应答的化合物或混合物。抗原可以主要作为递送体系、主要作为免疫调节剂或具有强的此二种特性。适宜的佐剂包括适用于哺乳动物包括人类的那些。已知可用于人类的适宜的递送体系类型佐剂的例子包括但不限于铝(例如磷酸铝、硫酸铝或氢氧化铝)、磷酸钙、脂质体、水包油乳液如MF5W4. 3% w/v角鲨烯、0. 5% w/v聚山梨醇酯80 (Tween 80)、0. 5% w/v山梨醇酐三油酸酯(Span 85))、油包水乳液如 Montanide和聚(D，L-丙交酯-共-乙交酯)(PLG)微颗粒或纳米颗粒。已知可用于人类的适宜的免疫调节类型佐剂的例子包括但不限于来自Aquilla 树的树皮的皂苷提取物0!S21、Quil A)、TLR4激动剂如MPL (单磷酰脂质A)、3DMPL(3_0_脱酰基MPL)或GLA-AQ、LT/CT突变体、细胞因子如各种白细胞介素(例如IL_2、IL-12)或 GM-CSF 等等。已知可用于人类的适宜的免疫调节类型佐剂(具有递送和免疫调节特性)的例子包括但不限于 ISCOMS(参见例如 Sj0lander et al. (1998) J. Leukocyte Biol. 64 713 ；W090/03184, W096/11711, WO 00/48630，W098/36772, W000/41720, W006/134423 和 W007/026190)或者GLA-EM，其是TLR4激动剂和水包油乳液的组合。对于包括但不限于动物实验的兽医应用，可以使用弗氏完全佐剂(CFA)，弗氏不完全佐剂(IFA)，Emulsigen，N-乙酰基-胞壁酰基-L-苏氨酰基-D-异谷氨酰胺(thr_MDP)， N-乙酰基-正-胞壁酰基-L-丙氨酰基-D-异谷氨酰胺(CGP 11637，称作正-MDP)，N-乙酰基胞壁酰基-L-丙氨酰基-D-异谷氨酰基-L-丙氨酸-2- (Γ -2' - 二棕榈酰-sn-甘油-3-羟基磷酰氧基)-乙胺(CGP 19835A,称作MTP-PE)和RIBI，其在2%角鲨烯/Tween 80乳液中含有提取自细菌的三种成分单磷酰脂质A、海藻糖二霉菌酸酯和细胞壁骨架 (MPL+TDM+CWS)。用于增强本文公开的肺炎球菌疫苗效力的其它示例性佐剂包括但不限于 (1)水包油乳液配制物(有或没有其它特定的免疫刺激性物质如胞壁酰肽(见下文) 或细菌细胞壁成分)，如例如(a) SAF，含有10%角鲨烯、0.4% Tween 80、5%普流尼克 (pluronic)-封闭的聚合物L121，和thr_MDP，经微流化成亚微粒乳液或经涡旋产生较大颗粒大小的乳液；以及(b)RIBI 佐剂体系(RAS), (Ribi Immunochem, Hamilton, MT)含有2%角鲨烯、0.2% Tween 80、和一或多种细菌细胞壁成分如单磷酰脂质A(MPL)、海藻糖二霉菌酸酯(TDM)和细胞壁骨架(CWS)，优选MPL+CWS (DET0X ) ； (2)皂苷佐剂，如QS21、 STIMULON (Cambridge Bioscience, Worcester, ΜΑ) 、Abisco (I sconova, Sweden)或 ^ Iscomatrix (Commonwealth Serum Laboratories, Australia), bJ 1 il!M 5 所产生的颗粒如ISCOMs (免疫刺激性复合物)，该ISCOMS可以没有额外的去污剂例如 W000/07621 ；(3)弗氏完全佐剂(CFA)和弗氏不完全佐剂(IFA) ； (4)细胞因子，如白细胞介素(例如 IL-1、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-12 (W099/44636)等)，干扰素(例如干扰素Y)，巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)，肿瘤坏死因子(TNF)等；(5)单磷酰脂质A(MPL) 或3-0-脱酰基MPL(3dMPL)(参见例如GB-2220221、EP-A-0689454)，任选在与肺炎球菌糖使用时基本不存在铝(参见例如W000/56358) ； (6) 3dMPL与例如QS21和/或水包油乳液的组合(参见例如EP-A-0835318、EP-A-0735898、EP-A-0761231) ； (7)聚氧乙烯醚或聚氧乙烯酯(参见例如W099/52549) ； (8)与辛苯昔醇组合的聚氧乙烯山梨聚糖酯表面活性剂 (W001/21207)或者与至少一种额外的非离子型表面活性剂如辛苯昔醇组合的聚氧乙烯烷基醚或酯表面活性剂(W001/21152) ； (9)皂苷和免疫刺激性寡核苷酸(例如CpG寡核苷 Μ ) (W000/62800) ； (10)免疫刺激物和金属盐的颗粒(参见例如W000/23105) ； (11)皂苷和水包油乳液例如W099/11241 ； (12)皂苷(例如QS21)+3dMPL+IM2 (任选地+固醇)，例
30如TO98/57659 ； (13)其它作为免疫刺激物用以增强所述组合物效力的物质。胞壁酰肽包括N-乙酰基-胞壁酰-L-苏氨酰基-D-异谷氨酰胺(thr-MDP)、N-25乙酰基-正-胞壁酰-L-丙氨酰基-D-异谷氨酰胺(正-MDP)、N-乙酰基-胞壁酰基-L-丙氨酰基-D-异谷氨酰基-L-丙氨酸-2-(1' -2' -二棕榈酰-sn-甘油-3-羟基磷酰氧基)-ZKMTP-PE)寸。在优选的实施方案中，本文公开的肺炎球菌疫苗包含铝、氢氧化铝、磷酸铝或硫酸铝作为本文所公开的至少一种TLR-9激动剂佐剂的额外佐剂。在本发明具体的实施方案中，疫苗含有独立缀合至CRM197的来自血清型4、6B、 9V、14、18C、19F和23F的糖，其中每种肺炎链球菌荚膜糖的剂量为2 μ g，只有6B的剂量为 4 μ g，进一步包含0. 5mg的磷酸铝，和任选存在的氯化钠和琥珀酸钠缓冲液作为赋形剂。在本发明具体的实施方案中，疫苗含有独立缀合至CRM197的来自血清型4、6B、 9V、14、18C、19F和23F的糖，其中每种肺炎链球菌荚膜糖的剂量为4 μ g，只有6B的剂量为 8 μ g，进一步包含Img的磷酸铝，和任选存在的氯化钠和琥珀酸钠缓冲液作为赋形剂。在本发明具体的实施方案中，疫苗含有独立缀合至CRM197的来自血清型4、6B、 9V、14、18C、19F和23F的糖，其中每种肺炎链球菌荚膜糖的剂量为6 μ g，只有6B的剂量为 12 μ g，进一步包含1. 5mg的磷酸铝，和任选存在的氯化钠和琥珀酸钠缓冲液作为赋形剂。在本发明具体的实施方案中，疫苗含有独立缀合至CRM197的来自血清型4、6B、 9V、14、18C、19F和23F的糖，其中每种肺炎链球菌荚膜糖的剂量为8 μ g，只有6B的剂量为 16 μ g，进一步包含aiig的磷酸铝，和任选存在的氯化钠和琥珀酸钠缓冲液作为赋形剂。在本发明具体的实施方案中，疫苗含有独立缀合至CRM197的来自血清型1、3、4、 5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和23F的糖，其中每种肺炎链球菌荚膜糖的剂量为2 μ g， 只有6B的剂量为4 μ g，进一步包含0. 5mg的磷酸铝，和任选存在的氯化钠和琥珀酸钠缓冲液作为赋形剂。在本发明具体的实施方案中，疫苗含有独立缀合至CRM197的来自血清型1、3、4、 5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和23F的糖，其中每种肺炎链球菌荚膜糖的剂量为4 μ g， 只有6B的剂量为8 μ g，进一步包含Img的磷酸铝，和任选存在的氯化钠和琥珀酸钠缓冲液作为赋形剂。在本发明具体的实施方案中，疫苗含有独立缀合至CRM197的来自血清型1、3、4、 5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和23F的糖，其中每种肺炎链球菌荚膜糖的剂量为6 μ g， 只有6B的剂量为12 μ g，进一步包含1. 5mg的磷酸铝，和任选存在的氯化钠和琥珀酸钠缓冲液作为赋形剂。在本发明具体的实施方案中，疫苗含有独立缀合至CRM197的来自血清型1、3、4、 5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和23F的糖，其中每种肺炎链球菌荚膜糖的剂量为8 μ g， 只有6B的剂量为16 μ g，进一步包含1. 5mg的磷酸铝，和任选存在的氯化钠和琥珀酸钠缓冲液作为赋形剂。在一个实施方案中，所述肺炎球菌疫苗是7-价缀合的肺炎球菌疫苗(ft~eVenar) 或13-价缀合的肺炎球菌疫苗，如US2007/0184072所述(13vPnC)。免疫功能受损对象在本发明优选的实施方案中，要用本发明的疫苗进行疫苗接种的对象是免疫功能
31受损对象。优选所述免疫功能受损对象是哺乳动物，如猫、绵羊、猪、马、牛、狗或人。在最优选的实施方案中，所述对象是人。免疫功能受损个体通常定义为对感染性物质的攻击形成正常体液或细胞防卫的能力减弱或降低的人。在本发明的实施方案中，要用所述肺炎球菌疫苗进行疫苗接种的免疫功能受损对象患有疾病或病症，所述疾病和病症削弱免疫系统并导致不足以防护或治疗肺炎球菌性疾病的抗体应答。在一个实施方案中，所述疾病是原发免疫缺陷病。优选所述原发免疫缺陷病选自下组合的T-和B-细胞免疫缺陷、抗体缺陷、明显综合征(well-defined syndrome)、免疫失调疾病、吞噬细胞病、先天免疫缺陷、自身炎症性疾病和补体缺陷。在一个实施方案中，所述组合的T-和B-细胞免疫缺陷选自下组Y c缺乏、JAK3 缺乏、白细胞介素7受体α链缺乏、CD45缺乏或⑶3 δ/⑶3 ε缺乏、RAG 1/2缺乏、DCLRE1C 缺乏、腺苷脱氨酶(ADA)缺乏、网状细胞发育不全、Omerm综合征、IV类DNA连接酶缺乏、 ⑶40配体缺乏、⑶40缺乏、嘌呤核苷磷酸化酶(PNP)缺乏、II类MHC缺乏、⑶3 γ缺乏、⑶8 缺乏、ΖΑΡ-70缺乏、ΤΑΡ-1Λ缺乏和Winged螺旋缺乏。在一个实施方案中，所述抗体缺陷选自下组X-连锁无丙种球蛋白血症、btk缺乏、Bruton无丙种球蛋白血症、μ-重链缺乏、I 5缺乏、Iga缺乏、BLNK缺乏、胸腺瘤伴免疫缺陷、常见可变免疫缺陷(CVID)、ICOS缺乏、CD19缺乏、TACI (TNFRSF13B)缺乏、BAFF受体缺乏、AID缺乏、UNG缺乏、重链缺失、κ链缺乏、分离的IgG亚类缺乏、IgA伴IgG亚类缺乏、选择性免疫球蛋白A缺乏、在正常B细胞和正常Ig浓度针对特定抗原的特异性抗体缺乏、婴幼儿短暂性低丙种球蛋白血症(THI)。在一个实施方案中，所述明显综合征选自下组Wiskott-Aldrich综合征、毛细血管扩张性共济失调、共济失调样综合征、Nijmegen断裂综合征、Bloom综合征、DiGeorge综合征(当与胸腺缺陷相关时)、软骨毛发发育不良、Schimke综合征、2型Hermansky-Pudlak 综合征、高-IgE综合征、慢性皮肤粘膜念珠菌病。在一个实施方案中，所述免疫失调疾病选自下组=Chediak-Higashi综合征、2型 Griscelli综合征、穿孔素(perforin)缺乏、MUNC 13D缺乏、突触融合蛋白11缺乏、X-连锁淋巴增殖综合征、自身免疫淋巴增殖综合征如Ia型(CD95缺陷)、lb型(Fas配体缺陷)、 2a型(CASP10缺陷)、2b型(CASP8缺陷)、APECED(自身免疫多内分泌病变伴念珠菌病和外胚层营养不良)和IPEX(免疫失调多内分泌病变肠病变X-连锁综合征)。在一个实施方案中，所述吞噬细胞病选自下组ELA2缺乏(伴有脊髓发育不良)、 GFIl缺乏(伴有T/B淋巴减少)、G-CSFR缺乏(G-CSF-无应答),Kostmann综合征、周期性中性粒细胞减少症、X-连锁中性粒细胞减少症/脊髓发育不良、1、2和3型白细胞粘附缺乏、RAC2缺乏、β -肌动蛋白缺乏、局限性青少年牙周炎、Papillon-Lefevre综合征、特异性颗粒缺乏、Shwachman-Diamond综合征、慢性肉芽肿疾病X_连锁的和常染色体的形式、嗜中性葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏、IL-12和IL-23 β 1链缺乏、IL_12p40缺乏、干扰素、受体1缺乏、干扰素Y受体2缺乏和STATl缺乏O种形式)。在一个实施方案中，所述先天免疫缺乏选自下组少汗性外胚层发育不良、NEMO 缺乏、IKBA缺乏、IRAK-4缺乏、WHIM综合征(疣、低丙种球蛋白血症、感染、先天性骨髓粒细胞缺乏症(myleokathexis))和疣状表皮发育不良。
在一个实施方案中，所述自身炎症性疾病选自下组家族性地中海热、TNF受体相关周期性综合征(TRAPS)、高-IgD综合征(HIDS)、CIAS1-相关疾病、Muckle-Wells综合征、 家族性寒冷自身炎症性综合征、新生儿多系统炎性疾病、PAPA综合征(化脓性不育关节炎、 脓皮病坏疽、痤疮)和Blau综合征。在一个实施方案中，所述补体缺陷选自下组Clq缺乏(狼疮样综合征、类风湿病、 感染)、Clr缺乏(同前)、C4缺乏(同前)、C2缺乏(狼疮样综合征、脉管炎、多肌炎、化脓感染)、C3缺乏(复发性化脓感染)、C5缺乏(奈瑟氏菌感染、SLE)、C6缺乏(同前)、C7缺乏(同前、脉管炎)、CSa和C8b缺乏(同前)、C9缺乏(奈瑟氏菌感染)、Cl-抑制剂缺乏 (遗传性血管水肿)、因子I缺乏(化脓感染)、因子H缺乏(溶血性尿毒综合征、膜增生性肾小球肾炎)、因子D缺乏(奈瑟氏菌感染)、备解素缺乏(奈瑟氏菌感染)、MBP缺乏(化脓感染)和MASP2缺乏。在一个实施方案中，所述自身炎症性疾病选自下组Cl、C2、C3和 C4缺乏。在本发明的一个实施方案中，要进行疫苗接种的免疫功能受损对象患有影响免疫系统的疾病，其中所述疾病是获得性免疫缺陷病。获得性免疫缺陷可由若干因素引起，包括细菌或病毒感染(如HIV)、癌症(如白血病或骨髓瘤)，其它慢性病还有衰老、营养不良或各种(如糖皮质激素，化疗药物治疗。在本发明具体的实施方案中，要进行疫苗接种的免疫功能受损对象患有选自下组的疾病HIV-感染、获得性免疫缺陷综合征(AIDQ、癌症、慢性心脏病或肺病、充血性心脏衰竭、糖尿病、慢性肝病、酒精中毒、肝硬化、脑脊液漏(spinal fluid leaks)、心肌病、慢性支气管炎、肺气肿、慢性阻塞性肺病(COPD)、脾功能障碍(如镰刀状细胞病)、脾功能缺失 (无脾)、恶性血液病、白血病、多发性骨髓瘤、霍奇金病、淋巴瘤、肾衰竭、肾病综合征和哮喘。在具体的实施方案中，要进行疫苗接种的免疫功能受损对象患有选自下组的疾病脾功能障碍(如镰刀状细胞病)、脾功能缺失(无脾)、白血病、多发性骨髓瘤、霍奇金病和淋巴瘤。在优选的实施方案中，要进行疫苗接种的免疫功能受损对象患有HIV-感染或获得性免疫缺陷综合征(AIDS)。在具体的实施方案中，要进行疫苗接种的免疫功能受损对象患有HIV-感染或获得性免疫缺陷综合征(AIDS)并且在进行治疗，所述治疗由如下组成接受至少一种选自下组的抗反转录病毒药物非核苷反转录酶抑制剂、蛋白酶抑制剂和核苷类似物反转录酶抑制剂(例如阿巴卡韦(abacavir)。在具体的实施方案中，所述治疗由接受至少3种药物组成所述药物属于至少两类选自下组的抗反转录病毒药物非核苷反转录酶抑制剂、蛋白酶抑制剂和核苷类似物反转录酶抑制剂(例如阿巴卡韦)。在具体的实施方案中，所述治疗由如下所组成接受至少两种核苷类似物反转录酶抑制剂加上蛋白酶抑制剂或非核苷反转录酶抑制剂。在具体的实施方案中，要进行疫苗接种的免疫功能受损对象患有HIV-感染或获得性免疫缺陷综合征(AIDS)并且在进行高活性抗反转录病毒治疗(HAART)。在一个实施方案中，所述HAART由3种药物方案组成，其包括非核苷反转录酶抑制剂、蛋白酶抑制剂和/ 或核苷类似物反转录酶抑制剂(例如阿巴卡韦)或者由2种药物方案组成，其包括非核苷反转录酶抑制剂和蛋白酶抑制剂的组合。在具体的实施方案中，要进行疫苗接种的免疫功能受损对象患有HIV-感染或获得性免疫缺陷综合征(AIDQ并且未进行高活性抗反转录病毒治疗(HAART)或者未进行抗反转录病毒治疗，或者所述对象从未暴露于抗反转录病毒药物。在具体的实施方案中，要进行疫苗接种的免疫功能受损对象是非病毒血性HIV感染患者。在另一实施方案中，要进行疫苗接种的免疫功能受损对象是病毒血性HIV感染患
者ο在本发明具体的实施方案中，要进行疫苗接种的免疫功能受损对象患有结核病或性传播疾病，例如梅毒或肝炎。在本发明的实施方案中，要进行疫苗接种的免疫功能受损对象患有营养不良。在本发明的实施方案中，要进行疫苗接种的免疫功能受损对象患有衰老。在本发明具体的实施方案中，要进行疫苗接种的免疫功能受损对象是55岁或更老的成年人，更优选65岁或更老的成年人。在一个实施方案中，要进行疫苗接种的免疫功能受损对象是70 岁或更老的成年人、75岁或更老的成年人或者80岁或更老的成年人。在本发明具体的实施方案中，要进行疫苗接种的免疫功能受损对象在接受降低机体对感染的抗性的药物或者治疗。在本发明具体的实施方案中，要进行疫苗接种的免疫功能受损对象在接受选自下组的药物化疗(例如癌症药物)、缓解疾病抗风湿药物、器官移植后的免疫阻抑药物和糖皮质激素。在本发明的实施方案中，要进行疫苗接种的免疫功能受损对象在接受选自下组的口服免疫阻抑药物他克莫司(tacrolimus) (Prograf)、霉酚酸吗乙酯(CellC印t)、西罗莫司(sirolimus) (Rapamune)、强的松、环抱菌素(cyclosoporine) (Neoral, Sandimmune, Gengraf)和硝基咪唑硫嘌呤(Imuran)。在一个实施方案中，免疫功能受损对象在接受至少 2种或3种所述口服免疫阻抑药物。在本发明的实施方案中，要进行疫苗接种的免疫功能受损对象在接受选自下组的免疫阻抑药物依维莫司(Everolimus)、霉酚酸、皮质类固醇(如强的松龙或氢化可的松)、 单克隆抗-IL-2Ra受体抗体(如巴利昔单抗或达克珠单抗)、抗胸腺细胞球蛋白(ATG)和抗淋巴细胞球蛋白(ALG)。在一个实施方案中，免疫功能受损对象在接受至少2种或3种所述免疫阻抑药物。在本发明具体的实施方案中，要进行疫苗接种的免疫功能受损对象已经进行了器官移植或者骨髓移植或耳蜗植入。在本发明具体的实施方案中，要进行疫苗接种的免疫功能受损对象已经进行了放射治疗。在本发明具体的实施方案中，要进行疫苗接种的免疫功能受损对象是吸烟者。在本发明具体的实施方案中，要进行疫苗接种的免疫功能受损对象患有哮喘并经口服皮质类固醇疗法治疗。在本发明具体的实施方案中，要进行疫苗接种的免疫功能受损对象是阿拉斯加本地人或美洲印第安人。在本发明具体的实施方案中，要进行疫苗接种的免疫功能受损对象具有低于5X IO9个细胞每升的白细胞计数(白细胞(leukocyte)计数)、或者低于4X IO9个细胞每升、或者低于3X IO9个细胞每升、或者低于2X IO9个细胞每升、或者低于1 X IO9个细胞每升、或者低于0. 5X IO9个细胞每升、或者低于0. 3X IO9个细胞每升、或者低于0. 1 X IO9个
细胞每升。白细胞计数(白细胞计数)血液中白细胞(WBC)的数目。WBC通常被测量为CBC(全血液计数)的部分。白细胞是血液中的抗感染细胞并且与已知为红细胞 (erythrocyte)的(携氧)红细胞不同。有不同类型的白细胞，包括中性粒细胞(多形核白细胞；PMN)、杆状白细胞(稍微不成熟的中性粒细胞)、T-型淋巴细胞(Τ细胞)、Β-型淋巴细胞(B细胞)、单核细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞。所有类型的白细胞都在所述白细胞计数中体现出来。白细胞计数的正常范围通常在每立方毫米血液4，300-10, 800个细胞之间。这也可以称作是白细胞计数并且可以用国际单位表示为4. 3-10. 8X IO9个细胞每升。在本发明具体的实施方案中，要进行疫苗接种的免疫功能受损对象患有中性粒细胞减少症。在本发明具体的实施方案中，要进行疫苗接种的免疫功能受损对象具有低于 2X IO9个细胞每升的中性粒细胞计数、或者低于1 X IO9个细胞每升、或者低于0. 5Χ IO9个细胞每升、或者低于0. 1 X IO9个细胞每升、或者低于0. 05X IO9个细胞每升。低白细胞计数或者“中性粒细胞减少症”是这样的病症，其特征在于循环血液中异常低水平的中性粒细胞。中性粒细胞是一种特定的白细胞，其辅助预防和抵抗感染。癌症患者经受中性粒细胞减少症的最常见的原因是化疗的副作用。化疗诱导的中性粒细胞减少症提高了患者感染的风险并中断癌症治疗。血液中的中性粒细胞越少则患者会越长时间持续没有足够的中性粒细胞，从而患者更加易于发展出细菌或真菌感染。中性粒细胞是抗细菌防卫机制的主要成分。在中性粒细胞计数降至低于1. 0、0. 5和0. 1 X 109/L时，威胁生命的感染的频率分别迅速地从10%升至 19%和 28%o在本发明具体的实施方案中，要进行疫苗接种的免疫功能受损对象具有低于500/ mm3的CD4+细胞计数、或者低于300/mm3的CD4+细胞计数、或者低于200/mm3的CD4+细胞计数、低于100/mm3的CD4+细胞计数、低于75/mm3的CD4+细胞计数、或者低于50/mm3的CD4+ 细胞计数。⑶4细胞测试通常被报道为mm3中的细胞数目。正常的⑶4计数在500-1600之间， 而⑶8计数在375-1100之间。⑶4计数在具有HIV的人中剧烈地降低。在本发明实施方案中，本文所公开的任何免疫功能受损对象是人类男性或人类女性。方案在一些情况中，需要少至一剂的本发明的疫苗，但是在某些情况中，如较严重的免疫缺陷的状况，可以提供第二、第三、或第四剂。在一个实施方案中，初始剂量在第0天提供，并以约2-约M周范围的间隔提供一或多次加强，优选以4-8周的间隔给药。在一个实施方案中，初始剂量在第0天提供并在约 3个月后提供加强。如实施例部分所示，目前疫苗接种的一些缺点可以用本发明的疫苗来克服。特别
35是本发明的疫苗可以降低所需的疫苗接种的次数用以实现血清保护、加快血清转换、可能允许暴露后疫苗接种、降低无应答者的比例、降低所需的抗原量、提高抗体亲和力和保护活性和/或导致更持久的抗体水平。这些优点在治疗免疫功能受损患者时尤其令人感兴趣。
实施例^MM 1.在HIV-感染的成人中对Toll-样等体9-激动弃IK乍为佐剂的肺炎球菌疮苗梓种的免疮应答已进行了 96例HIV感染患者的II期研究。目标主要目标 在CpG 7909组对对照组中比较疫苗高应答者的数目-疫苗高应答者定义为对于 7种肺炎球菌血清型中的至少5种有2倍的提高和IgG水平> 1 μ g/mL (通过定量的IgG测
量)O次要目标·比较对于有或没有CpG 7909的肺炎球菌疫苗接种的定量(功能性)抗体应答·评价CpG 7909作为肺炎球菌疫苗佐剂的安全性和耐受·分析在肺炎球菌疫苗接种后肺炎球菌载体状况中的变化主要评估参数效力主要的特异性抗荚膜抗体(7种血清型)的定量测量次要的特异性抗荚膜抗体(肺炎球菌血清型6B、14、19F和23F)的功能活性；不良的并且严重的不良事件的数目和强度；肺炎球菌咽部建群(pharangyal colonization) 中的微生物变化，基准⑶4-计数和s⑶163的测量安全性/耐受性不良事件(AE)；严重不良事件(SAE)；实验室测试(血液学、临床化学即病毒负载 (HIV RNA)和CD4-计数)；体检。研究设计安慰剂-对照的、随机的、双盲研究。总样本量96个参与者(每组48 个)。测试药物和配制物配制在PBS缓冲液中的CpG 7909 (合成的Toll-样受体9_激动剂)。CPG 7909 是序列为 5' -TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT-3 ‘ (SEQ ID NO 5)的 B-类 CpG ODN并且已用完全的硫代磷酸酯骨架合成。测试药物剂量Img CpG 7909 (100 μ 1)与每种肺炎球菌疫苗接种混合。对照具有每种肺炎球菌疫苗的100 μ 1中性PBS缓冲液(与测试药物在颜色和粘
度上一致)。施用途径肌肉注射。知情双盲研究。分组登记随机；将有资格的患者以1 1的比例随机化的接受有或没有CpG 7909的肺炎球菌疫苗接种。免疫
根据厂商描述将疫苗保存在其初始容器中并在免疫前即刻与佐剂(CpG 7909或安慰剂)混合。根据对象的意愿在左侧或右侧的上三角肌进行免疫。对每个参与者实验的期限从第一次疫苗接种至最后的随访共10个月。对象从研究中退出从分析的角度，从研究中“退出”是指没有回来进行计划中预计的结论性访问的任何对象。从退出/最后联络的日期起，当对于对象没有进行研究程序、没有进行随访并且没有收集进一步的信息时，则此对象符合从研究中“退出”的条件。退出者没有被替换。对象从研究产物退出从研究产物退出是指没有接受完整治疗的任何对象，即从退出日期起没有进一步施用计划的剂量。从研究产物退出的对象可以不必须从研究中退出，因为如果在计划中有安排则可以进行进一步的研究程序或者随访(安全性或者免疫原性)。包括在案例报告表中的数据·生日、性别、种族、身高、体重、研究编号·对象报告的不良事件包括起始点和期限(至消退的时间)·在体检期间的阳性发现·病历 在研究期间于研究外所接受的其它疫苗接种·在研究期间内常规用药的任何变化·在研究/第一次疫苗接种的开始之前在对象中所表现出的预先存在的病症或迹象和/或症状·在研究期间内的所有实验室发现参与者加入标准1)使用伦理委员会许可的参与者信息单和知情同意表按照地方监管和伦理实践来提供书面知情同意和授权声明。2)年龄> 18周岁的男性或女性参与者。
3) HIV-血清阳性个体参与者排除标准1)由阳性尿液β _hCG(若为女性)所确定的怀孕。2)参与者在试验期间不愿意使用可靠的避孕方法。生育控制的可靠方法包括药理学避孕药，包括口服、肠胃外和经皮递送；有杀精子剂的避孕套；有杀精子剂的隔膜；手术绝育；阴道环；子宫内装置；禁欲和绝经后期(若为女性)。3)目前正在哺乳(若为女性)。4)最近的 CD4 计数< 200X IO6 细胞/μ L5)若处于HAART (定义为至少3种抗反转录病毒剂，包括蛋白酶抑制剂或NNRTI， 即双汰芝300/150mgX2+施多宁600mgX 1最少6个月)病毒负载(HIV RNA) > 50拷贝/ ml ο6)先前曾加入此研究。
7)由首席研究者判断会妨碍研究目标评价的任何医学、精神病学、社会学或职业状况或其它责任(如严重的酒精滥用、严重的药物滥用、痴呆)。8)不能遵从计划方案9)在加入前5年或更短期内有肺炎球菌疫苗接种10)在此研究期间计划参与其它疫苗接种过程通过加入/排除标准的同意的参与者加入本研究。在进行免疫前抽取用于基准参数测量的血液样品。经随机选择，将参与者以1 1分配至两种研究方案之一·实验组2剂的7-价缀合物肺炎球菌疫苗接种(I^revenar ffyeth) +Img CpG 7909 (第O天)，2剂的7-价缀合物肺炎球菌疫苗接种(Prevenar ffyeth) +Img CpG 7909 (第 90 天)和 1 剂的 23-价多糖疫苗(Pneumo Novum Sanofi Pasteur MSD) +Img CpG 7909 (第 270 天)·对照组2剂的7-价缀合物肺炎球菌疫苗接种(I^revenar ffyeth) +100 μ 1的安慰剂(第O天)，2剂的7-价缀合物肺炎球菌疫苗接种1的安慰剂(第 90天)和 1 剂的 23-价多糖疫苗(Pneumo Novum (g), SanofiPasteur MSD)+100 μ 1 的安慰剂(day 270)。由医师进行血液样品抽取和随访，包括体检和病历、AE (不良事件)/SAE (严重不良事件)的登记、在本研究外的疫苗接种历史以及任何其它可与CRF中的文档相关的信息。 在第300天进行结论性拜访。返回进行结论性拜访或者在此计划中预见可进行结论性联系的对象被认为是完成了此研究。疫苗和测试药物/安慰剂注射所有对象在第0、90和270天进行给药。所有的免疫都在右臂或左臂(根据参与者的偏好)的三角肌中完成。·在第0和90天研究参与者接受一次双剂量I^revenar 1. 0ml+0. Iml测试药物 (CpG 7909)/安慰剂的肌内注射。在两种情况中，注射入臂部的体积都是1.1ml。·在第 270 天参与者接受一次 0. 5ml Pneumo Novum+0. Iml 测试药物(CpG7909)/ 安慰剂的肌内注射。在所有情况中，注射入臂部的体积都是1. Iml0研究者和参与者不知道施用的是实验或对照注射。每个注射产品的体积和外观都是相同的。主要效力参数和抗体应答的分析本研究能够在肺炎球菌疫苗高应答者中检测实验组和对照组之间的差异，所述疫苗高应答者定义为对于7种肺炎球菌血清型中的至少5种有2倍的提高和IgG水平> 1 μ g/ mL(通过定量的IgG测量)。本研究不能检测肺炎或者确认的侵入性/非侵入性肺炎球菌性疾病的发病率的差异。这将需要非常大量的参与者和更长的随访期。对肺炎球菌疫苗接种的免疫应答的最常用的测量是血清型特异性抗荚膜抗体的定量检测。最近的数据表明可以通过加入22F吸收步骤来改善此方法的特异性；由此去除低亲和力的交叉反应抗体。定量的血清型特异性 IgG 测量由 Matens Serum lnstitut (SSI)，Copenhagen，Denmark 使用加入了 22F吸收步骤的ELISA来完成。SSI对于治疗分配不知情。
次要效力参数和抗体应答的分析测量血清型特异性抗荚膜抗体的定量的量并不会给出抗体功能性的任何信息。这可以通过流式细胞术调理吞噬测定法来测量并对于抗体调理以及促进杀死侵入性肺炎球菌的能力给出间接信息。使用流式细胞术调理吞噬测定法来完成定性分析，所述测定法测量血清型特异性抗体的功能性(调理吞噬)活性(OPA)。简言之在OPA缓冲液中从10 μ 1测试血清进行 8次二倍稀释。将含有IXlO5的每种目标肺炎球菌血清型或肺炎球菌多糖缀合珠的多细菌或多珠悬浮液的20 μ 1等分试样加入到每个孔，并将平板在37°C以水平摇动QOOrpm) 温育一小时。此后，将来自3至4周大的幼兔血清的20 μ 1无菌血清(Pel-Freez，Brown Deer, Wis.)加入每个孔，除了 HL60细胞对照孔(其接受20 μ 1的OPA缓冲液。在37°C摇动(在轨道摇动器上200rpm)温育20min后，将30 μ 1经洗涤的HL60多形核白细胞(PMN) Ο.5μ104/πι1)加入每个孔，得到1 4的效应物对靶的比例(对于每种靶类型)。最终孔体积是80 μ 1，系列稀释的第一个孔含1 8的最终稀释度。继而将该平板于37°C摇动温育60min。将另外的80 μ 1 OPA缓冲液加入到每个孔以提供足够的体积用于流式细胞术分析并将孔内容物转移至微滴定管(Bio-Rad，Hercules, Calif.)。每平板可测定达12种血清样品，包括质量控制样品。通过Flow Applications, Inc, III，USA51来完成流式分析。肺炎球菌承载(CARRIAGE)肺炎球菌疫苗接种可影响肺炎球菌的咽部承载。肺炎球菌咽部建群也可以影响对肺炎球菌疫苗接种的免疫应答。因此在肺炎球菌疫苗接种之前和之后确定携带者 (carrier)状况是很重要的。使用 BBL 培养物交换(BBL culture swap) (Becton Dickson Microbiology Systems, Cockeysville, MD, USA)经口腔测试了后咽部中的口咽建群。 用个体研究ID数字来标记样品，在几小时内冷冻于-20°C并随后运至Matens Serum hstitut，在该处进行分离、培养和血清分型。这在第0天进行并在第270天的随访期间再次进行。不良事件(AE):AE是临床研究对象中的任何不利医学事件，与医药产品的使用有短暂关联，无论认不认为与该医药产品相关。因此AE可以是任何不利的和非故意的迹象(包括异常的实验室发现)、症状或疾病(新的或者恶化的)，其与医药产品的使用有短暂关联。在本研究中，根据Common Toxicity Criteria 2.0 版来将 AE 分级。严重不良事件(SAE)定义在临床试验期间发生的不良事件是与参与者中使用的医药产品关联的任何不期望的体验。当参与者的结果如下时，则该事件是严重的并将报告给监管部门1.死亡2.威胁生命3.入院治疗(起初或拖延的)4.残疾5.需要介入以防止永久性损伤或伤害6.先天性病症/异常(对于怀孕的妇女)
疑似意外严重不良事件反应(SUSAR)定义在本研究期间发生的疑似意外严重不良事件反应(SUSAR)并且要进行报告·该事件必须是SAE。·该事件必须有某种程度的可能性是对施用的药物的不良反应。该不良反应必须是意料之外的，也就是说，在研究者的手册中未曾预见的(对于未经许可的医药产品)。数据评估用于目标评估的标准在实验疫苗组(+CpG 7909)和对照疫苗组(+安慰剂)之间对比了所有的终末点。分研究(substudy)在两个(未随机化的)治疗组(处于HAART对非HAART)中比较了终末点。主要终末点在用I^revenar第二次疫苗接种后6个月。·肺炎球菌疫苗高应答者定义为对于7种肺炎球菌血清型中的至少5种有2倍的提高和IgG水平> 1 μ g/ml (通过定量的IgG测量)次要终末点免疫原性在用I^revenar第一次疫苗接种后3个月。·肺炎球菌疫苗高应答者定义为对于7种肺炎球菌血清型中的至少5种有2倍的提高和IgG水平> 1 μ g/ml (通过定量的IgG测量)·血清型6B、14、19F和23F的调理吞噬活性表示为效价·血清型-特异性抗体应答定义为2倍的提高和IgG水平> 1 μ g/ml·血清型-特异性抗体应答定义为IgG水平的变化在用I^revenar第二次疫苗接种后6个月。·血清型6B、14、19F和23F的调理吞噬活性表示为效价·血清型-特异性抗体应答定义为2倍的提高和IgG水平> 1 μ g/ml·血清型-特异性抗体应答定义为IgG水平的变化在用Pneumo Novum疫苗接种后1个月。·肺炎球菌疫苗高应答者定义为对于7种肺炎球菌血清型中的至少5种有2倍的提高和IgG水平> 1 μ g/ml (通过定量的IgG测量)·血清型6B、14、19F和23F的调理吞噬活性表示为效价·血清型-特异性抗体应答定义为2倍的提高和IgG水平> 1 μ g/ml·血清型-特异性抗体应答定义为IgG水平的变化 用标准酶免疫测定法对于血清型1、4、7F、9V、14、18C和19F的几何平均抗体浓度咽部建群在用I^revenar第二次疫苗接种后6个月。·有肺炎球菌建群的个体的数目抗体应答的预报因子在基准处。·在用ft~eVenar第二次疫苗接种后6个月对于疫苗应答的风险因子，
40
次要终末点在所有对象中反应原性和安全性分析人群安全性人群接受了至少一次疫苗接种的所有患者。·在每次疫苗接种剂量后4天(第0至第3天)期间引发的和一般性症状的发生·在每次疫苗接种后达1个月非引发症状的发生·在本研究期间CD4计数和病毒负载的变化通过体检、不良事件(根据common toxicity criteria 2. 0版)、实验室测试、和 HIV控制参数(HIV RNA和⑶4-计数)来评估安全性。统计分析基准特征通过Marm-Whitney秩和检验(连续变量)和x 2检验(二分和分类变量)来评估第0天研究组之间的差异。主要终末点在用ft~evenar第二次疫苗接种后6个月高应答者的普遍性比率(比较2个疫苗接种方案组(有/无CpG 7909))已通过X2检验进行评估。计划了通过年龄所调节的泊松回归模型、处于基准的CD4细胞计数和处于基准的HAART (HAART对非HAART)。次要终末点通过X2检验进行了研究组之间终末点的对比。计划了对适当潜在混杂数据 (confounder)进行调整的泊松回归(二分终末点)或线性回归(连续终末点)。对于在用ft~eVenar第二次疫苗接种后6个月实现高疫苗接种应答(分类为高应答者)的风险因子将通过多变量泊松回归来评估。安全性数据安全性数据已被列出并通过X 2检验进行对比。估计的样品大小意向处理(Intention-to-treat，ITT)群体所有随机化的参与者对主要终末点计算了样品大小(在用ft~eVenar第二次疫苗接种后6个月高应答者的普遍性比率(比较2个疫苗接种方案组))。将I类错误和II类错误的概率设定为· I类错误概率(α ) = 0. 05 (双侧)。· II类错误概率(β) 二化加丨幂二^日=0.80)。 主要终末点疫苗高应答者的比例(定义为对于7种肺炎球菌血清型中的至少5 种有2倍的提高和IgG水平> 1 μ g/ml)。· N是每组中需要的参与者的数目。对照\CpG0.500.550.600.650.700.2039292318150.2558413124190.3093614231240.35170966243310.40388173976242假设对照疫苗组中的普遍性为30%而实验疫苗组的普遍性为60%，则需要每组 42个参与者的样品大小来检测由泊松回归所评估的普遍性中的差异。预期的中途缺失百分比设定为10%。因此，本研究需要总共94个对象。依照监管部门所建议的途径，计算了免疫应答差异的双侧95%置信区间(Cl)。t施仿Il 2 :TLR9_佐剂化的肺炎球菌疮苗在感染HIV的成人中的免,疮原t牛禾Π安Φ 件。随机化的、双盲的、安慰剂-对照实验的结果进行了实施例1中所描述的临床试验。该研究是安慰剂-对照II期实验，将患有HIV的人员随机化用双剂的PCV(肺炎球菌缀合物疫苗)(Prevnar) 士 Img CpG 7909在第0和第3个月以及用单剂的PPV (肺炎球菌多糖疫苗)士 Img CpG 7909在第9个月进行疫苗接种。免疫原性和安全性在第0、3、4、9 和10个月评估。主要终末点在第9个月与疫苗高应答者成比例，所述疫苗高应答者定义为对于7种PCV血清型中的至少5种有2倍的提高和IgG水平> 1 μ g/ml (通过ELISA的定量 IgG, Statens Serum Institute, Copenhagen, Denmark)。结果如表1所示，包括了 96个参与者。在48个参与者的每组中38个处于ART。表1在加入时的基准特征
权利要求
1.一种肺炎球菌疫苗，其包含至少一种缀合的荚膜糖肺炎球菌抗原和至少一种TLR-9 激动剂作为佐剂。
2.权利要求1的肺炎球菌疫苗，其中所述至少一种TLR-9激动剂包含CpG寡核苷酸、优选为本文公开的任何CpG寡核苷酸或由其所组成。
3.权利要求2的肺炎球菌疫苗，其中所述CpG寡核苷酸是A、B、C或P类CpG免疫刺激性寡核苷酸。
4.权利要求3的肺炎球菌疫苗，其中所述CpG寡核苷酸是B类CpG免疫刺激性寡核苷酸，优选是本文所公开的任何B类CpG寡核苷酸。
5.权利要求3的肺炎球菌疫苗，其中所述A、B、C或P类的CpG寡核苷酸在5'端包含 E修饰。
6.权利要求4的肺炎球菌疫苗，其中所述CpG寡核苷酸具有选自下组的核酸序列5 ‘ TCGTCGTTTTTCGGTGCTTTT 3 ‘ (SEQ ID N0:3)、5 ‘ TCGTCGTTTTTCGGTCGTTTT 3 ‘ (SEQ ID N0:4)、5 ‘ TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT 3 ‘ (SEQ ID NO :5)、 5 ‘ TCGTCGTTTCGTCGTTTTGTCGTT 3 ‘ (SEQ ID NO 6)和 5 ‘ TCGTCGTTTTGTCGTTTTTTTCGA 3' (SEQ ID NO :7)。
7.权利要求4的肺炎球菌疫苗，其中所述CpG寡核苷酸选自下组5'3' (SEQ ID NO8)、或5'3' (SEQ ID NO:9)、或5'(SEQIDNO :10)、或5'(SEQIDNO:11)、或5'(SEQIDNO:12)/其中*是指硫代磷酸酯键。
8.权利要求3或5的肺炎球菌疫苗，其中所述CpG寡核苷酸是C类CpG免疫刺激性寡核苷酸，优选是本文所公开的任何C类CpG寡核苷酸。
9.权利要求8的肺炎球菌疫苗，其中所述CpG寡核苷酸具有选自下组的核酸序列 5' TCGCGTCGTTCGGCGCGCGCCG 3' (SEQ ID NO: 13)，5' TCGTCGACGTTCGGCGCGCGCCG 3' (SEQ ID NO :14)， 5' TCGGACGTTCGGCGCGCGCCG 3' (SEQ ID NO :15)， 5' TCGGACGTTCGGCGCGCCG 3' (SEQ ID NO :16)， 5' TCGCGTCGTTCGGCGCGCCG 3' (SEQ ID NO :17)， 5' TCGACGTTCGGCGCGCGCCG 3' (SEQ ID NO :18)， 5' TCGACGTTCGGCGCGCCG 3' (SEQ ID NO :19)， 5' TCGCGTCGTTCGGCGCCG 3' (SEQ ID NO :20)， 5' TCGCGACGTTCGGCGCGCGCCG 3' (SEQ ID NO :21). 5' TCGTCGTTTTCGGCGCGCGCCG 3' (SEQ ID NO :22)， 5' TCGTCGTTTTCGGCGGCCGCCG 3' (SEQ ID NO :23)， 5' TCGTCGTTTTACGGCGCCGTGCCG 3' (SEQ ID NO :24)禾口 5' TCGTCGTTTTCGGCGCGCGCCGT 3' (SEQ ID NO :25)。
10.权利要求8的肺炎球菌疫苗，其中所述CpG寡核苷酸选自下组5' T*C_G*C_G*T*C_G*T*T*C_G*G*C*G*C_G*C*G*C*C*G 3‘ (SEQ ID NO 26)， 5' T*C_G*T*C_G*A*C_G*T*T*C_G*G*C*G*C_G*C*G*C*C*G 3‘ (SEQ ID NO 27)， 5' T*C_G*G*A*C_G*T*T*C_G*G*C*G*C_G*C*G*C*C*G 3‘ (SEQ ID NO 28)， 5' T*C_G*G*A*C_G*T*T*C_G*G*C*G*C*G*C*C*G 3' (SEQ ID NO :29)， 5'3' (SEQ ID NO :30)，5' T*C_G*A*C_G*T*T*C_G*G^>G*C_G*OG^>OG 3' (SEQ ID NO :31)， 5' T*C_G*A*C_G*T*T*C_G*G*C*G*C*G*C*C*G 3' (SEQ ID NO :32)， 5' T*C_G*C_G*G*C_G*T*T*C_G*G*C*G*C*C*G 3' (SEQ ID NO :33)， 5' T*C_G*C_G*A*C_G*T*T*C_G*G*C*G*C_G*C*G*C*C*G 3' (SEQ ID NO :34)， 5'3' (SEQ ID NO 35),5'3' (SEQ ID NO :36)，5' T*C*G*T*C_G*T*T*T*T*A*C_G*G*C*G*C*C_G*T*G*C*C*G 3' (SEQ ID NO :37)禾口 5'3' (SEQ ID NO 38)其中*是指硫代磷酸酯键并且_是指磷酸二酯键。
11.权利要求3或5的肺炎球菌疫苗，其中所述CpG寡核苷酸是P类CpG免疫刺激性寡核苷酸，优选是本文所公开的任何P类CpG寡核苷酸。
12.权利要求11的肺炎球菌疫苗，其中所述CpG寡核苷酸具有核酸序列 5' TCGTCGACGATCGGCGCGCGCCG 3' (SEQ ID NO :39)。
13.权利要求11的肺炎球菌疫苗，其中所述CpG寡核苷酸是5' T*C_G*T*C_G*A*C_G*A*T*C_G*G*C*G*C_G*C*G*C*C*G 3‘ (SEQ 10而40)，其中*是指硫代磷酸酯键并且_是指磷酸二酯键。
14.前述权利要求中任一项的肺炎球菌疫苗，其中所述CpG寡核苷酸的核苷酸间连接是磷酸二酯、硫代磷酸酯、甲基磷酸酯、甲基硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、P"乙氧基或其组I=I O
15.前述权利要求中任一项的肺炎球菌疫苗，其中所述至少一种CpG寡核苷酸是6至 100个核苷酸长，或优选8至30个核苷酸长。
16.前述权利要求中任一项的肺炎球菌疫苗，其包含0.2mg至IOmg的CpG寡核苷酸，优选大约Img的CpG寡核苷酸。
17.前述权利要求中任一项的肺炎球菌疫苗，其中所述缀合的荚膜糖肺炎球菌抗原源自至少7种血清型的肺炎链球菌(S. pneumoniae)。
18.前述权利要求中任一项的肺炎球菌疫苗，其包含来自7、8、9、10、11、12、13、14、15、 16、17、18、19、20、21、22或23种不同血清型的肺炎链球菌的荚膜糖抗原。
19.前述权利要求中任一项的肺炎球菌疫苗，其包含来自11、7或13种不同血清型的肺炎链球菌的荚膜糖抗原。
20.前述权利要求中任一项的肺炎球菌疫苗，其中所述荚膜糖抗原独立地缀合至本文所述的任何一种载体蛋白。
21.前述权利要求中任一项的肺炎球菌疫苗，其包含来自血清型4、6B、9V、14、18C、19F 和23F的缀合的肺炎链球菌糖。
22.权利要求20的肺炎球菌疫苗，其另外包含来自血清型1的缀合的肺炎链球菌糖。
23.权利要求21-22任一项的肺炎球菌疫苗，其另外包含来自血清型5的缀合的肺炎链球菌糖。
24.权利要求21-23任一项的肺炎球菌疫苗，其另外包含来自血清型7F的缀合的肺炎链球菌糖。
25.权利要求2114任一项的肺炎球菌疫苗，其另外包含来自血清型3的缀合的肺炎链球菌糖。
26.权利要求21-25任一项的肺炎球菌疫苗，其另外包含来自血清型6A的缀合的肺炎链球菌糖。
27.权利要求2146任一项的肺炎球菌疫苗，其另外包含来自血清型19A的缀合的肺炎链球菌糖。
28.权利要求21-27任一项的肺炎球菌疫苗，其另外包含来自血清型22F的缀合的肺炎链球菌糖。
29.权利要求21- 任一项的肺炎球菌疫苗，其另外包含来自血清型15的缀合的肺炎链球菌糖。
30.权利要求21- 任一项的肺炎球菌疫苗，其另外包含来自血清型8的缀合的肺炎链球菌糖。
31.权利要求21-30任一项的肺炎球菌疫苗，其另外包含来自血清型12F的缀合的肺炎链球菌糖。
32.权利要求21-31任一项的肺炎球菌疫苗，其另外包含来自血清型2的缀合的肺炎链球菌糖。
33.权利要求21-32任一项的肺炎球菌疫苗，其另外包含来自血清型9N的缀合的肺炎链球菌糖。
34.权利要求21-33任一项的肺炎球菌疫苗，其另外包含来自血清型IOA的缀合的肺炎链球菌糖。
35.权利要求21-34任一项的肺炎球菌疫苗，其另外包含来自血清型1IA的缀合的肺炎链球菌糖。
36.权利要求21-35任一项的肺炎球菌疫苗，其另外包含来自血清型17F的缀合的肺炎链球菌糖。
37.权利要求21-36任一项的肺炎球菌疫苗，其另外包含来自血清型20的缀合的肺炎链球菌糖。
38.权利要求21-37任一项的肺炎球菌疫苗，其另外包含来自血清型33F的缀合的肺炎链球菌糖。
39.权利要求1-20任一项的肺炎球菌疫苗，其包含来自血清型4、6B、9V、14、18C、19F和 23F的缀合的肺炎链球菌糖。
40.权利要求1-20任一项的肺炎球菌疫苗，其包含来自血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、 14、18C、19A、19F和23F的缀合的肺炎链球菌糖。
41.权利要求1-20任一项的肺炎球菌疫苗，其包含来自血清型1、4、5、6B、7F、9V、14、 18CU9F和23F的缀合的肺炎链球菌糖。
42.权利要求1-20任一项的肺炎球菌疫苗，其包含来自血清型1、3、4、5、68、7 、抓、14、18CU9F和23F的缀合的肺炎链球菌糖。
43.前述权利要求中任一项的肺炎球菌疫苗，其中所述荚膜糖抗原缀合至载体蛋白，所述载体蛋白独立地选自下组TT、DT、CRM197、TT的片段C、WrtD、PhtDE融合体、脱毒肺炎球菌溶血素和蛋白D。
44.前述权利要求中任一项的肺炎球菌疫苗，其中所有荚膜糖抗原均独立地缀合至相同的载体蛋白。
45.前述权利要求中任一项的肺炎球菌疫苗，其中所述荚膜糖抗原缀合至DT(白喉类毒素)O
46.权利要求1-44任一项的肺炎球菌疫苗，其中所述荚膜糖抗原缀合至TT(破伤风类毒素)O
47.权利要求1-44任一项的肺炎球菌疫苗，其中所述荚膜糖抗原缀合至TT的片段C。
48.权利要求1-44任一项的肺炎球菌疫苗，其中所述荚膜糖抗原缀合至蛋白D。
49.权利要求1-44任一项的肺炎球菌疫苗，其中所述荚膜糖抗原缀合至CRM197蛋白。
50.前述权利要求中任一项的肺炎球菌疫苗，其中来自血清型1、2、3、4、5、6B、7F、8、 9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、17F、18C、19A、19F、20、22F、23F 或 33F 的糖缀合至蛋白 D。
51.前述权利要求中任一项的肺炎球菌疫苗，其中来自血清型1、2、3、4、5、6B、7F、8、 9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、17F、18C、19A、19F、20、22F、23F 或 33F 的糖缀合至 CRM 197。
52.前述权利要求中任一项的肺炎球菌疫苗，其中来自至少血清型1和3、1和4、1和 5、1 禾口 6A、1 禾口 6B、1 禾口 7、1 禾口 9V、1 禾口 14、1 禾口 22F、1 禾口 23F、3 禾口 4、3 禾口 5、3 禾口 6A、3 禾口 6B、3禾口 7F、3 禾口 9V、3 禾口 14、3 禾口 22F、3 禾口 23F、4 禾口 5、4 禾口 6A、4 禾口 6B、4 禾口 7F、4 禾口 9V、4 禾口 14、4禾口 22F、4 禾口 23F、5 禾口 6A、5 禾口 6B、5 禾口 7F、5 禾口 9V、5 禾口 14、5 禾口 22F、5 禾口 23F、6A 禾口 6B、6A 禾口 7F、6A 禾口 9V、6A 禾口 14、6A 禾口 22F、6A 禾口 23F、6B 禾口 7F、6B 禾口 9V、6B 禾口 14、6B 禾口 22F、6B 禾口 23F、7F 和 9V、7F 和 14、7F 和 22F、7F 和 23F、9V 和 14、9V 和 22F、9V 和 23F、14 和 22F、14 和 23F或22F和23F的糖缀合至CRM197。
53.前述权利要求中任一项的肺炎球菌疫苗，其中来自至少血清型1、3和4;1、3和5 ； 1、3 禾口 6A ；1、3 禾口 6B ；1、3 禾口 7F、1、3 禾口 9V ；1、3 禾口 14 ；3、4 禾口 7F ；3、4 禾口 5 ；3、4 禾口 7F ；3、4 禾口 9V ；3、4 禾口 14 ；4、5 禾口 7F ；4、5 禾口 9V ；4、5、禾口 14 ；5、7F 禾口 9V ；5、7F 禾口 14 ；7F、9V 禾口 14 ；1、3、 4 禾口 5 ；3、4、5 禾口 7F ；4、5、7F 禾口 9V ；4、5、7F 禾口 14 ；4,5,9V 禾口 14 ；4、7F、9V 禾口 14 ；5、7F、9V 禾口 14 ；或4、5、7F、9V和14的糖缀合至CRM197。
54.前述权利要求中任一项的肺炎球菌疫苗，其中来自至少血清型1和3、1和4、1和 5、1 禾口 6A、1 禾口 6B、1 禾口 7、1 禾口 9V、1 禾口 14、1 禾口 22F、1 禾口 23F、3 禾口 4、3 禾口 5、3 禾口 6A、3 禾口 6B、3禾口 7F、3 禾口 9V、3 禾口 14、3 禾口 22F、3 禾口 23F、4 禾口 5、4 禾口 6A、4 禾口 6B、4 禾口 7F、4 禾口 9V、4 禾口 14、4禾口 22F、4 禾口 23F、5 禾口 6A、5 禾口 6B、5 禾口 7F、5 禾口 9V、5 禾口 14、5 禾口 22F、5 禾口 23F、6A 禾口 6B、6A 禾口 7F、6A 禾口 9V、6A 禾口 14、6A 禾口 22F、6A 禾口 23F、6B 禾口 7F、6B 禾口 9V、6B 禾口 14、6B 禾口 22F、6B 禾口 23F、7F 和 9V、7F 和 14、7F 和 22F、7F 和 23F、9V 和 14、9V 和 22F、9V 和 23F、14 和 22F、14 和 23F或22F和23F的糖缀合至蛋白D。
55.前述权利要求中任一项的肺炎球菌疫苗，其中来自至少血清型1、3和4;1、3和5； 1、3 禾口 6A ；1、3 禾口 6B ；1、3 禾口 7F ；1、3 禾口 9V ；1、3 禾口 14 ；3、4 禾口 7F ；3、4 禾口 5 ；3、4 禾口 7F ；3、4 禾口 9V ；3、4 禾口 14 ；4、5 禾口 7F ；4、5 禾口 9V ；4、5、禾口 14 ；5、7F 禾口 9V ；5、7F 禾口 14 ；7F、9V 禾口 14 ；1、3、·4 禾口 5 ；3、4、5 禾口 7F ；4、5、7F 禾口 9V ；4、5、7F 禾口 14 ；4,5,9V 禾口 14 ；4、7F、9V 禾口 14 ；5、7F、9V 禾口 14 ；或者4、·5、7F、9V和14的糖缀合至蛋白D。
56.前述权利要求中任一项的肺炎球菌疫苗，其包含独立缀合至蛋白D的、来自血清型 4、6B、9V、14、18C、19F 和 23F 的糖。
57.前述权利要求中任一项的肺炎球菌疫苗，其包含独立缀合至CRM197的、来自血清型 4、6B、9V、14、18C、19F 和 23F 的糖。
58.前述权利要求中任一项的肺炎球菌疫苗，其包含独立缀合至蛋白D的、来自血清型 1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F 和 23F 的糖。
59.前述权利要求中任一项的肺炎球菌疫苗，其包含独立缀合至CRM197的、来自血清型 1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F 和 23F 的糖。
60.前述权利要求中任一项的肺炎球菌疫苗，其包含独立缀合至蛋白D的、来自血清型 1、4、5、6B、7F、9V、14、18C、19F 和 23F 的糖。
61.前述权利要求中任一项的肺炎球菌疫苗，其包含独立缀合至CRM197的、来自血清型 1、4、5、6B、7F、9V、14、18C、19F 和 23F 的糖。
62.前述权利要求中任一项的肺炎球菌疫苗，其包含来自血清型1、3、4、5、6B、7F、9V、 14、18C、19F和23F的独立缀合至蛋白D的糖。
63.前述权利要求中任一项的肺炎球菌疫苗，其包含独立缀合至CRM197的、来自血清型 1、3、4、5、6B、7F、9V、14、18C、19F 和 23F 的糖。
64.前述权利要求中任一项的肺炎球菌疫苗，其包含独立缀合至蛋白D的、来自血清型 1、2、3、4、5、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、17F、18C、19A、19F、20、22F、23F 和 33F 的糖。
65.前述权利要求中任一项的肺炎球菌疫苗，其包含独立缀合至CRM197的、来自血清型 1、2、3、4、5、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、17F、18C、19A、19F、20、22F、23F 和 33F的糖。
66.前述权利要求中任一项的肺炎球菌疫苗，其包含独立缀合至蛋白D的来自血清型 1、4、5、6B、7F、9V、14和23F的糖、缀合至破伤风类毒素(TT)的来自血清型18C的糖和缀合至白喉类毒素(DT)的来自血清型19F的糖。
67.前述权利要求中任一项的肺炎球菌疫苗，其包含独立缀合至破伤风类毒素(TT)的来自血清型1、4、5、7F、9V、19F和23F的糖和独立缀合至白喉类毒素(DT)的来自血清型3、 14U8C和6B的糖。
68.前述权利要求中任一项的肺炎球菌疫苗，其中每剂疫苗中缀合物的量为0.1至 1000 μ g的每种糖-蛋白缀合物，优选2至100 μ g、最优选4至40 μ g。
69.前述权利要求中任一项的肺炎球菌疫苗，其中每剂包含0.1至20 μ g、1至10 μ g或 1至5μ g的糖。
70.前述权利要求中任一项的肺炎球菌疫苗，其以0.1-20 μ g、0. 5-10 μ g、0. 5-5 μ g或 1-5 μ g糖的剂量含有每种肺炎链球菌荚膜糖。
71.前述权利要求中任一项的肺炎球菌疫苗，其含有独立缀合至CRM197的来自血清型 4、6B、9V、14、18C、19F* 23F的糖，其中每种肺炎链球菌荚膜糖的剂量为2 μ g，只有6B的剂量是4μ g。
72.权利要求1-70中任一项的肺炎球菌疫苗，其含有独立缀合至CRM197的来自血清型 4、6B、9V、14、18C、19F和23F的糖，其中每种肺炎链球菌荚膜糖的剂量为4 μ g，只有6B的剂量是8μ g。
73.权利要求1-70中任一项的肺炎球菌疫苗，其含有独立缀合至CRM197的来自血清型 4、6B、9V、14、18C、19F和23F的糖，其中每种肺炎链球菌荚膜糖的剂量为6 μ g，只有6B的剂量是12 μ g。
74.权利要求1-70中任一项的肺炎球菌疫苗，其含有独立缀合至CRM197的来自血清型 4、6B、9V、14、18C、19F和23F的糖，其中每种肺炎链球菌荚膜糖的剂量为8 μ g，只有6B的剂量是16 μ go
75.权利要求1-70中任一项的肺炎球菌疫苗，其含有独立缀合至CRM197的来自血清型 1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和23F的糖，其中每种肺炎链球菌荚膜糖的剂量为 21^，只有68的剂量是4 μ g。
76.权利要求1-70中任一项的肺炎球菌疫苗，其含有独立缀合至CRM197的来自血清型 1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和23F的糖，其中每种肺炎链球菌荚膜糖的剂量为 41^，只有68的剂量是8 μ g。
77.权利要求1-70中任一项的肺炎球菌疫苗，其含有独立缀合至CRM197的来自血清型 1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和23F的糖，其中每种肺炎链球菌荚膜糖的剂量为 6口8，只有68的剂量是121^。
78.权利要求1-70中任一项的肺炎球菌疫苗，其含有独立缀合至CRM197的来自血清型 1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和23F的糖，其中每种肺炎链球菌荚膜糖的剂量为 8口8，只有68的剂量是16 μ g。
79.前述权利要求中任一项的肺炎球菌疫苗，其含有5-500μ g、优选10-200 μ g、更优选20-100 μ g的CRM197载体蛋白。
80.前述权利要求中任一项的肺炎球菌疫苗，其含有20-50μ g、优选20-40 μ g、更优选 25-30 μ g、更优选大约观或四μ g的CRM 197载体蛋白。
81.权利要求1-79中任一项的肺炎球菌疫苗，其含有40-100μ g、优选40-80 μ g、更优选50-60 μ g、更优选大约57或58 μ g的CRM 197载体蛋白。
82.前述权利要求中任一项的肺炎球菌疫苗，其含有氯化钠和/或琥珀酸钠缓冲液作为赋形剂。
83.前述权利要求中任一项的肺炎球菌疫苗，其在本文所公开至少一种TLR-9激动剂佐剂之外还包含至少1种、2种或3种佐剂。
84.前述权利要求中任一项的肺炎球菌疫苗，其另外还包含本文所公开的任何另外的佐剂。
85.前述权利要求中任一项的肺炎球菌疫苗，其包含铝、氢氧化铝、磷酸铝或硫酸铝作为所述至少一种TLR-9激动剂佐剂之外的佐剂。
86.前述权利要求中任一项的肺炎球菌疫苗，其含有独立缀合至CRM197的来自血清型 4、6B、9V、14、18C、19F* 23F的糖，其中每种肺炎链球菌荚膜糖的剂量为2 μ g，只有6B的剂量是4 μ g，其另外含有0. 5mg磷酸铝，和任选存在的氯化钠和琥珀酸钠缓冲液作为赋形剂。
87.权利要求1-85中任一项的肺炎球菌疫苗，其含有独立缀合至CRM197的来自血清型~4、6B、9V、14、18C、19F* 23F的糖，其中每种肺炎链球菌荚膜糖的剂量为4 μ g，只有6B的剂量是8 μ g，其另外含有Img磷酸铝，和任选存在的氯化钠和琥珀酸钠缓冲液作为赋形剂。
88.权利要求1-85中任一项的肺炎球菌疫苗，其含有独立缀合至CRM197的来自血清型4、6B、9V、14、18C、19F和23F的糖，其中每种肺炎链球菌荚膜糖的剂量为6 μ g，只有6B的剂量是12 μ g，其另外含有1. 5mg磷酸铝，和任选存在的氯化钠和琥珀酸钠缓冲液作为赋形剂。
89.权利要求1-85中任一项的肺炎球菌疫苗，其含有独立缀合至CRM197的来自血清型 4、6B、9V、14、18C、19F和23F的糖，其中每种肺炎链球菌荚膜糖的剂量为8 μ g，只有6B的剂量是16 μ g，其另外含有ang磷酸铝，和任选存在的氯化钠和琥珀酸钠缓冲液作为赋形剂。
90.权利要求1-85中任一项的肺炎球菌疫苗，其含有独立缀合至CRM197的来自血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和23F的糖，其中每种肺炎链球菌荚膜糖的剂量为2 μ g，只有6B的剂量是4 μ g，其另外含有0. 5mg磷酸铝，和任选存在的氯化钠和琥珀酸钠缓冲液作为赋形剂。
91.权利要求1-85中任一项的肺炎球菌疫苗，其含有独立缀合至CRM197的来自血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和23F的糖，其中每种肺炎链球菌荚膜糖的剂量为4 μ g，只有6B的剂量是8 μ g，其另外含有Img磷酸铝，和任选存在的氯化钠和琥珀酸钠缓冲液作为赋形剂。
92.权利要求1-85中任一项的肺炎球菌疫苗，其含有独立缀合至CRM197的来自血清型 1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和23F的糖，其中每种肺炎链球菌荚膜糖的剂量为g，只有6B的剂量是12 μ g，其另外含有1. 5mg磷酸铝，和任选存在的氯化钠和琥珀酸钠缓冲液作为赋形剂。
93.权利要求1-85中任一项的肺炎球菌疫苗，其含有独立缀合至CRM197的来自血清型 1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和23F的糖，其中每种肺炎链球菌荚膜糖的剂量为g，只有6B的剂量是16 μ g，其另外含有aiig磷酸铝，和任选存在的氯化钠和琥珀酸钠缓冲液作为赋形剂。
94.前述权利要求任一项的肺炎球菌疫苗，其用于预防或治疗由肺炎链球菌感染所引起的疾病。
95.权利要求1-93任一项中的肺炎球菌疫苗，其用于预防或治疗免疫功能受损对象中由肺炎链球菌感染所引起的疾病。
96.权利要求1-93中任一项的肺炎球菌疫苗在制备药物中的用途，所述药物用于预防或治疗由肺炎链球菌感染所引起的疾病。
97.权利要求1-93中任一项的肺炎球菌疫苗在制备药物中的用途，所述药物用于预防或治疗免疫功能受损对象中由肺炎链球菌感染所引起的疾病。
98.权利要求1-93中任一项的肺炎球菌疫苗用于对免疫功能受损对象进行疫苗接种的用途。
99.针对由肺炎链球菌感染所引起的疾病而免疫对象的方法，其包括给所述对象施用免疫保护性剂量的权利要求1-93中任一项的疫苗。
100.针对由肺炎链球菌感染所引起的疾病而免疫免疫功能受损对象的方法，其包括给所述对象施用免疫保护性剂量的权利要求1-93中任一项的疫苗。
101.权利要求95的肺炎球菌疫苗、或者权利要求97或98的用途、或者权利要求100 的方法，其中所述免疫功能受损对象是本文所公开的任何免疫功能受损对象。
102.权利要求95的肺炎球菌疫苗、或者权利要求97或98的用途、或者权利要求100的方法，其中所述免疫功能受损对象是哺乳动物，如猫、绵羊、猪、马、牛、狗、大鼠、小鼠或人。
103.权利要求95的肺炎球菌疫苗、或者权利要求97或98的用途、或者权利要求100 的方法，其中所述免疫功能受损对象是人。
104.权利要求95或103的肺炎球菌疫苗、或者权利要求97、98或103的用途、或者权利要求100或103的方法，其中所述免疫功能受损对象患有影响免疫系统的疾病。
105.权利要求104的肺炎球菌疫苗、或者权利要求104的用途、或者权利要求104的方法，其中所述疾病是本文公开的任何原发免疫缺陷病。
106.权利要求104的肺炎球菌疫苗、或者权利要求104的用途、或者权利要求104的方法，其中所述疾病是获得性免疫缺陷病、优选本文所公开的任何获得性免疫缺陷病。
107.权利要求104或106的肺炎球菌疫苗、或者权利要求104或106的用途、或者权利要求104或106的方法，其中所述疾病选自下组细菌或病毒感染(如HIV)、癌症(如白血病或骨髓瘤)、其它慢性病，还有衰老、营养不良、或各种(如糖皮质激素、化疗)药物治疗。
108.权利要求104或106的肺炎球菌疫苗、或者权利要求104或106的用途、或者权利要求104或106的方法，其中所述疾病选自下组HIV-感染、获得性免疫缺陷综合征 (AIDQ、癌症、慢性心脏病或肺病、充血性心脏衰竭、糖尿病、慢性肝病、酒精中毒、肝硬化、 脑脊液漏、心肌病、慢性支气管炎、肺气肿、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、脾功能障碍(如镰刀状细胞病)、脾功能缺失(无脾)、恶性血液病、白血病、多发性骨髓瘤、霍奇金病、淋巴瘤、肾衰竭、肾病综合征和哮喘。
109.权利要求104或106的肺炎球菌疫苗、或者权利要求104或106的用途、或者权利要求104或106的方法，其中所述疾病选自下组脾功能障碍(如镰刀状细胞病)、脾功能缺失(无脾)、白血病、多发性骨髓瘤、霍奇金病和淋巴瘤。
110.权利要求104或106的肺炎球菌疫苗、或者权利要求104或106的用途、或者权利要求104或106的方法，其中所述疾病是HIV-感染或者获得性免疫缺陷综合征(AIDS)。
111.权利要求104或106的肺炎球菌疫苗、或者权利要求104或106的用途、或者权利要求104或106的方法，其中要进行疫苗接种的免疫功能受损对象患有HIV-感染或获得性免疫缺陷综合征(AIDS)并在进行治疗，所述治疗由如下组成接受至少一种选自下组的抗反转录病毒药物非核苷反转录酶抑制剂、蛋白酶抑制剂和核苷类似物反转录酶抑制剂 (例如阿巴卡韦)。
112.权利要求104或106的肺炎球菌疫苗、或者权利要求104或106的用途、或者权利要求104或106的方法，其中要进行疫苗接种的免疫功能受损对象患有HIV-感染或获得性免疫缺陷综合征(AIDQ并在进行治疗，所述治疗由接受至少3种药物所组成，所述3种药物属于至少两类选自下组的抗反转录病毒药物非核苷反转录酶抑制剂、蛋白酶抑制剂和核苷类似物反转录酶抑制剂(例如阿巴卡韦)。
113.权利要求104或106的肺炎球菌疫苗、或者权利要求104或106的用途、或者权利要求104或106的方法，其中要进行疫苗接种的免疫功能受损对象患有HIV-感染或获得性免疫缺陷综合征(AIDS)并在进行治疗，所述治疗由如下所组成接受至少两种核苷类似物反转录酶抑制剂加上蛋白酶抑制剂或非核苷反转录酶抑制剂。
114.权利要求104或106的肺炎球菌疫苗、或者权利要求104或106的用途、或者权利要求104或106的方法，其中要进行疫苗接种的免疫功能受损对象患有HIV-感染或获得性免疫缺陷综合征(AIDQ并且在进行高活性抗反转录病毒治疗(HAART)，优选由3种药物的方案组成，该方案包括非核苷反转录酶抑制剂、蛋白酶抑制剂和/或核苷类似物反转录酶抑制剂(例如阿巴卡韦)，或者由2种药物的方案组成，该方案包括非核苷反转录酶抑制剂和蛋白酶抑制剂的组合。
115.权利要求104或106的肺炎球菌疫苗、或者权利要求104或106的用途、或者权利要求104或106的方法，其中要进行疫苗接种的免疫功能受损对象患有HIV-感染或获得性免疫缺陷综合征(AIDS)并且未进行高活性抗反转录病毒治疗(HAART)、或者未进行抗反转录病毒治疗、或者所述对象从未暴露于抗反转录病毒药物。
116.权利要求104或106的肺炎球菌疫苗、或者权利要求104或106的用途、或者权利要求104或106的方法，其中要进行疫苗接种的免疫功能受损对象是非病毒血性HIV感染
117.权利要求104或106的肺炎球菌疫苗、或者权利要求104或106的用途、或者权利要求104或106的方法，其中要进行疫苗接种的免疫功能受损对象是病毒血性HIV感染患者ο
118.权利要求104或106的肺炎球菌疫苗、或者权利要求104或106的用途、或者权利要求104或106的方法，其中所述疾病是结核病或性传播疾病，例如梅毒或肝炎。
119.权利要求95、101-118中任一项的肺炎球菌疫苗、或者权利要求97、98、101-118中任一项的用途、或者权利要求100-118中任一项的方法，其中要进行疫苗接种的免疫功能受损对象患有营养不良。
120.权利要求95、101-119中任一项的肺炎球菌疫苗、或者权利要求97、98、101-119中任一项的用途、或者权利要求100-119中任一项的方法，其中要进行疫苗接种的免疫功能受损对象是阳岁或者更老的成年人，更优选是65岁或者更老的成年人。
121.权利要求95、101-120中任一项的肺炎球菌疫苗、或者权利要求97、98、101-120中任一项的用途、或者权利要求100-120中任一项的方法，其中要进行疫苗接种的免疫功能受损对象是70岁或者更老、75岁或者更老或80岁或者更老的成年人。
122.权利要求95、101-121中任一项的肺炎球菌疫苗、或者权利要求97、98、101-121中任一项的用途、或者权利要求100-121中任一项的方法，其中要进行疫苗接种的免疫功能受损对象在接受降低机体对感染的抗性的药物或治疗，特别是选自下组的药物化疗(例如癌症药物)、疾病改性抗风湿药物物、器官移植后的免疫阻抑药物和糖皮质激素。
123.权利要求95、101-122中任一项的肺炎球菌疫苗、或者权利要求97、98、101-122 中任一项的用途、或者权利要求100-122中任一项的方法，其中要进行疫苗接种的免疫功能受损对象在接受选自下组的口服免疫阻抑药物他克莫司(Prograf)、霉酚酸吗乙酯 (CellC印t)、西罗莫司(Rapamune)、强的松、环孢菌素(Neoral，Sandimmune,Gengraf)和硝基咪唑硫嘌呤(Imuran)。
124.权利要求95、101-123中任一项的肺炎球菌疫苗、或者权利要求97、98、101-123中任一项的用途、或者权利要求100-123中任一项的方法，其中要进行疫苗接种的免疫功能受损对象在接受选自下组的免疫阻抑药物依维莫司、霉酚酸、皮质类固醇(如强的松龙或氢化可的松)、单克隆抗-IL-2RCI受体抗体(如巴利昔单抗或达克珠单抗)、抗胸腺细胞球蛋白(ATG)和抗淋巴细胞球蛋白(ALG)。
125.权利要求95、101-1 中任一项的肺炎球菌疫苗、或者权利要求97、98、101-1 中任一项的用途、或者权利要求100-124中任一项的方法，其中所述免疫功能受损对象已经进行了器官移植、或骨髓移植或耳蜗植入。
126.权利要求95、101-125中任一项的肺炎球菌疫苗、或者权利要求97、98、101-125中任一项的用途、或者权利要求100-125中任一项的方法，其中所述免疫功能受损对象已经进行了放疗。
127.权利要求95、101-1沈中任一项的肺炎球菌疫苗、或者权利要求97、98、101-1沈中任一项的用途、或者权利要求100-126中任一项的方法，其中要进行疫苗接种的免疫功能受损对象是吸烟者。
128.权利要求95、101-127中任一项的肺炎球菌疫苗、或者权利要求97、98、101-127中任一项的用途、或者权利要求100-127中任一项的方法，其中要进行疫苗接种的免疫功能受损对象患有哮喘并经口服皮质类固醇疗法治疗。
129.权利要求95、101-1 中任一项的肺炎球菌疫苗、或者权利要求97、98、101-1 中任一项的用途、或者权利要求100-128中任一项的方法，其中要进行疫苗接种的免疫功能受损对象是阿拉斯加本地人或美洲印第安人。
130.权利要求95、101-1四中任一项的肺炎球菌疫苗、或者权利要求97、98、101-1四中任一项的用途、或者权利要求100-129中任一项的方法，其中要进行疫苗接种的免疫功能受损对象具有低于5X IO9个细胞每升的白细胞计数、或者低于4X IO9个细胞每升、或者低于3X IO9个细胞每升、或者低于2X IO9个细胞每升、或者低于1 X IO9个细胞每升、或者低于0. 5X IO9个细胞每升、或者低于0. 3X IO9个细胞每升、或者低于0. IXlO9个细胞每升。
131.权利要求95、101-130中任一项的肺炎球菌疫苗、或者权利要求97、98、101-130中任一项的用途、或者权利要求100-130中任一项的方法，其中要进行疫苗接种的免疫功能受损对象患有中性粒细胞减少症。
132.权利要求95、101-131中任一项的肺炎球菌疫苗、或者权利要求97、98、101-131中任一项的用途、或者权利要求100-131中任一项的方法，其中要进行疫苗接种的免疫功能受损对象具有低于2X IO9个细胞每升的中性粒细胞计数、或者低于1 X IO9个细胞每升、或者低于0. 5X IO9个细胞每升、或者低于0. IXlO9个细胞每升、或者低于0. 05X IO9个细胞每升。
133.权利要求95、101-132中任一项的肺炎球菌疫苗、或者权利要求97、98、101-132中任一项的用途、或者权利要求100-132中任一项的方法，其中要进行疫苗接种的免疫功能受损对象具有低于500/mm3的CD4+细胞计数、或者低于300/mm3的CD4+细胞计数、或者低于200/mm3的CD4+细胞计数、低于100/mm3的CD4+细胞计数、低于75/mm3的CD4+细胞计数、或者低于50/mm3的⑶4+细胞计数。
134.权利要求95、101-133中任一项的肺炎球菌疫苗、或者权利要求97、98、101-133中任一项的用途、或者权利要求100-133中任一项的方法，其中本文所公开的免疫功能受损对象是人类男性或者人类女性。
全文摘要
本发明涉及新的肺炎球菌疫苗。本发明还涉及使用所述新的肺炎球菌疫苗给对象、特别是免疫功能受损对象进行抗肺炎球菌感染的疫苗接种。
文档编号A61K39/39GK102413838SQ201080019071
公开日2012年4月11日 申请日期2010年3月17日 优先权日2009年4月30日
发明者A·M·克里格, H·C·申海德尔, H·L·戴维斯, L·厄斯特高, N·洛泽, O·S·瑟高 申请人:科勒制药集团有限公司