专利名称：作为用于抗微生物肽产生能力的滋补剂的甘草酸的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种用于抗微生物肽产生能力的滋补剂，其用于预防感染发生。
背景技术：
受某种类型的疾病折磨的患者或经历手术的患者通常对致病菌的免疫性降低。同时已知，这些患者极易发生感染，而所述感染几乎不会发生于健康个体。在这种情况下， 所述感染不仅危胁所感染患者本身的生命，而且会导致医院内感染，使得在患者中感染流行，由此导致严重的医疗问题。近来，特别是致病菌例如金黄色葡萄球菌(staphylococcus aurens) ^1 !(Enterococcus faecalis)禾口f同參录{[ΜHfilif (Pseudomonas aeruginosa) 导致的感染特别成为问题。通常，施用抗菌物质来治疗感染，并控制体内致病菌的平衡。但是，对抗菌物质具有耐受性的抗菌剂耐药性细菌的出现限制了抗菌物质的应用，使得现在在各种感染中有效治疗方法的选择的选择方案十分有限。因此强烈需要确立一种新的治疗方法。例如，在烧伤患者中，常常会观察到由铜绿假单胞菌导致的感染，已知甚至在健康个体中绝对不产生问题的非常少量的铜绿假单胞菌也会引发脓毒症等。已经使用小鼠模型详细地分析了烧伤患者中铜绿假单胞菌感染发生的机制。已知在发生烧伤的小鼠中，天然存在于皮肤中的抗微生物肽——鼠β-defencin 1和3 (下文分别缩写为MBD-I和MBD-3)的量在烧伤位点周围的皮肤中显著减少(参见，例如，Kobayashi 等，J. Leukoc. Biol.，(1354-1362)，2008)，人们认为，由此导致的免疫性降低是铜绿假单胞菌感染发生的原因。MBD-I和MBD-3是由表皮角质化细胞产生的，但是人们认为这些肽由于白细胞介素-10 (IL-IO)和趋化因子CCL2的作用而减少，白细胞介素-10 (IL-10)和趋化因子CCL2是由出现于烧伤位点的未成熟髓样细胞(Gr-I+CDllb+细胞)产生的。这样，甚至对于其中抗微生物肽产生量减少作为危机原因之一的感染而言，与相关领域的其他感染情况类似，主要使用的是施用抗菌物质治疗。
发明内容
本发明要解决的问题然而，如上所述，施用抗菌物质的问题在于，可能产生新的抗菌剂耐受性细菌。因此，对于例如具有很高的获得新药物耐受性能力的铜绿假单胞菌，这种风险是特别高的。在大多数感染中，问题在于，没有可以代替施用抗菌物质的有效治疗方法。因此，强烈需要研究高安全性和高有效性的感染发生的预防方法，其可以代替施用抗菌物质。例如，如果患者他/她本身对致病菌的免疫性可以恢复到与健康个体的免疫性水平相当的水平，就认为预防方法有望用于感染发生。此外，至于其中抗微生物肽的产生量降低是发病原因的感染，我们认为重要的是将抗微生物肽的产生量提高到与健康个体的水平相当的水平。然而，还未已知有感染发生的预防方法。本发明就是在这些情况下完成的，本发明的一个目的是提供能增加抗微生物肽产生量的药物。解决问题的方法本发明人进行了详尽的研究来解决上述技术问题，结果，他们发现，用于肝病或变应性疾病且已经被认可其安全性的治疗药物——甘草酸绝对出乎意料地增加小鼠MBD-I和 MBD-3的产生量，由此完成本发明。也就是说，为了解决上述的问题，根据本发明的第一个方面，提供一种用于抗微生物肽产生能力的滋补剂，所述滋补剂包含作为活性成分的化合物，所述化合物是甘草酸或其药学可接受的盐且抑制白细胞介素-10和趋化因子CCL2中的至少一种的产生。所述抗微生物肽优选是防御素或组织蛋白酶抑制素(cathelicidin)。根据本发明的又一个方面，提供抗机会性感染的保护剂，所述保护剂包含作为活性成分的化合物，所述化合物是甘草酸或其药学可接受的盐且抑制白细胞介素-10和趋化因子CCL2中的至少一种的产生。根据本发明的第三个方面，提供一种在个体中恢复抗微生物肽产生能力的方法， 所述方法包括给所述有需要的个体施用有效量的化合物，所述化合物是甘草酸或其药学可接受的盐且抑制白细胞介素-10和趋化因子CCL2中的至少一种的产生。根据本发明的第四个方面，提供一种在个体中保护防止机会性性感染的方法，所述方法包括给所述有需要的个体施用有效量的化合物，所述化合物是甘草酸或其药学可接受的盐且抑制白细胞介素-10和趋化因子CCL2中的至少一种的产生。发明效果根据本发明，可以增加抗微生物肽的产生量，并可以预防感染发生。此外，可以提供预防感染发生的方法，所述方法产生新的抗菌剂耐受性细菌的风险较低，而且高度安全。附图简述
图1的图，显示的是实施例1和比较例1中小鼠的存活率。图2的图，显示的是参照例1-3中小鼠的存活率。图3的图，显示的是参照例4-6中小鼠的存活率。图4的图，显示的是在实施例2和比较例2中获得的小鼠血液样本和小鼠脾勻浆样本中铜绿假单胞菌的量。图5的图，显示的是在实施例3和比较例3中获得的小鼠皮肤组织勻浆液中MBD-I的量。图6的图，显示的是在实施例4，比较例4和参照例7-9中获得的小鼠表皮角质化细胞和/或Gr-I+CDllb+细胞的培养液的上清液中MBD-I的量。图7的图，显示的是在实施例5，比较例5和参照例10-12中获得的小鼠LPS-处理的表皮角质化细胞和/或Gr-Γ⑶Ilb+细胞的培养液的上清液中MBD-3的量。图8的图，显示的是在实施例6-9、比较例6以及参照例7和8中获得的小鼠表皮角质化细胞和Gr-I+CDllb+细胞的培养液的上清液中、或者小鼠的表皮角质化细胞的培养液的上清液中MBD-I的量。图9的图，显示的是在参照例13-15中获得的小鼠Gr-I+⑶lib+细胞的培养液的上清液中IL-4、IL-13、IL-10和CCL2的量。图10的图，显示的是在参照例13-17中获得的小鼠表皮角质化细胞的培养液的上清液中MBD-I的量。图11的图，显示的是在参照例17和参照例18-20中获得的小鼠表皮角质化细胞的培养液的上清液中MBD-I的量。图12的图，显示的是在实施例10和比较例7中获得的小鼠Gr-I+CDllb+细胞的培养液的上清液中CCL2的量。图13的图，显示的是在实施例10和比较例7中获得的小鼠Gr-I+CDllb+细胞的培养液的上清液中IL-10的量。本发明的实施方案本发明的用于抗微生物肽产生能力的滋补剂(下文简称为滋补剂)包含作为活性成分的化合物，所述化合物是甘草酸或其药学可接受的盐并抑制白细胞介素-10 (下文缩写为IL-10)和趋化因子CCL2(下文缩写为CCL2)中的至少一种的产生。我们认为通过作用于产生IL-10和CCL2中的至少一种的细胞并抑制产生这些肽的能力，本发明的滋补剂能够恢复抗微生物肽产生能力。本发明的滋补剂可以恢复抗微生物肽产生能力，所述抗微生物肽是其产生受到 IL-10或CCL2抑制的肽。其中防御素例如α-防御素、β -防御素和组织蛋白酶抑制素是适当的。β -防御素的适当例子包括人β -防御素类(HBDs)例如人β -防御素-1 (HBD-I)、 人β -防御素-2 (HBD-2)、人β -防御素-3 (HBD-3)和人β -防御素_4 (HBD-4)。α -防御素的适当例子包括人嗜中性防御素(HNP s)例如人嗜中性防御素-I(HNP-I)、人嗜中性防御素-2 (ΗΝΡ-2)和人嗜中性防御素-3 (ΗΝΡ-3)。组织蛋白酶抑制素的适当例子包括组织蛋白酶抑制素抗微生物肽-18 (CAP-18)。甘草酸或其药学可接受的盐可以通过例如从甘草(licorice)中提取来获得，但是也可以使用市售产品。市售产品的一个适当例子是由Minophagen Pharmaceutical Co., Ltd制造的产品。甘草酸的药学可接受的盐的例子包括通过允许甘草酸和无机或有机碱以一定摩尔比反应可获得的那些盐。其特别优选的例子包括铵盐例如甘草酸单铵盐和甘草酸二铵盐；碱金属盐例如甘草酸单钠盐、甘草酸二钠盐、甘草酸单钾盐和甘草酸二钾盐；甘草酸胆碱盐；甘草酸钙盐；甘草酸镁盐；甘草酸铝盐；等。其中，甘草酸单铵盐是特别优选的。甘草酸或其药学可接受的盐可以单独使用，或者可以一起使用两种或更多种类型。在一起使用两种或更多种类型的情况下，可以根据目的适当调节组合和比例。本发明的滋补剂的剂型并没有特别的限制，根据目的可以适当地选自口服制剂例如片剂、粉末剂、颗粒剂、胶囊、细颗粒剂和液体(溶液)；胃肠外用制剂例如吸入剂、栓剂和注射剂；等。这些剂型形式的滋补剂都可以通过已知方法来制备。在配制口服制剂等形式的药剂的情况下，可以向所述口服制剂中加入制备这些制齐IJ常用的赋形剂、润滑剂、增塑齐 、表面活性齐 、粘合剂、崩解剂、润湿齐 、稳定齐 、矫味齐 、着色剂、调味剂、缓冲剂等。赋形剂的例子包括乳糖、葡萄糖、D-甘露醇、果糖、糊精、淀粉、食盐、碳酸氢钠、碳酸钙、海藻酸钠、乙基纤维素、羧甲基纤维素钠、羟丙基纤维素、硅酐、高岭土等。润滑剂的例子包括硬脂酸镁、硬脂酸钙、硬脂酸、滑石、玉米淀粉、聚乙二醇等。增塑剂的例子包括聚乙二醇、丙二醇、甘油、三醋汀、中链脂肪酸甘油三酯、乙酰甘油脂肪酸酯、柠檬酸三乙酯等。粘合剂的例子包括明胶、阿拉伯胶、纤维素酯、聚乙烯吡咯烷酮、淀粉糖浆、甘草的提取物、西黄蓍胶、单糖浆、明胶等。崩解剂的例子包括淀粉、琼脂、羧甲基纤维素钙、羧甲基纤维素、微晶纤维素等。润湿剂的例子包括阿拉伯胶、聚乙烯吡咯烷酮、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、羟丙基纤维素等。矫味剂的例子包括糖、蜂蜜、糖精钠、薄荷、桉油、桂皮油等。着色剂的例子包括氧化铁、β -胡萝卜素、叶绿素、水溶性食用焦油染料等。调味剂的例子包括柠檬油、橙皮油、dl-或1-薄荷醇等。。在配制胃肠外用制剂例如吸入剂或注射剂形式的药物的情况下，可以使用的溶剂的例子包括注射用蒸馏水、灭菌非水溶剂、悬浮剂等。非水溶剂或悬浮剂的基质的优选例子包括丙二醇、聚乙二醇、甘油、橄榄油、玉米油、油酸乙酯等。如果必要，除了加入其中的上述组分以外，本发明的滋补剂还可以含有药学可接受的任选组分，只要这些组分不妨碍本发明的效果即可。所述任选组分的例子包括缓冲剂、防腐剂、抗氧化剂等。本发明的滋补剂的施用方法可以包括任意的口服或胃肠外施用。根据患者的年龄、症状等，可以适当改变所述滋补剂的剂量，但是在口服的情况下，就甘草酸或其药学可接受的盐的量而言，成人的每日剂量通常优选是50-3000mg/人， 更优选300-2500mg/人，而在胃肠外施用的情况下，就甘草酸或其药学可接受的盐的量而言，成人的每日剂量通常优选是25-2500mg/人，更优选150-2000mg/人。施用本发明的滋补剂，以便一日一次或分为数份来施用预定量。甘草酸和其药学可接受的盐用作肝病和变应性疾病的治疗剂已经有长期的使用记录，由于它们的高度安全性而闻名。由于本发明的滋补剂是由甘草酸或其药学可接受的盐形成的，因此所述滋补剂是非常安全的。此外，所述滋补剂具有补充生物体固有功能的作用，所述功能涉及恢复抗微生物肽产生能力，因此所述滋补剂产生新的抗菌剂耐受性细菌的风险低。因此，本发明的滋补剂提供了一种高度安全的预防感染发生的方法。本发明的滋补剂可以适用于烧伤患者，但是由于所述滋补剂通过抑制IL-10和 CCL2中的至少一种产生来恢复抗微生物肽产生能力，因此有需要的患者并不限于烧伤患者，有需要的患者可以扩展到任何需要预防感染发生的那些患者。
实施例下面，参考具体实施例来进一步详细描述本发明。但是，并非通过任何方法将本发明限定于下列实施例。<施用铜绿假单胞菌的小鼠的存活率比较>[实施例1]使正常小鼠背侧烧伤，以100CFU (菌落形成单位)的量将铜绿假单胞菌应用于烧伤位点。然后在发生烧伤后2小时、M小时和72小时时将甘草酸腹膜内施用于小鼠，每次的量为每kg小鼠体重IOmg (即量为10mg/kg)，并检查小鼠存活或死亡。在10只小鼠上进行相同的操作，检查小鼠的存活率。结果如图1所示。图1的图的横轴代表铜绿假单胞菌感染后的天数(天)。[比较例1]以与实施例1相同的方式进行实验，不同的是腹膜内施用生理盐水来代替甘草酸。检查小鼠的存活率。结果如图1所示。从图1可以清楚地看出，在施用甘草酸的小鼠(实施例1)中直至第7天没有任何个体死亡，与未施用甘草酸的小鼠(比较例1)相比，2天后和2天时的存活率明显更高。[参照例1-3]以量为每只小鼠IO6CFU(参照例1)，IO7CFU(参照例2)或IO8CFU(参照例3)的铜绿假单胞菌分别感染正常小鼠的背侧，并检查小鼠存活或者死亡。在每组10只小鼠上进行相同的操作，检查小鼠的存活率。结果如图2所示。图2的图的横轴代表(应用铜绿假单胞菌)感染后的天数(天)。从图2可以清楚地看出，铜绿假单胞菌的剂量较大，则小鼠的存活率较低。[参照例4-6]使正常小鼠各自背侧烧伤，在烧伤位点以每只小鼠50CFU (参照例4)，IO3CFU (参照例5)或104CFU(参照例6)的铜绿假单胞菌量进行皮内感染，并检查小鼠存活或者死亡。 在每组10只小鼠上进行相同的操作，检查小鼠的存活率。结果如图3所示。图3的图的横轴代表铜绿假单胞菌感染后所经历的时间(天)。从图3可以清楚地看出，小鼠的存活率降低，使得与参照例1-3相比，用较小剂量铜绿假单胞菌即发生了多次的铜绿假单胞菌感染。<在感染铜绿假单胞菌的小鼠的试验样本中铜绿假单胞菌的量的比较>[实施例2]使正常小鼠背侧烧伤，以用量为100CFU的铜绿假单胞菌在烧伤位点感染。然后在用铜绿假单胞菌感染后2小时和12小时时将甘草酸腹膜内施用于小鼠，每次的量为每kg 小鼠体重10mg(即量为10mg/kg)。然后在用铜绿假单胞菌感染48小时后，收集小鼠的血液和脾并通过菌落计数法测定血液样本和脾勻浆样本中铜绿假单胞菌的量。结果如图4所示。图4的图的垂直轴代表Iml的样本中铜绿假单胞菌的量(CFU的量)。[比较例2]以与实施例2相同的方式进行实验，不同的是腹膜内施用生理盐水来代替甘草酸，并测定血液样本和脾勻浆样本中铜绿假单胞菌的量。结果如所示图4。从图4可以清楚地看出，与没有施用甘草酸的小鼠(比较例2)相比，施用甘草酸的小鼠(实施例幻的血液样本和脾勻浆样本中铜绿假单胞菌的量都显著减少。<皮肤组织中MBD-I的量的比较>[实施例3]使正常小鼠背侧烧伤，在发生烧伤后2小时，以每kg小鼠体重IOmg (即量为IOmg/ kg)的量腹膜内施用甘草酸。在发生烧伤0.5小时、6小时、12小时、18小时和M小时后从烧伤位点周围收集皮肤组织，将所收集的皮肤组织勻化。通过ELI SA测定勻浆中MBD-I的量。结果如图5所示。图5的图的横轴代表发生烧伤后的时间(小时)。[比较例3]以与实施例3相同的方式进行实验，不同的是腹膜内施用生理盐水来代替甘草酸，并测定勻浆液中MBD-I的量。结果如图5所示。从图5可以清楚地看出，施用甘草酸的小鼠(实施例3)中MBD-I的量大于未施用的小鼠(比较例3)。<培养的细胞中MBD-I的量的比较>[实施例4]从正常小鼠的皮肤收集表皮角质化细胞(EK)，使用补充有10%灭活胎牛血清的 RPMI1640培养基，制备细胞溶液至浓度为2X IO6细胞/ml。此外，使正常小鼠背侧烧伤，12 小时后，从烧伤位点周围的皮肤组织收集Gr-I+CDllb+细胞。使用补充有10%灭活胎牛血清的PRMI1640培养基制备所收集细胞的浓度为5 X IO5细胞/ml的细胞溶液。在量为IOyg/ ml的甘草酸共存在下，将表皮角质化细胞和Gr-I+CDllb+细胞在37°C下在同一 Transwell 中培养。在开始培养48小时后，通过ELISA测定该培养液的上清液中MBD-I的量。结果图 6如所示。[比较例4]以与实施例4相同的方式进行实验，不同的是不允许共存甘草酸，并测定该培养液的上清液中MBD-I的量。结果如图6所示。[参照例7]以与实施例4相同的方式进行实验，不同的是在不允许共存甘草酸的同时仅培养表皮角质化细胞Ox IO6细胞/ml)，并测定该培养液的上清液中MBD-I的量。结果如图6 所示。[参照例8]以与实施例4相同的方式进行实验，不同的是在共存在量为10 μ g/ml甘草酸的同时仅培养表皮角质化细胞Ox IO6细胞/ml)，并测定该培养液的上清液中MBD-I的量。结果如图6所示。[参照例9]以与实施例4相同的方式进行实验，不同的是在不允许共存在甘草酸的同时仅培养Gr-I+CDllb+细胞(5 X IO5细胞/ml)，并测定该培养液的上清液中MBD-I的量。结果如图 6所示。从图6可以清楚地看出，与不共存在有甘草酸的比较例4相比，使甘草酸共存在的实施例4中MBD-I的量更高。同时，甘草酸不具有对表皮角质化细胞的MBD-I产生能力促进效果(参照例7和8)。然而，Gr-I+CDllb+细胞具有对表皮角质化细胞的MBD-I产生能力抑制效果，但是甘草酸降低了该抑制效果。因此，其可以证明，甘草酸发挥MBD-I产生能力的滋补剂的作用。<培养的细胞中MBD-3的量的比较>[实施例5]从正常小鼠的皮肤收集表皮角质化细胞(EK)，使用补充有10%灭活胎牛血清的 RPMI1640培养基，制备细胞溶液至浓度为2X IO6细胞/ml。为诱导MBD-3，用量为1 μ g/ml 的脂多糖类(LPS)处理所述细胞6小时。此外，使正常小鼠背侧烧伤，12小时后，从烧伤位点周围的皮肤组织收集Gr-Γ⑶Ilb+细胞。使用补充有10%灭活胎牛血清的RPMI1640培养基，制备所收集细胞的细胞溶液至浓度为5X IO5细胞/ml。在量为10 μ g/ml的甘草酸共存在下，将LPS-处理过的表皮角质化细胞和Gr-I+CDllb+细胞在37°C下在同一 Transwell 中培养。在开始培养48小时后，通过ELISA测定该培养液的上清液中MBD-3的量。结果图 7如所示。[比较例5]以与实施例5相同的方式进行实验，不同的是不允许共存在甘草酸，并测定该培养液的上清液中MBD-3的量。结果如图7所示。[参照例10]以与实施例5相同的方式进行实验，不同的是在不允许共存在甘草酸的同时仅培养LPS-处理过的表皮角质化细胞O X IO6细胞/ml)，并测定该培养液的上清液中MBD-3的量。结果如图7所示。[参照例11]以与实施例5相同的方式进行实验，不同的是在量为10 μ g/ml甘草酸共存在的同时仅培养LPS-处理过的表皮角质化细胞QX IO6细胞/ml)，并测定该培养液的上清液中 MBD-3的量。结果如图7所示。[参照例12]以与实施例5相同的方式进行实验，不同的是在不允许共存在甘草酸的同时仅培养Gr-I+CDllb+细胞(5 X IO5细胞/ml)，并测定该培养液的上清液中MBD-3的量。结果如图 7所示。从图7可以清楚地看出，与不共存在有甘草酸的比较例5相比，使甘草酸共存在的实施例5中MBD-3的量更高。同时，甘草酸不具有对LPS-处理过的表皮角质化细胞的 MBD-3产生能力促进效果(参照例10和11)。然而，Gr-I+CDllb+细胞具有对LPS-处理过的表皮角质化细胞的MBD-3产生能力抑制效果，但甘草酸降低了这种抑制效果。因此，其可以证明，甘草酸发挥MBD-3产生能力的滋补剂的作用。<甘草酸对MBD-I产生能力恢复的量依赖性的证明>[实施例6_9]从正常小鼠的皮肤收集表皮角质化细胞QXlO6细胞/ml)。此外，使正常小鼠背侧烧伤，12小时后，从烧伤位点周围的皮肤组织收集Gr-I+CDllb+细胞(5X IO5细胞/ml)。 使用用于角质化细胞培养的介质基作为培养基并使甘草酸以1 μ g/ml (实施例6)，10 μ g/ ml (实施例7)，100 μ g/ml (实施例8)或300g/ml (实施例9)的量共存在，将表皮角质化细胞和Gr-Γ⑶Ilb+细胞在37°C下在同一 Transwell中培养。在开始培养48小时后，通过 ELISA测定该培养液的上清液中MBD-I的量。结果如图8的半对数图所示。[比较例6]以与实施例6-9相同的方式进行实验，不同的是不允许共存在甘草酸，并测定该培养液的上清液中MBD-I的量。结果如图8的条形图所示。图8也显示了参照例7和8的结果。此外，这两个图共享垂直轴(MBD-1的量)。从图8可以清楚地看出，其可以证明，当甘草酸以10 μ g/ml (实施例7)，100 μ g/ ml (实施例8)和300 μ g/ml (实施例9)的量存在时，MBD-I产生能力恢复的效果特别优良。〈对表皮角质化细胞的MBD-I产生能力的抑制因素的证明(1)>[参照例13-15]
使正常小鼠背侧烧伤，12小时后，从烧伤位点周围的皮肤组织收集Gr-Γ⑶Ilb+细胞(5X105细胞/ml)。使用补充有10%灭活胎牛血清的RPMI1640培养基，制备所收集细胞的细胞溶液至浓度为5 X IO5细胞/ml。在开始培养48小时后回收上清液，通过ELISA测定上清液样本中IL-4、IL-13、IL-10和CCL2的量。结果如图9所示。然后在37°C下，用量分别为2. Syg/ml的CCL2中和抗体(参照例13)、IL-10中和抗体(参照例14)或者CCL2中和抗体和IL-10中和抗体处理所述培养液的上清液1小时。 将处理后的培养液的上清液加入至最终浓度相当于培养基的15体积％。该培养基用于在 37°C下培养从正常小鼠的皮肤组织中分离的表皮角质化细胞O X IO6细胞/ml)。在开始培养48小时后，回收上清液，通过ELISA测定上清液样本中MBD-I的量。结果如图10所示。[参照例16]以与参照例13-15相同的方式进行实验，不同的是不使用CCL2中和抗体和IL-10 中和抗体，测定该培养液的上清液中MBD-I的量。结果如图10所示。[参照例17]将中禾口抗体的同种型对照抗体(Anisotype control antibody to a neutralizing antibody)用于在37°C下培养从正常小鼠的皮肤收集的表皮角质化细胞 QXlO6细胞/ml)。在开始培养48小时后，通过ELISA测定该培养液的上清液中MBD-I的量。结果如图10所示。从图10可以清楚地看出，其证明了，当一起加入CCL2中和抗体和IL-10中和抗体时，最大程度地抑制了表皮角质化细胞的MBD-I产生能力(参照例16)。此外，其证明了当加入CCL2中和抗体和IL-10中和抗体中的至少一种时，恢复了表皮角质化细胞的MBD-I产生能力(参照例13-15)。此外，其证明了当入CCL2中和抗体和IL-10中和抗体(参照例 15)时，MBD-I产生能力的恢复效果高于仅加入一种肽的情况(参照例13和14)。上述结果表明，源自Gr-Γ⑶Ilb+细胞的CCL2和IL-10抑制表皮角质化细胞的 MBD-I产生能力的恢复效果。<对表皮角质化细胞的MBD-I产生能力的抑制因素的证明[参照例18-20]在37 V 下，在 CCL2 (5ng/ml)(参照例 18)，IL-10 (lng/ml)(参照例 19)或者 CCL2(5ng/ml)和IL-10 (lng/ml)(参照例20)共存在下，培养从正常小鼠的皮肤收集的表皮角质化细胞O X IO6细胞/ml)，所述CCL2和IL-10 (lng/ml)是使用重组体，通过已知的重组DNA技术制备的。在开始培养48小时后，通过ELISA测定该培养液的上清液中MBD-I的量。结果如图11所示。图11也显示了参照例17的结果。从图11可以清楚地看出，其证明了通过加入CCL2和IL-10中的至少一种(参照例18-20)抑制了表皮角质化细胞的MBD-I产生能力。其证明了与仅加入一种肽的情况(参照例18和19)相比，当加入CCL2和IL-10 (参照例20)这两者时，对MBD-I产生能力的抑
制效果更高。上述结果表明，源于Gr-Γ⑶Ilb+细胞的CCL2和IL-10抑制表皮角质化细胞的 MBD-I产生能力。<甘草酸对CCL2和IL-10产生的抑制效果的证明>[实施例10]
使正常小鼠背侧烧伤，12小时后，从烧伤位点周围的皮肤组织收集Gr-Γ⑶Ilb+细胞QX IO6细胞/ml)。使用角质化细胞培养基作为培养基，在量为10yg/ml的甘草酸共存在下，在37°C下在96-孔板中培养所述Gr-Γ⑶Ilb+细胞。在开始培养48小时后，通过 ELISA测定该培养液的上清液中CCL2和I L-IO的量。结果如图12和13所示。图12显示了 CCL2的量，图13显示IL-IO的量。[比较例7]以与实施例10相同的方式进行实验，不同的是不使甘草酸共存在，并测定该培养液的上清液中CCL2和IL-IO的量。结果如图12和13所示。从图12和13可以清楚地看出，其可以证明，甘草酸抑制Gr-I+CDlIb+细胞的CCL2 和IL-IO产生能力。工业实用性本发明可以用于预防烧伤患者的感染。
权利要求
1.一种用于抗微生物肽产生能力的滋补剂，其包含甘草酸或其药学可接受的盐作为活性成分。
2.根据权利要求1的用于抗微生物肽产生能力的滋补剂，其中所述抗微生物肽是防御素或组织蛋白酶抑制素。
3.根据权利要求1的用于抗微生物肽产生能力的滋补剂，其为选自片剂、粉末、胶囊、 细颗粒、液体、吸入剂、栓剂和注射剂的形式。
4.一种用于机会性感染的保护剂，其包含甘草酸或其药学可接受的盐作为活性成分。
5.甘草酸或其药学可接受的盐在制备用于抗微生物肽产生能力的滋补剂中的应用。
6.甘草酸或其药学可接受的盐在制备用于机会性感染的保护剂中的应用。
7.甘草酸或其药学可接受的盐，用于抗微生物肽产生能力的滋补剂的应用。
8.甘草酸或其药学可接受的盐，用于机会性感染的保护剂的应用。
全文摘要
提供一种能够增强抗微生物肽产生能力的药物。该药物包含作为活性成分的化合物，所述化合物是甘草酸或其药学可接受的盐并且能够抑制白细胞介素-10(IL-10)和趋化因子CCL2中的至少一种的产生。所述抗微生物肽优选是防御素或组织蛋白酶抑制素。
文档编号A61K31/00GK102470141SQ20108003522
公开日2012年5月23日 申请日期2010年7月9日 优先权日2009年7月9日
发明者吉田昇平, 吉田毅, 宇都宫德一郎, 小林真纪子, 铃木富士夫 申请人:日本米诺发源制药株式会社